DK153492B

DK153492B - Fremgangsmaade til fremstilling af 3ae, 4ae-diacyltylosinderivater

Info

Publication number: DK153492B
Application number: DK382979AA
Authority: DK
Inventors: Tatsuro Fujiwara; Tetsuo Matsuda; Osamu Okegawa; Hideo Sakakibara; Susumu Watanabe; Toshiyuki Watanabe
Original assignee: Toyo Jozo Kk
Priority date: 1978-09-14
Filing date: 1979-09-13
Publication date: 1988-07-18
Also published as: AT367432B; DE2937267C2; CA1133899A; GB2031418A; FR2436150A1; DK382979A; US4268665A; AT366699B; ATA518080A; DK153492C; IT1123137B; ATA607479A; IT7925677A0; DE2937267A1; SE445739B; NL7906894A; SE7907547L; HU181976B; GB2031418B; CH642381A5

Description

DK 153492B

i

Opfindelsen angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af ukendte 3’*,41'-diacyltylosinderivater med den i kravets indledning angivne almene formel 1 eller salte deraf.

5 Ved salte skal forstås fysiologisk acceptable sal te. Foretrukne eksempler på salte er uorganiske salte såsom hydrochlorid, sulfat eller phosphat eller organiske salte såsom acetat, propionat, tartrat, citrat, succinat, malat, asparaginat eller glutaminat. Andre ikke-toksiske salte kan 10 medtages.

De hidtil ukendte forbindelser(i) har de ækvivalente niveauer for antibakteriel aktivitet for det hidtil kendte antibiotiske tylosin og har også forøget antibakteriel virkning mod alle macrolidantibiotikumresistente stammer såsom 15 macrolidresistent A-gruppestammer (kliniske isolater af ery thromycin-, oleandomycin- og 16-led-macrolidantibiotikumresi-stente stammer), B-gruppestammer og C-gruppestammer, Navnlig har de hidtil ukendte forbindelser overlegen antibakteriel aktivitet mod resistente stammer i sammenligning med det kend-20 te 4 *’-acyltylosin eller 3-acetyl- eller -propionyl-4’*-acyl-tylosin, som er effektive mod de stammer, som er resistente over for macrolidantibiotika. Desuden nedsættes den stærke vedvarende bitre smag, som er en generel egenskab hos macrolidantibiotika, og således fremstilles der fortrinsvis sirup 25 til børn, som man ikke kan give tabletter eller kapsler.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede antibiotika (l.) forventes at vise en udmærket klinisk infektionsterapeutisk virkning. Desuden·er disse antibiotika egnede til veterinære formål og som foderadditiver, 30 Tylosin har fem hydroxylgrupper i stillingerne 3,2’, 3^,411 og 4' ''. Blandt disse acyleres hydroxy lgrupperne i stillingerne 3,2», 4” og 4,M let,medens hydroxy lgruppen i * 3 r 1 — -stillingen er mindre aktiv. Hvis hydroxylgruppen i 3"-stillingen acyleres, så acyleres de andre stillinger med højaktive hy-35 droxylgrupper også, og derfor har en acylering af begge stil lingerne 3* * og 4’’ været umulig ved den kendte tekniks acy-leringsmetoder.

2

DK 153492B

Ved en acylering af hydroxylgruppen i 3"-stillingen acyleres andre hydroxylgrupper, navnlig i stillingerne 3, 2' og 4'", med beskyttelsesgrupper, som selektivt fjernes efter acyleringen af hydroxylgruppen i 3"-stillingen. Som 5 beskyttelsesgrupper anvendes alkanoylgrupper med 2-6 car- bonatomer for hydroxylgruppen i 2'-stillingen og lavmolekylære alkanoylgrupper eller halogenerede alkanoylgrupper for hydroxylgruppen i 4"1-stillingen. Hydroxylgruppen i 3-stil-lingen beskyttes ved omsætning med aliphatisk carboxylsyre-10 anhydrid med 2-6 carbonatomer i nærværelse af en uorganisk base til dannelse af en ring -^ίΐθ-alkanoyl A__ /—>

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

Indføring af beskyttelsesgrupper for hydroxylgrupper-15 ne i stillingerne 3, 2" og 4”' kan foretages ved omsætning med aliphatisk carboxylsyreanhydrid med 2-6 carbonatomer i nærværelse af uorganisk base.

2

Eksempler på aliphatisk carboxylsyreanhydrid R er eddikesyreanhydrid, propionsyreanhydrid, smørsyreanhydrid 20 og isovalerianesyreanhydrid.

Eksempler på uorganiske baser er alkalimetalhydroxid såsom kaliumhydroxid eller natriumhydroxid, a1kalimetalcar-bonat såsom kaliumcarbonat eller natriumcarbonat og alkali-metalhydrogencarbonat såsom natriumhydrogencarbonat, for-25 trinsvis alkalimetalcarbonat.

Indføring af beskyttelsesgruppen kan foretages ved 30-100°C, fortrinsvis 40-60°C. Reaktionsprocessen kan kontrolleres ved tyndtlagschromatografi, og reaktionen kan afsluttes ved forsvinden af tylosin.

30 I ovenstående reaktion acyleres aldehydgruppen i

DK 153492B

3 18-stillingen, og hydroxylgruppen i 3-stillingen beskyttes ved ringslutning mellem carbonatomet i 20-stillingen og oxygenatomet i 3-stillingen, og samtidig acyleres stillingerne 2f, 4m og 4,M. Da denne beskyttelse ved stillin-5 gerne 3 og 20 er yderst fordelagtige beskyttelsesgrupper for selektiv reaktion og tillige yderst stabil, er den en udmærket og bekvem beskyttelsesgruppe for hydroxylgruppen i 3-stillingen.

I ovenstående indføring for hydroxylbeskyttelsesgrup-10 perne kan hydroxylgruppen i 4"'-stillingen i forvejen være beskyttet ved hjælp af en lavmolekylær alkanoylgruppe eller halogeneret alkanoylgruppe, og derefter kan de resterende hydroxylgrupper i stillingerne 3, 2" og 4" acyleres ved ovennævnte indføringsmetode for beskyttelsesgruppen.

15 Foretrukne eksempler på lavmolekylære halogenalkano- ylgrupper er chloracetyl, dichloracetyl eller trichloracetyl. Indforing af beskyttelsesgruppen foretages ved omsætning med et 1,2 -1,5-molært overskud af chloreret-aliphatisk carboxyl-syrehalogenid i et indifferent organisk opløsningsmiddel såsom 20 dichlormethan i nærværelse af tertiær organisk amin såsom pyrid in.

Det således opnåede 4"' -halogenalkanoyltylosin beskyttes i hydroxylgrupperne i stillingerne 3 og 2’ og acyleres i hydroxylgruppen i 4'’-stillingen ved den ovennævnte indfø-25 ring af beskyttelsesgrupper.

Yed ovennævnte indføring af beskyttelsesgrupper er hydroxylgrupperne i stillingerne 3,2’ og 4,M beskyttet , og hydroxylgruppen i 4’'-stillingen acyleres.

Den fremkomne forbindelse (2) kan isoleres fra reak-30 tionsblandingen, idet man hælder reaktionsblandingen i vand, indstiller vandlaget til en pH-værdi på 8-3D og ekstraherer med et passende med vand ikke blandbart organisk opløsningsmiddel. Yderligere rensning kan foretages ved chromatografi på adsorbent såsom silicagel, aktivt aluminiumoxid eller 35 adsorbentharpiks og eluering med et passende opløsningsmid del såsom benzen og acetone.

Det næste trin i 3’’-acyleringen af forbindelsen 2

DK 153492B

4 kan foretages ved omsætning med aliphatisk carboxylsyre-anhydrid i nærværelse af tertiær organisk amin under opvarmning.

Eksempler på ovennævnte aliphatiske carboxylsyre-5 anhydrid R gO er eddikesyreanhydrid, propionsyreanhydrid, smørsyreanhydrid, isosmørsyreanhydrid, valerianesyreanhydrid, isovaleriane-syreanhydrid eller hexansyreanhydrid. Eksempler på tertiære organiske aminer er fortrinsvis pyridinforbindelser såsom 10 pyridin, picolin eller collidin, men de øvrige kendte tertiære organiske aminer kan benyttes selektivt. Opvarmningstemperaturen er f.eks. 50-120°C, fortrinsvis 80-100°C. Reaktionstiden kan afhænge af opvarmningstemperaturen, men reaktionen kan kontrolleres 15 ved tyndtlagsehromatografi på silioagel, og reaktionen kan afsluttes ved forsvinden af forbindelsen (2) i reaktionsblandingen-»- formalt er reaktionstiden af størrelsesordenen 1-100 timer.

Som et resultat af ovenstående reaktion omarrangeres 2 20 den hidtidige R -acylgruppe i 4''-stillingen til 3'*-stillin-gen, og acylgruppen R indføres i 4''-stillingen ved ovennævnte acyleringsreaktion.

Isolering og rensning kan foretages efter samme fremgangsmåde som til fremstilling af forbindelsen (2).

25 fjernelse af beskyttelsesgrupperne i den dannede forbindelse (.3) foretages ved behandling af forbindelsen (3) med methanol eller ethanol indeholdende ammoniak til fjernelse af beskyttelsesgrupperne i stillingerne 3 og 20 og beskyttelsesgruppen i 4,f'-stillingen. Fjernelsesreaktionen kan ud-30 føres ved stuetemperatur. Reaktionen kan afsluttes ved kontrol af forsvinden af forbindelsen (3) ved tyndtlagschromato-grafi på silioagel.

Derefter opvarmes det produkt, som fås ved afdestilla-tion af ammoniak og alkohol fra reaktionsblandingen, med me-35 thanol, som kan indeholde vand, til fjernelse. af acylgruppen i 2'-stillingen. Opvarmningen foretages under tilbagesvaling i methanol. Reaktionen kan afsluttes

DK 153492B

5 ved kontrol af tyndtlagschromatografi på silicagel.

Forbindelsen (la) kan fås ved isolering og rensning som beskrevet nedenfor af det produkt, som fås ved afde-stillation af methanol i reaktionsblandingen.

5 Isolation og rensning af forbindelsen (la) foretages ved konventionelle metoder såsom inddampning, ekstraktion, vaskning, overføring, krystallisation og chromatografi, f.eks. på silicagel, aktivt aluminiumoxid eller adsorptionsharpiks .

10 Forbindelsen (2) kan også acyleres i 3"-sti11ingen ved hjælp af aliphatisk carboxylsyrehalogenid. Acyleringen udføres ved omsætning med tilsvarende aliphatisk carboxylsyrehalogenid i nærværelse af tertiær organisk amin i et indifferent organisk opløsningsmiddel under opvarmning.

15 Eksempler på indifferente organiske opløsningsmidler er acetone, methylethylketon, ethylacetat, dimethoxyethan, tetrahydrofuran, dioxan, dichlorethan, benzen eller toluen. Eksempler på tertiære organiske aminer er pyridinforbindelser såsom pyridin, picolin eller collidin, men de øvrige kendte 20 tertiære organiske aminer såsom triethylamin, dimethylanilin, diethylanilin, N-methylpiperidin, N-methylmorpholin, quino-lin, isoquinolin eller tribenzylamin kan benyttes selektivt. Tilsvarende carboxylsyrehalogenider er aliphatiske C9_g-car-boxylsyrehalogenider såsom acetylchlorid, propionylchlorid, 25 butyrylchlorid, isobutyrylchlorid, valerylchlorid, isovale” rylchlorid eller hexanoylchlorid.

Opvarmningstemperaturen kan være 50-120°C. Reaktionstiden kan variere afhængende af reaktionstemperaturen, og da processens fremad skriden kan kontrolleres ved tyndtlagschro-30 matografi på silicagel, kan afslutningen bestemmes inden for 1-150 timer .

Den således opnåede forbindelse (4) kan isoleres på den måde, at når reaktionsopløsningsmidlet er et med vand blandbart organisk opløsningsmiddel, indstilles reaktions-35 blandingen ved hjælp af alkali til en pH-værdi på 8-10 i vand til udfældning og filtrering, og ngir reaktionsopløsningsmid -lej er et med vand ikke-blandbart organisk opløsningsmiddel,

DK 153492B

6 hældes reaktionsblandingen, i vand, og man indstiller pH-værdi-en på 8-10, og man ekstraherer med et med vand ublandbart organisk opløsningsmiddel. Yderligere rensning kan foretages ved chrornatografi under anvendelse af silicagel, aktivt alu-5 miniumoxid eller adsorptionsharpiks under eluering med f.eks, benzen og-acetone.

Forbindelsen (lb) kan fås ved fjernelse af beskyttelsesgrupperne i stillingerne 3, 2' og 4,,? i reaktionsproduktet (4)ved behandling ved samme procedure som nævnt ovenfor 10 for omdannelsen af forbindelsen (3) til forbindelsen (la). Msinblæ (lb) kan fas xed fraskilléLse cg distillation af matbanol cg raisniig.

Isolation af den ønskede forbindelse (l) kan udføres ved kendt isolation og rensning af macrolidantibiotika, f. eks, inddampning, ekstraktion, vaskning, overføring og kry-15 stallisation samt chromatografi under anvendelse af silicagel, aktivt aluminiumoxid eller adsorbent såsom adsorbent harpiks.

I tabel I er anført de minimale inhiberende koncentrationer (MIC) på microorganismer for forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Det fremgår, 20 at forbindelsen (l) er effektiv mod macrolidresistente A-grup-pemikroorganismer.

Nedenstående eksempler illustrerer fremstillingen af forbindelserne (1)ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Bf-værdierne i eksemplerne er, hvis ikke nærmere spe-25 cificeret, målt ved følgende tyndtlagschromatografi: Eærer: Silicagel 60 (Merck Co.)

Fremkalder: A: n-hexan : acetone : benzen : ethylacetat : methanol, 30 : 10 : 25 * 20 :10 30 B: benzen : acetone, 3·* 1 C: benzen : acetone, 4 : 1 7

DK 153492B

* I ooHOinoocMin H HffiSI » * ΙΓ\ (Μ ΙΛ O » » >> o pq| O m H o cm β β η ft -p +5 β 3 o ico-vooooocmo η ώ td lul - - o o o o ·* o

I OHHHHHOH

a d A A A A A u fQ Η Φ CM ίΛ Φ !>, CO cO CO MD m tn » » -p

O |—I ί> o ·>·>·>* o O VO cO

·>β ®H<JOHVOVOinO H

H <0 τ) CM H O

ft x β A « β Φ ·Η Λ ·Η ο Λ «Η I νβ Η ΙΑ (Λ in CM M3 •f-i q 3 31 * * * * * * * Φ

ft ·· OWffll H\DMVflCMlTiOH X

OH rH pH cm μ

Jh Φ · Ή ft tu H O dl νΟΗΙΛΚ1Κ1ΐΛ400 β

Cj_j ^ £>l »·»«»«»*»·»*·» «Η .· «Η ft H| HIOMD'vOVOCMOO Η Ο ·» rH ιΗ β Η β ft ft φο I M3 η m ro in cm νο <η Ρ n *, f» Λ Λ «V (0

φ KdftPPlH^CMVOCMinOH

«. i—) E pH iH CM β H Id B Φ ft > WOO V£>H fO in CM Φ i

-P Ο β ίπ U\ * * ·» ·» ·» ·» S

Φ (0 (0 ft ft| HKIIAOCMIilOH .(0 Ο ·Η W CM H CM +> t0 S m ·· φ ΗΐνΟΗΐΛίΟΐΛ <fv£) ·· (0 β Ο ΦΙ ·»·*·*·»·> » * Φ

0> (HCK HKICMiOCMinOH -P

<i Η Η H CM β β Φ Φ (0| yjrlKIKINIincMVO ·Ρ

• p o J>| CO

H <H<JH| ΗΚ1^)Ί)ΌΓΜΟγΙ ·η φ Η (0 Η φ φ Φ I Φ Η ΙΛ ΚΙ 1Λ CM VO β ο Μ Ο 3 *****. * * 'Φ φ H<3W|HfOCMVOCMinOH ·Η Φ Η Η CM Η Τί Ο β O VO Η rom CM VO β •η ο β - - - - - : 2 P<!ft HKIin^CMIAOrl (0

β CM Η CM S

ο i ft o o| oo md in m cm κι *ϋ · ^jl ***·»·» η ^ Φ OHCMCMOOOVO Ηβ Η Η ΙΛ Ο I Φ Η νΟ Β Η § • * φ Η Η kp ^

Π Η Ο W

•Η ·Η *2 -Ρ -Ρ »P« CO (0 β ft

J J 13 E

m <f ft M

a » ί « β φ f ft * m* co -p Φ / 00 O · CM Φ β to / m <d ft cm η φ η I in m m* * * · ο o +> φ i voininvD<T>isBH co Ο o |f\ |C1 Η H CM » Ή

β b OCOCQHHHCQCQ ICQ

•ri fe Η^ΕΟΟΟΦΦ βΦ . ,Ω /(0 <i β β ·Η β Ηρ/π cotocococoo® ϋ Ό 5 ο /β ωβββββ&οω ft η \ft/cO βΦΦΦΦΦΟΟ ΒΗ taO / bC Φβββββ>»>» ρρ β. /β ββββββΛΛ ββ I οβ(θ(θ(θίθ(θ Λ ο ο I β co · f 2 Η I &£ ... . ..+5+J ft Β S Is ΛΛΛΛΛΛ ftft β ^

leo ftftftftftftfl)® W

Ιβ (0(0(0!(0(0(0ββ

DK 153492B

8

Eksempel 1.

3' "-acetylH· * t-but.vr.yltylosin«

Kaliumcarhonat (7 g) sættes til tylosin (10 g) opløst i eddikesyreanhydrid (20 ml) og omrøres i 24 timer 5 ved 60°C. Reaktionshiandingen hældes i vand (200 ml), ind stilles til en pH-værdi på 9,5 ved tilsætning af ammoniakvand og ekstraheres 2 gange med chloroform (100 ml). Ekstrakten tørres med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum, hvorved man får råt 20, 2', 4fl, 4'1'-tetraacetyl-10 3*20 -0-cyclo-tylosin (10,2 g).

Tynd tlagschromat ograf i: Rf^ = 0*75, R?B = 0,49,

Rfø = 0,34 (tyndtlagsehromatografi for tylosin: Rf^ = 0,20,

RfB = 0,01, Bf0 = 0,01).

Masse: 1083 (M+), 1024 (M+-59).

I5 Der sættes smørsyreanhydrid (4 ml) til ovennævnte stof (10 g) opløst i tørt pyridin (50 ml), og man omrører 4 dage ved 100°C. Reaktionshlandingen hældes i vand (400 ml) og ekstraheres 2 gange med chloroform (200 ml). Ekstrakten tørres med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum, hvor-20 ved man får råt 20,2',31'*4’’'-tetraacetyl-3^0 -0-cyelo-4* butyryltylosin (9,8 g).

Tyndtlagsehromatografi: Rf^ = 0,77, Rfø = 0,61.

Dette stof chromatogramrres på silieagel under elue-ring med henzen og acetone (15:1) til opnåelse af et eluat, 25 som viser ovenstående Rf-værdi til opnåelse af den rensede forhindelse (3,5 g). Denne opløses i methanol (30 ml), og man tilsætter methanol mættet med ammoniak (20 ml) og omrører derpå i 8 timer ved stuetemperatur.

Man sætter vand til reaktionshiandingen og ekstrahe-30 rer 2 gange med chloroform (150 ml). Ekstrakten tørres med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum. Resten opløses i methanol (150 ml), tilhagesvales i 12 timer og tørres i vakuum. Resten chromatograferes på en silicagelsøjle og elueres med henzen og acetone (9:1) og henzen og acetone (7:l)· 35 Det først opnåede eluat tørres i vakuum til opnåelse af 3’',4"'-diacetyl-4 *’-hutyryltylosin (tyndtlagsehromatografi: Rf^ = 0,71, 400 mg), og det andet eluat tørres i vakuum, hvor- 9 ·

DK 153492B

ved man får 3’’-acetyl-41’-butyryltylosin (2,5 g). Tyndtlagschromatografi: Rf^ =0,57·

Masse: 922 (M+-87-18).

H.M.R.spektrum (100 MHz i CDCl^): 1,39 (3-CH3), 5 1,76 (12-CH3), 1,96 (3”-0Ac), 2,51 (3’-H(CH3)2), 3,44 (2”'-0CH3), 3,56 (3,,,-0CH3), 9,57 (20-CH0) ppm.

Eksempel 2.

3’ ’-acetyl-4 * ’-propionyltylosin.

I eksempel 1 erstattes smørsyreanhydrid med propion-10 syreanhydrid til opnåelse af 3’’-acetyl-4*’-propionyltylosin via 20 ,2',3’*,4 ’’’-tetracetyl-3,20 -0-cyclo-4’’-propionyltylosin (tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,75, Rfc = 0,59).

Tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,55.

Masse: 1013 (M+).

15 H.M.R.spektrum (100 MHz i CDClj): 1,39 (3”-CH3), 1,76 (12-CH3), 1,96 (3”-0Ac), 2,51 (3’-N(CH3)2), 3,44 (2”»-0CH3), 3,56 (3,M-00H3), 9,56 (20 -CH0) ppm.

Eksempel 3.

3 * * .4 * ’-diaoetylt.vlosin.

20 I eksempel 1 erstattes smørsyreanhydrid med eddike- syreanhydrid til opnåelse af 3’’,4’’-diacetyltylosin via 20,2' ,3 ’1,4 1' ,4 * ’ ’-pentaacetyl-3,20i-0-cyclo-tylosin (tyndtlagschromatografi: Rf-g = 0,71, Rfc = 0,55).

Tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,53.

25 Masse: 981 (M+-18).

N.M.R.spektrum (100 MHz i CI)013): 1,39 (3M-0H3), 1,75 (13 CH3), 1,97 (3”-0Ac), 2,11 (4”-0Ac), 2,51 (3’-. -H(CH3)2), 3,44 (2»”-0CH3), 3,56 (3,,,-OOH3), 9,56 ( 20--CH0) ppm.

Eksempel 4.

3 ’ ’-aoet.vl-4 ’ ’-hexanovltylosin.

I eksempel 1 erstattes smørsyreanhydrid med hexan-syreanhydrid til opnåelse af 3''-acetyl-4’’-hexanoyltylo-sin via 20 ,2’,3”,4’'*-tetraacetyl-3,20-0-cyclo-4’*-hexa-

DK 153492B

10 noyltylosin (tyndtlagschromatografi: Rf-g = 0,80, RfQ = 0,6 5). Tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,61.

Masse: 922 (M+-115-18), 390.

H.M.R.spektrum (100 MHz i CDCl^): 1,39 (3M~CH3), 5 1,76 (12-CH3), 1,96 (3"-0Ac), 2,52 (3'-N(CH3)2), 3,43 (2»»*-0CH3), 3,55 (3,f,-OCH3), 9,55 (20 -OHO) ppm.

Eksempel 5.

4 *1-Isovalery1-3 * *-propionyltylosin.

Vandfrit kaliumcarbonat (37,7 g) sættes til tylosin 10 (50g) opløst i propionsyreanhydrid (139,8 ml) og omrøres i 24 timer ved 60°C, Reaktionsblandingen hældes i vand (500 ml), indstilles til pH 9,5 ved tilsætning af ammoniakvand og eks-traheres 2 gange med chloroform (300 ml). Ekstrakten vaskes med vand, tørres ved tilsætning af vandfrit magnesiumsulfat 15 og tørres i vakuum til opnåelse af råt 3,20 -0-cyclo- 20,2*, 4!1,4»*»-tetrapropionyltylosin (48,5 g)«

Tynd tlags chromat ograf i: Rf^ = 0,84, Rf-g = 0,75,

Hfq = 0,57.

Isovalerianesyreanhydrid (4,5 ml) sættes til oven-20 stående produkt (10 g) opløst i tørt pyridin (50 ml) og omrøres i 5 dage ved 100°C. Pyridin afdestilleres fra reaktionsblandingen i vakuum, og resten hældes i vand (200 ml), som ekstraheres 2 gange med chloroform. Ekstrakten vaskes med vand, ammoniakvand (pH 9,0) i den nævnte rækkefølge, tørres 25 ved tilsætning af vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af råt 3,20-O-cyclo-4 ' f-isovaleryl-20, 2»,3", 4’'’-tetrapropionyltylosin (10,2 g).

Tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,87, Rfc = 0,78,

Der sættes methanol mættet med ammoniak (50 ml) til 30 dette produkt opløst i methanol (50 ml), og man omrører i 15 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen hældes i vand (500 ml) og ekstraheres 2 gange med chloroform (300 ml). Ekstrakten tørres i vakuum. Resten opløses i methanol (100 ml) og tilbagesvales i 17 timer. Reaktionsblandingen tørres i 35 vakuum, hvorved man får en forbindelse (9,5 g), aom chromato-graferes på silieagelsøjle under eluering med benzen og ace-

DK 153492 B

11 tone (15:1 - 7:1) til opnåelse af 41’-isovalery1-3 *',4' -dipropionyltylosin (tyndtlagachromatografi: Bf^ = 0,79, 100 mg) og 4’1-isovalery1-3’'-propionyltylosin (2,7 g)· Yæskechromatografi: Ef^ = 0,60.

5 Masse: 981 (M+-73), 954 (M+-10l).

JST.M.E.spektrum (100 MHz i ODCl^): 1,39 (3"-CH3), 1.75 (12-CH3), 2,51 (3'-H(CH3)2), 3,43 (2»”-0CH3), 3,55 (3,,,-OCH3), 9,56 (20.-CHO) ppm.

Eksempel 6.

10 4 * *~T3ut.yr.vl~5 *1-propionyltylosin.

I eksempel 5 erstattes isovalerianesyreanhydrid iped smørsyreanhydrid til opnåelse af 4''-butyryl-3’'-propionyl-tylosin via 4''-butyryl-3,.20-0-cyclo-20,2 * ,3 ’’,4'''-tetra-propionyltylosin (tynd tlagschromat ograf i: Efg = 0,87, Rfø = 15 0,78, ΪΓ.Μ.Ε. spektrum (100 MHz i CDCl^): 1,39 (3”-CH3), 1,9 (12-0H3), 2,36 (3’-H(CH3)2), 3,39 (2"*-0CH2), 3,46 (3,,,-OOH3) ppm).

Tyndtlagschromatografi: Ef^ = 0,58.

Masse: 954 (M+-87) 20 N.M.E,spektrum (100 MHz i CDC13): 1,39 (3" ~CH3), 1.76 (12-CH3), 2,51 (3'-H(CH3)2), 3,44 (2”'-0CH3), 3,56 (3,,!-OCH3), 9,56 (20-CH0) ppm.

Eksempel 7.

5'1.4 *'-dipropionyltylosin.

25 I eksempel 5 erstattes isovalerianesyreanhydrid med propionsyreanhydrid til opnåelse af 3 " ,4'' -dipropionyltylosin via 3, 20-0-cyclo-20 ,2»,3",4",4"' -pentapropionyl-tylosin (tyndtlagschromatografi: Efg = 0,86, Ef^ = 0,76, B.M.E.spektrum (100 MHz i CM^): 1,39 (3 * ·-CH^)„ 1,92 30 (12-CH3), 2r36 (3f-I(CH3)2), 3,39 (2«"-00H3), 3,46 (3’”- -0CH3) ppm).

Tyndtlagschromatografi: Ef^ = 0,58.

Masse: 954 (M+-73).

N.M.E.spektrum (100 MHz i CDC13): 1,39 (3"-CH3), 35 1,75 (12-CH3), 2,51 (3’-I(CH3)2), 3,44 (2”*-0CH3), 3,56

DK 153492B

12 (3,,,-0CH3), 9,55 ( 20uCHO) ppm.

Eksempel 8« 3* * «4'*-dibutyr.vltylosin«

Vandfrit kaliumcarbonat (7,5 g) sættes til tylosin 5 (10 g) opløst i smørsyreanhydrid (28 ml) og omrøres i 24 ti mer ved 60°C. Reaktionsblandingen hældes i vand (100 ml) og ekstraheres 2 gange med chloroform (100 ml). Ekstrakten vaskes med vand, tørres ved tilsætning af vandfrit magnesium-sulfat og tørres i vakuum, hvorved man får 20 ,2’,4’',4’”-10 -tetrabutyryl-3,20-0-cyclotylosin som et råt pulver (9,8 g). Tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,86, Rf^ = 0,74·

Smørsyreanhydrid (4 ml) sættes til dette rå pulver opløst i tørt pyridin (50 ml) og omrøres i 102 timer ved 100°0, Reaktionsblandingen hældes i vand (400 ml) og ekstra-15 heres 2 gange med chloroform (200 ml). Ekstrakten tørres ved tilsætning af vandfrit natriumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af råt 20,2’,3’1,4'*,4'1’-pentabutyryl-3,20-0--eyelo-tylosin (‘8,9 g)«

Tyndtlagschromatografi: Rf-g = 0,89, Rfø = 0,83.

20 Ret rå pulver chromatograferes på silicagelsøjle un der eluering med benzen og acetone (19:l) ved ovennævnte Rf-værdi til opnåelse af det rensede stof (2,9 g) efter tørring i vakuum.

Methanol mættet med ammoniak (25 ml) sættes til 25 stoffet opløst i methanol (25 ml) og omrøres i 10 timer ved stuetemperatur. Rer.sættes vand til reaktionsblandingen, som ekstraheres 2 gange med chloroform (150 ml). Ekstrakten tørres ved tilsætning af vandfrit natriumsulfat og tørres i vakuum. Resten opløses i methanol (150 ml) og tilbagesvales • 30 i 17 timer og tørres i vakuum. Resten chromatograferes på silicagel og elueres med benzen og acetone (15:1 - 7:1) til opnåelse af 3f*,4*’-dibutyryltylosin (2,3 g).

Tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,60,

Masse: 1055 (M+).

35 N.M.R.spektrum (100 MHz i CROl^): 1,39 (3M-CH3), 1,76 (12-CH3), 2,51 (3»-N(CH3)2), 3,44 (2"»-0CH3)f 3,56 13

DK tt>M92 B

(3m,-OCH5), 9,56 (20-OHO) ppm.

Eksempel 9.

4 *1-acetyl-3 * ^isovaleryltylosin.

γ-collidin (13,42 ml) og isovalerylchlorid (11,29 ml) 5 sættes til 20,2',41 *,4’’*-tetraacetyl-3£0 -O-cyclo-tylosin (10 g) beskrevet i eksempel 1 opløst i tørt dioxan og omrøres ved 90°C i 45 timer. Reaktionsblandingen hældes i isvand (300 ml) og ekstraheres 2 gange med chloroform (200 ml). Ekstrakten vaskes med 0,1 N HC1, fortyndet ammoniakvand og 10 vand i den nævnte rækkefølge, tørres ved tilsætning af vandfrit natriumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af råt 20,2’ ,4 1 ’ ,4 ’1 1-tetraacetyl-3>20-o-cyclo-3f ’-isovaleryl-tylosin (10,2 g).

Tyndtlagschromatografi: Rf-g = 0,76, Rf^ = 0,61.

15 Råproduktet chromatograferes på silicagelsøjle un der eluering med benzen og acetone (15:1), og eluatet med ovennævnte Rf-værdi tørres i vakuum til opnåelse af den rensede forbindelse (4.1 s). . , t..

Methanol mættet med ammoniak (100 ml) sættes til 20' forbindelsen opløst i methanol (100 ml) og omrøres i 12 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen hældes i isvand (500 ml) og ekstraheres 2 gange med chloroform (300 ml). Ekstrakten tørres ved tilsætning af vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum. Resten opløses i me-33 thanol (100 ml), tilbagesvales i 18 timer og tørres i va kuum. Den således opnåede rest chromatograferes på silica-gélsøjle under eluering med benzen og acetone (7:1), og de tilsvarende aktive fraktioner samles og tørres i vakuum til opnåelse af 4'',4'''-diacetyl-3''-isovaleryltylosin 3® (tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,73, 0,2 g) og 41'-acetyl s' '-isovaleryltylosin (3,2 g).

Tyndtlagschromatografi: Rf^ = 0,57.

Masse: 1041 (M+).

E.M.R.spektrum (100 MHz i CDCl^b 1,39 (3^-0^), 35 1,77 (13-CH5), 2,11 (4’*-OAc), 2,51 (3*-Η(0Η5)2), 3,44 (2"'-0CH3), 3,56 (3,,f-OCH3), 9,56 (20-CHO) ppm.

o 14

DK 153492B

Eksempel 10., 31♦-acetyl-Af ^isovalervltylosin.

Kaliumoarbonat (7 g) sættes til tylosin (10 g) opløst i eddikesyreanhydrid (20 ml) og omrørea 24 timer ved 5 60°C. Reaktionsblandingen hældes i vand (200 ml), indstilles til pH 9,5 ved tilsætning af ammoniakvand og ekstraheres 2 gange med chloroform (100 ml). Ekstrakten tørres med vand-frit magnesiumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af råt 20,2»,4M,4,f f—tetraacetyl—3 j20 -O-cyclo-tylosin (Efg = 0,49, 10 masse: 1084 (M+)) (10,2 g).

Isovalerianesyreanhydrid (4 ml) sættes til råproduktet opløst i tørt pyridin (50 ml) og omrøres i 110 timer ved 100°C. Reaktionsblandingen hældes i vand (400 ml) og ekstraheres 2 gange med chloroform (200 ml). Ekstrakten tørres med 15 vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum, hvorved man får råt 20,2»,3’1,4’f'-tetraacetyl-3,20-0-cyclo-4'’-isovaleryl-tylosin (Rf-g = 0,76, masse: 1168 ( M+)). Denne forbindelse chromatograferes på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (15:1). Eraktioner med Rf-g = 0,76 samles og 20 tørres til opnåelse af den rensede forbindelse (2,8 g).

Methanol mættet med ammoniak (20 ml) sættes til denne forbindelse opløst i methanol (20 ml) og omrøres i 5 timer ved stuetemperatur, Yand (-200 ml) sættes til reaktionsblandingen, og man ekstraherer 2 gange med chloroform (100 25 ml). Ekstrakten tørres med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum. Resten opløses i methanol (100 ml) og tilbage-svales i 12 timer. Reaktionsblandingen tørres i vakuum, og resten chromatograferes på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (9:1) og benzen og acetone (7:1)# Det før-30 ste eluat tørres i vakuum, hvorved man får 3^,411 '-diacetyl--4 r »-is ovale ry lty los in (Rf-g = 0,39, masse: 1084 (M+)) (320 mg).

Det andet eluat tørres i vakuum, hvorved man får det ønskede 3''-acetyl-41'-isovaleryltylosin (1,2 g.)RfB = 0,23, masse: 1042 (M+),

Claims

4 A_'(·<' ch3 H3C0OCHj 2 4 hvor R har samme betydning som ovenfor, og R betegner lavmolekylært alkanoyl eller lavmolekylært halogenalkanoyl, hvorpå man 3"-acylerer ved, at man (a) enten omsætter forbindelsen med formlen (2) med et aliphatisk mættet carboxylsyreanhydrid med 2-6 carbonatomer i alkanoyldelene under opvarmning i nærværelse af en tertiær organisk amin i et indifferent organisk opløsningsmiddel til opnåelse af en forbindelse med formlen (3) OH 3 J—CHORj OR; N(CH3) 2 /0R2 o y χ/\i_ o y o -\h3<: y oRj > “>c<\ 0 A, A, >0H3 < Vx_Vr° R‘°V'V X HjCO OCHj . DK 153492B 3 2 4 hvor R er alkanoyl med 2-6 carbonatomer, og R og R har samme betydning som ovenfor, eller ved at man (b) omsætter forbindelsen med formlen (2) med et aliphatisk mættet carboxylsyrehalogenid med 2-6 carbonatomer under opvarmning i nærværelse af en tertiær organisk amin i et indifferent organisk opløsningsmiddel til opnåelse af en forbindelse med formlen (4) CH3 j—CH0R2 ORtJKCHj), 0R3 0 < >V- o -l Vo-(HjC/-OR2 > H C<\ o—C o-/ / sC y0 ch3 ch3 i H3C\_1 HjCO 0CH3 2 3 4 hvor R , R og R har samme betydning som ovenfor, hvorpå man behandler forbindelsen med formlen (3) eller forbindelsen med formlen (4) med en methanol- eller ethanol-opløsning af ammoniak, hvorpå man behandler i methanol under opvarmning.