PL120811B1 - Process for preparing sisomycin antibiotic - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania antybiotyku sisomycyny i jej dopuszczalnych w far¬ macji soli, w drodze hodowli nieznanego dotychczas gatunku Micromonospora, mianowicie Micromono- spora rosea.Sisomycyna jest znanym antybiotykiem. Jej struk¬ tura jest nastepujaca: 0-2,6-dwamino-2,3,4,6-cztero- dezoksy-D-glicero-heksanopiranozyl-/l -* 4/-0-/3-de- zoksy-4-C-metylo-3-/metyloamino/HP-L-arabino-pi- ranozyl-/l--6/2-dezoksy-D-streptamina.Znane sa równe sposoby wytwarzania sisomycyny.Wedlug opisów patentowych St. Zjedn. Ameryki nr 3 832 286 i 3 907 771, antybiotyk wytwarza sie jako glówny produkt fermentacji Micromonospora inyo- nesis (NRRL 3292), jednakze maksymalna produkcja jego wynosi 150-225 Y_ml- Wedlug opisu patentowego St. Zjedn. Ameryki nr 3 951746, otrzymuje sie obok antybiotyku wardami- pyny w drodze fermentacji mikroorganizmu Micro¬ monospora grisea (NRRL 3800), takze male ilosci Gentamycyny A, G-148 i sisomycyny jako zanie¬ czyszczenia, które nalezy oddzielic. Nie podano jed¬ nak ilosci produkowanej tu sisomycyny.Wedlug opisu patentowego St. Zjedn. Ameryki nr 3 956 068 obok antybiotyku G-52, w drodze fer¬ mentacji Micromonospora zionensis (NRRL 5466) po¬ wstaja takze male ilosci sisomycyny, ale nie podano danych odnosnie wytwarzanej ilosci.Wedlug wegierskiego opisu patentowego nr 168 778, w drodze fermentacji Micromonospora purpurea 10 16 25 Var. nigrescens (MNG 00122), obok antybiotyku gen¬ tamycyny, powstaje takze sisomycyna w maksymal¬ nej ilosci 80—120 y/ml.W trakcie badan próbek gleby pobranych na ob^ szarze Wegier wyodrebniono nowy mikroorganizm, rózniacy sie od wszystkich dotychczas znanych i produkujacy sisomycyne. Zidentyfikowano go jako nowy gatunek Micromonospora i nadano mu nazwe Micromonospora rosea. Róznymi zabiegami uszla¬ chetniajacymi wytworzono z niego szczep Sl/109.Szczep ten zostal w dniu 12 grudnia 1978 r. zlozony w krajowym zbiorze kultur w Budapeszcie, gdzie nadano mu numer 00182, a w dniu 16 stycznia 1980 r. w „National Collection of Industrial Bacteria" pod nastepujacym numerem gatunek Micromonospora rosea MNG-00182 =NCIB 11567. Przez hodowle tego szczepu otrzymuje sie plyn fermentacyjny o duzej zawartosci sisomycyny.Jak wyzej wspomniano, wynalazek dotyczy no¬ wego sposobu wytwarzania antybiotyku sisomycyny, obejmujacego hodowle mikroorganizmu gatunku Mi¬ cromonospora rosea w warunkach aerobowych, w pozywce wodnej, zawierajacej zródla asymilowane- go wegla i azotu i nieorganicznych soli oraz, jezeli to jest pozadane, wydzielenie wytworzonej sisomy¬ cyny z pozywki fermentacyjnej i ewentualnie od¬ dzielenie od antybiotyków towarzyszacych i wyod¬ rebnienie w postaci wolnej lub w postaci dopuszczali nej w farmacji soli. 120 811120911 Stosowany w sposobie wedlug wynalazku szczep Micromonospora rosea Sl/109 ma nastepujace wlas¬ ciwosci: 1. Morfologia a) Makroskopowo, 10 dniowa hodowla prowadzona w 37°C na pozywce Czapeka wykazuje zadowala¬ jacy wzrost; brak grzybni powietrznej wystajace, normalne kolonie okraglego ksztaltu, barwy poma¬ ranczowozóltobrazowej; brak dyfundujacego pig¬ mentu. b) Obserwacje mikroskopowe: dlugie, rozgalezio¬ ne, normalne nici bez sciany dzielacej, przekrój 0,5 Jim; zarodniki okragle do jajowatych, umiesz- oeene~.jmu wpojedaifijych zarodniach o przekroju I 2. Wlasciwosci biochemiczne i fizjologiczne i Stosowany w sposobie wedlug wynalazku szczep Micrdmonóspófa rós^a Sl/109 wykazuje dobry wzrost V^0—3*°C-rlra*upizy 44°C.Utylizacje weglowodanów badano w nastepujacej pozywce: 0,5% ekstraktu z drozdzy, 1% zródla we¬ gla, 0,1% weglanu wapnia, 1,5% agaru w destylo¬ wanej wodzie. Wyniki zestawiono w tabeli 1.T a b e 1 a 1 Zródlo wegla arabinoza ryboza ksyloza ramnoza fruktoza galaktoza glukoza laktoza sacharoza rafinoza dulcyt mannit inozyt skrobia slaba zadowalajaca dobra slaba dobra mierna dobra slaba dobra mierna — slaba mierna — slaba slaba slaba dobra Utylizacja przez Micromonospora rosea Sl/109 Utylizacje azotu badano w nastepujacej pozywce: glukoza 1%, agar 1,5%, w destylowanej wodzie. Wy¬ niki zestawiono w tabeli 2.T a b Zródlo azotu 0,5 ekstraktu z drozdzy 1% asparaginy 1% kwasu glutamino- 1 wego 1% azotanu amonu 1% N-Z amina e 1 a 2 Utylizacja przez Micromonospora rosea Sl/109 dobra mierna — nieznaczna slaba slaba dobra 10 15 20 25 30 40 45 55 60 3. Wlasciwosci hodowlane Wyniki hodowli na róznych pozywkach zestawio¬ no w tabeli 3. Przy okreslaniu barwy mikroorga¬ nizmów stosowano oznaczenia wedlug Baumanns Fabkarte Atlas II. Paul Baumann, Aue I.-Sa 87350 LAu, RFN. ¦ Tabela 3 Zelatyna, mleko i skrobia ulegaja hydrolizie. Azo¬ tan ulega redukcji do azotynu. Tolerancja chlorku sodu: 2%.Pozywka Micromonospora rosea Sl/109 glukoza-aspara- gina-agar agar z peptonem i zelazem agar Emersona agar z glukoza i ekstraktem z drozdzy agar odzywczy brak wzrostu wzrost slaby, barwa: brudno- zólta, nieco szara Co 40 Malo warstwy zarodników: Co 63. Brak dyfundujacego pigmentu wzrost slaby, 1—2 kolonie barwa: pomaranczowa, jasna, nieco brazowa; O 126 lub Oc 117 wzrost zadowalajacy, barwa: jaskrawopomaranczowa, nieco czarna, kolonie silnie pofaldo¬ wane, Oc 98-Oc 120, nastep¬ nie 8 agar tyrozynowy agar Czapeka agar Benneta skos ziemniacza¬ ny (bez weglanu wapnia) wzrost zadowalajacy; barwa: jaskrawopomaranczowa, nieco czarna, Oc 98-Oc 120, nastep¬ nie 8 wzrost sladowy, barwa: brud¬ noszara, nastepnie w sladach czarna, rozpuszczalne pigmen¬ ty barwy rózowej, Oc 101 wzrost zadowalajacy, barwa: jaskrawopomaranczowa, na¬ stepnie czarna, Oc 97—120, na¬ stepnie 8 wzrost zadowalajacy; barwa: slabopomaranczowa, nieco brazowa; Oc 97-Oc 119 lub 120, rzadkie, rozpuszczalne pigmenty wzrost sladowy barwa: pomaranczowa; Oc 96 skos ziemniacza¬ ny (z weglanem wapnia) wzrost sladowy lub nieznacz¬ ny; barwa: pomaranczowa; Oc 96—97 i 99 Z porównania powyzszej charakterystyki hodowli z systematyka Micromonospora opracowana przez Luedemanna okazuje sie, ze szczep Sl/109 jest no- •5 wym gatunkiem.120 811 W korzystnym wykonaniu sposobu wedlug wyna¬ lazku, hodowle Micromonospora rosea Sl/109 pro¬ wadzi sie w warunkach podpowierzchniowych.W pozywce moga znajdowac sie rózne zródla asy- milowanego wegla i azotu, nieorganiczne sole, pier¬ wiastki sladowe i srodki przeciwpienne. Jako zródla wegla i azotu lub zródla energii mozna stosowac make sojowa, hydrolizat maki sojowej, hydrolizat, kazeiny, namok kukurydziany, ekstrakt z drozdzy i rózne weglowodany, jak np. glukoze, skrobie, skro¬ bie rozpuszczalna, dekstryne itp. Przykladami nieor¬ ganicznych soli sa rózne sole zelaza, magnezu lub kobaltu. Dla zwiekszenia pojemnosci buforowej ko-* rzystnie stosuje sie weglan wapnia. Jako srodki przeciwpienne odpowiednie sa rózne oleje roslinne (palmowy, slonecznikowy, sojowy).Z róznych skladników odzywczych mozna sporza¬ dzac rózne pozywki. W fermentacji w kolbach na wstrzasarce i w fermentacji inokulum stosuje sie inne pozywki niz w fermentacji w tanku.Do wytwarzania sisomycyny korzystna jest pozyw¬ ka skladajaca sie z maki sojowej, peptonu lub hy¬ drolizatu kazeiny, skrobi ziemniaczanej lub kukury¬ dzianej, dekstryny lub skrobi rozpuszczalnej, glu¬ kozy, weglanu wapnia, siarczanu zelaza lub magnezu, azotanu kobaltu i oleju palmowego.Fermentacje prowadzi sie w temperaturze okolo 25^tO°C, korzystnie 28—33°C, przy doplywie po¬ wietrza i mieszaniu z szybkoscia 200—400 obrotów na minute. Doplyw powietrza wynosi korzystnie jednostke objetosci na jednostke objetosci cieczy na minute.Do oznaczania aktywnosci powstajacych antybio¬ tyków (sisomycyny i skladników ubocznych) sto¬ suje sie mikroorganizm Staphylococcus epidermidis.Oznaczenia prowadzi sie metoda dyfuzji na agarze, wobec standardu sisomycyny.Sumaryczna aktywnosc brzeczki fermentacyjnej po 100—130 godzinach fermentacji wynosi okolo 600—700 jednostek/ml (jednostka = 1 \ig/ml zasady sisomycyny). 85% antybiotyku w brzeczce fermenta¬ cyjnej stanowi sisomycyna.Powstaly antybiotyk — sisomycyne odzyskuje sie kombinacja znanych zabiegów. Otrzymana zasade sisomycyny mozna, jezeli to jest pozadane, przepro¬ wadzic w dopuszczalna w farmacji sól.W fermentacji laboratoryjnej najwazniejsza ak¬ tywnosc sisomycyny dochodzi do 700—800 M-g/ml, a w warunkach pólprzemyslowych, tj. w tankach o po¬ jemnosci 1 m3, do 600—700 ng/ml. Stezenie to jest trzykrotnie wyzsze od uzyskiwanego w najkorzyst¬ niejszym z dotychczasowych sposobów, wedlug opisu patentowego St. Zjedn. Ameryki nr 3 832 286. Brzecz¬ ka fermentacyjna zawiera jedynie 15% lub mniej antybiotyków towarzyszacych.Przyklad I. Serie kolb o pojemnosci 3000 ml, zawierajacych po 800 ml sterylnej pozywki o skladzie: trypton 5 g, maka sojowa 10 g, rozpusz¬ czalna skrobia 20 g, glukoza 1 g, weglan wapnia 2 g, woda wodociagowa uzupelnienie do 1000 ml, inoku- luje sie 1 ml wegetatywnej grzybni utrzymywanego w —20°C mikroorganizmu Micromonospora rosea Sl/109 (MNG 00182) liczba zywych zarodników 106— 107/ml). Przed sterylizacja pozywke doprowadza sie do pH 7. Kolby utrzymuje sie w ciagu 3 dni w 28°C, 6 W 15 35 45 55 65 przy ciaglym ruchu obrotowym z szybokscia 260 obrotów na minute.Otrzymanym inokulum szczepi sie 100 litrów ste¬ rylnej pozywki o skladzie: maka kukurydziana 10 g, hydrolizat kazeiny 5 g, (waga substancji suchej), skrobia ziemniaczana 22 g, glukoza 10 g, weglan wapnia 2 g, olej palmowy 2g, woda wodociagowa uzupelnienie do 1000 ml.Kazeine hydrolizuje sie pankreatyna. Przed stery¬ lizacja pozywke doprowadza sie do pH 7,0 Fermen¬ tacje prowadzi sie w ciagu 36^18 godzin, przy cia¬ glym ruchu obrotowym z szybokscia 400 obrotów na minute, w 30°C. Napowietrzanie: jednostka obje¬ tosciowa na jednostke objetosciowa, na minute.Jako srodek przeciwpienny stosuje sie olej pal¬ mowy. 10 litrami tak otrzymanego inokulum szczepi sie 100 litrów pozywki fermentacyjnej o nastepuja¬ cym skladzie: maka sojowa 40 g, pepton 10 g, skro¬ bia ziemniaczana 10 g, dekstryna 25 g, glukoza 5 g, weglan wapnia 4 g, siarczan magnezu (7 H20) 2 g, siarczan zelaza (7 H20) 0,2 g, azotan kobaltu (6 H20) 0,3 mg, olej palmowy 2 g, woda wodociagowa uzu¬ pelnienie do 1000 ml.Przed sterylizacja, pozywke fermentacyjna dopro¬ wadza sie do pH 8,0. Sterylizacje prowadzi sie, przy mieszaniu, w 12TC w ciagu godziny, pod cisnieniem 1,3—1,4 atmosfery. Fermentacje przeprowadza sie w fermentorze z nierdzewnej stali, przy mieszaniu z szybkoscia 400 obrotów na minute i napowietrza¬ niu z szybkoscia Jednostka objetosciowa na jednost¬ ke objetosciowa na minute. Jako srodek przeciw¬ pienny stosuje sie olej palmowy.Produkcja antybiotyku rozpoczyna sie w 35 do 40 godzinie fermentacji, a maksymalne stezenie osiaga sie w 110 do 120 godzinie. Moment zakonczenia fer¬ mentacji okresla sie przyspieszona metoda ttirbidy- metryczna, stosujac jako szczep testowy Klebsiella pneumoniae (F. Kavanagh: Dilution Methods of An- tibiotic Assay, Analytical Microbiology, Acad. Press, New Yoerk, strony 125—140 (1963).Po zakonczeniu fermentacji sumaryczna aktyw¬ nosc brzeczki wynosi 650 jednostek/ml, w odniesie¬ niu do standardu sisomycyny (jednostka odpowiada aktywnosci 1 \ig standardu — zasady sisomycyny wobec Staphylococcus epidermidis, oznaczonej me¬ toda dyfuzji na agarze, J.S. Simpson: Analytical Microbiology. Acad. Press, New York, strony 87— 124 (1963).Przyklad II. Serie kolb o pojemnosci 3000 ml, zawierajacych po 800 ml sterylnej pozywki o skladzie: trypton 5 g, maka sojowa 10 g, skrobia rozpuszczalna 20 g, glukoza 1 g, weglan wapnia 2 g, woda wodociagowa uzupelnienie do 1000 ml, ino- kuluje sie 1 ml wegetatywnej grzybni mikroorga¬ nizmu Micromonospora rosea Sl/109 (MNG 00182).Przed sterylizacja pozywke doprowadza sie do ph 7,0.Kolby utrzymuje sie w ciagu 3 dni w 28°C, przy cia¬ glym ruchu obrotowym z szybkoscia 260 obrotów na minute.Tak otrzymanym inokulum szczepi sie 100 litrów sterylnej pozywki o nastepujacym skladzie: maka sojowa 10 g, sacharoza 10 g, skrobia ziemniaczana 10 g, weglan wapnia 4 g, olej palmowy 2 g, woda wodociagowa uzupelnienie do 1000 ml.120 811 8 Przed sterylizacja pozywke doprowadza sie do pH 7,0. Fermentacje prowadzi sie w ciagu 48—60 godzin, w 30°C, przy ciaglym mieszaniu z szybko¬ scia 400 obrotów na minute. Napowietrzanie: jed¬ nostka objetosci na jednostke objetosci na minute.Jako srodek przeciwpienny stosuje sie olej pal¬ mowy. 10 litrami otrzymanego inokulum szczepi sie 1 m3 pozywki fermentacyjnej o nastepujacym skladzie: maka sojowa 40 g, pepton 10 g, skrobia ziemniaczana 10 g, dekstryna 25 g, glukoza 5 g, weglan wapnia 4 g, siarczan magnezu (7 H20) 2 g, siarczan zelaza (7 R20) 0,2 g. azotan kobaltu (6 H20) 0,8 mg, olej palmowy 2 g, woda wodociagowa uzupelnienie do 1000 ml.Przed sterylizacja pozywke fermentacyjna do¬ prowadza sie do pH 8,0. Sterylizacje prowadzi sie, przy mieszaniu, w 121°C w ciagu godziny, pod cisnieniem 1,3—1,4 atmosfery. Fermentacje przeprowadza sie w fermentorze z nierdzewnej stali, przy mieszaniu z szybkoscia 400 obrotów na minute i napowietrzaniu z szybkoscia jednostka objetoscio¬ wa na jednostke objetosciowa na minute. Jako sro¬ dek przeciwpienny stosuje sie olej palmowy.Produkcja antybiotyku rozpoczyna sie w 35 do 40 godzinie fermentacji, a maksymalne stezenie osiaga sie w 110 do 120 godzinie. Moment zakonczenia fer¬ mentacji okresla sie przyspieszona metoda turbidy- metryczna, stosujac jako szczep testowy Klebsiella pneumoniae.Po zakonczeniu fermentacji sumaryczna aktyw¬ nosc brzeczki wynosi .600 jednostek/ml, w odnie¬ sieniu do standardu sisomycyny (jednostka odpo¬ wiada aktywnosci 1 |ng standardu — zasady sisomy¬ cyny, oznaczonej metoda dyfuzji na agarze wobec Staphylococcus epidermis).Przyklad III. 100 litrami inokulum z przykladu I szczepi sie 1 m3 pozywki fermentacyj¬ nej o skladzie: maka sojowa 40 g, hydrolizat ka¬ zeiny (waga substancji suchej) 10 g, skrobia ziem¬ niaczana 10 g, dekstryna 25 g, glukoza 5 g, weglan wapnia 4 g, siarczan magnezu (7 H20) 2 g, siarczan zelaza (7 H20 0,2 g, azotan kobaltu (6 H20) 0,8 mg, olej palmowy 2 g, woda wodociagowa uzupelnienie do 1000 ml. Kazeine hydrolizuje sie pankreatyna.Przed sterylizacja pozywke fermentacyjna dopro¬ wadza sie do pH 8,0. Sterylizacje prowadzi sie, przy mieszaniu, w 121°C w ciagu godziny, pod cisnieniem 1,3—1,4 atmosfery. Fermentacje przeprowadza sie w fermentorze z nierdzewnej stali, przy mieszaniu z szybkoscia 400 obrotów na minute i napowietrzaniu z szybkoscia jednostka objetosciowa na jednostke objetosciowa na minute. Jako srodek przeciwpienny stosuje sie olej palmowy.Produkcja antybiotyku rozpoczyna sie w 35 do 40 godzinie fermentacji, a maksymalne stezenie osiaga sie w 110 do 120 godzinie. Moment zakonczenia fermentacji okresla sie przyspieszona metoda tur- bidymetryczna, stosujac jako szczep testowy Kleb¬ siella pneumoniae.Po zakonczeniu fermentacji sumaryczna aktyw¬ nosc brzeczki wynosi 650 jednostek/ml, w odniesie¬ niu do standardu sisomycyny, oznaczonej metoda dyfuzji na agarze wobec Staphylococcus epider¬ mis).Przyklad IV. 100 litrami inokulum z przykladu I szczepi sie 1 m3 pozywki fermentacyj¬ nej o skladzie: maka sojowa 40 g, hydrolizat kazei¬ ny (waga substancji suchej) 10 g, skrobia kukury- 6 dziana 50 g, glukoza 5 g, weglan wapnia 4 g, siar¬ czan magnezu (7 H20) 2 g, siarczan zelaza (7 H20) 0,2 g, azotan kobaltu (6 H20) 0,8 mg, olej palmowy 2 g, woda wodociagowa uzupelnienie do 1000 ml.Kazeine hydrolizuje sie pankreatyna. Przed ste¬ lo rylizacja pozywke fermentacyjna doprowadza sie do pH 8,0. Sterylizacje prowadzi sie, przy mieszaniu, w 121°C w ciagu godziny, pod cisnieniem 1,3—1,4 atmosfery. Fermentacje przeprowadza sie w fermen¬ torze z nierdzewnej stali, przy mieszaniu z szyb- 15 koscia 400 obrotów na minute i napowietrzaniu z szybkoscia jednostka objetosciowa na jednostke ob¬ jetosciowa na minute. Jako srodek przeciwpienny stosuje sie olej palmowy.Produkcja antybiotyku rozpoczyna sie w 35 do 40 20 godzinie fermentacji, a maksymalne stezenie osiaga sie w 110 do 120 godzinie. Moment zakonczenia fer¬ mentacji okresla sie przyspieszona metoda turbidy- metryczna, stosujac jako szczep testowy Klebsiella pneumoniae. 26 Po zakonczeniu fermentacji sumaryczna aktyw¬ nosc brzeczki wynosi 680 jednostek/ml, w odniesie¬ niu do standardu — sisomycyny.Po zakonczeniu fermentacji znanym sposobem wy odrebnia sie czysta zasade sisomycyny 80 Temperatura topnienia 198—201°C; ( (c = 0,3, w wodzie); Widmo PMR (Me-N-3", s, 3H), 82,56 (H-3", d, J2»3" = 10 Hz, 1H), 83,17 (H-6', szeroki s, 2H), 83,30 (Hax-5", d, Jgem = 95 = 12 Hz, 1H), 83,80 (H-2", dd, J2»,3» = 10 Hz, Ji»2» = 4 Hz, 1H), 84,04 (He-5", d, Jgem = 12 Hz, 1"H), 84,88 (H-4', szeroki t, 1H), 85,09 (H-l", d, Jw = = 4 Hz, 1H), 85,35 (H-l, d, J12 = 2 Hz, 1H) ppm.^ Widmo w podczerwieni (KBr): vOH, NH 3170-3360, vCH=COC 1690, vCOC 1060 cm-* Widmo masowe: ciezar czasteczkowy: 447 Liczba masowa charakterystycznych jonów (m/e): 447, 332, 304, 160, 145, 127, 118, 110, 100. 45 Przyklad V. Wytwarzanie siarczanu siso¬ mycyny 15 g czystej zasady sisomycyny rozpuszcza sie w 60 ml odjonizowanej wody i za pomoca 5 N kwasu siarkowego doprowadza roztwór do pH 4,3. Roztwór 60 miesza sie w ciagu 30 minut z 1,5 g aktywnego we¬ gla i przesacza przez filtr Seitza. Saczek trzykrotnie przemywa sie porcjami po 5 ml odjonizowanej wo¬ dy, a polaczone przesacze przy ciaglym mieszaniu wylewa do 1 litra metanolu. Po oziebieniu otrzy- 55 many osad odsacza sie. Tak otrzymany siarczan siso¬ mycyny przemywa sie trzema 50 ml porcjami meta¬ nolu i suszy pod zmniejszonym cisnieniem w 50°C.Otrzymuje sie 22 g zadanego produktu. 60 Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania antybiotyku sisomycyny i jej dopuszczalnych w farmacji soli, w drodze ho¬ dowli mikroorganizmu rodzaju Micromonospora, w 65 warunkach aerobowych, w) pozywce zawierajacej120 811 9 zródla asymilowanego wegla i azotu i sole mineralne i nastepnego wytworzenia soli, znamienny tym, ze mikroorganizm gatunku Micromonospora rosca, szczep NMG 00182, hoduje sie w pozywce zawiera¬ jacej zródla asymilowanego wegla i azotu oraz sole mineralne, w warunkach aerobowych i, jezeli to jest pozadane, tak otrzymany antybiotyk sisomycyne wydziela z brzeczki fermentacyjnej i, jezeli to jest pozadane, oddziela od antybiotyków towarzyszacych i/lub, jezeli to jest pozadane, przeprowadza w do¬ puszczalne w farmacji sole. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako zródla wegla i azotu stosuje sie skrobie, dek¬ stryne, sacharoze, make kukurydziana, make sojo¬ wa, namok kukurydziany, hydrolizat maki sojowej. 10 3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze fermentacje prowadzi sie w 25—40°C, korzystnie w 28—30°C. 4. Sposób wedlug zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, 5 ze fermentacje prowadzi sie w obecnosci nieorganicz¬ nych soli, korzystnie soli zelaza, magnezu i kobaltu. 5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sie brzeczke fermentacyjna, w sklad której wchodzi maka sojowa, pepton lub hydrolizat ka- 10 zeiny, skrobia ziemniaczana lub kukurydziana, dek¬ stryna lub skrobia rozpuszczalna, glukoza, weglan wapnia, siarczan zelaza i magnezu, azotan kobaltu i olej palmowy. 6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 15 antybiotyk otrzymany w postaci zasady przeprowa¬ dza sie w siarczan. PL PL PL PL PL PL

Claims (6)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania antybiotyku sisomycyny i jej dopuszczalnych w farmacji soli, w drodze ho¬ dowli mikroorganizmu rodzaju Micromonospora, w 65 warunkach aerobowych, w) pozywce zawierajacej120 811 9 zródla asymilowanego wegla i azotu i sole mineralne i nastepnego wytworzenia soli, znamienny tym, ze mikroorganizm gatunku Micromonospora rosca, szczep NMG 00182, hoduje sie w pozywce zawiera¬ jacej zródla asymilowanego wegla i azotu oraz sole mineralne, w warunkach aerobowych i, jezeli to jest pozadane, tak otrzymany antybiotyk sisomycyne wydziela z brzeczki fermentacyjnej i, jezeli to jest pozadane, oddziela od antybiotyków towarzyszacych i/lub, jezeli to jest pozadane, przeprowadza w do¬ puszczalne w farmacji sole.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako zródla wegla i azotu stosuje sie skrobie, dek¬ stryne, sacharoze, make kukurydziana, make sojo¬ wa, namok kukurydziany, hydrolizat maki sojowej. 103.

3.Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze fermentacje prowadzi sie w 25—40°C, korzystnie w 28—30°C.

4. Sposób wedlug zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, 5 ze fermentacje prowadzi sie w obecnosci nieorganicz¬ nych soli, korzystnie soli zelaza, magnezu i kobaltu.

5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sie brzeczke fermentacyjna, w sklad której wchodzi maka sojowa, pepton lub hydrolizat ka- 10 zeiny, skrobia ziemniaczana lub kukurydziana, dek¬ stryna lub skrobia rozpuszczalna, glukoza, weglan wapnia, siarczan zelaza i magnezu, azotan kobaltu i olej palmowy.

6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 15 antybiotyk otrzymany w postaci zasady przeprowa¬ dza sie w siarczan. PL PL PL PL PL PL