DK149191B - Antiviralt virksom farmaceutisk olie-i-vand-formulering af 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanin(acyclovir) - Google Patents

Description

i 149191

Opfindelsen angår en antiviralt virksom farmaceutisk olie-i-vand-formulering af 9-(2-hydroxyethoxy-methyUguanin (acyclovir) eller et salt eller en ester heraf som aktiv bestanddel, indeholdende en 5 dispers oliefase og en kontinuerlig vandig fase, der indeholder den nævnte aktive bestanddel og en polyvalent alkohol.

Acyclovir og farmaceutisk acceptable salte og estere deraf vides at besidde antiviral virkning mod 10 forskellige klasser af DNA- og RNA-vira, både in vitro og in vivo, jf. engelsk patent nr. 1.523.865. Navnlig er forbindelsen virksom mod herpes simplex virus, der forårsager keratitis herpetica hos kaniner, encephalitis herpetica hos mus og cutant herpes hos marsvin.

15 Acyclovir har den ulempe, at det har en lav op løselighed i vand og er næsten totalt uopløselig i hydrofobe opløsningsmiddelsystemer. Det er følgelig vanskeligt at fremstille en topisk formulering, som indeholder en tilstrækkelig opløst koncentration af aktiv 20 bestanddel til at denne kan udøve sin fulde virkning, og ligeledes er det vanskeligt at optimere vandringen af forbindelsen ind i huden. Foruden lethed med.hensyn til frigørelse er det også vigtigt, at enhver formulering af en farmaceutisk aktiv forbindelse er stabil 25 i lasngere tidsrum, ikke forringes med hensyn til virkning, ikke misfarves eller danner uopløselige stoffer eller komplekser og ikke er for irriterende for huden eller slimhinden.

I eksempel 26 i engelsk patent nr. 1.523.865 30 er angivet bestanddelene i en olie-i-vand-creme indeholdende 5% vasgt/vægt acyclovir, blandt hvilke bestanddele er 5% vægt/vægt propylenglycol. Propylenglycolens funktion i formuleringen i eksempel 26 er at virke som fugtighedsbindende middel, dvs. som hygroskopisk be-35 standdel, der skal forbedre den kosmetiske fornemmelse af produktet og også begrasnse udtørring under opbevaring. Ved dyreforsøg bevirkede denne formulering og 149191 2 en formulering af vandig creme B.P. (Britisk Pharma-copé) indeholdende acyclovir ikke nogen særlig hurtig helbredelse, sandsynligvis på grund af en utilstrækkelig mængde aktiv bestanddel i opløsning samt ringe 5 indtrængning af den aktive bestanddel i huden.

På grund af hudoverfladens, særlig stratum cor-neums, lipid-natur har man længe ment, at den aktive bestanddel i en emulsion med henblik på opnåelse af god gennemtrængning af huden skal være til stede i 10 oliefasen, så at den kan fordele sig ind i hudens li-pidkomponenter.

Det har nu vist sig, at man til opnåelse af optimal frigørelse af acyclovir fra topiske formuleringer skal sørge for, at den ydre fase i et olie-i-15 vand-emulsionspræparat, dvs. den vandige fase, indeholder den maksimale koncentration af opløst lægemiddel. Endvidere har det vist sig, at man ved at anvende en høj koncentration af en polyvalent alkohol som hjælpeopløsningsmiddel i den vandige fase, f.eks.

20 mindst 50% vol/vol af denne fase, kan opnå en forøget koncentration af opløst acyclovir, hvilket fører til forøget virkning og effektivitet af sådanne formuleringer. En sådan høj koncentration af en polyvalent alkohol gør det også unødvendigt at inkorporere et 25 konserveringsmiddel som yderligere bestanddel i formuleringen.

Sådanne topiske formuleringer tilfredsstiller også kriterierne for fornøden stabilitet og bibeholdelse af virkning og er ikke for irriterende for hud 30 eller slimhinde, og de har den fordel sammenlignet med den kendte formulering, at de gennemtrænger huden mere effektivt og i større koncentration med det resultat, at der opnås en hurtig og fuldstændig helbredelse for infektionen.

35 Til opnåelse af en formulering med de ovennævnte fordelagtige egenskaber skal formuleringens bestandde- 3 149191 le på vægt/vægt-basis ligge inden for nærmere bestemte grænser. Formuleringen ifølge opfindelsen er således ejendommelig ved, at den omfatter 1 til 10% vægt/vægt acyclovir eller et salt eller en ester deraf, 30 til 5 50% vægt/vægt af den polyvalente alkohol og 20 til 40% vægt/vægt vand, hvorhos procentangivelserne er beregnet på den totale vægt af formuleringen.

Som nævnt ovenfor var et problem med den i eksempel 2 i engelsk patentskrift nr. 1.523.865 be-10 skrevne formulering den ringe indtrængning af den aktive bestanddel i huden. I modsætning hertil har formuleringen ifølge den foreliggende Opfindelse vist sig at give betydelig bedre gennemtrængning eller penetration af den aktive bestanddel gennem huden.

15 Denne forskel med hensyn til penetration gennem huden er en parameter, der er lidt vanskeligt at størrelsesbestemme i praksis, men med nedenstående forsøgsrapport er der tilvejebragt data, som demonstrerer denne forbedrede penetration. I forsøgsrapporten er en topisk 20 formulering i overensstemmelse med eksempel 2 i den foreliggende ansøgning sammenlignet med en creme fremstillet i overensstemmelse med eksempel 26 i britisk patentskrift nr. 1.523.865. Som det vil ses, beskriver forsøgsrapporten afprøvningen af de to formu-25 leringer ved behandling af en topisk herpesinfektion hos marsvin, og cremen ifølge den foreliggende opfindelse giver en meget hurtigere helbredelse af infektionen end cremen ifølge den kendte teknik. Idet de to creme administreres med den samme koncentration af aktiv be-30 standdel på nøjagtig samme måde, må forskellen i helbredende virkning hos de to formuleringer tilskrives en forskel i den aktive bestanddels penetration gennem huden, dvs. en farmaceutisk-teknisk effekt.

I det følgende skal henvisninger til acyclovir 35 opfattes som indbefattende også farmaceutisk acceptable salte og estere deraf, med mindre noget andet klart fremgår af sammenhængen.

4 149191 I en foretrukken udførelsesform omfatter formuleringen ifølge opfindelsen 2 til 5% vægt/vægt acyclovir, 35 til 45% vægt/vægt af den polyvalente alkohol og 25 til 40% vægt/vægt vand. Formuleringen indeholder 5 fortrinsvis ca. 40% vægt/vægt af den polyvalente alkohol.

En polyvalent alkohol er en alkohol med to eller flere hydroxyIgrupper. Blandt polyvalente alkoholer, der er egnede til inkorporering i den ved fremgangs-10 måden ifølge opfindelsen fremstillede topiske formulering, kan nævnes glycoler og macrogoler, såsom propy-lenglycol, butan-l,3-diol, polyethylenglycol og glycerol, idet propylenglycol er den foretrukne alkohol.

Når der anvendes mindst 50% vol/vol af en poly-15 valent alkohol i den vandige fase i den ifølge opfindelsen fremstillede formulering, stiger den maksimale koncentration af acyclovir ved omgivelsernes temperatur fra 0,15% vægt/vægt, som er den maksimale opløselighed af acyclovir i vand, til 0,3% vægt/vægt. Når 20 således koncentrationer på mere end 0,3% vægt/vægt acyclovir i vandig fase inkorporeres i en formulering, vil mængden af aktiv bestanddel udover 0,3% være i suspension og virke som et reservoir for lægemidlet. Den i formuleringen tilstedeværende mængde acyclovir skal 25 være i det mindste tilstrækkelig til at være antiviralt virksom og ikke-toksisk. Det i formuleringen anvendte vand er fortrinsvis renset vand, hvilket vil sige renset i overensstemmelse med forskrifterne i Britisk

Pharmacopé.

30

Oliefasen i den omhandlede formulering kan fremstilles ud fra kendte bestanddele på kendt måde.

Medens fasen kan indeholde blot en emulgator, indeholder den fortrinsvis en blanding af mindst én emulgator med et fedtstof eller en olie eller med 35 et fedtstof og en olie. Som nærmere forklaret i det følgende inkorporeres der fortrinsvis en hydrofil emulgator sammen med en lipofil emulgator, der virker som en stabilisator. Det foretrækkes også 5 149191 at inkorporere både en olie og et fedtstof. Tilsammen udgør emulgatoren eller emulgatorerne med eller uden stabilisator eller stabilisatorer det såkaldte emulgeringsvoks, og vokset udgør sammen med olien og/eller 5 fedtstoffet det såkaldte emulgerings-salvegrundlag, der danner den disperse oliefase i emulsionerne.

Topiske olie-i-vand-kompositioner kan formuleres på flere måder, der alle afhænger først og fremmest af orienteringen af emulgeringsmidlet og emuisions-sta-10 bilisatoren ved olie/vand-grænsefladen, med de ikke-po-lære eller lipofile grupper opløselige i oliefasen og de polære eller hydrofile eller lipofile grupper i den vandige eller kontinuerlige fase. De mere polære hydrofile emulgeringsmidler resulterer således i olie-i-vand-15 emulsioner. Dette princip er blevet sat i system med ideen om en "hydrofil-lipofil balance" (H.L.B.) Griffen, W. C, J.Soc. Cos. Met. Chem., 1954, f5, side 249, og de forskellige emulgeringsmidler er blevet tildelt H.L.B-tal, på grundlag af hvilke det kan forudsiges, hvorle- 20 des de vil opføre sig sammen med bestanddele af de vandige faser og oliefaserne.

Det er en anerkendt teori i formuleringen af olie-i-vand-emulsioner, at et lipofilt emulgeringsmiddel kan kombineres med et hydrofilt emulgeringsmiddel 25 af samme kemiske art i varierende forhold til opnåelse af den ønskede H.L.B.-værdi. Med den høje koncentration af polyvalent alkohol, der kræves til maksimering af acyclovir-frigivelse fra formuleringen ifølge opfindelsen, er det hensigtsmæssigt med en H.L.B.-værdi på fra 30 3,5 til 10,0, fortrinsvis 4,0 til 8,0 og bedst ca.

5,5, medens det til sammenligning kan nævnes, at det accepterede H.L.B.-område for mineralolie-i-vand-emul-sioner er 8 til 18.

Blandt emulgatorer og emulsionsstabilisatorer, 35 der er egnede for fremstilling af formuleringen ifølge opfindelsen, kan nævnes polyoxyethylen-sorbitan-monostearåt (polysorbat 60), sorbitan-monostearat, sorbitan-monooleat, cetostearylalkohol, myristylalkohol, 6 149191 glyceryl-monostearat og natriumlaurylsulfat. En fore-trukken kombination af emulgeringsmidler er cetostearyl-alkohol og natriumlaurylsulfat i et forhold på fra 3:1 til 30:1, fortrinsvis fra 6:1 til 20:1, og bedst 5 fra 9:1 til 15:1.

Formuleringen kan eventuelt indeholde andre emulgeringsmidler, som f.eks. poloxamere, i en mængde på fra 0,1 til 3% vægt/vægt, fortrinsvis 0,3 til 2% vægt/vægt, og bedst omkring 1% vægt/vægt, af formule-10 ringen.

Valget af egnede olier eller fedtstoffer til formuleringen træffes med henblik på opnåelse af· de Ønskede kosmetiske egenskaber, eftersom opløseligheden . af acyclovir i de fleste olier, der kan tænkes anvendt 15 i farmaceutiske emulsions-formuleringer, er meget lav.

En creme skal således fortrinsvis være et ikke-fedten-de, ikke-plettende og afvaskeligt produkt med passende konsistens til undgåelse af udsivning fra tuber eller beholdere. Der kan anvéndes mono- eller dibasiske alkyl-20 estere med lige eller forgrenet kæde, som f.eks. diiso-adipat, isocetylstearat, propylenglycoldiester af kokosnødfedtsyrer, isopropylmyristat, decyloleat, iso-propylpalmitat, butylstearat, 2-ethylhexylpalmitat eller en blandet ester af 2-ethylhexansyre med en blan-25 ding af cetyl- eller stearylalkoholer, der er kendt som "Crodamol CAP", idet de tre sidstnævnte er foretrukne estere. Disse estere kan anvendes alene eller i kombination afhængig af de ønskede egenskaber. Alternativt kan der anvendes højtsmeltende lipider, som 30 f.eks. hvid blød paraffin og/eller paraffinolie eller andre mineralolier.

Man kan fremstille den beskrevne topiske farmaceutiske formulering ved blanding af kombinationen af acyclovir, polyvalent alkohol og vand med oliefasen.

35 Måden, hvorpå emulsionen formuleres, vil selv sagt variere alt efter mængden og arten af bestanddelene, men formuleringen foregår ikke desto mindre i overensstemmelse med fra emulsionsteknologien kendt teknik 7 149131 (jf. The Pharmaceutical Codex, London, The Pharmaceutical Press, 1979), Eksempelvis kan acyclovir først inkorporeres helt og holdent i den vandige del, hvor det kan danne udelukkende en opløsning eller en blandet 5 opløsning/suspension, og derpå emulgeres med salvegrundlaget, Når der anvendes høje koncentrationer af acyclovir kan alternativt en del af den vandige del formuleres som en emulsion, hvorefter resten af vand polyvalent alkohol og acyclovir tilsættes og disperge-10 res i emulsionen. Ved en anden teknik kan acyclovir inkorporeres i emulsions-salven før emulgeringen med den vandige del. Ved anvendelse af disse fremgangsmåder foretrækkes det at opvarme den vandige del og salvegrundlaget til ca. 40 til 80°C, fortrinsvis 50 til 15 70°C, før emulgeringen, der kan udføres ved kraftig omrøring under anvendelse af eksempelvis en sædvanlig laboratorieblander. Finere dispersioner af oliefasen kan opnås ved homogenisering eller findeling i en kol-loidmølle.

20 En topisk formulering som den her omhandlede kan anvendes til behandling eller hindring af virusinfektioner, der er fremkaldt af eksempelvis Herpes zoster, Herpes varicella og Herpes simplex type 1 og 2, f· der bevirker sådanne sygdomme som f.eks. helvedesild, 25 skoldkopper, Herpes labialis og Herpes genitalis.

Formuleringen bør mest hensigtsmæssigt påføres det angrebne område af huden eller slimhinden fra 2 til 6 gange dagligt, fortrinsvis fra 3 til 4 gange.

Opfindelsen forklares nærmere ved hjælp af følgende eksempler og forsøgsrapport.

Eksempel 1 2% vægt/vægt vandig creme 35 En vandig creme fremstilledes ud fra følgende bestanddele: 8 149191 1. Acyclovir 20,0 g 2. Cetostearylalkohol,B.P. 67,5 g 3. Natriumlaurylsulfat, B.P. 7,5 g 4. Hvid, blød paraffin,B.P. 125,0 g 5 5. Paraffinolie, B.P. 50,0 g 6. Propylenglycol, B.P. 400,0 g 7. Renset vand, B.P. til 1000,0 g 2 g af den anvendte acyclovir opløstes i vandet og propylenglycolen ved omgivelsernes temperatur til 10 dannelse af en vandig opløsning. Paraffinerne (4,5) og emulgatorerne (2,3) blandedes med hinanden og opvarmedes til 60°C, hvorpå de emulgeredes med den vandige opløsning, ligeledes v.ed 60°C, under anvendelse af en laboratorieblander ved 8000 omdrejninger/minut.

15 Den resterende mængde acyclovir tilsattes, blandingen dispergeredes, henstilledes til afkøling og fyldtes i lakerede aluminiumtuber.

Eksempel 2 5% vægt/vægt vandig creme 20 På den ovenfor beskrevne måde fremstilledes en vandig creme indeholdende 5% vægt/vægt acyclovir.

Eksempel 3 25 0,2% vægt/vægt vandig creme 1. Acyclovir 2,0 g 2. Isopropylmyristat, B.P. 100,0 g 3. 2-Ethylhexylpalmitat 50,Q g 4. Lys paraffinolie, B.P. 50,0 g 30 5. Cetostearylalkohol, B.P. 30,0 g 6. Glycerylmonostearat, B.P. 16,0 g 7. Polysorbat 60,B.P.C. 4,Og 8. Propyl engly co 1,' B.P. 400,0 g 9. Renset vand, B.P. til 1000,0 g 33 Cremen fremstilledes på den i eksempel 1 be skrevne måde, med undtagelse af at hele mængden af acyclovir til at begynde opløstes i propylenglycol/vand-bestanddelene (8,9).

9 149191

Eksempel 4 2% vægt/vægt vandig creme

En vandig creme fremstilledes ud fra følgende bestanddele ved den i eksempel 1 beskrevne fremgangs-5 måde.

1. Acyclovir 20,0 g 2. Cetostearylalkohol, B.P. 67,5 g 3. Natriumlaurylsulfat, B.P. 7,5 g 4. Hvid, blød paraffin, B.P. 125,0 g 10 5. Paraffinolie, B.P. 50,0 g 6. Butan-1,3-diol, B.P. 400,0 g 7. Renset vand, B.P. til 1000,0 g

For søgsrapport 15 l. Det følgende er en redegørelse for afprøvningen af to farmaceutiske formuleringer, der indeholder 9-(2-hydroxyethoxymethyl)quanin (acyclovir).

2. De to formuleringer er som følger: a) Topisk creme med 5% acyclovir, formulering 20 ifølge den foreliggende opfindelse.

FORMULERING

Bestanddele Mængde til 10 kg charge

Acyclovir, mikroniseret 25 (faktoreret) 500,0 g

Cetostearylalkohol BP 675,0 g

Natriumlaurylsulfat BP 75,0 g

Hvid blød paraffin BP 1250,0 g

Paraffinolie BP 500,0 g 30 Propylenglycol BP 4000,0 g

Renset vand 3000,0 g

Fremstillingsmåde.

A. Acycloviret afvejes i et bægerglas.

35 B. Propylenglycol/vand-blandingen tilberedes i en beholder af rustfrit stål, og der blandes med en glasstav.

149191 ίο C. Den aktive forbindelse dispergeres i en del af propylenglycol/vand-blandingen under anvendelse af et blandeapparat med stor forskydningspåvirkning.

D. Den resterende blanding opvarmes til 70°C under 5 anvendelse af et dampbad.

E. Cetostearylalkoholen, natriumlaurylsulfatet, den hvide bløde paraffin og paraffinolien smeltes sammen og opvarmes til 70°C i en beholder af rustfrit stål under anvendelse af et dampbad.

10 P. D sættes til E, og der fyldes op til den korrekte vægt med vand og emulgeres under anvendelse af et blandeapparat med stor forskydningspåvirkning.

G. Der afkøles til 45 til 50°C.

H. Suspensionen af aktiv forbindelse fra C tilsættes, 15 og der blandes godt og afkøles hurtigt i et isbad og omrøres, indtil blandingen er stivnet ved stuetemperatur .

b) Topisk creme med 5% acyclovir, formulering ifølge 20 eksempel 26 i engelsk patentskrift nr. 1523865.

FORMULERING

Bestanddele Til 1 kg charge

Acyclovir, mikroniseret 25 (faktoreret) 50,0 g

Vandfrit lanolin BP 200,0 g

Polysorbat 60 BP 40,0 g

Sorbitanmonopalmitat 20,0 g

Let paraffinolie 40,0 g 3Q Propylenglycol BP 50,0 g

Methyl-hydroxybenzoat BP 1,0 g

Renset vand BP 599,0 g

Fremstillingsmåde.

35 A. Acycloviret dispergeres i 100 ml vand.

B. Propylenglycolet og det resterende vand blandes sammen, blandingen opvarmes til 60°C, og methyl-hydroxybenzoatet opløses deri.

14919 1 11 C. Det vandfri lanolin, polysorbat 60, sorbitanmono-palmitatet og den lette paraffinolie smeltes sammen ved 60°C.

D. B sættes til C og der emulgeres, der fyldes op til 5 850 g med vand og afkøles til 45°C, og suspensionen af aktiv forbindelse tilsættes og dispergeres.

E. Der afkøles under omblanding til stuetemperatur.

3. Afprøvningen af de ovennævnte formuleringer udførtes 10 som beskrevet nedenfor.

Metode.

Undersøgelsen af de to cremeformuleringer udførtes på 12-14 uger gamle hunlige albinomarsvin af en 15 vægt på 600-700 g hver (opnået fra Porcellus Animal Breeding Ltd., Heathfield, Sussex, England). Dyrene husedes enkeltvis eller i par og fik som foder F.D.I.

(Frant Diet No. 1 opnået fra Oxoid Labs., H.C, Styles (Bewdley Ltd.), Bewdley, Worcs., England) og vand ad 20 libitum.

Begge flanker på hvert marsvin barberedes tæt, og den tilbageværende pels fjernedes med en gængshår-fjerningscreme (Immac.). De blottede hudarealer vaskedes derefter og tørredes. 4 Timer senere blev otte 25 steder på hver flanke ridset i let grad under anvendelse af et sløvt skalpelblad gennem en dråbe af en suspension af H31-stammen af herpes simplex virus type 1 g indeholdende 10 pfu/ml (pfu = plaquedannende enheder).

Herpes simplex virus type 1 stamme H31 dyrkedes ud 30 fra en kultur taget fra halsen med en vatpind på St.

Mary's Hospital, Paddington, London og leveret af Dr. D. Jeffries som passage 2 i humane embryonale lungeceller. Den er siden blevet dyrket i VERO-celler og er på passagetrin 10, og den er blevet opbevaret 35 som en rå cellekulturekstrakt i 1 ml rumfang ved -70°C.

Denne stamme giver en selvbegrænsende infektion, som ikke er dødelig.

12 149191

Behandlingen med cremerne påbegyndtes 18 timer efter infektion, hvor små papler og erythema på infektionsstedet var blevet synlige. Den ovennævnte creme ifølge engelsk patentskrift nr. 1523865 admini-5 streredes til den højre flanke på to marsvin, og den ovennævnte creme ifølge den foreliggende opfindelse administreredes på tilsvarende måde til den højre flanke på ti marsvin, idet den venstre flanke på hvert marsvin benyttedes som ubehandlet kontrol. Behandlin-10 gen blev fortsat to gange dagligt i tre dage.

Der blev dagligt foretaget bedømmelse af størrelsen, antallet og spredningen af pustlerne, udstrækningen af erythema og udviklingen af sårskorper og deres efterfølgende løsgørelse.

3.5

Resultater.

Kutan infektion af marsvin med herpes simplex virus type 1 stamme H31 er selvbegrænsende, idet den er af 12-14 dages varighed. Efter 24 timer bliver 20 et lille antal papler og lokal erythema synlige, og paplerne udvikler sig efter yderligere 24 timer til pustler, der tiltager i størrelse og antal, idet de til sidst vokser sammen. Erythema'et forstærkes, og enkelte pustler slår ud i løbet af 4 dage efter infek-25 tion. Sårskorperne bliver ved med at udvikles op til 7-8 dage, på hvilket tidspunkt en stor sårskorpe eller række af sårskorper dækker hvert infektionssted. Sårskorperne løsgøres 12-14 dage efter infektion, hvilket understreger den selvbegrænsende beskaffenhed af in-30 fektionen og ligheden med hudinfektioner hos mennesker.

Omfanget af infektionerne på hvert dyr bedømtes dagligt, idet man begyndte 24 timer efter den første behandling og fortsatte, indtil behandlingens afslutning, og derefter med mellemrum, indtil helingsprocessen var fuld-35 endt. Hvert infektionssted på dyrets flanke tildeltes en talværdi som følger: 13 149191

Talværdi f A) Specifik erythema omkring infektionsstedet 0-1-2-3 B) Forhærdning på infektionsstedet 0-1-2 C) Pusteldannelse - størrelse, antal og hvorvidt de er sammenflydende 0-1-2-3 5 D) Sårskorpedannelse 0-1-2 E) Infektionsareal ud over det inficerede 0-1-2

Talværdierne for infektionsstederne på hver flanke 10 blev derefter lagt sammen.

Dagligt bestemte talværdier for behandling med cremen ifølge opfindelsen.

Tid efter behandlingens påbegyndelse (dage)

Dvr nr. 0 . 1 2 3 5

T j C TCTCTCTC

1 17 19 23 42 10 52 6 60 2 44 2 20 20 32 43 15 54 12 59 2 44 20 3 18 19 28 40 16 50 8 59 3 44 4 20 25 31 45 15 53 9 60 1 39 5 19 20 16 40 8 46 3 56 0 38 6 19 19 24 41 13 46 10 57 2 40 7 16 17 41 40 16 46 7 55 1 41 8 25 24 27 41 19 47 13 56 3 38 9 17 19 23 43 19 45 12 61 1 39 25 10 18 18 26 43 10 49 9 59 2 43 18,9 20,0 27,1 41,8 14,1 48,8 8,9 58,2 1,8 41,0 2>5 2>5 1 6'7 | 3/8 I 3,3]3tl 2,0 1,0 2,5

Dagligt bestemte talværdier efter behandling med cremen 30 ifølge engelsk patentskrift nr. 1.523.865.

Tid efter behandlingens påbegyndelsé' (dage)

Dyr nr. J \ 2 3 6

35 TCTCTCTCTC

1 18 18 18 34 11 44 21 58 14 61 2 16 16 26 35 19 44 16 57 28 62 1 17 I 1? 22 I 34, S IS 44 IS, S 57,5 21 61,5 14 149191

Middeltal værdierne blev derefter afsat grafisk mod "dage efter påbegyndelse af behandling" til opnåelse af den på tegningen viste grafiske afbildning.

Ved afslutningen af behandlingen med cremen 5 ifølge engelsk patentskrift nr. 1.523.865 (3 dage) er virusreplikationen nedsat ganske betydeligt sammenlignet med kontrolområderne, hvor læsionerne har deres maksimale udbredelse, men resterne af infektionsstederne på de behandlede områder er dog stadig synlige. Til 10 sammenligning er der ved afslutningen af behandlingen med cremen ifølge opfindelsen (3 dage) ingen synlige tegn på infektion, kun en generel erythema.

Tre dage efter afslutningen af behandlingen med cremen ifølge engelsk patentskrift nr. 1.523.865 (6 da-15 ge) er der ingen aktiv infektion, og helingen er i fremgang. Undersøgelse af kontrolområderne viser, at helingsprocessen er begyndt, og at sårskorpedannelsen er ved at begynde. Til sammenligning er helingen fuldendt tre dage efter afslutningen af behandlingen med 20 cremen ifølge opfindelsen (6 dage), og der er ingen synlige tegn på den tidligere infektion og ingen sårskorper* 4. Af dette forsøg kan det sluttes, at begge de afprøvede cremer udviser antiviral virkning mod infek-25 tion med herpes simplex virus type 1, men cremen ifølge opfindelsen giver en større helingshastighed hidrørende fra forbedret penetration af huden.