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Die Erfindung betrifft ein Produkt
zur Prävention
und Therapie des caninen Parvovirus.
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Das auslösende Moment der Krankheit
ist der canine Parvovirus Typ II (CPV-2), der dafür bekannt
ist, in einem einzelnen antigenen Typ der sich grundsätzlich von
dem nicht-patogenen Typ I Parvovirus (CPV-1) unterscheidet, versteht.
Die Straßeninfektion
von Hunden durch CPV-2 erfolgt fast ausschließlich oral. Infolge der starken
Affinität
des Virus zu sich schnell fortpflanzenden somatischen Zellen konzentriert
sich die Infektion insbesondere auf Epitelzellen des Dünndarms.
Ebenso werden Myocardialzellen von Welpen durch den Virus angegriffen.
Die Infektion bewirkt eine Degenerierung und Abschuppung der Enterozythen
und eine Exposition des Stroma des Intestinaltraktes, was zu einer
bedenklichen Verminderung der Absorptionskapazität der Dünndarmschleimhaut führt, über Biose,
Transport von Gewebsflüssigkeit
in den Dünndarmlumen,
Dysbalance der Mikroflora des Dünndarms,
und in einigen Fällen
zu bakterieller Blutvergiftung, die durch fakultative enteropathogene
Keime (Escherichia coli, Klebsiella spp. Pseudomonas spp. und andere
Spezies und Gattungen). Das klinische Muster des caninen Parvovirus
wird durch bösartiges
Erbrechen, schwere zur Dehydrierung führende Diarrhoea und plötzlichen
Welpentod, wenn das Myocardium betroffen ist, charakterisiert.
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Neben der oralen Verabreichung spezifischer
Antikörper
ist keine ursächliche
Therapie des caninen Parvovirus bekannt. Daher konzentriert sich
die Behandlung infizierter Hunde auf eine Linderung der klinischen
Symptome, die Unterstützung
der Verteidigungsmechanismen des Patienten und die Hemmung der Entwicklung
sekundärer
bakterieller Infektionen. Die spezifische Prophylaxe des caninen
Parvovirus basiert auf der Immunisierung mit lebend- oder inaktiven
Impfstoffen. Die Behandlung einer Magen-/Darmkrankheit mittels Antikörpern, die
mit einem proteolytischen Enzym vorbehandelt wurden oder die in
Gegenwart eines proteolytischen Enzyms verabreicht werden, optional
in Verbindung mit einem oder mehreren probiotischen Organismen ist
in der WO 94/21284 offenbart. Die
JP
08259462 offenbart eine Zusammensetzung, die aus Eidotter
gewonnene Antikörper
eines Huhns, das mit dem Parvovirus des Hundes immunisiert ist.
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Es ist allgemein bekannt, dass die
derzeitigen therapeutischen und immunoprophylaktischen Verfahren
für canine
Parvoviren unzureichend sind. Die Argumente sind weiter unten zusammengefasst.
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Der Parvovirus ist sehr resistent
gegen physikalische Faktoren und chemische Verbindungen und überlebt
in der Umwelt in vollständig
aktivem Status lange Zeit. Die einzige Infektionsquelle stellen
infizierte Hunde dar, die den Parvovirus mit dem Kot in die Umwelt
bringen.
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Welpen in der frühen Phase nach der Geburt,
denen es an einem vollständig
funktionstüchtigen
Immunsystem mangelt, sind gegen Infektionen durch das Parvovirus
am stärksten
anfällig.
Ihre Widerstandsfähigkeit
gegenüber
Infektionen hängt
von während
der embryonalen Phase erworbenen Antikörper (5%) und besonders von
während
der ersten drei Tage nach der Geburt absorbierten Antikörpern des
Kolostrums (95%) ab. Mit anderen Worten hängt die Widerstandsfähigkeit
der Welpen gegenüber
Infektionen durch das Parvovirus von zwei sehr variablen Faktoren
ab, z. B. dem Grad der Mutterimmunität (Konzentration der Antikörper zum
Parvovirus im Kolostrum) und dem während der ersten Tage nach
der Geburt aufgenommenen Menge an Kolostrum.
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Die Impfung der erwachsenen Hunde
verleiht keine lebenslange Immunität gegenüber einer Infektion durch den
Parvovirus. Die Immunität
erreicht ihr Maximum am 28. bis 35. Tag nach der Impfung und nimmt danach
ab. Es ist daher erforderlich, die Hunde wenigstens einmal pro Jahr
zu impfen.
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Die Impfung der Welpen erschwert
sich durch das so genannte „Immun-Fenster", z. B. eine Phase
von zwei oder vier Wochen, in denen der Grad der Antikörper des
Kolostrums unter die Schutzschwelle sinkt, aber ist noch hoch genug,
um den Antigeneffekt des Impfstoffs zu neutralisieren. Während dieser
Phase sind die Welpen gegenüber
der Infektion anfällig,
können
aber nicht wirkungsvoll immunisiert werden. Der Beqinn des Immun-Fensters
ist individuell verschieden. Im Allgemeinen deckt es die Phase von
der 6. bis 12. Woche nach der Geburt. Einige Autoren sind der Meinung,
dass sich die Phase bis zur 16. Woche erstreckt. Dies ist offenbar der
Grund, warum die meisten Impfungsprogramme empfehlen, die Impfung
in einem Alter von 6 Wochen zu beginnen und in zweiwöchigen Intervallen
bis zum Alter von 12 bis 16 Wochen zu wiederholen.
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Die Wirksamkeit spezifischer Prophylaxen
gegen canine Parvoviren, wie z. B. Impfung oder orale Verabreichung
von Antikörpern
ist signifikant schwächer,
weil das Eindringen zirkulierender Antikörper zu den Enterozythen des
Dünndarms
wie es primären
Infektionsortes eher schwierig ist. Der gleiche Mechanismus beschränkt die
Wirksamkeit von Antikörpern
des Kolostrums, die im Kreislauf absorbiert werden.
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Infolge des weit verbreiteten Auftretens
und des dramatischen Verlaufes wird canine Parvovirose als eine
der gefährlichsten
caninen Krankheiten angesehen, die mit einer hohen Sterblichkeitsrate,
besonders bei Welpen, verbunden ist.
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Die obigen Nachteile können zu
einem beachtlichen Anteil durch die Verabreichung oraler Produkte für die Prävention
und Therapie von canine Parvovirose gemäß der Erfindung, enthaltend
Antikörper
zum caninen Parvovirus als vorrangiger aktiver Komponente, beseitigt
werden. Weitere aktive Komponenten schließen stabili sierte Kulturen
laktacidogenen Bakterien, wie z. B. Enterococcus spp. und/oder Lactobacillus
spp. mit einem schützenden
Effekt und Vitamine mit einem unterstützenden Effekt ein. Die Homogenität des Produkts
und standardisierte Inhalt der aktiven Komponenten in der Verabreichungsformulierung,
wie z. B. einer Paste oder Puder, wird durch Mischung der aktiven
Komponenten mit geeigneten Trägern
gesichert. Die Wirksamkeit des erfindungsgemäßen Produkts beruht auf der
künstlichen
Einführung
einer lokalen Immunität
der Magen-Darm-Schleimhaut
von Hunden, insbesondere Welpen, gegenüber Infektionen durch das Parvovirus und
in der Unterstützung
der allgemeinen Abwehrmechanismen der behandelten Tiere. Die vorrangig
aktive Komponente des oralen Produkts sind stabilisierte spezifische
Antikörper
zum Parvovirus, die das canine Parvovirus im Dünndarm neutralisieren, die
erste Phase der Infektion, die auf der Adhäsion und dem Eindringen der
Viriolen in die Epithelzellen des Dünndarms beruht, hemmen und
damit die Infektion hemmen oder deren Schwere mildern. Die Antikörper zum
caninen Parvovirus werden aus unkonventionellen Quellen erhalten,
einschließlich
Kolostrum von Kühen
oder Eier von Legehennen die mit dem caninen Parvovirus-Antigen
immunisiert wurden. Die Behandlung der Ausgangsstoffe, wie z. B.
Kolostrum von Kühen
oder vorzugsweise Eidotter, beruht allein auf der sorgfältigen Konservierung
durch Sprüh-
oder Flüssigtrocknung
oder vorzugsweise durch Gefriertrocknung. Das resultierende Produkt
ist ein weißes
oder gelbes Pulver mit einer Ernährungszusammensetzung,
die mit der von für
die Ernährung
von Hunden gewöhnlich
verwendeten Futtermittel identisch ist. Der Grad der Antikörper zum
caninen Parvovirus im getrockneten Kolostrum oder Eidotter muss
mindestens einen Neutralisationstiter von 16 für 100 TCID50 (50%
Gewebskultur Infektionsdosis) pro 0,05 mg getrockneter Substanz
erreichen. Die biologische Aktivität der Antikörper zum Parvovirus kann durch
deren Kombination mit einer probiotischen Komponente erhöht werden,
wodurch die Wiederherstellung der Eubiose der durch die Infektion
durch den Parvovirus beeinträchtigte
mikrobielle Biozenose des Dünndarms
gewährleistet
wird. Stabilisierte Lebendkulturen der laktazidogenen Gattung Enterococcus
spp. und/oder Lactobacillus können
die Fortpflanzung fakultativer patogener Bakterien im Dünndarm hemmen
und die Gefahr einer bakteriellen Blutvergiftung vermeiden oder
auf ein Minimum reduzieren. Die probiotische Komponente wird aus
untergeordnet pulsierenden Kulturen ausgewählter laktazidogener Bakterienarten
hergestellt. Nach der Trennung von Medium werden die Kulturen durch
Gefriertrocknung stabilisiert. Die Konzentration der lebenden Bakterien
sollte wenigstens 50 × 109 CFU (Kolonie bildenden Einheiten) pro 1
g des probiotischen Konzentrats erreichen. Um die allgemeine Widerstandsfähigkeit
gegenüber
Infektionen zu steigern, kann das orale Produkt mit einer Vitaminkomponente,
enthaltend die Vitamine A, C, D, E, und Gruppe B entweder in isolierter
Form oder als Ölsuspension
ergänzt
werden. Die minimale tägliche
Dosis für
Hunde sollte 500 I. E. Vitamin A, 35 I. E. Vitamin D3,
7 mg Vitamin E, 1,2 mg Vitamin C, 2 mg Niacin und 0,01 mg Biotin
betragen. Das Produkt ist hauptsächlich
für die
orale Behandlung von Welpen unterschiedlichen Alters gedacht, die
die höchste
Gefahr einer Infektion durch das Parvovirus darstellen. Daher wurden
die folgenden zwei Formulierungen gewählt. Die Formulierung als Paste,
verpackt in Kunststoff-Applikatoren,
ist für
neugeborene und saugende Welpen sowie Welpen während der Milchernährungsphase
geeignet. Auf der anderen Seite erlauben isolierte Formulierungen
(Pulver oder Vormischung) eine einfache Mi schung des Produkts mit
jeder Futterart, die für
gestillte Welpen und Hunde jeden Alters vorgesehen sind, wie z.
B. Fleischhomogenate, Dosenfleisch und granulierte oder extrudierte Futtermittel.
Während
die Formulierung als Paste eine sichere und genaue ovale Dosierung
auf der Zungenwurzel ohne jegliche Gefahr des Ausspuckens oder der
ungewünschten
gefährlichen
Aspiration erlaubt, ist die Formulierung als Pulver für die Mischung
in Futtermittel für ältere und/oder
gestillte Welpen und erwachsene Hunde aller Altersgruppen geeignet.
Die vorrangigen Komponenten des Trägers der Formulierung als Paste schließen kolloidale
Silikonhydrate und destillierte Monoglyceride ein, die zusammen
mit einem qualitativ hochwertigen essbaren Öl eine konsistente Paste mit
einer molekularen Korngröße bilden,
die eine homogene Mischung einer aktiven Komponenten und Trägerkomponenten
sichert. Ungewünschte
mikrobielle Verunreinigung des Produkts müssen während allen Phasen der Herstellung
der Posten vermieden werden, einschließlich der Abfüllung in
Kunststoff-Applikatoren. Bei der letztlichen Abstimmung der Pulverformulierung
werden energiereiche Träger,
z. B. Glukose, Laktose, Sorbitol sowie Stärke zusammen mit getrockneter
entrahmter Milch oder getrockneter Molke verwendet. Die Pulverformulierung
(Pulvis, Vormischung) kann in Futtermittel gemischt werden, die
für Welpen
vor dem Stillen angeboten werden. Für Hunde kann das Produkt allen
Arten von Futtermitteln wie granulierten oder extrudierten Futtermitteln
und feuchten Fleischmischungen zugesetzt werden.
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Der hauptsächliche Verdienst des erfindungsgemäßen Produkts
besteht in der Möglichkeit
die Nachteile der derzeit verwendeten präventiven und therapeutischen
Verfahren zu beseitigen. Weitere Verdienste sind im folgenden genannt.
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Das Produkt wird aus biologischen
Ausgangsstoffen, die Bestandteil konventioneller Futtermittel für Hunde
sind, hergestellt. Es ist absolut nicht toxisch, wodurch keine Gefahr
der Überdosierung
besteht, sogar bei Verabreichung durch Laien, kann Welpen und erwachsenen
Hunden jeden Alters sicher verabreicht werden, kann sowohl zur Behandlung
fortgeschrittener Stadien einer Infektion durch das Parvovirus als
auch zur Vermeidung von Infektionen in Tieren, die einer erhöhten Infektionsgefahr
ausgesetzt sind, z. B. solche, die in Hundeschauen, Wettbewerben,
Leistungstests teilnehmen oder in Hundeheimen untergebracht sind,
verwendet werden. Die Verabreichung kann die Widerstandsfähigkeit
der Welpen gegen eine Infektion durch das Parvovirus nicht nur während der
Saugphase und dem Stillen, sondern auch vor jedem Übergang
in eine andere Hundegruppe oder vor jedem Wechsel der Umgebung verbessern.
Das erfindungsgemäße Produkt
kann ebenso verabreicht werden, um die Widerstandsfähigkeit
von Welpen während
der Phase des „Immun-Fensters" zwischen dem Alter
von 6 bis 12 Wochen verbessern. Die lokal verabreichten Antikörper beeinflussen
die Wirkung der elterlichen Impfung nicht und verändern nicht
die Immunität
zu canine Parvovirose nach der Impfung. Die Formulierung des Produkts,
wie z. B. eine Paste oder ein Pulver erlauben die optimale Möglichkeit der
Verabreichung bei allen Altersgruppen von Hunden, wobei die Gefahr
der Aspiration in neugeborenen und saugenden Welpen vermieden wird.
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Beispiele erfindungsgemäßer Ausführungsformen
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Das Produkt zur oralen Prävention
und Therapie von canine Parvovirose wird durch Verarbeitung der ele mentaren
aktiven Komponenten, Träger
und Vitaminergänzungen
hergestellt, um jede der beiden grundlegenden Verabreichungsformulierungen
zu erhalten. Während
die Paste für
saugende Welpen während
der ersten Phase nach der Geburt vorgesehen ist, ist die Formulierung
als Pulver für
die Mischung in Futtermittel für ältere Welpen
und erwachsene Hunde gedacht. Die elementaren aktiven Komponenten
des erfindungsgemäßen Produkts
sind in beiden Formulierungen gleich.
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Das canine Parvovirus (wie z. B.
die Familie CAPMV464, Sammlung tierischer pathogenen Mikroorganismen,
Hudcova 70, Brno), die in empfänglichen
Zellkulturen, wie z. B. die Zelllinie CRFK, A-72) fortgepflanzt
wurden um einen Haemaggutinationstiter (HAT) von 512 bis 1024 zu
erreichen, wird als Immunisierungs-Antigen verwendet, um Antikörper zum
Parvovirus zu erhalten. Schließlich
wird das Antigen 10- oder 20fach durch Ultrazentrifugation auf konzentriert.
Schwangere Kühe
oder Legehennen, die intramuskulär
mit 0,2 bis 1,0 ml des Virus-Antigen, vorgemischt mit dem gleichen
Volumen eines Öl-Adjuvantes,
werden als Antikörper-Spender
eingesetzt. Die Kühe
werden vor der erwarteten Parturierung zweifach immunisiert, die
Legehennen werden in 21tägigen
Intervallen dreifach und nachfolgend, falls erforderlich, gewöhnlich innerhalb von
dreiwöchigen
oder vierwöchigen
Intervallen immunisiert.
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Die Antikörperpegel zum Parvovirus werden
durch Haemagglutinationshemmung oder Virusneutralisierungstests überprüft. Der
Antikörpertiter
wird in den reziproken Werten des Blutserums, Kolostrums oder Eisuspensionsverdünnungen,
die acht Agglutinations-Einheiten
hemmen oder das Infektionspotential von TCID50 des
caninen Parvovirus neutralisieren ausge drückt.
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Die Konzentration von 16/100 TCID50 der Antikörper zum caninen Parvovirus
pro 1 g Produkt ist notwendig um den erwarteten Effekt zu erzielen.
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Kolostrum von Kühen oder Eidotter der immunisierten
Spender muss vor der weiteren Verarbeitung gründlich homogenisiert werden.
Das homogenisierte Kolostrum oder Ei-Homogenat wird schließlich durch Sprüh- oder
Flüssigtrocknunq
oder vorzugsweise durch Gefriertrocknung konserviert. Das resultierende
gelblichweiße
Pulver wird an einem trockenen und kalten Ort für die nachfolgende Verarbeitung
aufbewahrt.
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Das probiotische Konzentrat wird
aus untergeordneten pulsierenden Kulturen der ausgewählten Familien
der laktacidogenen Bakterienspezies Enterococcus faecium M74 (CCM
6226) oder Lactobacillus casei (CCM 3775) hergestellt, um nach der
Trennung des Mediums und Stabilisierung der kondensierten Biomasse durch
Gefriertrocknung ein trockenes bakterielles Konzentrat mit einem
Gehalt von wenigstens 50 × 109 Lebendzellen pro 1 g (CFU 50 : 109 pro 1 g) zu erhalten. Die probiotischen
Konzentrate werden in einem Gefrierschrank bei –18°C für die weitere Verarbeitung
aufbewahrt.
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Beispiel 1
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Eine der letztlichen Verabreichungsformulierungen
des erfindungsgemäßen Produktes
kann eine Paste sein, die durch Mischung der aktiven Komponenten
in die Trägerstoffe
hergestellt wird, womit die Homogenität und damit der standardisierte
Gehalt des vorherigen gesichert wird. Einzelne aktive Komponenten
des erfindungsgemäßen Produktes,
einschließlich
spezifischer Antikörper
zum caninen Parvovirus in der Form von Kolostrum oder Eidotter,
das von immunisierten Spendertieren gesammelt wurde, das probiotische
Konzentrat enthaltend stabilisierte lactacidogene Lebendbakterien
und Vitaminergänzungen,
werden schrittweise mit dem Träger
in einem speziellen Mischer unter Vakuum gemischt.
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Tabelle
1: Grundlegende Zusammensetzung der Formulierung als Paste des Produkts
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Nach gründlicher Homogenisierung wird
das erfindungsgemäße Produkt
in Kunststoff-Applikatoren mit einem Volumen zwischen 15 und 30
ml gefüllt.
Die gewöhnliche
Dosierung bewegt sich in einem Bereich zwischen 0,25 und 2 ml pro
Tier pro Tag.
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Beispiel 2
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Die letztliche Abstimmung der Formulierung
des isolierten Pulvers (Pulvis/Vormischung) des erfindungsgemäßen Produktes
wird in standardisierten Mischern mit sich horizontal und vertikal
bewegenden Mischblättern
durchgeführt,
um die höchstmögliche Homogenität des Produktes
zu erreichen. Zu diesem Zweck werden die aktiven Komponenten zuerst
gründlich
mit einer kleineren Menge des Trägers
vorgemischt und erst dann wird der Mischer mit dem vollständigen Volumen
aufgefüllt.
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Tabelle
2: Grundlegende Zusammensetzung der Formulierung des Pulvers (Pulvis/Vormischung)
des Produkts
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Nach sorgfältiger Homogenisierung wird
das erfindungsgemäße Produkt
in Packungen gefüllt,
die 100 bis 250 g enthalten. Das Produkt wird Futtermitteln für Welpen
und Hunde zugesetzt. Die tägliche
Dosis, die vom Alter, Rasse und Körpergewicht des Tieres abhängt, beträgt 3 bis
20 gr.
