ES2197258T3

ES2197258T3 - Formulacion acuosa de liberacion prolongada que comprende el factor de liberacion de la hormona de crecimiento bovino.

Info

Publication number: ES2197258T3
Application number: ES96945382T
Authority: ES
Inventors: Todd P. Foster; William M. Moseley; James F. Caputo; Michael J. Hageman
Original assignee: Pharmacia and Upjohn Co; Upjohn Co
Current assignee: Pharmacia and Upjohn Co
Priority date: 1996-01-11
Filing date: 1996-12-13
Publication date: 2004-01-01
Anticipated expiration: 2016-12-13
Also published as: CA2240685A1; EP0873134A1; KR100445087B1; CN1130222C; US6429195B1; KR19990077154A; DK0873134T3; EP0873134B1; HK1016083A1; AU1564997A; WO1997025057A1; ATE238063T1; AU705466B2; US6150330A; JP2000506509A; DE69627706T2; PT873134E; NZ326953A; DE69627706D1; CN1202114A

Abstract

PUEDE LOGRARSE UNA LIBERACION PARENTERAL PROLONGADA EN EL SISTEMA CIRCULATORIO DE UNA VACA DE UN FACTOR DE LIBERACION DE HORMONA DEL CRECIMIENTO BIOACTIVA CON UNOS NIVELES EFICACES DESEABLES, UTILIZANDO NUEVAS COMPOSICIONES EN LAS CUALES EL FACTOR DE LIBERACION DE HORMONA DEL CRECIMIENTO SE ENCUENTRA PRESENTE EN UN LIQUIDO ACUOSO EN UNA DOSIS DE AL MENOS APROXIMADAMENTE 50 MG Y A UNA CONCENTRACION DE AL MENOS APROXIMADAMENTE 20 MG/ML. PREFERIBLEMENTE, EL FACTOR DE LIBERACION DE HORMONA DEL CRECIMIENTO SE ENCUENTRA PRESENTE EN UN LIQUIDO ACUOSO EN UNA DOSIS DE APROXIMADAMENTE 200 MG Y A UNA CONCENTRACION DE APROXIMADAMENTE 180 MG/ML. EL FORMULADO DE SOMATOTROPINA BOVINA ACUOSO SUMINISTRA UNA LIBERACION SOSTENIDA DE SOMATOTROPINA BOVINA EN EL SISTEMA CIRCULATORIO DE UN ANIMAL DURANTE MAS DE SIETE (7) DIAS.

Description

Formulación acuosa de liberación prolongada que comprende el factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino.

Antecedentes de la invención

Esta invención trata de composiciones útiles para la liberación continua del factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino. Más concretamente, la presente invención proporciona una formulación superior acuosa inyectable de liberación continua del factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino. También se proporcionan algunos procedimientos no terapéuticos de uso de estas composiciones para la liberación continua o prolongada del factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino.

Con la llegada de la ingeniería genética, se ha logrado que muchos péptidos y proteínas bioactivos estén disponibles a gran escala. Sin embargo, la administración de estos péptidos y proteínas producidos de forma recombinante presenta una serie de problemas específicos. En muchos casos, el mantenimiento del efecto biológico de estas proteínas requiere administración a largo plazo y, puesto que la administración diaria de estos agentes no es conveniente, es preferible que sean liberados de forma continua o prolongada.

Por numerosas razones, la técnica se ha centrado durante mucho tiempo en el uso de aceites biocompatibles como vehículos para lograr la liberación continua de muchos medicamentos, entre los que se incluyen las proteínas y, más concretamente, las somatotropinas. Entre las patentes orientadas a la obtención de esta tecnología, se encuentran la patente de EE.UU. Nº 5.013.713, de Mitchell, y la patente de EE.UU. Nº 4.977.140, de Ferguson y col. Según Mitchell, se puede conseguir la liberación parenteral prolongada de la somatotropina bovina (BST o BGH) a los deseados niveles efectivos usando básicamente composiciones no acuosas que comprendan al menos aproximadamente 10% en peso una somatotropina biológicamente activa y un aceite biocompatible, como el aceite de maíz, que actuaría como fase continua de la composición. Según Ferguson y col., la inyección de una formulación de liberación continua que comprenda BST, cera y un aceite incrementa la producción diaria de leche de una vaca durante un periodo de tiempo prolongado.

Los expertos en la materia también han dirigido su atención hacia la consecución de la liberación continua de otras proteínas que incrementan el crecimiento, como es el caso del factor de liberación de la hormona de crecimiento. Concretamente, en la patente de EE.UU. Nº 5.352.662 de Brooks y col., se describe una formulación inyectable de liberación prolongada que incluye una hormona de crecimiento o un factor de liberación de una hormona de crecimiento, en un portador que incluye un vehículo hidrófobo biocompatible y una cantidad de éster de poliglicerol efectiva para prolongar la liberación de las proteínas en el animal.

Las patentes anteriores ilustran el énfasis de la técnica en el uso de sistemas de transporte no acuosos para la liberación prolongada de hormonas de crecimiento y factores de liberación de hormonas de crecimiento. Recientemente la técnica ha descrito el uso de una formulación acuosa para lograr la liberación prolongada de BST. La solicitud de patente internacional PCT/US95/00023, publicación Nº W095/19787, muestra la liberación parenteral prolongada de una BST bioactiva en el sistema circulatorio de una vaca. Esto se consigue usando nuevas composiciones en las que la BST está presente en un líquido acuoso a una dosis de al menos 150 mg aproximadamente y a una concentración de al menos 50 mg/ml aproximadamente. La formulación acuosa de BST descrita proporciona según los informes la liberación prolongada de BST en el sistema circulatorio del animal durante más de tres días.

Antes de esta enseñanza, sin embargo, la técnica evitó cuidadosamente el uso de sistemas acuosos para el transporte prolongado de proteínas, especialmente somatotropinas. La razón de este comportamiento era la opinión general de que las proteínas son altamente inestables cuando están expuestas a ambientes acuosos durante largos periodos de tiempo. (Pitt, Int. J. Pharmaceutics 59: 173-196 (1990)). Como distintas proteínas se comportan de manera diferente en ambientes acuosos (la BST comprende 191 aminoácidos mientras que el factor de liberación de la hormona de crecimiento comprende 44 aminoácidos), la opinión general de la técnica de que las proteínas son altamente inestables cuando están expuestas a ambientes acuosos durante largos periodos de tiempo permanece sin contradecirse para el factor de liberación de la hormona de crecimiento.

Información de los antecedentes publicados

Según Mariette et al., Journal of Controlled Release, 24:237-246 (1993), la liberación del análogo de GRF29NH_{2} (que comprende los primeros 29 aminoácidos del GRF44NH_{2} humano) de una matriz moldeada por compresión diseñada para formar una red filtrante de partículas de péptidos atrapados dependía mucho más de las características de solubilidad del péptido que de la difusión a través de la matriz o a través de los canales o de la morfología de la matriz propiamente dicha. Los autores informan de que se consiguió la liberación controlada en medios que contenían sal usando las condiciones de sumidero generadas por un flujo continuo de medios acuosos carentes de GRF29NH_{2}. Los autores señalan que el análogo de GRF29NH_{2}hGRF es también poco soluble en plasma, pero que los fenómenos en el plasma parecen bastante complejos y el péptido parecía interaccionar con las proteínas del suero. Los autores concluyeron señalando que se necesitaba trabajo adicional para comprender mejor estas interacciones.

Según Carmona y col., Spectrochimica Acta, 51A(5):929-938 (1995), mientras el esqueleto del GRF29NH_{2} está desordenado en estado sólido, se observa cierta agregación de láminas beta intermoleculares en soluciones acuosas. Además informan de que sus datos espectroscópicos indican que el análogo de GRF29NH_{2}existe como un conjunto de confórmeros en solución acuosa, que este péptido puede sufrir cambios conformacionales al modificarse las condiciones ambientales y que esta flexibilidad conformacional del hGRF puede ser importante para ser eliminado de la circulación.

Pitt, Int. J. Pharmaceutics 59:173-196 (1990), informa de dificultades en el desarrollo de sistemas de transporte de liberación parenteral prolongada para proteínas tales como las somatotropinas, que son altamente inestables en ambientes acuosos a concentraciones de proteína elevadas.

La patente de EE.UU. 5.013.713 de Mitchell, concedida el 7 de mayo de 1991, describe un procedimiento para conseguir la liberación prolongada de una somatotropina biológicamente activa en el sistema circulatorio de un animal mediante la administración parenteral al animal de una composición básicamente no acuosa de al menos 10% en peso aproximadamente de una somatotropina biológicamente activa y, como fase continua de la composición, un aceite biocompatible. Mitchell pone énfasis en que su composición debería ser no acuosa para no acelerar la liberación.

La patente de EE.UU. 4.977.140 de Ferguson y col., concedida el 11 de diciembre de 1990, describe un procedimiento para incrementar la producción de leche de una vaca lechera durante 28 días inyectando a la vaca de 2 a 10 gramos de una formulación que comprende 10-25% de somatotropina bovina suspendida en un transportador que comprende 8-20% de una cera y 80-92% de un aceite. Ferguson y col. no consideran la cuestión de si se pueden usar formulaciones acuosas como vehículos de liberación prolongada.

La patente de EE.UU. Nº 5.352.662 de Brooks y col., concedida el 4 de octubre de 1994, describe una formulación de liberación prolongada inyectable que incluye una hormona de crecimiento o un factor de liberación de la hormona de crecimiento en un transportador que incluye un vehículo hidrofóbo biocompatible y una cantidad de éster de poliglicerol efectiva para prolongar la liberación de las proteínas en el animal. Brooks y col. no consideran la cuestión de si se pueden usar formulaciones acuosas como vehículos de liberación prolongada.

La solicitud de patente internacional Nº PCT/US95/00023, publicación Nº W095/19787, muestra la liberación parenteral prolongada de una BST bioactiva en el sistema circulatorio de una vaca usando una formulación acuosa. Esto se consigue usando nuevas composiciones en las que la BST está presente en un líquido acuoso a una dosis de al menos 150 mg aproximadamente y a una concentración de al menos 50 mg/ml aproximadamente. La formulación acuosa de BST descrita proporciona según los informes la liberación prolongada de BST en el sistema circulatorio del animal durante más de tres días. La referencia no revela nada acerca de si un sistema de transporte acuoso puede ser usado para conseguir la liberación prolongada de los factores de liberación de la hormona de crecimiento.

Resumen de la invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de que se pueden usar composiciones básicamente acuosas del factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino para conseguir la liberación prolongada del factor en el sistema circulatorio de un animal mediante administración parenteral. Según un primer aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento no terapéutico que usa una composición básicamente acuosa que comprende al menos 50 mg de un factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino biológicamente activo en agua a una concentración de al menos 20 mg/ml aproximadamente. La formulación proporciona la liberación prolongada del factor en el sistema circulatorio del animal durante más de 7 días.

Según un segundo aspecto de la presente invención, una composición farmacéutica en forma de una solución acuosa inyectable comprende al menos 50 mg de un factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino activo en agua a una concentración de al menos 20 mg/ml, siendo dicha solución carente de agentes modificadores de la absorción y de agentes tamponadores.

Es preferible que el factor esté presente en agua en una cantidad de al menos 20 mg y a una concentración de al menos 180 mg/ml. A estas dosis y concentración, la formulación proporciona la liberación prolongada del factor en el sistema circulatorio del animal durante más de 35 días.

La presente invención proporciona así composiciones de liberación prolongada que son altamente efectivas y que se preparan fácilmente. Además, esta eficacia puede conseguirse en una composición inyectable que no requiere la compresión forzada del factor de liberación de la hormona de crecimiento con otros materiales para formar implantes sólidos. Además, se pueden llevar a cabo tratamientos no terapéuticos con la invención sin incisiones, lo que, por ejemplo, se requiere en el caso de implantes sólidos de liberación prolongada.

Breve descripción de las figuras

Las figuras 1 y 2 muestran las concentraciones medias de somatotropina (ST) en el suero de los novillos el día de la administración, y 35 días después de la administración de la formulación; y

la Figura 3 muestra el área bajo la curva de somatotropina (ABC-ST) diaria para el grupo sometido a tratamiento con el intervalo de confianza al 95% construido alrededor de las medias diarias del grupo de control.

Descripción de la invención

Con el propósito de promover la comprensión de los principios de la invención, se hará referencia ahora a ciertas formas de realización y se usará lenguaje específico para describir lo mencionado.

Como se ha indicado más arriba, una forma preferida de realización de la invención proporciona, como ingredientes de la composición, una formulación de liberación prolongada inyectable que incluye un factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino en un transportador acuoso. Esta formulación proporciona al animal la administración de una dosis eficaz de la hormona o el factor de liberación durante periodos de tiempo prolongados después de la inyección. El animal puede ser de cualquier especie que produzca hormonas de crecimiento endógenas, incluyendo especies de vertebrados tales como vacas, ovejas, cerdos, cabras, caballos, aves, peces y seres humanos.

La presente invención se basa en el descubrimiento de que se puede conseguir la liberación prolongada efectiva del factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino (de ahora en adelante ``GRF'', también conocida comúnmente como factor de liberación del crecimiento, hormona liberadora de la hormona de crecimiento, hormona liberadora del crecimiento y somatocrinina) con una formulación inyectable en la que el GRF se encuentre simplemente mezclado con un transportador acuoso. Tal y como se usa en la presente invención, el término ``simplemente mezclado'' pretende describir un estado en el que la formulación GRF/transportador acuoso es una pasta inyectable que proporciona la liberación prolongada de la sustancia. Como resultado, las formulaciones de la invención se preparan fácilmente.

El GRF a ser utilizado en la presente invención puede ser cualquier sustancia, de origen natural o sintético, que exhiba las propiedades biológicas de un GRF presente en la naturaleza. Los GRFs presentes en la naturaleza se extraen del tejido glandular apropiado de los animales; se conocen procedimientos para realizar esto, aunque son tediosos. Sin embargo, hoy en día es una práctica bien establecida la síntesis de GRFs mediante el uso de microorganismos genéticamente modificados. Muchas veces es conveniente o incluso preferible que tales procesos den como resultado un GRF modificado, esto es, una sustancia que difiere en su estructura del GRF presente en la naturaleza, pero que conserva la actividad biológica del GRF presente en la naturaleza. Por ejemplo, un GRF modificado puede contener uno o más aminoácidos adicionales en uno o ambos de los extremos de la cadena del polipéptido; puede tener una secuencia de aminoácidos que difiera de la del GRF presente en la naturaleza; o puede ser un fragmento activo del factor de liberación de la hormona de crecimiento presente en la naturaleza. Por ejemplo, se sabe que los GRFs presentes en la naturaleza, las preproteínas de GRFs presentes en la naturaleza y los fragmentos de GRFs presentes en la naturaleza (por ejemplo el factor de liberación de la hormona de crecimiento de 29 aminoácidos) causan la elevación de los niveles de la hormona de crecimiento. Los expertos en la materia comprenderán las modificaciones adicionales. Por lo tanto, el término ``factor de liberación de la hormona de crecimiento'' (o ``GRF'') se usa a lo largo de este documento para referirse tanto a los GRFs presentes en la naturaleza como a sustancias producidas sintéticamente que comparten las propiedades biológicas de los GRFs presentes en la naturaleza y que pueden ser idénticos o variar en cuanto a estructura.

Como se comprenderá, el GRF puede proporcionarse bajo varias formas físicas. Por ejemplo, puede ser un polvo, por ejemplo molido mediante el sistema ``molino de chorro'' para disminuir el tamaño de partícula, gránulos, etc. La formulación inyectable incluirá una cantidad efectiva de GRF. Cualquier técnico puede determinar esta cantidad. En el caso del GRF, es preferible incluirlo en una cantidad comprendida en un intervalo del 1% aproximadamente al 18% aproximadamente en peso de la formulación.

Se prefieren las formulaciones globales de la invención inyectables, por ejemplo mediante una aguja del calibre 14, y se pueden administrar mediante inyección en el espacio subcutáneo.

Para promover la comprensión más profunda de los principios y las ventajas de la invención, se proporcionan los siguientes ejemplos. Se comprenderá, sin embargo, que el siguiente ejemplo es ilustrativo, y no limitante, de la invención.

Ejemplo 1 Formulaciones/administración

Se pesaron 12 novillos Holstein (250-300 kg) 7 días antes del comienzo de la prueba. Se clasificaron los novillos en función de su peso del más pesado al más ligero y se dividieron en dos bloques de 6 novillos en función de su peso. Dentro de cada bloque se asignaron los tratamientos al azar.

Los grupos de tratamiento se diseñaron para determinar si la somatotropina en suero (ST) se podía mantener en los novillos cuando se administraba el análogo del factor de liberación de la hormona de crecimiento (GRFA) disperso en una pasta acuosa altamente concentrada. Los grupos de tratamiento consistían en controles no sometidos a inyección (CONT) y los inyectados una dosis de 200 mg de GRFA al 18% p/p en agua estéril para inyección, USP (WAT-18). El análogo del GRF usado tiene la siguiente secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 1):

1

La formulación acuosa se produjo dispersando GRFA liofilizado y pulverizado en agua estéril para inyección (SWFI, Vedco, Inc.). Debido a la rápida hidratación del polvo durante su adición, se llevó a cabo la incorporación del polvo a mano mediante una espátula en un vaso de precipitados de 50 ml. Inmediatamente se introdujo 1 g de esta pasta viscosa en cada una de las seis jeringuillas de 3 ml pre-esterilizadas.

Se esquiló el área por encima de la costilla que se encuentra aproximadamente a 101,6 mm en posición caudal respecto al borde axilar de la escápula y se administró la inyección subcutánea (SC) en este lugar. Las formulaciones de pasta acuosa se administraron usando una aguja del calibre 14, de 38,1 mm.

Se insertó una cánula en la vena yugular al menos un día antes de la administración del medicamento. Se recogió sangre (8 ml) a intervalos de 30 minutos durante 5 h comenzando 7 h antes de la alimentación y finalizando 2 h antes de la alimentación, los días 1, 3, 7, 14, 21, 28 y 35 después de la inyección subcutánea de la formulación. El día 1 se recogieron muestras adicionales a -40 y -20 minutos con respecto a la inyección de la formulación.

Ensayos/Estadística

Los 12 novillos Holstein fueron alojados en establos individuales (18- 20^{o}C) y expuestos a 16 horas de luz:8 horas de oscuridad (las luces se encendían a las 06:00) en The Upjohn Farms. Se adiestró a los novillos para consumir en un periodo de 2 horas sus raciones diarias completas que se les ofrecían una vez al día a las 15:00 horas. La ración diaria consistía en 41,1% de ensilaje de maíz y 58,9% de suplementación de maíz/concentrado (B-382), en base seca, a un nivel para mantener una tasa de ganancia de peso de 0,8-1,0 kg por cabeza y día. El agua estaba disponible ad libitum. Las investigaciones han mostrado que el perfil de la ST endógena en suero puede ser influido por la alimentación (Moseley y col. (1988) J. Endocr. 117:253-259). De este modo, el régimen de muestreo de sangre fue programado en relación con la alimentación, de tal modo que se optimizó la capacidad para caracterizar el patrón temporal de ST. Los sueros obtenidos se analizaron para determinar la concentración de ST mediante radioinmunoensayo (Moseley y col. (1982) J. Anim. Sci. 55:1062-1070).

La efectividad de la formulación se evaluó calculando el área bajo la curva (ABC) de respuesta de la ST para cada día de muestreo determinada por suma trapezoidal, la suma del ABC-ST diaria, las concentraciones máximas de ST a lo largo de todos los periodos de muestreo, el tiempo en el que se produjo el máximo de ST y el tiempo de retorno del valor medio del ABC-ST para cada día de muestreo al valor medio del ABC-ST control. La hipótesis establecida a priori se probó a un nivel de significación de 0,05. Las concentraciones globales máximas de ST y el ABC se analizaron usando el análisis de la varianza para un diseño en bloques completo al azar, siendo los bloques (los grupos de peso) un efecto al azar (Steel, R. G. D. y J. H. Torrie (1980) Principles and Procedures of Statistics, McGraw- Hill Book Co., New York). Las áreas bajo la curva correspondientes a cada día se analizaron mediante modelos mixtos de análisis de la varianza (SAS Procedimiento MIXTO). Si la interacción entre el tratamiento y el periodo de muestreo era significativa, se examinaban las diferencias en función del tratamiento para cada periodo de muestreo (Milliken, G. A. y D. E. Johnson (1984) Analysis of Messy Data, Van Nostrand Reinhold, New York, pp. 19-22). Se calculó la diferencia mínima significativa (DMS) para comparar las medias de cada grupo de tratamiento en un tiempo dado usando estimaciones ponderadas de la interacción tratamiento x bloque y varianzas residuales y una aproximación de Satterthwaite de los grados de libertad según describen Milliken y Johnson, citados más arriba. Se construyeron intervalos de confianza (95%) alrededor de las medias del grupo de control a cada tiempo usando la DMS. Se usó el test de Levene para determinar la homogeneidad de la varianza antes de realizar todos los análisis de la varianza. Los datos que presentaban una varianza heterogénea se transformaron usando log_{10}. Todos los análisis se llevaron a cabo usando SAS (1989) SAS User's Guide: Statistics. Version 6. SAS Institute, Cary, NC.

Resultados A. Concentración de ST en suero

La concentración media de ST en suero observada en novillos que recibían la formulación acuosa o ninguna formulación los días 1 y 35 se muestran en las Figs. 1 y 2, respectivamente. Se utilizaron estos datos junto con las concentraciones encontradas los días 3, 7, 14, 21 y 28 para calcular el ABC-ST diaria. En la Tabla 1 se muestran el valor medio máximo de ST en suero (121,4 ng/ml) y el tiempo en el que este máximo tuvo lugar (6,5 días) para los animales que recibían la formulación acuosa. La concentración máxima fue mayor (P<0,05) que los 38,4 ng/ml de los controles y el tiempo en el que este máximo tuvo lugar también difirió respecto a los controles.

B. Área bajo la curva de ST

Se calcularon las ABC-ST para los días 1, 3, 7, 14, 21, 28 y 35. Se observó heterogeneidad en la varianza (test de Levene), así que se transformaron los datos mediante log_{10}. En la Tabla 2 se muestran las medias de los mínimos cuadrados del ABC diaria de la ST en suero para el tratamiento acuoso y los grupos de control. La media global del grupo de control fue de 0,299 unidades, según se determinó promediando el área para los novillos control a lo largo de todos los días de muestreo. Se comparó esta media control con el grupo sometido a tratamiento acuoso para determinar cuándo retornaba el ABC-ST a la línea base. La comparación se muestra en la Figura 3. Todavía había una diferencia entre el control y el grupo WAT-18 el día 35 cuando el estudio se había completado.

En la Tabla 1 se muestra el ABC-ST total en el suero de los novillos Holstein a lo largo de 35 días después de recibir WAT-18 o ningún U-906999F. Las medias de los mínimos cuadrados para el ABC-ST total fueron 14,9 (CONT) y 36,2 (WAT-18). Los novillos que recibieron la formulación acuosa mostraron una ABC-ST total mayor (P<0,05) que los novillos control.

El principal resultado obtenido en el experimento fue el tiempo durante el que las ABC-ST del grupo sometido a tratamiento se elevaron por encima de los controles. Se consiguió una larga duración con una formulación acuosa. Calculando la relación ABC-ST del grupo sometido a tratamiento / ABC-ST media diaria (0,299 unidades) se observó que el día 1 el ABC-ST del grupo tratado con la formulación acuosa era 3,55 veces mayor que el ABC-ST media del grupo control. Para el día 7 ésta había decrecido a 1,81 veces mayor. El ABC-ST se mantuvo de 1,74 a 1,83 veces mayor que el grupo control entre los días 7 a 35, implicando una liberación de orden cero.

TABLA 1 Parámetros Medidos

\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{llll}\hline
 Tratamiento  \+ Concentración  \+ Tiempo en que se  \+
ABC-Total \\   \+ de ST máxima  \+ obtuvieron las 
\+ (unidades) \\   \+ media (ng/ml)  \+ concentraciones \+ \\   \+ 
\+ máximas medias de \+ \\   \+  \+ ST (días) \+ \\\hline  CONTROL 
\+ 38,4 ^{a}   \+ 15,7 ^{b}   \+ 14,9 ^{a}  \\ 
Wat-18  \+ 121,4 ^{b}   \+ 6,5 ^{a}   \+ 36,2 ^{b} 
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip

^{a, b} Medias dentro de una misma columna con el mismo superíndice no difieren significativamente, P<0,05.

TABLA 2 Área Bajo la Curva de ST (log_{10}) para los Grupos de Tratamiento^{1}

\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{lll}\hline
 Día  \+ CONTROL  \+ WAT-18 \\\hline  1  \+ 0,294 
\+ 1,063 \\  3  \+ 0,392  \+ 0,635 \\  7  \+ 0,272  \+ 0,540 \\  14 
\+ 0,244  \+ 0,546 \\  21  \+ 0,298  \+ 0,542 \\  28  \+ 0,287  \+
0,520 \\  35  \+ 0,307  \+ 0,529
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip

^{1}Se observó una diferencia significativa a lo largo de 35 días, P<0,05, DMS=0,1885.

(1) Información General

\vskip0.666000\baselineskip

(i): Solicitantes: Foster, Todd P.

: Moseley, William M.

: Caputo, James F.

: Hageman, Michael J.

\vskip0.666000\baselineskip

(ii): Título de la invención: Formulación acuosa de liberación prolongada

\vskip0.666000\baselineskip

(iii): Número de secuencias: 1

\vskip0.666000\baselineskip

(iv): Dirección para correspondencia:

\vskip0.333000\baselineskip

(A): Destinatario: Pharmacia & Upjohn, Inc., Intellectual Property Law

\vskip0.333000\baselineskip

(B): Calle: 301 Henrietta Street

\vskip0.333000\baselineskip

(C): Ciudad: Kalamazoo

\vskip0.333000\baselineskip

(D): Estado: Michigan (MI)

\vskip0.333000\baselineskip

(E): País: EE.UU.

\vskip0.333000\baselineskip

(F): ZIP: 49001

\vskip0.666000\baselineskip

(v): Forma legible por ordenador:

\vskip0.333000\baselineskip

(A): Tipo de medio: disquete

\vskip0.333000\baselineskip

(B): Ordenador: Compatible con PC IBM

\vskip0.333000\baselineskip

(C): Sistema operativo: PC-DOS/MS-DOS

\vskip0.333000\baselineskip

(D): Software: Patentin Release # 1.0, Versión # 1.25

\vskip0.666000\baselineskip

(vi): Datos de la actual solicitud:

\vskip0.333000\baselineskip

(A): Número de solicitud: 60/009.738

\vskip0.333000\baselineskip

(B): Fecha de formalización: 11 de enero de 1996

\vskip0.333000\baselineskip

(C): Clasificación:

\vskip0.666000\baselineskip

(viii): Información acerca del representante o apoderado:

\vskip0.333000\baselineskip

(A): Nombre: Darnley Jr., James D.

\vskip0.333000\baselineskip

(B): Número de registro: 33.673

\vskip0.666000\baselineskip

(ix): Información para telecomunicaciones:

\vskip0.333000\baselineskip

(A): Teléfono: 616/833-2210

\vskip0.333000\baselineskip

(B): Telefax: 616/833-8897

\vskip0.333000\baselineskip

(C): Telex: 224401

\vskip0.666000\baselineskip

(2) Información acerca de la SEQ ID NO: 1:

\vskip0.666000\baselineskip

(i): Características de la secuencia:

\vskip0.333000\baselineskip

(A): Longitud: 29 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B): Tipo: aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C): Tipo de hebra: una sola hebra

\vskip0.333000\baselineskip

(D): Topología: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(ii): Tipo de molécula: péptido

\vskip0.666000\baselineskip

(xi): Descripción de la secuencia: SEQ ID NO: 1:

2

Claims

1. Un procedimiento no terapéutico para conseguir concentraciones incrementadas de somatotropina endógena en el sistema circulatorio de un animal durante más de siete (7) días, que comprende la administración parenteral al animal de una composición básicamente acuosa que comprende al menos 50 mg de un factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino biológicamente activo en agua a una concentración de al menos 20 mg/ml.

2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que la composición comprende al menos 200 mg del factor en agua a una concentración de al menos 180 mg/ml.

3. Un procedimiento según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el factor tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1.

4. Una composición farmacéutica en forma de una solución acuosa inyectable que comprende al menos 50 mg de un factor de liberación de la hormona de crecimiento bovino biológicamente activo en agua a una concentración de al menos 20 mg/ml, careciendo dicha solución de agentes modificantes de la absorción y agentes tamponadores.

5. Una composición según la reivindicación 4, que comprende al menos 200 mg del factor en agua a una concentración de al menos 180 mg/ml.

6. Una composición según la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en la que el factor tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1.