DE69933581T2

DE69933581T2 - Verwendung von humanem wachstumshormon zur vermehrung der anzahl zirkulierender cd34+ zellen, zur wiederherstellung des hämopoietischen und des immunsystems nach myeloablativer oder antiblastischer therapie, bei transplantation oder re-infusion

Info

Publication number: DE69933581T2
Application number: DE69933581T
Authority: DE
Inventors: Massimo Alessandro GIANNI
Original assignee: Applied Research Systems ARS Holding NV
Current assignee: Merck Serono SA
Priority date: 1998-12-30
Filing date: 1999-12-30
Publication date: 2007-06-21
Anticipated expiration: 2019-12-31
Also published as: CY1107603T1; JP4808316B2; EP1140149A1; IL143994A0; CA2354194A1; EP1016413A1; EP1140149B1; ATE342064T1; US20060029581A1; IL143994A; DE69933581D1; AU2004203355B2; WO2000040260A1; AU2004203355A1; PT1140149E; DK1140149T3; AU772222B2; ES2275359T3; JP2002534393A; AU2103900A

Description

Knochenmarkstransplantation (BMT) ist ein klinisches Verfahren, in welchem pluripotente hämopoetische Zellen, die aus dem Knochenmark erhalten wurden, einem Patienten transplantiert werden. BMT ist die Behandlung der Wahl bei verschiedenen hämatologischen Erkrankungen einschließlich bösartiger Tumoren, schwerer kombinierter Immundefekte (SCIDs), kongenital oder genetisch bestimmter hämopoetischer Abnormalitäten, Anämie, aplastischer Anämie, Leukämie und Osteopetrose (Fischer et al., 1998). In den letzten zehn Jahren stieg die Verwendung von BMT von weniger als 5.000 auf mehr als 40.000 jährlich an (Waters et al., 1998).
Unter Gleichgewichtsbedingungen befindet sich die Mehrheit der hämopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen im Knochenmark und lediglich eine kleine Zahl dieser Zellen ist im peripheren Blut nachweisbar. Zusätzliche Stammzellen können jedoch durch Behandlung mit myelosuppressiven Mitteln und/oder bestimmten hämopoetischen Wachstumsfaktoren in das periphere Blut mobilisiert werden (Van Hoef, 1998). Untersuchungen haben gezeigt, dass periphere Blutstammzellen (PBSC), welche in einen Wirt infundiert werden, verglichen mit Stamm- und Vorläuferzellen aus dem Knochenmark ein erhöhtes Potenzial zur Verpflanzung aufweisen (Gianni et al., 1989; Larson et al., 1998). Daher werden PBSC, die durch Chemotherapie, hämopoetische Wachstumsfaktoren oder der Kombination dieser beiden Modalitäten mobilisiert werden, derzeit sowohl in autologen als auch in nicht autologen Transplantationssituationen verwendet (Van Hoef, 1998; Anderlini und Korbling, 1997). Im Fall der nicht autologen Transplantation sind die Spender der Stammzellen normale Individuen und das Verfahren zur Mobilisierung der Stammzellen in den Blutstrom muss mit minimalen Beschwerden erreicht werden. In diesem Fall wird die Stammzellmobilisierung mit hämopoetischen Wachstumsfaktoren der Behandlung mit antiblastischen Wirkstoffen (d. h. Cyclophosphamid) vorgezogen.
Einige hämopoetische Wachstumsfaktoren wie G-CSF, EPO und CSF wurden als mobilisierende Mittel untersucht und werden derzeit verwendet, um die Zahl der PBSC vor der Leukapherese zu erhöhen (Henry, 1997, Weaver und Testa, 1998). Behandlungen, die auf die Stimulierung der gesamten Hämopoese abzielen, können von großem Interesse sein, um einen großen Teil von Vorläuferzellen und Stammzellen zu mobilisieren. Die gesteigerte Mobilisierung von Stammzellen ist extrem wertvoll im Zusammenhang mit der Transplantation der hämopoetischen Stammzellen durch Verringerung der Anzahl der Leukapheresen, die notwendig sind, um ausreichende Mengen hämopoetischer Stammzellen zur Transplantation zu sammeln.
Der erste Teil der Erfindung stellt ein neues mobilisierendes Mittel bereit, das verwendet wird, um die Zahl der zirkulierenden Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo in einem Individuum wiederherzustellen, zu erhöhen.
Das erfindungsgemäße neue mobilisierende Mittel ist Wachstumshormon und insbesondere menschliches Wachstumshormon (hGH) oder eines seiner Derivate oder ein beliebiger Faktor, der die Wachstumshormon-Freisetzung induziert.
Wenn es nicht anders spezifiziert wird, bedeutet im Kontext der Erfindung der Begriff «GH» Wachstumshormon oder eines seiner Derivate.
Es wurde nun herausgefunden, dass durch Verabreichung des Wachstumshormons und insbesondere des menschlichen Wachstumshormons (hGH) oder eines seiner Derivate oder eines beliebigen Faktors, der die Wachstumshormon-Freisetzung induziert, eine Mobilisierung von Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, im peripheren Blut erreicht wird. Daher stellt Wachstumshormon und insbesondere menschliches Wachstumshormon (hGH) oder eines seiner Derivate oder ein beliebiger, die Wachstumshormon-Freisetzung induzierende Faktor, das/der allein oder in Kombination mit anderen Faktoren verabreicht wird, ein neues Verfahren oder eine neue Anwendung zur Mobilisierung von Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in das periphere Blut dar.
Menschliches Wachstumshormon (hGH), auch bekannt als Somatotropin, ist ein Proteinhormon, das von somatotropen Zellen des Hypophysenvorderlappens produziert und sekretiert wird. hGH spielt eine Schlüsselrolle beim somatischen Wachstum durch seine Wirkungen auf den Metabolismus von Proteinen, Kohlenhydraten und Fetten. Zusätzlich zu seinen Wirkungen auf das somatische Wachstum wurde für hGH gezeigt, dass es Blutzellen in vitro stimuliert (Derfalvi et al., 1998, Merchav et al., 1988), Erythrocyten- und Hämoglobinwerte steigert (Valerio et al., 1997, Vihervuori et al., 1996), die Proliferation und Ig-Produktion in Plasmazelllinien erhöht (Kimata und Yoshida, 1994) und die CD8⁺-Zellzahlen und zu einem geringeren Ausmaß die CD4⁺-Zellzahlen stimuliert (Geffner, 1997).
Die erfindungsgemäßen Verwendungen, welche das erfindungsgemäße mobilisierende Mittel verwenden, haben einige Vorteile:

– Es gibt eine niedrige Anzahl zirkulierender Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese wiederherzustellen. Diese Anzahl wird als nicht ausreichend angesehen, um eine Zellverpflanzungsdosis durch einmalige oder vielfache Apheresen in einem vertretbaren Zeitraum bereitzustellen. Erfindungsgemäße Verfahren und Verwendungen lösen dieses Problem durch eine vorübergehende Peripherisierung dieser Zellen und Untergruppen in das zirkulierende Blut, welches weithin verwendet wird, um die Ausbeute der zirkulierenden Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, im Blut signifikant zu erhöhen, wodurch die Zahl der zum Erreichen der Verpflanzungsdosis benötigten Apheresen minimiert wird.
– Andere Vorteile der erfindungsgemäßen Verfahren und Verwendungen umfassen die Möglichkeit des:
a) Umgehens der Notwendigkeit einer Vollnarkose,
b) Erntens, sogar wenn das Darmbein durch vorhergehende Bestrahlungstherapie geschädigt oder mit bösartigen Zellen infiltriert ist,
c) Schnelleren Erreichens der Wiederherstellung von anhaltenden hämopoetischen Funktionen als mit Vorläuferzellen aus dem Knochenmark (BM).
d) Schnelleren und wirksameren Erreichens der Wiederherstellung von anhaltenden hämopoetischen Funktionen als ohne Vorbehandlung, einschließlich eines erfindungsgemäßen Verfahrens oder Verwendung.
– Allgemein sind erfindungsgemäße Verwendungen wirksam und sicher, um periphere Blutzellen zu mobilisieren, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen.
– Erfindungsgemäße Verwendungen sind nicht toxisch hinsichtlich der Hauptparameter der Toxizität, welche zum Beispiel Tumorwachstum, klinische und instrumentelle Symptome oder Labortests auf Herz-, Leber- und Nierenfunktion sind.
– Die erhöhte Mobilisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, die mit den erfindungsgemäßen Verwendungen erhalten wird, ist im Zusammenhang mit der Transplantation hämopoetischer Stammzellen aufgrund der Verringerung der Anzahl der Leukapheresen, die benötigt werden, um ausreichende Mengen hämopoetischer Zellen zur Transplantation zu sammeln, extrem wertvoll.
– Erfindungsgemäße Verwendungen führen zu einer Verringerung des Blutvolumens, das während des Apherese- oder Leukaphereseverfahrens bearbeitet werden muss, um eine spezifische Zielzahl an Zellen zu erhalten. Die Vorteile des Bearbeitens eines verringerten Blutvolumens sind die, dass der Patient weniger Zeit an der Zelltrennungsmaschine verbringt, dass es die Toxizität des Verfahrens insbesondere hinsichtlich des Volumens des Antikoagulans, dem der Patient während des Verfahrens ausgesetzt sein würde, verringert und dass es die Zeit der Maschine und des Betreibers verringert.
– Weiterhin hat die Transplantation einer Population von Blutzellen, die mit Zellen angereichert sind, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, wobei die Population durch erfindungsgemäße Verfahren oder Verwendungen aus dem peripheren Blut erhalten wird, die Wirkung, die Wiederherstellung des hämopoetischen und des Immunsystems des Empfängers nach myeloablativen oder antiblastischen Therapien zu verstärken.

Die vorliegende Erfindung entspricht den Ansprüchen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart ein Verfahren der Herstellung einer Population zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, umfassend:

a) die Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, an einen Spender in einer Menge, die ausreichend ist, um die Zahl der zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in dem Spender zu erhöhen,
b) die Isolierung einer Population zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem peripheren Blut des Spenders.

Dieses Verfahren schafft daher eine Population von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, wobei diese Population zur Transplantation in dasselbe oder in andere Individuen bestimmt ist.
Daher offenbart die vorliegende Beschreibung ein Verfahren zur Herstellung einer Population von Blutzellen, welche mit Zellen angereichert ist, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, umfassend:

a) die Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, an einen Spender in einer Menge, die ausreichend ist, um die Zahl der zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in dem Spender zu erhöhen,
b) die Isolierung einer Population von Blutzellen, welche mit Zellen angereichert ist, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem peripheren Blut des Spenders.

Die vorliegende Beschreibung offenbart auch ein Verfahren zur Isolierung einer erhöhten Zahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, von einem Spender, umfassend:

a) die Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, allein oder in Kombination mit anderen hämopoetischen Wachstumsfaktoren an einen Spender in einer Menge, die ausreichend ist, um die Mobilisierung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in das periphere Blut zu induzieren,
b) die Isolierung einer Population von Blutzellen, welche mit Zellen angereichert ist, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem peripheren Blut des Spenders.

Die vorliegende Beschreibung offenbart auch ein Verfahren zur Herstellung einer Population zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, umfassend:

a) die Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, an einen Spender in einer Menge, die ausreichend ist, um in dem Spender die Mobilisierung oder Peripherisierung von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu induzieren,
b) die Isolierung einer Population von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem peripheren Blut des Spenders oder die Isolierung einer Population von Blutzellen, welche mit zirkulierenden Zellen angereichert ist, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem peripheren Blut des Spenders.

Schritt b) {d. h. «Isolierung einer Population von (Blutzellen, welche angereichert sind, mit) zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem peripheren Blut des Spenders»} der erfindungsgemäßen Verfahren oder Verwendungen kann dem Vorgang des Entfernens des peripheren Blutes aus dem Spender entsprechen, wobei die Zahl der Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, durch die Verabreichung des Wachstumshormons oder eines seiner Derivate allein oder in Kombination mit anderen Faktoren erhöht wurde.
Eine Menge, die ausreichend ist, um die Zahl der zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhöhen, eine Menge, die ausreichend ist, um die Mobilisierung oder Peripherisierung von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhöhen oder eine Menge, die ausreichend ist, um die Mobilisierung der Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in vivo in das periphere Blut zu erhöhen, kann in einer oder mehreren Dosen während eines oder mehrere Tage verabreicht werden.
Der Vorgang des Entfernens des peripheren Blutes aus dem Spender kann mit Leukapherese übereinstimmen. Leukapherese ist ein Verfahren, in welchem Leukocyten aus dem entnommenen Blut entfernt und der Rest des Blutes in den Spender zurücktransfundiert wird.
Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, und in der isolierten Population von Blutzellen vorhanden sind, können weiter gereinigt werden, um die Konzentration der Zellen zu erhöhen. Die Reinigung kann durch positive Selektion von CD34-positiven Zellen erreicht werden.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch ein Verfahren zur Herstellung eines Spenders zirkulierender Zellen, wobei die Zellen der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, umfassend die Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, an den Spender in einer Menge, die ausreichend ist, um die Zahl der zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo in dem Spender wiederherzustellen, zu erhöhen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch ein Verfahren zur Erhöhung der Zahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo in einem Spender durch die Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, an den Spender wiederherzustellen.
Der Begriff „erhöht" oder „erhöhen" und der Begriff „angereichert" bedeutet allgemein im Kontext der Erfindung, dass der „erhöhte" oder „angereicherte" Parameter (Zahl) einen Wert hat, der oberhalb des Standardwertes dieses Parameters ist. Der Standardwert des Parameters wird in einem Körper oder in einer Probe eines Körpers gemessen, welcher kein mobilisierendes Mittel von Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, erhalten hat. Der Standardwert der Zahl von CD34⁺-Zellen pro Mikroliter Blut ist zum Beispiel 3,8 (+ oder – 3,2) Zellen pro Mikroliter peripheren Blutes (Anderlini et al., 1997).
Die zirkulierenden Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, sind CD34⁺-Zellen.
Die Häufigkeit von CD34⁺-Zellen im Blut kann durch FACScan-Messungen gemessen werden (Siena et al., 1989 & 1991).
Die erhöhte Anzahl von CD34⁺-Zellen im peripheren Blut des Spenders oder die Höhe der Anreicherung von CD34⁺-Zellen in der isolierten Präparation von Blutzellen kann mehr als 10, 25, 34 oder 80 CD34⁺-Zellen pro Mikroliter peripheren Blutes betragen.
Die erhöhte Anzahl von CD34⁺-Zellen im peripheren Blut des Spenders oder die Höhe der Anreicherung von CD34⁺-Zellen in der isolierten Präparation von Blutzellen kann mindestens 2 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers oder mindestens 4 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers oder mindestens 8 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers betragen.
Die erhöhte Anzahl von CD34⁺-Zellen im peripheren Blut des Spenders oder die Höhe der Anreicherung von CD34⁺-Zellen in der isolierten Präparation von Blutzellen kann mindestens 2 × 10⁶, 4 × 10⁶, 5 × 10⁶, 6 × 10⁶, 8 × 10⁶ oder 15 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Spenders betragen.
Es gibt eine Korrelation zwischen der Anzahl von CD34⁺-Zellen, die für eine Transplantation benötigt wird, und der entsprechenden GM-CFC-Aktivität, die gemessen werden kann (Weaver et al., 1998). Daher kann die erhöhte Zahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder die Höhe der Anreicherung der Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in der isolierten Präparation von Blutzellen mindestens 1 × 10⁵ GM-CFC pro Kilogramm Körpergewicht des Spenders oder des Empfängers entsprechen.
Die Zahl der CD34⁺-Zellen im Blut korreliert gut mit CFU-GM (Siena et al., 1991). CFU-GM ist die Granulocyten-Makrophagen koloniebildende Einheit. Daher kann die erhöhte Zahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder die Höhe der Anreicherung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in der isolierten Präparation von Blutzellen mindestens 500 CFU-GM pro Milliliter peripheren Blutes entsprechen.
Aus derselben Überlegung heraus kann die erhöhte Zahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder die Höhe der Anreicherung der Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in der isolierten Präparation von Blutzellen einem erhöhten Spiegel an CFU-C, CFU-Meg oder BFU-E entsprechen. CFU-C ist die koloniebildende Einheit, Kultur, CFU-Meg ist die koloniebildende Einheit, Megakaryocyten, und BFU-E ist die Burst-bildende Einheit, erythroide.
Die Zahl der CD34⁺-Zellen im Blut korreliert gut mit der Zahl der weißen Blutzellen. Daher kann die erhöhte Zahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder die Höhe der Anreicherung der Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in der isolierten Präparation von Blutzellen mindestens 1000 weißen Blutzellen pro Mikroliter peripheren Blutes entsprechen.
Die zirkulierenden CD34⁺-Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, können CD34⁺/CD33⁺-Zellen und/oder CD34⁺/CD38^–-Zellen und/oder CD34⁺/Thy-I-Zellen und/oder CD34⁺/Thy-I/CD38^–-Zellen und/oder CD33⁺-Zellen und/oder Knochenmarksstammzellen und/oder Vorläuferzellen und/oder Langzeitkultur-initiierende Zellen (LTC-IC) und/oder Zellen, die das Selbsterneuerungspotenzial erfüllen, und/oder Zellen, die pluripotente Charakteristika erfüllen, und/oder Zellen, die eine Langzeit-Knochenmarkkultur initiieren, und/oder Zellen, die multiple Zellstammbäume erzeugen können, sein. Zelllstammbäume können voll differenzierte Blutzellen sein.
Die CD34⁺/CD38^–-Zellen und die CD34⁺/Thy-I-Zellen und die CD34⁺/Thy-I/CD38^–-Zellen werden zum Beispiel bei Anderlini et al. (vgl. Literaturverzeichnis) beschrieben. Die CD34⁺/CD33⁺-Zellen und die CD33⁺-Zellen werden zum Beispiel bei Siena et al., 1991 (vgl. Literaturverzeichnis) beschrieben. Die Langzeitkultur-initiierenden Zellen (LTC-IC) werden zum Beispiel bei Heather et al. (vgl. Literaturverzeichnis) beschrieben. Die Zellen, die das Selbsterneuerungspotenzial erfüllen, und/oder Zellen, die pluripotente Charakteristika erfüllen, und/oder Zellen, die eine Langzeit-Knochenmarkkultur initiieren, werden zum Beispiel bei Anderlini et al. (vgl. Literaturverzeichnis) beschrieben.
Die Erfindung betrifft speziell die Verwendung von menschlichem Wachstumshormon oder einem seiner Derivate, um ein Arzneimittel herzustellen, welches in einem Patienten die Anzahl von zirkulierenden CD34⁺-Zellen erhöht, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, wobei die Zellen dazu verwendet werden sollen, denselben Patienten durch Reinfusion, Transplantation oder Verpflanzung im Anschluss an myeloablative oder antiblastische Therapien zur Wiederherstellung der hämopoetischen Systeme und der Immunsysteme zu behandeln.
In einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung die Verwendung von menschlichem Wachstumshormon oder eines seiner Derivate zur Steigerung in einem gesunden Spender der Anzahl von zur Verfügung stehenden zirkulierenden CD34⁺-Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, und die vorgesehen sind für Leukapherese und Reinfusion, Transplantation oder Verpflanzung in einen Empfänger, der solche Zellen benötigt.
Die folgenden Verwendungen werden ebenfalls hier beschrieben:

– Die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate zur Erhöhung oder Vermehrung der Anzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen.
– Die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate zur Peripherisierung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen.
– Die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate zur Herstellung eines Arzneimittels oder einer Zusammensetzung zur Erhöhung oder Vermehrung der Zahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen.
– Die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate zur Herstellung eines Arzneimittels oder einer Zusammensetzung zur Peripherisierung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen.
– Eine Verwendung gemäß einer der vorstehenden Verwendungen, wobei die zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, CD34⁺-Zellen sind.
– Eine Verwendung gemäß der vorstehenden Verwendung, wobei die erhöhte Anzahl von CD34⁺-Zellen mehr als 10, 25, 34 oder 80 CD34⁺-Zellen pro Mikroliter peripheren Blutes ist.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die erhöhte Anzahl von CD34⁺-Zellen mindestens 2 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers oder mindestens 4 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers oder mindestens 8 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers ist.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die erhöhte Anzahl von CD34⁺-Zellen mindestens 2 × 10⁶, 4 × 10⁶, 5 × 10⁶, 6 × 10⁶, 8 × 10⁶ oder 15 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm Körpergewicht des Spenders ist.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die erhöhte Anzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, mindestens 1 × 10⁵ GM-CFC pro Kilogramm des Körpergewichts des Spenders oder des Empfängers entspricht.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die erhöhte Anzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, mindestens 500 CFU-GM pro Milliliter peripheren Blutes entspricht.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die erhöhte Anzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, einem erhöhten Spiegel von CFU-C, CFU-Meg oder BFU-E entspricht.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die erhöhte Anzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, im Wesentlichen der Zellzahl weißer Blutzellen entspricht, welche mindestens 1000 Zellen pro Mikroliter peripheren Blutes beträgt.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die zirkulierenden CD34⁺-Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, CD34⁺/CD33⁺-Zellen und/oder CD34⁺/CD38^–-Zellen und/oder CD34⁺/Thy-I-Zellen und/oder CD34⁺/Thy-I/CD38^–-Zellen und/oder CD33⁺-Zellen und/oder Stammzellen und/oder Vorläuferzellen und/oder Langzeitkultur-initiierende Zellen (LTC-IC) und/oder Zellen, welche das Selbsterneuerungspotenzial erfüllen, und/oder Zellen, welche pluripotente Charakteristika erfüllen, und/oder Zellen, welche eine Langzeit-Knochenmarkkultur initiieren, sind.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Arzneimittel oder die Zusammensetzung weiterhin eine oder mehrere Verbindungen, ausgewählt aus den folgenden Gruppen von Verbindungen umfasst: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine, monoclonale Antikörper.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Gruppe der Cytokine IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF oder SCF, die Gruppe der Chemokine MIP-1α oder Thrombopoietin (TPO) und die Gruppe der monoklonalen Antikörper anti-VLA-4-Antikörper umfasst.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Arzneimittel oder die Zusammensetzung Wachstumshormon und G-CSF umfasst.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei GH und G-CSF separat und/oder gleichzeitig verabreicht werden sollen.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei Wachstumshormon in einer Menge um etwa 33 μg pro Kilogramm Körpergewicht verabreicht werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei G-CSF in einer Menge um etwa 5 μg oder um etwa 10 μg pro Kilogramm verabreicht werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der beiden vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung auf intravenösem oder subcutanem Weg erfolgen soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung auf parenteralen, subcutanen, intravenösen, intramuskulären, intraperitonealen, transdermalen oder buccalen Wegen erfolgen soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung täglich oder dreimal täglich durchgeführt wird.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung von Wachstumshormon dreimal täglich und die Verabreichung von G-CSF täglich durchgeführt werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung über einen Zeitraum von 5 Tagen oder über einen Zeitraum von 10 Tagen bis zur Leukapherese oder bis zur vollständigen Erholung durchgeführt werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung bis zur Leukapherese oder bis zur vollständigen Erholung durchgeführt werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Wachstumshormon ein rekombinantes Wachstumshormon ist.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Wachstumshormon ein menschliches Wachstumshormon ist.

a) die Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, an einen Spender in einer Menge, die ausreichend ist, um das Blutvolumen zu verringern, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten,
b) die Aufarbeitung oder die Isolierung des verringerten Blutvolumens und optional
c) die Isolierung einer Population von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem isolierten Volumen.

Schritt b) oder c) {Isolierung einer Population von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, aus dem isolierten Volumen} der hier beschriebenen Verfahren oder Verwendungen kann dem Vorgang des Entfernens des peripheren Blutes aus dem Spender entsprechen, wobei die Zahl der Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, durch die Verabreichung des Wachstumshormons oder eines seiner Derivate allein oder in Kombination mit anderen Faktoren erhöht wurde.
Eine Menge, die zur Verringerung des Blutvolumens notwendig ist, welches aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen zu enthalten, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, kann in einer oder mehreren Dosen während eines oder mehrerer Tage verabreicht werden.
Der Vorgang des Entfernens des peripheren Blutes aus dem Spender kann mit Leukapherese übereinstimmen. Leukapherese ist ein Verfahren, in welchem Leukocyten aus dem entnommenen Blut entfernt und der Rest des Blutes in den Spender zurücktransfundiert wird.
Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, die in der isolierten Population von Blutzellen vorhanden sind, können weiter gereinigt werden, um die Konzentration der Zellen zu erhöhen. Die Reinigung kann durch positive Selektion von CD34-positiven Zellen erreicht werden.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch ein Verfahren zur Herstellung eines Spenders für zirkulierende Zellen, wobei die Zellen der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, umfassend die Verabreichung einer Zusammensetzung an den Spender, welche Wachstumshormon oder eines seiner Derivate umfasst, in einer Menge, die ausreichend ist, um das zur Aufarbeitung benötigte Blutvolumen zu verringern, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten und/oder um die Zahl der Leukapheresen zu verringern, welche notwendig ist, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zur Transplantation zu sammeln.
Eine Menge, die ausreichend ist, um das zur Aufarbeitung benötigte Blutvolumen zu verringern, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten und/oder um die Zahl der Leukapheresen zu verringern, welche notwendig ist, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zur Transplantation zu sammeln, kann in einer oder mehreren Dosen während eines oder mehrerer Tage verabreicht werden.
Das zur Aufarbeitung benötigte Blutvolumen kann das Blutvolumen sein, das während des Apherese- oder des Leukapherese-Verfahrens aufgearbeitet werden muss.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch ein Verfahren zur Verringerung des Blutvolumens, das aufarbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo in einem Spender wiederherzustellen, zu erhalten, und/oder um zur Verringerung der Zahl der Leukapheresen, welche notwendig ist, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zur Transplantation zu sammeln, durch Verabreichung einer Zusammensetzung, umfassend das Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, an den Spender.
Der Begriff „verringert" bedeutet allgemein hinsichtlich der Erfindung, dass der „verringerte" Parameter" (Volumen) einen Wert hat, der unter dem des Standardwertes dieses Parameters liegt.
Die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, ist mindestens 2 × 10⁴ LTC-IC pro kg des Körpergewichts von Spender oder Empfänger, etwa oder mehr als 2 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm des Körpergewichts von Spender oder Empfänger, etwa oder mehr als 4 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm des Körpergewichts von Spender oder Empfänger oder etwa oder mehr als 8 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm des Körpergewichts von Spender oder Empfänger.
Des benötigte Blutvolumen kann in einem Bereich von etwa 30 bis etwa 900 Milliliter enthalten sein.
Die folgenden Verwendungen werden ebenfalls hier beschrieben:

– Die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate zur Verringerung des Blutvolumens, welches aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten.
– Die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate zur Herstellung eines Arzneimittels oder einer Zusammensetzung zur Verringerung des Blutvolumens, welches aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten.
– Eine Verwendung gemäß der vorstehenden Verwendung, wobei die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, etwa oder mehr als 2 × 10⁴ LTC-IC pro kg des Körpergewichts von Spender oder Empfänger, etwa oder mehr als 2 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm des Körpergewichts von Spender oder Empfänger, etwa oder mehr als 4 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm des Körpergewichts von Spender oder Empfänger oder etwa oder mehr als 8 × 10⁶ CD34⁺-Zellen pro Kilogramm des Körpergewichts von Spender oder Empfänger beträgt.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der beiden vorstehenden Verwendungen, wobei das benötigte Blutvolumen in einem Bereich von etwa 30 bis etwa 900 Milliliter enthalten ist.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Arzneimittel oder die Zusammensetzung weiterhin eine oder mehrere Verbindungen, ausgewählt aus den folgenden Gruppen von Verbindungen, umfasst: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine, monoclonale Antikörper.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Gruppe der Cytokine IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF oder SCF, die Gruppe der Chemokine MIP-1α oder Thrombopoietin (TPO) und die Gruppe der monoclonalen Antikörper anti-VLA-4-Antikörper umfasst.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Arzneimittel oder die Zusammensetzung Wachstumshormon und G-CSF umfasst.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei GH und G-CSF separat und/oder gleichzeitig verabreicht werden sollen.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei Wachstumshormon, in einer Menge von etwa 33 μg pro Kilogramm Körpergewicht verabreicht werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der beiden vorstehenden Verwendungen, wobei G-CSF in einer Menge von etwa 5 μg oder etwa 10 μg pro Kilogramm verabreicht werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der beiden vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung auf intravenösem oder subcutanem Weg erfolgen soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung auf parenteralen, subcutanen, intravenösen, intramuskulären, intraperitonealen, transdermalen oder buccalen Wegen erfolgen soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung täglich oder dreimal täglich ist.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung von Wachstumshormon dreimal täglich und die Verabreichung von G-CSF täglich durchgeführt werden sollen.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung über einen Zeitraum von 5 Tagen oder über einen Zeitraum von 10 Tagen bis zur Leukapherese oder bis zur vollständigen Erholung durchgeführt werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung bis zur Leukapherese oder bis zur vollständigen Erholung durchgeführt werden soll.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung/en nach der Chemotherapie, Strahlentherapie, myelosuppressiven Therapie, der Transplantation von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder der Transplantation von Knochenmark durchgeführt werden soll/en.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei die Verabreichung/en etwa 7 Tage nach dem Beginn der chemotherapeutischen Behandlung oder etwa 2 Tage nach dem Ende der chemotherapeutischen Behandlung beginnt/en.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Wachstumshormon rekombinantes Wachstumshormon ist.
– Eine Verwendung gemäß einer beliebigen der vorstehenden Verwendungen, wobei das Wachstumshormon menschliches Wachstumshormon ist.

In dieser Anmeldung:

– kann der Begriff „zirkulierend" durch den Begriff „Blut" oder „peripheres Blut" ersetzt werden.
– kann der Begriff „Aufbereitung" im Ausdruck „Verfahren der Aufbereitung" durch „Vorbehandlung" oder durch „Aufbereitung für Blutextraktion oder Leukapherese" ersetzt werden.
– kann ein „Spender", wie er in den erfindungsgemäßen Verfahren oder Verwendungen erwähnt wird, kann ein Mensch oder ein Tier, ein gesundes oder krankes Individuum (Patient) sein. Das Tier ist vorzugsweise ein Säuger und kann aus Haustieren wie Hunden, Katzen etc. oder Tieren wie Pferde, Rindvieh, Schafen ausgewählt werden.
– Der Begriff „Hämopoese" kann die Bildung der Blutzellen bedeuten.
– Der Begriff „Wachstumshormon" umfasst menschliches Wachstumshormon (hGH) und all die zu menschlichem Wachstumshormon von verschiedenen Arten homologen Proteine und all die zu menschlichem Wachstumshormon von nicht-menschlichen Arten homologen Proteine. Die nicht-menschlichen Arten können zum Beispiel eine beliebige Art von Haustieren oder Pferde sein.

In einer bevorzugten Ausführungsform ist das Wachstumshormon menschliches Wachstumshormon. Menschliches Wachstumshormon (hGH), auch bekannt als Somatotropin, ist ein Proteinhormon, das von somatotropen Zellen des Hypophysenvorderlappens produziert und sekretiert wird. hGH spielt durch seine Wirkungen auf den Metabolismus von Proteinen, Kohlenhydraten und Fetten eine Schlüsselrolle im somatischen Wachstum.
Menschliches Wachstumshormon ist eine einzelne Polypeptidkette von 101 Aminosäuren mit zwei Disulfidbindungen, einer zwischen Cys-53 und Cys-165, welche eine große Schleife im Molekül bildet, und die andere zwischen Cys-182 und Cys-189, welche eine kleine Schleife in der Nähe des C-Terminus bildet.
Der Begriff „Derivat" im Ausdruck „Derivate von Wachstumshormon" bezeichnet im Kontext der Erfindung Moleküle, welche sich strukturell von GH unterscheiden, welche jedoch die Funktion von GH hinsichtlich seiner direkten oder indirekten Wirkung auf den Metabolismus von Proteinen, Kohlenhydraten und Lipiden und/oder seiner mobilisierenden Wirkung und/oder wiederherstellenden Wirkung erhalten (d. h. «Mobilisierung oder Peripherisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Erhöhung der Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Verringerung der Anzahl von Leukapheresen, die notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln, Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten»).
Derivate des in der Erfindung eingeschlossenen menschlichen Wachstumshormons (hGH) umfassen natürlich vorkommende Derivate, Varianten und metabolische Produkte, Abbauprodukte primär von biosynthetischem hGH und manipulierte Derivate von hGH, die mit genetischen Verfahren hergestellt wurden. Ein beliebiges Derivat von hGH kann für den Zweck der vorliegende Erfindung verwendet werden, solange es die biologische Aktivität von hGH hinsichtlich der Erfindung behält.
Beispiele von Derivaten sind Spleißvarianten, Oligomere, Aggregate, proteolytische Spaltprodukte, Varianten mit Substitutionen, Insertionen oder Deletionen von einer oder mehreren Aminosäuren etc.
Methionyl-hGH ist ein Beispiel für ein Derivat von hGH, welches durch rekombinante DNA-Technologie hergestellt wird. Diese Verbindung ist tatsächlich ein Derivat von hGH mit einem zusätzlichem Methioninrest an seinem N-Terminus (Goeddel et al., 1979).
Ein anderes Beispiel von Derivaten von hGH ist eine natürlich vorkommende Variante von hGH, genannt 20-K-hGH, von welcher berichtet wurde, dass sie in der Hypophyse sowie im Blutstrom vorkommt (Lewis et al., 1978, Lewis et al., 1980). Diese Verbindung, welcher 15 Aminosäurereste von Glu-32 bis Gln-46 fehlt, entsteht aus dem alternativen Spleißen von Boten-Ribonucleinsäure (DeNoto et al., 1981).
Ein anderes Beispiel von Derivaten von hGH ist am N-Terminus acetyliert (Lewis et al., 1979).
Menschliches Wachstumshormon kann weiterhin in einer monomeren, dimeren oder oligomeren Form mit höherem Molekulargewicht oder in einem Gemisch dieser Formen vorliegen.
Menschliches Wachstumshormon kann in aggregierten Formen vorliegen, welche sowohl in der Hypophyse als auch in der Zirkulation gefunden werden (Stolar et al., 1984, Stolar und Baumann, 1986).
Die dimere Form von hGH kann von unterschiedlichen Typen sein:

– ein Disulfiddimer, verbunden durch Disulfidbindungen zwischen den Ketten (Lewis et al., 1977),
– ein kovalentes oder irreversibles Dimer, welches auf Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamidgelen nachgewiesen wird und welches nicht ein Disulfiddimer ist (Bewley und Li, 1975) und
– ein nicht kovalentes Dimer, welches durch Behandlung mit Mitteln, welche die hydrophoben Wechselwirkungen in Proteinen zerstören, leicht in monomeres hGH dissoziierbar ist (Becker et al., 1987),
– ein dimerer Komplex mit Zn²⁺ (Cunninham et al., 1991).

Eine Scatchard-Analyse zeigte, dass zwei Zn⁺-Ionen pro hGH-Dimer in einer kooperativen Art und Weise assoziieren und für diesen dimeren Zn²⁺-hGH-Komplex wurde gefunden, dass er gegenüber Denaturierung stabiler ist als monomeres hGH (Cunningham et al., 1991).
Eine Anzahl von hGH-Derivaten entsteht aus proteolytischen Modifikationen des Moleküls. Der primäre Metabolismusweg von hGH beinhaltet Proteolyse. Die hGH-Region um die Reste 130–150 herum ist extrem anfällig für Proteolyse und einige Derivate von hGH mit Nicks oder Deletionen in dieser Region wurden beschrieben (Thorlacius-Ussing, 1987). Diese Region liegt in der großen Schleife von hGH und die Spaltung einer Peptidbindung dort führt zur Erzeugung von zwei Ketten, welche durch eine Disulfidbindung bei Cys-53 und Cys-165 verbunden sind. Von vielen dieser zweikettigen Formen wird berichtet, dass sie eine erhöhte biologische Aktivität aufweisen (Singh et al., 1974).
Viele Derivate des menschlichen Wachstumshormons wurden unter Verwendung von Enzymen künstlich hergestellt. Die Enzyme Trypsin und Subtilisin sowie andere wurden verwendet, um hGH an verschiedenen über das Molekül verteilten Punkten zu modifizieren (Lewis et al., 1977). Ein solches Derivat, genannt zweikettiges anaboles Protein (2-CAP), wurde durch kontrollierte Proteolyse von hGH unter Verwendung von Trypsin gebildet.
Ein anderes Beispiel eines Derivats von hGH ist desamidiertes hGH. Asparagin und Glutaminreste in Proteinen sind unter geeigneten Bedingungen für Desamidierungsreaktionen anfällig. Ein Beispiel für desamidiertes hGH ist Hypophysen-hGH, für welches gezeigt wurde, dass es diesen Reaktionstyp durchläuft, was zur Umwandlung von Asn-152 in Asparaginsäure und auch zu einem geringeren Umfang zur Umwandlung von Gln-137 in Glutaminsäure führt (Lewis et al., 1981). Ein anderes Beispiel für desamidiertes hGH ist biosynthetisches hGH, welches dafür bekannt ist, unter bestimmten Lagerungsbedingungen zu degradieren, was zu einer Desamidierung an einem anderen Asparagin (Asn-149) führt. Dies ist die primäre Desamidierungsstelle, die Desamidierung an Asn-152 wird jedoch ebenfalls beobachtet (Becker et al., 1988). Die Desamidierung bei Gln-137 wurde bei biosynthetischem hGH nicht berichtet.
Ein anderes Beispiel eines Derivats von hGH ist Sulfoxid-hGH. Methioninreste in Proteinen sind empfindlich für Oxidation, primär für Sulfoxid. Sowohl hGH aus der Hypophyse als auch biosynthetisches hGH erfahren Sulfoxidierungen an Met-14 und Met-125 (Becker et al., 1988). Eine Oxidation an Met-170 in der Hypophyse wurde ebenfalls berichtet, nicht jedoch bei biosynthetischem hGH.
Ein anderes Beispiel für Derivate von hGH sind verkürzte Formen von hGH, welche entweder durch die Wirkung von Enzymen oder durch genetische Verfahren hergestellt wurden. Bei 2-CAP, das durch die kontrollierte Wirkung von Trypsin erzeugt wurde, sind die ersten acht Reste am N-Terminus von hGH entfernt. Andere verkürzte Versionen von hGH wurden durch Modifizierung des Gens vor der Expression in einem geeigneten Wirt produziert. Die ersten 13 Reste wurden entfernt, um ein Derivat mit bestimmten biologischen Eigenschaften zu erhalten, in welchem die Polypeptidkette nicht gespalten ist (Gertler et al., 1986).
hGH und seine Derivate können durch rekombinante DNA-Technologie hergestellt werden, welche die Produktion eines unbegrenzten Vorrats von hGH oder seiner Derivate in einer Anzahl verschiedener Systeme erlaubt. Die Reinigung von hGH oder seiner Derivate aus dem Kulturmedium wird durch das Vorhandensein niedriger Mengen kontaminierender Proteine erleichtert. In der Tat wurde gezeigt, dass hGH im Labormaßstab durch einen einzelnen Reinigungsschritt auf einer Umkehrphasen-HPLC-Säule gereinigt werden kann.
Rekombinantes hGH wird im Allgemeinen als Ampullen, enthaltend hGH plus zusätzliche Excipienten, z. B. Glycin und Mannit, in einer lyophylisierten Form auf den Markt gebracht. Eine dazugehörige Verdünnungsampulle wird bereitgestellt, welche es dem Patienten erlaubt, das Produkt vor der Verabreichung der Dosis zur gewünschten Konzentration zu rekonstituieren.
Im Allgemeinen wurden keine signifikanten Unterschiede in der Pharmakokinetik oder bei den biologischen Aktivitäten von rekombinantem hGH mit natürlicher Sequenz, des rekombinanten N-Methionyl-hGH oder des Materials aus der Hypophyse im Menschen beobachtet (Moore et al., 1988, Jorgensen et al., 1988).
Das menschliche Wachstumshormon, wie es in der vorliegenden Erfindung verwendet wird, kann funktionelle Derivate, wie vorstehend erwähnt, umfassen, sowie andere Typen von Derivaten, Fragmenten, Varianten, Analogen oder chemischen Derivaten. Ein funktionelles Derivat behält mindestens einen Teil der Aminosäuresequenz von hGH bei, welches seine Nützlichkeit in Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung ermöglicht, nämlich zum Beispiel die Mobilisierung zirkulierender Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen.
In der Bedeutung der Erfindung kann ein „Derivat" sein:

– Ein „Fragment" des menschlichen Wachstumshormons gemäß der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf eine beliebige Untereinheit des Moleküls, das heißt ein kürzeres Peptid.
– Eine „Variante" des menschlichen Wachstumshormons gemäß der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein Molekül, welches im Wesentlichen ähnlich entweder zum gesamten Peptid oder einem Fragment davon ist. Abweichende Peptide können konventionell durch direkte chemische Synthese des abweichenden Peptids unter Verwendung von im Fachgebiet wohlbekannter Verfahren hergestellt werden.

Alternativ können Aminosäurenvarianten von hGH durch Mutationen in der cDNA, welche die synthetisierten hGH-Derivate codieren, hergestellt werden. Solche Varianten umfassen Deletionen, Insertionen oder Substitutionen von Resten innerhalb der Aminosäuresequenz. Eine beliebige Kombination von Deletionen, Insertionen und Substitutionen kann ebenfalls hergestellt werden, vorausgesetzt, das endgültige Konstrukt besitzt die gewünschte Aktivität.
Auf genetischer Ebene werden diese Varianten üblicherweise durch ortspezifische Mutagenese (wie beispielhaft bei (Adelman et al., 1983) beschrieben) von Nucleotiden in der DNA, codierend das Peptidmolekül, wodurch eine die Variante codierende DNA erzeugt wird, und die anschließende Expression der DNA in rekombinanter Zellkultur hergestellt. Die Varianten zeigen typischerweise dieselbe biologische Aktivität wie das nicht abweichende Peptid.

– Ein „Analoges" des erfindungsgemäßen menschlichen Wachstumshormons bezieht sich auf ein nicht natürliches Molekül, welches im Wesentlichen entweder dem gesamten Molekül oder einem aktiven Fragment davon ähnlich ist.
– Ein „chemisches Derivat" des erfindungsgemäßen menschlichen Wachstumshormons enthält zusätzliche chemische Reste, welche normalerweise nicht Teil der Aminosäuresequenz des Derivats des menschlichen Wachstumshormons sind. Kovalente Modifikationen der Aminosäuresequenz sind im Umfang der Erfindung eingeschlossen. Solche Modifizierungen können in das menschliche Wachstumshormon durch Umsetzung gezielter Aminosäurereste des Peptids mit einem organischen derivatisierenden Mittel, welches in der Lage ist, mit ausgewählten Seitenketten oder endständigen Resten zu reagieren, eingeführt werden.

Die Substitutionstypen, welche im erfindungsgemäßen menschlichen Wachstumshormon durchgeführt werden können, können auf der Analyse der Häufigkeiten von Aminosäureveränderungen zwischen einem homologen Protein verschiedener Arten basieren. Basierend auf solchen Analysen können konservative Substitutionen hier als Austausche innerhalb einer der folgenden fünf Gruppen definiert werden:

I: Kleine, aliphatische, unpolare oder leicht polare Reste: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly
II: Polare, negativ geladene Reste und ihre Amide: Asp, Asn, Glu, Gln
III: Polare, positiv geladene Reste: His, Arg, Lys
IV: Große, aliphatische, nicht polare Reste: Met, Leu, Ile, Val, Cys
V: Große, aromatische Reste: Phe, Try, Trp

Innerhalb der vorangehenden Gruppen werden die nachfolgenden Substitutionen als „hochkonservativ" angesehen:

– Asp/Glu
– His/Arg/Lys
– Phe/Tyr/Trp
– Met/Leu/Ile/Val

Semikonservative Substitutionen werden als Austausche zwischen zwei der vorstehenden Gruppen (I)–(IV) definiert, welche auf die Übergruppe (A), umfassend die vorstehenden Gruppen (I), (II) und (III), oder auf die Übergruppe (B), umfassend die vorstehenden Gruppen (IV) und (V), beschränkt sind. Substitutionen sind nicht auf die genetisch codierten oder sogar auf die natürlich vorkommenden Aminosäuren eingeschränkt. Wenn das Epitop durch Peptidsynthese hergestellt wird, kann die gewünschte Aminosäure direkt verwendet werden.
Alternativ kann eine genetisch codierte Aminosäure durch Umsetzung mit einem organischen derivatisierenden Mittel modifiziert werden, welches in der Lage ist, mit den ausgewählten Seitenketten oder endständigen Resten zu reagieren.
Cysteinylreste werden am häufigsten mit alpha-Haloacetaten (und entsprechenden Aminen) wie Chloressigsäure oder Chloracetamid umgesetzt, um Carboxymethyl- oder Carboxyamidomethylderivate zu erhalten. Cysteinylreste werden auch durch Umsetzung mit Bromtrifluoraceton, alpha-Brom-beta-(5-imidazoyl)propionsäure, Chloracetylphosphat, N-Alkylmaleimide, 3-Nitro-2-pyridyldisulfid, Methyl-2-pyridyldisulfid, p-Chlorquecksilberbenzoat, 2-Chlorquecksilber-4-nitrophenol oder Chlor-7-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol derivatisiert.
Histidylreste werden durch Umsetzung mit Diethylprocarbonat bei pH 5,5–7,0 derivatisiert, weil dieses Mittel relativ spezifisch für die Histidylseitenkette ist. Parabromphenacylbromid ist ebenfalls nützlich, die Reaktion wird vorzugsweise in 0,1 M Natriumcacodylat bei pH 6,0 durchgeführt.
Lysinyl- und aminoterminale Reste werden mit Bernsteinsäure- oder anderen Carbonsäureanhydriden umgesetzt. Die Derivatisierung mit diesen Mitteln bewirkt die Ladungsumkehr der Lysinylreste. Andere geeignete Reagenzien zur Derivatisierung von alpha-Aminosäure enthaltenden Resten umfassen Imidoester wie Methylpicolinimidat, Pyridoxalphosphat, Pyridoxal, Chlorborhydrid, Trinitrobenzolsulfonsäure, O-Methylisoharnstoff, 2,4-Pentandion und die durch Transaminase katalysierte Umsetzung mit Glyoxylat.
Arginylreste werden durch Umsetzung mit einem oder mehreren konventionellen Reagenzien, darunter Phenylglyoxal, 2,3-Butandion und Ninhydrin modifiziert. Die Derivatisierung der Argininreste erfordert es, dass die Reaktion wegen des hohen pKa der funktionellen Guanidingruppe unter alkalischen Bedingungen durchgeführt wird. Weiterhin können diese Reagenzien mit den Gruppen von Lysin reagieren, sowie mit der Epsilon-Aminogruppe von Arginin.
Die spezifische Modifizierung der Tyrosylreste an sich wurde umfangreich untersucht, mit besonderem Augenmerk auf die Einführung spektraler Markierungen in die Tyrosylreste durch Umsetzung mit aromatischen Diazoniumverbindungen oder Tetranitromethan. Üblicherweise werden N-Acetylimidazol und Tetranitromethan verwendet, um O-Acetyl-Tyrosyl-Arten beziehungsweise E-Nitroderivate zu bilden.
Carboxyl-Seitengruppen (Aspartyl oder Glutamyl) werden selektiv durch Umsetzung mit Carbodiimiden (R'N-C-N-R') wie 1-Cyclohexyl-3-[2-morpholinyl-(4-ethyl)]carbodiimid oder 1-Ethyl-3-(4-azonia-4,4-dimethylpentyl)carbodiimid modifiziert. Weiterhin werden Aspartyl- und Glutamylreste durch Umsetzung mit Ammoniumionen in Asparaginyl- und Glutaminylreste umgewandelt.
Glutaminyl- oder Asparaginylreste werden häufig zu den entsprechenden Glutamyl- und Aspartylresten desamidiert. Alternativ werden diese Reste unter mild sauren Bedingungen desamidiert. Jede Form dieser Reste fällt in den Umfang dieser Erfindung.
Während die vorliegende Erfindung mit rekombinanten menschlichen Wachstumshormon-Derivaten, welche mit rekombinanter DNA-Technologie zum Beispiel in prokaryontischen oder eukaryontischen Zellen hergestellt werden, ausgeführt werden kann, können diese Derivate auch mit konventionellen Proteinsyntheseverfahren, welche dem Fachmann wohlbekannt sind, hergestellt werden.
Wachstumshormon kann ein Protein oder ein Peptid sein.
Wachstumshormon kann vorzugsweise rekombinantes Wachstumshormon sein.
Die Bestimmung der Mengen des Wachstumshormons oder eines seiner Derivate, welche in einer vorstehend beschriebenen erfindungsgemäßen Verwendung verabreicht werden sollen, ist Stand der Technik.
Eine typische Dosierung des Wachstumshormons oder eines seiner Derivate beginnt bei etwa 1 Mikrogramm pro Kilogramm des Gewichts des Patienten pro Tag und die Dosis wird gesteigert, bis die gewünschte Wirkung (Mobilisierung oder Peripherisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Erhöhung die Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Verringerung der Anzahl von Leukapheresen, die notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln, Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten) erreicht ist.
Die Dosierung des Wachstumshormons oder eines seiner Derivate, welche verabreicht werden soll, hängt vom Alter, dem Geschlecht, der Gesundheit und dem Gewicht des Spenders, dem Typ der vorangegangenen oder laufenden Behandlung, falls zutreffend, der Häufigkeit der Behandlung und der Art der gewünschten Wirkung ab.
Wachstumshormon oder eines seiner Derivate kann vorteilhaft in einer Menge verabreicht werden, die zwischen 20 und 50 μg pro Kilogramm Körpergewicht und genauer zwischen 30 und 40 μg pro Kilogramm Körpergewicht liegt.
Eine bevorzugte Dosierung des zu verabreichenden Wachstumshormons oder eines seiner Derivate liegt bei etwa 33 μg pro Kilogramm Körpergewicht. Wachstumshormon oder seine Derivate können allein oder in Verbindung oder in Assoziation mit anderen Faktoren verabreicht werden.
Wachstumshormon oder seine Derivate können vorteilhaft in einer Zusammensetzung enthalten sein, welche weiterhin eine oder mehrere Verbindungen umfasst, welche aus den Verbindungen ausgewählt sind, die zu folgenden Gruppen gehören: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine, monoclonale Antikörper.
Wachstumshormon oder seine Derivate und eine oder mehrere Verbindungen, ausgewählt aus den Verbindungen, die zu folgenden Gruppen gehören: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine, monoclonale Antikörper, können gleichzeitig oder zu verschiedenen Zeiten und/oder an derselben Stelle oder an einer anderen Stelle/anderen Stellen und/oder in derselben/demselben oder in einer/einem anderen Zusammensetzung oder Arzneimittel verabreicht werden.
Die Gruppe der Cytokine kann IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF oder SCF umfassen.
Die Gruppe der Chemokine kann MIP-1α oder Thrombopoietin (TPO) umfassen. Die Gruppe der monoclonalen Antikörper kann anti-VLA-4-Antikörper umfassen.
Vorzugsweise ist Wachstumshormon oder seine Derivate in einer Zusammensetzung vorhanden, welche Granulocyten-Kolonie-stimulierenden Faktor (G-CSF) umfasst.
Vorzugsweise ist Wachstumshormon oder seine Derivate mit G-CSF assoziiert. Wachstumshormon oder seine Derivate und G-CSF können gleichzeitig oder zu verschiedenen Zeiten und/oder an der gleichen Stelle oder an einer anderen Stelle/anderen Stellen und/oder in derselben/demselben oder in einer/einem anderen Zusammensetzung oder Arzneimittel verabreicht werden.
Wachstumshormon oder seine Derivate und G-CSF können vorteilhaft separat verabreicht werden.
G-CSF kann vorteilhaft in einer Menge, die zwischen 3 und 15 μg pro Kilogramm Körpergewicht, genauer zwischen 4 und 12 μg pro Kilogramm Körpergewicht enthalten ist, verabreicht werden.
Eine bevorzugte zu verabreichende Dosis von G-CSF liegt bei etwa 5 μg oder etwa 10 μg pro Kilogramm Körpergewicht.
In einer bevorzugten Ausführungsform soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate in einer Menge, die zwischen 20 und 50 μg pro Kilogramm Körpergewicht, genauer zwischen 30 und 40 μg pro Kilogramm Körpergewicht liegt, verabreicht werden und G-CSF wird in einer Menge, die zwischen 3 und 15 μg pro Kilogramm Körpergewicht, genauer zwischen 4 und 12 μg pro Kilogramm Körpergewicht liegt, verabreicht.
In einer bevorzugten Ausführungsform soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate in einer Menge von 33 μg pro Kilogramm Körpergewicht verabreicht werden und G-CSF wird in einer Menge von etwa 5 μg oder etwa 10 μg pro Kilogramm Körpergewicht verabreicht.
Gemäß der Erfindung kann der Ausdruck «Verabreichung in einer Menge, die ausreichend ist, um die Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhöhen oder das Blutvolumen, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu verringern» eine oder mehrere Verabreichungen einmal oder mehrmals am Tag und während einer oder mehrerer Tage für eine kumulierte Menge, welche ausreichend ist, um die Anzahl der zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhöhen oder das Blutvolumen, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu verringern, bedeuten.
Die erfindungsgemäß verwendeten Arzneimittel oder Zusammensetzungen liegen in einer pharmazeutisch verträglicher Form vor, wahlweise kombiniert mit einem verträglichen Trägerstoff.
Diese Zusammensetzungen können durch ein beliebiges Mittel verabreicht werden, welches seinen beabsichtigten Zweck erreicht.
Die erfindungsgemäß verwendeten Zusammensetzungen können allein oder in Verbindung mit anderen Therapeutika, welche gegen eine Erkrankung oder gegen andere Symptome davon gerichtet sind, verabreicht werden.
Die Zusammensetzungen, welche gemäß der Erfindung verwendet werden, können auf dem intravenösem oder dem subcutanen Weg verabreicht werden.
Nach intravenöser Verabreichung wird die Eliminierung von hGH durch eine Kinetik erster Ordnung mit einer Halbwertszeit im Serum von 12–30 Minuten sowohl in Tieren als auch im Menschen beschrieben (Moore et al., 1988, Hendricks et al., 1985). Traditionell war die intramuskuläre Injektion das Verfahren der Wahl als bevorzugter Verabreichungsweg. Beim Menschen scheint die Absorption des exogenen hGH aus der intramuskulären Stelle mit einer Zeit bis zur maximalen Konzentration von zwei bis drei Stunden schneller zu sein verglichen mit vier bis sechs Stunden nach der subkutanen Verabreichung. Es wurde berichtet, dass die Phase des Verschwindens aus dem Serum für die intramuskuläre Verabreichung von 12–20 Stunden reicht und 20–24 Stunden nach subcutaner Verabreichung (Albertsson-Wikland et al., 1986, Jorgensen et al., 1987).
Die erfindungsgemäß verwendeten Zusammensetzungen können auf parenteralen Wegen verabreicht werden, wie subcutan, intravenös, intramuskulär, intraperitoneal, oder auf transdermalem Weg oder auf mukosalen Wegen wie der buccale oder orale Weg.
Die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann auf parenteralen Wegen verabreicht werden, wie subcutan, intravenös, intramuskulär, intraperitoneal, oder auf transdermalem Weg oder auf mukosalen Wegen wie der buccale oder orale Weg.
Vorzugsweise soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate subcutan verabreicht werden.
Die gesamte Dosis oder Menge, die für jede erfindungsgemäße Verwendung benötigt wird, kann in vielfachen oder einzelnen Dosen verabreicht werden.
Die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann täglich oder dreimal täglich verabreicht werden.
Vorzugsweise soll die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, dreimal täglich verabreicht werden.
Vorzugsweise soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate täglich oder dreimal täglich verabreicht werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate dreimal täglich verabreicht werden.
Wenn eine erfindungsgemäße Verwendung die Verabreichung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF umfasst, soll G-CSF vorzugsweise einmal täglich und/oder subcutan verabreicht werden.
Wenn eine erfindungsgemäße Verwendung die Verabreichung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF umfasst, soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate vorzugsweise dreimal täglich verabreicht werden und G-CSF soll vorzugsweise täglich verabreicht werden.
Die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann eine täglich Verabreichung sein, welche bis zu 20 Tage vor der Leukapherese beginnen kann.
Die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann über einen Zeitraum von 5 Tagen oder über einen Zeitraum von 10 Tagen verabreicht werden, bis zur Leukapherese oder bis die gewünschte Wirkung (Mobilisierung oder Peripherisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Erhöhung der Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Verringerung der Anzahl von Leukapheresen, die notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln, Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten) erreicht ist.
Vorzugsweise soll die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, bis zur Leukapherese und/oder bis zur gewünschten Wirkung erreicht ist, verabreicht werden (Mobilisierung oder Peripherisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Erhöhung der Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Verringerung der Anzahl von Leukapheresen, die notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln, Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten).
Erfindungsgemäße Verwendungen werden vorteilhaft nach Chemotherapie, Strahlentherapie, myelosuppressiver Therapie, Transplantation oder Verpflanzung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder Transplantation von Knochenmark durchgeführt.
Erfindungsgemäße Verwendungen werden vorteilhaft etwa 7 Tage nach dem Beginn einer chemotherapeutischen Behandlung oder etwa 2 Tage nach dem Ende einer chemotherapeutischen Behandlung durchgeführt.
In einer bevorzugten Ausführungsform sollen Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF verabreicht werden bis zur Leukapherese, bis zur Mobilisierung oder Peripherisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, bis zur Erhöhung der Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, bis zur Verringerung der Anzahl von Leukapheresen, die notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln, und/oder bis zur Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten. In dieser bevorzugten Ausführungsform wird Wachstumshormon oder eines seiner Derivate vorzugsweise dreimal täglich verabreicht und G-CSF wird vorzugsweise einmal täglich verabreicht.
Erfindungsgemäße Verwendungen können mit einer vorangegangenen Behandlung, genannt «Chemopriming» kombiniert werden. Die Behandlungsschemata des «Chemoprimings», die angewendet werden können, sind:

– Hochdosis-Cyclophosphamid (4 g/m²) für Patienten mit Brustkrebs oder multiplem Myelom,
– Ifosfamid, Etoposid für Patienten mit Non-Hodgkin-Lymphom oder Morbus Hodgkin,
– Cyclophosphamid, Etoposid, Cisplatin (CVP) für Patienten mit soliden Tumoren (z. B. Brustkrebs).

Um die Induktion von erholten Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu verstärken, sollen die erfindungsgemäßen Verwendungen kurz nach der Vervollständigung der Chemopriming-Behandlung begonnen und bis zur Vervollständigung der Apherese fortgesetzt werden (5 bis 12 μg/kg/d).
Es ist auch erwähnenswert, dass in Patienten, deren Bestand an Knochenmarksstammzellen durch eine vorangegangene Chemotherapie deutlich verringert ist, ein zusätzliches Chemopriming-Behandlungsschema die Peripherisierung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, eher verhindern als induzieren kann. Für Stammzellen toxische chemotherapeutische Mittel wie Busulfan, Doxorubicin, Melphalan, Thiotepa und möglicherweise Fludarabin (und andere) sollten nicht Teil des Chemopriming-Behandlungsschemas sein. Auf der anderen Seite wird Cyclophosphamid als idealer Chemopriming-Wirkstoff mit der geringsten Toxizität gegenüber Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, angesehen, obwohl die Kardiotoxizität (Dosis > 4 g/m²) und hämorrhagische Cystitis wohlbekannte extramedullare Nebenwirkungen sind (Shepperd et al., 1990).
Die Population der Blutzellen, welche mit Zellen angereichert sind, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, und aus dem peripheren Blut mit erfindungsgemäßen Verfahren und Verwendungen erhalten wurde, kann in dasselbe Individuum, welches in diesem Fall der Spender ist (autologe Transplantation), oder in verschiedene Individuen (nicht-autologe Transplantation) reinfundiert, verpflanzt oder transplantiert werden.
Die Population der Blutzellen, welche mit Zellen angereichert sind, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, und aus dem peripheren Blut mit erfindungsgemäßen Verfahren und Verwendungen erhalten wurden, werden vorteilhaft in ein Individuum infundiert, welches zuvor eine oder mehrere Chemotherapien, Strahlentherapien, myelosuppressive, myeloablative oder myelotoxische Therapien erhalten hat.
Der Vorgang der Reinfusion, Verpflanzung oder Transplantation gehört zum sogenannten Verfahren der Hämopoetischen Stammzellentransplantation (HSCT). HSCT ist ein klinisches Verfahren, in dem Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, erhalten aus dem Knochenmark oder dem peripheren Blut, in einen Patienten transplantiert werden.
Eine autologe Transplantation ist eine Transplantation, in welcher Spender und Empfänger dasselbe Individuum sind, während eine nicht-autologe Transplantation eine Transplantation ist, in welcher Spender und Empfänger verschiedene Individuen sind. Das erfindungsgemäße Verfahren umfasst sowohl die autologe, als auch die nicht-autologe Transplantation.
In einem anderen Teil offenbart die vorliegende Beschreibung auch ein Verfahren oder eine Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um die mobilisierende oder peripherisierende Wirkung von G-CSF zu verstärken.
Die vorliegende Beschreibung offenbart ein Verfahren oder eine Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate oder eines beliebigen Faktors, welcher die Freisetzung von Wachstumshormon induziert, um die Mobilisierung der zirkulierenden Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, durch G-CSF zu verstärken, um die Erhöhung der Anzahl zirkulierender Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, durch G-CSF zu verstärken, um die Verringerung der Anzahl an Leukapheresen, welche notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation durch G-CSF zu verstärken und/oder die Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten, durch G-CSF zu verstärken.
Daher verstärkt oder erhöht die Verabreichung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF synergistisch die Mobilisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, sie verstärkt oder erhöht synergistisch die Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, sie verringert die Zahl der Leukapheresen, welche notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln und/oder sie reduziert das Blutvolumen, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten, hinsichtlich der Wirkung(en), die durch Verabreichung von G-CSF allein oder ohne Wachstumshormon oder eines seiner Derivate oder eines beliebigen Faktors, welcher die Freisetzung des Wachstumshormons induziert, erzielt werden.
Die Verabreichung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF erlaubt die Verwendung einer geringeren Dosis/geringerer Dosen von G-CSF, als wenn G-CSF alleine oder ohne Wachstumshormon oder ohne eines seiner Derivate oder ohne einen beliebigen Faktor, welcher die Freisetzung von Wachstumshormon induziert, verwendet wird.
Die Verabreichung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF kann gleichzeitig oder zu verschiedenen Zeiten und/oder an der gleichen Stelle oder an einer anderen Stelle/anderen Stellen und/oder in derselben/demselben oder in einer/einem anderen Zusammensetzung oder Arzneimittel verabreicht werden.
In einem zweiten Teil offenbart die vorliegende Beschreibung neue Verwendungen zur Verstärkung der hämopoetischen Wiederherstellung. Die vorliegende Beschreibung offenbart ein Mittel, welches in der Lage ist, die hämopoetische Erneuerung, Erholung oder Wiederherstellung zu fördern, zu verstärken oder zu beschleunigen. Die vorliegende Beschreibung offenbart neue Verwendungen zur Verstärkung der hämopoetischen Wiederherstellung.
Daher offenbart die vorliegende Beschreibung die Verwendung von menschlichem Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verstärkung der hämopoetischen Wiederherstellung in einem Menschen anzufertigen.
Innerhalb der Anmeldung kann der Begriff «verstärkend» und alle Begriffe mit demselben Wortstamm durch den Begriff «fördernd» oder den Begriff «beschleunigend» ersetzt werden.
Innerhalb der Anmeldung kann der Begriff «Wiederherstellung» und alle Begriffe mit demselben Wortstamm durch den Begriff «Erholung» oder den Begriff «Erneuerung» ersetzt werden.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von menschlichem Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verstärkung der hämopoetischen Wiederherstellung nach Knochenmarkstransplantation in einem Menschen anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von menschlichem Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verbesserung der Verpflanzung von Knochenmarkszellen oder Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in einem Menschen anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verstärkung der hämopoetischen Wiederherstellung nach Transplantation von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verstärkung der Verpflanzung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, anzufertigen.
Wachstumshormon kann vorteilhaft menschliches Wachstumshormon sein.
Wachstumshormon und seine Derivate können Wachstumshormon und seinen Derivaten entsprechen, welche vorstehend in dieser Anmeldung im Zusammenhang mit dem ersten Teil der Erfindung erwähnt werden.
Die hämopoetische Wiederherstellung oder die verbesserte Verpflanzung kann durch eine Erhöhung der Zahl der peripheren weißen Blutzellen (WBC) und/oder der Zahl der Granulocyten und/oder der Zahl der Lymphocyten und/oder der Zahl der Blutplättchen und/oder der Zahl der Erythrocyten nachgewiesen werden.
Eine Erhöhung der Zahl der peripheren weißen Blutzellen (WBC) und/oder der Zahl der Granulocyten und/oder der Zahl der Lymphocyten und/oder der Zahl der Blutplättchen und/oder der Zahl der Erythrocyten kann durch Vergleich mit der Geschwindigkeit der Erhöhung dieser Zahlen in einem Individuum, welches dasselbe Transplantationsschema erhalten hat, nicht jedoch eine Behandlung zur hämopoetischen Wiederherstellung erhalten hat, nachgewiesen werden.
Die hämopoetische Wiederherstellung oder die verbesserte Verpflanzung kann durch Verringerung des Zeitraums nachgewiesen werden, der nötig ist, um eine normale oder Standardzahl von peripheren weißen Blutzellen (WBC) und/oder Granulocyten und/oder Neutrophilen und/oder Lymphocyten und/oder Blutplättchen und/oder Erythrocyten wieder zu erhalten.
Eine normale oder Standardzahl von peripheren weißen Blutzellen (WBC) und/oder Granulocyten und/oder Lymphocyten und/oder Blutplättchen und/oder Erythrocyten ist diejenige, welche in einem gesunden Individuum oder in einem Individuum gemessen wird, welches keine myeloablative, myelotoxische oder myelosuppressive Therapie, keine Chemotherapie, keine Strahlentherapie oder keine Transplantation erhalten hat.
Eine normale Anzahl von Neutrophilen kann mindestens 0,5 × 10⁹ neutrophile Zellen pro Liter peripheren Blutes sein.
Eine normale Anzahl von Blutplättchen kann mindestens 20 × 10⁹ pro Liter peripheren Blutes sein.
Die hämopoetische Wiederherstellung oder Verbesserung der Verpflanzung kann durch eine Verringerung des Ausmaßes und/oder der Dauer der Neutropenie und/oder der Thrombocytopenie und/oder der Anämie und/oder der Hämorrhagien und/oder der Dauer der Prophylaxe nachgewiesen werden.
Die hämopoetische Wiederherstellung oder Verbesserung der Verpflanzung kann durch eine Verringerung der Dauer und/oder der Schwere des Fiebers und/oder der Infektionen nachgewiesen werden.
Eine Verringerung des Ausmaßes und/oder der Dauer der Neutropenie und/oder der Thrombocytopenie und/oder der Anämie und/oder der Hämorrhagien und/oder der Dauer der Prophylaxe oder eine Verringerung der Dauer und/oder der Schwere des Fiebers und/oder der Infektionen können mit dem Ausmaß und/oder der Dauer und/oder der Schwere verglichen werden, die in einem Individuum gemessen wurden, welches dasselbe Transplantationsschema, dieselbe Chemotherapie, dieselbe Strahlentherapie oder dieselbe myelosuppressive, myeloablative oder myelotoxische Therapie, nicht jedoch irgendeine hämopoetische Wiederherstellungsbehandlung erhalten hat.
Die hämopoetische Wiederherstellung oder Verbesserung der Verpflanzung kann durch eine Erholung der Granulocyten, welche mindestens 1000 pro Mikroliter peripheren Blutes ist, nachgewiesen werden.
Die hämopoetische Wiederherstellung oder Verbesserung der Verpflanzung kann durch eine Erholung der Zahl der Blutplättchen, welche mindestens 50.000 pro Mikroliter peripheren Bluten ist, nachgewiesen werden.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate oder eines beliebigen Faktors, welcher die Freisetzung von Wachstumshormon induziert, um ein Arzneimittel zur Behandlung einer neoplastischen Erkrankung, einer hämatologischen Erkrankung, bösartiger Tumoren, schwerer kombinierter Immundefekte (SCIDs), kongenital oder genetisch bestimmter hämopoetischer Abnormalitäten, Anämie, aplastischer Anämie, Leukämie und/oder Osteopetrose anzufertigen.
Eine neoplastische Erkrankung kann Brustkrebs sein.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verringerung des Zeitraums der Knochenmarksaplasie nach Transplantation, Chemotherapie, Strahlentherapie oder myeloablativer, myelosuppressiver oder myelotoxischer Therapie, zur Verhinderung oder Behandlung opportunistischer Infektionen nach Transplantation, Chemotherapie, Strahlentherapie oder myeloablativer, myelosuppressiver oder myelotoxischer Therapie oder zur Einschränkung des Risikos des erneuten Auftretens eines Tumors nach Transplantation, Chemotherapie, Strahlentherapie oder myeloablativer, myelosuppressiver oder myelotoxischer Therapie anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verhinderung oder Behandlung sekundärer Wirkungen der myeloablativen, myelotoxischen oder myelosuppressiven Therapie und/oder Strahlentherapie und/oder Chemotherapie und/oder Transplantation anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verhinderung oder Behandlung von Neutropenie und/oder Thrombocytopenie anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verhinderung oder Behandlung von Anämie nach Strahlentherapie und/oder Chemotherapie und/oder Transplantation hämopoetischer Stammzellen und/oder Transplantation von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese wiederherzustellen, und/oder Knochenmarkstransplantation und/oder myelosuppressiver oder myelotoxischer Therapie anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verhinderung oder Behandlung von Neutropenie nach Strahlentherapie und/oder Chemotherapie und/oder Transplantation hämopoetischer Stammzellen und/oder Transplantation von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese wiederherzustellen, und/oder Knochenmarkstransplantation und/oder myelosuppressiver oder myelotoxischer Therapie anzufertigen.
Die vorliegende Beschreibung offenbart auch die Verwendung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, um ein Arzneimittel zur Verhinderung oder Behandlung von Thrombocytopenie nach Strahlentherapie und/oder Chemotherapie und/oder Transplantation hämopoetischer Stammzellen und/oder Transplantation von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese wiederherzustellen, und/oder Knochenmarkstransplantation und/oder myelosuppressiver oder myelotoxischer Therapie anzufertigen.
Die CD34⁺-Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen können zu einer oder mehreren der folgenden Gruppen von Zellen gehören: CD34⁺-Zellen, CD34⁺CD33⁺-Zellen, CD34⁺CD38^–-Zellen, CD34⁺Thy-I-Zellen, CD34⁺Thy-I-CD38^–-Zellen, CD33⁺-Zellen, Stammzellen, Vorläuferzellen, Langzeitkultur-initiierende Zellen (LTC-IC), Zellen, welche ein Selbsterneuerungspotenzial erfüllen, Zellen, welche pluripotente Charakteristika erfüllen, Langzeit-Knochenmarkkultur-initiierende Zellen.
Die Bestimmung der Mengen des Wachstumshormons oder eines seiner Derivate, welche in einem/einer vorstehend beschriebenen erfindungsgemäßen Verfahren oder Verwendung verabreicht werden sollen, ist Stand der Technik.
Eine typische Dosis von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate beginnt bei etwa 1 Mikrogramm pro Kilogramm Körpergewicht des Patienten pro Tag und die Dosis wird gesteigert, bis die gewünschte Wirkung (hämopoetische Erholung oder Verpflanzung) erreicht ist.
Die zu verabreichende Dosis von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate hängt vom Alter, dem Geschlecht, der Gesundheit und dem Gewicht des Spenders, der Art der vorangegangenen oder laufenden Behandlung, falls zutreffend, der Häufigkeit der Behandlung und der Art der gewünschten Wirkung ab.
Wachstumshormon oder seine Derivate können allein oder in Verbindung oder in Assoziation mit anderen Faktoren verabreicht werden.
Wachstumshormon oder seine Derivate können vorteilhaft in einer Zusammensetzung oder einem Arzneimittel enthalten sein, welches weiterhin eine oder mehrere Verbindungen umfasst, welche aus den Verbindungen ausgewählt sind, die zu folgenden Gruppen gehören: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine, monoclonale Antikörper.
Wachstumshormon oder seine Derivate und eine oder mehrere Verbindungen, ausgewählt aus den Verbindungen, die zu folgenden Gruppen gehören: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine, monoclonale Antikörper, können gleichzeitig oder zu verschiedenen Zeiten und/oder an derselben Stelle oder an einer anderen Stelle/anderen Stellen und/oder in derselben/demselben oder in einer/einem anderen Zusammensetzung oder Arzneimittel verabreicht werden.
Die Gruppe der Cytokine kann IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF oder SCF umfassen. Die Gruppe der Chemokine kann MIP-1α oder Thrombopoietin (TPO) umfassen. Die Gruppe der monoclonalen Antikörper kann anti-VLA-4-Antikörper umfassen.
Vorzugsweise ist Wachstumshormon oder seine Derivate in einer Zusammensetzung oder einem Arzneimittel vorhanden, welches Granulocyten-Kolonie-stimulierenden Faktor (G-CSF) umfasst.
Vorzugsweise ist Wachstumshormon oder seine Derivate mit G-CSF assoziiert. Wachstumshormon oder seine Derivate und G-CSF können gleichzeitig oder zu verschiedenen Zeiten und/oder an der gleichen Stelle oder an einer anderen Stelle/anderen Stellen und/oder in derselben/demselben oder in einer/einem anderen Zusammensetzung oder Arzneimittel verabreicht werden.
Wachstumshormon oder seine Derivate und G-CSF können vorteilhaft separat verabreicht werden.
Wachstumshormon oder seine Derivate und/oder G-CSF sollen in einer Menge verabreicht werden, welche ausreichend ist, um die hämopoetische Wiederherstellung oder Verpflanzung zu erhöhen.
Die Verabreichung in einer Menge, welche ausreichend ist, um die hämopoetische Wiederherstellung oder Verpflanzung zu erhöhen, kann eine oder mehrere Verabreichungen bedeuten, einmal oder mehrmals am Tag und während eines oder mehrerer Tage, um eine kumulierte Menge zu erreichen, welche ausreichend ist, um die hämopoetische Wiederherstellung oder Verpflanzung zu erhöhen.
Die erfindungsgemäß verwendeten Arzneimittel oder Medikamente oder Zusammensetzungen liegen in einer pharmazeutisch verträglichen Form vor, wahlweise kombiniert mit einem verträglichen Träger.
Diese Zusammensetzungen oder Arzneimittel können durch beliebige Mittel verabreicht werden, welche ihren beabsichtigten Zweck erreichen.
Die erfindungsgemäß verwendeten Zusammensetzungen oder Arzneimittel können allein oder in Verbindung mit anderen Therapeutika verabreicht werden, welche gegen eine Erkrankung oder gegen andere Symptome davon gerichtet sind.
Die erfindungsgemäß verwendeten Zusammensetzungen oder Arzneimittel können auf intravenösem oder subcutanem Weg verabreicht werden.
Die erfindungsgemäß verwendeten Zusammensetzungen oder Arzneimittel können auf parenteralen Wegen wie dem subcutanen, intravenösen, intramuskulären, intraperitonealen oder transdermalen Weg oder auf mukosalen Wegen wie dem buccalen oder oralen Weg verabreicht werden.
Die Zusammensetzung oder das Arzneimittel, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann auf parenteralen Wegen wie dem subcutanen, intravenösen, intramuskulären, intraperitonealen oder transdermalen Weg oder auf mukosalen Wegen wie dem buccalen oder oralen Weg verabreicht werden.
Vorzugsweise sollen Wachstumshormon oder eines seiner Derivate subcutan verabreicht werden.
Die Gesamtdosis oder Menge, welche für jede/jedes erfindungsgemäße Behandlung, Verfahren oder Verwendung benötigt wird, kann in vielfachen Dosen oder einer einzelnen Dosis verabreicht werden.
Die Zusammensetzung oder das Arzneimittel, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann täglich oder dreimal täglich verabreicht werden. Vorzugsweise soll die Zusammensetzung oder das Arzneimittel, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, dreimal täglich verabreicht werden. Vorzugsweise soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate täglich oder dreimal täglich verabreicht werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate dreimal täglich verabreicht werden.
Wenn eine erfindungsgemäße Verwendung die Verabreichung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF umfasst, soll G-CSF vorzugsweise einmal täglich und/oder subcutan verabreicht werden.
Wenn eine erfindungsgemäße Verwendung die Verabreichung von Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF umfasst, soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate vorzugsweise dreimal täglich und G-CSF soll vorzugsweise täglich verabreicht werden.
Die Verabreichung des Arzneimittels kann über einen Zeitraum von 3 Tagen mit oder bis zur Leukapherese oder bis zur vollständigen Erholung durchgeführt werden. Die Verabreichung des Arzneimittels kann von Tag 1 bis Tag 3 nach der Transplantation durchgeführt werden.
Der Begriff «Transplantation» umfasst die Knochenmarkstransplantation oder die Transplantation hämopoetischer Stammzellen.
Die Zusammensetzung oder das Arzneimittel, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann eine tägliche Verabreichung sein, welche bis zu 20 Tage vor der Leukapherese beginnt.
Die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, kann über einen Zeitraum von 5 Tagen oder über einen Zeitraum von 10 Tagen verabreicht werden, bis die gewünschte Wirkung (hämopoetische Erholung oder Verpflanzung) erreicht ist.
Vorzugsweise soll die Zusammensetzung, umfassend Wachstumshormon oder eines seiner Derivate, verabreicht werden, bis die gewünschte Wirkung (hämopoetische Erholung oder Verpflanzung) erreicht ist.
Erfindungsgemäße Verwendungen werden vorzugsweise nach Chemotherapie, Bestrahlungstherapie, myelosuppressiver Therapie, Transplantation oder Verpflanzung von Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder nach Transplantation von Knochenmark durchgeführt.
Erfindungsgemäße Verwendungen werden vorzugsweise etwa 7 Tage nach dem Beginn einer chemotherapeutischen Behandlung oder etwa 2 Tage nach dem Ende einer chemotherapeutischen Behandlung durchgeführt.
In einer bevorzugten Ausführungsform soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate und G-CSF bis zur hämopoetischen Wiederherstellung oder Verpflanzung verabreicht werden. In dieser bevorzugten Ausführungsform soll Wachstumshormon oder eines seiner Derivate vorzugsweise dreimal täglich und G-CSF soll vorzugsweise einmal täglich verabreicht werden.
In dem Arzneimittel verwendetes Wachstumshormon kann vorteilhaft rekombinantes Wachstumshormon sein.
In dem Arzneimittel verwendetes Wachstumshormon kann vorteilhaft menschliches Wachstumshormon sein.
In einem dritten Teil offenbart die Erfindung eine Kombination der Verfahren und Verwendungen des ersten Teils der Erfindung (Mobilisierung) mit den Verfahren und Verwendungen des zweiten Teils der Erfindung (Erholung).
Die Kombination der Verwendungen sind Verwendungen zur Mobilisierung und Erholung, welche in Fällen autologer Transplantation hämopoetischer Stammzellen angewendet werden können, wobei der Spender und der Empfänger dieselbe Person oder dasselbe Individuum sind. Daher kann Wachstumshormon oder eines seiner Derivate als mobilisierendes Mittel in einem ersten Mobilisierungsschritt, welcher eine Vorbehandlung hinsichtlich der Extraktion von Blutzellen ist, und als Mittel zur hämopoetischen Erholung in einem zweiten Schritt nach der Transplantation verwendet werden.
Die Kombinationsverwendungen sind sehr nützlich. In der Tat führt die Transplantation von Zellen, welche durch Wachstumshormon oder eines seiner Derivate mobilisiert wurden, in einen Patienten zu einer schnelleren hämatologischen Erholung als eine Transplantation als ohne einer vorherige Mobilisierungsbehandlung des Patienten.
Erfindungsgemäße Verwendungen können in vielen klinisch wichtigen Feldern, nämlich bei autologen Knochenmarkstransplantationen, allogenen Knochenmarkstransplantation, Gentherapie, Transplantation hämopoetischer Stammzellen, Transplantation von Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Strahlentherapie, Chemotherapie, myelosuppressiver oder myelotoxischer Therapie, angewendet werden.
Erfindungsgemäße Verwendungen können angewendet werden, um einen Patienten zu behandeln, der Strahlentherapie oder Chemotherapie erhalten hat, dem Knochenmarkszellen transplantiert wurden, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, oder der eine myelotoxische oder myeloablative Therapie erhalten hat.
BILDUNTERSCHRIFTEN DER FIGUREN:
1:
Abkürzungen:

– GH: Wachstumshormon
– G-CSF: Granulocyten zellstimulierender Faktor
– ND: nicht nachweisbar

2:
Dieses Diagramm zeigt die Anzahl der CD34⁺-Zellen/μl Blut, das von einem Patienten während 3 Zyklen von Chemotherapie nach einer Mobilisierungsbehandlung mit G-CSF allein (Zyklus 1), GH + G-CSF (Zyklus 2) und G-CSF alleine (Zyklus 3) erhalten wurde.
Beispiele
Abkürzungen und Anmerkungen:

– BFU-E: Burst-bildende Einheit, erythroid
– CFU-C: Koloniebildende Einheit, Kultur
– CFU-GM: Koloniebildende Einheit, Granulocyten und Makrophagen
– CFU-Meg: Koloniebildende Einheit, Megakaryocyten
– G-CSF: Granulocyten koloniestimulierender Faktor
– IGF-I: Insulin-Wachstumsfaktor I
– LTC-IC: Langzeitkultur initiierende Zelle
– HGH: menschliches Wachstumshormon
– RhG-CSF: rekombinanter menschlicher Granulocyten koloniestimulierender Faktor
– RhGH: rekombinantes menschliches Wachstumshormon

Beispiel 1: Mobilisierungsaktivität von hGH, untersucht in einem präklinischen Maus-Modell
BALB/c-Mäusen wurden täglich intraperitoneale Injektionen von 10 μl rhGH für einen gesamten Zeitraum von 10 Tagen gegeben. Die gesamte Aktivität von CFU-C oder BFU-E, welche im peripheren Blut am Tag 5 beziehungsweise Tag 10 zirkuliert, wird gemäß der Standardverfahren für die in vitro-Kultur bestimmt und verglichen mit:

(i) den Gleichgewichtsspiegeln vor der Behandlung
(ii) den absoluten Zahlen von CFU-C und BFU-E am Tag 3 beziehungsweise Tag 5 nach Behandlung mit rhG-CSF, von welchem täglich 10 μl intraperitoneal für 5 aufeinanderfolgende Tage gegeben wurden.

Beispiel 2: Auswahlkriterien für klinische Studien zur Mobilisierung und zur Erholung
A) Einschlusskriterien:

– Schriftliche Einverständniserklärung
– 18 Jahre und 60 Jahre
– Histologisch bestätigte Hochrisiko-Krebserkrankung (Lymphoma), die einer Hochdosis-Chemotherapie gemäß der aktuellen INT-Richtlinien ausgesetzt wird.

Ausschlusskriterien:

– Patienten, die mit Chemotherapie (Chemotherapiedurchlauf) und/oder Strahlentherapie stark vorbehandelt sind.
– Nieren- (Creatinin > 1,5 N) oder Leber-Insuffizienz und/oder SGPT > 2,5 N; Bilirubin > 1,5 N) oder schwere ZNS- oder psychatrische Erkrankung.
– Klinisch signifikante Herz- oder Myocard-Erkrankung. Die Auswurffraktion des linken Ventrikels < 50% im Ruhezustand nach Untersuchung durch Echocardiographie oder < 55% durch Isotopenmessung.
– Hepatitis B- oder C- oder HIV-Test positiv.

Beispiel 3: Basislinien-Untersuchungsverfahren für klinische Studien zur Mobilisierung und zur Erholung
Während der klinischen Studien zur Mobilisierung und zur Erholung werden einige Parameter untersucht:

– Vollständige medizinische Vorgeschichte, körperliche Untersuchung, Herzuntersuchung, Auswurffraktion des linken Ventrikels (LVEF) durch Multigated Szintigraphie oder Echographie, Röntgenuntersuchung der Brust.
– Schwangerschaftstest (falls zutreffend)
– HBV-, HCV- und HIV-Test
– Großes Blutbild mit Differenzialbild
– Absolute Zahlen der zirkulierenden CD34⁺-Zellen und CFU
– Chemische Blutanalyse (Transaminasen, Serumphosphatase, gammaGT LDH, gesamtes Bilirubin, BUN, Creatinin, Glycämie, Na, K, Ca, P, Harnsäure, Gesamtprotein, Albumin, Cholesterin, Triglyceride
– Bilaterale Knochenmarksbiopsie
– Schriftliche Einverständniserklärung

Beispiel 4: Hauptparameter der Toxizität für die klinischen Studien zur Mobilisierung und zur Erholung

– Tumorwachstum (nur Mobilisierungsstudie)
– Klinische und instrumentelle Symptome
- Labortests für Herz-, Leber- und Nierenfunktion

Beispiel 5: Klinische Studie zur Mobilisierung
A) Ziele der klinischen Studie zur Mobilisierung

– Untersuchung der Aktivität von rhGH zur:
(i) Erhöhung zirkulierender CD34⁺-Zellen und
(ii) Ausdehnung des hämopoetischen Raumes im Knochenmark, so dass die erhöhte Mobilisierung durch nachfolgende rhG-CSF-Verabreichug ermöglicht wird.
– Untersuchung der Sicherheit und Verträglichkeit von rhGH, welches Krebspatienten zusammen mit rhG-CSF nach Chemotherapie gegeben wurde (hämatologische Erholungsstudie).

B) Behandlungsplan
Mobilisierungsstudie mit rhGH:
rhGH wird von Tag 1 bis 10 auf dem intravenösen Weg verabreicht. Die Dosierung von rhGH wird bei etwa 1 Mikrogramm pro Kilogramm Körpergewicht des Patienten pro Tag begonnen und die Dosis wird bis zur gewünschten Wirkung gesteigert (Mobilisierung oder Peripherisierung zirkulierender Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Erhöhung der Anzahl zirkulierender Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in dem Spender, Verringerung der Anzahl von Leukapheresen, die notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln, Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten). (xx μg/kg QD, iv)
Mobilisierungsstudie mit rhGH und rhG-CSF:

– rhGH-Verabreichung: rhGH wird von Tag 1 bis 5 auf dem intravenösen Weg verabreicht. Die Dosierung von rhGH wird bei etwa 1 Mikrogramm pro Kilogramm Körpergewicht des Patienten pro Tag begonnen und die Dosis wird bis zur gewünschten Wirkung gesteigert (Mobilisierung oder Peripherisierung zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, Erhöhung der Anzahl zirkulierender Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in dem Spender, Verringerung der Anzahl von Leukapheresen, die notwendig sind, um eine ausreichende Menge zirkulierender Zellen zur Transplantation zu sammeln, Verringerung des Blutvolumens, das aufgearbeitet werden muss, um die spezifizierte Zielzahl von zirkulierenden Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, zu erhalten).
– rhG-CSF-Verabreichung (10 μg/kg QD, iv) ab der Vervollständigung der CD34⁺-Zellernte (die Zielzelldosis ist 8 × 10e⁶ CD34⁺-Zellen/kg Körpergewicht).

Hauptparameter der Aktivität
Beginnend bei Tag +6 werden die folgenden Parameter untersucht:

– Absolute Zellzahlen von CD34⁺/μl (täglich in der Peripherie und einmal in den Leukapheresezellen)
– Absolute Zahlen von CFU-GM/μl (täglich in der Peripherie und einmal in den Leukapheresezellen)

D) Studienverfahren

– Tägliche Bestimmung der CD34⁺-Zellen/μl und CFU-GM im peripheren Blut von Tag +5 bis zur Leukapherese.
– Gesamtausbeute von CD34⁺-Zellen, CFU-GM, BFU-E, CFU-IC in Leukapheresezellen.
– Bestimmung der Toxizität durch klinische Studien und in Untersuchungen (EKG, Röntgenuntersuchung der Brust und andere Untersuchungen, soweit erforderlich).
– Messung und Bewertung aller Tumorparameter, welche die Studie zur Mobilisierung beenden.

Beispiel 6: Klinische Studien zur Erholung
A) Ziele der klinischen Studie zur Erholung

– Untersuchung der Fähigkeit von rhGH, welches allein oder in Kombination gegeben wird, um die Erholung von WBC, RBC und Blutplättchen im peripheren Blut von Krebspatienten, welche mit einer Hochdosis-Chemotherapie und Autoverpflanzung von Stammzellen des periphere Bluts behandelt werden, zu beschleunigen.
– Untersuchung der Sicherheit und der Verträglichkeit von rhGH, welches Krebspatienten nach Chemotherapie zusammen mit rhG-CSF gegeben wird.

B) Behandlungsplan

– Verabreichung einer Hochdosischemotherapie, gefolgt von Infusion einer optimalen Menge am Tag 0 (d. h. 8 × 10e⁶ CD34⁺-Zellen/kg) von kältekonservierten Zellen, die in der Mobilisierungsstudie geerntet wurden.
– Gemeinsame Verabreichung (iv) von rhGH und rhG-CSF μg/kg QD, iv) von Tag 1 bis zur stabilen (d. h. für drei aufeinanderfolgende Tage) Erholung der Granulocyten auf über 1000/μl und der Zahl der Blutplättchen auf über 50.000/μl.

C) Hauptparameter der Aktivität
Beginnend bei Tag +0 und bis zur vollständigen und stabilen Erholung werden die folgenden Parameter untersucht:

– Absolute Zellzahlen von Granulocyten/μl (täglich)
– Absolute Zellzahlen von Blutplättchen/μl (täglich)
– Absolute Zellzahlen von Erythrocyten/μl (täglich)
– Nadir der Granulocyten
– Nadir der Blutplättchen
– Ausmaß und Dauer der Neutropenie
– Ausmaß und Dauer der Thrombocytopenie
– Ausmaß und Dauer der hämopoetischen Unterstützungstransfusionen, RBC-Transfusionen)
– Dauer der infektiösen Prophylaxe und Infektionen
– Hämorrhagien

D) Studienverfahren

– Tägliche Bestimmung der Zahlen von WBC, RBC und Blutplättchen
– Anzahl der Transfusionen von Blutplättchen
– Anzahl der Transfusionen von RBC
– Typ und Schwere von Fieber und dokumentierter Infektion
– Klinische und instrumentelle Beurteilung von hämatologischen Toxizitäten.

Beispiel 7: Ergebnisse der klinischen Studien zur Mobilisierung
I – Studien zur Mobilisierung innerhalb von 2 Zyklen von Chemotherapie
A) Behandlungsplan
Drei Patienten mit rezidiviertem Morbus Hodgkin erhielten die folgenden beiden Behandlungszyklen:

• Zyklus 1 (Kontrollzyklus):
– Ifosfamid (Mittel für die Chemotherapie): 3 g/m² iv (intravenös) (einmal täglich), Tag 1–4,
– Vinorelbin (Mittel für die Chemotherapie): 25 g/m² iv (einmal täglich), Tag 1 und 5,
– G-CSF: 5 μg/kg sc (subcutan) (einmal täglich) von Tag 7 an bis zur Leukapherese oder bis zur Wiederherstellung einer ausreichenden Zahl von CD34⁺-Zellen (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg).
• Zyklus 2:
– Ifosfamid: 3 g/m² iv (einmal täglich), Tag 1–4,
– Vinorelbin: 25 g/m² iv (einmal täglich), Tag 1 und 5,
– G-CSF: 5 μg/kg sc (einmal täglich) von Tag 7 an bis zur Wiederherstellung einer ausreichenden Zahl von CD34⁺-Zellen (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg) oder bis zur Leukapherese,
– rhGH (rekombinantes menschliches Wachstumshormon}: 33 μg/kg sc (dreimal täglich) von Tag 7 an bis zur Wiederherstellung einer ausreichenden Zahl von CD34⁺-Zellen (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg) oder bis zur Leukapherese.

Ergebnisse
Die Ergebnisse werden in der Tabelle von 1 dargestellt.
Es wurde keine Toxizität beobachtet, abgesehen von einer Hyperglycämie, die eine Insulinverabreichung erfordert.
Verglichen mit der Kontrolle (Zyklus 1) führte die Zugabe von rhGH in Zyklus 2 zur:

1) Verdopplung oder Verdreifachung der Mobilisierung von CD34⁺-Zellen im Blutstrom.
2) Erholung der CD34⁺-Leukapheresezellen oder Erhöhung der Zahl der CD34⁺-Leukapheresezellen.

Die durch GH induzierte Erhöhung der Zahl der CD34⁺-Leukapheresezellen erlaubt die Ernte einer Menge von CD34⁺-Zellen, welche für eine autologe Transplantation geeignet sind (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg), aus allen drei Patienten.
II – Studien zur Mobilisierung innerhalb von 3 Zyklen von Chemotherapie Behandlungsplan
Ein Patient mit rezidiviertem Morbus Hodgkin erhielt die folgenden drei Behandlungszyklen:

• Zyklus 1:
– Ifosfamid (Mittel für die Chemotherapie): 3 g/m² iv (intravenös) (einmal täglich), Tag 1–4,
– Vinorelbin (Mittel für die Chemotherapie): 25 g/m² iv (einmal täglich), Tag 1 und 5,
– G-CSF: 5 μg/kg sc (subcutan) (einmal täglich) von Tag 7 an bis zur Leukapherese oder bis zur Wiederherstellung einer ausreichenden Zahl von CD34⁺-Zellen (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg).
• Zyklus 2:
– Ifosfamid: 3 g/m² iv (einmal täglich), Tag 1–4,
– Vinorelbin: 25 mg/m² iv (einmal täglich), Tag 1 und 5,
– G-CSF: 5 μg/kg sc (einmal täglich) von Tag 7 an bis zur Wiederherstellung einer ausreichenden Zahl von CD34⁺-Zellen (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg) oder bis zur Leukapherese,
– rhGH (rekombinantes menschliches Wachstumshormon): 33 μg/kg sc (dreimal täglich) von Tag 7 an bis zur Wiederherstellung einer ausreichenden Zahl von CD34⁺-Zellen (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg) oder bis zur Leukapherese.
• Zyklus 3:
– Ifosfamid (Mittel zur Chemotherapie): 3 g/m² iv (intravenös) (einmal täglich), Tag 1–4,
– Vinorelbin (Mittel zur Chemotherapie): 25 mg/m² iv (einmal täglich), Tag 1 und 5,
– G-CSF: 5 μg/kg sc (subcutan) (einmal täglich) von Tag 7 an bis zur Leukapherese oder bis zur Wiederherstellung einer ausreichenden Zahl von CD34⁺-Zellen (etwa 3 bis 8–10⁶ Zellen/kg),

Ergebnisse
Die Ergebnisse der im vorstehenden Abschnitt A wiedergegebenen klinischen Behandlung werden im Diagramm von 2 dargestellt.
Das Diagramm von 2 zeigt den zeitlichen Verlauf der Mobilisierung von CD34⁺-Zellen nach drei aufeinanderfolgenden Zyklen von Chemotherapie, beginnend alle 21 Tage.
Jeder im Diagramm der 2 eingezeichnete Punkt entspricht der Maßeinheit der Zahl von CD34⁺-Zellen/μl Blut, die in einer Blutprobe von 1 Milliliter gefunden wird.
Die Ergebnisse zeigen, dass Zyklus 2 (Zusatz von rhGH) den Zyklen 1 und 3 deutlich überlegen ist. Daher wird die Mobilisierung von CD34⁺ im Blut durch den Zusatz von rhGH erhöht.
Die Erhöhung der Mobilisierung von CD34⁺-Zellen im Blut durch GH ist hoch, insbesondere da der untersuchte Patient mehrere Durchläufe durch eine myelotoxische Chemotherapie erhält und da jeder nachfolgende Durchlauf das Ausmaß der Mobilisierung hemmt. Die abnehmenden Zahlen der zirkulierenden CD34⁺-Zellen nach aufeinanderfolgenden myelotoxischen Chemotherapie- und Mobilisierungszyklen kann durch Vergleich von Zyklus 1 und Zyklus 3 beobachtet werden.
Das Blut der Patienten wird einer Leukapherese unterzogen, wenn die gemessene Zahl der CD34⁺-Zellen/μl Blut maximal ist (Tag 13 von Zyklus 1, Tag 20 von Zyklus 2). Die Leukapheresezellen werden kältekonserviert und werden dem Patienten nach einer myeloablativen Therapie reinfundiert.
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Claims

Verwendung von menschlichem Wachstumshormon oder einem seiner Derivate für die Herstellung eines Arzneimittels, welches in einem Patienten die Anzahl von zirkulierenden CD34⁺-Zellen erhöht, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, wobei die Zellen dazu verwendet werden sollen, denselben Patienten durch Reinfusion, Transplantation oder Verpflanzung im Anschluss an myeloablative oder antiblastische Therapien zur Wiederherstellung der hämopoetischen Systeme und der Immunsysteme zu behandeln.
Verwendung von menschlichem Wachstumshormon oder einem seiner Derivate zur Steigerung in einem gesunden Spender der Anzahl von zur Verfügung stehenden zirkulierenden CD34⁺-Zellen, die in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, und die vorgesehen sind für Leukapherese und Reinfusion, Transplantation oder Verpflanzung in einen Empfänger, der die Zellen benötigt.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Arzneimittel separat oder gleichzeitig mit G-CSF verabreicht werden soll.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei das menschliche Wachstumshormon oder eines seiner Derivate separat oder gleichzeitig mit G-CSF verabreicht werden soll.
Verwendung nach Anspruch 1 zur Steigerung der Anzahl von zirkulierenden CD34⁺-Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in dem Patienten über einen Zeitraum von bis zu 20 Tagen.
Verwendung nach Anspruch 2 zur Steigerung der Anzahl von zirkulierenden CD34⁺-Zellen, welche in der Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, in einem gesunden Spender über einen Zeitraum von bis zu 20 Tagen.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1, 3 und 5, wobei das Arzneimittel eine oder mehrere Verbindung(en), ausgewählt aus den folgenden Gruppen von Verbindungen, umfasst: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine, monoclonale Antikörper.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2, 4 und 6, wobei das menschliche Wachstumshormon oder eines seiner Derivate separat oder gleichzeitig verabreicht werden soll mit einer oder mehrere(n) weiteren Verbindung(en) ausgewählt aus den folgenden Gruppen von Verbindungen: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine und monoclonale Antikörper.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 5, wobei das Arzneimittel separat oder gleichzeitig verabreicht werden soll mit einem oder mehrere(n) weiteren Arzneimittel(n) umfassend eine oder mehrere Verbindung(en) ausgewählt aus den folgenden Gruppen von Verbindungen: hämopoetische Wachstumsfaktoren, Cytokine, Chemokine und monoclonale Antikörper.
Verwendung nach einem der Ansprüche 7 bis 9, wobei die Cytokin-Gruppe IL-1, IL-3, IL-6, IL-11, Insulin-ähnlichen Wachstumsfaktor 1 (IGF-1), G-CSF, GM-CSF oder SCF umfasst; die Chemokin-Gruppe MIP-1α oder Thrombopoietin (TPO) umfasst; die monoclonale Antikörper-Gruppe Anti-VLA-4-Antikörper umfasst.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei die weitere Verbindung oder das Arzneimittel G-CSF umfasst.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1, 3, und 5, wobei das Arzneimittel täglich oder dreimal täglich verabreicht wird.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2, 4 und 6, wobei das menschliche Wachstumshormon oder eines seiner Derivate täglich oder dreimal täglich verabreicht wird.
Verwendung nach Anspruch 3 oder 4, wobei das Wachstumshormon dreimal täglich verabreicht wird und G-CSF täglich verabreicht wird.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1, 3 und 5, wobei das Arzneimittel über einen Zeitraum von drei Tagen und/oder bis zur Leukapherese verabreicht wird.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1, 3 und 5, wobei die Verabreichung des Arzneimittels etwa sieben Tage nach dem Beginn einer chemotherapeutischen Behandlung oder etwa 2 Tage nach der Beendigung einer chemotherapeutischen Behandlung beginnt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei das Wachstumshormon ein rekombinantes Wachstumshormon ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 4 bis 6, wobei das Wachstumshormon ein menschliches Wachstumshormon ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 4 bis 6, wobei die zirkulierenden Zellen, die in Lage sind, Hämopoese in vivo wiederherzustellen, CD34⁺/CD33⁺-Zellen und/oder CD34⁺/CD38^–-Zellen und/oder CD34⁺/Thy-I-Zellen und/oder CD34⁺/Thy-I/CD38^–-Zellen sind.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei der G-CSF in einer Menge zwischen 3 bis 15 μg/kg des Körpergewichts, in einer Menge zwischen 4 bis 12 μg/kg des Körpergewichts oder in einer Menge von etwa 5 oder 10 μg/kg des Körpergewichts zu verabreichen ist.