DK141773B - Fremgangsmåde til fremstilling af et antitumormiddel. - Google Patents
Fremgangsmåde til fremstilling af et antitumormiddel. Download PDFInfo
- Publication number
- DK141773B DK141773B DK422475AA DK422475A DK141773B DK 141773 B DK141773 B DK 141773B DK 422475A A DK422475A A DK 422475AA DK 422475 A DK422475 A DK 422475A DK 141773 B DK141773 B DK 141773B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- tumor
- cytotoxic agent
- chloroethyl
- immunoglobulin
- agent
- Prior art date
Links
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 27
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 27
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 27
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 26
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 16
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 6
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 125000001340 2-chloroethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)C([H])([H])* 0.000 description 4
- HWAVIYAFGOQVNJ-UHFFFAOYSA-N 4-n,4-n-bis(2-chloroethyl)benzene-1,4-diamine Chemical compound NC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 HWAVIYAFGOQVNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 1,4-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=C(N)C=C1 CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- -1 phenyl diamines Chemical class 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SNFZPEZEZZWYMP-UHFFFAOYSA-N [4-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]azanium;chloride Chemical compound Cl.NC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SNFZPEZEZZWYMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 229940098174 alkeran Drugs 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000025036 lymphosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- GBCKRQRXNXQQPW-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylprop-2-en-1-amine Chemical group CN(C)CC=C GBCKRQRXNXQQPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006069 physical mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Metal Rolling (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
(11) FREMLÆGGELSESSKRIFT 141773 (§) DANMARK l'” ln, cl’ A 61 K 39/395 • (21) Ansøgning nr. 4224/75 (22) Indleveret døn 19* sep. 1975 (23) Løbedag 19· Ββρ. 1975 (44) Ansøgningen fremlagt og fremlæggelsesskriftet offentliggjort den 16. jun. 1 980 DIREKTORATET FOR __.
PATENT-OG VAREMÆRKEVÆSENET (30) Prioritet begæret fra dap
20. sep. 1974, 41037/74, GB
(7i) G.D. SEARLE & CO. LIMITED, Lane End Road, High Wycombe, Buckingham* shir ej GB.
(72) Opfinder: David Allen Lewis Davies, 10, Gillets Lane, High Wycombe, Buckinghamshire, GB.
(74) Fuldmægtig under sagens behandling;
Ingeniørfirmaet Budde, Schou & Co.
(54) Fremgangsmåde til fremstilling af et antitumprmiddel.
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et antitumormiddel, der er ejendommelig ved, at man omsætter et cytotoksisk middel, fortrinsvis p-di(2-chlorethyl)amino- -L-phenylalanin eller N,N-bis(2-chlorethyl)p-phenylendiamin med formlen m2C-C^-CH2- -N (CH2-CH2-C1) 2 eller H2N-^~^“N" (CH2CH2“C1) 2 nh2 med et tumorspecifikt antistof i nærværelse af et vandopløseligt carbodiimid til dannelse af en peptidbinding mellem det cytotoksiske middel og det tumorspecifikke antistof.
Det er kendt at fremstille antitumormidler i form af specifikke antisera ved konventionel teknik ved immunisering og derefter 2 141773 opsamling af sera. Disse antisera absorberes derefter med f.eks. normale celler for at fjerne visse uønskede antistoffer over for andre celler end målcellerne, dvs. tumorceller. De tilbageværende antistoffer vil da være rettet i overvejende grad mod de valgte målceller, dvs. tumorceller.
Det har nu vist sig, at et sådant tumorspecifikt antistof ved binding til et cytotoksisk middel tilvejebringer et væsentligt mere effektivt, specifikt antitumormiddel.
De medikament-antistofkomplekser, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, viser sig nemlig at tilvejebrinr-ge betydelig større beskyttelse af mus mod tumordannelse end enten EL4 immunoglobulin indgivet alene eller det cytotoksiske middel knyttet til ikke-specifikt (antitumor) globulin. Hertil kommer, at ækvivalente doser af det cytotoksiske middel indgivet alene er dødelige for mus; men den maksimalt tolerable dosis af det cytotoksiske middel anvendt alene er utilstrækkelig til i væsentlig grad at modvirke tumordannelse under de betingelser, der er anvendt ved nedenstående biologiske afprøvning.
Tumorspecifikke antistoffer fremstilles (ved immunisering) f.eks. mod neoplastisk væv ved kendt teknik, som beskrevet af Ghose et al. i British Medical Journal (1972) 3, side 492-499. Ved en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen omsættes således antistoffer mod muse-EL4--lymphoma (EL4 immunoglobulin) med p-di(2-chlorethyl)amino--L-phenylalanin i nærværelse af l-ethyl-3(3-dimethylaminopro-pyl) -carbodiimid-hydrochlorid, således at der tilvejebringes et antitumormiddel, som pr. ét tumorspecifikt antistof indeholder ca. 13 molekyler cytotoksisk middel kemisk bundet ved peptidbindinger.
Antistoffer mod neoplasma af lymphatiske og hæmatopoi-tiske væv, herunder lymphosarcoma, kronisk lymphatisk leukemi,
Hodgkin's sygdom, kræft i æggestokkene, brystet og testiklerne og andre epithelievæv og melanoma, fremstillet ved i og for sig kendt teknik er tumorspecifikke antistoffer, der kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Den immunoglo-bulinfraktion, der virker som antistof over for disse væv og absorberes méd normalt væv, bindes særlig let og uden aktivi-tetsforringelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen til et 3 141773 cytotoksisk middel såsom p-di(2-chlorethyl)amino-L-phenylana-nin i nærværelse af l-ethyl-3(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid.
Dette giver en glat forløbende reaktion under dannelse af det ønskede antal peptidbindinger. Det er således hensigtsmæssigt ifølge opfindelsen, at carbodiimidet er l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) -carbodiimid-hydrochlorid.
Det er essentielt for fremgangsmåden ifølge opfindelsen, at efter at komplekset er dannet, bevarer det tumorspecifikke antistof sin specificitet, ligesom det cytotoksiske middel bevarer sin evne til at alkylere. Begge disse væsentlige træk opfyldes ved hjælp af den med carbodiimid frembragte peptidbindingsdannelse, som er simpel at styre, idet der ifølge opfindelsen i antitumormidlet bindes 5 til 15 molekyler cytotoksisk middel pr. molekyle tumorspecifikt antistof. Herved opnås, at det tumorspecifikke antistof holder det cytotoksiske middel bundet og først afgiver dette til målcellerne, dvs. ved tumorsteder, hvor dets frigivelse i høj koncentration ønskes. Formentlig kan denne virkningsmekanisme redegøre for den ovenfor beskrevne iagttagelse af, at en større indgivelse af cytotoksisk middel bundet komplekst ifølge opfindelsen nu er mulig i modsætning til indgivelse af samme cytotoksiske middel i fri form (som i øvrigt er helt utilstrækkelig i tolerable doser). Dette forøger i høj grad det tumorspecifikke antistofs aktivitet.
Grunden til, at man blandt de cytotoksiske midler, der kan omsættes med tumorspecifikt antistof i nærværelse af vandopløseligt carbodiimid under dannelse af peptidbindinger og herved giver et overvejende mod tumorceller rettet stadig stærkt cytotoksisk aktivt (alkyleringsdygtigt) middel, foretrækker de to specifikt nævnte phenyldiaminer, er disses kendte og gennemprøvede cytotoksiske aktivitet samt deres lette tilgængelighed, hvor det første fås under NFN navnet "Melphalan" og er kommercielt tilgængeligt under registreret varemærke "Alkeran"® , medens det andet ligeledes er et nu velkendt cy-totoksikum, der kan fremskaffes i tekniske mængder.
Doseringen vil variere efter det tumorspecifikke antistofs art og mængde og efter typen af dertil bundet cytotoksisk middel, udstrækningen af neoplastisk vækst (tumorstørrelsen) samt individets tolerance over for det specielle antitumormiddel -(tumorspecifikt 141773 4 antistof-cytotoksisk middel-kompleks). Da toksiske bivirkninger hos det cytotoksiske middel i høj grad formindskes ved bindingen til det tumorspecifikke antistof, kan man med fordel indgive store doser bundet cytotoksisk middel. Doser af p-di(2-chlorethyl)amino--L-phenylalanin kan således hasves 2-5 gange i forhold til dem, der er beskrevet i Cuttings Handbook of Pharmacology, 4. udgave 1969 udsendt på Appelton Century Crafts, se navnlig side 139.
De neden for anførte eksempler er beregnet på at illustrere fremgangsmåden ifølge opfindelsen Under mere detaljeret gennemgang af en foretrukken udførelsesform derfor.
Eksempel_l_og_2 I kaniner fremstilles et antiserum mod EL4 tumorceller (celler af transplantabel lymphoma fra C57B1/6 musestamme). EL4 celler ud-
Q
taget fra mus indsprøjtes intravenøst i kaniner i tre doser på 10 celler pr. dosis med intervaller på 10 dage. 10 dage efter den sidste dosis aftappes blod fra kaninerne, og serummet indsamles. Dette serum opvarmes til 56°C i 30 min. for at ødelægge komplement-aktivitet.
Det opsamlede serum absorberes med normale museceller, hvilket efterlader tumorspecifikke antistoffer. Serummet absorberes med en pulje af musemiltceller, herunder i det mindste nogle fra mus af stammen C57B1/6 eller en lignende stamme. Gentagne absorptioner foretages med en portion svarende til 10 milte til 1 milliliter serum i 16 timer ved 4°C under omrøring, indtil der hos serummet ikke er nogen reaktivitet mod normale celler fra stammen C57B1/6 ved konventionelle cytotoksicitetsprøver. Ved den samme prøve og desuden ved indirekte immunofluorescens eller agglutinationsprøver afprøves det samme serums reaktivitet med EL4 tumorceller for at demonstrere, at det er tumorspecifikt.
Globulinfraktionen fældes fra serummet ved tilsætning af mættet ammoniumsulfat, indtil slutkoncentrationen er 40%. Det fældede EL4 globulin (Ig) genopløses i phosphatpuffret saltvand, således at der tilsidst tilvejebringes en proteinkoncentration på 30-50 g/ml således som målt ved biuretreaktionen.
En peptidbinding mellem en amino- henholdsvis en carboxylsyre-gruppe, der er tilstede på visse cytotoksiske medikamenter, og tilsvarende respektive grupper på antistofmolekylerne, frembringes i nærværelse af carbodiimid således som nedenfor beskrevet.
5 141773
Der fremstilles følgende reagenser (Al 10 ml af ovennævnte EL4 i immunoglobulinopløsning på 57 mg/ml indstillet til pH 6,5 med HC1, (B) enten (1) 57 mg N,N-bis(2-chlorethyl)p-phenylendiamin--hydrochlorid opløst i 2 ml dioxan eller (2} 57 mg p-di (2-chlorethyl }.amino-L-phenylalanin opløst i 0,8 ml af en syre:ethanol-blanding (92% ethanol indeholdende 2% HCl efter vægt/rumfangl og derpå fortyndet med en pufferopløsning af 60% propylenglycol indeholdende 1,2% (efter vægt/rumfang). di-kaliumhy-drogenphosphat, således at der nås et slut-pH på 6-6,5, (C) 114 mg l-ethyl-3 (3-dimethylaminopropyl) -carbodiimid-HCl opløst i 0,5 ml fysiologisk saltvandopløsning.
Reagenserne A, B og C blandes hurtigt i 5 sek., hvorefter reaktionen standses ved tilsætning af 6 ml 1M natriumacetat ved pH 6,5. Den herved fremkomne opløsning dialyseres mod tre portioner 0,3% natriumcitratopløsning over 24 timer ved 4°C for at fjerne ubundet cytotoksisk middel, dvs. (li henholdsvis (2i.
De således fremstillede antitumormidler analyseres for proteinindhold og alkyleringsaktivitet. Proteinindholdet måles under anvendelse af en konventionel biuretafprøvning med okseserumalbumin som standard. Alkyleringsaktiviteten afprøves under anvendelse af -Epstein's metode (jvf. J. Epstein, R. W. Rosenthai og R. J. Ess.
Anal. Chem. 27, 1434 (1955)).
Det ifølge eks. 1 fremstillede færdige præparat af N,N-bis-(2-chlorethyl)p-phenylendiamin/tumorspecifikt antistof-kompleks indeholder 12,2 mg EL4 immunoglobulin/ml og 122 pg N,N-bis(2--chlorethyl)p-phenylendiamin/ml. Dette repræsenterer et forhold på ca. 5,0 molekyler cytotoksisk middel pr. molekyle tumorspecifikt ig.
På lignende måde indeholder den ifølge eks. 2 fremstillede færdige opløsning af p-di(2-chlorethyl)amino-L-phenylalanin/tumorspecifikt antistof-kompleks 13,9 mg EL4 immunoglubulin/ml og 380 pg p-di(2-chlorethyl)amino-L-phenylalanin/ml, hvilket repræsenterer et forhold på ca. 13,6 molekyler cytotoksisk middel pr. molekyle tumorspecifikt antistof.
Det ses således, at man covalent kan binde de her omhandlede cytotoksiske midler og deres nære analoge til tumorspecifikke antistoffer ved hjælp af en peptidbinding. Sådanne cytotoksisk middel/ tumorspecifikt antistof-kompleksers aktivitet er vist neden for.
6 141773
Biologisk afprøvning af cytotoksisk middel/tumorspecifikt antistof-^__ i _ -kompleks som antitumormiddel_____________;_¥_______
De i eks. 1 og 2 ovenfor fremstillede præparater anvendes til at beskytte mus mod de dødelige virkninger af indsprøjtning af EL4 tumorceller.
Grupper af mus får intraperitonealt injiceret ca. 10.000 4 lethale doser (5 x 10 1 tumorceller opsamlet fra underlivet af i forvejen inficerede mus. 24 timer efter cellernes injektion modtager dyrene den første af 4 daglige doser terapeutisk middel eller et kontrolmiddel således som nedenfor beskrevet.
1. Behandling med N,N-bis(2-chlorethyl)p-phenylen- di«mln/EL4 immunoglobulin-komplekser____ 50% af musene overlever
Behandling med i (antal dage)
Saltvand (kontrol) 14,5
Normal kaninglobulin/N,N-bis(2-chlor-ethyl)p-phenylendiamin (1/2 ml doser indeholdende 245 pg N,N-bis (2-chlor-ethyl)p-phenylendiamin og 7,0 mg normalt kaninglobulin) (sammenligning! 14,5 EL4 immunoglobulin alene (25 mg! (sammenligning! 24,5 N,N-bis(2-chloreth.yl1p-phenylendiamin/-EL4 immunoglobulin (1,4 ml doser indeholdende 170 pg N,N-bis(2-chlorethyl i p-phenylendiamin + 17 mg EL4 immunoglobulin), (fremstillet ifølge opfindelsen! 34,0 2, Behandling med p-di{2-chlorethyllamino-L--phenylalanin/EL4 immunoglobulin-komplekser 50% af musene overlever
Behandling med i (antal dage)
Saltvand (kontrol) 15,5 p-di(2-chlorethyl)amino-L-phenylalanin blandet med normal kaninglobulin som i 1. i øvrigt (sammenligning) 15,0 EL4 immunoglobulin alene (1 mg) (sammenligning) 26,6 p-di(2-chlorethyl1amino-L-phenylalanin/-EL4 immunoglobulin-kompleks (760 pg p--di(2-chlorethyli amino-L-phenylalanin + 28 mg EL4 immunoglobulin) (fremst. 80% overlevende mus efter ifølge opf.) 42 dage 7 141773
Det ses af forsøgsresultaterne, at en ren fysisk blanding af de cytotoksiske midler i tolerable doser med ikke-antitumor-specifikt immunoglobulin fra samme forsøgsdyr (kaniner) er lige så ineffektivt som saltvandsindsprøjtninger (kontrol).
En noget bedre aktivitet har den kendte indgivelse af EL4 immunoglobulin alene (sammenligning).
Den kraftige forbedring ses ved indgivelse af antitumormidlet fremstillet ifølge opfindelsen ved omsætning af samme cytotoksiske middel med samme tumorspecifikke antistof, dvs. EL4 immunoglobulin. Doseringen af cytotoksisk middel er herved hævet over grænsen for disse forbindelsers toksicitet.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB41037/74A GB1509707A (en) | 1974-09-20 | 1974-09-20 | Immunological compounds |
| GB4103774 | 1974-09-20 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK422475A DK422475A (da) | 1976-03-21 |
| DK141773B true DK141773B (da) | 1980-06-16 |
| DK141773C DK141773C (da) | 1980-11-03 |
Family
ID=10417824
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK422475AA DK141773B (da) | 1974-09-20 | 1975-09-19 | Fremgangsmåde til fremstilling af et antitumormiddel. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5161640A (da) |
| DE (1) | DE2541931A1 (da) |
| DK (1) | DK141773B (da) |
| FR (1) | FR2285145A1 (da) |
| GB (1) | GB1509707A (da) |
| NL (1) | NL7511089A (da) |
| SE (1) | SE7510505L (da) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4067971A (en) * | 1976-05-13 | 1978-01-10 | The Procter & Gamble Company | Therapeutic composition |
| JPS54132503A (en) * | 1978-04-07 | 1979-10-15 | Kayaku Antibiotic Research Co | Immune globulin combined neocarcinostatin |
| US4315851A (en) | 1978-12-29 | 1982-02-16 | Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical composition having antitumor activity |
| JPS5592325A (en) * | 1978-12-29 | 1980-07-12 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumor agent and its preparation |
| JPS5665828A (en) * | 1979-11-02 | 1981-06-03 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumor agent |
| JPS5665829A (en) * | 1979-11-02 | 1981-06-03 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumor agent |
| EP0037388B1 (fr) * | 1980-03-31 | 1984-12-12 | Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire | Formes pharmaceutiques, leur préparation et les compositions qui les contiennent |
| JPS58118520A (ja) * | 1982-01-09 | 1983-07-14 | Hidematsu Hirai | 抗腫瘍性蛋白複合体およびその製造法 |
| JPS59186924A (ja) * | 1983-04-08 | 1984-10-23 | Kureha Chem Ind Co Ltd | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
| GB2148299B (en) * | 1983-09-01 | 1988-01-06 | Hybritech Inc | Antibody compositions of therapeutic agents having an extended serum half-life |
| DE3513572A1 (de) * | 1985-04-16 | 1986-10-16 | Karl Prof. Dr.med. 7302 Ostfildern Theurer | Herstellung von praeparaten zur spezifischen beeinflussung der humoralen und zellulaeren immunreaktion |
| JPS62228025A (ja) * | 1985-12-27 | 1987-10-06 | Teijin Ltd | 抗体複合体の製造方法 |
| WO1988007553A1 (en) * | 1987-03-26 | 1988-10-06 | Teijin Limited | Process for preparing antibody complex |
| US5773435A (en) * | 1987-08-04 | 1998-06-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Prodrugs for β-lactamase and uses thereof |
| AU649275B2 (en) * | 1990-11-06 | 1994-05-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Prodrugs for beta-lactamase and uses thereof |
| DE4122210C2 (de) * | 1991-07-04 | 1999-04-01 | Deutsches Krebsforsch | Konjugate aus tumoraktiver Verbindung und Serumalbumin sowie Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung |
-
1974
- 1974-09-20 GB GB41037/74A patent/GB1509707A/en not_active Expired
-
1975
- 1975-09-19 DK DK422475AA patent/DK141773B/da unknown
- 1975-09-19 DE DE19752541931 patent/DE2541931A1/de not_active Withdrawn
- 1975-09-19 SE SE7510505A patent/SE7510505L/xx unknown
- 1975-09-19 JP JP50113541A patent/JPS5161640A/ja active Pending
- 1975-09-19 NL NL7511089A patent/NL7511089A/xx not_active Application Discontinuation
- 1975-09-19 FR FR7528837A patent/FR2285145A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK141773C (da) | 1980-11-03 |
| FR2285145B1 (da) | 1980-05-30 |
| DK422475A (da) | 1976-03-21 |
| NL7511089A (nl) | 1976-03-23 |
| JPS5161640A (en) | 1976-05-28 |
| DE2541931A1 (de) | 1976-04-01 |
| GB1509707A (en) | 1978-05-04 |
| SE7510505L (sv) | 1976-03-22 |
| FR2285145A1 (fr) | 1976-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220387314A1 (en) | Albumin-pd-1 paclitaxel nanoparticle complex compositions and methods of making and using the same | |
| US10780049B2 (en) | Lyophilized compositions comprising albumin-rankl or albumin-GD2 paclitaxel nanoparticle complexes | |
| DK141773B (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et antitumormiddel. | |
| ES2266041T3 (es) | Proteina serica y celular de anclaje y conjugados. | |
| US4263279A (en) | Pharmaceutically active compositions containing adriamycin and daunomycin | |
| JPH05504554A (ja) | 免疫強化を促進するための方法と組成物 | |
| JPH02503088A (ja) | 抗体フラグメント複合体の調製方法 | |
| JPH04503945A (ja) | 血管透過性抱合体 | |
| US4017471A (en) | Immunological compounds | |
| CS235525B2 (en) | Method of conjugate preparation containing immunoglobulin or immunoglobulin's fragment | |
| Bragman et al. | Simultaneous interaction of monoclonal antibody-targeted liposomes with two receptors on K562 cells | |
| Agodoa et al. | Precipitating antigen-antibody systems are required for the formation of subepithelial electron-dense immune deposits in rat glomeruli. | |
| JPH0640945A (ja) | Ｆｃフラグメント結合抗腫瘍剤 | |
| FI98706C (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen immunoglobuliinikonjugaatin valmistamiseksi | |
| JPH062679B2 (ja) | 免疫毒素製剤 | |
| JP2003513985A (ja) | 天然に存在しないエナンチオマー（Ｌ−ビオチン）を結合する抗体および該抗体のターゲッティング薬剤（ａｇｅｎｔ）としての使用 | |
| La Via et al. | Studies on Fc receptor function: I. IgG-mediated inhibition of B lymphocyte activation by T-dependent and T-independent antigens | |
| Koyama et al. | Effect of chemical cationization of antigen on glomerular localization of immune complexes in active models of serum sickness nephritis in rabbits. | |
| AU619195B2 (en) | Hepatic blocking agents | |
| US5151266A (en) | Use of anionic detergents with conjugates of monoclonal or polyclonal antibodies | |
| Woodman | Localized incorporation of iododeoxyuridine from polycation-complexed iododeoxycytidylic acid into DNA of several murine and hamster tumors | |
| EP0213881B1 (en) | The use of amphipathic molecules for radioimaging and therapy with conjugates of monoclonal or polyclonal antibodies | |
| CA1050012A (en) | Conjugates of anti-cancer drugs with antibodies | |
| Onuma et al. | Antitumor effect of adriamycin entrapped in liposomes conjugated with anti‐bovine tumor antigen monoclonal antibody in leukemic cows | |
| Das et al. | Correlation between antitumor activity of protein A and in vivo formation of defined high molecular weight complexes with immunoglobulin G in BALB/c mice |