NL7906894A

NL7906894A - 3",4"-diacyltylosinederivaten.

Info

Publication number: NL7906894A
Application number: NL7906894A
Authority: NL
Original assignee: Toyo Jozo Kk
Priority date: 1978-09-14
Filing date: 1979-09-14
Publication date: 1980-03-18
Also published as: HU181976B; SE445739B; GB2031418A; CH642381A5; AT367432B; DK153492B; FR2436150B1; AT366699B; FR2436150A1; DK382979A; DE2937267C2; DE2937267A1; ATA518080A; SE7907547L; CA1133899A; GB2031418B; IT1123137B; DK153492C; ATA607479A; US4268665A

Description

t TO 8395 3,,,4,,-Diacyltylosinederivaten.

De uitvinding heeft "betrekking op nieuwe derivaten van het antibioticum tylosine. Meer in het "bijzonder heeft de uitvinding "betrekking op een verbinding volgens formule 1 van het formuleblad, waarin een waterstofatoom of lagere alkanoyl-5 groep is, en Ag groepen zijn waarvan de ene een Rg-groep en de andere een R^ groep is, waarbij Rg en R^ alkanoylgroepen met 2-6 koolstofatomen voorstellen of een zout daarvan.

Het hierboven genoemde zout betreft een fysiologisch aanvaardbaar zout, Toorkeursvoorbeelden van deze zouten zijn een 10 anorganisch zout, zoals een hydrochloride, sulfaat en fosfaat, of een organisch zout,, zoals een acetaat, propionaat, tartraat, citraat, succinaat, maleaat, aspartaat of glutamaat. Andere niet-giftige zouten worden tevens omvat,

De nieuwe verbinding volgens formule 1 heeft een equiva-15 lente anti-bacteriële activiteit vergeleken met het bekende antibioticum tylosine en tevens een vergrote antibacteriële activiteit ten opzichte van tegen macrolide antibiotica resistente stammen, zoals tegen macrolide resistente A groep stammen (klinische geïsoleerde organismen van tegen etythromycine, 20 oleandomycine en uit 16 leden bestaande macrolide antibiotica resistente stammen), B groep stammen en C groep stammen. De nieuwe verbinding heeft in een bijzonder uitstekende antibacteriële activiteit ten opzichte van resistente stammen vergeleken met het bekende 4”-acyltylosine of 3-acetyl- of propionyl-4"-25 acyltylosine die effectief zijn ten opzichte van tegen de macrolide antibiotica resistente stammen. Bbvendien wordt de sterke aanhoudende bittere smaak van de algemene macrolide antibiotica verminderd waardoor bij voorkeur stropen worden gemaakt voor kleine kinderen aan wie geen tabletten of capsules 30 kunnen worden toegediend. De antibiotica volgens formule 1 van de uitvinding vertonen een uitstekend klinisch therapeutisch effekt bij de bestrijding van infectieziekten. Terder zijn de 7906894 2 antibiotica bruikbaar voor veeartsenijkundige doeleinden of als voedingstoevoegsels.

Tylosine bezit vijf hydroxylgroepen op de 3» 2', 3% 4" en 4,u plaatsen. Hiervan zijn de hydroxylgroepen op de 3» 2', 4" 5 en 4'*' plaatsen gemakkelijk acyleerbaar terwijl de hydroxyl- groep op de 3" plaats inactief ia. Indien de hydroxylgroep op de 3* plaats wordt geacyleerd worden de andere plaatsen van sterk actieve hydroxylgroepen eveneens geacyleerd, als gevolg waarvan acylering bij zowel de 3" als 4” plaatsen volgens be-10 kende acyleringsmethoden onmogelijk is. Bij acylering van de hydroxylgroep op de 5” plaats, worden de andere hydroxylgroepen, in het bijzonder op de 3♦ 2* en 4"' plaatsen geacyleerd met beschermende groepen, die na acylering van de hydroxylgroep op de 3” plaats selectief worden verwijderd. Beschermende groepen die 15 de voorkeur hebben zijn lagere alkanoylgroepen voor de hydroxyl groep op de 2* plaats en lagere alkanoyl-, gehalogeneerde acetyl- of trime.thylsilylgroepen voor de hydroxylgroep op de 4" plaats. Be hydroxylgroep op de 5 plaats kan worden beschermd door reactie met een alifatische carbonzuuranhydride in aanwe-20 zigheid van een anorganische base ter vorming van een ring, volgens formule 9 van het formuleblad, waarmede de uitvinding wordt voltooid.

Be verbinding volgens figuur 1 van de uitvinding kan worden bereid met de volgende werkwijzen.

25 Werkwijze (a)s Een verbinding volgens formule 1 waarin R1 een waterstofatoom is, dat wil zeggen de verbinding met formule 1a van het formuleblad, waarin R2 en R^ de voornoemde betekenissen hebben wordt op de volgende wijze bereid,

Tylosine als zodanige of met een beschermde 4'"-hydroxy1-30 groep wordt gereageerd met een alifatisch carbonzuuranhydride in aanwezigheid van een anorganische base teneinde een verbinding met formule 2 van het formuleblad te vormen, waarin R^ een lagere alkanoyl- of halogeen lagere alkanoylgroep is en R2 de voornoemde betekenissen heeft, waarna de genoemde verbinding 35 volgens formule 2 wordt gereageerd met een alifatisch oarbon- 7906894 * * 3 zuuranhydride onder -verhitting in aanwezigheid van een inert organisch oplosmiddel en een tertiaire organische amine, waarbij een verbinding volgens formule 3 van het formuleblad wordt verkregen, waarin Hg, en de voornoemde betekenissen heb-5 ben, welke genoemde verbinding volgens formule 3 vervolgens wordt behandeld met ammoniak in ethanol of methanol, en daarna verhit in methanol. De invoering van beschermende groepen voor de hydroxylgroepen op de 3» 2" en 4"’ plaatsen wordt uitgevoerd door reactie met een alifatisch carbonzuuranhydride in aanwe-10 zigheid van een anorganische base.

Toonbeelden van de voornoemde alifatische carbonzuuranhy-driden ^2^2°-^ zi<5a alifatische zuuranhydriden, zoals azijnzuuranhydride, propionzuuranhydride, boterzuuranhydride en isovaleriaanzuuranhydride * 15 Toorbeelden van anorganische basen zijn alkalische hydroxy- den, zoals kaliumhydroxyde of natriumhydroxyde, alkalicarbona-ten, zoals kaliumcarbonaat of natriumoarbonaat en alkaliwater-stofcarbonaten, zoals natriumwaterstofcarbonaat, met voorkeur voor een alkalicarbonaat.

20 Het invoeren van de beschermende groepen wordt uitgevoerd bij 30 - 100°C, bij voorkeur 40 - 60°C. De reactiemethode kan worden gevolgd door dunnelaagchromatografie waarbij de reactie na verdwijning van het tylosine kan worden beëindigd.

In de voornoemde reactie wordt de aldehydegroep op de 18 25 plaats geacyleerd en de hydroxylgroep op de 3 plaats beschermd door ringsluiting tussen het koolstofatoom op de 18 plaats en het zuurstofatoom op de 3 plaats, waarbij gelijktijdig de 2', 4” en 4"1 plaatsen worden geacyleerd. Aangezien deze bescherming van 3 en 18 plaatsen voor een selectieve reactie bijzonder 30 gunstig en stabiel is, heeft deze methode voor de hydroxyIgroep op de 3 plaats de voorkeur.

Bij de voornoemde invoering van de hydroxyIgroep, wordt van te voren de hydroxylgroep op de 4"1 plaats beschermd door een halogeen lagere alkenylgroep, waarna de achterblijvende 35 hydroxyIgroepen op de 3, 2" en 4"' plaatsen kunnen worden ge- 7906894 «r * 4 acyleerd*volgens de voornoemde invoermethode van de beschermende groep.

Voorkeursvoorbeelden van halogeen lagere alkanoylgroepen zijn chlooracetyl, dichlooracetyl of trichlooracetyl. Het in-5 voeren van de beschermende groep wordt uitgevoerd door de reac tie ten uitvoer te brengen met een 1,2-1,5 molaire overmaat van een gechloreerd alifatisch carbonzuurhalogenide in een inert organisch oplosmiddel, zoals chloormethaan, in aanwezigheid van een tertiair organisch amine, zoals pyridine.

10 Van het aldus verkregen 4"-halogeen lagere alkanoyltylosi- ne zijn de hydroxylgroepen op de 5 en 2' plaatsen beschermd en de hydroxylgroep op de 4" plaats geacyleerd door de voornoemde invoering van beschermende groepen* Door de voornoemde invoering van beschermende groepen worden de hydroxylgroepen op de 15 3,.-21 en 4"' plaatsen beschermd en de hydroxylgroep op de 4’' plaats geacyleerd.

Het produkt volgens formule 2 kan uit het reactiemengsel worden geïsoleerd door dit mengsel in water te schenken, de waterlaag in te stellen op een pH van 8 - 10 en te extraheren 20 met een geschikt water-onoplosbaar organisch oplosmiddel. Ver dere zuivering kan worden uitgevoerd door chromatografie via een adsorptiemiddel, zoals silicagel, actieve alumina of adsorberende harsen en te elueren met een geschikt oplosmiddel, zoals benzeen-aceton.

25 De volgende trap van de 3"-acylering van de verbinding volgens formule 2 kan worden uitgevoerd door reactie met een alifatisch carbonzuuranhydride in aanwezigheid van een tertiair organisch amine onder verhitting.

Voorbeelden van de voornoemde alifatische carbonzuuranhy-30 driden /""(R^^O) zijn alifatische zuuranhydriden met 2-6 koolstofatomen, zoals azijnzuuranhydride, propionzuuranhydride, boterzuuranhydride, isoboterzuuranhydride, valeriaanzuuranhy-dride, isovaleriaanzuuranhydride of hexaanzuuranhydride. Voorbeelden van tertiaire organische aminen zijn bij voorkeur pyri-55 dinische verbindingen,, zoals pyridine, picoline of collidine, 7906894 * ».

5 maar deze voorbeelden zijn niet beperkend 'bedoeld en andere be· kende tertiaire organische amines kannen worden gekozen* De verhittingstemperatuur kan 50 - 120°C, bij voorkeur 80 - 100°C zijn. De reactietijd hangt af van de verhittingstemperatuur, 5 maar de reactie kan worden gevolgd door silicagel dunnelaag- chromatografie waarbij de reactie kan worden beëindigd wanneer de verbinding volgens formule 2 uit het reactiemengsel is verdwenen. Gewoonlijk is de reactietijd ongeveer 1-100 uur.

Als gevolg van de voornoemde reactie wordt de voorafgaande 10 acylgroep (R^) °P 4e 4" plaats omgelegd naar de 3" plaats en de acylgroep (R^) door de voornoemde acyleringsreactie op de 4" plaats ingevoerd.

Isolering en zuivering kan worden uitgevoerd volgens dezelfde procedure als voor de werkwijze voor het bereiden van de 15 verbinding volgens formule 2.

De verwijdering van de beschermende groepen van de verbinding volgens formule 3 wordt uitgevoerd door deze verbinding te behandelen met ammoniak bevattend methanol of ethanol ter verwijdering van de beschermende groep op de 3 en 18 plaatsen en 20 de beschermende groep op de 4"' plaats. De verwijderingsreactie kan worden uitgevoerd bij kamertemperatuur. De reactie kan worden beëindigd bij verdwijning van de verbinding volgens formule 3 gevolgd door silicagel dunnêlaagchromatografie. Het aldus door het afdestilleren van ammoniak en alcohol uit het reactie-25 mengsel verkregen produkt wordt verhit met methanol, dat water mag bevatten, ter verwijdering van de acylgroep op de 2' plaats.

De verhitting wordt uitgevoerd onder terugloop in methanol, De reactie wordt gecontroleerd door silicagel dunnelaagchromato-grafie. De verbinding volgens formule 1a kan worden verkregen 30 door als hierna beschreven het produkt verkregen door het af destilleren van methanol uit het reactiemengsel te isoleren en te zuiveren. De isolering en zuivering van de verbinding volgens formule 1a kan op gebruikelijke wijze worden uitgevoerd zoals door concentreren, extraktie, wassen, overdracht, kris-35 tallisatie en chromatografie, zoals met silicagel, actieve 7906394 6 alumina of adsorptieharsen.

Werkwijze (B)i Een verbinding volgens formule 1, waarin R^ een waterstofatoom.is, dat wil zeggen de verbinding volgens formule 1b van het formuleblad, waarin R^ en R^ de voornoemde beteke-5 nissen hebben, kan worden verkregen door de verbinding volgens formule 2 in reactie te brengen met een alifatisch carbonzuurhalogenide in aanwezigheid van een tertiair organisch amine in een inert organisch oplosmiddel onder verhitting, ter bereiding van de verbinding volgens formule 4 van liet formuleblad, waarin 10 R_., R, en R. de voornoemde betekenissen hebben, waarna deze 2’ 5 4 wordt behandeld met een methanol- of ethanoloplossing van ammoniak en vervolgens met methanol onder verhitting.

De verbinding volgens formule 2 wordt geacyleerd op de 3" plaats met een alifatisch carbonzuurhalogenide. De aoylering 15 wordt uitgevoerd door het overeenkomstige alifatische carbon zuurhalogenide onder verhitting in reactie te brengen in aanwezigheid van een tertiair organisch amine in een inert organisch oplosmiddel. Voorbeelden van een inert organisch oplosmiddel zijn aceton, methylethylketon, ethylacetaat, dimethoxyethaan, 20 tetrahydrofuran, dioxan, benzeen of tolueen. Voorbeelden van tertiaire organische amines zijn pyridinische verbindingen, zoals pyridine, picoline of collidine, hoewel de andere bekende tertiaire organische amines, zoals triëthylamine, dimethylani-line, R-methylpiperidine, F-methylmorfoline, chinoline, iso-25 chinoline of tribenzylamine naar keuze kunnen worden toegepast.

Een overeenkomstig carbonzuurhalogenide is een alifatisch carbonzuurhalogenide met 2-6 koolstofatomen, zoals acetylchlori-de, propionylchloride, butyrylchloride, isobutyrylchloride, valerylchloride, isovalerylchloride of hexanoylchloride. De 30 verhittingstemperatuur kan 50 - 120°C zijn. De reactietijd kan worden gevarieerd afhankelijk van de reactietemperatuur en aangezien de voortgang kan worden gecontroleerd door silicagel dunnelaagchromatografie kan de reactie afhankelijk daarvan worden beëindigd.binnen 1 tot 150 uur.

35 De aldus verkregen verbinding volgens formule 4 kan worden 7906894 *. * 7 geïsoleerd door, wanneer het reactieoplosmiddel een water mengbaar organisch oplosmiddel is, het reactiemengsel door een waterige base in te stellen op een pH van 8-10 ter vorming van een neerslag dat wordt afgefiltreerd, en door wanneer het reac-5 tie-oplosmiddel een water-onoplosbaar organisch oplosmiddel is het reactiemengsel in water te schenken, de pH op 8 - 10 in te stellen, en daarna te extraheren met een water-onmengbaar organisch oplosmiddel» Verdere zuivering kan worden uitgevoerd door chromatografie met behulp van silicagel, actieve alumina of een 10 adsorptiehars onder elutie, zoals met henzeen-aceton*

De verbinding volgens formule 1b kan worden verkregen door de beschermende groepen bij de 3, 2' en 4,n plaatsen in het re-actieprodukt volgens formule 4 te verwijderen door behandeling volgens dezelfde procedure als volgens werkwijze L. De verbin-15 ding volgens formule 1b- kan worden verkregen door afscheiding en zuivering nadat methanol is afgedestilleerd.

Werkwijze(c): Een verbinding volgens formule 1', waarin E1 een lagere alkanoylgroep is, dat wil zeggen een verbinding volgens formule 1c van het formuleblad, waarin R'1 een lagere alkanoyl-20 groep is en R2 en R^ de voornoemde betekenissen hebben, wordt bereid door het 2'-acyltylosine volgens formule 5 van het formuleblad, waarin R^ een alkanoylgroep met 2-6 koolstofatomen en Rg een waterstofatoom, een alkanoylgroep met 2-6 koolstofatomen of een halogeen lagere alkanoylgroep is, te acyleren met 25 een alifatisch carbonzuurhalogenide in aanwezigheid van een tertiair organisch amine in een inert organisch oplosmiddel, ter bereiding van de verbinding volgens formule 6 van het formuleblad, waarin R^ een alkanoylgroep met 2-6 koolstofatomen of een halogeen lagere alkanoylgroep is en R'^, Rg en R^ de 30 voornoemde betekenissen hebben; waarna de verbinding volgens formule 6 wordt geacyleerd met een alifatisch carbonzuuranhydride in aanwezigheid van een base onder verhitting ter bereiding van de verbinding volgens formule 7 van het formuleblad, waarin R1, Eg, R^ en R^ de voornoemde betekenissen hebben, 55 waarna de voornoemde verbinding wordt behandeld met ammoniak in 7906894 8 methanol of ethanol of verhit in methanol.

Het uitgangsmateriaal volgens formule 5 is gewoonlijk een "bekend 2,-acyltylosine. De acylgroep wordt tijdens de reactie verwijderd en is een alkanoylgroep met 2-6 koolstofatomen, 5 "bij voorkeur acetyl, propionyl of hutyryl.

De hydroxylgroep op de 4"' plaats van het voornoemde 2'-acyltylosine kan naar keuze worden "beschermd door een alkanoylgroep met 2-6 koolstofatomen of een halogeen lagere alkanoylgroep, in het bijzonder de chlooracetyl-, dichlooracetyl- of 10 trichlooracetylgroep, hoewel dit niet altijd nodig is.

Het voornoemde 2'-acyltylosine wordt 5»4"-geacyleerd door een overeenkomstig alifatisch carbonzuurhalogenide* De acyle-ring wordt uitgevoerd door reactie met het overeenkomstige car-bonzuurhalogenide. in een inert organisch oplosmiddel in aanwe-15 zigheid van een tertiair organisch amine. "Voorbeelden van inerte organische oplosmiddelen zijn aceton, methylethylketon, ethyl-acetaat, tetrahydrofuran, dioxan, benzeen of tolueen. Yoorbeel-den van tertiaire organische aminen zijn pyridinische verbindingen, zoals pyridine, picoline of collidine. Andere bekende 20 tertiaire organische aminen, zoals triëthylamine, dimethylani- line, n-methylpiperidine, n-methylmorfoline, chinoline of iso-chinoline kunnen worden toegepast. Voorbeelden van alifatische carbonzuurhalogeniden zijn alifatische carbonzuurhalogeniden met 2-6 koolstofatomen, zoals acetylchloride, propionylchlo-25 ride, butyrylchloride, isobutyrylchloride, valerylchloride, isovalerylchloride of hexanoylchloride, De voorkeursacylgroep voor de 3 plaats is een lagere groep, zoals acetylchloride of propionylchloride. De reactie kan worden voortgezet bij kamertemperatuur en het is derhalve niet noodzakelijk te verhitten 30 of tot ten hoogste 30 - 50°C. De reactie kan worden gecontro leerd door silicagel dunnelaagchromatografie en wordt beëindigd binnen 1-10 uur.

Door de voornoemde acyleringsreactie worden niet alleen de hydroxylgroepen op de 3 en 4” plaatsen maar tevens die op de 4”' 35 plaats geacyleerd. Derhalve kan de hoeveelheid van het alifati- 7906894 9 ache carbonzuurhalogenide worden bepaald door het aantal te acyleren hydroxylgroepen. Indien verder de 3 en 4” plaatsen moeten worden geacyleerd door een verschillende acylgroep wordt een ieta kleinere hoeveelheid van het alifatische carbonzuurha-5 logenide toegepast ter vorming van de eerste 4,,-geacyleerde verbinding, waarna de voornoemde verbinding wordt geacyleerd door het gewenste alifatische carbonzuurhalogenide.

De aldus verkregen verbinding volgens formule 6 kan worden geïsoleerd, waarbij wanneer het reactieoplosmiddel een water-10 mengbaar organisch oplosmiddel is, het reactiemengsel door alkali wordt ingesteld op een pïï van 8 - 10 in water voor het vormen van een neerslag dat wordt afgefiltreerd, terwijl wanneer het reactieoplosmiddel een wateronoplosbaar organisch oplosmiddel is het reactiemengsel wordt geschonken in water, de 15 pE op 8 -> 10 ingesteld, en daarna geëxtraheerd met een geschikt water-onoplosbaar organisch oplosmiddel. Verdere zuivering kan worden uitgevoerd door chromatografie met silicagel, actieve alumina of een adsorptiehars, onder elutie zoals met benzeen-aceton.

20 De acylering van het produkt volgens formule 6 op de 3” plaats wordt uitgevoerd door reactie onder verhitting met een alifatisch carbonzuur-anhydride in aanwezigheid van een base. Voorbeelden van de base zijn alkalicarbonaten, zoals kaliumcar-bonaat of natriumcarbonaat en tertiaire organische aminen, b.v.

25 pyridinische verbindingen, zoals pyridine, picoline of collidine, hoewel men daartoe niet beperkt is en de eerder beschreven alkalicarbonaten, alkaliwaterstofcarbonaten of tertiaire organische aminen kunnen worden toegepast. Voorbeelden van alifatische carbonzuuranhydriden zijn die als gegeven in de werkwij-30 ze A. De verhittingstemperatuur is ongeveer 50 - 120°C bij voorkeur 80 - 100°C. De reactietijd varieert afhankelijk van de reactietemperatuur en aangezien de reactiewerkwijze kan worden gecontroleerd door silica-gel-dunnelaagchromatografie kan het eindpunt van de reactie worden bepaald door het waarnemen van 35 de verdwijning van de verbinding volgens formule 6 in het reac- 7906894 10 tiemengsel, dat ligt tinnen 1-100 uur« Door de voornoemde reactie wordt de eerste acylgroep R2 op de 4" plaats omgelegd op de 3” plaats en de acylgroep R^ geïntroduceerd op de 4" plaats. Isolering en zuivering van de verbinding volgens formule 7 5 uit het reactiemengsel kan worden uitgevoerd door dezelfde pro cedure als beschreven in de werkwijze ter verkrijging van de verbinding volgens formule 4· De verwijdering van de beschermende groepen in de verbinding volgens formule 7 wordt uitgevoerd door behandeling met eventueel ammoniak bevattend methanol 10 of ethanol ter verwijdering van de beschermende groep op de 41,1 plaats, De reactie verloopt bij kamertemperatuur en kan worden beëindigd bij verdwijning van de verbinding volgens formule 7 gevolgd door silicagel dunnelaagchromatografie. Ammoniak en alcohol worden uit het aldus verkregen reactiemengsel afgedestil-15 leerd,en het mengsel verhit in eventueel water bevattend metha nol ter verwijdering van de acylgroep op de 2' plaats, De verhitting wordt uitgevoerd onder terugloop met methanol, De reac-tiewerkwijze kan worden gevolgd door silicagel dunnelaagchromatografie ter vaststelling van het beëindigen van de reactie, 20 De verbinding volgens formule 1d kan worden verkregen door isolering en zuivering van het reactiemengsel na afdestillatie van methanol.

Werkwijze (D): De verbinding volgens formule 1 waarin R^ een lagere alkanoylgroep is, dat wil zeggen de verbinding volgens 25 formule 1d van het formuleblad, waarin R'^, R2 en R^ de voor noemde betekenissen hebben wordt als volgt bereid.

De verbinding volgens formule 6 wordt geacyleerd door verhitting met een alifatisch carbonzuurhalogenide in aanwezigheid van een tertiair organisch amine in een inert organisch oplos-30 middel ter bereiding van de verbinding volgens formule 8 van het formuleblad, waarin R1^» Rg» ^3* R^ en de voornoe®d® betekenissen hebben. De verbinding volgens formule 8 wordt behandeld met ammoniak in methanol of ethanol en daarna verhit in methanol.

35 Ter verkrijging van de verbinding volgens formule 8 wordt 7906894 11 de verbinding volgens formule 6 geacyleerd op de 3" plaats door een alifatisch carbonzuurhalogenide. Tevens kan de genoemde acylering worden uitgevoerd door dezelfde methode als de 3” acylering van de verbinding volgens formule 2 in werkwijze A.

5 Vervolgens worden de beschermende groepen op de 2’ en 4" plaatsen in de verbinding volgens formule 8 verwijderd ter vorming van de verbinding volgens formule 1d. Deze verwijdering kan worden uitgevoerd met dezelfde verwijderingsreactie van de beschermende groepen in de verbinding volgens formule J als 10 reeds vermeld. De verbinding volgens formule 1d kan door isole ring en zuivering als hierna beschreven uit het produkt worden verkregen na verwijdering van methanol.

De isolering van de gewenste verbinding volgens formule 1 kan worden uitgevoerd door de bekende isolering en zuivering 15 van macrolide antibiotica, b.v. concentrering, extraktie, was sen, overdracht en rekristallisatie, alsmede chromatografie met behulp van silicagel, actieve alumina of een adsorptiemiddel, zoals adsorberende harsen.

Tabel A toont de minimaal remmende concentratie (MRC) voor 20 microörganismen van de produkten volgens de uitvinding. Sr blijkt dat de verbinding volgens formule 1 effectief is tegen macrolide resistente A groep microörganismen.

De volgende voorbeelden illustreren bereidingen van de verbinding volgens formule 1 van de uitvinding.

25 Be Rf-waarden in de voorbeelden worden gemeten, indien niet aangegeven, door de volgende dunnelaagchromatografie.

Dragers: silica gae 60 (Art. 5721, Merck Co.)

Ontwikkelaar: A: n-hexaan - aceton - benzeen - ethylace-taat - methanol (30 : 10 : 25 ! 20 : 10). 30 Bs benzeen - aceton (3 : 1)

Cs benzeen - aceton (4 ï l) 7906894 12 ιΗ É? £3 GO T- CM tn >, MW»· » » Λ

-p OKVOICVOOOCM O

^ tr\ cm tn Ο 1- m

M O _ ·— *H

o--£j M C CO VO cm Ή & % ο* ; Ο 8 S § °’ § 5

Η S___* * * * * - S

>5 Χ 00 VO )Λ ΙΛ CM ΙΟ > g φ ♦*·*·»·» » » Ο Μ > ο Οτ-ΌΌΐηΟΟΌ S3 •Η Η <3 CM Ο Ο

ft - X ΙΟ Η ______—— - S

ho νο r- in (Λ in CM VO cö ^ pp »»·*»·> ·» ·* »p WW t-VOCMVOCMITVOt- «

·» κ t— CM

O H--——-—- €> h >, vo r- in m in in vf oo +» ft h OqS **·«*.···*·· ^** ¢3- o h > t-KVVOVOOCMOO' Φ « r-4 ft 1-4 T- +=> r4 aJ a-----—-- o >j> si vo r m m in cm vo *h +> O W O 0 «·«··· » » a

SO <β h W ·— KVCMVOCMirVOr- O

O Ή S3 ft r- CM f+ (Ö Ή —^bc; 3——^ — > TCtn in cm vo ® ••cd +5 o o »«- «- » » » ό ^ ^ o > THhh T-miftVOCMlftOr -HÖ «} W 3 ft ft CM T- CM (H® -. o ε

® vo r-m m in ·>φνο B

Ι·ζ30^ ·> Λ ·· * ^ m mr QflJ

<3 ® t-KVCMVOCMUVO·- <Ö -P

a M T- T- cm_ S b o vOr-minminNvo φ ft (gOti Λ'·» ·*·» ·* ·*-·*·* 'O 0) ιΗ > T- KV VO VO VO CM Or- £30 OW r- CÖ h ^ cd tso vo r- in n in cmvo -Pt £{ O ·* » ·« ^ ^ ^ ·* φ <ïj «j C-^W t-KVCMVOCMITVOt- ® •H t— t— CM W ® H g " TÖ KV lFv CM vo S3 S3 PQ O O ·. ·* ·» ·» ♦> © <S> <x} ,α <1 h rfoin^cjinOr tj +»

£-* P-i OJt-C\I © CQ

> od vo tn in <ΜΚΛ co «·«»«* « «i \Q ©

O O Ot-CMCMOOOVO ·— ?H

<3 <3 t— t— KV O

T- +3 Φ ............ ........ -H 1¾ me 33 ·Η -P -P w cd cd ·> o cd cö o Sn Η H 3 o A ft -H Oj o ε = r >S ^

kv -=3" S

...... O S3 /ft * * Μ Φ

/ ω LTV S3 H

/ kv O «cm cö ra

/ lTV <tj***>-tCM ® -H

/ vo KV kv · O i—i S3 tso / οιηιτννοσνρ-Βτ- ocö £3 / o KV KV ·— t— cm ïao •H k E-iWCOt— i— t-ffl® · 0 Μ/ω «dSSOOO®® ® o w S3 /s S3 S3 S3 S w / ra οοοπο.ηοο ·ηφ

\ W/W £303303333¾¾ OM

tao h / s3 φφφφφφοο >5 h ££ ®/ cd hhhhOOi>ï>j 8® ^ >/ ttO 000000OO O Φ

/ h cdaJcdccJeöcö · · OW

/0 *·····+3+5 MO

/ ft MWMMWMftO -P®

O/Φ ΟΟΟΟΟΟ-ΦΦ >a!H

Od/ocdcdcöidcdcdOO h® S/ h 4J+S+34J4J+J-P-P P=3 t30 / Ot cncncQcncncncnco I x / 7906894 . È 13

Voorbeeld I

3”-Acetyl-4"-butyry1ty1o s ine:

Kaliumcarbonaat (7 g) werd toegevoegd aan tylosine (10 g) opgelost in azijnzuuranhydride (20 ml) en gedurende 24 uur bij 5 60°C geroerd. Het reactiemengsel werd geschonken in water (100 ml), ingesteld op een pH van 9,5 door toevoeging van gasvormige ammoniak en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (100 ml). Het extrakt werd gedroogd met anhydrisch magne9ium-sulfaat en in vacuum gedroogd tot ruw 18, 2', 4% 4M'-tetra-10 acetyl-3, 18-0-cyclo-tylosine (10,2 g) TLC: H£a - 0,75, HfB » 0,49, Hfc - 0,54 (TIC van tylosine: Hf^ = 0,20, Hfj * 0,01, Hfc * 0,01)

Massa: 1085 (M+), 1024 (M+-59)

Bo.terzuur (4 al) werd toegevoegd aan het voornoemde pro-15 dukt (10 g) opgelost in droog pyridine (50 ml) en gedurende 4 dagen bij 100°C geroerd. Het reactiemengsel werd geschonken in water (400 ml) en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (200 ml).

Het extrakt werd gedroogd met anhydrisch magnesiumsulfaat, gedroogd in vacuum en men verkreeg ruw 18, 2', 3”, 4"’-tetraace-20 tyl-3, 18-0-cyclo-4"-butyryl-tylosine (9,8 g).

TIC: BfB = 0,77, Bfc = 0,61

Het voornoemde produkt werd gechromatografeerd over sili-cagel onder elutie met benzeen-aceton (15 : 1) waarbij het elu-aat werd verkregen met de voornoemde Hf-waarde en een gezuiverd 25 produkt werd verkregen (3,5 g)· Dit werd opgelost in methanol (30 ml) en toegevoegd aan methanol verzadigd met ammoniak (20 ml), en daarna geroerd gedurende 8 uur bij kamertemperatuur.

Water werd aan het reactiemengsel toegevoegd en dit tweemaal met chloroform (150 ml) geëxtraheerd. Het extrakt werd gedroogd 30 met anhydrisch magnesiumsulfaat en gedroogd in vacuum. Het re sidu werd opgelost in methanol (150 ml), gedurende 12 uur onder terugvloeikoeling gekookt en in vacuum gedroogd. Het residu werd gechromatografeerd over een silicagelkolom en geëlueerd met benzeen-aceton (9:1) en benzeen-aceton (7:1). Het door de 55 eerstgenoemde behandeling verkregen eluaat werd gedroogd in 7906894 14 vacuum waarbij men 3"» 4"-diacetyl-4"-butyryltylosine verkreeg (TLF: Sf^ = 0,71» 4OO mg) ea het eluaat verkregen door de laatste behandeling werd in vacuum gedroogd waarbij men 3”-acetyl-4”-butyryltylosine (2,5 g) verkreeg.

5 TLC! HfA * 0,57

Massa: 922 (M+-87-18) mm (100 MHz in CDCl^): 1,39 (3^.), 1,76 (12 CHj), 1,96 (3n0Ac), 2,51 f3'noz3)2J, 3,44 (2"» 0CH3), 3,56 (3"‘ 0CH3), 9,57 10 (18 CHO) dpm.

Voorbeeld II

3”-Acetyl-4"-propionyltylosine:

In voorbeeld I werd boterzuuranhydride vervangen door propionzuuranhydride en verkreeg men 3,,-acetyl-4,,-propionyl-15 tylosine via 18, 2’, 3% 4"’-tetraacetyl-5, 18-0-cyclo-4"- propionyltylosine (TIC: Hf^ = 0,75, R£c = 0,59).

TLC: HfA - 0,55 Massa: 1015 (M+) mm (100 MHz in CICl^): 1,39 (3*^), 1,76 (12 CHj), 1,96 20 (3"0Ao), 2,51 ri'X(CX3)2-J' ?’44 (2"' 0CH3), 3,56 (3"' 0CH3), 9,56 (18 CHO) dpm.

Voorbeeld Ill 3", 4"-Eiacetyltylosine: 25 In voorbeeld I werd boterzuur vervangen door azijnzuur- anhydride en verkreeg men 3"»4M-diacetyltylosine via 18, 2”, 3”, 4”, 4,n-pentaScetyl-3, 18-0-cyclo-tylosine (TLC: Rfg + 0,71, Hfc = 0,55).

. TLC: Hf = 0,53 30 Massa: 981 (M+-18) mm (100 MHz in CDC13): 1,39 (3'OHj), 1,75 (13 CH3), 1,97 (3n0Ao), 2,11 (4"0Ac), 2,51 f3'TS(CX3)2J, 3,44 (2'" 0CH3), 3,56 (3"' OCHj), 9,56 (18 CHO) dpm.

7906894 15

Voorbeeld 17 3., -Acetyl-4"-hexanoyltylosine:

In voorbeeld I werd boterzuuranhydride vervangen door hexaanzuuranhydride en verkreeg men 3"-acetyl-4',-hexanoyltylo-5 sine via 18, 2', 3"» 4”1 -tetraacetyl-3, 18-0-cyclo-4"-hexanoyl- tylosine (TLC: Rf^ = 0,80, Rfc » 0,65).

TLC: R^A * 0,61

Massa: 922 (M+-115 -18), 390 mm (100 MHz in C2)C13): 1,39 (3" CHj), 1,76 (12 CH,), 1,96 10 (3M0Ac), 2,52/^(0^)^, 3,45 (2"‘ 0CH3), 3,55 (3rM 0CH3), 9,55 (18 CH0) dpm.

Voorbeeld T

4., -Isovaleryl-3,t-propionyltylosine.

15 Anhydrisch kaliumoarbonaat (37,7 g) werd toegevoegd aan tylosine (50 g) opgeloat in propionzuuranhydride (139,8 ml) en het mengsel gedurende 24 uur geroerd bij 60°C. Het reactiemeng-sel werd geschonken in water (500 ml), ingesteld op een pH van 9,5 door toevoeging van waterig ammoniak en tweemaal geëxtra-20 heerd met chloroform (300 ml). Het extrakt werd gewassen met water, gedroogd door toevoeging van anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum verder gedroogd tot ruw 3, 18-0-cyclo-18, 2', 4”, 4"*-tetrapropionyltyrosine (48,5 g).

TLC: HfA a 0,84, Hfj * 0,74, RfQ = 0,57.

25 Isovaleriaanzuuranhydride (4,5 rol) werd toegevoegd aan het voornoemde produkt (10 g) opgelost in droog pyridine (50 ml) en gedurende 5 dagen bij 100°C geroerd. Pyridine werd afgedestilleerd in vacuum uit het reactiemengsel en het residu werd geschonken in water (200 ml), dat tweemaal werd geëxtraheerd met 30 chloroform. Eet extrakt werd in volgorde gewassen met water en waterige ammoniak (pH 9,0), gedroogd door toevoeging van anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum verder gedroogd tot ruw 3, 18-0-cyclo-4,,-isovaleryl-18, 2', 3", 4"'-tetrapropionyltylosine (10,2 g).

35 TLC: Rf_ = 0,87, Rf„ = 0,78.

£ U

7906894 16

Methanol verzadigd met ammoniak (50 ml) werd aan dit pro-dukt toegevoegd opgelost in methanol (50 ml) en gedurende 15 uur hij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd geschonken in water (500 ml) en tweemaal geëxtraheerd met chloro-5 form (5OO ml). Het extrakt werd gedroogd in vacuum. Het residu werd opgelost in methanol (100 ml) en gedurende 17 uur onder terugvloeikoeling gekookt. Het reactiemengsel werd in vacuum gedroogd tot het produkt, 9,5 S» dat werd gechromatografeerd over een silicagelkolom, geëlueerd met benzeewuseton (15 * 1 -10 7 ! I) tot men 4"-isovaleryl-3"» 4,M-dipropionyltylosine (TLC:

RfA * 0,79» 100 mg) en 4"-isovaleryl-3"-propionyltylosine (2,7 ff) verkreeg* TLffr RfA * 0,60'

Massa:. 981 (m+-73), 954 (M+-101) 15 UMR (100 MHz in ORClj): 1,39 (ƒ" CH^), 1,75 (12 Cïïj), 2,51 3)2J, 3,43 (2”' 0CH5), 3,55 (3,M 0CH3), 9,56 (18 CH0) dpm.

Voorbeeld 71 4"-Butyryl-3"-propionyltylosine: 20 In voorbeeld 7 werd isovaleriaanzuuranhydride vervangen door boterzuuranhydride en verkreeg men 4't-'butyryl-3"-propionyl-tylosine via 4"-butyryl-3, 18-0-cyclo-18, 2', 3”, 4"'-tetrapro-pionyltylosine /~TLC: Rf * 0,87, Rfc = 0,78, MR (100 MHz in CDC13): 1,39 (3" ci3), "1,72 (12 CH^, 2,36 (3'K(ch3)2), 3,39 25 2”» 0CH2), 3,46 (3”1 OCHj) dpm_7· TLC: Rf = 0,58 Massa: 954 (M+-87) MR (100 MHz in CDGl^): 1,39 (3" CHj), 1,76 (12 CH^), 2,51 f3'K(CE3)2J, 3,44 (2"' 0CH3), 30 ' . · 3,56 (3,M 0CH3), 9,56 (18 CH0) dpm.

Voorbeeld VII

3",4"-Lipropionyltylosine.

In voorbeeld 7 werd isovaleriaanzuuranhydride vervangen door propionzuuranhydride en verkreeg men 3", 4"-dipropionyl-35 tylosine via 3, 18-0-cyclo-18, 2', 3", 4", 4"'-pentapropionyl- 7906894 > f 17 tylosine /~TLC: Rf^ » 0,86, RfQ =» 0,76, ME (100 MHz in OHCl^): 1,39 (3” CH3), 1,69 (13 CH5), 2,36 O'NiCH^,,), 3,39 (2”' OCHj), 3,46 (3,,, 0CH3) dpm_7.

TIC: HfA = 0,58 5 Massa: 954 (M+-73) UMR (100 MHz in CDCl^s 1,39 (3” CH3), 1,75 (12 CHj), 2,51 r3'X(<K3)2J’ 5,44 (2«' 0CH3), 3,56 (3”» 0CH3), 9,55 (18 CHO) dpm.

Toorbeeld Till 10 3", d^-Dibutyryltylosine:

Anhydrisch kaliumc arb onaat (7,5 s) werd toegevoegd aan tylosine (10 g) opgelost in boterzuuranhydride (28 ml) en gedurende 24 uur geroerd "bij 60°C. Het reactiemengsel werd geschonken in water (100 ml) en tweemaal geëxtraheerd met chloroform 15 (100 ml). Het extrakt werd gewassen met water, gedroogd door toevoeging van anhydrisoh magnesiumsulfaat en in vacuum gedroogd tot ruw 18, 2’, 4", 4"'-tetrabutyryl-3, 18-0-cyclo-tylo-sinepoeder (9,8 g). TIC: Rf^ » 0,86, Rf^ » 0,74·

Boterzuuranhydride (4 ml) werd toegevoegd aan dit ruwe 20 poeder opgelost in droog pyridine (50 ml) en gedurende 102 uur hij 100°C geroerd. Het reactiemengsel werd geschonken in water (400 ml) en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (200 ml). Het extrakt werd gedroogd door toevoeging van anhydrisch natrium-sulfaat en in vacuum gedroogd tot ruw 18, 2', 3”, 4”, 4”'-penta-25 hutyryl-3, 18-0-cyclo-tylosine (8,9 g).

TLC: RfB » 0,89, Rfc = 0,83.

Het ruwe poeder werd gechromatografeerd over een silicagel-kolom door elutie met henzeen-aceton (19 : 1) hij de voornoemde Hf-waarde waarbij het gezuiverde produkt (2,9 g) werd verkregen 30 na drogen in vacuum.

Methanol verzadigd met ammoniak (25 ml) werd toegevoegd aan het produkt opgelost in methanol (25 ml) en gedurende 10 uur hij kamertemperatuur geroerd, ’tfater werd aan het reactiemengsel toegevoegd en dit tweemaal geëxtraheerd met chloroform (150 ml).

55 Het extrakt werd gedroogd door toevoeging van anhydrisch natrium- 7906894 18 sulfaat en in vacuum verder gedroogd. Het residu werd opgelost in methanol (150 ml) en onder terugvloeikoeling gekookt gedurende 17 uur en in vacuum gedroogd. Het residu werd gechromatogra-feerd over een silicagelkolom door elutie met benzeen-aceton 5 (15 *1-7*1) waarbij men 3”» 4"-<ïibutyryltylosine (2,3 g) verkreeg.

TLC* Hf =0,60

Massa: 1055 (M ) ΓΓΜΗ (100 MHz in CDCl^): 1,39 (3" CH^), 1,76 (12 CH^), 2,51 10 £“3'IT(CH5)2J, 3,44 (2"· 0GH?), 3f56 (5,M OCÏÏj), 9,56 (18 CH0) dpm.

Voorbeeld IX

4”-Acetyl-3 "'-isovalerylty-losine: ^-collidine (13,42 ml) en isovalerylchloride (11,29 ml) 15 werden toegevoegd aan 18, 2', 4", 4M,-tetraëoetyl-3, 18-0-cyclo- tylosine (10 g) beschreven in voorbeeld I opgelost in droog dioxaa en het mengsel werd gedurende 45 uur bij 90°C geroerd.

Het reactiemengsel werd geschonken in ijswater (300 ml) en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (200 ml).

20 Het extrakt werd in volgorde gewassen met 0,1 ïï HC1, ver dunde waterige ammoniak en water en gedroogd door toevoeging van anhydrisch natriumsulfaat, en in vacuum vérder gedroogd waarbij men het ruwe 18, 2’, 4", 4"*-tetraacetyl-3,8-0-cyclo-3”-isovaleryltylosine (10,2 g) verkreeg. TLC: Rf_ = 0,76, Hfn = 25 0,61.

Het ruwe produkt werd gechromatografeerd over een silicagelkolom onder elutie met benzeen-aceton (15 : 1) en het eluaat met de voornoemde Ef-waarde werd in vacuum gedroogd tot het gezuiverde produkt (4,1 g).

30 Methanol verzadigd met ammoniak (100 ml) werd toegevoegd aan het genoemde produkt opgelost in methanol (100 ml) en het mengsel gedurende 12 uur geroerd bij kamertemperatuur. Het reactiemengsel werd geschonken in ijswater (5OO ml) en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (300 ml). Het extrakt werd gedroogd 35 onder toevoeging van anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum 7906894 19 verder gedroogd. Set residu werd opgelost in methanol (100 ml), gedurende 18 uur onder terugvloeikoeling gekookt en in vaouum gedroogd. Het aldus verkregen residu werd met benzeen-aceton (7 : 1) geëlueerd en de overeenkomstige actieve frakties werden 5 verzameld en in vacuum gedroogd tot 4", 4" ,-diacetyl-3,,-isovale« ryl-tylosine (TLCj Rf^ * 0,73» 0,2 g) en 4"-acetyl-3"-isovaleryl-tylosine (3,2 g).

TICt EfA » 0,57

Uassa; 1041 (M+) 10 MR (100 mz in CDCl^)t 1,39 (5" CH^, 1,77 (13 CH,), 2,11 4” OAc), 2,51 Z”5'ir(CH3)2_/, 5,44 (2,M 0CH3), 3,56 (3nt 0CH5), 9,56 (18 CH0) dpm.

Toorbeeld X

15 3,3 ” -Diac e tyl -4 ,r-buty ry 1 ty 1 o sine ï

Azijnzuuranhydride (8,5 ml) werd toegevoegd aan tylosine (10 g) opgelost in droog aceton (50 ml) en gedurende 4 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd geschonken in water (200 ml), ingesteld op een pH van 9,5 door toevoeging van 20 waterige ammoniak en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (200 ml). Het extrakt werd gedroogd door toevoeging van anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum verder gedroogd tot 2'-acetyl-tylosine (10,2 g). TIC: Rf^ = 0,12, * 0,06. (tylosinei Rf^ = 0,20, HfB = 0,01, Rfc » 0,01).

25 Droog pyridine (8,05 ml) en acetylchloride (6,4 ml) werden toegevoegd aan het voornoemde produkt (10 g) opgelost in droog aceton (50 ml) en het mengsel werd gedurende 150 min geroerd bij 45°C. Het reactiemengsel werd geschonken in water (200 ml), ingesteld op een pH van 9,5 door toevoeging van waterige ammoniak 30 en het neerslag werd afgefiltreerd waarbij men 3, 2', 4", 4" tetraacetyltylosine (8,44 g) verkreeg. TLC: Rf^ = 0,40, Rf^ = 0,22.

Boterzuuranhydride (1 ml) werd toegevoegd aan het voornoemde produkt (2,0 g) opgslost in droog pyridine (10 ml) en gedu-35 rende &. dagen bij 100°G geroerd. Het reactiemengsel werd ge- 7906894 20 - * Λ schonken in water (50 ml), ingesteld op een pH van 9*5 door toevoeging van waterige ammoniak en met chloroform (50 ml) geëxtraheerd. Het extrakt werd tweemaal gewassen met 0,1 N HCl (50 ml) en een maal met verdunde waterige ammoniak, gewassen 5 met anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum gedroogd tot ruw 5, 2', 3", 4,M-tetraacetyl-4"-butyryltylosine. TLC: Ef^ » 0,81, Hfc = 0,66.

Methanol verzadigd met ammoniak (10 ml) werd toegevoegd aan dit ruwe produkt opgelost in methanol en gedurende 3 uur geroerd 10 onder ijskoeling* Het reactiemengsel werd geschonken in water (100 ml) en geëxtraheerd met chloroform (100 ml). Het extrakt werd gedroogd door toevoeging van anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum verder gedroogd. Het residu werd opgelost in methanol (50 ml), gedurende 17 uur onder terugvloeikoeling gekookt en in 15 vacuum gedroogd tot het ruwe 3»3"-diacetyl-4'’-butyryltylosine.

Dit werd gezuiverd door silicagelkolomchromatografie onder elu-tie met benzeen-aceton (10 s 1) en leverde het gezuiverde produkt (1,2 g). TLC: RfA = 0,73*

Voorbeeld XI

20 3>3"-Liacetyl-4'’-isovaleryltylosine:

In voorbeeld X werd het boterzuuranhydride vervangen door isovaleriaanzuuranhydride en men verkreeg 3*3"-<liacetyl-4"-iso-valeryltylosine. TLCs Rf^ = 0,76.

Voorbeeld XII

25 3"-Acetyl-4"-isovaleryltylosine:

Kaliumcarbonaat (7 g) werd toegevoegd aan tylosine (10 g) opgelost in azijnzuuranhydride (20 ml) en gedurende 24 uur bij 60°C geroerd. Het reactiemengsel werd geschonken in water (200 ml), ingesteld op een pH van 9>5 door toevoeging van waterige 30 ammoniak en tweemaal geëxtraheerd in chloroform (100 ml). Het extrakt werd gedroogd met anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum verder gedroogd tot het ruwe 18, 2’, 4"» 4"'-tetraacetyl-3, 18-0-cyclo-tylosine /"*Rf.g = 0,49> Massa: 1084 (M+ )J (10,2 g). Isovaleriaanzuuranhydride (4 ml) werd toegevoegd aan het 35 ruwe produkt opgelost in droog pyridine (50 ml) en gedurende 7906894 21 110 uur tij 100°C geroerd. Het reactiemengsel werd geschonken in water (400 ml) en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (200 ml). Iet extrakt werd gedroogd met anhydrisch magnesiumsulfaat en in vacuum gedroogd tot ruw 18, 2’, 3"» 4"'-tetraacetyl-3, 18-0-5 cyclo-4"-isovaleryltylosine /"kf^ * 0,76, Massa: 1168 (M+)_J^.

Het genoemde produkt werd gechromatografeerd over een silicagel-kolom onder elutie met henzeen-aceton (15 * O· Frakties met een Hfg » 0,76 werden verzameld en gedroogd tot gezuiverd produkt (2,8 g).

10 Methanol verzadigd met ammoniak (20 ml) werd toegevoegd aan dit produkt opgelost in methanol (20 ml) en het mengsel gedurende 5 uur geroerd hij kamertemperatuur. Water (200 ml) werd aan het reactiemengsel toegevoegd en tweemaal geëxtraheerd met chloroform (100 ml). Het extrakt werd gedroogd met anhydrisch magne-15 siumsulfaat en in vacuum gedroogd.. Het residu werd opgelost in methanol (1Q0 ml) en gedurende 12 uur onder terugvloeikoeling gekookt. Het reactiemengsel werd in vacuum gedroogd en het residu werd gechromatografeerd over een silicagelkolom onder elutie met henzeen-aceton (9 ï 1) en henzeen-aceton (7 : 1). Het 20 eerste eluaat werd gedroogd in vacuum waarbij men 3", 4"-diace- tyl-4n-isovaleryltylosine verkreeg (Rf_ = 0,59, Massa: 1084 (M ) ) (320 mg). Het laatste eluaat werd in vacuum gedroogd en men verkreeg het gewenste produkt in een hoeveelheid van (1,2 g).

HfB = 0,23 25 Massa: 1042 (M+) 7906894

Claims

9· f C_o n c 1 u s i e s
1, Verbinding volgens formule 1, waarin een waterstofatoom of lagere alkanoylgroep is, A1 en Ag groepen zijn waarvan er één van Rg-groep en de ander een R^-groep is, waarbij Rg en R- alkanoylgroepen met 2-6 koolstofatomen voorstellen, of een 5 5 zout daarvan,
2. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R^ een waterstofatoom is of een zout daarvan, 3* Verbinding volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat A1 een acetyl-, propionyl-, butyryl- of isovalerylgroep en Ag een TO acetyl-, propionyl-, butyryl-, isobutyryl-, valeryl-, isovaleryl- of hexanoylgroep is of een zout daarvan. 4« Verbinding volgens conclusie 3» niet het kenmerk, dat de genoemde· verbinding 3"> 4"-<ïiaoetyltylosine, 3"-e'Cetyl-4"-pro-pionyltylosine, 3,r-acetyl-4,,-butyryltylosine, 3',~acetyl-4,,-iso-15 valeryltylosine, 3"-acetyl-4"-hexanoyltylosine, 3% 4”-dipropio- nyltylosine, 4"-butyryl-3'’-propionyltylosine, 4"-isovaleryl-3"-propionyltylosine, 3”» 4"-<iibutyryltylosine of 4,,-acetyl-3,,-iso-valeryltylosine is of een zout daarvan,
5, Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R^ 20 een lagere alkanoylgroep is.
6, Verbinding volgens conclusie 5 of zout daarvan, met het kenmerk, dat de lagere alkanoylgroep een acetyl- of propionyl-groep is.
7, Verbinding volgens conclusie 6, of een zout daarvan, met 25 het kenmerk, dat A^ een acetyl-, propionyl-, butyryl- of iso valerylgroep en Ag een acetyl-, propionyl-, butyryl-, isobutyryl-, valeryl-, isovaleryl- of hexanoylgroep is.
8, Verbinding volgens conclusie J, met het kenmerk, dat de verbinding bestaat uit 3» 3"-diacetyl-4"-butyryltylosine of 30 3,3'’“diacetyl-4"-isovaleryltylosine of een zout daarvan. 7906894 -f <. ' f" ' OH_“ ¢=¾ 2 _°Xl o / /°\ zy°A* GH3 CH3 ORi h3 C ho/ Vo-* '•oh, la H.CO °ch3 ®3 ΓΟΗΟ °® _OH 2 0·=^^ 0 ~\ / 0 \ 3 )s, h3c-/ 0-( 0-( JP \ ch3 ch3 3^-OH h3c ^\J HD “N^ CIi3 ILjCO 0CH3 ^ CH r-CHO 0H N(CH3)2 0R3 \ ε,ο y °—( /9 \ CH, ™3 y λ-® ^-0¼ H3C )— 0 HO ~\^" ^H3 790 6 8 94 h,co och3 1c *f e CH3 rCH0 OH NCCHjj) 2 0¾ /V X\ /** / H3c'V K^aw0^ Ifi* \ H3 °·\^ Cg3 CHg. g ^-0¾ \-ch3 <C H3C \vZ\o / )-0 HD-^ Vo CH3 \-( Id %C0 0CH3 CH3 rCH0 OH N (pHj) 2 0¾ ο=<^\χΝ\-ο-/ /o\H3°y°a2 \ H„C-< 0-( 0-( X. GL 0H3 X VoB^ V^-ch3 <. h3c VXo/" „{~}J L h3co och, 2 ia CHa I-q*R2 0rJ (0¾) 2_OH χΧ^ χ\ ; /? \_/Vc\_ 0=/ / |0\ / \ /°¾ h3c-<V 0 ^ 0 ' X CH3 X / 0 JVch3 V H3C X/^^O }-0 i^oV Vo LCh3 79 0 6 8 9 4 h3co 3 (S CH3 I 0Rg ^ ¢.0¾)- 2 0 sQ N. ch3 ch5 H3° St0i^V h3co 0CH3 17 18 CH 3 ,-CHOR, if (¾) 2 0R3
1. V / /—<*- /S. / \1 /*ye-/ H3°\ofL, 0xT°\ Γ \ r \ &3σ^( 0 ^ gk3 V"° h3 c 0 *£} cH3 S^CO OOH, ^ CHO »tCH5)2 _*f a Z*7- \-o -/ H3c\oh > h3c\ 0—( 0 ( y \ ch3 ch3 r 3 V OH Y>-ch3 \ h3c n/\o X )—0 ^ ^-cr Ah3 7906894 HjCO 0CH3 6 -3 è, N(CH3) a OH Γ <%_/ ^ 0 0 \2 / 0 \ z}0*2 ^ H3° \ . CH-· CH3 .^•CHa H3c \///Ννχο )—0 \ ^°v' /°J ^ . /^0¾ ch3 rGH0 QR ncch3)2 _0K2 0 =\ / ' __A^3 H3G“V ch GH3 ^>-CH3 X h3c V"Xo^ Λ-0 ι,ο > v Loh* h3co cch3 8 ' -CBO 00 n(CH3)z CH3 X3 I >-( /-<** oA/\oM°-( "=CV H3G 0 cii3 CH3 // VOR^ ^>-ch3 g H3C ' 17 18 CO j CHO-alkanoyl \o L 0ί3 -1-> h3co och3 V_q 7. fl A G Q Λ X