DE69921682T2

DE69921682T2 - T.d.polio vielwertiger impstoff gegen mindestens diphterie, poliomyelitis und tetanus

Info

Publication number: DE69921682T2
Application number: DE69921682T
Authority: DE
Inventors: Rene Jean CARTIER; Patrick Laroche
Original assignee: Aventis Pasteur MSD SNC
Current assignee: Sanofi Pasteur MSD SNC
Priority date: 1998-11-26
Filing date: 1999-11-25
Publication date: 2005-11-03
Anticipated expiration: 2019-11-26
Also published as: PL347719A1; ATE281176T1; CZ20011860A3; CA2352617A1; AU1390100A; AU759221B2; EP1131094B1; NZ511933A; JP2003525858A; EP1004314A1; PT1131094E; EP1131094A1; DE69921682D1; DK1131094T3; ZA200103634B; ES2228175T3; WO2000030678A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft einen neuen polyvalenten Impfstoff gegen wenigstens Diphtherie, Poliomyelitis und Tetanus, der dazu bestimmt ist, als Impfauffrischung bei einer Person verwendet zu werden, die bereits erstgeimpft oder sensibilisiert ist.
Stand der Technik
Diphtherie wird durch Corynebacterium diphtheriae verursacht. Die Übertragung erfolgt im Wesentlichen direkt über die Atemwege. Die klinischen Erscheinungen der Atemwegsform sind von zwei Mechanismen abhängig. Die Proliferation der Bakterien an der Eintrittspforte bestimmt die lokale Symptomatologie, üblicherweise im Rachen (pseudomembranöse Angina), bisweilen im Kehlkopf (Krupp). Die Diffusion des Exotoxins bestimmter Stämme ist verantwortlich für maligne Angina und/oder viszerale Komplikationen (Polyneuritis, Myocarditis, malignes Marfan-Syndrom). Zahlreiche serologische Studien, die vor kurzem in den meisten entwickelten Ländern durchgeführt wurden, haben gezeigt, dass je nach Alter, Geschlecht und lokaler epidemischer oder vakzinaler Vorgeschichte 20 bis 80 % der Einwohner heutzutage nicht mehr richtig immunisiert sind; und dass die über 50-Jährigen und die Frauen besonders gefährdet sind (Rappuoli et al., Vaccine 11, 576-577, 1993. Simonsen et al., Acta Pathol. Microbiol. Immunol. Scand, 95, 225-231, 1987. Wirz et al., Vaccine, 13, 771-773, 1995). Diese Gefährdung wurde in den letzten zwanzig Jahren durch das bisweilen dramatische Wiederauftreten der Diphtherie in den entwickelten Ländern offensichtlich (Galazka et al., Eur. J. Epidemiol, 11, 107-117, 1995).
Tetanus wird durch Clostridium tetani verursacht. Die im Wesentlichen in der Erde vorliegende Sporenform, die durch Eindringen in den Organismus zugeführt wird (Verletzung, Stich, Verbrennung oder kleine Wunde), führt zur Entstehung der vegetativen Form. Diese Form sondert ein Endotoxin ab, das Tetanospasmin. Die Bakteriolyse bewirkt seine Diffusion. Da es neurotrop ist, bestimmt das Toxin die Symptomatologie, das heißt einen anfänglichen Trismus und Muskelkontraktionen. Ohne Behandlung ist die Entwicklung durch Asphyxie oder Synkope tödlich. Die Impfung mit Anatoxin bleibt die einzige Abwehr. Die durch Erstimpfung erworbene Immunität nimmt mit der Zeit ab und bedarf der Auffrischungen. In der amerikanischen Bevölkerung wurde das Fehlen oder der Verlust der Immunität mit dem Alter seit Jahrzehnten durch mehrere serologische Erhebungen festgestellt (Hilton et al., Ann. Intern. Med., 115, 32-33, 1991). In Europa haben serologische Erhebungen gleichartige Ergebnisse erbracht (Kjeldsen et al., Scand. J. Infect. Dis., 20, 177-185, 1988). Es ist folglich klar, dass zahlreiche Erwachsene, insbesondere die über 50-Jährigen und die Frauen wieder durch Tetanus gefährdet sind oder es immer waren und eine Impfung mit Anatoxin benötigen.
Poliomyelitis wird durch das Poliovirus verursacht, das zur Gruppe der Enteroviren gehört. Es existieren drei Serotypen, die Typ 1, Typ 2 und Typ 3 genannt werden. Die Übertragung erfolgt im Wesentlichen fäkal-oral, direkt oder indirekt und manchmal oral-oral. Das Virus hat einen Intestinal-, Muskel-, Hirnhaut- und Nerventropismus. Die Infektion ist im Allgemeinen inapparent oder abgeschwächt. Diese "Poliomyelitis-Infektion" ist immunisierend, aber ohne Kreuzimmunität zwischen den Typen, und mehrere Wochen lang ansteckend. Sie ruft in Ausnahmefällen (1% bis 1 % der Infektionen je nach Alter und Typ) Meningitis- oder Paralyseformen (akute atonische Paralyse) aus. Diese "Poliomyelitis-Erkrankung" ist immer bedrohlich, weil es keine ätiologische kurative Behandlung gibt. Wenn sie nicht durch Asphyxie tödlich ist (2 bis 10 % je nach Alter und Typ), sind zu Behinderungen führende Spätfolgen für die Muskeln oder die Atmung die Folge. Der menschliche Austausch, der immer zahlreicher wird, zwischen den Endemieländern und den poliomyelitisfreien Ländern setzt diese Letzteren den Gefahren des Einschleppens und der Wiedereinführung von Wildstämmen aus. In den letzten Jahren sind trotz eines hohen Niveaus der Durchimpfung und eines sehr geringen globalen Auftretens der Krankheit eingeschleppte Fälle und Epidemien in Europa, in Nordamerika und im Mittleren Osten aufgetreten (WHO, Relevé Epidémiologique Hebdomadaire, 29, 220-221, 1996). Bis zu einer Ausrottung der Krankheit birgt der zahlreiche menschliche Austausch zwischen den Endemieländern und den nicht betroffenen Ländern folglich die Gefahr, in einer beliebigen Region der Erde Ausbrüche, die durch eingeschleppte Wildstämme verursacht werden, hervorzurufen. Um das Ausbreiten der Krankheit bei Schüben dieses Typs auf das Minimum zu vermindern, müssen alle Länder einschließlich derjenigen, wo kein Fall akuter Poliomyelitis mehr gemeldet ist, einen hohen Durchimpfungsgrad in ihrer ganzen Bevölkerung aufrechterhalten.
Die Diphtherie- und Tetanusimpfstoffe, in den 1930er Jahren von Ramon entwickelt, basieren auf Anatoxinen. Sie können durch die detoxifizierende Wirkung von Formaldehyd auf ein Konzentrat von Corynebacterium diphtheriae- oder von Clostridium tetani Kultur und anschließende Reinigung erhalten werden. Ihre jeweiligen immunisierenden Aktivitäten werden in vitro und in vivo ermittelt. Ein Flockungstest misst die Menge an Anatoxin, ausgedrückt als Flockungseinheit (Lf) pro Dosis (Lyng et al., J. Biol. Stand., 15, 27-37, 1987; J. Lyng, Biologicals, 18, 11-17, 1990).
Tetanus-Anatoxin wird bisweilen allein verabreicht. Historisch wird dieses Anatoxin jedoch immer kombiniert, wenigstens mit Diphtherie-Anatoxin. Allgemein wird die Tetanus- und Diphtherie-Erstimpfung im Verlauf des ersten Lebensjahres in 3 Dosen durchgeführt (WHO, WHO/EP/GEN, 95.3, 1995). Je nach Land wird im Verlauf des zweiten Jahres und/oder zwischen 4 und 10 Jahren eine Auffrischdosis verabreicht. Manchmal wird auch eine Auffrischung zwischen 11 und 18 Jahren durchgeführt. Außerdem empfiehlt die WHO seit 1987, die Frauen im fortpflanzungsfähigen Alter in den Entwicklungsländern mit 3 Erstimpfungsdosen, dann 1 bis 5 Jahre später mit 1 Auftrischdosis mit Tetanus-Anatoxin zu impfen.
Die Menge an Tetanus-Anatoxin (T) pro Impfdosis variiert je nach Land von 5 bis 20 Lf für eine Dosis von 0,5 ml bei der Erst- oder Auffrischimpfung. Die Europäische Pharmakopöe empfiehlt eine Aktivität von wenigstens 20 IE.
Die Menge an Diphtherie-Anatoxin (D) pro Impfdosis, die am häufigsten und am längsten verabreicht wird, ist diejenige, die in den Erstimpfungskombinationen für Kinder vorliegt: sie variiert von 12 bis 50 Lf für eine Dosis von 0,5 ml (Galazka et al., Vaccine, 14, 845-857, 1996).
Für eine Impfauffrischung hat sich jetzt auch die Verminderung der Menge an Diphtherie-Anatoxin (d) allgemein verbreitet. Die Menge liegt im Allgemeinen in der Größenordnung von 1/10 der Menge für Kinder. Sie ist so auf 2 Lf für eine Dosis von 0,5 ml in den USA und in Kanada festgesetzt und wird als Auffrischung ab dem Alter von 7 Jahren empfohlen (Edsall et al., Am. J. Hyg, 53, 283-295, 1951). In Europa sind je nach Land die Menge an Anatoxin und das Mindestalter der Verabreichung unterschiedlich. Die Menge ist nicht festgesetzt, weil die einzige Bedingung, die die Europäische Pharmakopöe stellt, sich nicht auf die Menge, sondern auf die Aktivität bezieht: sie muss wenigstens 2 IE pro 0,5 ml-Dosis betragen.
Für die Auffrischimpfstoffe, die für eine erwachsene Population bestimmt sind, ist das Diphtherie-Anatoxin im Allgemeinen auch mit dem Tetanus-Anatoxin kombiniert. Es ist bekannt, dass diese Kombination nur die Toleranz des Tetanus-Anatoxins ein wenig vermindert (Palmer et al., Br. Med. J., 286, 624-626, 1983). In den Vereinigten Staaten wurden die Berichte über unerwünschte Vorfälle, die mit den Impfstoffen T und Td, die den Patienten mit mehr als 7 Jahren verabreicht wurden, verbunden sind, vor kurzem analysiert (Haber et al., ICAAC, 1996). Der Td-Impfstoff zeigte mehr als der T-Impfstoff eine lokale Reaktion, eine Dyspnoe, einen Bewusstseinsverlust oder einen Krampf.
Gegen Poliomyelitis wurden in den 1950er Jahren zwei Impfstoffe entwickelt: der injizierbare Impfstoff (VPI), der mit Formaldehyd inaktiviert ist, entwickelt von Salk (Plotkin et al., E.A. Vaccines, Verl. Raven Press, 1994), und der orale Impfstoff (VPO), attenuiert lebend, entwickelt von Sabin (Plotkin et al., s. o.). VPI hat allen Ländern ermöglicht, Poliomyelitis auszurotten, sowohl als Wildform als auch postvakzinal (Murdin et al., Vaccine, 14, 735-746, 1996). Die Herstellungsart und die Zusammensetzung von VPI variieren je nach Land. Die drei Poliovirustypen werden so auf einer kontinuierlichen VERO-Zelllinie kultiviert, dann gereinigt und mit Formaldehyd inaktiviert. Ihre jeweilige immunisierende Aktivität wird in vitro und in vivo beurteilt. Ein ELISA-Test misst den Gehalt an viralem Antigen, ausgedrückt in internationalen Einheiten: die WHO empfiehlt pro 0,5 ml-Dosis 40 IE, 8 IE beziehungsweise 32 IE (wie durch das Sigmoid-Verfahren bestimmt) für die D-Antigene der Typen 1, 2 und 3.
VPI bietet zwei pharmazeutische Vorteile: er ist stabil und benötigt keine spezielle Logistik. Er kann bisweilen mit weiteren Antigenen kombiniert sein.
Die gleichzeitige Impfung während der Kindheit gegen Poliomyelitis, Tetanus und Diphtherie ist seit Jahren in der ganzen Welt gängige Praxis, in den meisten entwickelten Ländern sogar seit Jahrzehnten. Diese Praxis hat zur beträchtlichen Verminderung der Fall- und Todesfallzahlen aufgrund dieser drei Krankheiten stark beigetragen. Sie sind jedoch nicht verschwunden. In den entwickelten Ländern ver laufen sie, wenn sie eintreten, umso schwerer, je später sie auftreten. Nun schwächt sich aber die durch Impfung erworbene Immunität mit der Zeit ab. Da die Jugendlichen und die Erwachsenen dieser Länder nicht von einer natürlichen Erhaltung dieser Immunität profitieren, werden sie wieder gefährdet. Der Erhalt der Durchimpfung gegen jede der drei Krankheiten während des ganzen Lebens ist künftig eine epidemiologische Notwendigkeit.
Es besteht folglich ein Bedarf an einem neuen Impfstoff gegen wenigstens Diphtherie, Poliomyelitis und Tetanus, der bei einer Impfauffrischung verwendbar ist, der zum Ziel hat, einen Schutz gegen Tetanus, Poliomyelitis und Diphtherie, der anfangs bei einer Erstimpfung oder einer Sensibilisierung verliehen wurde, zu verlängern und der bei dieser Population die von den bestehenden Impfstoffen ausgelösten unerwünschten Wirkungen minimiert.
Die injizierbaren Impfstoffe für Kinder der Art TDPolio (T: Tetanus-Anatoxin; D: herkömmliche Dosis Diphtherie-Anatoxin; Polio: inaktivierte Polioviren Typen 1,2 und 3), beispielsweise der Impfstoff D.T.Polio^® (PMsv S.A., Frankreich), können diesen Bedarf nicht befriedigen. Diese Impfstofftypen werden nämlich hauptsächlich bei einer Erstimpfung von Kindern verwendet. Sie sind frei von Aluminiumsalzen. Sie enthalten zu hohe Mengen an Diphtherie-Anatoxin, beispielsweise in der Größenordnung von 100 Lf/ml. Und sie lösen unerwünschte Reaktionen beim Erwachsenen aus (Björkholm et al., Eur. J. Clin. Microb., 6, 637-640, 1987).
Man kann auch nicht in Betracht ziehen, einen bestehenden TDPolio-Impfstoff einfach zu verändern, um seine unerwünschten Wirkungen auf eine erstgeimpfte Population zu minimieren. Ein Ziel der Wahl wäre nämlich beispielsweise, darin die Menge an Diphtherie-Anatoxin zu vermindern. In diesem Fall würde man nicht in Erwägung ziehen, die herkömmlicherweise in einem Td-Impfstoff (der der einzige aktuelle Bezug ist) verwendeten Anatoxinmengen in der Größenordnung von beispielsweise wenigstens 4 Lf pro ml beizubehalten, sondern eher mehr davon einzusetzen, wahrscheinlich mehr als beispielsweise 20 Lf/ml. In einem herkömmlichen Td-Impfstoff ist nämlich das Diphtherie-Anatoxin immer mit einem Aluminiumsalz-Hilfsstoff versehen, was seine Immunogenizität verstärkt. In einem TDPolio-Impfstoff beinhaltet die Tatsache, dass man keinen Hilfsstoff hat, dass man die Anatoxindosis im Vergleich mit derjenigen, die in einem Td-Impfstoff verwendet wird, verstärkt.
Aus den gleichen Gründen könnte die einfache Kombination eines bestehenden Impfstoffs vom injizierbaren Td-Typ, beispielsweise die Impfstoffe Vaccinol^® oder Td-Pur^®(Chiron-Behring GmbH, Deutschland) oder der Impfstoff Diftavax^® (PMsv S.A., Frankreich), mit einem herkömmlichen Impfstoff gegen Poliomyelitis (PMsv, Frankreich) auch nicht zu einer zufrieden stellenden Lösung führen. Die Wahl jedes Bestandteils in einem solchen Impfstoff sowie ihre Dosierung sind nämlich bestimmend für den Erhalt einer optimalen Immunreaktion und eine Minimierung der unerwünschten Wirkungen.
So kann dann beispielsweise, wenn man zu einem Td-Impfstoff neue Antigene (Polio) hinzufügt, die Menge an Aluminiumsalzen nicht ausreichend sein, um eine optimale Rolle als Hilfsstoff zu spielen. Man würde Gefahr laufen, dass die Immunogenizität eines solchen Impfstoffs so vermindert wäre. Andererseits würde man, wenn man dieses Problem vermeiden will, indem man die Menge an Aluminiumsalzen erhöht, Gefahr laufen, parallel dazu die an diese Salze gebundenen unerwünschten Reaktionen zu verschlimmern (1,2 bis 3 mg pro ml in den Td-Impfstoffen; Gupta et al., Vaccine, 13, 1263-1276, 1995).
Desgleichen vermindert man, wenn man zu einem Td-Impfstoff neue Antigene (Polio) hinzufügt, auch die relative Menge jedes T- oder d Antigens. Man würde Gefahr laufen, die Immunogenizität eines solchen Impfstoffs so auch zu vermindern. Andererseits würde man, wenn man dieses Problem vermeiden will, indem man die Dosierung jedes Antigens, insbesondere diejenige des Diphtherie-Anatoxins erhöht, Gefahr laufen, parallel dazu die an dieses Anatoxin gebundenen unerwünschten Reaktionen zu verschlimmern (Björkholm et al., Eur. J. Clin. Microb., 6, 637-640, 1987).
Die Wahl jedes Bestandteils eines Impfstoffs vom Typ TdPolio sowie ihre Dosierung sind folglich schwer einzukreisen und können nicht einfach aus den bestehenden Impfstoffen abgeleitet werden.
Es existiert auch keine Impfstoffkombination, die für eine Verwendung als Impfauffrischung beim Erwachsenen oder Jugendlichen gegen Diphtherie, Tetanus, Poliomyelitis und Keuchhusten, sogar auch gegen Hepatitis A und/oder Hepatitis B geeignet ist.
Die vorliegende Erfindung hat folglich zum Ziel, einen Impfstoff zu liefern, der wenigstens die Basiskombination TdPolio besizt, der, wobei er sich von den vorherigen TDPolio-, Td- und Polio-Impfstoffen unterscheidet, eine mit diesen vergleichbare Immunogenizität aufweist und außerdem ihre unerwünschten Wirkungen minimiert. Der erfindungsgemäße Impfstoff ist bei einer Auffrischimpfung verwendbar.
Zusammenfassung der Erfindung
Dazu betrifft die Erfindung einen Impfstoff, umfassend:

– weniger als 1,2 mg pro ml Aluminiumsalz, ausgedrückt in Bezug auf das Al³⁺-Atom,
– immunogene Antigene, die wenigstens vom Poliovirus, von Corynebacterium diphtheriae und von Clostridium tetani stammen, und
– eine Menge an Diphtherie-Anatoxin, das als immunogenes Antigen von Corynebacterium diphtheriae verwendet wird, zwischen 4-16 Lf pro ml.

Der Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung ist bei einer Erstimpfung und als Auffrischimpfstoff bei einer erstgeimpften oder sensibilisierten Population verwendbar. Die Anmelderin hat gezeigt, dass der wie oben definierte Impfstoff besonders gut für eine Verwendung als Impfauffrischung geeignet ist.
Die Anmelderin hat überraschenderweise gezeigt, dass der wie oben definierte Impfstoff es ermöglicht, die reaktogenen und/oder allergischen Wirkungen, die von den Grundantigenen ausgelöst werden, zu minimieren.
Gemäß einem weiteren Gegenstand betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Impfung gegen wenigstens das Poliovirus, Corynebacterium diphtheriae und Clostridium tetani, umfassend die Verabreichung eines wie oben definierten Impfstoffs.
Schließlich betrifft die Erfindung auch ein pharmazeutisches Kit, umfassend wenigstens 2 injizierbare Dosen eines Impfstoffs gemäß der vorliegenden Erfindung.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Im Zusammenhang der vorliegenden Erfindung versteht man unter dem Ausdruck "eine bereits erstgeimpfte oder sensibilisierte Population" erwachsene, jugendliche oder heranwachsende Personen, die bereits gegen wenigstens das Poliovirus, Corynebacterium diphtheriae und/oder Clostridium tetani geimpft wurden, oder Personen, die bereits in Kontakt mit wenigstens einem der Keime Poliovirus, Corynebacterium diphtheriae und Clostridium tetani gewesen waren; wobei die bevorzugte Population aus den Jugendlichen und den Erwachsenen und spezieller den älteren Personen besteht.
Vorzugsweise haben die Antigene von Corynebacterium diphtheriae und von Clostridium tetani ihre Toxine zum Ursprung, die mit Formaldehyd detoxifiziert, dann gereinigt werden. Die Techniken zum Detoxifizieren und Reinigen dieser Toxine sind seit Jahrzehnten gut bekannt und sind beispielsweise beschrieben von Leong et al., Science, 220, 815-517, 1983; Ramon G., Ann. Inst. Pasteur, 38, 1-105, 1924; Raynaud et al., Ann. Inst. Pasteur, 96, 60-71, 1959; oder von Bizzini et al., Eur. J. Biochem., 17, 100-105, 1970. Die detoxifizierten Analogen, die gentechnisch erzeugt werden können, sind in die vorliegende Erfindung ebenfalls eingeschlossen.
Desgleichen können die Antigene des Poliovirus einfach aus einem oder mehreren Typen von inaktiviertem Poliovirus (siehe Folgendes) und/oder aus gereinigten immunogenen Antigenen des Poliovirus bestehen, wie diejenigen, die beispielsweise beschrieben sind von Delpeyroux et al., 70, 1065-73, 1988; EP 323861 (Pasteur Institut); E P86707 (Pasteur Institut); oder in EP 65924 (Pasteur Institut).
Um inaktivierte Polioviren zu erhalten, kann man sie beispielsweise auf VERO-Zelllinien kultivieren, sie reinigen, sie dann mit Formaldehyd detoxifizieren. Die Verfahren der Kultur und Detoxifizierung des Poliovirus sind seit Jahrzehnten gut bekannt und sind beispielsweise beschrieben in WO9800167 (Connaught); Dulbecco, Nature, 376, S. 216, 1995; Cohen, Acta Leiden, 56, 65-83, 1987 und von Salk, Dev Biol Stand., 47, 247-55, 1981.
Vorzugsweise verwendet man die inaktivierten Polioviren der Typen 1 (MAHONEY-Stamm), 2 (MEF 1-Stamm) und 3 (Saukett-Stamm).
Die pro Impfdosis verwendete Menge an Diphtherie-Anatoxin als immunogenes Antigen von Corynebacterium diphtheriae muss zwischen 4 und 16 Lf pro ml, vorzugsweise 6-14 Lf, insbesondere beispielsweise in der Größenordnung von 10 Lf pro ml liegen. Diese Menge ermöglicht es, eine optimale Immunogenizität sicherzustellen, wobei gleichzeitig die unerwünschten Wirkungen, wie beispielsweise die reaktogenen oder allergischen Reaktionen auf die Antigene, minimiert werden.
Desgleichen liegt die Menge an Tetanus-Anatoxin als immunogenes Antigen von Clostridium tetani pro Impfdosis zwischen 6 und 30 Lf pro ml, vorzugsweise 8-20 Lf, insbesondere beispielsweise in der Größenordnung von 10 Lf pro Dosis. Diese Menge ermöglicht es, eine optimale Immunogenizität sicherzustellen, wobei gleichzeitig die unerwünschten Wirkungen minimiert werden.
Um die Menge an Diphtherie- oder Tetanus-Anatoxin (Lf) zu messen, verwendet man den Flockungstest, der beschrieben ist von Lyng (J. Biol. Stand., 15, 27-37, 1987; oder Biologicals, 18, 11-17, 1990) oder von der WHO (Manual for the production and the control of vaccines, BLG/UNDP/77.1 und BLG/UNDP/77.2), wobei man jedoch berücksichtigt, dass die Reinheit des verwendeten Anatoxins mit 1500-1800 Lf pro mg Stickstoff für Diphtherie oder 1000-1300 Lf pro mg Stickstoff für Tetanus angeführt wird.
Als Anhaltspunkt ist bei den meisten Herstellungen die Reinheit des gereinigten Diphtherie-Anatoxins im Allgemeinen in der Größenordnung von 1700-1800 Lf pro mg Stickstoff (interne Quelle). Desgleichen liegt diese Reinheit für das Tetanus-Anatoxin in der Größenordnung von 1200-1400 Lf (interne Quelle).
Für die als immunogene Antigene verwendeten inaktivierten Polioviren kann eine erfindungsgemäße Impfdosis beispielsweise 60-120 IE/ml D-Antigen des Poliovirus Typ 1, 8-30 IE/ml D-Antigen des Poliovirus Typ 2 und/oder 16-80 IE/ml D Antigen des Poliovirus Typ 3 umfassen. Die Internationalen Einheiten werden gemäß dem Sigmoid Verfahren bestimmt.
Bei einer speziellen Anwendungsform der vorliegenden Erfindung kann der erfindungsgemäße Impfstoff außer der oben beschriebenen Basiskombination TdPolio beispielsweise 0,1 bis 60 μg/ml der gereinigten Antigene von B. pertussis, vorzugsweise Anatoxin von B. pertussis (PT) und FHA; 0,1 bis 40 μg/ml HBs-Antigen von Hepatitis B; und/oder 0,1 bis 40 μg/ml inaktiviertes Hepatitis A-Virus oder ein Antigen von diesem umfassen.
Das Toxin von Bordetella pertussis, einschließlich der gentechnisch erzeugten detoxifizierten Analoge kann auf verschiedene Arten hergestellt werden. Beispielsweise kann man einen Stamm von B. pertussis gemäß herkömmlichen Verfahren kultivieren (Sekura et al., J. Biol. Chem., 258, 14647-14651, 1993), man kann das Anatoxin isolieren, indem man das Kulturmedium auf einer Säule Affi-Gel Blue^® (Bio-Rad Lab, US) adsorbiert, indem man es dann mit einer salzreichen Lösung (beispielsweise 0,75 M Magnesiumchlorid) eluiert, dann kann man noch anschließend, nachdem man die Salze entfernt hat, dieses Eluat auf einer Affinitätssäule Fetuin-Sepharose (Fetuinverbindung, die an Bromcyan gebunden ist) adsorbieren, es dann mit einer 4M Lösung eines Magnesiumsalzes eluieren. Das Toxin von B. pertussis kann dann mit Hilfe von Glutaraldehyd gemäß einem abgeänderten Verfahren von Munoz et al. (Infect. Immun., 33, 820-826, 1981), wie in der Patentanmeldung PCT/EP97/05378 (PMsv) beschrieben, detoxifiziert werden. Zahlreiche weitere Verfahren stehen dem Fachmann noch zur Verfügung, wie die von Irons et al. (Biochem. Biophys. Acta, 580, 175-185, 1979) oder die, die in den Patenten US4705686 und EP 336736 beschrieben sind.
FHA kann aus dem aufschwimmenden Anteil einer Kultur im Wesentlichen durch das von Cowell et al (Infect. and Immun., 41, 1, 313-320, 1983) beschriebene Verfahren gereinigt werden. Wachstumspromotoren, wie die methylierten Beta-Cyclodextrine können verwendet werden, um die Ausbeute an FHA in dem Aufschwimmenden zu erhöhen. Der aufschwimmende Anteil der Kultur wird auf eine Hydroxylapatitsäule gegeben. FHA wird auf der Säule adsorbiert, PT jedoch nicht. Die Säule wird sehr ausgiebig mit Triton X-100 gewaschen, um das Endotoxin zu beseitigen. FHA wird anschließend unter Verwendung von 0,5 M NaCl in 0,1 M Natriumphosphat eluiert und, wenn notwendig, über eine Fetuin-Sepharose-Säule geleitet, um das verbliebene PT zu entfernen. Eine zusätzliche Reinigung kann das Durchlaufen einer Säule mit Sepharose CL-6B umfassen. Eine Alternative kann die Reinigung des FHA durch Verwendung monoklonaler Antikörper, die gegen das Antigen gerichtet sind, umfassen, worin die Antikörper an eine mit CNBr aktivierte Affinitätssäule gebunden sind. FHA kann auch durch Anwendung einer Chromato graphie über Perlit gereinigt werden, wie dies in dem Patent EP 336 736 beschrieben ist.
Ein geeignetes Verfahren zur Reinigung des FHA ist auch im Beispiel 3 des Patents EP 0242 302 beschrieben. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird FHA gemäß diesem Verfahren hergestellt.
Man kann eine Suspension des Antigens von Hepatitis B gemäß dem in dem Patent EP 273811 (Pasteur Vaccins) beschriebenen Verfahren herstellen, worin man Hepatitis-B-Oberflächen-Antigenteilchen durch Expression aus einer Kultur von CHO-Zellen, die mit einem Plasmid transfektiert sind, das das HBsAg-Gen trägt, herstellt, um in dem Kulturmedium die Oberflächen-Antigenteilchen freizusetzen. Weitere Verfahren sind dem Fachmann gut bekannt, wie beispielsweise diejenigen, die in EP 864649 , UE 56711 oder IE 48665 beschrieben sind.
Desgleichen kann man ein inaktiviertes Hepatitis A-Virus gemäß dem Protokoll von Flehmig et al. (Viral Hepatitis and Liver Disease, 87-90, 1988; J. Med. Virol., 22, 7-16, 1987) herstellen. Weitere Verfahren sind dem Fachmann gut bekannt, wie diejenigen, die beispielsweise beschrieben sind von Wang et al., Vaccine, 13, 835-40, 1995; Shevtsova et al., Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol., 2, 55-90, 1995; Richtmann et al., J Med Virol., 48, 147-50, 1996; EP 199480 ; IE 48399 ; oder in IE50191.
Der erfindungsgemäße Impfstoff umfasst einen oder mehrere Hilfsstoffe, die ausgewählt sind unter den als solche anerkannten Hilfsstoffen, beispielsweise insbesondere alle Aluminiumsalze, wie die Aluminiumphosphate und -hydroxide; N-Acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamyl-L-alanin-2-[1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-(hydroxyphosphoryloxy)] siehe Sanchez-Pescador et al., J. Immu., 141, 1720-1727, 1988); die von Quillaja saponaria abgeleiteten Moleküle, wie Stimulon^® (Aquila, US); Iscoms^® (CSL ltd, US); alle Moleküle auf der Basis von Cholesterin und Analoge, wie DC Chol^® (Targeted Genetics); das Glycolipid Bay R1005^® (Bayers, DE); die Antigene von Leishmania brasiliensis, wie LeIF (technischer Name), erhältlich bei Corixa Corp. (US), die Polymere der Familie der Polyphosphazene, wie Adjumer (technischer Name), erhältlich bei "Virus Research Institute" (US). Der Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung enthält weniger als 1,2 mg/ml, vorzugsweise 0,70 mg/ml Aluminiumsalz, ausgedrückt in Bezug auf das Al³⁺-Atom.
Man kann anmerken, dass, im Vergleich zu den herkömmlichen TDPolio-Impfstoffen, wie D.T.Polio^® (PMsv, Frankreich), die vorliegende Erfindung zum ersten Mal die Zugabe eines Hilfsstoffs, und insbesondere ein Aluminiumsalz, wie beispielsweise Aluminiumhydroxid, vorschlägt.
Entgegen jeder Erwartung kann der Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung eine Menge an Aluminiumsalz umfassen, die geringer ist als diejenigen, die in allen herkömmlichen Td-Impfstoffen, wie Td-Pur^® oder Diftavax^® vorgefunden werden, während man es als notwendig hätte annehmen können, seine Menge infolge der Zugabe der inaktivierten Polioviren zu erhöhen. Ein Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung umfasst weniger als 1,2 mg/ml eines Aluminiumsalzes, vorzugsweise weniger als 0,8 mg/ml. Die Menge an Aluminiumsalz wird immer in Bezug auf das Aluminiumatom (Al³⁺) ausgedrückt; was dem einzigen auf dem Gebiet der Impfstoffe anwendbaren Verfahren entspricht. Alle Mengen an Aluminiumsalz, auf die in der vorliegenden Anmeldung Bezug genommen wird, sind folglich auf diese Art ausgedrückt.
Ein Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung kann weitere Bestandteile enthalten, wie Konservierungsstoffe, wie beispielsweise 2-Phenoxyethanol und/oder Formaldehyd usw.
Die verschiedenen berücksichtigten Formulierungen können beispielsweise eine derjenigen sein, die oben beschrieben sind, insbesondere diejenigen, die weitere Antigene enthalten, die von Bordetella pertussis, Hepatitis A oder Hepatitis B stammen.
Der erfindungsgemäße Impfstoff kann in der Form einer injizierbaren Suspension vorliegen, die leicht undurchsichtig ist, weil ein unlösliches Aluminiumsalz vorhanden ist. Die Impfdosis ist vorzugsweise in der Größenordnung von 0,5 ml, enthalten in einer vorbefüllten Glasspritze. Die Verabreichung erfolgt tief subkutan oder intramuskulär, vorzugsweise intramuskulär, beispielsweise in einen der Deltamuskeln.
Bei einer speziellen Anwendungsform der vorliegenden Anwendung sind mehrere Impfstoffdosen dazu bestimmt, getrennt voneinander einem gleichen Patienten in einem Zeitintervall zwischen 10 Tagen bis 3 Monaten injiziert zu werden, um eine optimale Immunreaktion zu fördern und um die reaktogenen und/oder allergischen Wirkungen dieser Antigene zu minimieren. Für eine Erstimpfung wird der Impfstoff bevorzugt in einer Menge von 3 Dosen verabreicht, wobei die beiden ersten Dosen in einem Intervall von 1 bis 2 Monaten verabreicht werden, die dritte Dosis von der zweiten Injektion durch ein Intervall von 6 bis 12 Monaten getrennt ist. Für eine Auffrischimpfung, die an einer erstgeimpften oder sensibilisierten Population anwendbar ist, wird der Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung in der Menge von 1 Dosis oder 2 Dosen, die wenigstens 1 Monat auseinander liegen, verabreicht.
Der Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung kann vorteilhafterweise bei einer Auffrischimpfung verwendet werden, bei der die Erstimpfung mittels eines oralen Impfstoffs gegen Poliomyelitis durchgeführt wurde.
Man verwendet sowohl bei einer Erstimpfung als auch bei einer Auffrischimpfung vorzugsweise eine Dosis von 0,5 ml, umfassend 4 bis 16 Lf/ml Diphtherie-Anatoxin, vorzugsweise 10 Lf/ml; 6 bis 30 Lf/ml Tetanus-Anatoxin, vorzugsweise 20 Lf/ml, und jeweils und vorzugsweise 40 IE, 8 IE und 32 IE (Sigmoidverfahren) der D-Antigene des Poliovirus 1, 2 und 3. Wobei die vorhandene Menge an Aluminiumsalz vorzugsweise 0,70 mg/ml beträgt, ausgedrückt in Bezug auf das Al³⁺-Atom.
Der erfindungsgemäße Impfstoff ermöglicht es, die durch die bestehenden TDPolio- und Td-Impfstoffe bei ihrer Injektion ausgelösten unerwünschten Wirkungen zu vermindern. So kann man beispielsweise eine Verminderung der lokalen Reaktionen, wie Taubheit der Gliedmaßen, Schweißausbrüche, Fieber, Schmerzen, die verbunden sind mit Rötungen, Knötchen, Verhärtungen und/oder Ecchymosen, und eine Verminderung der Dyspnoen, Bewusstseinsverluste oder Krämpfe beobachten. Diese Reaktionen können unter die allergischen, ja reaktogenen Reaktionen auf die Antigene und/oder auf bestimmte andere Verbindungen des Impfstoffs, wie das Aluminiumsalz, eingeordnet werden. Die Anmelderin hat so gezeigt, dass der Impfstoff gemäß der vorliegenden Erfindung besonders für eine Auffrischimpfung geeignet ist, insbesondere bei den Erwachsenen.
Die vorliegende Erfindung ist in den nachstehend dargestellten Beispielen detaillierter beschrieben. Die Prozentangaben sind außer bei gegenteiliger Angabe in Gewicht angegeben. Es versteht sich jedoch von selbst, dass diese Beispiele zur Veranschaulichung des Gegenstands der Erfindung angegeben sind, für die sie in keinerlei Weise eine Beschränkung darstellen.
Beispiel 1 Immunogenizität von TdPolio mit verschiedenen Diphtherie-Anatoxin-Dosen
Man stellt Diphtherie-Anatoxin (d) her, indem man den Stamm IM 1514 N3S in einem IMD-Medium 15 bis 18 h lang bei 36 °C kultiviert, indem man das Medium zentrifugiert, indem man es klärt, indem man es durch Ultrafiltration konzentriert, indem man es bei 37 °C 4 Wochen lang in Gegenwart von 6/1000 Formalin detoxifiziert, indem man dann das Toxin bis zum Erhalt einer Reinheit in der Größenordnung von 1700 Lf pro mg Stickstoff reinigt.
Parallel stellt man Tetanus-Anatoxin (T) her, indem man den Stamm Harvard Nr.49205 IM 1472C in einem Massachusetts-Medium bei 35 °C 4 Tage lang kultiviert, indem man dazu NaCl und Natriumcitrat zugibt, indem man das Medium zentrifugiert, indem man es durch Ultrafiltration konzentriert, indem man es 2 Wochen lang bei 35 °C in Gegenwart von 5,511000 Formalin und 5 g/l Natriumbicarbonat detoxifiziert, indem man dann das Toxin bis zum Erhalt einer Reinheit in der Größenordnung von 1200 Lf pro mg Stickstoff reinigt.
Desgleichen stellt man die inaktivierten Polioviren Typ 1 (MAHONEY-Stamm), 2 (MEF 1-Stamm) und 3 (Saukett-Stamm) gemäß dem Salk-Verfahren her.
Man mischt dann die 5 obigen immunogenen Antigene mit Aluminiumhydroxid, 2-Phenoxyethanol, Formaldehyd, phenolrotfreiem Medium 199 Hanks und Wasser. Dazu sterilisiert man das Aluminiumgel in Gegenwart von Wasser, man stellt den pH zwischen 5,6 und 6 ein, man fügt nacheinander das ADP (2 oder 8 Lf/Dosis) und das ATP (10 Lf/Dosis), das Medium 199 Hanks zu, man stellt den pH auf 6-6,9 ein, man gibt die drei Poliovirustypen zu, dann gibt man 2-Phenoxyethanol und Formaldehyd zu und gegebenenfalls stellt man den pH zwischen 6,8 und 7 ein.
Das Endprodukt mit 0,5 ml dient als TdPolio-Impfstoff und enthält mindestens 2 IE Diphtherie-Anatoxin, mindestens 20 IE gereinigtes Tetanus-Anatoxin, jeweils 40 IE, 8 IE und 32 IE D-Antigen (Werte wie mit dem Sigmoid-Verfahren gemessen) für die inaktivierten Polioviren vom Typ 1, 2 und 3, 0,35 mg Aluminiumhydroxid, ausgedrückt in Bezug auf das Aluminiumatom Al³⁺, 2,5 μl 2-Phenoxyethanol, 12,5 μg Formaldehyd; wobei der Rest aus phenolrotfreiem Medium 199 Hanks und Wasser besteht.
Eine Studie der Phase I hatte zum Hauptziel, die klinische und biologische Toleranz der ersten Verabreichung eines adsorbierten TdPolio-Impfstoffs nachzuweisen. Mit diesem Ziel wurden 31 gesunde freiwillige Erwachsene rekrutiert. Drei Chargen des Impfstoffs zu jeweils 0,5 ml wurden verwendet. Sie unterschieden sich nur durch die Menge an oben beschriebenem gereinigtem Diphtherie-Anatoxin: 2 Lf, 5 Lf und 8 Lf pro Dosis. Sie wurden fortlaufend in einem Umfang von 10 Patienten pro Charge gegeben. Jeder Patient wurde mit einer Dosis einer Charge, die in einen Deltamuskel injiziert wurde, geimpft.
Bei den mit den Chargen zu 2, 5 und 8 Lf geimpften Gruppen wurde keinerlei allgemeine Reaktion berichtet. Wenigstens eine lokale Reaktion wurde im Verlauf der ersten Woche bei 8 Patienten der Gruppe berichtet, die mit der Charge mit 2 Lf ADP geimpft war, bei 6 Patienten der Gruppe, die mit der Charge mit 5 Lf ADP geimpft war und bei 8 Patienten der Gruppe, die mit der Charge mit 8 Lf ADP geimpft war, es handelte sich immer um Schmerzen, die mit einigen Rötungen, Knötchen, Verhärtungen und/oder Ecchymosen verbunden waren. Alle Reaktionen verschwanden ohne Behandlung und haben das tägliche Leben der Patienten nicht beeinträchtigt. Keinerlei Reaktion ist über die erste Woche hinaus aufgetreten. Von den Forschern wurde kein schwerwiegender unerwünschter Vorfall gemeldet.
Diese Untersuchung hatte auch zum Nebenziel gehabt, die Immunogenizität der drei ersten Chargen des adsorbierten Impfstoffs zu bestimmen. Die Ergebnisse zeigen, dass die Immunreaktion auf die fünf Antigene für die drei Chargen ausgezeichnet war. Trotz hoher anfänglicher Titerwerte auf Grund des geringen Alters der Patienten und der kürzlichen Impfungen wurde für jedes Antigen eine Auffrischwirkung erzielt.
Beispiel 2 Immunogenizität beim jungen Erwachsenen
Die Immunogenizität und die Unschädlichkeit eines TdPolio-Impfstoffs wurden während eines klinischen Versuchs bei 508 jungen Erwachsenen bestimmt.
Für jeden Patienten wurde eine Dosis von 0,5 ml eines Td- (Diftavax^®) oder TdPolio-Impfstoffs in den linken Deltamuskel injiziert und eine Dosis von 0,5 ml des Impfstoffs gegen Poliomyelitis (VPI^®, PMsv) oder ein Placebo wurde in den rechten Deltamuskel injiziert. Eine Dosis adsorbierter Td-Impfstoff enthält Tetanus-Anatoxin (Aktivität ≥ 20 IE), Diphtherie-Anatoxin (Aktivität ≥ 2 IE), Aluminiumhydroxid (≤ 1,25 mg). Der VPI-Impfstoff enthält die D-Antigene der Palioviren des Typs 1 (40 IE), 2 (8 IE) und 3 (32 IE). Das Placebo hat die gleiche Zusammensetzung wie der VPI-Impfstoff mit dem Unterschied, dass es keine D-Antigene enthält. Der TdPolio-Impfstoff hat die gleiche Zusammensetzung wie die in Beispiel 1 beschriebene (5 Lf ADP pro Dosis).
Die Antikörper gegen Diphtherie, Tetanus und Poliomyelitis werden aus den Seren der Patienten durch ELISA-Test bestimmt.
Die Ergebnisse zeigen, dass vor der Impfung quasi alle Patienten seropositiv auf ADP waren (99,2 % haben einen Titer ≥ 0,01 IE/ml: Schutz möglich; und 92,6 % haben einen Titer ≥ 0,1 IE/ml: Schutz sichergestellt). Einen Monat nach der Impfung mit TdPolio hatten 99,6 % der Patienten einen Antikörpertiter ≥ 0,1 IE/ml und 82,4 % einen Titer ≥ 1 IE/ml (Langzeitschutz). Insgesamt wiesen 17,4 % der Patienten eine Serokonversion auf.
Desgleichen war die Mehrheit der Patienten seropositiv bezüglich Tetanus-Anatoxin (99,6 % mit einem Titer > 0,01 IE/ml: Schutz möglich; und 98,4 % mit einem Titer ≥ 0,1 IE/ml: Schutz sichergestellt). Einen Monat nach der Impfung mit TdPolio haben 100 % der Patienten einen Antikörpertiter ≥ 0,1 IE/ml und 99,2 % haben einen Titer ≥ 1 IE/ml (Langzeitschutz). Insgesamt wiesen 25,2 % der Patienten eine Serokonversion auf.
Bezüglich eines Schutzes gegen Poliomyelitis war die Mehrheit der Patienten auf die drei Typen von Polioviren seropositiv. Insgesamt hatten 99,2 % der Patienten einen Antikörpertiter ≥ 5 für den Typ 1, 100 % für den Typ 2 und 97,6 % für den Typ 3. Einen Monat nach der Impfung mit TdPolio haben 100 % der Patienten einen Titer ≥ 5 für alle Poliovirentypen mit einem minimalen Titer von 120 für den Typ 1, 160 für den Typ 2 und 80 für den Typ 3. Insgesamt wiesen 63,1 % der Patienten, die bereits einen hohen Antikörpertiter hatten, eine Serokonversion auf.
Vergleicht man die mit TdPolio erhaltenen Ergebnisse und diejenigen, die durch Kombination der Bezugsimpfstoffe Td und VPI^® erzielt werden, erhält man eine gleichwertige Antikörperreaktion.
Beispiel 3 Unschädlichkeit und Verträglichkeit beim jungen Erwachsenen
Die Unschädlichkeit und die Verträglichkeit eines TdPolio-Impfstoffs wurden unter 1742 jungen Erwachsenen bestimmt. Jeder dieser Patienten erhielt eine Dosis von 0,5 ml, injiziert in den linken Deltamuskel, des in Beispiel 1 dargestellten Impfstoffs (ADP: 5 Lf pro Dosis). Die Wirkungen wurden 15 Minuten nach einer Impfung bewertet. Die lokale, regionale und systemische Wirkung wurden in dem auf die Impfung folgenden Monat bewertet.
Die allgemeine unmittelbare Wirkung ist das Auftreten einer Rötung an der Injektionsstelle (0,34 % der Patienten) und ein Schmerz (0,11 %).
Die allgemeinen lokalen Wirkungen während des auf die Impfung folgenden Monats sind die folgenden für 66 % der Patienten: Schmerz (64,41 %), Rötung an der Injektionsstelle (9,13 %) und subkutane Knötchen (3,33 %). Diese unerwünschten Wirkungen zeigen sich in den 3 ersten Tagen nach der Impfung und dauern 2 bis 3 Tage an. 0,86 % der Patienten berichteten auch von Vorfällen eines Ödems, einer Entzündung, Migräne, Gefühllosigkeit im Arm, ungewollten Muskelkontraktionen und einer Parästhesie.
Die allgemeinen systemischen Wirkungen während des auf die Impfung folgenden Monats sind die folgenden für 18 % der Patienten: Kopfschmerzen (10,5 %), Schwindel oder Erbrechen (2,75 %) und Unwohlsein (2,41 %). Kein Vorfall von Urtikaria oder allgemeinem Juckreiz wurde berichtet. Diese Vorfälle zeigen sich in den 3 ersten Tagen nach der Impfung und dauern 2 bis 3 Tage an. Nur 0,23 % der Patienten haben eine Temperatur über ≥ 40 °C während der 3 ersten, auf die Impfung folgenden Tage.
Beispiel 4 Unschädlichkeit und Verträglichkeit von TdPolio gegenüber Td + Polio bei den jungen Personen
Der in Beispiel 2 beschriebene TdPolio-Impfstoff zeigt eine ausgezeichnete Verträglichkeit im Verlauf des Versuchs an 508 jungen Erwachsenen (Beispiel 2). Die Ergebnisse sind außerdem vergleichbar mit denjenigen, die im Verlauf des in Beispiel 3 beschriebenen Versuchs erhalten wurden.
Zieht man den Prozentanteil an Patienten, die wenigstens ein lokales oder regionales Anzeichen an der Injektionsstelle des Placebos hatten (14,8 %) von denjenigen ab, die an der Injektionsstelle des Polioimpfstoffs (36,5 %) beobachtet wurden, addiert dann diesen Prozentsatz zu dem, der an der Injektionsstelle des Td-Impfstoffs beobachtet wurde (66,7 %) hinzu, beobachtet man einen Unterschied von etwa 8 % bezüglich des Auftretens unerwünschter Vorfälle (88,4 % gegenüber 80,5 %). Der TdPolio-Impfstoff wird folglich besser vertragen als die gleichzeitige Verabreichung der bestehenden Impfstoffe.
Beispiel 5 Immunogenizität bei den über 40 Jahre alten Personen
Die Immunogenizität und die Unschädlichkeit eines TdPolio-Impfstoffs wurden während eines klinischen Versuchs bei 113 Patienten mit mehr als 40 Jahren (40 bis 78 Jahre) bestimmt. Alle Patienten hatten eine Erstimpfung (3 Dosen während eines Jahres) gegen Diphtherie, Tetanus und Poliomyelitis erhalten, wobei die letzte Impfung 32 Jahre (Minimum 15 Jahre), 28 Jahre (Minimum 10 Jahre) beziehungsweise 28 Jahre (Minimum 10 Jahre) zurücklag.
Die Patienten erhielten eine Injektion einer Dosis von 0,5 ml TdPolio, beschrieben in Beispiel 1 (ADP 5 Lf pro Dosis), in den rechten Deltamuskel und 28 Tage später eine zweite Injektion in den linken Muskel. Die Antikörper gegen Diphtherie, Tetanus und Poliomyelitis wurden aus den Seren der Patienten durch ELISA-Test bestimmt.
Die Ergebnisse zeigen, dass nur 50 % der Patienten anfangs gegen Tetanus geschützt waren, was so das Abfallen der Immunität zeigt. 83 % der Patienten waren anfangs seropositiv gegen die Polioviren der Typen 1, 2 und 3. Am 28. Tag nach der ersten Impfung war der Anteil an Patienten, die gegen Diphtherie, Tetanus und das Poliovirus der Typen 1, 2 und 3 geschützt waren, auf 80,5 %, 97,3 % beziehungs weise 100 % gestiegen. Am 56. Tag nach der Verabreichung der zweiten Dosis war der Anteil an Patienten, die gegen Diphtherie, Tetanus und das Poliovirus der Typen 1,2, und 3 geschützt waren, auf 93,7 %, 100 % beziehungsweise 100 % gestiegen.
Beispiel 6 Unschädlichkeit und Verträglichkeit von TdPolio gegenüber Td + Polio bei den über 40 Jahre alten Personen
Die Unschädlichkeit und die Verträglichkeit des in Beispiel 5 beschriebenen TdPolio-Impfstoffs wurden bestimmt. Die Ergebnisse zeigen ein Verträglichkeitsprofil, das mit dem vergleichbar ist, das mit der Kombination Td + Polio erzielt wird. Der TdPolio-Impfstoff löst jedoch weniger schwere unerwünschte Vorfälle aus (weniger als 1,8 auf 1000 Injektionen).
Beispiel 7 Auffrischimpfung für Erwachsene d.T.Polio.PT.FHA
Man stellt eine Impfstoffsuspension von 0,5 ml mit oder ohne Konservierungsmittel her, die aus 5 Lf Diphtherie-Anatoxin (mit einer Reinheit von 1700 Lf pro mg Stickstoff), 5 Lf Tetanus-Anatoxin (mit einer Reinheit von 1200 Lf pro mg Stickstoff), 40 IE, 8 IE beziehungsweise 32 IE D-Antigen (Werte wie durch das Sigmoid-Verfahren bestimmt) für die inaktivieren Polioviren des Typs 1, 2 und 3; 6 μg/ml gereinigtem Anatoxin (PT) und 6 μg/ml FHA von Bordetella pertussis, 0,35 mg Aluminiumhydroxid besteht und wobei der Rest aus phenolrotfreiem Medium 199 Hanks und Wasser besteht.
Man kann auch als Konservierungsmittel 2,5 μl 2-Phenoxyethanol und 12,5 μg Formaldehyd zugeben.
Die Diphtherie- und Tetanus-Anatoxine sowie die inaktivierten Polioviren wurden wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt.
Das Anatoxin von B. pertussis wird gemäß dem Verfahren von Sekura et al. (J. Biol. Chem., 258, 14647-14651, 1993) hergestellt, gemäß einem abgeänderten Protokoll von Munoz et al. (Infect. Immun., 33, 820-826, 1981) detoxifiziert, dann auf einem Aluminiumgel voradsorbiert. FHA von B. pertussis wird durch das in Beispiel 3 von EP 0242 302 beschriebene Verfahren hergestellt, dann auf einem Aluminiumsalz voradsorbiert.
Man mischt dann die obigen immunogenen Antigene mit Aluminiumhydroxid, Wasser und gegebenenfalls mit den Konservierungsstoffen. Dazu sterilisiert man das Aluminiumgel in Gegenwart von Wasser, man stellt den pH zwischen 5,6 und 6 ein, man gibt nacheinander ADP, ATP, und PT und FHA von B. pertussis zu, man stellt den pH auf 6,8-7 ein, man gibt das Medium 199 Hanks und die drei Typen von Polioviren zu, dann gibt man gegebenenfalls 2-Phenoxyethanol und Formaldehyd zu.
Beispiel 8 Auffrischimpfstoff für Erwachsene d.T.Polio.PT.FHA.HBs
Man stellt eine Impfstoffsuspension von 0,5 ml ohne Konservierungsmittel her, die aus 5 Lf Diphtherie-Anatoxin (mit einer Reinheit von 1700 Lf pro mg Stickstoff), 5 Lf Tetanus-Anatoxin (mit einer Reinheit von 1200 Lf pro mg Stickstoff), 40 IE, 8 IE beziehungsweise 32 IE D-Antigen für die inaktivierten Polioviren des Typs 1, 2 und 3; 6 μg/ml gereinigtem Anatoxin (PT) von Bordetella pertussis, 6 μg/ml FHA von B. pertussis, 5 μg/ml HBs-Antigen von Hepatitis B, 0,35 mg Aluminiumhydroxid besteht und wobei der Rest aus phenolrotfreiem Medium 199 Hanks und Wasser besteht.
Die Diphtherie- und Tetanus-Anatoxine sowie die inaktivierten Polioviren wurden wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt. PT und FHA B. pertussis wurden wie in Beispiel 7 beschrieben hergestellt.
Das HBs-Antigen wurde gemäß dem in dem Patent EP 273 811 (Pasteur Vaccins) beschriebenen Verfahren hergestellt. Es wird durch eine Voradsorption auf einem Aluminiumgel stabilisiert.
Man mischt dann die obigen immunogenen Antigene mit Aluminiumhydroxid und Wasser. Dazu sterilisiert man das Aluminiumgel in Gegenwart von Wasser, man stellt den pH zwischen 5,6 und 6 ein, man gibt nacheinander ADP, ATP und PT und FHA von B. pertussis zu, man stellt den pH auf 6,8-7 ein, man gibt das Medium 199 Hanks und die drei Typen von Polioviren zu, man stellt, wenn notwendig, den pH auf 6,8 ein und man gibt HBs zu.
Beispiel 9 Auffrischimpfstoff für Erwachsene d.T.Polio.PT.FHA.HBs.HA
Man stellt eine Impfstoffsuspension von 0,5 ml ohne Konservierungsmittel her, die aus 5 Lf Diphtherie-Anatoxin (mit einer Reinheit von 1700 Lf pro mg Stickstoff), 5 Lf Tetanus-Anatoxin (mit einer Reinheit von 1200 Lf pro mg Stickstoff), 40 IE, 8 IE beziehungsweise 32 IE D-Antigen für die inaktivierten Polioviren des Typs 1, 2 und 3; 6 μg/ml gereinigtem Anatoxin (PT) von Bordetella pertussis, 6 μg/ml FHA von B. pertussis, 5 μg/ml HBs-Antigen von Hepatitis B, 5 μg/ml inaktiviertem Hepatitis A-Virus, 0,35 mg Aluminiumhydroxid besteht und wobei der Rest aus phenolrotfreiem Medium 199 Hanks und Wasser besteht.
Die Diphtherie- und Tetanus-Anatoxine sowie die inaktivierten Polioviren wurden wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt. PT und FHA B. pertussis wurden wie in Beispiel 7 beschrieben hergestellt. Das HBs-Antigen wurde wie in Beispiel 8 beschrieben hergestellt.
Das inaktivierte Hepatitis A-Virus wird gemäß dem Verfahren von Flehmig et al. (s. o.) hergestellt.
Man mischt dann die obigen immunogenen Antigene mit Aluminiumhydroxid, den Konservierungsstoffen und Wasser. Dazu sterilisiert man das Aluminiumgel in Gegenwart von Wasser, man stellt den pH zwischen 5,6 und 6 ein, man gibt nacheinander ADP, ATP und PT und FHA von B. pertussis zu, man stellt den pH auf 6,8-7 ein, man gibt das Medium 199 Hanks und die drei Typen von Polioviren zu, man stellt, wenn notwendig, den pH auf 6,8 ein, dann gibt man nacheinander HBs und das inaktivierte Hepatitis A-Virus zu.

Claims

Ein Auffrischimpfstoff, umfassend: – weniger als 1,2 mg pro ml Aluminiumsalz, ausgedrückt in Bezug auf das Al³⁺-Atom, – immunogene Antigene, die wenigstens vom Poliovirus, von Corynebacterium diphtheriae und von Clostridium tetani stammen, und – eine Menge an Diphtherie-Anatoxin, das als immunogenes Antigen von Corynebacterium diphtheriae verwendet wird, zwischen 4-16 Lf pro ml.
Ein Auffrischimpfstoff gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Menge an Diphtherie-Anatoxin in der Größenordnung von 10 Lf pro ml liegt.
Ein Auffrischimpfstoff gemäß Anspruch 1 oder 2, worin die Menge an Tetanus-Anatoxin in der Größenordnung von 20 Lf pro ml liegt.
Ein Auffrischimpfstoff gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, umfassend außerdem wenigstens ein Antigen, das ausgewählt ist unter den Antigenen von Bordetella pertussis, Hepatitis A und Hepatitis B.
Ein Impfstoff gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4 zum Minimieren der reaktogenen und/oder allergischen Wirkungen, die von diesen Antigenen und/oder den Aluminiumsalzen bei einer Auffrischimpfung ausgelöst werden.
Verwendung eines Impfstoffs gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 für die Herstellung eines Medikaments für den Schutz eines erstgeimpften oder sensibilisierten Menschen gegen wenigstens das Poliovirus, Corynebacterium diphtheriae und Clostridium tetani.
Verwendung gemäß Anspruch 6 für die Herstellung von wenigstens zwei Impfstoffdosen, die dazu bestimmt sind, dem gleichen Erwachsenen in einem Zeitintervall zwischen 10 Tagen bis 3 Monaten getrennt voneinander injiziert zu werden, wobei besagter Impfstoff dazu bestimmt ist, die reaktogenen und/oder allergischen Wirkungen, die von diesen Antigenen ausgelöst werden, zu minimieren.
Pharmazeutisches Kit, enthaltend wenigstens 2 injizierbare Dosen eines Impfstoffs gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5.