MXPA01006681A

MXPA01006681A - Hormona humana del crecimiento para estimular la movilizacion de celulas madre hematopoyeticas pluripotentes

Info

Publication number: MXPA01006681A
Application number: MXPA/A/2001/006681A
Authority: MX
Inventors: Alessandro Massimo Gianni
Original assignee: Laboratoires Serono Sa
Priority date: 1998-12-30
Filing date: 2001-06-28
Publication date: 2002-03-26

Abstract

La presente invención se refiere a campo de la movilización de células hematopoyéticas CD34+. En particular, esta invención se relaciona con un método para incrementar la movilización de células hematopoyéticas pluripotentes CD34+ por administración de hormona del crecimiento humana y uno o más de sus derivados a un individuo.

Description

HORMONA HUMANA DEL CRECIMIENTO PARA ESTIMULAR LA MOVILIZACIÓN DE CÉLULAS MADRE HEMATOPOYÉTICAS PLU^IPOTENTES DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN El transplante de médula ósea (BMT) es un procedimiento clínico en el cual se transplantan a un paciente células hematopoyéticas pluripotentes que se obtienen de médula ósea. BMT es el tratamiento de elección en varios desórdenes hematológicos que incluyen cánceres malignos, deficiencias inmunes combinadas graves (SCID) , anormalidades hematopoyéticas determinadas congénita o genéticamente, anemia, anemia aplásica, leucemia y osteoporosis (Fischer et al., 1998) . En los últimos diez años, el uso de BMT creció de menos de 5 '000 a más de 40 '000 al año (Waters et al., 1998). Bajo una condición de estado estable, la mayor parte de las células madre hematopoyéticas y progenitoras se encuentran en médula ósea y solo un número pequeño de estas células son detectables en sangre periférica. Sin embargo, se pueden movilizar células madre adicionales a la sangre periférica por tratamiento con agentes mielosupresores o algunos factores de crecimiento hematopoyéticos o ambos (Van Hoef , 1998) . Los estudios han demostrado que las células madre de sangre periférica (PBSC) administradas como infusión en un huésped muestran potencial aumentado para injerto en comparación con células madre y progenitoras derivadas de médula ósea (Gianni et al., 1989 ; Larsson et al., 1998). Por lo tanto, las PBSC movilizadas por quimioterapia, factores de crecimiento hematopoyéticos o la combinación de estas modalidades, es lo que se utiliza actualmente en realizaciones de trasplantes autólogos y no autólogos (Van Hoef , 1998 ; Anderlini and Korbling, 1997) . En el caso de transplante no autólogo, los donadores de células madre son individuos normales y el procedimiento para movilización de células madre a la corriente sanguínea se debe obtener con incomodidad mínima. En este caso, la movilización de células madre con factores de crecimiento hematopoyéticos se prefiere al tratamiento con medicamentos antiblásticos (es decir, ciclofosfamida) . Se han estudiado varios factores de crecimiento hematopoyéticos tales como G-CSF, EPO y CSF como agentes movilizantes y actualmente se utilizan para incrementar el número de PBSC antes de leucaferesis (Henry, 1997; Weaver and Testa, 1998) . Los tratamientos con el objetivo de estimular la hematopoyesis total pueden ser de gran interés para movilizar una gran cantidad de células progenitoras y células madre. La movilización aumentada de células madre es muy valiosa en el contexto del transplante de células madre hematopoyéticas al reducir el número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células madre hematopoyéticas que se van a transplantar .

La primera parte de la invención proporciona un agente de movilización nuevo utilizado para incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en un individuo. El agente de movilización nuevo de la invención es hormona del crecimiento y especialmente hormona humana del crecimiento (hGH) u otro de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento. A menos que se especifique de otra manera, el término "GH" significa hormona del crecimiento, uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento dentro del contexto de la invención. Ahora se ha encontrado que, por medio de administración de hormona del crecimiento y especialmente hormona humana del crecimiento (hGH) o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento, se obtiene en sangre periférica una movilización de células capaz de regenerar hematopoyesis in vivo. Por lo tanto, la hormona del crecimiento y especialmente la hormona humana del crecimiento (hGH) o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento, administrado solo o en combinación con otros factores, representa otro método o uso nuevo para movilizar células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a la sangre periférica .

La hormona humana del crecimiento (hGH) también conocida como somatotropina es una hormona proteínica que se produce y secreta por las células somatotrópicas de loa hipófisis anterior. La hGH en el crecimiento somático a través de sus efectos en el metabolismo de proteínas, carbohidratos y lípidos. Además de sus efectos en el crecimiento somático, se ha demostrado que hGH estimula células sanguíneas in vitro (Derfalvi et al., 1986 ; Merchav et al; 1988), para incrementar los eritrocitos y las cuentas de hemoglobina (Valerio et al., 1997 ; Vihervuori et al., 1996), para mejorar tanto la proliferación como la producción de Ig en líneas de células de plasma (Ki ata and Yoshida, 1994) y para estimular las cuentas de CD8+ y en menor grado, las cuentas de CD4+ (Geffner, 1997) . Los métodos y usos de la invención los cuales utilizan al agente movilizante de la invención tienen varias ventajas: existe un número bajo de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis. Este número se considera suficiente para proporcionar una dosis de células de injerto por aféresis simple o múltiple en un período de tiempo razonable. Los métodos y usos de la invención resuelven este problema mediante periferalización temporal de las células y subconjuntos en la sangre circulante, el cual se utiliza ampliamente para incrementar de manera significativa en la sangre la producción de células circulantes capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo, por lo que se minimiza el número de aféresis necesaria para obtener una dosis de injerto. Otras ventajas de los métodos y usos de la invención incluyen la posibilidad de: a) eliminar la necesidad de anestesia general, b) cosechar incluso si los huesos iliacos están dañados por radioterapia previa o infiltrado con células malignas c) obtener la restauración de funciones hematopoyéticas sostenidas más rápidamente que con células progenitoras derivadas de BM, d) obtener restauración de funciones hematopoyéticas sostenidas más rápidamente y de manera más efectiva que sin el tratamiento previo que incluye un método o un uso de la invención. Generalmente, los métodos y usos de la invención son efectivos e inocuos para movilizar células sanguíneas periféricas capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. Los métodos y usos de la invención no son tóxicos en vista de los parámetros principales de toxicidad los cuales son, por ejemplo, crecimiento de tumores, síntomas clínicos e instrumentales, o pruebas de laboratorio para función cardíaca, hepática y renal. La movilización aumentada de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo que se obtienen con los métodos y usos de la invención es muy útil en el contexto del transplante de células madre hematopoyéticas al reducir el número de leucaferesis requerida para recolectar una cantidad suficiente de células hematopoyéticas que se van a transplantar . Los métodos y usos de la invención llevan a una reducción en el volumen de sangre que se necesita procesar durante la aféresis o el procedimiento de leucaferesis con el fin de obtener el número objetivo especificado de células. Las ventajas de procesar un volumen reducido de sangre son que el paciente gasta menos tiempo en la máquina que separa células que se reduce la toxicidad del procedimiento, particularmente en términos del volumen de anticoagulante al cual se debe exponer al paciente durante el procedimiento, y lo que reduce los tiempos de uso de la máquina y de trabajo del operador. Además, el transplante de una población de células sanguíneas enriquecidas con células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, población la cual se obtiene a partir de sangre periférica por los métodos o usos de la invención, tiene el efecto de mejorar la reconstitución de los sistemas hematopoyético e inmune del receptor después de terapias mielosupresora o contra los gastocitos. En un primer aspecto, la invención se relaciona con un método de preparación de una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo al comparar: a) la administración a un donador de una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para incrementar en el donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, b) aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo de la sangre periférica del donador. El método de la invención por lo tanto produce una población de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, esta población se destina al transplante en el mismo individuo o en individuos diferentes. Así, la invención, se relaciona con un método de preparación de una población de células sanguíneas enriquecidas con células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende : a) administrar a un donador una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados, o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para incrementar en el donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, b) aislar una población de células sanguíneas enriquecidas con células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo de la sangre periférica del donador. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con un método para aislar un número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de un donador, que comprende: a) administrar a un donador una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados, o cualquier factor que induzca la liberación de la hormona del crecimiento sola, o en combinación con otros factores de crecimiento hematopoyéticos, a un sujeto, en una cantidad suficiente para inducir la movilización de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a la sangre periférica, b) aislar una población de células sanguíneas enriquecidas con células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de la sangre periférica del donador. En otra modalidad, la invención se relaciona con un método de preparación de una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende: a) administrar a un donador una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados, o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para inducir al donador la movilización o proliferación de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, b) aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de la sangre periférica del donador o aislar población de células sanguíneas enriquecidas con células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de la sangre periférica del donador. La etapa b) [es decir "aislamiento de una población de (células sanguíneas enriquecidas con) células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de sangre periférica del donador") de los métodos y usos de la invención puede corresponder con la operación de extraer sangre periférica del donador, en donde el número de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo se ha incrementado por la administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la hormona del crecimiento . sola o en combinación con otros factores. Una cantidad suficiente para incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, una cantidad suficiente para inducir la movilización o periferalización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o una cantidad suficiente para inducir la movilización de células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo a la sangre periférica se puede administrar en una o varias dosis durante uno o varios días. La operación de extraer sangre periférica de un donador puede corresponder a la leucaferesis. La leucaferesis es un procedimiento en el cual se extraen los leucocitos de la sangre extraída y el resto de la sangre se vuelve a transfundir al donador . Las célula-i capaces de regenerar hematopoyesis in vivo presentes en una población aisladas de células sanguíneas se puede purificar adicionalmente con el fin de incrementar la concentración de células, la purificación se puede realizar por selección positiva de células CD34 positivas. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con un método de preparación de un donador de células circulantes, células las cuales son capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende la administración al donador de una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en el donador. En otra modalidad, la invención se relaciona con un método para incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en un donador por administración al donador de una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento. El término "aumentado" o "incremento" y el término "enriquecido" generalmente significa, en el contexto de la invención que el parámetro (número "incrementado" o "enriquecido" tiene un valor convencional o estándar de este parámetro. El valor estándar del parámetro se mide en un cuerpo o en una muestra de un cuerpo la cual no ha recibido ningún agente movilizante de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. El valor estándar o convencional del número de células CD34+ por microlitro de sangre es, por ejemplo 3.8 (+ o - 3.2) células por microlitro de sangre periférica (Anderlini et al., 1997) . Las células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo pueden ser células CD34+. La frecuencia de células CD34+ en la sangre se puede medir por mediciones FACScan (Siena et al., 1989 & 1991) . El número aumentado de células CD34+ en la sangre periférica del donador o el nivel de enriquecimiento de células CD34+ en la preparación aislada de células sanguíneas puede ser mayor de 10, 25, 34 u 80 células CD34+ por microlitros de sangre periférica . El número aumentado de células CD34+ en la sangre periférica del donador o el nivel de enriquecimiento de células CD34+ en la preparación aislada de células sanguíneas puede ser de por lo menos 2 x 106 células CD34" por kilogramo de peso corporal de receptor, o de por lo menos 4 x 10s células CD34+ por kilogramo de peso corporal de receptor o por lo menos 8 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de receptor. El número aumentado de células CD34* en la sangre periférica del donador o el nivel de enriquecimiento de células CD34+ en la preparación aislada de células sanguíneas puede ser por lo menos 2 x 106, 4 x 106, . 5 x 106, 6 x 105, 8 x 106 o 15 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal del donador. Existe una correlación entre el número de células CD34* necesarias para transplante y la actividad correspondiente de GM-CFC la cual se puede medir (Weaver et al., 1998) . Por lo tanto, un número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o el nivel de enriquecimiento de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en la preparación aislada de células sanguíneas puede corresponder con por lo menos 1 x 105 GM-CSF por kilogramo de peso corporal de donador o receptor. El número de células CD34+ en la sangre se correlaciona bien con CFU-GM (Siena et al., 1991). CFU-GM es la unidad formadora se colonias de granulocitos y macrófagos. Por lo tanto, el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o el nivel de enriquecimiento de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en la preparación aislada de células sanguíneas puede corresponder a por lo menos 500 CFU-GM por mililitro de sangre periférica.

Con el mismo razonamiento, el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o el nivel de enriquecimiento de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en la preparación aislada de células sanguíneas puede corresponder con un nivel aumentado de CFU-C, CFU-Meg o BFU-E. CFU-C es la unidad formadora de colonias, cultivo, CFU-Meg es la unidad formadora de colonias, megacariocitos y BFU-E es la unidad formadora de descargas eritroides . El número de células CD34+ en la sangre se correlaciona bien con la cuenta de células sanguíneas blancas. Por lo tanto, el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o el nivel de enriquecimiento de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en una preparación aislada de células sanguíneas puede corresponder con por lo menos 1000 leucocitos por microlitro de sangre periférica. Las células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo pueden ser células CD34+ /CD33" o células CD34+ /CD38", o células CD34+/Thy-I, o células CD34+/Thy-I/CD38 y células CD33+ o células madre de médula ósea u otras células progenitoras y células iniciadoras de cultivo a largo plazo (LTC-IC) o bien células que satisfagan el potencial de renovación propio o bien células que satisfagan las características pluripotenciales o células que inicien el cultivo de médula ósea a largo plazo, o células que puedan generar líneas de células múltiples, o cualquier combinación de los anteriores. Las líneas de células pueden ser células sanguíneas completamente diferenciadas . Las células CD34+/CD38+ y CD34+/Thy-I y las células CD34+/Thy-I/CD38+ se menciona, por ejemplo, en Anderlini et al (véanse referencias) . Las células CD34+/CD33+ y las células CD33+ se mencionan, por ejemplo, en Siena et al ; 1991 (véanse referencias) . Las células iniciadoras de cultivo a largo plazo (LTC-IC) se mencionan, por ejemplo, en Hea ther et al (véanse referencias) . Las células que satisfacen el potencial de renovación propio o células que satisfacen características pluripotenciales o células que inician el cultivo de médula ósea a largo plazo se menciona, por ejemplo, en Anderlini et al (véanse las referencias) . En una modalidad adicional, la invención se relaciona con los siguientes usos: Uso de hormona del crecimiento, uno de sus derivados, o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para incrementar o expandir el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. Uso de hormona del crecimiento, uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para periferalización de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo.

Uso de hormona del crecimiento, uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento o una composición para incrementar o expandir el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. Uso de hormona del crecimiento, uno de los derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento o una composición para periferalización de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. Uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde las células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo son células CD34+. Uso de acuerdo con el uso precedente, en donde el número aumentado de células CD34+ es mayor de 10, 25, 34 u 80 células CD34+ por microlitro de sangre periférica. Uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el número aumentado de células CD34+ es de por lo menos 2 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de receptor, o por lo menos 4 x 105 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de receptor, o por lo menos 8 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de receptor.

Uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el número aumentado de células CD34+ es de por lo menos 2 x 105, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 8 x 106 o 15 x 10s células CD34+ por kilogramo de peso corporal del donador . El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a por lo menos 1 x 105 GM-CFC por kilogramo de peso corporal de donador o receptor. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde por lo menos 500 CFU-GM por mililitro de sangre periférica. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a una concentración aumentada de CFU-C, CFU-Meg o BFU-E. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde sustancialmente con una cuenta de leucocitos la cual es de por lo menos 1000 células por microlitro de sangre periférica. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde las células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo son células CD34+/CD33+ o células CD34+/CD3A+ y CD34+/Thy-I o células CD34+/Thy-I/CD38+ ó células CD33+ o células madre o células progenitoras o células que inician cultivo a largo plazo (LTC-IC) o células que satisfacen el potencial de renovación propio o células que satisfacen características pluripotenciales, o células que inician el cultivo de médula ósea a largo plazo, o cualquier combinación de los anteriores. El uso de acuerdo con cualquiera de los otros procedentes, en donde el medicamento o composición comprende además uno o varios compuestos que se eligen entre los siguientes grupos de compuestos : factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas y anticuerpos monoclonales. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el grupo de citocinas comprende IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF o SCF; el grupo de quimocinas comprende MlP-la o trombopoyetina (TPO) , el grupo de los anticuerpos monoclonales comprende anticuerpos contra VLA-4.

El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el medicamento o composición comprende hormona del crecimiento y G-CSF. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes en donde GH y G-CSF se administran de manera separada o simultáneamente. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes en donde la hormona del crecimiento se administra en una cantidad de aproximadamente 33 µg por kilogramo de peso corporal. El uso de acuerdo con cualquiera de los dos usos precedentes, en donde se administra G-CSF en una cantidad de aproximadamente 5 µg o aproximadamente 10 µg por kilogramo. El uso de acuerdo con cualquiera de los dos usos precedentes, en donde la administración se realiza por vía intravenosa o subcutánea. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración se realiza por vía parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica o bucal. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración es diaria o tres veces al día.

El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración de la hormona del crecimiento se realiza tres veces al día y la administración de G-CSF se realiza diariamente. - El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración se realiza durante un período de 5 días o durante un período de 10 días, hasta la leucaferesis o hasta la recuperación completa. - El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración se realiza hasta la leucaferesis o hasta la recuperación completa. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento recombinante. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento humana. En un segundo aspecto, la invención se relaciona con un método de preparación de una población de células circulantes capaz de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende: a) administrar a un donador una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para reducir el volumen de la sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, b) procesar o aislar el volumen reducido de sangre; y opcionalmente c) aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de tal volumen aislado. La etapa b) o c) [aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir del volumen aislado] de los métodos o usos de la invención puede corresponder a la operación de extraer sangre periférica del donador en donde el número de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo se ha incrementado por administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la hormona del crecimiento solo o en combinación con otros factores. Una cantidad suficiente para reducir el volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaz de regenerar hematopoyesis in vivo se puede administrar en una o varias dosis durante uno o varios días. La operación de extraer sangre periférica del donador puede corresponder con la leucaferesis. La leucaferesis es un procedimiento en el cual se remueven los leucocitos de sangre extraída y el resto de la sangre se vuelve a transfundir al donador . Las células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo presentes en la población aislada de células sanguíneas se pueden purificar adicionalmente con el fin de incrementar la concentración de las células. Tal purificación se puede realizar por selección positiva de células CD34 positivas. En otra modalidad, la invención se relaciona con un método para la preparación de un donador de células circulantes, células las cuales son capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende la administración al donador de una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para reducir el volumen de sangre que se requiere para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, o bien para reducir el número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes capaz de regenerar hematopoyesis in vivo para ser trasplantada. Una cantidad suficiente para reducir el volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo o bien reducir el número de leucaferesis requerida para recolectar la sangre suficiente de células circulantes capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo para ser trasplantada, se puede administrar en una o varias dosis durante uno o varios días. El volumen de sangre necesario para ser procesado puede ser el volumen de sangre necesario para ser procesado durante el procedimiento de aféresis o leucaferesis. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con un método para reducir el volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo en un donador o bien para reducir el número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo para ser trasplantada por administración de una composición que comprende la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento al donador. El término "reducido" generalmente significa en vista de la invención de que el parámetro "reducido" (volumen) tiene un valor el cual es inferior al valor estándar o convencional de este parámetro. El número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo es de por lo menos 2 x 104 LTC-IC por kg de cuerpo donador o receptor, aproximadamente o más de 2 x 10d células CD34+ por kilogramo de peso corporal del donador o receptor, aproximadamente o más de 4 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor, o aproximadamente o más de 8 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor. El volumen necesario de sangre puede estar constituido en un intervalo de aproximadamente 30 a aproximadamente 900 milímetros. En otra modalidad, la invención se relaciona con los siguientes usos: El uso de hormona del crecimiento, uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para reducir el volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. El uso de normona del crecimiento, uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para prepara un medicamento o una composición para reducir el volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. El uso de acuerdo con el uso precedente, en donde el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo es aproximadamente o mayor de 2 x 104 LTC-IC por kg de cuerpo de donador o receptor, aproximadamente o mayor de 2 x 10s células CD34* por kilogramo de peso corporal de donador o receptor, aproximadamente o más de 4 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor, o aproximadamente o más de 8 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor. - El uso de acuerdo con cualquiera de los dos usos precedentes, en donde el volumen necesario de sangre está comprendido en un intervalo de aproximadamente 30 a aproximadamente 900 mililitros. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el medicamento o composición comprende además uno o varios compuestos que se eligen de entre los siguientes grupos de compuestos: factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas y anticuerpos monoclonales. - El uso de acuerdo con cualquiera de las usos precedentes, en donde el grupo de citocinas comprende IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF o SCF; el grupo de quimocinas comprende MlP-la o trombopoyetina (TPO) , el grupo de los anticuerpos monoclonales comprende anticuerpos contra VLA-4.

El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde el medicamento o composición comprende hormona del crecimiento y G-CSF. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde se administran GH y G-CSF por separado o de manera simultánea. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes en donde la hormona del crecimiento se administra en una cantidad de aproximadamente 33 µg por kilogramo de peso corporal. El uso de acuerdo con cualquiera de los dos usos precedentes, en donde se administra G-CSF en una cantidad de aproximadamente 5 µg o aproximadamente 10 µg por kilogramo. El uso de acuerdo con cualquiera de los dos usos precedentes, en donde la administración se realiza por vía intravenosa o subcutánea. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración se realiza por vía parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica o bucal. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración es diaria o tres veces al día.

El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración de la hormona del crecimiento se realiza tres veces al día y la administración de G-CSF se realiza diariamente. - El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración se realiza durante un período de 5 días o durante un período de 10 días, hasta la leucaferesis o hasta la recuperación completa . - El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la administración se realiza hasta la leucaferesis o hasta la recuperación completa. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración o administraciones se realizan después de quimioterapia, radioterapia, terapia mielosupresora, transplante de células capaz de regenerar hematopoyesis in vivo o transplante de médula ósea. - El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la administración o administraciones comienzan aproximadamente 7 días después del inicio del tratamiento quimioterapéutico o aproximadamente 2 días después del final del tratamiento quimioterapéutico.

El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento recombinante. El uso de acuerdo con cualquiera de los usos precedentes, en donde la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento humana. En esta solicitud, el término "circulante" se puede sustituir por el término "sanguíneo" o "de sangre periférica" . El término "preparación" en la expresión "método de expresión" se puede sustituir por "tratamiento previo" o por "preparación de extracción de sangre" o leucaferesis" . Un "donador" como se menciona en los métodos o usos de la invención puede ser un humano o un animal, un individuo sano o enfermo "paciente" . El animal preferiblemente es un mamífero y se puede elegir de animales domésticos tales como perros, gatos, etc., o bien animales tales como caballos y borregos. El término "hematopoyesis" puede significar la formación de células sanguíneas. El término "hormona del crecimiento" abarca a la hormona humana del crecimiento" y todas las proteínas homologas de la hormona humana del crecimiento de diferentes especies y todos los homólogos de la hormona del crecimiento en especies diferentes a la humana. Las especies diferentes a la humana puede ser cualquier clase de animal doméstico o caballos, por ejemplo.

En una modalidad preferida, la hormona del crecimiento es hormona humana del crecimiento. La hormona del crecimiento (hGH) , también conocida como somatropina, es una hormona proteínica producida y secretada por células somatotrópicas de la hipófisis anterior. La hGH juega un papel clave en el crecimiento somático durante sus efectos en el metabolismo de proteínas, carbohidratos y lípidos. La hormona humana del crecimiento es una cadena polipeptídica única de 101 aminoácidos que tiene dos enlaces disulfuro, uno entre Cys-53 y Cys-165, formando un rizo grande en la molécula y el otro entre Cys-182 y Cys-189, formando un rizo pequeño cerca de la parte C terminal . El término "derivado" en la expresión "derivado de hormona del crecimiento" significa, en el contexto ee la invención, moléculas las cuales difieren estructuralmente de GH pero las cuales conservan la función de GH con respecto a su efecto directo o indirecto en el metabolismo de proteínas, carbohidratos y lípidos, o bien su efecto de movilización o efecto de recuperación (es decir, "movilización o periferalización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, reducción del número de leucaferesis necesarias para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante, reducción del volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo") . Los derivados de hormona humana del crecimiento (hGH) incluidos en la invención, incluyen derivados que se presentan de manera natural, variantes y productos metabólicos, productos de degradación principalmente de hGH biosintética y derivados sometidos a ingeniería de hGH producidos por métodos genéticos. Se puede utilizar cualquier derivado de hGH con el propósito de la presente invención en la medida en que retenga la actividad biológica de hGH en vista de la invención. Los ejemplos de derivados son variantes de empalme, oligómeros, agregados, productos de separación proteolítica, variantes que tienen sustituciones, inserciones o supresiones de uno o más aminoácidos, etc. La metionil hGH es un ejemplo de derivado de hGH el cual se produce a través de tecnología de ADN recombinante. Este compuesto en realidad es un derivado de hGH que tiene un residuo metionina adicional en su parte N terminal (Goeddel et al., 1979) . Otro ejemplo de derivado de hGH es una variante que se presenta de manera natural de hGH denominada 20-K-hGH la cual se ha informado que se presenta en la hipófisis así como en la corriente sanguínea (Lewis et al., 1978 ; Lewis et al, 1980) . Este compuesto, el cual carece de 15 residuos aminoácidos desde Glu-32 hasta Gln-46, surge del empalme alternado del ácido ribonucleico mensajero (DeNoto et al., 1981) . Otro ejemplo de derivado de hGH está acetilado en la parte N terminal (Lewis et al., 1979). La hormona del crecimiento humana puede además estar en una forma monomérica, dimérica y oligomérica de peso molecular superior o en una mezcla de tales formas. La hormona humana del crecimiento puede estar en formas agregadas que se encuentran tanto en la hipófisis como en la circulación (Stolar et al., 1984 ; Stolar and Baumann, 1986) . La forma dimérica de hGh puede ser de tipos distintos: un dímero disulfuro conectado a través de enlaces disulfuro entre cadenas (Lewis et al., 1977), un dímero covalente o irreversible que se detecta en geles de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida y que no es un dímero disulfuro (Bewley and Li, 1975), y un dímero no covalente el cual se disocia fácilmente en hGH monomérico por tratamiento con agentes que rompen las interacciones hidrofóbicas en las proteínas (Becker et al. , 1987) , un complejo dimérico con Zn+ (Cunningham et al . , 1991) , El análisis Scatchard ha mostrado que dos iones de Zn2+ se asocian por dímeros de hGh de una manera cooperativa, y que este complejo dimérico de Zn2+-hGH se encuentra que es más estable a la desnaturalización que hGH monomérico (Cunningham et al., 1991) . Surgen muchos derivados de hGh a partir de las modificaciones proteolíticas de la molécula. La vía principal para el metabolismo de hGH involucra la proteolísis. La región de hGH alrededor de los residuos 130-150 es extremadamente susceptible a proteólisis, y se han descrito varios derivados de hGH que tienen huecos o supresiones en esta región (Thorlacius-Ussing, 1987) . Esta región está en el rizo grande de hGH y la separación de un enlace peptídico aquí resulta en la generación de dos cadenas que se conectan a través de un enlace disulfuro en Cys-53 y Cys-165. Muchas de estas formas de dos cadenas se ha informado que tienen actividad biológica aumentada (Singh et al., 1974) . Se han generado artificialmente muchos derivados de hormona humana del crecimiento mediante el uso de enzimas. Se han utilizado las enzimas tripsina y subtilisina, así como otras, para modificar hGH en diversos puntos a través de la molécula (Lewis et al., 1977). Uno de tales derivados, derivado proteína anabólica de dos cadenas (2-CAP) , se forma a través de la proteólisis controlada de hGH utilizando tripsina. Otro ejemplo de derivado de hGH es hGH desamidada. Los residuos asparagina y glutamina en las proteínas son susceptibles a reacciones de desamidación bajo condiciones apropiadas. Un ejemplo de hGH desamidada es hGH de hipófisis la cual se ha mostrado experimenta este tipo de reacción, lo que resulta en conversión de Asn- 152 a ácido aspártico y además, en menor grado, la conversión de Gln-137 a ácido glutámico (Lewis et al., 1981) . Otro ejemplo de hGH desamidada es hGH biosintética la cual se conoce se degrada bajo ciertas condiciones de almacenamiento, lo que resulta en la desamidación en una asparagina diferente (Asn-149) . Este es el sitio primario de desamidación, pero también se ha observado la desamidación en Asn-152 (Becker et al., 1988) . La desamidación en Gln-137 no se ha reportado en hGH biosintética. Otro ejemplo de derivado de hGH es sulfóxido de hGH.

Los residuos metionina en las proteínas son susceptibles de oxidación, principalmente al sulfóxido. Tanto la hGH derivada de hipófisis como la biosintética experimentan sulfoxidaciones en Met-14 y Met-125 (Becker et al., 1988). También se ha informado de la oxidación en Met-170 en la hipófisis pero no en hGH biosintética. Otro ejemplo de derivado de hGH son las formas truncadas de hGH las cuales se han producido, ya sea a través de acciones de enzimas o bien por métodos genéricos. 2-CAP, generada por las acciones controladas de tripsina, tiene los primeros ocho residuos removidos en la parte N terminal de hGH. Se han producido otras versiones truncadas de hGH al modificar el gen antes de la expresión en un huésped adecuado. Los primeros 13 residuos se han removido para proporcionar un derivado que tiene propiedades biológicas diferentes en las cuales no se separa la cadena polipeptídica (Gertler et al., 1986). Se pueden producir hGH y sus derivados por tecnología de ADN recombinante lo que permite la producción de un suministro ilimitado de hGH en muchos sistemas diferentes. La purificación de hGH o sus derivados a partir del medio de cultivo se facilita por cantidades bajas de proteínas contaminantes presentes. De hecho, se ha demostrado que se puede purificar hGH a escala de laboratorio por una simple etapa de purificación en una columna de CLAP en fase inversa. El hGH recombinante generalmente se vende como frascos que contienen hGH más excipientes adicionales, por ejemplo glicina y manitol, en una forma liofilizada. Se proporciona un frasco diluyente acompañante, que permite que el paciente reconstituya el producto a la concentración deseada antes de la administración de la dosis. En general, no se han observado diferencias importantes en la farmacocinética o las actividades biológicas en la secuencia natural recombinante de hGH, N-metionil -hGH recombinante o material derivado de hipófisis en humanos (Moore et al., 1988 ; Jorgensen et al., 1988). La hormona humana del crecimiento, como se utiliza en la presente invención puede incluir derivados funcionales como se indica en lo anterior, así como otros tipos de derivados, fragmentos, variantes, análogos o derivados químicos. Un derivado funcional retiene por lo menos una porción de la secuencia de aminoácidos de hGH lo que permite su utilidad de acuerdo con la presente invención, específicamente la movilización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, por ejemplo. En el significado de la invención, un "derivado" puede ser: Un fragmento de la hormona humana del crecimiento de acuerdo con la presente invención que se refiere a cualquier subconjunto de la molécula, esto es, un péptido más corto. Una "variante" de la de la hormona humana del crecimiento de acuerdo con la presente invención se refiere a una molécula la cual es sustancialmente similar ya sea al péptido completo o a un fragmento del mismo. Los péptidos variantes se pueden preparar convenientemente por síntesis química directa del péptido variante, utilizando métodos bien conocidos en el arte. De manera alternativa, se pueden preparar variantes de aminoácidos de hGH por mutaciones en el ADNc que codifica para los derivados de hGH sintetizados. Tales variantes comprenden supresiones, inserciones o sustituciones de residuos dentro de la secuencia de aminoácidos. También se puede realizar cualquier combinación de supresiones, inserciones y sustituciones, con la condición de que el constructo final posea la actividad deseada. A nivel genético, estas variantes habitualmente se preparan por mutagénesis dirigida al sitio (como se ejemplifica por (Adelman et al., 1983)) de nucleótidos en el ADN que codifican para la molécula peptídica, por lo que producen ADN que codifica para la variante, y posteriormente expresan el ADN en un cultivo de células recombinantes. Las variantes típicamente muestran la misma actividad biológica que el péptido no variante. Un "análogo" de la hormona humana del crecimiento de acuerdo con la presente invención, se refiere a una molécula no natural la cual es sustancialmente similar ya sea a la molécula completa o a un fragmento activo de la misma. Un "derivado químico" de la hormona humana del crecimiento de acuerdo con la presente invención contiene porciones químicas adicionales que normalmente no son parte de la secuencia de aminoácidos derivados de la hormona humana del crecimiento. Se incluyen dentro del alcance de esta invención las modificaciones covalentes de la secuencia de aminoácidos. Tales modificaciones se pueden introducir dentro de la hormona humana del crecimiento al hacer reaccionar los residuos aminoácidos dirigidos del péptido con un agente derivatizante orgánico que sea capaz de reaccionar con las cadenas laterales seleccionadas o los residuos terminales. Los tipos de sustituciones los cuales se pueden realizar en la hormona humana del crecimiento de acuerdo con la presente invención se pueden basar en el análisis de las frecuencias de cambios de aminoácidos entre una proteína homologa de especie diferente. En base en tal análisis, las sustituciones conservadoras de pueden definir aquí como cambios dentro de uno de los siguientes cinco grupos: I: Residuos pequeños, alifáticos, no polares o ligeramente polares: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly II: Residuos polares, con carga negativa y sus amidas: Asp, Asn, Glu, Gln. III: Residuos polares, con carga positiva: His, Arg, Lys IV: Residuos grandes, alifáticos no polares: Met, Leu, lie, Val , Cys V: Residuos aromáticos grandes: Phe, Try, Trp Dentro de los grupos anteriores, se consideran las siguientes sustituciones como "altamente conservadoras" : Asp/Glu His/Arg/Lys Phe/Tyr/Trp Met/Leu/Ile/val Las sustituciones semiconservadoras se definen como los cambios entre dos de los grupos (I) -(IV) anteriores los cuales se limitan al supergrupo (A) que comprende (I), (II) y (III) anteriores, o al supergrupo B, que comprende a (IV) y (V) anteriores. Las sustituciones no se limitan a los aminoácidos codificados genéticamente o incluso los que se presentan de manera natural. Cuando el epitopo se compara por síntesis peptídica, se puede utilizar directamente el aminoácido deseado. De manera alternativa, se puede modificar un aminoácido modificado genéticamente al hacerlo reaccionar con un agente derivatizante orgánico que sea capaz de reaccionar con las cadenas laterales seleccionadas o los residuos terminales. Los residuos cisteinilo que reaccionan más comúnmente con alfa-haloacetatos (y las aminas correspondientes) tales como ácido cloroacético o cloroacetamida, para proporcionar derivados carboxilmetilo o carboxiamidometilo. Los residuos cisteinilo también son derivatizados por reacción con bromotrifluoroacetona, ácido alfa-bromo-beta- (5-imidazoil) propiónico, fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas, disulfuro de 3-nitro-2-piridilo, disulfuro de metil-2-piridilo, p-cloromercuribenzoato, 2-cloromercuri-4-nitrofenol o cloro-7-nitrobenzo-2-oxa-l, 3 -diazol . Los residuos histidilo se derivatizan por reacción con dietilprocarbonato a pH 5.5-7.0 debido a que este agente es relativamente específico para la cadena lateral histidilo. También es útil el bromuro de parabromofenacilo; la reacción preferiblemente se lleva a cabo en cacodilato de sodio 0.1 M a pH 6.0. Los residuos lisinilo y amino terminal se hacen reaccionar con anhídrido de ácido succínico u otro anhídrido de ácido carboxílico. La derivatización con estos agentes tiene el efecto de invertir la carga de los residuos glicinilo. Otros reactivos adecuados para derivatizar residuos que contienen aminoácidos alfa incluyen imidoésteres tales como picolidimidato de metilo; fosfato de piridoxal; piridoxal; cloroborohidruro; ácido trinitrobencensulfónico; o-metilisourea; 2 , 4-pentanodiona; y reacción catalizada por transaminasa con glioxilato. Los residuos arginilo se modifican por reacción con uno o varios reactivos convencionales, entre ellos fenildioxal; 2,3-butanodiona y ninhidrina. La derivatización de residuos arginina requiere que la reacción se realice en condiciones alcalinas debido a la alta pKa del grupo funcional guanidina. Además, estos reactivos pueden reaccionar con los grupos de lisina, así como con el grupo amino epsilon arginina. La modificación específica de los residuos tirosilo se ha estudiado extensamente per se, con interés particular en la introducción de marcas espectrales dentro de los residuos tirosilo por reacción con compuestos aromáticos de diazonio o tetranitrometano. Más comúnmente, se utiliza N-acetilimidazol y tetranitrometano para formar las especies O-acetiltirosilo y derivados e-nitro, respectivamente. Los grupos laterales carboxilo (aspartilo o glutamilo) se modifican selectivamente por reacción con carbodiimidas (R'N-C-N-R') tales como 1-ciclohexil -3 - [2 -morfolinil - (4 -etil) ] carbodiimida o l-etil-3- (4-azonia-4, 4-dimetilpentil) carbodiimida. Además, los residuos aspartilo y glutamilo se convierten a residuos asparaginilo y glutaminilo por reacción con iones amonio. Los residuos glutaminilo y asparaginilo con frecuencia se desamidan a los residuos glutamilo y aspartilo correspondientes. De manera alternativa, estos residuos se desamidan bajo condiciones acidas moderadas. Cualquier forma de estos residuos se encuentra dentro del alcance de esta invención. Aunque la presente invención se puede llevar a cabo con derivados recombinantes de hormona humana del crecimiento elaborada por tecnología de ADN recombinante, por ejemplo en células procarióticas o eucarióticas, estos derivados también se pueden elaborar por métodos de síntesis proteínica convencional los cuales son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica . La hormona del crecimiento puede ser una proteína, un péptido, una molécula de ADN, una molécula de ARN. La molécula de ADN y la molécula de ARN pueden codificar para hGH y todos sus derivados incluyendo los mencionados antes. La hormona del crecimiento preferiblemente puede ser una hormona del crecimiento recombinante. La determinación de las cantidades de hormona del crecimiento, de uno de sus derivados o de cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento que se va a administrar en un método o uso de la invención descrita antes, está dentro de la habilidad de la técnica.

La dosificación típica de hormona del crecimiento, de uno de sus derivados o de cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento comenzará en aproximadamente 1 microgramo por kilogramo de peso de paciente por día y la dosis se incrementará hasta que se alcance el efecto deseado (movilización o periferalización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, incremento del número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, reducción del número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante, reducción del volumen de sangre que se necesita procesar con el fin de obte er el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo) . La dosificación de la hormona del crecimiento, de uno de sus derivados o de cualquier factor que induzca a la liberación de la hormona del crecimiento administrada depende de la edad, sexo, salud y peso del donador, tipo de tratamiento previo o concurrente, si lo hay, frecuencia de tratamiento y la naturaleza del efecto deseado. La hormona del crecimiento o uno de sus derivados ventajosamente se puede administrar en una cantidad comprendida entre 20 y 50 µg por kilogramo de peso corporal, de manera más particular entre 30 y 40 µg por kilogramo de peso corporal.

Una dosificación preferida de hormona del crecimiento o uno de sus derivados que se va a administrar es de aproximadamente 33 µg por kilogramo de peso corporal. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento se puede administrar solo o junto o asociado con otros factores. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento puede estar presente ventajosamente en una composición la cual comprende además uno o varios compuestos que se eligen de entre los compuestos que pertenecen a los siguientes grupos : factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas y anticuerpos monoclonales. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento y uno o varios de los compuestos se eligen de entre los compuestos que pertenecen a los siguientes grupos: factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas, anticuerpos monoclonales que se pueden administrar simultáneamente o en momentos diferentes o en el mismo sitio o en sitios diferentes, o en la misma composición o medicamento o en uno diferente. El grupo citocina puede comprender IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF o SCF. El grupo quimocina puede comprender ElP-la o trombopoyetina (TPO) . El grupo de anticuerpo monoclonal puede comprender anticuerpos contra VLA-4.

Preferiblemente, la hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la hormona del crecimiento está presente en una composición la cual comprende factor estimulador de colonia de granulocitos (G-CSF) . Preferiblemente, la hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca la hormona del crecimiento se asocia con G-CSF. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la hormona del crecimiento y G-CSF se puede administrar simultáneamente o en momentos diferentes, o en el mismo sitio o en sitios diferentes, o en una composición o medicamento igual o diferente. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF ventajosamente se puede administrar por separado. Se puede administrar ventajosamente G-CSF en una cantidad comprendida entre 3 y 15 µg por kilogramo de peso corporal, más particularmente entre 4 y 12 µg por kilogramo de peso corporal . Una dosificación preferida de G-CSF para ser administrada es de aproximadamente 5 µg o aproximadamente 10 µg por kilogramo de peso corporal. En una modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados se administra en una cantidad comprendida entre 20 y 50 µg por kilogramo de peso corporal, más particularmente entre 30 y 40 µg por kilogramo de peso corporal y se administra G-CSF en una cantidad comprendida entre 3 y 15 µg por kilogramo de peso corporal, de manera más particular entre 4 y 12 µg por kilogramo de peso corporal . En una modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados se administra en una cantidad de 33 µg por kilogramo de peso corporal y se administra G-CSF en una cantidad de aproximadamente 5 µg o aproximadamente 10 µg por kilogramo de peso corporal . De acuerdo con la invención, la expresión "administración en una cantidad suficiente para incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o reducir el volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo" puede significar una o varias administraciones, una o varias veces al día y durante uno o varios días para una cantidad acumulada suficiente para incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o para reducir el volumen de sangre necesaria que se procese con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. Las composiciones farmacéuticas o las composiciones las cuales se utilizan en los métodos y usos de la invención están en una forma aceptable y farmacéutica opcionalmente combinados con un portador aceptable. Estas composiciones se pueden administrar por cualquier medio que obtenga los propósitos que se proponen. Las composiciones utilizadas en los métodos o usos de la invención se pueden administrar solas o junto con otras sustancias terapéuticas dirigidas a una enfermedad o dirigidas a otros síntomas de la misma. Las composiciones utilizadas en los métodos o usos de la invención se pueden administrar por vía intravenosa o subcutánea . Después de la administración intravenosa, la eliminación de hGH se describe por una cinética de primer orden con una vida media sérica de 12-30 minutos tanto en animales como en humanos (Moore et al., 1988; Hendricks et al., 1985) . Tradicionalmente, la inyección intramuscular ha sido el método de elección como la vía preferida de suministro. En los humanos, la absorción de hGH exógena parece ser más rápida desde el sitio intramuscular, con un tiempo para una concentración máxima de dos a tres horas, en comparación con cuatro a seis horas después de la administración subcutánea. La fase de desaparición del suero se ha informado que varía entre 12-20 horas para la administración intramuscular, y 20-24 horas después de la administración subcutánea (Albertsson-Wikland et al., 1986; Jorgensen et al., 1987).

La composición utilizada en los métodos o usos de la invención se pueden administrar por vías parenterales tales como vía subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o transdérmica o bien por vías mucosales como vía bucal u oral. La composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormonas del crecimiento se puede administrar por vía parenteral por ejemplo por vía subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o transdérmica o bien por vías mucosales tales como vía bucal u oral. Preferiblemente, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento se administra subcutáneamente. La dosis total o cantidad necesaria para cada tratamiento, método o uso de la invención se puede administrar en dosis múltiples o únicas. La composición que comprende hormonas del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento se puede administrar diariamente o tres veces al día. Preferiblemente, la composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento se administra tres veces al día.

Preferiblemente, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento se administra diariamente o tres veces al día . En una modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento se administra tres veces al día. Si un método o uso de la invención comprende la administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF, G-CSF preferiblemente se administra una vez al día o bien por vía subcutánea. Si un método o uso de la invención comprende la administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento preferiblemente se administra tres veces al día y G-CSF preferiblemente se administra diariamente. La composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento puede ser una administración diaria que puede comenzar hasta 20 días antes de la leucaferesis.

La composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento se puede administrar durante un período de 5 días o durante un período de 10 días, hasta la leucaferesis o hasta que se alcance el efecto deseado (movilización o periferalización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, reducción en el número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante, reducción del volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo) . Preferiblemente, la composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento que se administre hasta que la leucaferesis o hasta que se obtenga el efecto deseado (movilización o periferalización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, incremento del número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, reducción del número de leucaferesis necesarias para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante, reducción del volumen de sangre que se necesita procesar con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivó) . Los métodos y usos de la invención ventajosamente se llevan a cabo después de quimioterapia, radioterapia, terapia mielosupresora, transplante o injerto de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo o de transplante de médula ósea. Los métodos y usos de la invención ventajosamente se llevan a cabo aproximadamente 7 días después del inicio de un tratamiento quimioterapéutico o aproximadapu -;e 2 días después del final de un tratamiento quimioterapéutico. En una modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF se administra hasta la leucaferesis, hasta la movilización o periferalización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, hasta el incremento en el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, hasta la reducción del número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante o hasta la reducción del volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. En esta modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento preferiblemente se administra tres veces al día y G-CSF pref -riblemente se administra una vez al día. Los métodos y usos de la invención se pueden combinar con un tratamiento previo denominado "quimiopreparación" . Los regímenes de "quimiopreparación" los cuales se pueden utilizar son: altas dosis de ciclofosfamidas (4 g/m2) para pacientes con cáncer de mama o mieloma múltiple, ifosfamida, etopósido para pacientes con linfoma que no es de Hodgkin o enfermedad de Hodking ciclofosfamida, etopósido, cisplatina (CVP) para pacientes con tumores sólidos (por ejemplo cáncer de mama) . Para mejorar la inducción de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo unidas nuevamente, los métodos y usos de la invención se usan poco después de completar el tratamiento de quimiopreparación y continúan hasta completar la aféresis (5 a 12 µg/kg/d) . También resulta notable que en pacientes cuyo acumulado de células madre óseas está disminuido significativamente por quimioterapia previa, un régimen de quimiopreparación adicional puede dañar en vez de inducir células capaces de regenerar la periferalización de hematopoyesis in vivo. Los agentes quimioterapéuticos tóxicos para las células madre tales como busulfan, doxorrubicina, melfalano, tiotepa y posiblemente fludarabina (y otros) no deben ser parte de quimiopreparación. Por otra parte, se considera a la ciclofosfamida como el medicamento ideal de quimiopreparación con el menor número de células con toxicidad, capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, aunque la cardiotoxicidad (dosis > 4 g/m2) y la cistitis hemorrágica son efectos colaterales extramedulares limitantes de la dosis bien conocidos (Shepperd et al., 1990) . La población ae células sanguíneas enriquecidas con células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo que se obtienen de sangre periférica por los métodos y usos de la invención se pueden suministrar por infusión nuevamente, injertar o transplantar al mismo individuo el cual, en este caso, es el donador (transplante autólogo) o dentro de individuos diferentes (transplante no autólogo) . La población de células sanguíneas enriquecidas con células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo que se obtienen en sangre periférica por los métodos y usos de la invención se suministran por infusión ventajosamente en un individuo el cual previamente ha recibido una o varias de quimioterapia, radioterapia, terapia mielosupresiva, mieloablativa o mielotóxica. Tal operación de infusión nuevamente, injertado o transplante pertenece a lo que se denomina procedimientos de transplante de células madre hematopoyéticas (HSCT) . T-SCT es un procedimiento clínico en el cual se transplantan a un paciente células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, las cuales se obtienen de médula ósea o de sangre periférica. Un transAante autólogo es un transplante en el cual el donador y el receptor son el mismo individuo, mientras que un transplante no autólogo es un transplante en el cual el donador y el receptor son individuos diferentes. El método de la invención abarca trasplantes autólogos y no autólogos. Por otra parte, la invención proporciona un método o un uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento, para mejorar el efecto de movilización o periferalización de G-CSF. La invención proporciona un método o un uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para mejorar la movilización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo por G-CSF, para mejorar e incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo por G-CSF, o para mejorar la reducción del número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante por G-CSF, o para mejorar la reducción del volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo por G-CSF. Así, la administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF mejora o incrementa sinergísticamente la movilización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, mejora o incrementa sinergísticamente el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, reduce el número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante, o reduce el volumen de sangre necesaria para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo con respecto a los efectos que se obtienen al administrar G-CSF solo o sin hormona del crecimiento, o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento. La administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF permite utilizar dosis más bajas de G-CSF en comparación a si se utilizara solo G-CSF o sin la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento. La administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF se puede llevar a cabo simultáneamente o en momentos diferentes por el mismo sitio o en sitios diferentes, o en una composición o medicamento igual o diferente.

En un segundo aspecto, la invención proporciona usos nuevos para mejorar la reconstitución hematopoyética. La invención se relaciona con un agente capaz de promover, mejorar o acelerar la regeneración, recuperación o reconstitución hematopoyética. La invención proporciona usos nuevos para mejorar la reconstitución hematopoyética. Por lo tanto, la invención se relaciona con el uso de hormona del crecimiento humana o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de la hormona del crecimiento humana para preparar un medicamento para mejorar la reconstitución hematopoyética en un ser humano. A través de la solicitud, el término "mejorar" y todos los términos que tengan la misma raíz se puedan sustituir por el término "promover" o el término "acelerar" . En la solicitud, el término "reconstitución" y todos los términos que tengan la misma raíz se pueden sustituir por el término "recuperación" o por el término "regeneración" . En otra modalidad, la invención se relaciona con el uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento para mejorar la reconstitución hematopoyética después de transplante de médula ósea en un ser humano. En otra modalidad, la invención se relaciona con el uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento para mejorar el injertado de médula ósea o células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, en un se- humano. Otra modalidad de la invención es el uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento para mejorar la reconstitución hematopoyética después del transplante de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con el uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento para mejorar el injertado de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo . La hormona del crecimiento ventajosamente puede ser hormona humana del crecimiento. La hormona del crecimiento y sus derivados pueden corresponder con hormona del crecimiento y sus derivados los cuales se mencionan antes en esta solicitud en relación con la primera parte de la invención. La reconstitución hematopoyética o injertado mejorado se puede detectar por un incremento de la cuenta de leucocitos periféricos ((WBC) o la cuenta de granulocitos, o la cuenta de linfocitos, o la cuenta de plaquetas o la cuenta de eritrocitos, o cualquier combinación de los anteriores. Un incremento en la cuenta de leucocitos periféricos (WBC) o la cuenta de granulocitos o la cuenta de linfocitos o la cuenta de plaquetas o la cuenta de eritrocitos, o cualquiera de las anteriores, se puede detectar por comparación con la tasa de incremento de tales cuentas en un individuo quien ha recibido el mismo régimen de transplante pero quien no ha recibido ningún tratamiento de reconstitución hematopoyética. La reconstitución hematopoyética o el injerto mejorado se pueden detectar por reducción del período de tiempo necesario para recuperar una cuenta de leucocitos periféricos (WBC) o una cuenta de granulocitos, o una cuenta de neutrófilos, o una cuenta de linfocitos, o una cuenta de plaquetas o una cuenta de eritrocitos normal o estándar. Una cuenta de leucocitos periféricos (WBC) o una cuenta de granulocitos o una cuenta de neutrófilos o una cuenta de linfocitos o una cuenta de plaquetas o una cuenta de eritrocitos normal o estándar es una la cual se mide en un individuo sano o en un individuo el cual no ha recibido ninguna terapia mieloablativa, mielotóxica o mielosupresora y ninguna quimioterapia, radioterapia o transplante. Una cuenta de neutrófilos normales puede ser de por lo menos 0.5 x 109 células neutrófilas por litro de sangre periférica. Una cuenta normal de plaquetas puede ser por lo menos 20 x 109 por litro de sangre periférica. La reconstitución hematopoyética o el injertado mejorado se pueden detectar por una reducción en la extensión o duración de neutropenia o trombocitopenia o anemia o hemorragias o duración de la profilaxis. La reconstitución hematopoyética o el injertado mejorado se pueden detectar por una reducción de la duración o gravedad de la fiebre o las infecciones. Una reducción de la extensión o duración de la neutropenia o trombocitopenia o anemia o hemorragias o duración de profilaxis o una reducción de la duración o gravedad de la fiebre o infecciones se puede comparar con la extensión o duración de la gravedad medida en un individuo quien ha recibido el mismo régimen de transplante, la misma quimioterapia, la misma radioterapia o la misma terapia mielosupresora, mieloablativa o mielotóxica, pero que no ha recibido ningún tratamiento de reconstitución hematopoyética. La reconstitución hematopoyética o el injertado mejorado se pueden detectar por la recuperación de granulocitos la cual es de por lo menos 1000 por microlitro de sangre periférica . La reconstitución hematopoyética o el injertado mejorado se pueden detectar por una recuperación de la cuenta de plaquetas en la cual es de por lo menos 50,000 por microlitro de sangre periférica. En otra modalidad, la invención se relaciona con el uso de hormonas de crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para tratar una enfermedad neoplásica, un desorden hematológico, cánceres malignos, deficiencias inmunes combinadas graves (SCID) , anormalidades hematopoyéticas determinadas congénita o genéticamente, anemia, anemia aplásica, leucemia u osteoporosis. Una enfermedad neoplásica puede ser cáncer de mama. En otra modalidad, la invención se relaciona con el uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para reducir aplasia de médula ósea período el cual sigue al transplante, quimioterapia, radioterapia o terapia mieloablativa, mielosupresora o mielotóxica, para evitar o tratar infecciones oportunistas después de transplante, quimioterapia, radioterapia o terapia mieloablativa, mielosupresora o mielotóxica o para limitar el riesgo de recurrencia de tumor después de transplante, quimioterapia, radioterapia o terapia mieloablativa, mielosupresora o mielotóxica. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con el uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para evitar o tratar efectos secundarios de terapia mieloablativa, mielotóxica o mielosupresora o radioterapia o quimioterapia o transplante. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con el uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para evitar o tratar neutropenia o trombocitopenia o ambas. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con el uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para evitar o tratar anemia después de radioterapia o quimioterapia o transplante de células madre hematopoyéticas o transplante de células capaces de regenerar hematopoyesis o transplante de médula ósea o terap_a mielosupresora o mielotóxica. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con el uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para evitar o tratar neutropenia, seguido radioterapia o quimioterapia o transplante de células madre hematopoyéticas o transplante de células capaces de regenerar la hematopoyesis o transplante de médula ósea o terapia mielosupresora o mielotóxica.

En una modalidad adicional, la invención se relaciona con el uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para evitar o tratar trombocitopenia, después de radioterapia o quimioterapia o transplante de células madre hematopoyéticas o transplante de células capaces de regenerar hematopoyesis o transplante de médula ósea o terapia mielosupresora o mielotóxica. Las células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo pueden pertenecer a uno varios de los siguientes grupos de células: células CD34\ células CD34AD33\ células CD34AD38", células CD34Ahy-I, células CD34+Thy-ICD38", células CD33+ , células madre, células progenitoras, células iniciadoras de cultivo a largo plazo (LTC-IC) , células que satisfacen el potencial propio de renovación, células que satisfacen las características pluripotenciales, células que inician el cultivo de médula ósea a largo plazo. La determinación de las cantidades de hormona del crecimiento de uno de sus derivados o de cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento que se va a administrar en un método o uso de la invención descrita antes, está dentro de la habilidad de la técnica. La dosificación típica de hormona del crecimiento, o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca ".a liberación de hormona del crecimiento comenzará en aproximadamente 1 microgramo por kilogramo de peso de paciente por día y la dosis se incrementará hasta que se alcance el efecto deseado (recuperación hematopoyética o injertado) . La dosificación de hormona del crecimiento, o uno de sus derivados o de cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento administrada depende de la edad, sexo, salud y peso del donador, tipo de tratamiento previo o concurrente, si lo hay, frecuencia del tratamiento y naturaleza del efecto que se desea. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento se puede administrar sola o junto o en asociación con otros factores. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento ventajosamente pueden estar presentes en una composición o un medicamento el cual comprende adicionalmente uno o varios compuestos que se eligen de entre los compuestos que pertenecen a los siguientes grupos: factores de crecimiento hematopoyético, citocinas, quimocinas, anticuerpos monoclonales. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento y uno o varios compuestos que se eligen entre los compuestos que pertenecen a los siguientes grupos: factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas, anticuerpos monoclonales, se pueden administrar simultáneamente o en momentos diferentes, o en el mismo sitio o en sitios diferentes, o en la misma composición o en composiciones diferentes de medicamento. El grupo citocina puede comprender IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF o SCF. El grupo de quimocina puede comprender MlP-la o trombopoyetina (TPO) . El grupo de anticuerpo monoclonal puede comprender anticuerpos contra VLA-4. Preferiblemente, la hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la hormona del crecimiento está presente en una composición o un medicamento el cual comprende factor estimulador de colonia de granulocitos (G-CSF) . Preferiblemente, la hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la hormona del crecimiento está asociado con G-CSF. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca a la hormona del crecimiento y G-CSF se puede administrar simultáneamente o en momentos diferentes, o en el mismo sitio o en sitios diferentes, o en una composición o medicamento igual o diferente. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF ventajosamente se puede administrar por separado. La hormona del crecimiento o sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento o G-CSF se administra en una cantidad suficiente para mejorar la reconstitución hematopoyética o el injertado. La administración en una cantidad suficiente para mejorar la reconstitución hematopoyética o el injertado puede significar una o varias administraciones, una o varias veces al día y durante uno o varios días por una cantidad suficiente acumulada para mejorar la reconstitución hematopoyética o el injertado. Las composiciones farmacéuticas o medicamentos o composiciones las cuales se utilizan en los métodos y uso de la invención están en una forma farmacéutica aceptable opcionalmente combinada con un portador aceptable. Estas composiciones o medicamentos se pueden administrar en cualquier medio que obtenga su propósito deseado. Las composiciones o medicamentos utilizados en los métodos o usos de la invención se pueden administrar solos o con otras sustancias terapéuticas dirigidas a una enfermedad o dirigidas a otros síntomas de la misma. Las composiciones o medicamentos utilizados en los métodos o usos de la invención se pueden administrar por vía intravenosa o subcutánea. Las composiciones o medicamentos adjudicados en los métodos o usos de la invención se pueden administrar por vía parenteral como subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o transdérmica o bien por vía de mucosa por ejemplo por vía bucal u oral. La composición o el medicamento que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se puede administrar por vía parenteral por ejemplo vía subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o transdérmica o bien por vía mucosal tal como bucal u oral . Preferiblemente, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se administra por vía subcutánea. La dosis total o cantidad requerida para cada tratamiento, método o uso de la invención se puede administrar en dosis múltiples o únicas. La composición o medicamento que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se puede administrar diariamente o tres veces al día. Preferiblemente, la composición o medicamento que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se administra tres veces al día. Preferiblemente, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de iormona del crecimiento se administra diariamente o tres veces al día. En una modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se administra tres veces al día. Si un método o uso de la invención comprende la administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF, preferiblemente G-CSF se administra una vez al día o por vía subcutánea. Si un método o uso de la invención comprende la administración de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento preferiblemente se administra tres veces al día y G-CSF se administra preferiblemente diario. La administración del medicamento se puede realizar durante un período de 3 días, hasta la leucaferesis o hasta la recuperación completa. La administración del medicamento se puede realizar desde el día 1 hasta el día 3 después del transplante. El término "transplante" abarca transplante de médula ósea o transplante de células madre hematopoyéticas.

La composición o medicamento que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento puede ser una administración diaria que puede iniciarse hasta 20 días antes la leucaferesis. La composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se puede administrar durante un período de 5 días o durante un período de 10 días hasta que se alcance el efecto deseado (recuperación hematopoyética o injertado) . Preferiblemente, la composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se administra hasta que se alcanza el efecto deseado (recuperación hematopoyética o injertado) . Los métodos y usos de la invención se llevan a cabo ventajosamente después de quimioterapia, radioterapia, terapia mielosupresora, transplante o injerto de células capaces de regenerar la hematopoyesis in vivo o transplante de médula ósea. Los métodos y usos de la invención se llevan a cabo aproximadamente ventajosamente los 7 días después del inicio de un tratamiento quimioterapéutico o aproximadamente 2 días después de finalizar el tratamiento quimioterapéutico.

En una modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca a la liberación de hormona del crecimiento y G-CSF se administra hasta la reconstitución hematopoyética o injertado. En esta modalidad preferida, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento preferiblemente se administra tres veces al día y G-CSF preferiblemente se administra una vez al día. La hormona del crecimiento utilizada en el medicamento ventajosamente puede ser una hormona del crecimiento recombinante . La hormona del crecimiento utilizada en el medicamento ventajosamente puede ser una hormona del crecimiento humana. En una tercera parte, la invención proporciona una combinación de métodos y usos de la primera parte de la invención (movilización) con los métodos y usos de la segunda parte de la invención (recuperación) . Tal combinación de métodos y usos son los métodos de movilización y recuperación los cuales se pueden aplicar en casos de transplante autólogo de células madre hematopoyéticas en donde el donador y el receptor son la misma persona o individuo. Así, la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento se puede utilizar como un agente movilizador en una primera etapa de movilización la cual es un pretratamiento en vista de la extracción de células sanguíneas y como un agente de recuperación hematopoyética en una segunda etapa después del transplante. Tal combinación de métodos y usos es muy útil. De hecho, el transplante de células movilizadas por hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento a un paciente resulta en una recuperación hematológica más rápida en comparación con un transplante sin el tratamiento previo de movilización al paciente . Los métodos y usos de la invención se pueden aplicar en muchos campos clínicamente importantes, específicamente transplante de médula ósea autóloga, transplante de médula ósea alogeneica, terapia de genes, transplante de células madre hematopoyéticas, transplante de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, radioterapia, quimioterapia, terapia mielosupresora o mielotóxica. Los métodos y usos de la invención se pueden aplicar para tratar a un paciente quien ha recibido radioterapia o quimioterapia, quien ha sido sometido a transplante de médula ósea o de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, o quien ha recibido terapia mielotóxica o mieloablativa.

LEYENDA DE LAS FIGURAS: Figura 1 : Abreviaturas : - GH : Hormona del crecimiento - G-CSF : Factor estimulador de células granulocíticas - ND : No detectable Figura 2 : Esta gráfica muestra el número de células CD34+/µl de sangre obtenida en un paciente durante 3 ciclos de quimioterapia después de un tratamiento de movilización en donde se administra únicamente G-CSF (ciclo 1) , GH + G-CSF (ciclo 2) y únicamente G-CSF (ciclo 3) .

Ejemplos 2 Abreviaturas v notas: - BFU-E : unidad formadora de descarga, eritroide - CFU-C : unidad formadora de colonia, cultivo - CFU-GM : unidad formadora de colonia, granulocito y macrófago - CFU-Meg : unidad formadora de colonia, megacariocito - G-CSF : factor estimulante de colonia de granulocitos - IGF-I : factor I de crecimiento de insulina - LTC-IC : célula iniciadora de cultivo a largo plazo - HGH : hormona humana del crecimiento - RhG-CSF : factor humano recombinante de estimulación de colonia de granulocitos - RhGH : hormona humana recombinante del crecimiento Ejemplo 1: Actividad de movilización de hGH estudiada en un modelo preclínico murino A ratones BALB/c se les administra 10 µl de inyecciones intraperitoneales de rhGH todos los días durante un total de 10 días. Se determina la actividad CFU-C o BFU-E total circulante en sangre periférica en los días 5 y 10, respectivamente, de acuerdo con técnicas de cultivo in vitro estándar o convencionales, y se compara con: (i) niveles de pretratamiento de estado estable, (ii) cuentas absolutas de CFU-C y BFU-E en los días 3 y 5, respectivamente, después del tratamiento con rhG-CSF administrada intraperitonealmente a 10 µl cada día durante 5 días consecutivos.

E emplo 2 : Criterio de selección para la movilización y recuperación de estudios clínicos A]_ Criterio de inclusión: Consentimiento escrito y con conocimiento Edad entre 18 y 60 años Cáncer de alto riesgo confirmado histológicamente (cáncer de linfoma) y experimentación de quimioterapia estas dosis, de acuerdo con las líneas de guía INT actuales.

B) Criterios de exclusión: Pacientes pretratados de manera fuerte con curso de quimioterapia o radioterapia, o ambas cosas. Insuficiencia renal (creatinina > 1.5 N) o hepática o bien SGPT > 2.5 N; bilirrubina > 1.5 N) o enfermedad grave del SNC o psiquiátrica. Enfermedad cardíaca o del miocardio clínicamente importante. Fracción de expulsión ventricular izquierda < 50% en reposo por determinación de ecocardiografía o < 55% por medición isotópica . Prueba positiva a hepatitis B o C o VIH.

Ej e plo 3 : Procedimiento de estudio de línea de base para los estudios clínicos de movilización y recuperación Se estudiaron varios parámetros durante los estudios clínicos de movilización y recuperación: Antecedentes médicos completos, examen físico, examen cardíaco, fracción de expulsión ventricular izquierda (LVEF) mediante exploración scintigráfica de compuerta múltiple o ecografía, rayos X torácicos - Prueba de embarazo (si es aplicable) Prueba para HBV, HCY y VIH Cuenta sanguínea completa con cuenta diferencial Cuentas absolutas de células CD34+ circulantes y CFU - Química sanguínea (transaminasas, fosfatasa sérica, gamma GT, LDH, bilirrubina total, BUN, creatinina, glicemia, Na, K, Ca, P, ácido úrico, proteína total, albúmina, colesterol, triglicéridos Biopsia de médula ósea bilateral - Consentimiento con conocimiento Ei emplo 4 : Parámetros principales de toxicidad para la movilización y recuperación de estudios clínicos - Crecimiento de tumor (únicamente estudio de movilización) Síntomas clínicos y determinados por instrumentos Pruebas de laboratorio para función cardíaca, hepática y renal Ejemplo 5: Estudio clínico de movilización Objetivos del estudio clínico de movilización - Para determinar la actividad de rhGH en: (i) incremento de células CD34+ circulantes, y (ii) expansión del compartimiento hematopoyético de médula ósea de manera que permite la movilización aumentada por administración subsecuente de rhG- CSF Para determinar la seguridad y tolerabilidad de rhGH, dado con rhG-CSF a pacientes con cáncer después de quimioterapia (estudio de recuperación hematológica) .

B), Plan de tratamiento Estudio de movilización con rhGH: rhGH se administra del día 1 a 10 por vía intravenosa. La dosificación de rhGH se inicia aproximadamente a 1 microgramos por kilogramo del peso del paciente por día y la dosis se incrementará hasta el efecto deseado (movilización o periferalización de células circulante capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, incremento en el donador en el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, reducción del número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante, reducción del volumen de sangre necesario para ser procesado con el fin de obtener el número objetivo especificado de células recirculantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo) se investiga .xx µg/kg QD, iv) .

Estudio de movilización con rhGH y rhG-CSF: - Administración de rhGH: *e administra rhGH desde el día 1 hasta el 5 por vía intravenosa. La dosificación de rhGH se inicia aproximadamente a 1 microgramo por kilogramo de peso del paciente por día y la dosis se incrementará hasta que alcance el efecto deseado (movilización o periferalización de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, incrementar en el donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, reducción del número de leucaferesis necesaria para recolectar una cantidad suficiente de células circulantes para transplante, reducción del volumen de sangre necesario para ser procesada con el fin de obtener el número objetivo especificado de células circulantes capaces de regenerar hematopoye is in vivo) . Administración de rhG-CSF (10 µg/kg QD, iv) desde el momento de completar la cosecha de células CD34+ (la dosis de células objetivo es 8 x 106 células CD34+/kg de peso corporal) .

C Parámetros principales de actividad A partir del día +6 se determinan los siguientes parámetros : - Cuentas absolutas de células CD34+/µl (diariamente en la periferia y una vez en células sometidas a leucaferesis) Cuentas absolutas de CFU-GM/µl (diariamente en la periferia y una vez en las células sometidas a leucaferesis) D Procedimiento de estudio Determinación diaria de células CD34+/µl y sangre periférica CFU-GM, desde el día +5 hasta la leucaferesis. Producción total de células CD34+, CFU-GM, BFU-E, CFU-IC en células sometidas a leucaferesis. Determinación de toxicidad mediante estudios clínicos y en exámenes (EKG, rayos X torácicos y otros exámenes según se requiera) . Medición y evaluación de todos los parámetros tumorales al finalizar el estudio de movilización.

Ejemplo 6: Estudio clínico de recuperación A) Objetivos del estudio clínico de recuperación Determinar la capacidad de rhGH, administrada sola o en combinación para activar la recuperación de leucocitos, eritrocitos y plaquetas en la sangre periférica de pacientes con cáncer tratados con altas dosis de quimioterapia y autoinjertado de células madre de sangre periférica. Determinar la seguridad y capacidad de tolerancia de rhGH, administrada con rhG-CSF a pacientes con cáncer después de quimioterapia.

B_)_ Plan de tratamiento Administración de quimioterapia a altas dosis, seguido por infusión en el día 0 de una cantidad óptima (por ejemplo 8 x 106 células CD34+/kg) o células crioconservadas, cosechadas en el estudio de movilización. Coadministración (iv) de rhGH y rhG-CSF µg/kg QD, iv) del día 1 hasta recuperación estable (es decir, durante tres días consecutivos) de granulocitos por encima de 1000 µl y cuentas plaquetarias superiores a 50,000 µl .

C) Parámetros principales de actividad Comenzando desde el día +0 y hasta la recuperación completa y estable, se determinarán los siguientes parámetros: - Cuentas absolutas de granulocitos/µl (diario) Cuentas absolutas de plaquetas/µl (diario) Cuentas absolutas de eritrocitos/µl (diario) Nadir (concentración mínima) de granulocitos Nadir de plaquetas - Extensión y duración de neutropenia Extensión y duración de trombocitopenia Extensión y duración del transfusiones de soporte hematopoyético, transfusiones de eritrocitos) Duración de profilaxis infecciosa, e infecciones - Hemorragias D) Procedimiento de estudio Determinación diaria de la cuenta de WBC, RBC y plaquetas Número de transfusiones plaquetarias Número de transfusiones de eritrocitos Tipo y gravedad de fiebre e infección documentada Determinación clínica e instrumental de toxicidades hematológicas Ejemplo 7: Resultado de los estudios clínicos de movilización I - Estudios de movilización dentro de 2 ciclos de quimioterapia A) Plan de tratamiento Tres pacientes con enfermedad de Hodgkin relapsada han recibido los siguientes dos ciclos de tratamiento: ciclo 1 (ciclo control) : Ifosfamida (agente para quimioterapia) : 3 g/m2 iv (intravenosa) (una vez al día), día 1-4; Vinorelbine (agente para quimioterapia) : 25 mg/m2 iv (una vez al día) , día 1 y 5; G-CSF: 5 µg/kg sc (subcutánea) (una vez al día), desde el día 7 hasta la leucaferesis o hasta la recuperación de una cantidad suficiente de células CD34+ (aproximadamente 3 a 8-106 células/kg) . ciclo 2 : Ifosfamida: 3 g/m2 iv (una vez al día) , día 1-4; Vinorelbine: 25 mg/m2 iv (una vez al día), día 1 y 5; - G-CSF: 5 µg/kg sc (una vez al día) desde el día 7 hasta la recuperación de un número suficiente de células CD34+ (aproximadamente 3 a 8-106 células/kg) o hasta leucaferesis; rhGH (hormona del crecimiento humana recombinante) : 33 µg/kg sc (tres veces al día) desde el día 7 hasta la recuperación de un número suficiente de células CD34+ (aproximadamente 3 a 8-106 células/kg) o hasta leucaferesis.

B) Resultados Los resultados se muestran en la tabla de la figura 1. No se observa toxicidad excepto que la hiperglicemia requiere administración de insulina. En comparación con el control (ciclo 1) , la adición de rhGH en el ciclo 2 resulta en: 1) Duplicación o triplicación de la movilización de células CD34+ en la corriente sanguínea 2) Recuperación de células CD34+ sometidas a leucaferesis o incremento en el número de células CD34+ sometidas a leucaferesis. El incremento en el número de células CD34+ sometidas a leucaferesis inducida por GH permite la cosecha de los tres pacientes de una cantidad de célula CD34+ para transplante autólogo (aproximadamente 3 a 8-106 células/kg) .

II - Estudios de movilización en los siguientes 3 ciclos de quimioterapia A) Plan de tratamiento Un paciente con enfermedad de Hodgkin y relapsada ha recibido los siguientes 3 ciclos de tratamiento: ciclo 1 (ciclo control) : - Ifosfamida (agente para quimioterapia) : 3 g/m2 iv (intravenosa) (una vez al día), día 1-4; Vinorelbine (agente para quimioterapia) : 25 mg/m2 iv (una vez al día) , día 1 y 5; G-CSF: 5 µg/kg sc (subcutánea) (una vez al día), desde el día 7 hasta la leucaferesis o hasta la recuperación de una cantidad suficiente de células CD34+ (aproximadamente 3 a 8-10s células/kg) . ciclo 2: - Ifosfamida: 3 g/m2 iv (una vez al día), día 1-4; Vinorelbine: 25 mg/m2 iv (una vez al día) , día 1 y 5; G-CSF: 5 µg/kg sc (una vez al día) desde el día 7 hasta la recuperación de una cantidad suficiente de células CD34+ (aproximadamente 3 a 8-106 células/kg) o hasta leucaferesis; rhGH (hormona del crecimiento humana recombinante) : 33 µg/kg sc (tres veces al día) desde el día 7 hasta la recuperación de un número suficiente de células CD34+ (aproximadamente 3 a 8-106 células/kg) o hasta leucaferesis. ciclo 3 : Ifosfamida: (agente para quimioterapia) 3 g/m2 iv (intravenoso) (una vez al día), día 1-4; Vinorelbine: (agente para quimioterapia) 25 mg/m2 iv (una vez al día) , día 1 y 5; G-CSF: 5 µg/kg sc (subcutáneo) (una vez al día) desde el día 7 hasta leucaferesis o hasta recuperación de una cantidad suficiente de células CD34+ (aproximadamente 3 a 8-106 células/kg) ; B) Resultados Los resultados del tratamiento clínico mencionado en la sección A anterior se muestran en la gráfica de la figura 2. La gráfica de la figura 2 muestra el curso en el tiempo de la movilización de células CD34+ seguido de tres ciclos consecutivos de quimioterapia comenzando cada 21 días. Cada punto que se muestra en la gráfica en la figura 2 corresponde a la medida del número de células CD34+/µl de sangre encontrada en una muestra de sangre de 1 mililitro. Los resultados muestran que el ciclo 2 (adición de rhGH) es claramente superior a los ciclos 1 y 3. Por lo tanto, la movilización de CD34+ en la sangre se mejora por la adición de rhGH.

Mejoramiento de la movilización de células CD34+ en la sangre por GH es alta, especialmente puesto que el paciente estudiado recibió varios cursos de quimioterapia mielotóxica y puesto que cada curso subsecuente dificulta el grado de movilización. Los números cada vez menores de células CD34+ circulantes después de quimioterapia mielotóxica consecutiva y ciclo de movilización se puede observar al comparar el ciclo 1 y el ciclo 3. La sangre del paciente se somete a leucaferesis cuando el número de células CD34+/µl de sangre medida es máximo (día 13 del ciclo; día 20 del ciclo 2) . Las células sometidas a leucaferesis se crioconservan y se pueden suministrar por infusión nuevamente en el paciente después de una terapia mieloablativa.

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Método de preparación de una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende : a) la administración a un donador de una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para incrementar en el donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, b) aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo de la sangre periférica del donador c) volver a aplicar por infusión, injerto o transplante la población aislada en el mismo individuo o en individuos diferentes.

2. Método de preparación de una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende : a) la administración a un donador de una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento, de manera simultánea o separada con una composición que comprende G-CSF en una cantidad suficiente para incrementar en el donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, b) aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de la sangre periférica del donador.

3. Método de preparación de una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, que comprende : a) administrar a un donador, durante un período de hasta 20 días, una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para incrementar en el donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo; b) aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de la sangre periférica del donador.

4. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde las células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo son células CD34+.

5. Método como se describe en la reivin, icación 4, en donde el número aumentado de células CD34+ es mayor de 10, 25, 34 u 80 células CD34+ por microlitro de sangre periférica del donador .

6. Método como se describe en la reivindicación 4, en donde el número aumentado de células CD34+ es de por lo menos 2 x 106, 4 x 10s, . 5 x 106, 6 x 106, 8 x 10s o 15 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal del donador.

7. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a aproximadamente o más de 500 CFU-GM por mililitro de sangre periférica del donador.

8. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a un nivel aumentado de CFU-C, CFU-Meg o BFU-E en sangre periférica del donador.

9. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde sustancialmente con la cuenta de leucocitos o aproximadamente o más de 100 células por microlitro de sangre periférica del donador.

10. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a aproximadamente o más de 1 x 105 GM-CSF por kilogramo de peso corporal de donador o receptor.

11. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde las células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo son células CD34+ /CD33" o células CD34+ /CD38', o células CD34+/Thy-I, o células CD34+/Thy-I/CD38 y células CD33* o células madre de médula ósea o células progenitoras o células iniciadoras de cultivo a largo plazo LTC-IC) o células que satisfacen el potencial de autorrenovación o células que satisfacen las características pluripotenciales, o células que inician el cultivo de médula ósea a largo plazo o células que pueden generar líneas de células múltiples, o cualquier combinación de los anteriores.

12. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el número objetivo de células capaces de regenerar hematopoyesis in vivo es de por lo menos 2 x 104 LTC-IC por kg de cuerpo donador o receptor, aproximadamente o más de 2 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal del donador o receptor, aproximadamente o más de 4 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor, o aproximadamente o más de 8 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor.

13. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el volumen de sangre procesada en la etapa (b) está constituido en un intervalo de aproximadamente 30 a aproximadamente 900 mililitros.

14. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la composición comprende uno o varios compuestos adicionales que se eligen de entre los siguientes grupos de compuestos: factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas y anticuerpos monoclonales .

15. Método como se describe en la reivindicación 1 ó 3 , en donde la composición se administra simultánea o separadamente con uno o más composiciones adicionales que comprenden uno o varios compuestos diversos que se eligen de entre los siguientes grupos de compuestos: factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas y anticuerpos monoclonales .

16. Método como se describe en la reivindicación 14 ó 15, en donde el grupo de citocina comprende IL-1, IL-3, G-CSF, GM-CSF o SCF; el grupo de quimocina comprende .-HP-la o trombopoyetina (TPO) ; el grupo de anticuerpo monoclonal comprende anticuerpos contra VLA-4.

17. Método como se describe en la reivindicación 14 ó 15, en donde el compuesto o composición adicional comprende G-CSF.

18. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se administra en una cantidad comprendida entre 20 y 50 µg/kg de peso corporal del donador, en una cantidad comprendida entre 30 a 40 µg/kg de peso corporal de donador o en una cantidad de 33 µg por kilogramo de peso corporal de donador.

19. Método como se describe en la reivindicación 17, en donde se administra G-CSF en una cantidad comprendida entre 3 y 15 µg/kg de peso corporal de donador, en una cantidad comprendida entre 4 y 12 µg/kg de peso corporal de donador o en una cantidad de aproximadamente 5 a 10 µg por kilogramo de peso corporal de donador.

20. Método como se describe en la reivindicación 2, en donde la administración de hormona del crecimiento se realiza tres veces al día y la administración de G-CSF se realiza diariamente.

21. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la administración de la composición se realiza por vía parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica o bucal .

22. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la administración de la composición es diaria o tres veces al día.

23. Método como se describe en la reivindicación 1 ó 2, en donde la administración de la composición se realiza durante un período de 5 días o durante un período de 10 días.

24. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la administración comienza aproximadamente 7 días después del inicio de un tratamiento quimioterapéutico o aproximadamente 2 días después del final de un tratamiento quimioterapéutico.

25. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento recombinante.

26. Método como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la hormona del crecimiento es hormona humana del crecimiento.

27. Método para el mejoramiento de la reconstitución de hematopoyesis en un ser humano, que comprende las etapas de: a) administrar a un donador una composición que comprende hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para incrementar en el donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo; b) aislar una población de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo a partir de la sangre periférica del donador; c) transplantar las células recuperadas en la etapa (b) a un individuo, y d) administrar a este individuo hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento en una cantidad suficiente para acelerar la recuperación hematopoyética.

28. Método como se describe en la reivindicación 27, en donde la administración en las etapas a) y d) comprende además G-CSF.

29. Uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento el cual incrementa, en un donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo, las células se utilizan para tratar por reinfusión, transplante o injerto a un receptor en necesidad de tales células.

30. Uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento para incrementar en un donador el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo disponible para leucaferesis y reinfusión, transplante o injerto en un receptor en necesidad de tales células.

31. Uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento, que se administra de manera simultánea con G-CSF, para incrementar el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en un ser humano.

32. Uso de hormona humana del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca liberación de hormona humana del crecimiento para preparar un medicamento para incrementar durante un período de hasta 20 días el número de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo en un ser humano .

33. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde el medicamento comprende uno o varios compuestos adicionales que se eligen de entre los siguientes grupos de compuestos: factores de compuestos hematopoyéticos, citocinas, quimocinas y anticuerpos monoclonales.

34. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29, 30 ó 32, en donde el medicamento se administra de manera separada o simultánea con uno o más medicamentos adicionales que comprenden uno o varios compuestos que se eligen de entre los siguientes grupos de compuestos: factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, quimocinas, o anticuerpos monoclonales.

35. Uso como se describe en las reivindicaciones 33 ó 34, en donde el grupo de las citocinas comprende IL-1, IL-3, IL-6, IL-11, factor de crecimiento similar a insulina 1 (IGF-1), G-CSF, GM-CSF o SCF; el grupo de las quimocinas comprende MlP-la o trombopoyetina (TPO) ; el grupo de los anticuerpos monoclonales comprende anticuerpos contra VLA-4.

36. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde el compuesto o medicamento adicional comprende G-CSF.

37. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde la administración del medicamento se realiza por vía parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica o bucal.

38. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde la administración del medicamento es diaria o tres veces al día.

39. Uso como se describe en la reivindicación 31, en donde la administración del medicamento que comprende hormona del crecimiento se realiza tres veces al día y la administración de G-CSF es diaria.

40. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde la administración del medicamento se realiza durante un período de tres días o hasta leucaferesis .

41. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde la administración del medicamento comienza aproximadamente 7 días después del inicio de un tratamiento quimioterapéutico o aproximadamente dos días después del final de un tratamiento quimioterapéutico.

42. Uso de hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento para preparar un medicamento para evitar o tratar infecciones oportunistas después de transplante o para limitar el riesgo de recurrencia de tumor después del transplante.

43. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento recombinante.

44. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento humana.

45. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde las células circulantes capaces de regeneración de hematopoyesis in vivo son células CD34+.

46. Uso como se descrit- en la reivindicación 45, en donde el número aumentado de células CD34+ es mayor de 10, 25, 34 u 80 células CD34+ por microlitro de sangre periférica después de administración del medicamento.

47. Uso como se describe en la reivindicación 45, en donde el número aumentado de células CD34+ es de por lo menos 2 x 106, 4 x 106, . 5 x 106, 6 x 106, 8 x 106 o 15 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de administración del medicamento.

48. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a aproximadamente o más de 500 CFU-GM por mililitro de sangre periférica después de la administración del medicamento.

49. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a un nivel aumentado de CFU-C, CFU-Meg o BFU-E en sangre periférica después de la administración del medicamento.

50. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde el número aumentado de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde sustancialmente a la cuentade leucocitos de aproximadamente o mayor de 1000 células de microlitro de sangre periférica después de la administración del medicamento.

51. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, el donde el número aumentado de células circulantes capaz de regenerar hematopoyesis in vivo corresponde a aproximadamente o más de 1 x 105 GM-CSF por kilogramo de peso corporal .

52. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde las células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo pueden ser células CD34+ /CD33" o células CD34+ /CD38", o células CD34+/Thy-I, o células CD34+/Thy-I/CD38 o células CD33+ o células madre de médula ósea u otras células progenitoras o células iniciadoras de cultivo a largo plazo (LTC-IC) o células que satisfacen el potencial de autorenovación o células que satisfacen las características pluripotenciales o células que inician el cultivo de médula ósea a largo plazo, o células que puedan generar líneas de células múltiples, o cualquier combinación de los anteriores.

53. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde el número objetivo de células circulantes capaces de regenerar hematopoyesis in vivo es de por lo menos 2 x 104 LTC-IC por kg de cuerpo del donador o receptor, aproximadamente o más de 2 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor, aproximadamente o más de 4 x 10d células CD34+ por kilogramo de peso corporal de donador o receptor o aproximadamente o más de 8 x 106 células CD34+ por kilogramo de peso corporal.

54. Uso como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 32, en donde la hormona del crecimiento o uno de sus derivados o cualquier factor que induzca la liberación de hormona del crecimiento se administra en una cantidad comprendida entre 20 y 50 µg/kg de peso corporal, en una cantidad comprendida entre 30 y 40 µg/kg de peso corporal o en una cantidad de 33 µg por kilogramo de peso corporal.

55. Uso como se describe en la reivindicación 36, en donde se administra G-CSF en una cantidad comprendida entre 3 a 15 µg/kg de peso corporal, en una cantidad comprendida entre 4 y 12 µg/kg de peso corporal o en una cantidad de aproximadamente 5 ó 10 µg por kilogramo de peso corporal.