DK145760B - Fremgangsmaade til rensning af ursodesoxycholsyre - Google Patents

Description

145760

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til rensning af ursodesoxycholsyre.

Ursodesoxycholsyre eller dihydroxy-3a,7a(5P)-cho-lansyre muliggør opløsningen af cholesteroliske galdesten og "benyttes i den humane medicin til behandling af galdestensdannelse.

Ursodesoxycholsyre fremstilles på klassisk måde ud fra ohenodesoxycholsyre (C.A,£1, (1957) 17.965), som atter fremstilles ud fra cholsyre (J. A, 0, S. 22, 5550 (1950)), som igen ekstraheres fra animalsk galde.

Ved slutningen af sin fremstilling indeholder rå ursodesoxycholsyre et vist antal urenheder (andre galdesyrer og især ohenodesoxycholsyre, og derivater af galdesyrer dannet under syntesen).

Tilstedeværelsen af disse urenheder i et produkt, som er beregnet til at indgives gennem lang tid, således som det er tilfældet for ursodesoxycholsyre, kan medføre risiko for fremkaldelsen af uønskede bivirkninger.

Det er derfor vigtigt at råde over en fremgangsmåde til rensning af ursodesoxycholsyre, som gør det muligt at opnå en forbindelse med meget høj renhed.

Det er kendt at rense ursodesoxycholsyre ved dannelse af methylesteren af ursodesoxycholsyre, omkrystallisation af denne ester af et organisk opløsningsmiddel og hydrolyse (japansk patentansøgning nr. 154.864/1975).

Formålet med den foreliggende opfindelse er at anvise en fremgangsmåde til rensning af ursodesoxycholsyre, som på et industrielt plan gør det muligt at opnå en ursodesoxycholsyre med meget høj renhed med bedre udbytter end de udbytter, som er blevet opnået ved den industrielle iværksættelse af de kendte fremgangsmåder.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man fremstiller et alkalimetalsalt af rå ursodesoxycholsyre og behandler det i vandig opløsning i nærværelse af chloroform med en syre, at man samler det dannede krystallinske produkt og deraf udvinder den rensede ursodesoxycholsyre.

2 145760

Alkalimetalsaltet kan især være et natrium-, kalium- eller lithiumsalt. Alkalimetalsaltet er fortrinsvis natriumsaltet, men kan ligeledes være lithiumsaltet, som det vil fremgå af det følgende.

Under foretrukne betingelser for iværksættelse af opfindelsen er den syre, som benyttes til behandling af alkalimetalsaltet af ursodesoxycholsyre, en uorganisk syre såsom saltsyre, phosphorsyre eller svovlsyre. Man benytter med fordel saltsyre.

Der fås altså i dette stadium et krystallinsk stof, og under foretrukne betingelser for iværksættelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen får man ursodesoxycholsyren ved tørring af det krystallinske stof. Ved tørring skal forstås indvirkning af varme, vakuum eller ventilation.

Alkalimetalsaltet af ursodesoxycholsyre fås fortrinsvis ved esterificering af den rå ursodesoxycholsyre med methanol efterfulgt af en omkrystallisation af methylesteren af pr-sodesoxycholsyre og en hydrolyse med alkalimetalhydroxid.

Ved en særlig foretrukken udførelsesform omkrystalliseres methylesteren af ursodesoxycholsyre af ethylacetat.

Anvendelsen af ethylacetat som opløsningsmiddel ved omkrystallisationen af methylesteren af ursodesoxycholsyre frembyder fremfor anvendelsen af andre opløsningsmidler såsom methanol (ovennævnte japanske patentansøgning 154.864/1975) den fordel at tillade en bedre rensning af esteren med et bedre omkrystallisationsudbytte,

Alkalimetalsaltet af ursodesoxycholsyre kan ligeledes opnås under syntesen af ursodesoxycholsyre ud fra che-nodesoxycholsyre efter den fremgangsmåde, som navnlig er beskrevet i C. A. 51, (1957) 17965» i sidste stadium, under reduktionen af 5a-hydroxy-7-ketocholansyre med et alkalimetal .

Dette alkalimetal kan være natrium, idet man arbejder i nærværelse af tert.-butanol (japansk patentansøgning 154.864/1975).

Det kan ligeledes være lithium i det tilfælde, hvor man reducerer 3oc-hydroxy-7-ketocholansyre med lithium i fly- 145760 3 dende ammoniak i nærværelse af en alkohol, som f.eks. kan være methanol, idet reaktionen fortrinsvis udføres i et organisk opløsningsmiddel, som kan være tetrahydrofuran.

Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

145760 4

Eksempel 1.

Man opløser 1,320 kg rå ursodesoxycholsyre (indeholdende af størrelsesordenen 8$ chenodesoxycholsyre) i 5,280 liter methanol under omrøring ved 20°C i ca. 15 minutter, og derpå indfører man i løbet af 15 minutter 132 ml 66° Bl svovlsyre, holder under omrøring 2 timer og tilsætter derpå en blanding af 3,960 liter afmineraliseret vand, 0,400 kg natriumbicarbonat, 1,320 kg is og 3,960 liter methylen-chlorid.

Man omrører 15 minutter, fraskiller methylenchlorid-fasen og genekstraherer den vandige fase med methylenchlorid.

Man vasker methylenchloridopløsningen med vand og genekstra-herer vaskevæskerne med methylenchlorid. Man tørrer methy-lenehloridopløsningen med vandfrit natriumsulfat, idet man behandler med aktivkul, suger fra og vasker med methylenchlorid. Man inddamper til tørhed og tilsætter 2,640 liter ethylacetat, destillerer ved almindeligt tryk ca. 1,320 liter ethylacetat og inddamper derpå til tørhed under formindsket tryk. lil den tørre faste ekstrakt sætter man 7,920 liter ethylacetat, opvarmer til tilbagesvaling under omrøring indtil fuldstændig opløsning og destillerer derpå ved almindeligt tryk 1,320 liter, afkøler til 60°C, lader henstå 18 timer, afkøler derpå under omrøring til 0°C +5°C, holder under disse betingelser i 1 time, vasker ved udrivning med 3 gange 0,660 liter ethylacetat ved 0°C +5°C, tørrer ved 60°C og får 1,134 feg methylester af ursodesoxycholsyre, smp. 158°C.

Desuden får man fra moderludene og vaskevæskerne 62 g nethylester af ursodesoxycholsyre.

Man opløser under omrøring ved mellem 20 og 25°C de opnåede 1,196 kg methylursodesoxycholat i 5,980 liter methanol, tilsætter en opløsning af 0,360 liter 36° Bl natriumhydroxid i 7,180 liter afmineraliseret vand, opvarmer til tilbagesvaling under god omrøring og holder under tilbagesvaling og under omrøring i 1 time. Man afkøler til mellem 50 og 60°C, suger fra, vasker med 1,196 liter methanol ved 50-60°C og destillerer derpå ved almindeligt tryk.

145760 5

Til det vandige koncentrat sætter man 3,590 liter vand og derpå efter afkøling til 27°C +2°C 5,980 liter chloroform.

Derpå tilsætter man under god omrøring i løbet af ca. 30 minutter ved 27°C +2°C 1,500 liter 22° Bé saltsyre (14 rumfangsprocent) i afmineraliseret vand (86 rumfangsprocent).

Man omrører ved 27°C +2°C i 30 minutter og tilsætter derpå i løbet af ca. 30 minutter 1,345 liter af samme saltsyre. Man omrører i 2 timer ved 27°C +2°c, suger fra og får et krystallinsk stof. Dette vasker man ved udrivning med chloroform ved 27°C +2°C og derefter med afmineraliseret vand, hvorpå man tørrer ved 60°C og får 1,130 kg urso-desoxycholsyre.

Af chloroformmoderludene får man 25 g ursodesoxy-cholsyre.

Op = +30,5° +0,5° (c = 5$, ethanol).

Ved tyndtlagschromatografi ser man , at den opnåede rensede ursodesoxycholsyre indeholder mindre end 0,25# ehenodesoxycholsyre og mindre end 0,25# galdesyrer eller andre derivater end ursodesoxycholsyre og chenodesoxycholsyre.

Eksempel 2.

Man blander under omrøring i ca, 1 time ved en temperatur mellem -35 og -40°C 7,650 liter flydende ammoniak og en til -10°C afkølet blanding af 9,180 liter tetrahydro-furan og 0,460 liter methanol, og derpå tilsætter man i løbet af ca, 15 minutter 1,530 kg 3a-hydroxy-7-ketocholan-syre. Man tilsætter under omrøring, idet man holder temperaturen mellem -35 og -38°C, i løbet af ca. 1 time 111 g lithium, holder under omrøring ved mellem -35 og -38°C i 1 time og tilsætter derpå i løbet af ca. 15 minutter 1,530 liter methanol.

Derpå tilsætter man i løbet af ca, 15 minutter under omrøring 1,530 liter afmineraliseret vand ved 20°C og afdestillerer derpå ammoniakken. Når størstedelen af ammoniakken er afdampet, tilsætter man ved 27°C +2°C under om- 6 145760 røring 7,650 liter vand. Man destillerer blandingen af tetrahydrofuran og methanol under formindsket tryk under opvarmning på et bad til maksimalt 60°C under opretholdelse af et konstant niveau ved gradvis tilsætning af 1,530 liter afmineraliseret vand. Efter afkøling til ca, 37°C tilsætter man 15,300 liter vand og tilsætter derpå under omrøring 7,650 liter chloroform og i løbet af 1 time under opretholdelse af en temperatur på 27°C +2°C 3,060 liter 22° Bé saltsyre, (Man tilsætter saltsyren indtil det øjeblik, hvor man når en pH-værdi på 7, hvorpå man standser indføringen af syren og omrører i 30 minutter ved 27°C +2°C, hvorefter man genoptager indføringen af syren.)

Man holder derpå under omrøring ved 27°C +2°C i 2 timer, frasuger på bomuldsstof, bringer det fugtige produkt i suspension i 2,300 liter chloroform ved 27°c +2°0 og man omrører i 15 minutter ved 27°C +2°C, suger fra, bringer i suspension igen i 15 minutter i 2,300 liter chloroform ved 27°C +2°C og suger fra.

Man vasker flere gange med vand, tørrer ved 60°C og får 1,320 kg ursodesoxycholsyre, smp. 198°C, = +55,5° +0,5° (c = 5fit ethanol).