ES2275359T3 - Uso de hormona de crecimiento humana para incrementar el numero de celulas cd34+circulantes, destinadas a regenerar los sistemas hematopoyetico e inmunologico despues de terapias mieloablativas o antiblasticas, por transplante, reinfusion o injerto. - Google Patents
Uso de hormona de crecimiento humana para incrementar el numero de celulas cd34+circulantes, destinadas a regenerar los sistemas hematopoyetico e inmunologico despues de terapias mieloablativas o antiblasticas, por transplante, reinfusion o injerto. Download PDFInfo
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Abstract
El uso de una hormona del crecimiento humana, o uno de sus derivados, para preparar un medicamento que aumenta, en un paciente, el número de células CD34+ en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, en el que dichas células se utilizan para tratar, mediante reinfusión, transplante o injerto, el mismo paciente para el restablecimiento del sistema hematopoyético e inmunológico después de terapias mieloablativas o antiblásticas.
Description
Uso de hormona de crecimiento humana para
incrementar el número de células CD34^{+} circulantes, destinadas
a regenerar los sistemas hematopoyético e inmunológico después de
terapias mieloablativas o antiblásticas, por trasplante, reinfusión
o injerto.
El trasplante de médula ósea (TMO) es un
procedimiento clínico en el que células hematopoyéticas
pluripotenciales obtenidas a partir de médula ósea se trasplantan a
un paciente. El TMO es el tratamiento preferido en varios
trastornos hematológicos, incluyendo malignidades, deficiencias
inmunológicas combinadas graves (SCID), anomalías hematopoyéticas
congénita o genéticamente determinadas, anemia, anemia aplásica,
leucemia y osteopetrosis (Fischer et al., 1998). En los
últimos diez años, el uso del TMO creció desde menos de 5.000 a más
de 40.000 intervenciones anuales (Waters et al., 1998).
En el estado normal, la mayoría de las células
progenitoras y pluripotenciales hematopoyéticas se encuentran en la
médula ósea, y sólo un pequeño número de estas células se detectan
en sangre periférica. Sin embargo, pueden movilizarse más células
pluripotenciales hacia la sangre periférica mediante un tratamiento
con agentes mielosupresores y/o ciertos factores del crecimiento
hematopoyético (Van Hoef, 1998). Los estudios han demostrado que
células pluripotenciales de sangre periférica (PBSC) infusionadas en
un hospedante muestran un potencial mejorado para el injerto,
comparadas con células pluripotenciales y progenitoras derivadas de
la médula ósea (Gianni et al., 1989; Larsson et al.,
1998). Por tanto, las PBSC movilizadas mediante quimioterapia,
factores del crecimiento hematopoyético, o una combinación de estas
modalidades se utilizan, en la actualidad, en marcos de trasplantes
autólogos y no autólogos (Van Hoef, 1998; Anderlini y Korbling,
1997). En el caso del trasplante no autólogo, los donantes de
células pluripotenciales son individuos normales, y el procedimiento
para la movilización de células pluripotenciales hacia la corriente
sanguínea debe lograrse con una molestia mínima. En este caso, se
prefiere la movilización de las células pluripotenciales con
factores del crecimiento hematopoyético, frente al tratamiento con
fármacos antiblásticos (es decir, ciclofosfamida).
Se han estudiado varios factores del crecimiento
hematopoyético, tales como G-CSF, EPO y CSF, como
agentes movilizantes y, en la actualidad, se utilizan para aumentar
el número de PBSC antes de la leucaféresis (Henry, 1997; Weaver y
Testa, 1998). Los tratamientos destinados a estimular la
hematopoyesis global pueden ser de gran interés para movilizar un
gran conjunto de células progenitoras y células pluripotenciales. El
aumento de la movilización de células pluripotenciales es
extremadamente valioso en el contexto del trasplante de células
pluripotenciales hematopoyéticas, mediante la reducción del número
de leucaféresis requeridas para recoger una cantidad suficiente de
células pluripotenciales hematopoyéticas para ser trasplantadas.
La primera parte de la invención proporciona un
nuevo agente movilizante utilizado para aumentar el número de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo en un individuo.
El nuevo agente movilizante de la invención es
una hormona del crecimiento y, en especial, la hormona del
crecimiento humana (hGH) o uno de sus derivados, o cualquier factor
que induce la liberación de la hormona del crecimiento.
A menos que se indique lo contrario, el término
"GH" significa hormona del crecimiento ("growth hormone")
o uno de sus derivados dentro del contexto de la invención.
Ahora se ha descubierto que mediante la
administración de la hormona del crecimiento y, en especial, la
hormona del crecimiento humana (hGH) o uno de sus derivados, o
cualquier factor que induce la liberación de la hormona del
crecimiento, se obtiene una movilización de células capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo en la sangre periférica.
Por tanto, la hormona del crecimiento y, en especial, la hormona del
crecimiento humana (hGH) o uno de sus derivados, o cualquier factor
que induce la liberación de la hormona del crecimiento,
administrados por sí solos o en combinación con otros factores,
representa un nuevo método o uso para movilizar células capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo hacia la sangre
periférica.
La hormona del crecimiento humana (hGH), también
conocida como somatotropina, es una hormona proteica producida y
segregada por las células somatotrópicas de la pituitaria anterior.
La hGH desempeña un papel clave en el crecimiento somático a través
de sus efectos sobre el metabolismo de proteínas, carbohidratos y
lípidos. Además de sus efectos sobre el crecimiento somático, se ha
demostrado que la hGH estimula las células sanguíneas in
vitro (Derfalvi et al., 1998; Merchav et al.,
1988), aumenta los recuentos de eritrocitos y hemoglobina (Valerio
et al., 1997; Vihervuori et al., 1996), potencia la
proliferación y producción de Ig en líneas celulares plasmáticas
(Kimata y Yoshida, 1994), y estimula los recuentos de células
CD8^{+} y, en un grado menor, los recuentos de células CD4^{+}
(Geffner,
1997).
1997).
Los usos de la invención que emplean el agente
movilizante de la invención tienen varias ventajas:
- Existe un número bajo de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis. Este número es
considerado insuficiente para proporcionar una dosis de células de
injerto mediante una única o múltiples aféresis en un periodo de
tiempo razonable. Los métodos y usos de la invención resuelven este
problema mediante una periferalización temporal de dichas células y
subconjuntos hacia la sangre en circulación, que se utiliza
ampliamente para aumentar significativamente en la sangre el
rendimiento de las células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, minimizando, con ello, el número de
aféresis requeridas para lograr una dosis de injerto.
- Otras ventajas de los métodos y usos de la
invención incluyen la posibilidad de:
a) evitar la necesidad de una anestesia
general,
b) realizar la recolección incluso si los huesos
iliacos están dañados por una radioterapia previa, o están
infiltrados con células malignas,
c) lograr el restablecimiento de las funciones
hematopoyéticas sostenidas con más rapidez que con células
progenitoras derivadas de la médula ósea,
d) lograr el restablecimiento de las funciones
hematopoyéticas sostenidas con más rapidez y eficacia que sin un
pretratamiento que incluye un método o un uso de la invención.
- En general, los usos de la invención son
eficaces y seguros para movilizar hacia la sangre periférica células
que son capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo.
- Los usos de la invención no son tóxicos a la
vista de los parámetros principales de toxicidad que son, por
ejemplo, crecimiento tumoral, síntomas clínicos e instrumentales, o
ensayos de laboratorio para la función cardíaca, hepática y
renal.
- El aumento de la movilización de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo
obtenido con los usos de la invención es extremadamente valioso en
el contexto del trasplante de células pluripotenciales
hematopoyéticas, mediante la reducción del número de leucaféresis
requeridas para recoger una cantidad suficiente de células
hematopoyéticas para ser trasplantadas.
- Los usos de la invención conducen a una
reducción del volumen de sangre requerido para ser procesado durante
el procedimiento de aféresis o leucaféresis para obtener el número
diana especificado de células. Las ventajas de procesar un volumen
reducido de sangre son que el paciente pasa menos tiempo en la
máquina de separación de células, se reduce la toxicidad del
proceso, en particular en términos de volumen de anticoagulante al
cual se expone el paciente durante el procedimiento, se reduce el
tiempo en la máquina y el tiempo del operario.
- Además, el trasplante de una población de
células sanguíneas enriquecida con células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, habiéndose obtenido dicha población a
partir de sangre periférica mediante los métodos o usos de la
invención, tiene el efecto de potenciar la reconstitución de los
sistemas hematopoyético e inmunológico del paciente después de
terapias mieloablativas o antiblásticas. La presente invención se
realiza según las reivindicaciones.
La presente descripción describe un método para
la preparación de una población de células en circulación capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo, que comprende:
a) administrar a un donante una composición que
comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, en
una cantidad suficiente para aumentar en dicho donante el número de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo,
b) aislar una población de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo a
partir de la sangre periférica de dicho donante.
Este método produce, por tanto, una población de
células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo,
estando destinada esta población para el trasplante en el mismo
individuo o en individuos diferentes.
Por tanto, la presente descripción describe un
método de preparación de una población de células sanguíneas
enriquecida con células capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, que comprende:
a) administrar a un donante una composición que
comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, en
una cantidad suficiente para aumentar en dicho donante el número de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo,
b) aislar una población de células sanguíneas
enriquecidas con células capaces de regenerar la hematopoyesis
in vivo a partir de la sangre periférica de dicho
donante.
La presente descripción también describe un
método para aislar un número mayor de células en circulación capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo a partir de un
donante, que comprende:
a) administrar a un donante una composición que
comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, por
sí solos o en combinación con otros factores del crecimiento
hematopoyético al sujeto en una cantidad suficiente para inducir la
movilización de células capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo hacia la sangre periférica,
b) aislar una población de células sanguíneas
enriquecida con células capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo a partir de la sangre periférica de dicho donante.
La presente descripción también describe un
método de preparación de una población de células en circulación
capaces de regenerar la hematoyesis in vivo, que
comprende:
a) administrar a un donante una composición que
comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, en
una cantidad suficiente para inducir en dicho donante la
movilización o periferalización de células en circulación capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo,
b) aislar una población de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo a
partir de la sangre periférica de dicho donante, o aislar una
población de células sanguíneas enriquecida con células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo a
partir de la sangre periférica de dicho donante.
La etapa b) [es decir, "aislar una población
de (células sanguíneas enriquecida con) células capaces de regenerar
la hematopoyesis in vivo a partir de la sangre periférica de
dicho donante"] de los métodos o usos de la invención puede
corresponder a la operación de retirar sangre periférica del
donante, en la que el número de células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo ha aumentado mediante la administración
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, por sí
solos o en combinación con otros factores.
Una cantidad suficiente para aumentar el número
de células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis
in vivo, una cantidad suficiente para inducir la movilización
o periferalización de células en circulación capaces de regenerar
la hematopoyesis in vivo, o una cantidad suficiente para
inducir la movilización de células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo hacia la sangre periférica puede
administrarse en una o varias dosis durante uno o varios días.
La operación de retirar sangre periférica del
donante puede corresponder a una leucaféresis. La leucaféresis es
un procedimiento en el que los leucocitos se retiran de la sangre
extraída, y el resto de la sangre se vuelve a transfusionar al
donante.
Las células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo presentes en la población aislada de
células sanguíneas pueden purificarse aún más para aumentar la
concentración de dichas células. Dicha purificación puede realizarse
mediante la selección positiva de células CD34 positivas.
La presente descripción también describe un
método de preparación de un donante de células en circulación,
siendo dichas células capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, que comprende la administración a dicho donante de una
composición que comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus
derivados, en una cantidad suficiente para aumentar el número de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo en dicho
donante.
donante.
La presente descripción también describe un
método para aumentar el número de células en circulación capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo en un donante mediante la
administración a dicho donante de una composición que comprende una
hormona del crecimiento, o uno de sus derivados.
El término "aumentado", "aumento" o
"mayor" y el término "enriquecido" significan, en general,
en el contexto de la invención, que el parámetro (número)
"aumentado" o "enriquecido" tiene un valor por encima del
valor estándar de este parámetro. El valor estándar del parámetro
se mide en un cuerpo o en una muestra de un cuerpo que no ha
recibido ningún agente movilizante de células capaces de regenerar
la hematopoyesis in vivo. El valor estándar del número de
células CD34^{+} por microlitro de sangre es, por ejemplo, 3,8 (+
o - 3,2) por microlitro de sangre periférica (Anderlini et
al., 1997).
Las células en circulación capaces de regenerar
la hematopoyesis in vivo son células CD34^{+}.
La frecuencia de células CD34^{+} en la sangre
puede medirse mediante medidas FACS (Siena et al., 1989 y
1991).
El mayor número de células CD34^{+} en la
sangre periférica del donante, o el nivel de enriquecimiento de
células CD34^{+} en la preparación aislada de células sanguíneas
puede ser más de 10, 25, 34 u 80 células CD34^{+} por microlitro
de sangre periférica.
El mayor número de células CD34^{+} en la
sangre periférica del donante, o el nivel de enriquecimiento de
células CD34^{+} en la preparación aislada de células sanguíneas
puede ser al menos 2 x 10^{6} células CD34^{+} por kilogramo de
peso corporal del receptor, o al menos 4 x 10^{6} de células
CD34^{+} por kilogramo de peso corporal del receptor, o al menos
8 x 10^{6} de células CD34^{+} por kilogramo de peso corporal
del receptor.
El mayor número de células CD34^{+} en la
sangre periférica del donante, o el nivel de enriquecimiento de
células CD34^{+} en la preparación aislada de células sanguíneas
puede ser al menos 2 x 10^{6}, 4 x 10^{6}, 5 x 10^{6}, 6 x
10^{6}, 8 x 10^{6} ó 15 x 10^{6} de células CD34^{+} por
kilogramo de peso corporal del donante.
Existe una correlación entre el número de
células CD34^{+} requeridas para el trasplante y la
correspondiente actividad GM-CFC que puede medirse
(Weaver et al., 1998). Por tanto, el mayor número de células
en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, o el nivel de enriquecimiento de células capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo en la preparación aislada
de células sanguíneas puede corresponder al menos a 1 x 10^{5}
GM-CFC por kilogramo de peso corporal del donante o
receptor.
El número de células CD34^{+} en la sangre se
correlaciona bien con CFU-GM (Siena et al.,
1991). CFU-GM es la unidad formadora de colonias de
granulocitos y macrófagos. Por tanto, un mayor número de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, o
el nivel de enriquecimiento de células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo en la preparación aislada de células
sanguíneas puede corresponder al menos a 500 CFU-GM
por mililitro de sangre periférica.
Con el mismo razonamiento, el mayor número de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, o el nivel de enriquecimiento de células capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo en la preparación aislada
de células sanguíneas puede corresponder a una mayor nivel de
CFU-C, CFU-Meg o
BFU-E. CFU-C es la unidad formadora
de colonias en cultivo; CFU-Meg es la unidad
formadora de colonias de megacariocitos; y BFU-E es
la unidad formadora de estallido eritroide.
El número de células CD34^{+} en la sangre se
correlaciona bien con el recuento de leucocitos. Por tanto, un
número mayor de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, o el nivel de enriquecimiento de
células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo en la
preparación aislada de células sanguíneas puede corresponder al
menos a 1000 leucocitos por microlitro de sangre periférica.
Las células CD34^{+} en circulación capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo pueden ser células
CD34^{+}/CD33^{+} y/o células CD34^{+}/CD38^{-} y/o células
CD34^{+}/Thy-I y/o células
CD39^{+}/Thy-L/CD38^{-} y/o células CD33^{-}
y/o células pluripotenciales de la médula ósea y/o células
progenitoras y/o células iniciadoras de cultivo a largo plazo
(LTC-IC) y/o células que cumplen el potencial de
autorrenovación y/o células que cumplen las características
pluripotenciales y/o células que inician el cultivo de médula ósea a
largo plazo y/o células que pueden generar múltiples líneas
celulares. Las líneas celulares pueden ser células sanguíneas
totalmente diferenciadas.
Las células CD34^{+}/CD38^{-} y las células
CD34^{+}/Thy-I y las células
CD34^{+}/Thy-L/CD38^{-} se describen, por
ejemplo, en Anderlini et al. (véanse las referencias). Las
células CD34^{+}/CD33^{+} y las células CD33^{+} se
describen, por ejemplo, en Siena et al., 1991 (véanse las
referencias). Las células iniciadores de cultivo a largo plazo
(LTC-IC) se describen, por ejemplo, en Heather et
al. (véanse las referencias). Las células que cumplen el
potencial de autorrenovación y/o las células que cumplen las
características pluripotenciales y/o las células que inician el
cultivo de médula ósea a largo plazo se describen, por ejemplo, en
Anderlini et al. (véanse las referencias).
La invención se refiere, de forma específica, al
uso de una hormona del crecimiento humana, o uno de sus derivados,
para preparar un medicamento que aumenta, en un paciente, el número
de células CD34^{+} en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, en el que dichas células se utilizan
para tratar, mediante reinfusión, trasplante o injerto, el mismo
paciente para el restablecimiento del sistema hematopoyético e
inmunológico después de terapias mieloablativas o
antiblásticas.
En otra realización, la invención se refiere al
uso de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
aumentar en un donante sano el número de células CD34^{+} en
circulación capaces de regenerar la hemapoyesis in vivo
disponibles y previstas para la leucaféresis y la reinfusión,
trasplante o injerto en un receptor que necesita dichas
células.
Los siguientes usos también se describen en la
presente:
- El uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para aumentar o expandir el número de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo.
- El uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para periferalizar células capaces de regenerar
la hematopoyesis in vivo.
- El uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para preparar un medicamento o una composición
para aumentar o expandir el número de células en circulación capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo.
- El uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para preparar un medicamento o una composición
para periferalizar células capaces de regenerar la hematopoyesis
in vivo.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que las células en circulación capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo son células
CD34^{+}.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el mayor número de células CD34^{+} es más
de 10, 25, 34 u 80 células CD34^{+} por microlitro de sangre
periférica.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el mayor número de células CD34^{+} es al
menos 2 x 10^{6} de células CD34^{+} por kilogramo de peso
corporal del receptor, o al menos 4 x 10^{6} de células
CD34^{+} por kilogramo de peso corporal del receptor, o al menos 8
x 10^{6} de células CD34^{+} por kilogramo de peso corporal del
receptor.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el mayor número de células CD34^{+} es al
menos 2 x 10^{6}, 4 x 10^{6}, 5 x 10^{6}, 6 x 10^{6}, 8 x
10^{6} ó 15 x 10^{6} de células CD34^{+} por kilogramo de
peso corporal del donante.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el mayor número de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo corresponde al
menos a 1 x 10^{5} GM-CFC por kilogramo de peso
corporal del donante o receptor.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el mayor número de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo corresponde al
menos a 500 CFU-GM por mililitro de sangre
periférica.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el mayor número de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo corresponde a
un mayor nivel de CFU-C, CFU-Meg o
BFU-E.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el mayor número de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo corresponde
sustancialmente a un recuento de leucocitos que es al menos 1000
células por microlitro de sangre periférica.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que las células CD34^{+} en circulación capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo son células
CD34^{+}/CD33^{+} y/o células CD34^{+}/CD38^{-} y/o células
CD34^{+}/Thy-I y/o células
CD34^{+}/Thy-I/CD38^{-} y/o células CD33^{-}
y/o células pluripotenciales y/o células progenitoras y/o células
iniciadoras de cultivo a largo plazo (LTC-IC) y/o
células que cumplen el potencial de autorrenovación y/o células que
cumplen las características pluripotenciales y/o células que
inician el cultivo de médula ósea a largo plazo.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el medicamento o composición comprende además
uno o varios compuestos elegidos entre los siguientes grupos de
compuestos: factores del crecimiento hematopoyético, citoquinas,
quimioquinas, anticuerpos monoclonales.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el grupo de citoquinas comprende
IL-1, IL-3, G-CSF,
GM-CSF o SCF; el grupo de quimioquinas comprende
MIP-1\alpha o trombopoyetina (TPO); el grupo de
anticuerpos monoclonales comprende anticuerpos
anti-VLA-4.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el medicamento o composición comprende una
hormona del crecimiento y G-CSF.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la GH y el G-CSF se
administran por separado y/o de modo simultáneo.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la hormona del crecimiento se administra en
una cantidad de aproximadamente 33 \mug por kilogramo de peso
corporal.
- El uso según uno cualquiera de los dos usos
anteriores, en el que el G-CSF se administra en una
cantidad de aproximadamente 5 \mug o aproximadamente 10 \mug
por kilogramo.
- El uso según uno cualquiera de los dos usos
anteriores, en el que la administración se realiza por vía
intravenosa o subcutánea.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza por vía
parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular,
intraperitoneal, transdérmica o bucal.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza a diario o tres
veces diarias.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración de la hormona del
crecimiento se realiza tres veces diarias, y la administración del
G-CSF se realiza a diario.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza a lo largo de un
periodo de 5 días, o a lo largo de un periodo de 10 días, hasta la
leucaféresis o hasta la recuperación completa.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza hasta la
leucaféresis o hasta la recuperación completa.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la hormona del crecimiento es una hormona del
crecimiento recombinante.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la hormona del crecimiento es una hormona del
crecimiento humana.
La presente descripción también describe un
método de preparación de una población de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, que
comprende:
a) administrar a un donante una composición que
comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, en
una cantidad suficiente para reducir el volumen de sangre requerido
para ser procesado para obtener el número diana especificado de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo,
b) procesar o aislar dicho volumen reducido de
sangre; y, opcionalmente
c) aislar una población de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo a
partir de dicho volumen aislado.
La etapa b) o c) [aislar una población de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo a partir de dicho volumen aislado] de los métodos o usos
descritos en la presente puede corresponder a la operación de
retirar sangre periférica del donante, en la que el número de
células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo ha
aumentado mediante la administración de una hormona del crecimiento,
o uno de sus derivados, por sí solos o en combinación con otros
factores.
Una cantidad suficiente para reducir el volumen
de sangre requerido para ser procesado para obtener el número diana
especificado de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo puede administrarse en una o varias
dosis durante uno o varios días.
La operación de retirar sangre periférica del
donante puede corresponder a una leucaféresis. La leucaféresis es
un procedimiento en el que se retiran los leucocitos de la sangre
extraída y el resto de la sangre se retransfusiona al donante.
Las células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo presentes en la población aislada de
células sanguíneas pueden purificarse aún más para aumentar la
concentración de dichas células. Dicha purificación puede realizarse
mediante selección positiva de células CD34 positivas.
La presente descripción también describe un
método de preparación de un donante de células en circulación,
siendo capaces dichas células de regenerar la hematopoyesis in
vivo, que comprende la administración a dicho donante de una
composición que comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus
derivados, en una cantidad suficiente para reducir el volumen de
sangre requerido para ser procesado para obtener el número diana
especificado de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo y/o para reducir el número de
leucaféresis requeridas para recoger una cantidad suficiente de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo para ser trasplantadas.
Una cantidad suficiente para reducir el volumen
de sangre requerido para ser procesado para obtener el número diana
especificado de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo y/o para reducir el número de
leucaféresis requeridas para recoger una cantidad suficiente de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo para ser trasplantadas puede administrarse en una o varias
dosis durante uno o varios días.
El volumen de sangre requerido para ser
procesado puede ser el volumen de sangre requerido para ser
procesado durante el procedimiento de aféresis o leucaféresis.
La presente descripción también describe un
método para reducir el volumen de sangre requerido para ser
procesado para obtener el número diana especificado de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo en
un donante y/o para reducir el número de leucaféresis requeridas
para recoger una cantidad suficiente de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo para ser
trasplantadas, mediante la administración de una composición que
comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, a
dicho donante.
El término "reducido" significa, en
general, a la vista de la invención, que el parámetro (volumen)
"reducido" tiene un valor que es inferior al valor estándar de
este parámetro.
El número diana especificado de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo es
al menos 2 x 10^{4} LTC-IC por kg de peso
corporal del donante o receptor, aproximadamente o más de 2 x
10^{6} células CD34^{+} por kg de peso corporal del donante o
receptor, aproximadamente o más de 4 x 10^{6} células CD34^{+}
por kg de peso corporal del donante o receptor, o aproximadamente o
más de 8 x 10^{6} células CD34^{+} por kg de peso corporal del
donante o receptor.
El volumen requerido de sangre puede estar en un
intervalo de aproximadamente 30 a aproximadamente 900
mililitros.
Los siguientes usos también se describen en la
presente:
- El uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para reducir el volumen de sangre requerido para
ser procesado para obtener el número diana especificado de células
en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo.
- El uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para preparar un medicamento o una composición
para reducir el volumen de sangre requerido para ser procesado para
obtener el número diana especificado de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo.
- El uso según el uso anterior, en el que el
número diana especificado de células en circulación capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo es aproximadamente o más
de 2 x 10^{4} LTC-IC por kg de peso corporal del
donante o receptor, aproximadamente o más de 2 x 10^{6} células
CD34^{+} por kg de peso corporal del donante o receptor,
aproximadamente o más de 4 x 10^{6} células CD34^{+} por kg de
peso corporal del donante o receptor, o aproximadamente o más de 8
x 10^{6} células CD34^{+} por kg de peso corporal del donante o
receptor.
- El uso según uno cualquiera de los dos usos
anteriores, en el que el volumen requerido de sangre está en un
intervalo de aproximadamente 30 a aproximadamente 900
mililitros.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el medicamento o composición comprende además
uno o varios compuestos elegidos entre los siguientes grupos de
compuestos: factores del crecimiento hematopoyético, citoquinas,
quimioquinas, anticuerpos monoclonales.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el grupo de citoquinas comprende
IL-1, IL-3, G-CSF,
GM-CSF o SCF; el grupo de quimioquinas comprende
MIP-1\alpha o trombopoyetina (TPO); el grupo de
anticuerpos monoclonales comprende anticuerpos
anti-VLA-4.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que el medicamento o composición comprende una
hormona del crecimiento y G-CSF.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la GH y el G-CSF se
administran por separado y/o de modo simultáneo.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la hormona del crecimiento se administra en
una cantidad de aproximadamente 33 \mug por kilogramo de peso
corporal.
- El uso según uno cualquiera de los dos usos
anteriores, en el que el G-CSF se administra en una
cantidad de aproximadamente 5 \mug o aproximadamente 10 \mug
por kilogramo.
- El uso según uno cualquiera de los dos usos
anteriores, en el que la administración se realiza por vía
intravenosa o subcutánea.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza por vía
parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular,
intraperitoneal, transdérmica o bucal.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza a diario o tres
veces diarias.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración de la hormona del
crecimiento se realiza tres veces diarias, y la administración del
G-CSF se realiza a diario.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza a lo largo de un
periodo de 5 días, o a lo largo de un periodo de 10 días, hasta la
leucaféresis o hasta la recuperación completa.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la administración se realiza hasta la
leucaféresis o hasta la recuperación completa.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la(s) administración(es) se
realiza(n) después de quimioterapia, radioterapia, terapia
mielosupresora, trasplante de células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, o trasplante de médula ósea.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la(s) administración(es)
comienza(s) aproximadamente 7 días después del comienzo del
tratamiento quimioterapéutico, o aproximadamente 2 días después del
final del tratamiento quimioterapéutico.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la hormona del crecimiento es una hormona del
crecimiento recombinante.
- El uso según uno cualquiera de los usos
anteriores, en el que la hormona del crecimiento es una hormona del
crecimiento humana.
En esta solicitud:
- La expresión "en circulación" puede
sustituirse por el término "sangre" o la expresión "sangre
periférica".
- El término "preparación" en la expresión
"método de preparación" puede sustituirse por
"pretratamiento" o por "preparación para la extracción de
sangre o leucaféresis".
- Un "donante" como se indica en los
métodos o usos de la invención puede ser un ser humano o un animal,
un individuo sano o enfermo (paciente). Dicho animal es
preferiblemente un mamífero, y puede elegirse entre animales
domésticos, tales como perros, gatos, etc., o animales tales como
caballos, ganado vacuno, ovejas.
- El término "hematopoyesis" puede
significar la formación de células sanguíneas.
- La expresión "hormona del crecimiento"
incluye la hormona del crecimiento humana (hGH) y todas las
proteínas homólogas de la hormona del crecimiento humana de
diferente especies y todos los homólogos de la hormona del
crecimiento humana en especies distintas a la humana. Las especies
distintas a la humana pueden ser cualquier tipo de animal doméstico
o caballo, por ejemplo.
En una realización preferida, la hormona del
crecimiento es la hormona del crecimiento humana. La hormona del
crecimiento humana (hGH), también conocida como somatotropina, es
una hormona proteica producida y segregada por las células
somatotrópicas de la pituitaria anterior. La hGH desempeña un papel
clave en el crecimiento somático a través de sus efectos sobre el
metabolismo de proteínas, carbohidratos y lípidos.
La hormona del crecimiento humana es una única
cadena polipeptídica de 101 aminoácidos que tiene dos enlace
disulfuro, uno entre Cys-53 y
Cys-165, que forma un gran bucle en la molécula, y
el otro entre Cys-182 y Cys-189,
que forma un bucle pequeño cerca del C-terminal.
El término "derivado" en la expresión
"derivados de la hormona del crecimiento" significa, en el
contexto de la invención, moléculas que son diferentes
estructuralmente de la GH pero que conservan la función de la GH
con respecto a su efecto directo o indirecto sobre el metabolismo de
proteínas, carbohidratos y lípidos y/o su efecto de movilización
y/o el efecto de recuperación (es decir, "movilización o
periferalización de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, aumento del número de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo,
reducción del número de leucaféresis requeridas para recoger una
cantidad suficiente de células en circulación para el trasplante,
reducción del volumen de sangre requerido para ser procesado para
obtener el número diana especificado de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo").
Los derivados de la hormona del crecimiento
(hGH) incluidos en la invención incluyen los derivados que aparecen
en la naturaleza, los variantes y productos metabólicos, los
productos de la degradación principalmente de hGH biosintética y
los derivados modificados de hGH producidos mediante métodos
genéticos. Cualquier derivado de hGH puede utilizarse para los
fines de la presente invención, con la condición de mantenga la
actividad biológica de hGH a la vista de la invención.
Los ejemplos de derivados son variantes de corte
y empalme, oligómeros, agregados, productos de la ruptura
proteolítica, variantes que tienen sustituciones, inserciones o
deleciones de uno o más aminoácidos, etc.
La metionil-hGH es un ejemplo de
un derivado de hGH que se produce mediante la tecnología de ADN
recombinante. Este compuesto en realidad es un derivado de hGH que
un resto metionina adicional en su N-terminal
(Goeddel et al., 1979).
Otro ejemplo de derivado de hGH es un variante
que aparece en la naturaleza de hGH denominado
20-K-hGH que se ha indicado que
aparece en la pituitaria, así como en la corriente sanguínea (Lewis
et al., 1978; Lewis et al., 1980). Este compuesto, no
tiene los 15 restos aminoácidos desde Glu-32 a
Gln-46, surge de un corte alternativo del ácido
ribonucleico mensajero (DeNoto et al., 1981).
Otro ejemplo de derivado de hGH está acetilado
en el N-terminal (Lewis et al., 1979).
La hormona del crecimiento humana también puede
encontrarse en forma oligómera monómera, dímera y otras formas de
mayor peso molecular, o en una mezcla de dichas formas.
La hormona del crecimiento humana puede estar en
formas agregadas que se encuentran en la pituitaria y en la
circulación (Stolar et al., 1984; Stolar y Baumann,
1986).
La forma dímera de hGH puede ser de varios tipos
diferenciados:
- un dímero de disulfuro conectado a través de
enlaces disulfuro intercatenarios (Lewis et al., 1977),
- un dímero covalente o irreversible que se
detecta sobre geles de dodecilsulfato de
sodio-poliacrilamida, y que no es un dímero de
disulfuro (Bewley y Li, 1975), y
- un dímero no covalente que puede disociarse
con facilidad en hGH monómera mediante un tratamiento con agentes
que rompen las interacciones hidrófobas en proteínas (Becker et
al., 1987),
- un complejo dímero con Zn^{2+} (Cunningham
et al., 1991).
Un análisis de Scatchard ha revelado que se
asocian dos iones Zn^{2+} por dímero de hGH de una manera
cooperativa, y se ha descubierto que este complejo dímero
Zn^{2+}-hGH es más estable frente a la
desnaturalización que la hGH monómera (Cunningham et al.,
1991).
Una serie de derivados de hGH surge de las
modificaciones proteolíticas de la molécula. La vía principal para
el metabolismo de hGH implica la proteolisis. La vía principal para
el metabolismo de la hGH implica la proteolisis. La región de hGH
alrededor de los restos 130-150 es extremadamente
susceptible a la proteolisis, y se han descrito varios derivados de
hGH que tienen muescas o deleciones en esta región
(Thorlacius-Ussing, 1987). Esta región está en el
bucle grande de hGH, y la ruptura de un enlace peptídico allí
produce la generación de dos cadenas que están conectadas a través
del enlace disulfuro en Cys-53 y
Cys-165. Se indica que muchas de estas formas
bicatenarias tienen mayor actividad biológica (Singh et al.,
1974).
Muchos derivados de la hormona del crecimiento
humana se han generado de modo artificial mediante el uso de
enzimas. Las enzimas tripsina y subtilisina, así como otras, se han
utilizado para modificar la hGH en diversos puntos a lo largo de la
molécula (Lewis et al., 1977). Uno de estos derivados,
denominado proteína anabólica bicatenaria (2-CAP),
se formó mediante la proteolisis controlada de hGH utilizando
tripsina.
Otro ejemplo de derivado de hGH es hGH
desamidada. Los restos asparagina y glutamina en las proteínas son
susceptibles a reacciones de desamidación bajo condiciones
apropiadas. Un ejemplo de hGH desamidada es la hGH de pituitaria,
que se ha demostrado que sufre este tipo de reaccion, dando como
resultado la conversión de Asn-152 en ácido
aspártico y también, en menor grado, la conversión de
Gln-137 en ácido glutámico (Lewis et al.,
1981). Otro ejemplo de hGH desamidada es hGH biosintética, que se
sabe que se degrada bajo ciertas condiciones de conservación, dando
como resultado la desamidación en una asparagina diferente
(Asn-149). Éste es el principal sitio de
desamidación, pero también se ha observado la desamidación en
Asn-152 (Becker et al., 1988). No se ha
indicado la desamidación en Gln-137 en hGH
biosintética.
Otro ejemplo de derivado de hGH es
sulfóxido-hGH. Los restos metionina en las proteínas
son susceptible a la oxidación, principalmente para producir el
sulfóxido. La hGH derivada de pituitaria y biosintética sufren
sulfoxidaciones en Met-14 y Met-125
(Becker et al., 1988). También se ha indicado la oxidación en
Met-170 en hGH de pituitaria, pero no en hGH
biosintética.
Otro ejemplo de derivado de hGH son las formas
truncadas de hGH, que se han producido mediante las acciones de
enzimas o mediante métodos genéticos. El 2-CAP,
generado mediante las acciones controladas de la tripsina, tiene
eliminados los ocho primeros restos en el N-terminal
de hGH. Se han producido otras versiones truncadas de hGH mediante
la modificación del gen antes de la expresión en un hospedante
adecuado. Los primeros 13 restos se han eliminado para producir un
derivado que tiene propiedades biológicas diferenciadas, en el que
la cadena polipeptídica no se ha roto (Gertler et al.,
1986).
La hGH y sus derivados pueden producirse
mediante la tecnología del ADN recombinante, que permite la
producción de un suministro ilimitado de hGH en una serie de
sistemas diferentes. La purificación de hGH o sus derivados a
partir del medio de cultivo se ve facilitada por las bajas
cantidades de proteínas contaminantes presentes. De hecho, se ha
demostrado que la hGH puede purificarse a escala de laboratorio
mediante una única etapa de purificación en una columna de HPLC de
fase inversa.
La hGH recombinante se comercializa, en general,
en forma de viales que contienen hGH más otros excipientes, por
ejemplo, glicina y manitol, en forma liofilizada. Se proporciona un
vial de diluyente adjunto, permitiendo al paciente la
reconstitución del producto hasta la concentración deseada antes de
la administración de la dosis.
En general, no se han observado diferencias
significativas en la actividades biológicas o farmacocinéticas de
la hGH de secuencia natural recombinante, la
N-metionil-hGH recombinante, o el
material derivado de pituitaria en seres humanos (Moore et
al., 1988; Jorgensen et al., 1988).
La hormona del crecimiento humana tal como se
utiliza en la presente invención puede incluir derivados funcionales
como se indicó anteriormente, así como otros tipos de derivados,
fragmentos, variantes, análogos o derivados químicos. Un derivado
funcional mantiene al menos una porción de la secuencia de
aminoácidos de hGH que permite su utilización según la presente
invención, es decir la movilización de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, por
ejemplo.
En el significado de la invención, un
"derivado" puede ser:
- Un "fragmento" de la hormona del
crecimiento humana según la presente invención se refiere a
cualquier subconjunto de la molécula, es decir, un péptido más
corto.
- Un "variante" de la hormona del
crecimiento humana según la presente invención se refiere a una
molécula que es sustancialmente similar al péptido entero o un
fragmento de éste. Los variantes peptídicos pueden prepararse, de
forma convencional, mediante síntesis química directa del variante
peptídico, utilizando métodos conocidos en la
técnica.
técnica.
Como alternativa, pueden prepararse variantes de
aminoácidos de hGH mediante mutaciones en el ADNc que codifica los
derivados de hGH sintetizados. Estos variantes comprenden
deleciones, inserciones o sustituciones de restos dentro de la
secuencia de aminoácidos. También puede realizarse cualquier
combinación de deleciones, inserciones y sustituciones, con la
condición de que el constructo final posea la actividad deseada.
A nivel genético, estos variantes normalmente se
preparan mediante mutagénesis dirigida específica de sitio (como se
ejemplifica en Adelman et al., 1983) de nucleótidos en el ADN
que codifica la molécula peptídica, produciendo, con ello, ADN que
codifica el variante, y después expresando el ADN en un cultivo de
células recombinantes. Los variantes muestran, de forma típica, la
misma actividad biológica que los péptidos que no son
variantes.
- Un "análogo" de la hormona del
crecimiento humana según la presente invención se refiere a una
molécula no natural que es sustancialmente similar a la molécula
entera o a un fragmento activo de ésta.
- Un "derivado químico" de la hormona del
crecimiento humana según la presente invención contiene restos
químicos adicionales que normalmente no forman parte de la
secuencia de aminoácidos del derivado de la hormona del crecimiento
humana. Las modificaciones covalentes de la secuencia de aminoácidos
se incluyen dentro del alcance de esta invención. Estas
modificaciones pueden introducirse en la hormona del crecimiento
humana haciendo reaccionar los restos aminoácidos diana del péptido
con un agente derivatizante orgánico que es capaz de reaccionar con
cadenas laterales seleccionadas o restos terminales.
Los tipos de sustituciones que pueden realizarse
en la hormona del crecimiento humana según la presente invención
pueden basarse en el análisis de las frecuencias de cambios de
aminoácidos entre una proteína homóloga de una especie diferente.
Basándose en estos análisis, las sustituciones conservativas pueden
definirse en la presente como intercambios dentro de uno de los
cinco siguientes grupos:
I: restos pequeños, alifáticos, no polares o
ligeramente polares: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly
II: restos polares, cargados negativamente y sus
amidas: Asp, Asn, Glu, Gln
III: restos polares, cargados positivamente:
His, Arg, Lys
IV: restos grandes, alifáticos, no polares: Met,
Leu, Ile, Val, Cys
V: restos grandes, aromáticos: Phe, Try, Trp
Dentro de los grupos anteriores, se considera
que las siguientes sustituciones son "altamente
conservativas":
- -
- Asp/Glu
- -
- His/Arg/Lys
- -
- Phe/Tyr/Trp
- -
- Met/Leu/Ile/Val
Las sustituciones semiconservativas se definen
como intercambios entre dos de los grupos (I) - (IV) anteriores,
que se limitan al supergrupo (A), que comprende (I), (II) y (III)
anteriores, o al supergrupo (B), que comprende (IV) y (V)
anteriores. Las sustituciones no se limitan a los aminoácidos
codificados genéticamente, ni siquiera a los aminoácidos que
aparecen en la naturaleza. Cuando se prepara el epitopo mediante
síntesis peptídica, el aminoácido deseado puede utilizarse
directamente. Como alternativa, un aminoácido codificado
genéticamente puede modificarse haciéndolo reaccionar con un agente
derivatizante orgánico que es capaz de reaccionar con cadenas
laterales seleccionadas o restos terminales.
Los restos cisteinilo se hacen reaccionar, de
modo más habitual, con alfa-haloacetatos (y las
correspondientes aminas), tales como ácido cloroacético o
cloroacetamida, para producir derivados de carboximetilo o
carboxiamidometilo. Los restos cisteinilo también se derivatizan
haciéndolos reaccionar con bromotrifluoroacetona, ácido
alfa-bromo-beta-(5-imidazolil)propiónico,
fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas,
disulfuro de
3-nitro-2-piridilo,
disulfuro de metil-2-piridilo,
p-cloromercuribenzoato,
2-cloromercuri-4-nitrofenol,
o
cloro-7-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol.
Los restos histidilo se derivatizan haciéndolos
reaccionar con dietilprocarbonato a pH 5,5-7,0,
porque este agente es relativamente específico para la cadena
lateral de histidilo. El bromuro de parabromofenacilo también es
útil; la reacción se realiza preferiblemente en cacodilato de sodio
0,1 M a pH 6,0.
Los restos lisinilo y
amino-terminales se hacen reaccionar con anhídrido
de ácido succínico u otro anhídrido de ácido carboxílico. La
derivatización con estos agentes tiene el efecto de revertir la
carga de los restos lisinilo. Otros reactivos adecuados para
derivatizar los restos que contienen
alfa-aminoácidos incluyen imidoésteres, tales como
picolinimidato de metilo; fosfato de piridoxal; piridoxal;
cloroborohidruro; ácido trinitrobencensulfónico;
O-metiliosurea; 2,4-pentandiona; y
reacción con glioxilato catalizada con transaminasa.
Los restos arginilo se modifican haciéndolos
reaccionar con uno o varios reactivos convencionales, entre éstos
fenilglioxal; 2,3-butandiona; y ninhidrina. La
derivatización de los restos arginina requiere que la reacción se
realice en condiciones alcalinas, debido al alto pKa del grupo
funcional guanidina. Además, estos reactivos pueden reaccionar con
los grupos de lisina, así como con el grupo
épsilon-amino de arginina.
La modificación específica de los restos
tirosilo, per se, se ha estudiado a fondo, con interés
particular en introducir marcadores espectrales en los restos
tirosilo mediante reacción con compuestos de diazonio aromáticos o
tetranitrometano. Más habitualmente, se utilizan
N-acetilimidazol y tetranitrometano para formar
especies de O-acetiltirosilo y derivados de
e-nitro, respectivamente.
Los grupos laterales de carboxilo (aspartilo o
glutamilo) se modifican de forma selectiva haciéndolos reaccionar
con carbodiimidas
(R'N-C-N-R'), tales
como
1-ciclohexil-3-[2-morfolinil-(4-etil)]carbodiimida
o
1-etil-3-(4-azonia-4,4-dimetilpentil)-carbodiimida.
Además, los restos aspartilo y glutamilo se convierten en restos
asparaginilo y glutaminilo haciéndolos reaccionar con iones
amonio.
Los restos glutaminilo y asparaginilo se
desamidan con frecuencia para producir los correspondientes restos
glutamilo y aspartilo. Como alternativa, estos restos se desamidan
bajo condiciones ácidas suaves. Cualquier forma de estos restos se
encuentra dentro del alcance de esta invención.
Aunque la presente invención puede realizarse
con derivados de la hormona del crecimiento humana recombinante
preparados mediante la tecnología del ADN recombinante, por ejemplo
en células procariotas o eucariotas, estos derivados también se
preparan mediante métodos de síntesis de proteínas convencionales,
que son muy conocidos por los expertos en la técnica.
La hormona del crecimiento puede ser una
proteína o un péptido.
La hormona del crecimiento puede ser
preferiblemente una hormona del crecimiento recombinante.
La determinación de las cantidades de hormona
del crecimiento, o de uno de sus derivados, para ser administradas
en un uso de la invención descrito anteriormente se encuentra dentro
de la técnica.
La dosificación típica de la hormona del
crecimiento, o de uno de sus derivados, comienza a aproximadamente
1 microgramo por kilogramo de peso del paciente diarios, y la dosis
se escala hasta que se alcanza el efecto deseado (la movilización o
periferalización de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, el aumento del número de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, la
reducción del número de leucaféresis requeridas para recoger una
cantidad suficiente de células en circulación para el trasplante,
la reducción del volumen de sangre requerido para ser procesado para
obtener el número diana especificado de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo).
La dosificación de la hormona del crecimiento, o
de uno de sus derivados, para ser administrada depende de la edad,
sexo, salud y peso del donante, del tipo de tratamiento previo o
concurrente, si es que existe, de la frecuencia del tratamiento y
de la naturaleza del efecto deseado.
La hormona del crecimiento, o uno de sus
derivados, puede administrarse de forma ventajosa en una cantidad
comprendida entre 20 y 50 \mug por kilogramo de peso corporal, más
en particular entre 30 y 40 \mug por kilogramo de peso
corporal.
Una dosificación preferida de la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, para ser administrada es
aproximadamente 33 \mug por kilogramo de peso corporal.
La hormona del crecimiento, o sus derivados,
pueden administrarse por sí solos, o junto o asociados con otros
factores.
La hormona del crecimiento, o sus derivados,
pueden estar presentes de forma ventajosa en una composición que
comprende además uno o varios compuestos seleccionados entre los
compuestos que pertenecen a los siguientes grupos: factores del
crecimiento hematopoyético, citoquinas, quimioquinas, anticuerpos
monoclonales.
La hormona del crecimiento, o sus derivados, y
uno o varios compuestos seleccionados entre los compuestos que
pertenecen a los siguientes grupos: factores del crecimiento
hematopoyético, citoquinas, quimioquinas, anticuerpos monoclonales,
pueden administrarse de forma simultánea o en diferentes momentos
y/o en el mismo sitio o en un(os) sitio(s)
diferente(s) y/o en la misma o en diferente composición o
medicamento.
El grupo de citoquinas puede comprender
IL-1, IL-3, G-CSF,
GM-CSF o SCF. El grupo de quimioquinas puede
comprender MIP-1\alpha o trombopoyetina (TPO). El
grupo de anticuerpos monoclonales puede comprender anticuerpos
anti-VLA-4.
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
sus derivados, están presentes en una composición que comprende el
factor estimulante de colonias de granulocitos
(G-CSF).
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
sus derivados, están asociados con el G-CSF.
La hormona del crecimiento, o sus derivados, y
el G-CSF pueden administrarse de forma simultánea o
en diferentes momentos y/o en el mismo sitio o en un(os)
sitio(s) diferente(s) y/o en la misma o en diferente
composición o medicamento.
La hormona del crecimiento, o sus derivados, y
el G-CSF pueden administrarse de forma ventajosa por
separado.
El G-CSF puede administrarse de
forma ventajosa en una cantidad comprendida entre 3 y 15 \mug por
kilogramo de peso corporal, más en particular entre 4 y 12 \mug
por kilogramo de peso corporal.
Una dosificación preferida de
G-CSF para ser administrada es aproximadamente 5
\mug o aproximadamente 10 \mug por kilogramo de peso
corporal.
En una realización preferida, la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, se administra en una cantidad
comprendida entre 20 y 50 \mug por kilogramo de peso corporal, más
en particular entre 30 y 40 \mug por kilogramo de peso corporal,
y el G-CSF se administra en una cantidad comprendida
entre 3 y 15 \mug por kilogramo de peso corporal, más en
particular entre 4 y 12 \mug por kilogramo de peso corporal.
En una realización preferida, la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, se administra en una cantidad
de 33 \mug por kilogramo de peso corporal, y el
G-CSF se administra en una cantidad de
aproximadamente 5 \mug o aproximadamente 10 \mug por kilogramo
de peso corporal.
Según la invención, la expresión
"administración de una cantidad suficiente para aumentar el número
de células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis
in vivo, o para reducir el volumen de sangre requerido para
ser procesado para obtener el número diana específico de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo" puede significar una o varias administraciones, una o
varias veces diarias, y durante uno o varios días para conseguir
una cantidad acumulada suficiente para aumentar el número de células
en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, o para reducir el volumen de sangre requerido para ser
procesado para obtener el número diana especificado de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo.
Las composiciones farmacéuticas o las
composiciones que se utilizan según la invención se encuentran en
una forma farmacéuticamente aceptable, opcionalmente combinada con
un vehículo aceptable.
Estas composiciones pueden administrarse
mediante cualquier medio que logre su fin previsto.
Las composiciones utilizadas según la invención
pueden administrarse por sí solas o junto con otros compuestos
terapéuticos dirigidos a una enfermedad o dirigidos a otros síntomas
de ésta.
Las composiciones utilizadas según la invención
pueden administrarse mediante la vía intravenosa o subcutánea.
Después de la administración intravenosa, la
eliminación de la hGH se describe mediante una cinética de primer
orden con una semivida sérica de 12-30 minutos en
animales y seres humanos (Moore et al., 1988; Hendricks
et al., 1985). De forma tradicional, la inyección
intramuscular ha sido el método preferido como vía preferida de
administración. En seres humanos, la absorción de hGH exógena parece
ser más rápida desde el sitio intramuscular, con un tiempo hasta la
concentración máxima de dos a tres horas, comparado con las cuatro a
seis horas después de la administración subcutánea. Se ha indicado
que la fase de desaparición del suero varía de 12-20
horas para la administración intramuscular, y 20-24
horas después de la administración subcutánea
(Albertsson-Wikland et al., 1986; Jorgensen
et al., 1987).
Las composiciones utilizadas según la invención
pueden administrarse mediante vías parenterales, tales como la vía
subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o
transdérmica, o mediante vías mucosas, tales como la vía bucal u
oral.
La composición que comprende la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse mediante
vías parenterales, tales como la vía subcutánea, intravenosa,
intramuscular, intraperitoneal o transdérmica, o mediante vías
mucosas, tales como la vía bucal u oral.
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
uno de sus derivados, se administra por vía subcutánea.
La dosis total o cantidad requerida para cada
uso de la invención puede administrarse en una dosis única o
múltiple.
La composición que comprende una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse a diario o
tres veces diarias.
Preferiblemente, la composición que comprende
una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, se administra
tres veces diarias.
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
uno de sus derivados, se administra a diario o tres veces
diarias.
En una realización preferida, la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, se administra tres veces
diarias.
Si un uso de la invención comprende la
administración de una hormona del crecimiento, o uno de sus
derivados, y G-CSF, el G-CSF se
administra preferiblemente una vez diaria y/o por vía
subcutánea.
Si un uso de la invención comprende la
administración de una hormona del crecimiento, o uno de sus
derivados, y G-CSF, la hormona del crecimiento, o
uno de sus derivados, se administra preferiblemente tres veces
diarias, y el G-CSF se administra preferiblemente
una vez diaria.
La composición que comprende una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse una vez
diaria, comenzando hasta 20 días antes de la leucaféresis.
La composición que comprende una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse a lo largo
de un periodo de 5 días, o a lo largo de un periodo de 10 días,
hasta que se alcanza la leucaféresis o el efecto deseado (la
movilización o periferalización de células en circulación capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo, el aumento del número de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, la reducción del número de leucaféresis requeridas para
recoger una cantidad suficiente de células en circulación para el
trasplante, la reducción del volumen de sangre requerido para ser
procesado para obtener el número diana especificado de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo).
Preferiblemente, la composición que comprende
una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, se administra
hasta que se alcanza la leucaféresis y/o el efecto deseado (la
movilización o periferalización de células en circulación capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo, el aumento del número
de células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis
in vivo, la reducción del número de leucaféresis requeridas
para recoger una cantidad suficiente de células en circulación para
el trasplante, la reducción del volumen de sangre requerido para
ser procesado para obtener el número diana especificado de células
en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo).
Los usos de la invención se realizan, de forma
ventajosa, después de quimioterapia, radioterapia, terapia
mielosupresora, trasplante o injerto de células capaces de regenerar
la hematopoyesis in vivo, o trasplante de médula
ósea.
ósea.
Los usos de la invención se realizan, de forma
ventajosa, aproximadamente 7 días después del comienzo de un
tratamiento quimioterapéutico, o aproximadamente 2 días después del
final de un tratamiento quimioterapéutico.
En una realización preferida, la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, y el G-CSF se
administran hasta la leucaféresis, hasta la movilización o
periferalización de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, hasta el aumento del número de células
en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, hasta la reducción del número de leucaféresis requeridas
para recoger una cantidad suficiente de células en circulación para
el trasplante, y/o hasta la reducción del volumen de sangre
requerido para ser procesado para obtener el número diana
especificado de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo. En esta realización preferida, la
hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, se administra
preferiblemente tres veces diarias, y el G-CSF se
administra preferiblemente una vez diaria.
Los usos de la invención pueden combinarse con
un tratamiento anterior denominado "quimiocebado". Los
regímenes de "quimiocebado" que pueden utilizarse son:
- ciclofosfamida en altas dosis (4 g/m^{2})
para pacientes con cáncer de mama o mieloma múltiple,
- ifosfamida, etopósido para pacientes con
linfoma no hodgkiniano o enfermedad de Hodgkin,
- ciclofosfamida, etopósido, cisplatina (CVP)
para pacientes con tumores sólidos (por ejemplo, cáncer de
mama).
Para potenciar el rebote de la inducción de
células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, los
usos de la invención deben comenzarse al poco tiempo después de
finalizar el tratamiento de quimiocebado y deben continuarse hasta
la finalización de la aféresis (5 a 12 \mug/kg/d).
También es interesante advertir que, en
pacientes cuyo conjunto de células pluripotenciales de la médula
está significativamente disminuido por una quimioterapia anterior,
otro régimen de quimiocebado puede dificultar, en lugar de inducir,
la periferalización de células capaces de regenerar la hematopoyesis
in vivo. Los agentes quimioterapéuticos tóxicos para células
pluripotenciales, tales como busulfano, doxorrubicina, melfalano,
tiotepa y, probablemente, fludarabina (y otros) no deben formar
parte del régimen de quimiocebado. Por otra parte, se considera que
la ciclofosfamida es el fármaco ideal de quimiocebado, con la menor
toxicidad para las células capaces de regenerar la hematopoyesis
in vivo, aunque se conocen bien los efectos secundarios
extramedulares limitantes de la dosis, que son cardiotoxicidad
(dosis > 4 g/m^{2}) y cistitis hemorrágica (Shepperd et
al., 1990).
La población de células sanguíneas enriquecida
con células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo
obtenida a partir de sangre periférica mediante los métodos y usos
de la invención puede reinfusionarse, injertarse o trasplantarse
hacia el mismo individuo, que en este caso es el donante (trasplante
autólogo), o hacia individuos diferentes (trasplante no
autólogo).
La población de células sanguíneas enriquecida
con células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo
obtenida a partir de sangre periférica mediante los métodos y usos
de la invención se infusiona, de forma ventajosa, en un individuo
que previamente ha recibido una o varias quimioterapias,
radioterapias, terapias mielosupresoras, mieloablativas o
mielotóxicas.
Dicha operación de reinfusión, injerto o
trasplante pertenece a los denominados procedimientos de trasplante
de células pluripotenciales hematopoyéticas (HSCT). El HSCT es un
procedimiento clínico en el que células capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo, obtenidas a partir de médula ósea o
sangre periférica, se trasplante a un paciente.
Un trasplante autólogo es un trasplante en el
que el donante y receptor son el mismo individuo, mientras que un
trasplante no autólogo es un trasplante en el que el donante y el
receptor son individuos diferentes. El método de la invención
incluye el trasplante autólogo y no autólogo.
En otra parte, la presente descripción también
describe un método o un uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para potenciar el efecto de movilización o
periferalización del G-CSF.
La presente descripción describe un método o un
uso de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, o
cualquier factor que induce la liberación de la hormona del
crecimiento, para potenciar la movilización de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo por
el G-CSF, para potenciar el aumento del número de
células en circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo por el G-CSF, para potenciar la reducción
del número de leucaféresis requeridas para recoger una cantidad
suficiente de células en circulación para el trasplante por el
G-CSF y/o para potenciar la reducción del volumen de
sangre requerido para ser procesado para obtener el número diana
especificado de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo por el G-CSF.
Por tanto, la administración de una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, y G-CSF
potencia o aumenta de forma sinérgica la movilización de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo,
potencia o aumenta de forma sinérgica el número de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo,
reduce el número de leucaféresis requeridas para recoger una
cantidad suficiente de células en circulación para el trasplante
y/o reduce el volumen de sangre requerido para ser procesado para
obtener el número diana especificado de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, con respecto
al(los) efecto(s) obtenido(s) mediante la
administración de G-CSF por sí solo o sin hormona
del crecimiento, o uno de sus derivados, o cualquier factor que
induce la liberación de la hormona del crecimiento.
La administración de una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, y G-CSF permite
utilizar una dosis menor de c3-CSF que si el
G-CSF se utiliza por sí solo o sin hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, o cualquier factor que induce
la liberación de la hormona del crecimiento.
La administración de una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, y G-CSF puede
realizarse de forma simultánea o en diferentes momentos y/o en el
mismo sitio o en un(os) sitio(s) diferente(s)
y/o en la misma o en diferente composición o medicamento.
En una segunda parte, la presente descripción
describe nuevos usos para potenciar la reconstitución
hematopoyética. La presente descripción describe un agente capaz de
estimular, potenciar o acelerar la regeneración, recuperación o
reconstitución hematopoyética. La presente descripción describe
nuevos usos para potenciar la reconstitución hematopoyética.
Por tanto, la presente descripción describe el
uso de una hormona del crecimiento humana, o uno de sus derivados,
para preparar un medicamento para potenciar la reconstitución
hematopoyética, en un ser humano.
A lo largo de la solicitud, el término
"potenciar" y todos los términos que tienen la misma raíz
pueden sustituirse por el término "estimular" o por el término
"acelerar".
A lo largo de la solicitud, el término
"reconstitución" y todos los términos que tienen la misma raíz
pueden sustituirse por el término "recuperación" o por el
término "regeneración".
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para potenciar la reconstitución
hematopoyética después de un trasplante de médula ósea en un ser
humano.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para potenciar el injerto de médula ósea o
de células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo en
un ser humano.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para potenciar la reconstitución
hematopoyética después de un trasplante de células capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para potenciar el injerto de células capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo.
La hormona del crecimiento puede ser, de forma
ventajosa, la hormona del crecimiento humana.
La hormona del crecimiento y sus derivados
pueden corresponder a la hormona del crecimiento y sus derivados
indicados anteriormente en esta solicitud en conexión con la primera
parte de la invención.
La reconstitución hematopoyética o el injerto
potenciado puede detectarse por medio de un aumento del recuento de
leucocitos y/o del recuento de granulocitos y/o del recuento de
linfocitos y/o del recuento de plaquetas y/o del recuento de
eritrocitos periféricos.
Un aumento del recuento de leucocitos y/o del
recuento de granulocitos y/o del recuento de linfocitos y/o del
recuento de plaquetas y/o del recuento de eritrocitos periféricos
puede detectarse mediante la comparación con la velocidad de
aumento de dichos recuentos en un individuo que ha recibido el mismo
régimen de trasplante pero que no ha recibido ningún tratamiento de
reconstitución hematopoyética.
La reconstitución hematopoyética o el injerto
potenciado puede detectarse por medio de la reducción del periodo
de tiempo necesario para recuperar un recuento de leucocitos y/o un
recuento de granulocitos y/o un recuento de neutrófilos y/o un
recuento de linfocitos y/o un recuento de plaquetas y/o un recuento
de eritrocitos periféricos normal o estándar.
Un recuento de leucocitos y/o un recuento de
granulocitos y/o un recuento de neutrófilos y/o un recuento de
linfocitos y/o un recuento de plaquetas y/o un recuento de
eritrocitos periféricos normal o estándar es aquel que se mide en
un individuo sano o en un individuo que no ha recibido ninguna
terapia mieloablativa, mielotóxica o mielosupresiva, ninguna
quimioterapia, radioterapia o trasplante.
Un recuento de neutrófilos normal puede ser al
menos 0,5 x 10^{9} células de neutrófilos por litro de sangre
periférica.
Un recuento de plaquetas normal puede ser al
menos 20 x 10^{9} por litro de sangre periférica.
La reconstitución hematopoyética o el injerto
potenciado puede detectarse por medio de una reducción del grado
y/o duración de la neutropenia y/o trombocitopenia y/o anemia y/o
hemorragias y/o duración de la profilaxis.
La reconstitución hematopoyética o el injerto
potenciado puede detectarse por medio de una reducción de la
duración y/o gravedad de la fiebre y/o infecciones.
Una reducción del grado y/o duración de la
neutropenia y/o trombocitopenia y/o anemia y/o hemorragias y/o
duración de la profilaxis, o una reducción de la duración y/o
gravedad de la fiebre y/o infecciones, puede compararse con dicho
grado y/o duración y/o gravedad en un individuo que ha recibido el
mismo régimen de trasplante, la misma quimioterapia, la misma
radioterapia o la misma terapia mielosupresora, mieloablativa o
mielotóxica, pero que no ha recibido ningún tratamiento de
reconstitución hematopoyética.
La reconstitución hematopoyética o el injerto
potenciado puede detectarse por medio de una recuperación de los
granulocitos que es al menos 1000 por microlitro de sangre
periférica.
La reconstitución hematopoyética o el injerto
potenciado puede detectarse por medio de una recuperación del
recuento de plaquetas que es al menos 50.000 por microlitro de
sangre periférica.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, o cualquier
factor que induce la liberación de la hormona del crecimiento para
preparar un medicamento para tratar una enfermedad neoplásica, un
trastorno hematológico, malignidades, deficiencias inmunológicas
combinadas graves (SCID), anomalías hematopoyéticas congénita o
genéticamente determinadas, anemia, anemia aplásica, leucemia y/u
osteopetrosis.
Una enfermedad neoplásica puede ser el cáncer de
mama.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para reducir el periodo de aplasia de la
médula ósea después de un trasplante, quimioterapia, radioterapia o
terapia mieloablativa, mielosupresora o mielotóxica, para prevenir o
tratar infecciones oportunistas después de un trasplante,
quimioterapia, radioterapia o terapia mieloablativa, mielosupresora
o mielotóxica, o para limitar el riesgo de recurrencia de tumores
después de un trasplante, quimioterapia, radioterapia o terapia
mieloablativa, mielosupresora o mielotóxica.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para prevenir o tratar los efectos
secundarios de una terapia mieloablativa, mielosupresora o
mielotóxica y/o radioterapia y/o quimioterapia y/o trasplante.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para prevenir o tratar la neutropenia y/o
trombocitopenia.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para prevenir o tratar la anemia después de
una radioterapia y/o quimioterapia y/o trasplante de células
pluripotenciales hematopoyéticas y/o trasplante de células capaces
de regenerar la hematopoyesis y/o trasplante de médula ósea y/o
terapia mielosupresora o mielotóxica.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para prevenir o tratar la neutropenia
después de una radioterapia y/o quimioterapia y/o trasplante de
células pluripotenciales hematopoyéticas y/o trasplante de células
capaces de regenerar la hematopoyesis y/o trasplante de médula ósea
y/o terapia mielosupresora o mielotóxica.
La presente descripción también describe el uso
de una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, para
preparar un medicamento para prevenir o tratar la trombocitopenia
después de una radioterapia y/o quimioterapia y/o trasplante de
células pluripotenciales hematopoyéticas y/o trasplante de células
capaces de regenerar la hematopoyesis y/o trasplante de médula ósea
y/o terapia mielosupresora o mielotóxica.
Las células CD34^{+} capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo pueden pertenecer a uno o varios de los
siguientes grupos de células: células CD34^{+}, células
CD34^{+}CD33^{+}, células CD34^{+}CD38^{-}, células
CD34^{+}Thy-I, células
CD34^{+}Thy-ICD38^{-}, células CD33^{+},
células pluripotenciales, células progenitoras, células iniciadoras
de cultivo a largo plazo (LTC-IC), células que
cumplen el potencial de autorrenovación, células que cumplen las
características pluripotenciales, células que inician el cultivo de
médula ósea a largo plazo.
La determinación de las cantidades de hormona
del crecimiento, o uno de sus derivados, para ser administradas en
un método o uso de la invención descrito anteriormente se encuentra
dentro de la técnica.
La dosificación típica de una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, comienza a aproximadamente 1
microgramo por kilogramo de peso del paciente diario, y la dosis se
escala hasta que se alcanza el efecto deseado (la recuperación
hematopoyética o el injerto).
La dosificación de la hormona del crecimiento, o
uno de sus derivados, para ser administrada depende de la edad,
sexo, salud y peso del donante, del tipo de tratamiento previo o
concurrente, si es que existe, de la frecuencia del tratamiento y
de la naturaleza del efecto deseado.
La hormona del crecimiento, o sus derivados,
pueden administrarse por sí solos, o junto o asociados con otros
factores.
La hormona del crecimiento, o sus derivados,
pueden estar presentes de forma ventajosa en una composición o un
medicamento que comprende además uno o varios compuestos
seleccionados entre los compuestos que pertenecen a los siguientes
grupos: factores del crecimiento hematopoyético, citoquinas,
quimioquinas, anticuerpos monoclonales.
La hormona del crecimiento, o sus derivados, y
uno o varios compuestos seleccionados entre los compuestos que
pertenecen a los siguientes grupos: factores del crecimiento
hematopoyético, citoquinas, quimioquinas, anticuerpos monoclonales,
pueden administrarse de forma simultánea o en diferentes momentos
y/o en el mismo sitio o en un(os) sitio(s)
diferente(s) y/o en la misma o en diferente composición o
medicamento.
El grupo de citoquinas puede comprender
IL-1, IL-3, G-CSF,
GM-CSF o SCF. El grupo de quimioquinas puede
comprender MIP-1\alpha o trombopoyetina (TPO). El
grupo de anticuerpos monoclonales puede comprender anticuerpos
anti-VLA-4.
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
sus derivados, están presentes en una composición o un medicamento
que comprende el factor estimulante de colonias de granulocitos
(G-CSF).
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
sus derivados, están asociados con el G-CSF.
La hormona del crecimiento, o sus derivados, y
el G-CSF pueden administrarse de forma simultánea o
en diferentes momentos y/o en el mismo sitio o en un(os)
sitio(s) diferente(s) y/o en la misma o en diferente
composición o medicamento.
La hormona del crecimiento, o sus derivados, y
el G-CSF pueden administrarse de forma ventajosa por
separado.
La hormona del crecimiento, o sus derivados, y
el G-CSF pueden administrarse en una cantidad
suficiente para potenciar la reconstitución hematopoyética o el
injerto.
La administración de una cantidad suficiente
para potenciar la reconstitución hematopoyética o el injerto puede
significar una o varias administraciones, una o varias veces
diarias, y durante uno o varios días para conseguir una cantidad
acumulada suficiente para potenciar la reconstitución hematopoyética
o el injerto.
Las composiciones farmacéuticas, o los
medicamentos o composiciones que se utilizan según la invención
están en una forma farmacéuticamente aceptable, opcionalmente
combinados con un vehículo aceptable.
Estas composiciones o medicamentos pueden
administrarse mediante cualquier medio que logre su fin
previsto.
Las composiciones o medicamentos utilizados
según la invención pueden administrarse por sí solos o junto con
otros compuestos terapéuticos dirigidos a una enfermedad o dirigidos
a otros síntomas de ésta.
Las composiciones o medicamentos utilizados
según la invención pueden administrarse mediante la vía intravenosa
o subcutánea.
Las composiciones o medicamentos utilizados
según la invención pueden administrarse mediante vías parenterales,
tales como la vía subcutánea, intravenosa, intramuscular,
intraperitoneal o transdérmica, o mediante vías mucosas, tales como
la vía bucal u oral.
La composición o medicamento que comprende una
hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse
mediante vías parenterales, tales como la vía subcutánea,
intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o transdérmica, o
mediante vías mucosas, tales como la vía bucal u oral.
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
uno de sus derivados, se administra por vía subcutánea.
La dosis total o cantidad requerida para cada
tratamiento, método o uso de la invención puede administrarse en
una dosis única o múltiple.
La composición o medicamento que comprende una
hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse
a diario o tres veces diarias.
Preferiblemente, la composición o medicamento
que comprende una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados,
se administra tres veces diarias.
Preferiblemente, la hormona del crecimiento, o
uno de sus derivados, se administra a diario o tres veces
diarias.
En una realización preferida, la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, se administra tres veces
diarias.
Si un uso de la invención comprende la
administración de una hormona del crecimiento, o uno de sus
derivados, y G-CSF, el G-CSF se
administra preferiblemente una vez diaria y/o por vía
subcutánea.
Si un uso de la invención comprende la
administración de una hormona del crecimiento, o uno de sus
derivados, y G-CSF, la hormona del crecimiento, o
uno de sus derivados, se administra preferiblemente tres veces
diarias, y el G-CSF se administra preferiblemente
una vez diaria.
La administración del medicamento puede
realizarse a lo largo de un periodo de 3 días, hasta la leucaféresis
o hasta la recuperación total.
La administración del medicamento puede
realizarse desde el día 1 al día 3 después del trasplante.
El término "trasplante" incluye el
trasplante de médula ósea o el trasplante de células
pluripotenciales hematopoyéticas.
La composición o medicamento que comprende una
hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse
una vez diaria, comenzando hasta 20 días antes de la
leucaféresis.
La composición que comprende una hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, puede administrarse a lo largo
de un periodo de 5 días, o a lo largo de un periodo de 10 días,
hasta que se alcanza el efecto deseado (la recuperación
hematopoyética o el injerto).
Preferiblemente, la composición que comprende
una hormona del crecimiento, o uno de sus derivados, se administra
hasta que se alcanza el efecto deseado (la recuperación
hematopoyética o el injerto).
Los usos de la invención se realizan, de forma
ventajosa, después de quimioterapia, radioterapia, terapia
mielosupresora, trasplante o injerto de células capaces de regenerar
la hematopoyesis in vivo, o trasplante de médula ósea.
Los usos de la invención se realizan, de forma
ventajosa, aproximadamente 7 días después del comienzo de un
tratamiento quimioterapéutico, o aproximadamente 2 días después del
final de un tratamiento quimioterapéutico.
En una realización preferida, la hormona del
crecimiento, o uno de sus derivados, y el G-CSF se
administran hasta la reconstitución hematopoyética o el injerto. En
esta realización preferida, la hormona del crecimiento, o uno de
sus derivados, se administra preferiblemente tres veces diarias, y
el G-CSF se administra preferiblemente una vez
diaria.
La hormona del crecimiento utilizada en el
medicamento puede ser, de forma ventajos, una hormona del
crecimiento recombinante.
La hormona del crecimiento utilizada en el
medicamento puede ser, de forma ventajos, la hormona del crecimiento
humana.
En una tercera parte, la invención describe una
combinación de métodos y usos de la primera parte de la invención
(movilización) con los métodos y usos de la segunda parte de la
invención (recuperación).
Dichos usos de combinación son los usos de
movilización y de recuperación, que pueden aplicarse en casos de
trasplante autólogo de células pluripotenciales hematopoyéticas, en
el que el donante y el receptor son la misma persona o individuo.
Por tanto, la hormona del crecimiento, o uno de sus derivados,
pueden utilizarse como agente movilizante en una primera etapa de
movilización, que es un pretratamiento en vista a la extracción de
células sanguíneas, y como agente de recuperación hematopoyética en
una segunda etapa después del trasplante.
Dichos usos de combinación son muy útiles. De
hecho, el trasplante de células movilizadas mediante una hormona
del crecimiento, o uno de sus derivados, a un paciente da como
resultado una recuperación hematológica más rápida que un
trasplante sin un tratamiento de movilización anterior de dicho
paciente.
Los usos de la invención pueden aplicarse en
muchos campos clínicamente importantes, es decir trasplante de
médula ósea autólogo, trasplante de médula ósea alogénico, terapia
génica, trasplante de células pluripotenciales hematopoyéticas,
trasplante de células capaces de regenerar la hematopoyesis in
vivo, radioterapia, quimioterapia, terapia mielosupresora o
mielotóxica.
Los usos de la invención pueden aplicarse para
tratar un paciente que ha recibido radioterapia o quimioterapia,
que ha sido trasplantado con médula ósea o células capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo, o que ha recibido una
terapia mielotóxica o mieloablativa.
Figura
1
- GH: hormona del crecimiento
- G-CSF: factor estimulante de
colonias de granulocitos
- ND: no detectable
Figura
2
Esta gráfica representa el número de células
CD34^{+}/\mul de sangre obtenido en un paciente durante 3
ciclos de quimioterapia después de un tratamiento de movilización
con G-CSF por sí sólo (ciclo 1), GH +
G-CSF (ciclo 2), y G-CSF por sí
sólo (ciclo 3).
- BFU-E: unidad formadora de
estallido eritroide
- CFU-C: unidad formadora de
colonias en cultivo
- CFU-GM: unidad formadora de
colonias de granulocitos y macrófagos
- CFU-Meg: unidad formadora de
colonias de megacariocitos
- G-CSF: factor estimulante de
colonias de granulocitos
- IGF-I: factor del crecimiento
de insulina I
- LTC-IC: células iniciadores de
cultivo a largo plazo
- hGH: hormona del crecimiento humana
- rhG-CSF: factor estimulante de
colonias de granulocitos humano recombinante
- rhGH: hormona del crecimiento humana
recombinante
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
Ratones BALB/c reciben inyecciones
intreperitoneales de 10 \mul de rhGH diarias durante un total de
10 días. La actividad CFU-C o BFU-E
total en circulación en la sangre periférica en el día 5 y el día
10, respectivamente, se determina según técnicas de cultivo in
vitro convencionales, y se compara con:
- (i)
- los niveles de pretratamiento en estado de equilibrio,
- (ii)
- los recuentos de CFU-C y BFU-E absolutos en el día 3 y el día 5, respectivamente, después del tratamiento con rhG-CSF administrado por vía intraperitoneal a 10 \mul diarios durante 5 días consecutivos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
- Consentimiento informado escrito.
- Edad entre 18 años y 60 años.
- Alto riesgo de padecer cáncer confirmado
histológicamente (cáncer de linfoma) que recibe una quimioterapia
de altas dosis según las líneas directrices de INT actuales.
- Pacientes intensamente pretratados con
tratamientos de quimioterapia y/o radioterapia.
- Insuficiencia renal (creatinina > 1,5 N) o
hepática y/o SGPT > 2,5 N (bilirrubina > 1,5 N), o enfermedad
grave del SNC o psiquiátrica.
- Enfermedad cardíaca o miocárdica clínicamente
significativa. Fracción de eyección ventricular izquierda < 50%
en reposo mediante evaluación con ecocardiografía, o < 55%
mediante medidas isotópicas.
- Positivos en ensayos de hepatitis B o C, o
VIH.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Se estudiaron varios parámetros durante los
estudios clínicos de movilización y recuperación:
- Historia médica completa, examen físico,
examen cardíaco, fracción de eyección ventricular izquierdo (LVEF)
mediante barrido de centelleo de múltiples puertas o ecografía,
rayos X del pecho.
- Ensayo de embarazo (si es aplicable).
- Ensayo de HBV, HVC y VIH.
- Recuento sanguíneo completo con
diferencial.
- Recuentos absolutos de células CD34^{+} y
CFU en circulación.
- Química sanguínea (transaminasas, fosfatasa
sérica, gamma-GT, LDH, bilirrubina total, BUN,
creatinina, glucemia, Na, K, Ca, P, ácido úrico, proteínas totales,
albúmina, colesterol, triglicéridos).
- Biopsia de médula ósea bilateral.
- Consentimiento informado.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
- Crecimiento tumoral (sólo en el estudio de
movilización).
- Síntomas clínicos e instrumentales.
- Ensayos de laboratorio para la función
cardíaca, hepática y renal.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
- Para evaluar la actividad de rhGH en:
- (i)
- el aumento de las células CD34^{+} en circulación, y
- (ii)
- la expansión de la compartimentalización hematopoyética de la médula ósea, para permitir la potenciación de la movilización por la posterior administración de rhG-CSF.
- Para evaluar la seguridad y tolerancia de
rhGH, administrada con rhG-CSF a pacientes con
cáncer después de quimioterapia (estudio de recuperación
hematológica).
- La rhGH se administra desde el día 1 al día 10
por vía intravenosa. La dosificación de la rhGH comienza desde
aproximadamente 1 microgramo por kilogramo de peso del paciente
diario, y la dosis se escala hasta que se alcanza el efecto deseado
(la movilización o periferalización de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, el aumento en
dicho donante del número de células en circulación capaces de
regenerar la hematopoyesis in vivo, la reducción del número
de leucaféresis requeridas para recoger una cantidad suficiente de
células en circulación para el trasplante, la reducción del volumen
de sangre requerido para ser procesado para obtener el número diana
especificado de células en circulación capaces de regenerar la
hematopoyesis in vivo), xx \mug/kg QD, iv.
- Administración de rhGH: La rhGH se administra
desde el día 1 al día 5 por vía intravenosa. La dosificación de la
rhGH comienza desde aproximadamente 1 microgramo por kilogramo de
peso del paciente diario, y la dosis se escala hasta que se alcanza
el efecto deseado (la movilización o periferalización de células en
circulación capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo,
el aumento en dicho donante del número de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, la reducción
del número de leucaféresis requeridas para recoger una cantidad
suficiente de células en circulación para el trasplante, la
reducción del volumen de sangre requerido para ser procesado para
obtener el número diana especificado de células en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo).
- Administración de rhG-CSF (10
\mug/kg QD, iv) desde la finalización de la recogida de células
CD34^{+} (la dosis diana de células es 8 x 10e^{6} células
CD34^{+}/kg de peso corporal).
Comenzando a partir del día +6, se evalúan los
siguientes parámetros:
- Recuentos absolutos de células
CD34^{+}/\mul (a diario en la periferia y una vez en las células
leucaferizadas).
- Recuentos absolutos de
CFU-GM/\mul (a diario en la periferia y una vez en
las células leucaferizadas).
- Evaluación diaria de células CD34^{+}/\mul
y CFU-GM en sangre periférica, desde el día +5 hasta
la leucaféresis.
- Rendimiento total de células CD34^{+},
CFU-GM, BFU-E,
CFU-IC en células leucaferizadas.
- Evaluación de la toxicidad a través de datos
clínicos y en exámenes (EKG, rayos X del pecho y otros exámenes
según sean necesarios).
- Medida y evaluación de todos los parámetros
tumorales cuando finaliza el estudio de movilización.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
- Evaluar la capacidad de rhGH, administrada por
sí sola o en combinación, para acelerar la recuperación de
leucocitos, eritrocitos y plaquetas en la sangre periférica de
pacientes con cáncer tratados con quimioterapia de altas dosis y
autoinjerto de células pluripotenciales de sangre periférica.
- Evaluar la seguridad y tolerancia de rhGH,
administrada con rhG-CSF a pacientes con cáncer
después de quimioterapia.
- Administración de quimioterapia de altas
dosis, seguido de una infusión en el día 0 de una cantidad óptima
(es decir, 8 x 10e^{6} células CD34^{+}/kg) de células
crioconservadas recolectadas en el estudio de movilización.
- Coadministración (por vía intravenosa) de rhGH
y rhG-CSF (\mug/kg QD, iv) desde el día 1 hasta la
recuperación estable (es decir, durante tres días consecutivos) de
recuentos de granulocitos por encima de 1000/\mul y de plaquetas
por encima de 50.000/\mul.
Comenzando a partir del día +0 y hasta la
recuperación estable y completa, se evalúan los siguientes
parámetros:
- Recuentos absolutos de granulocitos/\mul
(diario).
- Recuentos absolutos de plaquetas/\mul
(diario).
- Recuentos absolutos de eritrocitos/\mul
(diario).
- Nadir de granulocitos.
- Nadir de plaquetas.
- Grado y duración de la neutropenia.
- Grado y duración de la trombocitopenia.
- Grado y duración de las transfusiones de apoyo
hematopoyéticas (transfusiones de eritrocitos).
- Duración de la profilaxis infecciosa y de
infecciones.
- Hemorragias.
- Evaluación diaria del recuento de leucocitos,
eritrocitos y plaquetas.
- Número de transfusiones de plaquetas.
- Número de transfusiones de eritrocitos.
- Tipo y gravedad de la fiebre e infección
documentada.
- Evaluación clínica e instrumental de
toxicidades hematológicas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Tres pacientes con recaída en la enfermedad de
Hodgkin recibieron los siguientes dos ciclos de tratamiento:
\cdot ciclo 1 (ciclo control):
- -
- Ifosfamida (agente para quimioterapia): 3 g/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), días 1-4;
- -
- Vinorelbina (agente para quimioterapia): 25 mg/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), día 1 y 5;
- -
- G-CSF: 5 \mug/kg por vía subcutánea (una vez diaria), desde el día 7 hasta la leucaféresis o hasta la recuperación de un número suficiente de células CD34^{+} (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6} células/kg).
\cdot ciclo 2:
- -
- Ifosfamida: 3 g/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), días 1-4;
- -
- Vinorelbina: 25 mg/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), día 1 y 5;
- -
- G-CSF: 5 \mug/kg por vía subcutánea (una vez diaria), desde el día 7 hasta la recuperación de un número suficiente de células CD34^{+} (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6} células/kg), o hasta la leucaféresis;
- -
- rhGH (hormona del crecimiento humana recombinante): 33 \mug/kg por vía subcutánea (tres veces diarias), desde el día 7 hasta la recuperación de un número suficiente de células CD34^{+} (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6} células/kg), o hasta la leucaféresis.
Los resultados aparecen en la tabla de la figura
1.
No se observó toxicidad, excepto hiperglucemia
que requirió la administración de insulina.
Cuando se compara con el control (ciclo 1), la
adición de rhGH en el ciclo 2 dio como resultado:
1) la duplicación o triplicación de la
movilización de células CD34^{+} en la corriente sanguínea;
2) la recuperación de células CD34^{+}
leucaferizadas, o el aumento del número de células CD34^{+}
leucaferizadas.
El aumento del número de células CD34^{+}
leucaferizadas inducido por la GH permite la recolección en los
tres pacientes de una cantidad de células CD34^{+} adecuada para
el trasplante autólogo (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6}
células/kg).
Un paciente con recaída en la enfermedad de
Hodgkin recibió los siguientes 3 ciclos de tratamiento:
\cdot ciclo 1:
- -
- Ifosfamida (agente para quimioterapia): 3 g/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), días 1-4;
- -
- Vinorelbina (agente para quimioterapia): 25 mg/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), día 1 y 5;
- -
- G-CSF: 5 \mug/kg por vía subcutánea (una vez diaria), desde el día 7 hasta la leucaféresis o hasta la recuperación de una cantidad suficiente de células CD34^{+} (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6} células/kg).
\newpage
\cdot ciclo 2:
- -
- Ifosfamida: 3 g/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), días 1-4;
- -
- Vinorelbina: 25 mg/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), día 1 y 5;
- -
- G-CSF: 5 \mug/kg por vía subcutánea (una vez diaria), desde el día 7 hasta la recuperación de una cantidad suficiente de células CD34^{+} (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6} células/kg), o hasta la leucaféresis;
- -
- rhGH (hormona del crecimiento humana recombinante): 33 \mug/kg por vía subcutánea (tres veces diarias), desde el día 7 hasta la recuperación de una cantidad suficiente de células CD34^{+} (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6} células/kg), o hasta la leucaféresis.
\cdot ciclo 3:
- -
- Ifosfamida (agente para quimioterapia): 3 g/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), días 1-4;
- -
- Vinorelbina (agente para quimioterapia): 25 mg/m^{2} por vía intravenosa (una vez diaria), día 1 y 5;
- -
- G-CSF: 5 \mug/kg por vía subcutánea (una vez diaria), desde el día 7 hasta la leucaféresis o hasta la recuperación de una cantidad suficiente de células CD34^{+} (aproximadamente de 3 a 8 x 10^{6} células/kg).
Los resultados del tratamiento clínico indicado
en la sección A anterior se representan en la gráfica de la figura
2.
La gráfica de la figura 2 muestra la evolución
en el tiempo de la movilización de células CD34^{+}, después de
tres ciclos de quimioterapia consecutivos, comenzando cada 21
días.
Cada punto representado en la gráfica de la
figura 2 se corresponde con la medida del número de células
CD34^{+}/\mul de sangre encontrado en una muestra de sangre de
1 mililitro.
Los resultados demuestran que el ciclo 2
(adición de rhGH) es evidentemente superior a los ciclos 1 y 3. Por
tanto, la movilización de CD34^{+} en la sangre es potenciada por
la adición de rhGH.
La potenciación de la movilización de células
CD34^{+} en la sangre por la GH es elevada, en especial puesto
que el paciente estudiado recibió varios tratamientos de
quimioterapia mielotóxica, y puesto que cada tratamiento posterior
dificulta el grado de movilización. Puede observarse un número en
disminución de células CD34^{+} en circulación después de
quimioterapias mielotóxicas y ciclos de movilización consecutivos,
comparando el ciclo 1 y el ciclo
3.
3.
La sangre del paciente se somete a una
leucaféresis cuando el número de células CD34^{+}/\mul de sangre
es máximo (día 13 del ciclo 1; día 20 del ciclo 2).
Las células leucaferizadas se crioconservan y se
volverán a infusionar al paciente después de una terapia
mieloablativa.
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Claims (20)
1. El uso de una hormona del crecimiento humana,
o uno de sus derivados, para preparar un medicamento que aumenta,
en un paciente, el número de células CD34^{+} en circulación
capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, en el que
dichas células se utilizan para tratar, mediante reinfusión,
trasplante o injerto, el mismo paciente para el restablecimiento
del sistema hematopoyético e inmunológico después de terapias
mieloablativas o antiblásticas.
2. El uso de una hormona del crecimiento, o uno
de sus derivados, para aumentar en un donante sano el número de
células CD34^{+} en circulación capaces de regenerar la
hemapoyesis in vivo disponibles y previstas para la
leucaféresis y la reinfusión, trasplante o injerto en un receptor
que necesita dichas células.
3. El uso según la reivindicación 1, en el que
dicho medicamento se administra por separado o de forma simultánea
con G-CSF.
4. El uso según la reivindicación 2, en el que
dicha hormona del crecimiento humana, o uno de sus derivados, se
administra por separado o de forma simultánea con
G-CSF.
5. El uso según la reivindicación 1 para
aumentar a lo largo de un periodo de hasta 20 días el número de
células CD34^{+} en circulación capaces de regenerar la
hemapoyesis in vivo en un paciente.
6. El uso según la reivindicación 2 para
aumentar a lo largo de un periodo de hasta 20 días el número de
células CD34^{+} en circulación capaces de regenerar la
hemapoyesis in vivo en un donante sano.
7. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1, 3 y 5, en el que el medicamento comprende uno o
varios compuestos adicionales seleccionados entre los siguientes
grupos de compuestos: factores del crecimiento hematopoyético,
citoquinas, quimioquinas, anticuerpos monoclonales.
8. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 2, 4 y 6, en el que la hormona del crecimiento
humana, o uno de sus derivados, se administra por separado o de
forma simultánea con uno o varios compuestos adicionales
seleccionados entre los siguientes grupos de compuestos: factores
del crecimiento hematopoyético, citoquinas, quimioquinas,
anticuerpos monoclonales.
9. El uso según la reivindicación 1 ó 5, en el
que el medicamento se administra por separado o de forma simultánea
con uno o más medicamentos adicionales que comprenden uno o varios
compuestos seleccionados entre los siguientes grupos de compuestos:
factores del crecimiento hematopoyético, citoquinas, quimioquinas,
anticuerpos
monoclonales.
monoclonales.
10. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 7 a 9, en el que el grupo de citoquinas comprende
IL-1, IL-3, IL-6,
IL-11, factor del crecimiento 1 del tipo de la
insulina (IGF-1), G-CSF,
GM-CSF o SCF; el grupo de quimioquinas comprende
MIP-1\alpha o trombopoyetina (TPO); el grupo de
anticuerpos monoclonales comprende anticuerpos
anti-VLA-4.
11. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, en el que el compuesto o medicamento
adicional comprende G-CSF.
12. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1, 3 y 5, en el que la administración de dicho
medicamento se realiza a diario o tres veces diarias.
13. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 2, 4 y 6, en el que la administración de dicha
hormona del crecimiento humana, o uno de sus derivados, se realiza
a diario o tres veces diarias.
14. El uso según la reivindicación 3 ó 4, en el
que la administración de la hormona del crecimiento se realiza tres
veces diarias, y la administración de G-CSF se
realiza a diario.
15. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1, 3 y 5, en el que la administración de dicho
medicamento se realiza a lo largo de un periodo de 3 días y/o hasta
la leucaféresis.
16. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1, 3 y 5, en el que la administración de dicho
medicamento comienza aproximadamente 7 días después del comienzo
del tratamiento quimioterapéutico, o aproximadamente 2 días después
del final del tratamiento quimioterapéutico.
17. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que la hormona del crecimiento es una
hormona del crecimiento recombinante.
18. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 4 a 6, en el que la hormona del crecimiento es una
hormona del crecimiento humana.
19. El uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 4 a 6, en el que las células en circulación capaces
de regenerar la hematopoyesis in vivo son células
CD34^{+}/CD33^{+} y/o células CD34^{+}/CD38^{-} y/o células
CD34^{+}/Thy-I y/o células
CD34^{+}/Thy-I/CD38^{-}.
20. El uso según la reivindicación 11, en el que
el G-CSF se administra en una cantidad comprendida
entre 3 y 15 \mug/kg de peso corporal, en una cantidad
comprendida entre 4 y 12 \mug/kg de peso corporal, o en una
cantidad de aproximadamente 5 ó 10 \mug por kilogramo de peso
corporal.
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