DK144855B - Fremgangsmaade til fremstilling af det antibiotiske stof sisomicin eller terapeutisk acceptable salte deraf - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af det antibiotiske stof sisomicin eller terapeutisk acceptable salte deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK144855B DK144855B DK49180AA DK49180A DK144855B DK 144855 B DK144855 B DK 144855B DK 49180A A DK49180A A DK 49180AA DK 49180 A DK49180 A DK 49180A DK 144855 B DK144855 B DK 144855B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- medium
- antibiotic
- fermentation
- micromonospora
- sisomicin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/46—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical bound to a cyclohexyl radical, e.g. kasugamycin
- C12P19/48—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical bound to a cyclohexyl radical, e.g. kasugamycin the cyclohexyl radical being substituted by two or more nitrogen atoms, e.g. destomycin, neamin
- C12P19/485—Having two saccharide radicals bound through only oxygen to non-adjacent ring carbons of the cyclohexyl radical, e.g. gentamycin, kanamycin, sisomycin, verdamycin, mutamycin, tobramycin, nebramycin, antibiotics 66-40B, 66-40D, XK-62-2, 66-40, G-418, G-52
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/29—Micromonospora
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/867—Micromonospora
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
144855
Den foreliggende opfindelse angår en særlig mikrobiologisk fremgangsmåde af den i indledningen til krav 1 angivne art til fremstilling af det kendte antibiotiske stof sisomi-cin eller farmaceutisk acceptable salte deraf, og fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del angivne, nemlig at fremstillingen sker ved dyrkning af en hidtil ukendt art af slægten Micromonospora, M. rosea.
Sisomicin, også benævnt antibiotikum 66-40, er 0-2,6-diamino-2,3,4,6-tetradeoxy-a-D-glycero-hex-4-enopyranosyl-(l-»-4) —0— [ (3-deoxy-4-C-metyl-3-(metylamino) -β-L-arabinopyrano- 2 144855 syl (1+6)]-2-deoxy-D-streptamin. Det er et bredspektret antibiotikum som. skader vasksten af både grampositive og gramnegative bakterier.
Der kendes flere mikrobiologiske metoder til produktion af sisomicin. Fx fremkommer det som hovedprodukt ved dyrkning af Micromonospora inyoensis NRRL 3292 (US-patentskrif-terne 3.932.286 og 3.907.771) eller sammen med verdamicin ved dyrkning af Micromonospora grisea NRRL 3800 (US-patent-skrift 3.951.746) eller sammen med antibiotikum G-52 ved dyrkning af Micromonospora zionensis NRRL 5466 (US-patent-skrift 3.956.068), eller sammen med gentimicin ved dyrkning af Micromonospora purpurea var. nigrescens MNG 00122 (ungarnsk patentskrift 168.778).
Den hidtil ukendte mikroorganisme, der anvendes i henhold til den foreliggende opfindelse til fremstilling af sisomicin, blev isoleret fra en ungarnsk jordprøve. Denne stamme, der er forskellig fra alle andre mikroorganismer og har evne til at producere sisomicin, er blevet klassificeret som en ny art af slægten Micromonospora og har fået navnet Micromonospora rosea species nova. Fra denne mikroorganisme opnåedes stammen Sl/109 ved forskellige udvælgelsesprocedurer. En kultur af den levende organisme Micromonospora rosea Sl/109 er den 12. december 1978 blevet deponeret hos den nationale samling af mikroorganismer i Budapest, hvor den har fået accessionsnummeret MNG 00182. Ved dyrkning af denne opnås der et gæringsmedium med højt indhold af sisomicin.
Den deponerede mikroorganisme Micromonospora rosea
Sl/109 (MNG 00182), der ifølge opfindelsen fortrinsvis anvendes som stamme af Micromonospora rosea, har de nedenfor beskrevne mikroskopiske, makroskopiske og biokemiske egenskaber .
Morfologi a) Makroskopiske iagttagelser af en 10 dage gammel kultur inkuberet ved 37°C på Czapek's agar udviser rimeligt god vækst uden noget luftmycelium, uden diffunderbart pigment 3 U6855 og med veludviklede,regelmæssige runde kolonier, orangesort farve.
b) Mikroskopiske iagttagelser af organismen viser lange, grenede, regulære tråde uden tværvægge og med en diameter på 0,5 y. Der dannes sporer på simple sporoforer med en diameter 1-1,5 y, deres form er kugleformet til ovoid.
Biokemiske og fysiologiske egenskaber
Stammen Micromonospora rosea Sl/109 udviser god vækst ved 28-37°C, og der forekommer ingen vækst ved 44°C.
Udnyttelsen af kulstofkilder afprøvedes i et næringsmedium bestående af 0,5% gærekstrakt, 1% kulstofkilde, 0,1% kalciumkarbonat, 1,5% agar, alt i destilleret vand.
Observationerne og kulstofudnyttelsen fremgår af nedenstående tabel I.
Tabel I
Kulstofudnyttelse
Kulstofkilde Micromonospora rosea Sl/109
Arabinose dårlig
Ribose rimelig
Rhamnose dårlig
Xylose god
Fruktose god
Galaktose moderat
Glukose god
Laktose dårlig
Sakkarose god
Raffinose moderat-dårlig
Dulcitol moderat-dårlig
Mannitol dårlig
Inositol dårlig
Stivelse_______god_ 4 U4855
Nitrogenudnyttelsen afprøvedes i et næringsmedium bestående af 1% glukose, 1,5% agar og en nitrogenkilde som angivet i tabel II, alt i destilleret vand. Nitrogenudnyttelsen fremgår af tabel II.
Tabel II
Nitrogenudnyttelse
Nitrogenkilde Micromonospora rosea Sl/109 0,5% gærekstrakt god 1% asparagin moderat-dårlig 1% glutaminsyre dårlig 1% ammoniumnitrat dårlig 1% NZ-amin god
En koloni af Micromonospora rosea i vækst vil hydrolysere gelatine, mælk og stivelse og reducere nitrat til nitrit. Mikroorganismen vil tolerere et maximum på 2% natriumklorid i et vækstmedium.
Kulturkarakterer I tabel III er der angivet kulturkarakterer for Micromonospora rosea Sl/109. Ved beskrivelsen af farvedannelserne for de til grund liggende iagttagelser anvendes følgende reference: Baumanns Farbtonkarte Atlas II, Paul Baumann, Aue I-SA 87350 LAu 302, Tyskland.
Tabel III
Kulturkarakterer
Medium Micromonospora rosea Sl/109
Glukose-asparagin-agar_Ingen vækst_
Pepton-jern-agar vækst dårlig; smudsiggul, bliver grå; Co 40, lille sporelag: Co 63.
_Intet dlffunderbart pigment_
Emerson's agar Vækst dårlig; 1-2 kolonier. Far ve: livlig orange, svagt brunlig, _______ _ 0 126 eller Oc 117_ 5 144855
Tabel III (fortsat)
Medium Micromonospora rosea Sl/109
Glukose-gærekstrakt-agar Vaskst nogenlunde. Farve livlig orange, bliver sort. Stærkt foldede kolonier. Oc 98-Oc 120, og __senere 8_ Næringsagar Vækst nogenlunde. Farve: livlig orange, bliver sort; Oc 98-Oc 120, og senere 8
Tyrosinagar Vaskst meget dårlig. Farve: grå lighvid, på nogle steder sort; 8. Lyserødt opløseligt pigment, _Oc 101_
Czapek's agar Vaskst rimelig. Farve livlig o- range og senere sort. Oc 97-Oc 120, og senere 8
Bennet’s agar Vækst rimelig. Farve: lysorange, bliver brun; Oc 97-Oc 119 eller 120. Svagt brunt opløseligt pigment _
Kartoffelstykker Vækst: i spor. Farve: orange; (uden kalciumkarbonat) Oc 96 _
Kartoffelstykker Vækst i spor eller meget dårlig.
(med kalciumkarbonat) Farve: orange; Oc 96-97 og 99
Ved sammenligning af de foran angivne identifikationskarakterer for stammen Sl/109 med Luedemann's Micromonospora-system kan stammen klassificeres som en ny art af Micromonospora.
Den taxonomiske relation mellem Micromonospora rosea og de andre sisomicinproducerende arter af Micromonospora fremgår af nedenstående sammenligning med arterne M. inyoen-sis, M. zionensis og M. grisea, dels med hensyn til udnyttelse af kulstofkilder og dels med hensyn til kulturegenskaber på visse næringssubstrater.
6 144855
Tabel IV, udnyttelse af kulstofkilder.
M. rosea M. inyoensis M. grisea M. zionensis
Arabinose negativ negativ positiv positiv
Xylose positiv (meget dårlig) positiv positiv
Rhamnose negativ negativ negativ negativ
Fruktose positiv negativ positiv (positiv)
Galaktose (positiv) (meget dårlig) positiv positiv
Glukose positiv positiv positiv positiv
Laktose negativ (meget dårlig) negativ (positiv)
Sakkarose positiv positiv positiv positiv
Raffinose (negativ) negativ negativ negativ
Dulcitol (negativ) negativ negativ negativ
Mannitol negativ negativ negativ negativ
Inositol negativ negativ negativ negativ
Det ses at M. rosea afviger fra M. inyoensis med hensyn til udnyttelse af fruktose, der er en af de vigtigste diagnostiske kulstofforbindelser. M. rosea afviger fra M. grisea med hensyn til udnyttelse af arabinose og galaktose.
M. rosea afviger fra M. zionensis ved ikke at udnytte arabinose, og desuden med hensyn til udnyttelse af galaktose og laktose.
7 1A A 8 5 5 3 XT rt su C-I 25 3 © Ό © 3 H O P> W 3 ' Γ+ 3 H! © 3 Rj Xf M 3 P © 3 N ©3 CD : c g η: h n ni h h tn c h c øj φ si) o> 3 a a (1 Xrt 0 H 3 P· rti 0 X Η H © HD P· 3 a Tf 0 3 I D Η O ifl Ο 01 Λ n> £ 3 3 Hi P- © © 3 3 P· 3 Ο rt 3 Π H Mi 3 3 3 Tf 3 3 3 3 01 (+ DØJfDlO lr+lll 01 01 3 Π P 3 <+ 3 I © 3 ft> 3 Ο Ο I © O © 0J Ri © 3 © OW ØjD 3 © H 3 I 3
CJ Η I H 3 I H H
H
tn 3 X3 ¢(¢4 «hh p- iq a » hr tf o 3 h g
Tj (D O 3" 00 Hi p· OO 3 p· 3 3 3» Η Ο P· Η Ω 3 P· 3 © P Η I ft 3 I 3 © 3 H 3 3 3 C ^ H 3
Hi Ο Ο H ®(1 (D 013 3 OlHftP-3 3 -J 3 3 H
3 rt D P· Η P Ο Ο P 3 Tf P· 3 P (+ 1 P 0
O P-© p· Ω H p- 3 © 3 Η P- tf P· 01 H
3 [i 3 3 U0 r+ © <! Ο'·© Ο O RiO 3 3 [Do hi < Ο P 3 Ri 3 < H 1333 3 tf 3 Ρ· H Ri Η < Μ 3 < Tf 3 Ri ft Ο < P P 3 < 3 ρ PJ Tf <+$©33 οι 3» Tf 03 8 hh3 p p 3 P-01 3 X ' 3 X + 3 5f 3 U3 P- Tf {001 © (+ 0133 O (+ © 3 3 <-Q 3 < H g '· Xr+rtrt H - -J<+ p ^ 3 r+
rt <! O— P-Tf- 3 - — P- P
μ· p 3 3 P P O 3 P ©N>Tf 3H- Tf 3 O O P O © OP rt o O O S*
iQiQ 3 C 3 H 3 O H 33 OH! '“'PH C
(03 rt α p· 3 P 3 3 P 3 © '· O 3 P
3 3 3 3 C P· 3 Tf P P O P· 3 3 <+
hh p- H © r+ 3 © 03 WR <D H P·© C
<H· © -3 H 3 PH 03 3 *-< 3 3 H
cu H lQ ' 00' ' O ' 3 3 3 H ' 3 XT 3 CO 3 co © 3 3 '· 00 3 I—' O ø 0 3 P· (+3 ft 1 3 3 r+rt 3303 3 P· 3 3 μ. H 3 Η P Tf I 3 p 13 O Tf hh 11»
fB
x h 3 a p© <3 πα a tr 3 h s 3
Hj Qi 3 3» p· O Ri Ri © 3» 3» H © p· · H
013 © H UØ a Tf 3 an H G H 3
Hi 3 P I 3 rt 3 P P 3 Tf 3 Ρ· © rt< rtP· H < (+3 P· P- 33P 3 3» μ. RJ © © Ri 3 Tf iQ © 3 μ· ·< xr cl a ?f o Tf 3 © o < ϋΐ 3° < I 3 3 P· P < < oa 3 P· <Jlf HfB <+ 3 O Ri Ri P 3 < 3 3 rj p Tf Tf'· © 3 Tf Tf O ' Ri 3 3 x x μ. 01 o 3 P· 3 3 3 Tf P- 3 tn c © r+ Hid 3 3 rt <+ P-P-3 3 (+3 OH H'· 3 3 <+ 3 < 3 3» H rt — 3 μ- Ri P· I 3 a
Tf 3 3 P· 01 3 H 3 3
© rt <+ H
O
hj <3 a <3 Tf in in < 3 Tf© a a d © Tf 2
Ri 3 3» ftiRj 030 RJ CD 03 3° 3» 3 Η H
Tf© H Tf3HPa^"©PPH H 3° 3 33 P 3r+0P 330PP P TfPhh ©
rt rt p· <+ 3 3 P· < rt <+ 3 P- P· p- O p· <+ H
I © 3 P·© Ri P·© © © P© P- P- a 3 i Tf a 3 i o r+© 3 3° < p· H tf 3 3° H tf < < 3 3 H Rj 3 H rt Η H Ri Ri P·© < 3 H Tf © C'· PCTf Tf 3 H Rj p· 3 33 μ· 3 3 3 H © Tf ©i+ 33 © 3 <+ r+ 33 '· I <+ xf <3 a < 3 3 p© <3 3a <3 3 Tf s
hj $3 0* Si 81 Φ μ·0 (β » 0 3° Ri Ri OH
3 Tf© H Tf 3 © a Tf© HH Tf 3 H 3 N
Hi 33 P 3 r+ XI 33 r+P 3<+ <+Hi μ· t+ r+<+ μ· <+30Η<ι+<+ 3 Ρ· <+3 ©r+ Ο μ- © 3 Ρ © fli ©3 μ- 3 aa α ο α Tf α Tf Tf© 3 30 < μ· 3 H 3 3° O < P· O 3 < HflJ 3P-P-r+HPflj 3 P< 3 RJ H Tf © 3 © '· P O Tf © ORi P· XT μ- 3 3 Η I μ·33 3 3Tf3 3 ©rt 3 tf© © P· rt 3 P-3 r+ H H 3 '· 3 (+ C 3° Η H '·
I I
144855 8
Det fremgår af disse sammenligninger at Micromonospo-ra rosea klart afviger fra alle kendte sisomycinproducerende arter af slægten Micromonospora.
Ved en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden dyrkes mikroorganismen Micromonospora rosea Sl/109 under submerse betingelser.
Næringsmediet kart indeholde forskellige assimilerbare kilder til kulstof og nitrogen, uorganiske salte, sporelementer og antiskumningsmidler. Som eksempler på assimilerbare kulstof- og nitrogenkilder samt energikilder kan nævnes sojabønnemel, sojabønnehydrolysat, caseinhydrolysat, majsstøbevand, gærekstrakt og forskellige kulhydrater såsom glukose, stivelse, opløselig stivelse, dextrin og lignende. Foretrukne uorganiske salte er fx ferro-, magnium- og koboltsalte. For at forøge næringsmediets pufferkapacitet tilsættes der fortrinsvis kalciumkarbonat. Som antiskumningsmidler kan der bruges planteolier, fx palmeolie, solsikkeolie eller sojaolie.
Ved kombination af næringsmediets forskellige komponenter kan der opnås forskellige typer næringssuppe. Det medium der bruges til rystekolbegæring eller podematerialegæring er anderledes end det der bruges til hovedgæringen.
Mikroorganismen Micromonospora rosea dyrkes ifølge opfindelsen med størst fordel i et næringsmedium der foruden vand består af sojamel, pepton eller caseinhydrolysat, kartoffel- eller majsstivelse, dextrin eller opløselig stivelse, glukose, kalciumkarbonat, ferro- og magniumsulfat, koboltnitrat og palmeolie.
Produktion af sisomicin kan udføres mellem 25 og 40°C, fortrinsvis ved 28-33°C. Omrøring sker ved 200-400 opm. Luftindtag er fortrinsvis et rumfang luft pr. min pr. rumfang næringsmedium.
For at bestemme den totale antibiotiske aktivitet (sisomicin og andre antibiotika i mindre mængde) under gæringen bruges Staphylococcus epidermidis som testorganisme. Bestemmelsen sker mod et standardpræparat af sisomicin under anvendelse af agar-diffusionsmetoden.
9 1U8S5
Den totale aktivitet af gæringsmediet på 100-130 timer er omkring 600-700 U/ml (1U = 1 yg/ml aktivitet af sisomicin-base) .
85% af de antibiotiske stoffer i gæringsmediet er siso- micin.
Når der er opnået maximal antibiotisk aktivitet isoleres sisomicinet ved en kombination af trin som er i og for sig kendt i teknikken.
Den vundne sisomicinbase kan om ønsket omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
Den mængde sisomicin der dannes under laboratorieforhold andrager over 700-800 yg/ml og i pilotmålestok, dvs. ved 3 hjælp af en gæringstank på 1 m er den 600-700 yg/ml.
Antibiotikumkoncentrationen er over tre gange så stor som den der er beskrevet i USA-patentskrift nr. 3.832.286, der anses for det hidtil bedste resultat. Gæringsmediet indeholder kun 15% ledsagende antibiotika eller derunder foruden sisomicinet.
Nogle eksempler tjener til belysning af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
Eksempel 1 1 ml vegetativt mycelium (opbevaret i dybfrosset tilstand ved -20°C) af stammen Micromonospora rosea Sl/109 (MNG 00182) anbringes under aseptiske betingelser i en 3000 ml stor Erlenmeyer-kolbe indeholdende 800 ml af følgende sterile medium:
Trypton ("Oxoid") 5 g
Sojamel 10 g
Opløselig stivelse 20 g
Glukose 1 g
Kalciumkarbonat 2 g
Postevand indtil 1000 ml Før mediet steriliseres reguleres dets pH til 7,0. Gæringsmediet inkuberes i 3 dage ved 28°C på en roterende ryster (260 opm, 10 cm slaglængde).
ίο U4855
Det således vundne medium bruges til at pode 100 liter af følgende sterile medium under aseptiske betingelser:
Sojamel 10 g
Caseinhydrolysat (tørvægt) 5 g
Kartoffelstivelse 22 g
Glukose 10 g
Kalciumkarbonat 2 g
Palmeolie 2 g
Postevand indtil 1000 ml
Caseinet er hydrolyseret med pancreatin. Mediets pH-værdi reguleres før sterilisering til 7,0. Der gæres aerobt i 36-48 timer ved 30°C under omrøring med en hastighed på 400 opm og med et luftindtag på 1 rumfang pr. minut. Palmeolien bruges som antiskumningsmiddel. Der bruges 10 liter af det vundne, gærede medium til podning af 100 liter gæringsmedium med følgende sammensætning:
Sojamel 40 g
Pepton 10 g
Kartoffelstivelse 10 g
Dextrin 25 g
Glukose 5 g
Kalciumkarbonat 4 g
Magniumsulfat, 7^0 2 g
Ferrosulfat, 7^0 0,2 g
Koboltnitrat, 6^0 0,8 mg
Palmeolie 2 g
Postevand indtil 1000 ml Før sterilisering af dette medium reguleres pH til 8,0 og der steriliseres i 1 time ved 121°C under et tryk på 1,3- 1,4 at. under omrøring. Der bruges en gæringstank af rustfast stål. Omrøring med 400 opm og med et luftindtag på 1 rumfang pr. minut. Der bruges palmeolie som antiskumningsmiddel.
Antibiotikumproduktionen begynder efter 35-40 timer og når sit maximum efter 110-120 timers gæring. Tidspunktet for gæringens afslutning bestemmes ved en hurtig turbidime-trisk metode med anvendelse af Klebsiella pneumoniae (F.
Kavanagh: Dilution Methods of Antibiotic Assay, Analytical Microbiology, Acad. Press, New York, side 125-140, 1963).
11 144855 Mængden af dannet antibiotikum når ved gæringens slutning op på 650 U/ml (1U er ækvivalent med standardeffektiviteten af 1 pg sisomicinbase som bestemt med Staphylococcus epidermidis-testorganismen ved agar-diffusionsmetoden (J. S. Simpson: Analytical Microbiology, Acad. Press, New York, side 87-124, 1963)).
Eksempel 2
Under aseptiske betingelser sættes der 1 ml vegetativt mycelium (lagret i dybfrosset tilstand ved -20°C) af stammen Micromonospora rosea Sl/109 (MNG 00182) til 800 ml af nedenstående sterile medium i en 3000 ml stor Erlenmeyer-kolbe:
Trypton ("Oxoid") 5 g
Sojamel 10 g
Opløselig stivelse 20 g
Glukose 1 g
Kalciumkarbonat 2 g
Postevand indtil 1000 ml Før sterilisation af mediet reguleres dets pH-værdi til 7,0. Gæringsmediet inkuberes i 3 dage ved 28°C på en roterende ryster (260 opm, 10 cm slaglængde).
Det herved vundne medium bruges til podning af 100 liter af nedenstående sterile medium under aseptiske betingelser:
Sojamel 10 g
Sakkarose 10 g
Kartoffelstivelse 10 g
Kalciumkarbonat 4 g
Palmeolie 2 g
Postevand indtil 1000 ml
Mediets pH-værdi reguleres før sterilisation til 7,0.
Der gæres aerobt i 48-60 timer ved 30°C under omrøring med 400 opm og et luftindtag på 1 rumfangsdel. Der bruges palmeolie som antiskumningsmiddel.
3
Det vundne medium bruges til at pode 1 m af et gæringsdyrkningsmedium med følgende sammensætning: 12 144855
Sojamel 40 g
Pepton 10 g
Kartoffelstivelse 10 g
Dextrin 25 g
Glukose 5 g
Kalciumkarbonat 4 g
Magniumsulfat, 7^0 2 g
Ferrosulfat, 7^0 0,2 g
Koboltnitrat, 6^0 0,8 mg
Palmeolie 2 g
Postevand indtil 1000 ml Før sterilisation af dette medium reguleres pH-værdien til 8,0. Der steriliseres i 1 time ved 121°C under et tryk på 1,3-1,4 at. under omrøring. Der bruges en gæringstank af rustfast stål og omrøres ved 400 opm og et luftindtag på 1 rumfangsdel. Palmeolie bruges som antiskumningsmiddel.
Antibiotikumproduktionen begynder efter 35-40 timer og når sit maximum efter 110-120 timers gæring. Tidspunktet for gæringens afslutning bestemmes ved den hurtige turbidimetri-ske metode med anvendelse af Klebsiella pneumoniae.
Mængden af dannet antibiotikum når ved gæringens slutning op på 600 U/ml (herved anvendtes agar-diffusionsmetoden).
Eksempel 3 100 liter af inoculet ifølge eksempel 1 overføres til 3 1 m gæringsmedium med følgende sammensætning:
Sojamel 40 g
Caseinhydrolysat (tørvægt) 10 g
Kartoffelstivelse 10 g
Dextrin 25 g
Glukose 5 g
Kalciumkarbonat 4 g
Magniumsulfat, 7^0 2 g
Ferrosulfat, 7^0 0,2 g
Koboltnitrat, 6^0 0,8 mg
Palmeolie 2 g
Postevand indtil 1000 ml 13 144855
Casein hydrolyseres med pancreatin. Mediets pH-værdi reguleres før sterilisation til 8,0. Der steriliseres i 1 time ved 121°C under omrøring og ved et tryk på 1,3-1,4 at. Der benyttes en gæringstank af rustfast stål og omrøres med 400 opm med et luftindtag på 1:1 rumfang/rumfang. Der bruges palmeolie som antiskumningsmiddel.
Antibiotikumproduktion begynder efter 35-40 timer og når sit maximum efter 110-120 timers gæring. Tidspunktet for gæringens afslutning bestemmes ved en hurtig turbidimetrisk metode ved hjælp af Klebsiella pneumoniae.
Mængden af dannet antibiotikum når ved slutningen af gæringen op på 650 U/ml (bestemt ved agar-diffusionsmetoden).
Eksempel 4 100 liter af podemedium ifølge eksempel 1 overføres 3 til 1 m gæringsmedium med følgende sammensætning:
Sojamel 40 g
Caseinhydrolysat (tørvægt) 10 g
Majsstivelse 50 g
Glukose 5 g
Kalciumkarbonat 4 g
Magniumsulfat, 71^0 2 g
Ferrosulfat, 71^0 0,2 g
Koboltnitrat, 6H20 0,8 mg
Palmeolie 2 g
Postevand indtil 1000 ml
Casein hydrolyseres med pancreatin. Mediets pH-værdi reguleres forud for sterilisationen til 8,0. Der steriliseres i 1 time ved 121°C under omrøring og ved et tryk på 1,3-1,4 at.
Der bruges en gæringstank af rustfast stål. Der omrøres med 400 opm med luftindtag på 1/1 rumfang/rumfang. Palmeolie bruges som antiskumningsmiddel.
Antibiotikumproduktionen begynder efter 35-40 timer og når sit maximum efter 110-120 timers gæring. Tidspunktet for gæringens afslutning bestemmes ved en hurtig turbidimetrisk metode med anvendelse af Klebsiella pneumoniae.
146855 14 Mængden af dannet antibiotikum når ved gæringens slutning op på 680 U/ml (bestemt ved agar-diffusionsmetoden).
Ved gæringens slutning isoleres rent sisomicin på i og for sig kendt måde.
Smp. 198-201°C; [a]D = +188° (c = 0,3 i vand).
IR-spektrum (KBr): vOH, NH 3170-3360,VCH=C0C 1690, vCOC 1060 cm PMR-spektrum (ϋ20):δ 1,20 (Me-4", s, 3Η),δ 2,50 (Me-N-3", s, 3H), δ 2,56 (H-3", d, J2„ 3„ = 10Hz, IH), δ 3,17 (H-61 , bs, 2H) , δ 3,30 (Hax-5n, å'r Jgem = 12Hz, IH) , δ 3,80 (H-2", dd, J2„ 3„ = 10Hz, 2„ = 4Hz, IH) , δ 4,04 (He-5", d, J = 12Hz, IH), δ 4,88 (H-4 *, bt, IH), 6 5,09 (H-l", d, J1H 2„ = 4Hz, IH), δ 5,35 (H-l', d, ^,21 = 2Hz' IH) ppm.
Massespektrum: molekylvægt 447.
Massetal for de karakteristiske ioner (m/e): 447, 332, 304, 160, 145, 127, 118, 110, 100.
Sisomicinsulfat 15 g ren sisomicinbase opløses i 60 ml afioniseret vand og pH reguleres til 4,3 med 5N svovlsyre. Opløsningen omrøres med 1,5 g aktiveret trækul i 30 minutter og filtreres med et Seitz-filter. Filteret vaskes tre gange med 5 ml afioniseret vand og de forenede filtrater sættes til 1 liter metanol under kraftig omrøring. Opløsningen opbevares i et køligt rum og det resulterende bundfald filtreres. Det dannede sisomicinsulfat vaskes med 3 x 50 ml metanol og tørres i vakuum ved 50°C over fosforpentoxyd, hvorved der vindes 22 g sisomicinsulfat.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HUCI001911 | 1979-02-06 | ||
| HU79CI1911A HU179146B (en) | 1979-02-06 | 1979-02-06 | Process for microbiological producing sysnycin with fermenting micromonospora rosea |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK49180A DK49180A (da) | 1980-08-07 |
| DK144855B true DK144855B (da) | 1982-06-21 |
| DK144855C DK144855C (da) | 1982-11-08 |
Family
ID=10994738
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK49180A DK144855C (da) | 1979-02-06 | 1980-02-05 | Fremgangsmaade til fremstilling af det antibiotiske stof sisomicin eller terapeutisk acceptable salte deraf |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4363876A (da) |
| JP (1) | JPS55104895A (da) |
| AT (1) | AT369425B (da) |
| BG (1) | BG40969A3 (da) |
| CS (1) | CS222171B2 (da) |
| DK (1) | DK144855C (da) |
| ES (1) | ES8102592A1 (da) |
| FI (1) | FI65084C (da) |
| HU (1) | HU179146B (da) |
| IT (1) | IT1133061B (da) |
| PL (1) | PL120811B1 (da) |
| SU (1) | SU1200854A3 (da) |
| YU (1) | YU27980A (da) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4977084A (en) * | 1989-02-16 | 1990-12-11 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Production, isolation, and identification of novel antifungal compounds |
| US5303518A (en) * | 1993-02-11 | 1994-04-19 | Strickland Industries, Inc. | Lined manhole assembly and liner |
| US7794713B2 (en) | 2004-04-07 | 2010-09-14 | Lpath, Inc. | Compositions and methods for the treatment and prevention of hyperproliferative diseases |
| US7862812B2 (en) | 2006-05-31 | 2011-01-04 | Lpath, Inc. | Methods for decreasing immune response and treating immune conditions |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3832286A (en) * | 1971-02-03 | 1974-08-27 | Schering Corp | Sisomicin and methods for its production |
| US3956068A (en) * | 1972-07-14 | 1976-05-11 | Schering Corporation | Antibiotic G-52 and method for the production thereof |
-
1979
- 1979-02-06 HU HU79CI1911A patent/HU179146B/hu unknown
-
1980
- 1980-01-30 US US06/116,915 patent/US4363876A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-02-04 BG BG8046469A patent/BG40969A3/xx unknown
- 1980-02-04 YU YU00279/80A patent/YU27980A/xx unknown
- 1980-02-05 JP JP1213080A patent/JPS55104895A/ja active Pending
- 1980-02-05 CS CS80770A patent/CS222171B2/cs unknown
- 1980-02-05 PL PL1980221821A patent/PL120811B1/pl unknown
- 1980-02-05 SU SU802877856A patent/SU1200854A3/ru active
- 1980-02-05 DK DK49180A patent/DK144855C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-02-05 FI FI800360A patent/FI65084C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-02-05 AT AT0061980A patent/AT369425B/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-05 IT IT67170/80A patent/IT1133061B/it active
- 1980-02-06 ES ES488972A patent/ES8102592A1/es not_active Expired
- 1980-12-08 US US06/214,425 patent/US4365020A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK144855C (da) | 1982-11-08 |
| ES488972A0 (es) | 1981-02-16 |
| DK49180A (da) | 1980-08-07 |
| IT8067170A0 (it) | 1980-02-05 |
| BG40969A3 (en) | 1987-03-14 |
| HU179146B (en) | 1982-08-28 |
| ES8102592A1 (es) | 1981-02-16 |
| FI65084B (fi) | 1983-11-30 |
| AT369425B (de) | 1982-12-27 |
| US4365020A (en) | 1982-12-21 |
| ATA61980A (de) | 1982-05-15 |
| US4363876A (en) | 1982-12-14 |
| IT1133061B (it) | 1986-07-09 |
| FI800360A (fi) | 1980-08-07 |
| CS222171B2 (en) | 1983-05-27 |
| YU27980A (en) | 1983-04-30 |
| PL221821A1 (da) | 1980-12-01 |
| JPS55104895A (en) | 1980-08-11 |
| PL120811B1 (en) | 1982-03-31 |
| SU1200854A3 (ru) | 1985-12-23 |
| FI65084C (fi) | 1984-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SHOJI et al. | Production of fosfomycin (phosphonomycin) by Pseudomonas syringae | |
| EP0388152B1 (en) | Process for producing an immunosuppressant agent (demethimmunomycin) using a mutant strain of a microorganism | |
| Ventosa et al. | Moderately halophilic Gram-positive cocci from hypersaline environments | |
| UA47410C2 (uk) | Спосіб стереоселективного відновлення за участю мікроорганізмів та штам мікробактерій | |
| GB2164035A (en) | A novel antibiotic and production thereof | |
| KR20080014242A (ko) | 항균활성물질을 생산하는 신규의 페니바실러스 폴리믹사ｄｙ1 및 그 항균활성물질 | |
| DK144855B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af det antibiotiske stof sisomicin eller terapeutisk acceptable salte deraf | |
| NO163574B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av antitumor-antibiotika (ll-e33288 kompleks) ved fermentering av micromonospora echnospora ssp. calichensis nrrl 15839 og nrrl 15975. | |
| US4517296A (en) | Antibiotic acmimycin and its production | |
| JPS6040840B2 (ja) | 抗生物質類の微生物学的製法 | |
| US4371622A (en) | Micromonospora culture | |
| HU190358B (en) | Process for preparing enduracidin | |
| CN109536423B (zh) | 一种蜡样芽孢杆菌的培养方法及其专用培养基 | |
| US4309504A (en) | Process for preparing narasin | |
| NO146673B (no) | Aminoglukosid for anvendelse som utgangsmateriale ved fremstilling av aminoglukosidantibiotika | |
| JPS5934355B2 (ja) | 醗酵方法 | |
| JPH04261180A (ja) | １３β−１３−デオキシ−２２，２３−ジヒドロアベルメクチン−Ｂｌａ／Ｂｌｂアグリコンの微生物学的製造 | |
| Wiley et al. | Microbial conversion of steffimycin and steffimycin B to 10-dihydrosteffimycin and 10-dihydrosteffimycin B | |
| JPS6248692A (ja) | バリオ−ルアミン誘導体およびその製造法 | |
| Ashy et al. | Fermentative production of spiramycins | |
| JPS6122955B2 (da) | ||
| GB2078714A (en) | Micromonospora Rosea Species, Cultivation Thereof and Antibiotics Produced Thereby | |
| US4316957A (en) | Process for the production of 7-deazaadenosine and 7-deazainosine | |
| JPH05279374A (ja) | スイダトレスチン及びその製造方法 | |
| JPS6322799B2 (da) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |