JP2000506509A - 水性徐放性処方 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 成長ホルモン放出因子が、少なくとも５０ｍｇの用量および少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度にて、水性液体中に存在する新規組成物を用いて、所望のレベルで生物活性成長ホルモン放出因子の、雌牛の循環システムへの非経口徐放が達成できる。好ましくは、成長ホルモン放出因子は、少なくとも１８０ｍｇ／ｍｌの濃度にておよび約２００ｍｇの用量にて水性液体に存在させる。水性ウシ・ソマトトロピン処方は、７日を超えて、動物の循環システムへのウシ・ソマトトロピンの持続放出を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 水性徐放性処方 発明の背景 本発明は、生物活性蛋白質の持続放出で有用な新規組成物に関する。さらに詳 しくは、本発明は、ウシ成長ホルモン放出因子の優れた水性持続放出注射処方を 提供する。また、ウシ成長ホルモン放出因子の持続放出または徐放のためにこれ らの新規組成物を使用する方法が提供される。 遺伝子工学の出現につれて、多くの生物活性ペプチドおよび蛋白質の大規模な 利用が達成された。しかしながら、これらの組換えにより生産されたペプチドお よび蛋白質の投与は特別な組の問題を生じる。多くの場合、これらの蛋白質の生 物学的効果の維持は長期投与を要する。これらの薬剤の毎日の投与は不便である ので、持続放出または徐放が好ましい。 多くの理由で、当該分野では、蛋白質、特にソマトトロピンを多く含む多くの 薬物の持続放出を達成するためのビヒクルとして生体適合性油の使用に長い間焦 点が当てられてきた。この技術に向けられた特許の中には、Ｍｉｔｃｈｅｌｌに 対する米国特許第５,０１３,７１３号およびＦｅｒｇｕｓｏｎらに対する米国特 許第４,９７７,１４０号がある。Ｍｉｔｃｈｅｌｌは、望ましくは効果的なレベ ルにおけるウシ・ソマトトロピン（ｂＳｔ；ＢＧＨ）の非経口徐放、少なくとも 約１０重量％の生物学的活性ソマトトロピンおよび、当該組成物の連続相として の、トウモロコシ油のごとき生体適合性油を含む実質的に非水性の組成物を用い て達成できる。Ｆｅｒｇｕｓｏｎらは、ｂＳｔ、ワックスおよび油を含む持続放 出処方の注射は、長期間雌牛での毎日の乳生産を増大させることを報告している 。 また、当業者は、成長ホルモン放出因子のごとき他の成長促進蛋白質の持続放 出を達成することに注意を払ってきた。特に、Ｂｒｏｏｋｓらに対する米国特許 第５,３５２,６６２号は、生体適合性疎水性ビヒクルおよび当該動物において蛋 白質の放出を延長するのに効果的な量のポリグリセロールエステルを含む担体中 に、成長ホルモンまたは成長ホルモン放出因子を含む注射可能な延長放出処方を 報告している。 前記特許は、成長ホルモンおよび成長ホルモン放出因子の徐放のための、非水 性送達系の使用に対する当該分野の重要視を説明している。最近、当該分野は、 ｂＳｔの徐放を達成するための水性処方の使用を教示している。国際出願ＰＣＴ ／ＵＳ９５／０００２３は、生物活性ｂＳｔの雌牛の循環システムへの非経口徐 放を教示している。これは、該ｂＳｔが、少なくとも約１５０ｍｇの用量および 少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水性液体に存在する新規組成物を用いる ことによって達成される。開示された水性ｂＳｔ処方は、報告されていることに よると、３日を超える間、動物の循環システムへのｂＳｔの持続放出を提供する 。 しかしながら、この教示に先立っては、当該分野は蛋白質、特にソマトトロピ ンの持続送達のために水性系を使用するのを用心深く回避した。この行動の理由 は、水性環境に長時間暴露される場合、該蛋白質は高度に不安定であるという一 般的見解であった。(Ｐｉｔｔ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ５９ ：１７３−１９６(１９９０))。異なる蛋白質は水性環境では異なって挙動する( ｂｓｔは１９１個のアミノ酸を含むが成長ホルモン放出因子は４４個のアミノ酸 を含む)ので、水性環境に長期間暴露した場合、該蛋白質は高度に不安定である という当該分野の一般的見解は成長ホルモン放出因子に対しては依然として否定 されないままである。 情報の開示 Marietteら、Journal of Controlled Release，２４：２３７−２４６（１９ ９３）は、包括されたペプチド粒子の浸出性ネットワークを形成するために設計 した圧縮成形マトリックスからの（ヒトＧＲＦ４４ＮＨ₂の最初の２９個のアミ ノ酸からなる）ＧＲＦ２９ＮＨ₂アナログの放出は、マトリックスを介するもし くはチャンネルを介する拡散またはマトリックス自体の形態よりも、ペプチドの 溶解特性に依存すると報告している。著者らは、制御放出が無ＧＲＦ２９ＮＨ₂ 水性媒体の連続流によって生じた浸透（ｓｉｎｋ）条件を用いることによって、 塩含有媒体中で達成されたと報告している。著者らは、ＧＲＦ２９ＮＨ₂ ｈＧ ＲＦアナログは血漿に貧溶解性であるが、血漿中の現象はかなり複雑なようであ り、ペプチドは、血清蛋白質と相互作用するように見えると注記、している。著 者らは、これらの相互作用をよく理解するためにはさらに研究が必要であると注 記 することによって結論付けている。 Ｃａｒｍｏｍａら，Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，５１Ａ（５） ：９２９−９３７（１９９５）は、ＧＲＦ２９ＮＨ₂の骨格は、固体状態では無 秩序であるが、いくつかの分子内ベーターシート凝集が、水性溶液中で観察され ることを報告している。彼らは、さらに、それらのスペクトルデータは、非凝集 ＣＲＦ２９ＮＨ₂アナログが水性溶液中でコンフォーマーの集合体として存在す ること、このペプチドが環境の修飾に際してコンフォメーション変化を受け得る こと、およびｈＧＲＦのかかるコンフォメーション柔軟性が循環からのそのクリ アランスで重要であり得ることを報告している。 Pitt、Int.J.Pharmaceutics 59:173-196(1990)は、高蛋白質濃度では水性環境 で高度に安定なソマトトロピンのごとき蛋白質用の非経口持続性送達システムを 開発するにおける困難性を報告している。 １９９１年５月７日に発行されたMitchellに対する米国特許第５,０１３,７１ ３号は、少なくとも約１０重量％の生物学的活性ソマトトロピンおよび、当該組 成物の連続相としての、生体適合性油の実質的に非水性の組成物〜動物へ非経口 投与することによって、動物の循環システムへの生物学的活性ソマトトロピンの 徐放を達成する方法を開示している。Mitchelleは、放出を加速しないためには 彼の組成物は非水性であるべきことを強調している。 １９９０年１２月１１日に発行されたFergusonらに対する米国特許第４,９７ ７,１４０号は、８−２０％のワックスおよび８０−９２％の油を含む担体に懸 濁した１０−２５％ウシ・ソマトトロピンを含む２ないし１０グラムの処方を雌 牛に注射することによって、２８日間の乳牛からの増大した毎日の乳生産を得る 方法を開示している。Fergusonらは、徐放性ビヒクルとして水性処方を使用でき るか否かの問題を考慮していない。 １９９４年１０月４日に発行されたBrooksらに対する米国特許第５,３５２,６ ６２号は、生体適合性疎水性ビヒクルおよび動物において蛋白質の放出を延長す るのに効果的な量のポリグリセロールエステルを含む担体中に成長ホルモンまた は成長ホルモン放出因子を含む注射可能な延長放出処方を開示している。Ｂｒｏ ｏｋｓらは、徐放性ビヒクルとして水性処方を使用できるか否かの問題を考慮 していない。 国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／０００２３は、水性処方を用いる生物活性ｂＳｔ の雌牛循環システムへの非経口徐放を教示している。これは、ｂＳｔが、少なく とも約１５０ｍｇの用量および少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水性液体 中に存在する新規組成物を用いることによって達成される。開示された水性ｂＳ ｔ処方は、報告されているところによると、３日以上の間、ｂｓｔの動物循環シ ステムへの持続放出を提供する。該文献は、水性送達システムを用いて成長ホル モン放出因子の徐放を達成できるか否かについては何も明らかにしていない。 発明の概要 本発明は、実質的に水性の成長ホルモン放出因子組成物を用いて、該実質的に 水性の成長ホルモン放出因子を動物に投与することにより、生物学的に活性な成 長ホルモン放出因子の動物の循環システムへの徐放を達成できることを見出した 。該組成物は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度にて、水性担体中に少なくと も約５０ｍｇの生物学的に活性な成長ホルモン放出因子を含む。該水性成長ホル モン放出因子処方は、約７日を超える間、動物の循環システムへの成長ホルモン 放出因子の持続放出を提供する。 好ましくは、成長ホルモン放出因子は、約２０ｍｍｇの用量にて、および約１ ８０ｍｇ／ｍｌの濃度にて、水性液体中に存在する。この用量および濃度におい て、水性成長ホルモン放出因子処方は、約３５日を超える間、動物の循環システ ムへの成長ホルモン放出因子の持続放出を提供する。 かくして、本発明は、高度に効果的であって、迅速に調製される延長放出組成 物を提供する。さらに、この効果は、固体インプラントを形成させるのに成長ホ ルモン放出因子を他の物質と共に強制的に圧縮することを要しない注射組成物に おいて達成できる。さらに、本発明の治療は、例えば、固体の延長放出インプラ ントで必要な切開無くして達成できる。本発明のさらなる具体例、態様および利 点は、以下の記載および添付の請求の範囲から明らかであろう。 図面の簡単な記載 図１は、処方の投与日における去勢雄牛中の血清ソマトトロピン（ＳＴ）平均 濃度を示す。 図２は、処方の投与３５日後における去勢雄牛中の血清ＳＴ平均濃度を示す。 図３は、日対照群平均のまわりに９５％信頼区間を作図した、処理群日ソマト トロピン−曲線下面積を示す。 発明の詳細な記載 さて、本発明の原理の理解を促進する目的で、ある具体例を参照し、具体的言 語を用いてそれを記載する。それにもかかわらず、それにより本発明の範囲の限 定は意図されず、本明細書に記載されたごとく、本発明の原理のさらなる修飾お よび適用が本発明に関する分野の当業者に通常に起こると考えられることが理解 されるであろう。 前記したごとく、組成物(composition of matter)として、本発明の好ましい 具体例は、水性担体中に成長ホルモン放出因子を含む注射可能な延長放出処方を 提供する。この処方は、注射後に長期間にわたって、効果的用量のホルモンまた は放出因子の動物への送達を提供する。該動物は、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、 ウマ、鳥類、魚類およびヒトのごとき脊椎動物を含めた、内因性成長ホルモンを 生産するいずれの種でもあり得る。 本発明は、ＧＲＦが水性担体と単に混合された注射処方でもって、成長ホルモ ン放出因子（成長放出因子、成長ホルモン放出ホルモン、成長放出ホルモン、お よびソマトクリニンとしても通常知られている、以後、「ＧＲＦ」という）の効果 的な延長放出が達成できるという発見に基づいている。本明細書で用いる「単に 混合された」なる用語は、ＧＲＦ／水性担体処方が注射可能なペーストであり、 該物質の延長された放出を供する状態を記載することを意図する。その結果、本 発明の処方は容易に調製される。 本発明で利用されるべきＧＲＦは、天然ＧＲＦの生物学的特性を呈する、天然 または合成起源の、いずれの物質でもあり得る。天然ＧＲＦは、ウシ、ヒツジ、 ヤギ、ウマ、ブタ、鳥類、魚類、ヒト等のごときいずれの種でもあり得る。天然 ＧＲＦは、動物の適当な腺組織から抽出される；これを達成する手法は、退屈な ものではあるが、知られている。しかしながら、今日では、遺伝子的に修飾され た微生物の使用によってＧＲＦを合成するのはよく確立されたプラクティスであ る。かかるプロセスは、天然ＧＲＦからのその構造に関しては異なるが、天然Ｇ ＲＦの生物学的活性を保持する物質である修飾ＧＲＦを生じるのがしばしば便宜 であるか、あるいは好ましくさえある。例えば、修飾ＧＲＦはポリペプチド鎖の １端または両端に１個以上のさらなるアミノ酸を含有でき；天然ＧＲＦのそれと は異なるアミノ酸配列を有することができ；あるいは、天然成長ホルモン放出因 子の活性断片であり得る。例えば、天然ＧＲＦ）天然ＧＲＦのプレ蛋白質および 天然ＧＲＦの断片（例えば、２９個アミノ酸の成長ホルモン成長因子）は、成長 ホルモンレベルの上昇を引き起こすことが知られている。さらなる修飾は、当業 者によって理解されるであろう。従って、「成長ホルモン放出因子」(または「ＧＲ Ｆ」)なる用語は、本書類を通じて使用されて、天然ＧＲＦならびに天然ＧＲＦの 生物学的特性を有し、かつ構造に関しては同一であり得るかまたは異なる、合成 により得られた物質を共に指す。 理解されるごとく、ＧＲＦは種々の物理的形態で提供できる。例えば、それは 粒子サイズを低下するために空気粉砕した粉末、顆粒等であり得る。注射処方は 、有効量のＧＲＦを含むであろう。この量を決定するのは、当業者の技量の範囲 内のものである。ＧＲＦの場合、処方の約１重量％ないし約１８重量％の範囲の 量で含ませるのが好ましい。 本発明の好ましい全処方は、例えば１４ゲージ針を通してシリンジに入れるこ とができ、皮下スペースへの注射によって投与することができる。 本発明の原理および利点のさらなる理解を促進するために、以下の実施例を供 する。しかしながら、以下の実施例は例示的なものであって、限定的なものでは ないことが理解されるであろう。 実施例１ 処方／投与 １２頭のホルスタイン去勢雄牛(steer)（２５０−３００ｋｇ）を試行開始７ 日前に体重を測定した。去勢雄牛は、最大体重から最低体重によってランク付け した。去勢雄牛を体重に基づいて６頭の２ブロックに分けた。ブロツク内で処理 をランダムに割り当てた。 高度に濃縮した水性ペースト中に分散させた成長ホルモン放出因子アナログ( ＧＲＦＡ)を送達する場合、血清ソマトトロピン（ＳＴ）が去勢雄牛中に維持で き るか否かを決定するように処理群を設計した。処理群は、非注射対照(ＣＯＮＴ) および注射用滅菌水、(ＵＳＰ(ＷＡＴ−１８)中の１８％ｗ／ｗＧＲＦＡの２０ ０ｍｇ用量よりなるものであった。使用したＧＲＦアナログは、以下のアミノ酸 配列（配列番号１）を有していた。 水性処方は、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ、Vedco,Inc.）中に細砕凍結乾燥ＧＲＦ Ａを分散させることによって得た。添加の間の迅速な粉末水和のため、粉末配合 は、５０ｍＬビーカーにスパチュラを用いて手で行った。この粘性ペースト１ｇ を直ちに６つの子備滅菌した３ｍＬシリンジの各々に充填した。 肩甲骨の腋境界に対してほぼ４インチ尾部側の肋骨にわたる領域をしっかりは さみ、この位置にて皮下(ＳＣ)注射を投与した。１４ゲージ、１.５インチ針を 用いて、水性ペーストをデリバリーした。 投与の少なくとも１日前に、カニューレを頸静脈に挿入した。血液（８ｍｌ） を３０分間隔で５時間収集し、これは処方の皮下注射後、第１、３、７、１４、 ２１、２８および３５日に、給餌前７時間に開始し、給餌２時間前に終了した。 処方注射に対して−４０および−２０分にてさらなる試料を第１日に収集した。 アッセイ／統計処理 １２頭のホルスタイン去勢雄牛を個々の牛舎（１８−２０℃）の内部に収容し 、アップジョン社農場において１６時間の照明／８時間消灯（０６００に照明） に暴露した。去勢雄牛を訓練して、１５００時に毎日一回供されたそれらの全日 飼料を、２時間内に消費するようにした。毎日の飼料は、０.８−１.０ｋｇ／１ 頭／体重増加日率を維持するレベルにて、乾燥ベースで、４１.１％穀物生牧草 および５８.９％穀物補足物／濃縮物(Ｂ−３８２)よりなるものであった。水は 自由に摂取させた。観察は、内因性血清ＳＴプロフィールが同調できることを示 した(Moseleyら(１９８８)J ．Endocr．117:253-259)。かくして、血液サンプリ ング法は、一時的ＳＴパターンを特徴付ける能力が最適化されるように、給餌に 対する関係をもって計画した。ラジオイムノアッセイによって、得られた血清を ＳＴ濃度につき検定した(Moseley(1982)J ．Anim．Sci.，55:1062-1070)。 毎日のＳＴ−ＡＵＣ、全てのサンプリング期間にわたる最大ＳＴ濃度、起こっ た時間最大ＳＴおよび平均対照ＳＴ−ＡＵＣに対する各試料日についての平均Ｓ Ｔ−ＡＵＣの復帰の時間を合計した、台形加算によって決定した各サンプリング 日についてのＳＴ応答曲線下面積（ＡＵＣ）を計算することによって、処方の有 効性を評価した。０.０５の有意レベルにおいて、先験的仮説を検定した。ラン ダム効果としてのブロック（体重群）にて、ランダム化完全ブロックデザインに ついての偏差分析を用い、最大全ＳＴ濃度およびＡＵＣを分析した(Steel,R.G.D .およびJ．H．Torrie（1980）Principles and Procedures of Statistics,McGra w-Jill Book Co，New York)。曲線下の日面積を、偏差分析の混合モデルによっ て分析した(ＳＡＳ ProceduresMIXED)。もしサンプリング期間相互作用による 処理が有意であれば、処理差を各サンプリング期間において調べた(Milliken,G. A.およびD.E.Johnson(1984)Analysis of Messy Data,Van Nostrand Reinhold,Ne w York,pp.12-22)。MillikenおよびJohnson(前掲)によって記載されているごと く、処理×ブロックの重み付け見積もりおよび残存偏差および自由度のSatterth waite近似を用い、最小有意差（ＬＳＤ）を計算して、所与の時間における処理 平均を比較した。信頼区間（９５％）は、ＬＳＤを用いて各時間において対照平 均の回りに作図した。偏差の均一性についてのレーベン（Levene）検定を、全て の偏差分析に先立って用いた。不均一偏差に関するデータは、ｌｏｇ₁₀を用いて 変換した。全ての分析は、ＳＡＳ（1989）SAS User's Guide:Statictics ，Versi on ６ ．SAS Institute，Gary，NCを用いて行った。 結果 Ａ．血清ＳＴ濃度 第１日および第３５日に水性処方を摂取したまたは処方を摂取しなかった去勢 雄牛で観察された血清ＳＴの平均濃度を、各々、図１および２に示す。第３、７ 、１４、２１および２８日に見られた濃度と共にこれらのデータを用いて、日Ｓ Ｔ−ＡＵＣを計算した。水性処方を摂取した動物については、最大平均血清ＳＴ （１ ２１．４ｎｇ／ｍＬ）およびこの最大が起こった時点（６．５日）を表１に示す 。最大濃度は対照３８.４ｎｇ／ｍＬよりも大きく(Ｐ＜０.０５)、この最大が起 こった時点は対照とは異なった。 Ｂ． ＳＴ曲線下面積 日ＳＴ−ＡＵＣは、第１、３、７、１４、２１、２８および３５日につき計算 した。偏差の不均一性（レーベン(Levene)検定）を観察し、データをｌｏｇ₁₀に 変換した。水性処理および対照群についての日血清ＳＴ−ＡＵＣの最小自乗平均 を表２に示す。全対照平均は、全てのサンプリング日にわたって対照去勢雄牛で の面積を平均することによって決定した０.２９９ユニットであった。この対照 平均を、水性処理群と比較して、いつ、日ＳＴ−ＡＵＣがベースラインに復帰す るかを決定した。比較を図３に示す。実験を完了した時に、３５日における対照 およびＷＡＴ−１８群の間の差異が依然としてあった。 ＷＡＴ−１８を摂取した後またはＵ−９０６９９Ｆを摂取しなかった後の３５ 日にわたってのホルスタイン去勢雄牛における合計血清ＳＴ−ＡＵＣを表１に示 す。合計ＳＴ−ＡＵＣについての最小自乗平均は１４.９(ＣＯＮＴ)および３６. ２ユニット（ＷＡＴ−１８）であった。水性処方を摂取した去勢雄牛は対照去勢 雄牛よりも大きい（Ｐ＜０.０５）合計ＳＴ−ＡＵＣを有していた。 実験によって測定された主要な結果は、時間処理ＳＴ−ＡＵＣが対照を超えて 上昇されたということであった。長い持続が、水性処方で達成された。日平均Ｓ Ｔ−ＡＵＣ(０.２９９ユニット)に対して処理ＳＴ−ＡＵＣの比率をとることに よって、第１日の水性処方が観察された。ＳＴ−ＡＵＣは平均対照ＳＴ−ＡＵＣ よりも３.５５倍大きかった。７日までには、これは１.８１倍大まで低下した。 ＳＴ−ＡＵＣは、１７日および３５日の間の対照よりも１.７４ないし１.８３倍 大の間に止まり、これは０次の放出を意味する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ， ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｅ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ， ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ (72)発明者 キャプト，ジェイムズ・エフ アメリカ合衆国49002ミシガン州ポーテイ ジ、ブリッタニー・ドライブ215番 (72)発明者 ヘイグマン，マイケル・ジェイ アメリカ合衆国49009ミシガン州カラマズ ー、サウス・トゥエルフス・ストリート 5262番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水中に少なくとも約５０ｍｇの生 物学的活性ウシ成長ホルモン成長因子を含む実質的に水性のウシ成長ホルモン放 出因子組成物を動物に非経口投与することを特徴とする、７日を超えて、動物の 循環システムにおいて内因性ソマトトロピンの濃度増強を達成する方法。 ２．シリンジに入れることができる水性ウシ成長ホルモン放出因子溶液を形成 するための、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍｌの濃度で水中に少なくとも約２００ ｍｇの生物学的活性ウシ成長ホルモン放出因子を含み、該溶液は吸収修飾剤およ び緩衝剤を実質的に欠くことを特徴とする医薬組成物。 ３．少なくとも約１８０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水中に少なくとも約２００ｍｇ の生物学的活性ウシ成長ホルモン成長因子を含む実質的に水性のウシ成長ホルモ ン放出因子組成物を動物に非経口投与することを特徴とする、３５日を超えて、 動物の循環システムにおいて内因性ソマトトロピンの濃度増強を達成する方法。 ４．シリンジに入れることができる水性ウシ成長ホルモン放出因子溶液を形成 するための、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で水中に少なくとも５０ｍｇの 生物学的活性ウシ成長ホルモン放出因子を含み、該溶液は吸収修飾剤および緩衝 剤を実質的に欠くことを特徴とする医薬組成物。 ５．少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水中に少なくとも約５０ｍｇの生 物学的活性ウシ成長ホルモン放出因子を含む、配列番号１で示されるアミノ酸配 列を有する実質的に水性のウシ成長ホルモン放出因子アナログを動物に非経口投 与することを特徴とする、７日を超えて、動物の循環システムにおいて内因性ソ マトトロピンの濃度増強を達成する方法。 ６．シリンジに入れることができる水性ウル成長ホルモン放出因子溶液を形成 するための、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水中に配列番号１で示さ れるアミノ酸配列を有する少なくとも約２００ｍｇの生物学的活性ウシ成長ホル モン放出因子を含み、該溶液が吸収修飾剤および緩衝剤を実質的に欠くことを特 徴とする医薬組成物。 ７．少なくとも約１８０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水中に少なくとも約２００ｍｇ の生物学的活性ウシ成長ホルモン放出因子を含む、配列番号１で示されるアミノ 酸配列を有する実質的に水性のウシ成長ホルモン放出因子を動物に非経口投与す ることを特徴とする、３５日を超えて、動物の循環システムにおいて内因性ソマ トトロピンの濃度を増強達成する方法。 ８．シリンジに入れることができる水性ウル成長ホルモン放出因子溶液を形成 するための、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの濃度にて水中に配列番号１で示され るアミノ酸配列を有する少なくとも約５０ｍｇの生物学的活性ウシ成長ホルモン 放出因子を含み、該溶液が吸収修飾剤および緩衝剤を実質的に欠くことを特徴と する医薬組成物。