DE929389C

DE929389C - Verfahren zur Herstellung von Penicillin

Info

Publication number: DE929389C
Application number: DEG11180A
Authority: DE
Inventors: Donald John Darling Hockenhull; Anthony Richard John Quilter
Original assignee: Glaxo Laboratories Ltd
Current assignee: Glaxo Laboratories Ltd
Priority date: 1952-03-10
Filing date: 1953-03-11
Publication date: 1955-06-27

Description

Verfahren zur Herstellung von Penicillin

Die F.riindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung

von Penicillin und insbesondere verbesserten Medien

für die Fermentation von Penicillin erzeugenden

Schimmelpilzen. Mit dem Ausdruck Penicillin ist eine

oder eine Mischung von mehr als einer antibiotischen

Substanz gemeint, die durch die Fermentation von

Schimmelpilzen, beispielsweise von der Art des Peni-

cillium, z. l3. Penicillium notatum und Penicillium

chrj-sogenum, erzeugt wird: Beispiele von Antibiotica,

die unter den allgemeinen Ausdruck Penicillin fallen,

sind solche wie Penicillin G, Penicillin 1 und Peni-

cillin F, von denen Penicillin G das bedeutendste ist.

Die Penicilline h@iiilen durch die allgemeine Formel

worin R verschiedene Gruppen bedeuten kann, dar-

gestellt «-erden; im Falle von Penicillin G ist R eine

Benzylgruppe.

Penicillin wird durch Fermentation eines Penicillin

erzeugenden Schinunelpilzes in einem geeigneten

Nährmedium erzeugt, und zwar normalerweise bei den

Bedingungen einer aeroben Tiefenkultur, und es sind

umfangreiche Untersuchungen durchgeführt -worden,

um geeignete Nährmedien aufzufinden, mit denen

maximale Ausbeuten an Penicillin erzielt werden

können. Gegenwärtig werden für eine wirtschaftliche

Herstellung von Penicillin Medien auf der Basis von

Maisquellwasser verwendet, die neben diesem Material

Wasser, Nährsalze, ein Kohlehydrat, wie Lactose, und

gewünschtenfalls andere organische Materialien, wie

Maisöl, enthalten. Die für die Unterstützung des

Wachstums eines Penicillin erzeugenden Schimmel-

pilzes erforderliche Zusammensetzung von Medien auf

der Basis Maisquellwasser ist bekannt. Ein solches

Medium wird hier als ein "Maisquellwassermedium,;

bezeichnet.

Es ist ebenfalls bekannt, daß die durch Fermenta-

tion eines Penicillin erzeugenden Schimmelpilzes in

einem geeigneten Maisquellwassermedium erzielten

ausbeuten merklich vergrößert werden können, -wenn

man in solche Medien bestimmte organische Sub-

stanzen, wie Phenvlessigsäure, Phenylacetamid, p-Phe-

nvläthylamin (vgl. britische Patentschrift 586 93o)

einbringt, und diese Substanzen sind als Precursoren

des Penicillins bekanntgeworden. Es -wird ange-

nommen, daß diese Substanzen die Gruppe R in der

obenerwähnten Formel für Penicillin liefert, da die

Art dieser Precursoren die Art des erhaltenen Peni-

cillins beeinflußt; wenn das 3Iedium beispielsweise

Phenvlessigsäure enthält, werden verbesserte aus-

beuten an Benzylpenicillin (Penicillin G) erhalten,

während bei Verwendung von p-Oxyphenylessigsäure

ein größerer Anteil an p-Oxybenzylpenicillin erhalten

wird. Andere Precursoren von der allgemeinen Formel

worin R' Wasserstoff, Methyl, Äthyl, niedrigmole-

kulare alkvläther und deren Acyloxyderivate be-

deuten kann, sind in der britischen Patentschrift

f)r3 4q2 erwähnt, -nie beispielsweise Plienylacetyl-

äthanolamin. Eine Substanz, die in ihrem Molekül

den Rest R der Penicilline enthält und die nach Ein-

bringen in ein geeignetes Maisquellwassermedium zu

einer gesteigerten Ausbeute an Penicillin anlaß gibt,

-wird hier als "Penicillinprecursor@r bezeichnet.

In der USA.-Patentschrift 2a.37 gtä wird die Ein-

bringung von Substanzen, die dort als -Stilfit ent-

haltende Verbindungen,. bezeichnet -werden, in Peni-

cillinfermentationsmedier.- beschrieben. Ganz all-

gemein werden dort viele schwefelhaltige Verbin-

dungen genannt, im speziellen jedoch metallische Stil-

fite besprochen. In der Beschreibung wird einerseits

die Verwendung von Thiosulfaten erwähnt, anderer-

seits werden aber Beispiele -weder für die Verwendung

von Thiosulfaten noch für die dabei zu erzielenden

Ergebnisse angeführt. Die Zugabe solcher sulfit-

haltiger Verbindungen -wird mehr für sogenannte

synthetische 3ledien als für 3laisquellwassermedien

vorgeschlagen, und es wird tatsächlich angedeutet,

daß die Anwesenheit von Stilfit die Verwendung von

Maisquellwasser überflüssig macht. Soweit bekannt,

hat die Verwendung von Stilfiten bei den Herstellern

von Penicillin in England und in den Vereinigten

Staaten von Amerika leinen anklang gefunden.

Auf Grund umfassender Versuche -wurde nun ge-

funden, daß es bei Verwendung eines geeigneten Mais-

quellwassermediums für eine optimale Penicillin-

herstellung notwendig ist, in dem Medium so---olil eine

Quelle für den Rest R des Penicillinmoleküls als auch

eine Quelle für den Schwefel (vermutlich für den Thia-

zolidenring) zu verschaffen. Beispielsweise wurde

beobachtet, daß die Zugabe eines Penicillinprecur-

sors, der als solcher schon die Erhöhung der Penicillin-

ausbeuten veranlaßt, eine «,"eitere Steigerung der Aus-

beute ergibt, wenn eine geeignete Schwefelquelle an-

wesend ist. Während in gleicher Weise die An-

wesenheit einer Schwefelquelle als solche in einem

Medium, das keinen Penicillinprecursor enthält,

fördernd wirkt, wird durch die Anwesenheit eines

Precursors die Ausbeute noch -weiter gesteigert. Diese

Entdeckungen sind bei großen Zusätzen wichtig. So

sind beispielsweise vor der vorliegenden Erfindung

optimale Ausbeuten durch Zugabe von Phenylacet@-1-

äthanolamin in der Größenordnung von 0, 1° " er-

zielt worden, und über diese Zahl hinaus erhöhte

Mengen ergaben nicht viel mehr Penicillin. Es -wurde

nun gefunden, daß größere Mengen von Penicillin-

Precursoren verwendet werden können, wenn man

auch eine Schwefelquelle einbringt, und <lall dann

höhere Ausbeuten an Penicillin erzielt werden k5nnen

als bei Verwendung von Precursoren in irgendeiner

:Menge ohne eine solche Zugabe; es scheint also, daß

der Schimmelpilz, wenn sowohl die Schwefelquelle

wie auch der Penicillinprecursor zusammen in dem

Medium anwesend sind, fähig ist, jede dieser beiden

einzelnen Substanzen besser auszunutzen, als -renn

nur eine von ihnen anwesend ist. Die Auswahl einer

geeigneten Schwefelquelle für den erfin<@unggemäpn

Zweck hat sorgfältige Untersuchungen, erfordert, und

es sind eine Anzahl von Quellen, wie beispie lsweise die

in der erwähnten USA.-Patentsclirift a T," giS vor-

geschlagenen, geprüft -worden. Es wurde jedoch ge-

funden, daß nur Thiosulfate befriedigende Ergebnisse

zu ergeben scheinen und daß andere schwefel-

haltige Verbindungen, -nie Cystein, Sulfate, Stilfite

u. dgl., unbefriedigend sind. Weiterhin ist die vor-

liegende Erfindung nur bei Kulturbedingungen von

Wert, bei denen normalerweise hohe Ausbeuten er-

zielt werden können, nämlich bei Tiefenkulturbedin-

gungen. Es kann also gesagt werden, daß die Ent-

deckung, auf der die vorliegende Erfindung fußt,

darin besteht, daß bei der Fermentation unter Tiefen-

kulturbedingungen ein Penicillin erzeugender Schim-

melpilz in einem geeigneten Maisquellwassermediuni,

das sowohl ein Thiosulfat -wie einen Penicillinprecursor

enthält, mehr befähigt ist, bei seiner Peiiicillins@-ntllese

den Procursor und den Schwefel auszunutzen, so daß

größere Mengen an diesen beiden Zusatzsubstanzen

verwendet werden können, -ras die Herstellunvon

Penicillin in größeren Ausbeuten, als sie bisher möglich

waren, zur Folge hat. Bei optimalen Bedingungen

können daher Ausbeuten von mehr als ;ooo inter-

nationalen Einheiten je Kubikzentimeter erzielt

werden. Es sei bemerkt, daß durch Versuche gezeigt

worden ist, daß die hohen, durch das erfindungs-

gemäße Verfahren zu erzielenden Ausbeuten nicht

allgemein bei @'er«'elidung syntlietiscller Medien er-

halten werden kühnen, die eine Schwefelquelle und

einen Penicillinprecursor, jedoch kein Maisquell-

e @2sscr enthalten.

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung

von Penicillin besteht daher darin, (laß ein Penicillin

c'rzetigender @cliininiulpilz unter Tiefenlkulturl)edin-

gungen in einer) Maisquellwasserinc(liuin, das ein

Thiosulfat und einen Penicillinprecursor, wie hier

definiert, enthält, fermentiert wird.

Es ist ein weiteres Merkmal der Erfindung, daß der

Penicillinprecursor Phenylessigsä ure, Phenylacet-

ainid, Plielivlacetyliithanolamin oder (1'-Plieny-lätliyl-

;linin ist.

Das zur @-er«'endung kommende Thiosulfat sollte

zumindest teilweise wasserl-slich sein, und sein

hutionischer Anteil sollte in der zur Verwendung

kommenden Menge keine Vergiftung des Schimmel-

pilzes oder Zerstörung des erzeugten Penicillins ver-

ursachen. Durch Vorversuche mit Schüttelflaschen

ist leicht festzustellen, ob irgendein spezielles Thio-

sulfat gec'i;@net ist; es wird irgendein Natrium-

tllic@su@fat, 1i<tliunitliiosulfat, Amnioniunitliiositlfrit

oder llagnesiun)tliiosulfat verwendet.

Die für die j:rfindung bevorzugten Penicillin er-

zl'tigcnd(#n Schitninelpilze sind Penicillium notatuin

und f'<'nicillitiril chrvsogenum.

\Vie ()l-)en fest;-,stellt, kann n las Mengen an Pctii-

cilliiil>rerursor ver«-enden, die gr@)ßer sind als die

11eiigen, die bisher zur Ver«-endung kanten, und inan

l)evorzugt die Verwendung von mehr als o,i o," und

vorzugs«-eise o,2"" an Procursor, wobei die obere

t irenze durch die leichte toxische Wirkung bestimmter

1'r( cursoreit auf den Schimmelpilz bestimmt ist. Es

sei beincrlct, daß einige Precursoren während der

1#erinentation schnell verbraucht «-<#rden, ohne daß

sie notwendiger«-eisu vom Schimmelpilz für die Syn-

these von Penicillin verwendet «-erden, und es ist

geg(,ni\-iirtig in solchen Fällen üblich, weitere Mengen

an Precursor in dein Maße, wie die Fermentation fort-

schreitet, ztizitgc'l)en; ein soklier Precursor ist bei-

spiels«-c'isc I'hen@'lessi@säure.

1>ie' Ztig@tlie i\-e iterer Precursormengen v()n Zeit zu Zeit

wahrend der Fermentation kann bei dein crfindungs-

g#'in<il3cil #'e rfabren ebenfalls notwendig sein. Es ist

jedoch nicht notwendig, den Precursortyp zu ver-

wt'ildtll, (ler ill der britischen Patentschrift t)i3 4(-)2

(@rtt-Millt ist.

I'.s \@-erdun i11) Medium Thiosuliat-

inengeii vurwundet, die einem Sch«-ufelgeh@ilt Unt-

sprechen, der gri»l.ie r ist als o,oi0 " und vorzugsweise

ungefähr o,o2 ° " beträtet. «-un) Thiosulfat verwendet

wird.

Diu (-)hure Grunze der Zugaben an Precursor und

l`I11@)sllliat ist durch die Mengen dieser liusta il(ltelle

bestiniiiit, die der in Frage kommende Schinmielpilz

erträgt. Wenn zuviul eines oder der beiden Bestand-

toile zugegeben wird, findet eine Wachstuinshinderung

statt. Trotzdem kann die Menge jedes der beiden

Bestandteile, die ein bestimmter Schimmelpilzstamm

zuläßt, durch Akklimatisierung der Kultur an die

speziellen Bedingungen vergrößert werden.

Die Erfindung soll im folgenden an Hand von

experimentellen Daten näher erläutert «'erden.

Beispiel i

Es wurden Versuche zum Vergleich der Wirkung

von Natriumsulfat in einer Menge von o,o8 °j" mit

variierenden Mengen von Phenyläthv_ lamm und

Pheliylacetamid durchgeführt.

Der für diese Versuche zur Verwendung gekommene

Stamm von Penicillium chrysogenum war PNI 3.

Das Grundmedium hatte die folgende Zusammen-

setzung

Lactose . . . . . . . . . . . . . . . 3,5 ""

Feststoffe Maisquell-

wasser . . . . . . . . . . . . . . 3,5 0,'0 (Gewicht)

KHZPOi ............. 0,4 o ;o

Kreide (AN ALAR) ..... 1,0 °;o

Maisöl . . . . . . . . . . . . . . . . o,16 ccm pro Flasche,

getrennt zugegeben.

Je nach ßed@irf «-urelen Natriumthiosulfat und das

Phenvlätlivlamin oder Plienylacetamid als Gewichts-

anteil zll ;l, eilen des Hauptiriedlums zugegeben.

Probeflaschen «-orden in einer Rotationsschüttel-

maschine finit 21o Umdrehungen je Minute geschüttelt.

Sie wurden dann mikrobiologisch getestet, wobei die

folgenden Ergebnissi' gew«nncn «-urdes

o,i5 0," Phuny-lacetainicl - 5-Tage-Kultur

Versuch Nr. Titer Mittel

1 200 200

200

260 230

200

mit Thiosulfat: o,08 o," lind 0,15 "@" Phenylacetamid

Versuch Nr. Titer Mittel

3 6i0 615

62O

t 4 ,-5 N .+8o

18o

o,3"", Plienylacetamid - kein Thiosulfat

Versuch Nr. Titer Mittel

J 300 31J

3.30

c32o 325

325

mit Thiosulfat o,oS" "

Versuch \i-. Titer Mittel

5C)U 5()J

54n

S 155 450

5

Phenylacetamid - 6-Tage-Kultur

Menge -0,1501" - kein Thiosulfat
Versuch Nr. Titer Mittel
285 295
310
10 310 315
320
mit Thiosulfat o,o8 °/"
Versuch Nr. Titer Mittel
ii 485 485
i2 555 545
540
Menge = 0,3 °/" - kein Thiosulfat
Versuch Nr. Titer Mittel
13 355 355
14 325 28O
240
mit Thiosulfat o,o8 "/o
Versuch Nr. Titer Mittel
15 61o 61o
16 605 565
525
Phenylacetamid - 7-Tage-Kultur
Menge 0,i5 °/"
Versuch Nr. Titer mittel
17 210 *270*
330
18 340 325
310
mit Thiosulfat o,o8 °/"
Versuch Nr. Titer Mittel
i9 550 5-2o
490
20 440 430
420
Menge o,3 °;"
Versuch Nr. Titer Mittel
21 210 285
365
22 300 295
290
mit o,o8 Thiosulfat
Versuch Nr. Titer Mittel
23 6oo 6oo
24 530 565
600

Phenyläthylamin ergab folgende Ergebnisse:

5-Tage-Kultur - Menge o,i5 °/o
Versuch Nr. Titer Mittel
25 315 325
335
26 350 350
mit o,o8°/" Thiosulfat
Versuch Nr. Titer Mittel
27 495 495
28 465 465
Menge 0,3 011,)
Versuch Nr. . Titer Mittel
29 310 310
30 385 385
mit o,o8 "j" Thiosulfat
Versuch Nr. Titer Mittel
31 370 420
470
32 505 495
490
Menge o,6 °/"
Versuch Nr. Titer Mittel
33 390 390
34 270 260
255
mit o,o8 °/o Thiosulfat
Versuch Nr. Titer Mittel
35 520 485
450
36 425 435
445
Phenyläthylamin - 6-Tage-Iiultur
Menge 0,15 ";'"
Versuch Nr. Titer Mittel
37 395 395
38 375 J/5
mit o,o8 °/o Thiosulfat
Versuch Nr. Titer Mittel
39 550 520
485
40 42-5 475
535
Menge 0,3 °/o
Versuch Nr. Titer Mittel
41 470 470
42 455 455

mit 0,o8 °,'" Tbiosulfat

Versuch N r. Titer "Mittel

43 560 555

550

44 575 b05

64o

Menge 0,611,

Versuch N r. Titer Mittel

45 -130 -150

470

46 -160 435

410

finit 0,o8",'" Thiosulfat

Versuch Nr. Titer "Mittel

47 J55 550

5-15

48 t>10 565

520

Plicil@-lätli@-lamin - 7-Tage-Kultur

Menge o,15 °,"

Versuch Nrr. Titer "Mittel

49 225 280

330

50 460 .160

mit Thiosulfat (o,oe °, ")

Versuch \r. Titer Mittel

51 :190 500

510

52 61o 61o

Menge o,3 °; "

Versuch \r. Titer Mittel

53 5-1o 540

54 475 475

mit Thiosulfat (0,o8 ": ")

Versuch _X r. Titer Mittel

55 575 57o

565

5r1 585 545

51o

Menge 0,6 °,'"

Versuch Nr. Titer Mittel

37 66o 66o

5'8 -155 450

-1-10

mit Thiosulfat (0,o8"-")

Versuch Nr. Titer Mittel

39 575 570

56o

h0 t350 63j

615

Fermentation,

durch"efiihrt in 5-I-Fermentationsgefäßen

Die folgenden mikrohiologischen Titer wurden an

5-d-Fermentationsgefäßen auf dem gleichen Grund-

niediuni wie dem für die Schüttelflaschen verwendeten

geWonnun. Phenvlacetamid wurde in einer Menge von

o,15 und 0,3 ", r, zugesetzt.

Ohne Mit

\atriumtliiosulfat

\a2riumtlüosullat: 0,

ninden 0,080,'

Plienp1acetainid Pllen@-lacetamid

0,1#5o,7 0 1 0,300 0,15% 1 0,3w'0

70 840 77 0 780 630

82 580 66o 62o 590

94 790 760 870 1030

106 99o 880 103 0 1150

118 920 7.10 1150 ioio

130 930 720 1430 1070

142 78 0 810 980 1090

Beispiel 2

Das folgende Medium wurde für Versuche mit

Plienvlacetvlätl)anolamin verwendet

Lactose . . . . . . . . . . . . . . . . 3,0 °;'o

Feststoffe "Maisquellwasser 3,0 ";'"

Kreide ................ 1,o 1'I"

KH.PO4 .............. 0,4 °,'u

Phenvlacet-,--lätlianolamin. o,i °;"

lIais<il ... . . . . . . . . . . . . . . 0,25 °/" (bezogen auf

das Volumen)

Unter Verwendung von Penicillium chrt-sogenum

var. breuistenjnia. (vgl. USA-Patentschrift 2458495)

wurden eine Anzahl von Schüttelflaschenversuchen

durchgeführt, wobei der Hälfte der Flaschen eine zu-

sätzliche Menge von 0,02 °,/" Schwefel in Form von

0,08 "'"t \atriumtliiosulfat zugegeben wurde. Die Er-

gebnisse waren die folgenden:

lnhtlhationszeit Kontrollversuch -f- Tliiosulfat

5 Tage....... 13.M0 i. E. ccm 1370 i. E.iiccm

1380 - 1:19o -

Tage....... 1380 - 1590 -

1320 - 1610 -

7 Tage....... 1175 - 1235 -

1165 - 1310 -

Diese Ergebnisse, die bei 5 und 6 Tagen einen An-

stieg im Titer von ungefähr 200 internationalen Ein-

heiten je Kubikzentimeter bei den Thiosulfatflaschen

zeigten, waren statistisch bedeutsam.

Da es nicht bekannt war, ob die Wirkung auf eine

Eigenschaft des speziellen verwendeten Maisquell-

wasseransatzes zurückzuführen war, wurden 14 andere

Ansätze in Schüttelflaschen mit und ohne Zugabe von

\atriumthiosulfat getestet, und in jedem Falle wurde

gefunden, daß durch diese Zugabe ein Anstieg im

Titer erhalten wurde.

?als nächstes wurde N atriumthiosulfat in 5-l-Fer-

mentationsgefäßen untersucht. Für diese Versuche

wurde ein Medium verwendet, das eine höhere Konzen-

tration an Lactose und Feststoffen des Maisquell-

wassers enthielt

Lactose . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3,5 0/0

Feststoffe Maisquellwasser ........... 3,5 0(0

Irreide ............................ i,o o/

0

RH.PO. .......................... 0,4 0,'`0

Phenylacetyläthanolamin ............ o,i 0 70

o

Maisöl . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,25 0

Zu diesem Medium wurden wie in den Schüttel-

flaschenversuchen 0,o8 % Natriumthiosulfat, die

0,02 0!0 Schwefel entsprechen, zugegeben.

Nach 96 und I08 Fermentationsstunden wurden

die folgenden Titer erreicht:

Flasche 96 Stunden 1o8 Stunden

17 1430 i. E./ccm 1620 i. E./ccm

18 2020 - 165o -

20 1 1430 - 1580 -

21 1550 - 146o -

23 1320 - 1400 -

24 2070 - 186o -

Kontrollversuche, die in genau der gleichen Weise,

jedoch ohne Natriumthiosulfat durchgeführt wurden,

gaben die folgenden Ergebnisse:

Flasche 92 Stunden I 116 Stunden

25 1200 750

26 1140 850

.27 logo 930

28 840 1270

29 glo iigo

Weitere Versuche in je 5-l-Fermentationsgefäßen

wurden in einem 'Medium der folgenden Zusammen-

setzung durchgeführt:

Lactose ................

3,5 o;'o

Feststoffe Maisquellwasser 3,5 0/0 (bezogen auf

Phenylacetyläthanoiamin. o,2 °,'o das Gewicht)

Ir W P 0,I . . . . . . . . . . . . . . 0,4 0,!0

N atriumthiosulfat ....... 0,o8 0%

Kreide ................ i,o 0/0

Maisöl . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,25%

Bei diesen Versuchen wurde der Precursor von

o,I 0!0 auf o,2 0,10 erhöht, um das durch die Zugabe von

N atriumthiosulfat gesteigerte Vermögen zur Erzeu-

gung von Penicillin zu unterstützen. Die folgenden

Titer zeigen die erzielten Ergebnisse.

Flasche

96 Stunden

1o8 Stunden

6 2040 i. E./ccm ig8o i. E./ccm

20 1770 - 2020 -

Es wurde dann gefunden, daß das gleiche Medium

für andere Stämme von P. chrysogenum ebenso

günstig ist. Bei Verwendung von zwei verschiedenen

Stämmen wurden die folgenden Titer erhalten:

Flasche Nr. 96 Stunden 1 1o8 Stunden

Stamm 1 l 13 165o I870

17 1560 2250

I4 216o .'.I30

Stamm 2 I8 2050 1970

15 2020 2230

?2I 2090 2350

Bei Verwendung von verschiedenen Mengen Mais-

quellwasser und Lactose wurden dann Versuchs-

ergebnisse gewonnen. Die Titer sind die folgenden:

Behandlung Flasche 9(3 1o8

u r. stunden Stunden

1. 3,5 0l0 #VIOW") 24 1800 2-220

3,5 0/0 Lactose 4 Ip40 2100

17 '''22O 1810

2. 4,0 0,10 MOW 16 1900 (84 Std.) -

3,5 0,1o Lactose 13 1990 1700

3. 5,0 % MOW 6 1650 (84 Std.) -

3,5 010 Lactose 20 17S0 710

4. 4,0o/. MOW 5 2 33 0 2100

4,0l)/, Lactose 15 logo 1580

5. 4.5 0/0 MOW ig 166o -

4,00/, Lactose 14 2070 1780

6. 5,o 0ö MOW 21 1580 65o

4,0 °!o Lactose 23 1380 1320

*) 3Iaisquellirasser

Daraus geht hervor, daß jeder einzelne einer Anzahl von Bestandteilen beschränkend werden kann. Um diese Schwierigkeit zu überwinden und Titer bedeutend höherer Größenordnung zuzulassen, ist es notwendig, dafür zu sorgen, daß kein Faktor in dem Medium in begrenzenden Mengen anwesend ist. Diese Bedingungen werden, ohne daß irgendwelche anderen nachteiligen Wirkungen auftreten, erfüllt, wenn ein Fermentationsmedium der folgenden Zusammensetzung verwendet wird:

Lactose . . . . . . . . . . . . . . . . 3,5 0/0

Feststoffe Maisquellwasser 3,5 0,'0 (bezogen auf

Phenylacetyläthanolamin. 0,2 0/0 das Gewicht)

K H, P O4 . . . . . . . . . . . . . . 0,4 0/0

Natriumthiosulfat ....... 0,o80/0

Irreide ................ i,o 0/0

Beispiel 3 Eine Anzahl von Versuchen wurde unter Verwendung von Phenylessigsäure als Precursor durchgeführt. Die Bedingungen und Ergebnisse waren die folgenden:

@leC1111iI1

Lactose ................

3#J u

J#eststolie \Iaisquelhcasser 3,5",I

K H=1'01 . . . . . . . . . . . . . . 0,4

Kreide ..... . .......... 1.0 \iaisül ....... . . . . . . . . . . o,1ti ccm pro Flasche,

getrennt zugegeben

`1ta111211'kl

I@. I@JII't'Sü@-el111111, Pjl 3.

1're<nusor

Drei @len@-en neutralisierte Phuiivlessigsäure, in Ab-

Stä11de11 von 24 Stunden aseptisch zugegeben.

Ergebnisse

Phenwl- Pllcn#;I- Phinvl-

e@i@üurc e;i@-@@iurc esigsäure

1I@Ii @lllt

1-,in Illlt '-,in 11 kein

11- 1'hlr,- 7#i#io-

Tl:;o Tl;io T'_lio

#nIf,i- `lI@Iat i #llll@it I #Illl:ll,lllfat @tll'at

Tage

1' laSChe I 2()J I80 33 5 10 <20 <20

Flasche = 290 .305 335 S <20 <20

Flasche ,i 1 34J Ios I 31- j ,- --20 <20

Mittel . ...... 300 1q3 327 -20 <20

@@ Tag'.

I' 1@iSCl@e I . . . I 300 235 415 20 100

l@lascile 2 . . . 34,5 220 I -145 oo 2,5 io

Fla#clle 3... 36o 2 5 5 330 ; 50 1 3 0 10

Mittel ....... 335 230 -103 75 5@ 40

l'agu

Flasche I .. 35O ?5I 420 jo 14 1 l

Flasche 2 ... 440 25J .130 1g0 z8 ti

Flasche 3.. - 251 375 20J 14

Mittel .......I 395 I 251 i .108 I 178 1 1 5 I 6

* 2o -Minuten. hei 1,05 Atn1. sterilisiert

Es sei bemerkt, daß bei einer Menge von 0,24 °,'"

Precursor dessen toxische Wirkung bei Zugabe des

Thiosulfats beseitigt wird.

Claims

PA1E\'I'A\SPRL`CI1L: I. Verfahren zur Herstellung von Penicillin mittels Penicillin erzeugender Schimmelpilze unter Tiefenkulturbedingungen in einem Maisquellwasser- medium und in Gegen -,wart eines Precursors, da- durch gekennzeichnet, daß das Rührmedium außer dein Precursor noch ein Thiosulfat in einer Menge enthält, die gering genug ist, keine wesentliche Henllnung der Fermentation zu Z'er- ursachen. 2. Verfahren nach Anspruch I, dadurch gekenn- zeichnet, daß das Medium wenigstens o,I "" und #-Or7-tigswelse wenigstens o,2 #." des PreclirSOrs lind Wenigstens o,o1 °", und vorzugsweise wenigstens 0,02 °," Schwefel als Thiosulfat enthält. 3. Verfahren nach Anspruch I und 2, dadurch gekennzeichnet, daß als Precursor Phenylessig- säure, Phenvlacetamid, Phen@-lacetvläthanolamin oder 13-Phenvlätli\-lamin und als Thiosulfat Na- triuinthiosulfat, lialiumthiosulfat, Aninionium- tliiosulfat oder -Nlagnesiumthiostilfat verwendet «'erden. 4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Zu- gaben an Precursor zu dem Medium in Zeitab- ständen «während der Fermentation vorgenommen werden, «wobei der Gesamtgehalt an Precursor gering genug ist, um keine wesentliebe Hemmung der Fermentation zu verursachen. j. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß als Penicillinschiinmelpilz Penicillium chr-,'sogenum vur«-endut wird.