DE69731540T2

DE69731540T2 - Behandlung von diarrhoe

Info

Publication number: DE69731540T2
Application number: DE69731540T
Authority: DE
Inventors: A. Ivan CASAS; Bo Mollstam
Original assignee: Biogaia AB
Current assignee: Biogaia AB
Priority date: 1996-06-05
Filing date: 1997-06-03
Publication date: 2005-10-27
Anticipated expiration: 2017-06-04
Also published as: EP0923293A1; EP0923293B1; CA2257077A1; ATE281840T1; WO1997046104A1; US5837238A; PL189998B1; JP2010265303A; CA2257077C; BR9710689A; JP4861500B2; JP2000512634A; PT923293E; ES2232869T3; AU734194B2; EP0923293A4; DE69731540D1; PL330324A1; AU3154897A

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Gebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft die therapeutische Behandlung infektiöser Gastroenteritis.
Beschreibung des Standes der Technik
Eine normale Mikroflora ist wichtig für den Schutz des Wirts gegen Krankheiten des Gastrointestinaltrakts (GI-Trakt) (Fuller, R., Gut 1991; 32: 439–42; Salminen, S. et al., Dig Dis Sci 1992; 10: 227–38). Während der Dauer akuter Diarrhöe ändert sich die normale gastrointestinale Mikroflora radikal. Diese Änderungen beinhalten eine Abnahme der Zahl von Lactobacilli, Bacteroides und Bifidobacteria (Salminen S. et al., Dig Dis Sci 1992; 10: 227–38; Tazume S. et al., Clin Infect Dis 1993; 16(2 suppl): 77–825; Mitsuoka T., in Wood BJB, London: Elsevier Applied Science 1992, 1: 69–114; Salminen S. et al., Chemotherapy, in Druck).
Lactobacillus reuteri ist die am häufigsten vorkommende Lactobacillus-Spezies, die im GI-Trakt von Menschen und Tieren gefunden wird (Kandler O. et al., Zbl Bakt Abt Orig 1980; C1: 264–9). Wie andere Lactobacilli produziert L. reuteri saure Stoffwechselendprodukte (Milch- und Essigsäuren), die eine beträchtliche antimikrobielle Aktivität aufweisen (Axelson L. T. et al., Microb Ecology Health Dis 1989; 2: 131–6).
Verschiedene Untersuchungen haben gezeigt, daß die Verabreichung probiotischer Mittel das mikrobielle Gleichgewicht des Wirts modulieren und akute Diarrhöeperioden abmildern kann (Pearce J. L. et al., J. Pediatr 1974; 84: 261–2; Brunser O. et al., Acta Paediator Scand 1989; 78: 259–64; Boudraa G. et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr 1990; 11: 509–12). Es wurde gezeigt, daß der Stamm Lactobacillus casei GG (LcGG) die klinische Heilung einer Rotavirus-Gastroenteritis bei Kindern fördert und intestinale Immunantworten verbessert (Isolauri E. et al., Pediatrics 1991; 88: 90–7; Kaila et al., Int Pediatr Research Foundation, Inc. 1992; 32: 141–4; Majamaa H. et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr 1995; 20: 333–8). Andere im Handel erhältliche Präparate von Milchsäurebakterien, wie L. casei subsp. rhamnosus (Lactophilus), L. delbrückii subsp. bulgaricus und andere, werden ebenfalls zur Behandlung akuter Diarrhöe eingesetzt, wenngleich ihre Wirksamkeit formal nicht demonstriert wurde (Majamaa H. et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr 1995; 20: 333–8). Es wurde gezeigt, daß L. reuteri bei exogener Verabreichung an gesunde Menschen sicher ist (Wolf B. W. et al., Micro Ecology Health Dis 1995; 8: 41–50), und im Colitismodell der Ratte zeigte er therapeutisches Potential (Fabia R. et al., Scand J Gastroenterol 1993; 28: 155–62).
Von L. reuteri ist bekannt, daß er ein Breitband-Antimikrobiotikum produziert, Reuterin genannt (Axelson L. T. et al., Microb Ecology Health Dis 1989; 2: 131–6), das für die Inhibierung pathogener Mikroorganismen im Gastrointestinaltrakt verantwortlich sein könnte.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die Erfindung betrifft die Behandlung von Diarrhöe unter Verwendung ein oder mehrerer Lactobacillus reuteri-Stämme, die aus einem Lebewesen der gleichen Spezies isoliert wurde, wie dem Lebewesen, an dem die Therapie durchgeführt wird. Vorzugsweise werden, abhängig von der Schwere der Gastroenteritis, über eine Dauer von wenigstens einem Tag wenigstens etwa 10⁷ L. reuteri-Zellen verabreicht. Das Ergebnis ist eine rasche, dramatische Abnahme von Diarrhöe und Erbrechen des Lebewesens, die bei anderen früheren Therapien nicht beobachtet wurde.
Eine Aufgabe der Erfindung ist es, eine Behandlung von akuter Diarrhöe bereitzustellen, die die Dehydration junger Patienten wirksamer und schneller unterbindet als frühere Verfahren.
Andere Aspekte, Merkmale und Aufgaben der Erfindung ergeben sich deutlicher aus der folgenden Offenbarung und den anhängenden Ansprüchen.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
1 zeigt graphisch die Häufigkeit von wäßrigem Stuhl während einer Periode von 24 Stunden bei Patienten, die L. reuteri oder ein Placebo erhielten, dargestellt als absolute Zahl von diarrhoischen Stühlen (1a) und als prozentuale Abnahme im Vergleich zum Aufnahmewert (1b). Die gefüllten Quadrate zeigen die Behandlung mit L. reuteri an und die offenen Quadrate zeigen das Placebo.
2 zeigt die Häufigkeit des Erbrechens während einer Periode von 24 Stunden bei Patienten, die L. reuteri oder ein Placebo erhielten, dargestellt als absolute Zahl der Episoden von Erbrechen (2a) und als prozentuale Abnahme vom Aufnahmewert (2b). Die gefüllten Quadrate zeigen die Behandlung mit L. reuteri und die offenen Quadrate zeigen das Placebo.
3 zeigt den gesamten fäkalen Lactobacillus bei Kindern, denen das Placebo gegeben wurde (zweiter Balken von jedem Balkenpaar) und denen L. reuteri gegeben wurde (erster Balken von jedem Balkenpaar).
4 zeigt die Keimzahl an fäkalem L. reuteri bei Kindern, denen das Placebo gegeben wurde (zweiter Balken von jedem Balkenpaar) und denen L. reuteri gegeben wurde (erster Balken von jedem Balkenpaar).
5 zeigt L. reuteri als Prozentsatz der gesamten fäkalen Lactobacilluspopulation bei Kindern, denen das Placebo gegeben wurde (zweiter Balken von jedem Balkenpaar) und denen L. reuteri gegeben wurde (erster Balken von jedem Balkenpaar).
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG UND BEVORZUGTE AUSFÜHRUNGSFORMEN
Die Erfindung betrifft eine Therapie für einen Säuger mit Diarrhöe, umfassend die Feststellung, daß der Säuger Diarrhöe hat oder imminent anfällig für Diarrhöe ist; Auswählen eines Lactobacillus reuteri-Stamms; Herstellen wenigstens eines Aliquots von Zellen des Stamms, das etwa 10⁷ bis 10¹⁰ vorzugsweise wenigstens etwa 10⁸ Zellen enthält, zur Verabreichung an den Säuger; und orales Verabreichen des wenigstens einen Aliquots an den Säuger sobald wie möglich nach Diagnose der Diarrhöe. Die Aliquote können lyophilisierte Zellen sein, die zur Verabreichung an den Säuger in einer Flüssigkeit suspendiert sind. Bei der Flüssigkeit kann es sich um Wasser, Fruchtsäfte, Milchprodukte wie Milch oder Joghurt, und dergleichen handeln, die für den Säuger nicht schädlich sind. Die lyophylisierten Zellen können wie bekannt in eine feuchtigkeitsundurchlässigen Verpackung, wie einer Folienverpackung, oder in eine Gelatinekapsel verpackt sein. Alternativ zur flüssigen Verabreichung an den Säuger können die lyophilisierten Zellen zur Verabreichung an den Säuger in eine Gelatine-kapsel gefüllt werden. Vorzugsweise handelt es sich bei dem Lactobacillus reuteri-Stamm um einen Stamm, der aus der gleichen Säugerart isoliert wurde, an dem die Therapie durchgeführt wird. Die Erfindung umfaßt ferner ein therapeutisches Präparat zur Verringerung von Diarrhöesymptomen, das wenigstens etwa 10⁷ lebensfähige Zellen eines L. reuteri-Stamms in einem Aliquot zur Verabreichung an den Säuger umfaßt.
Die vorliegende Erfindung stellt eine Behandlung von akuter Diarrhöe bei Menschen bereit, die die Verabreichung von Lactobacillus reuteri umfaßt. Vorzugsweise erstrecken sich Behandlungen über einen Zeitraum von wenigstens ein bis sieben Tagen und werden vorzugsweise sobald wie möglich nach Diagnose der Diarrhöe mit einer täglich verabreichten Menge von 10⁷ bis 10¹⁰ Zellen begonnen. Je früher die Behandlung beginnt, desto schneller kann die Therapie mit der Verabreichung von L. reuteri-Zellen die Diarrhöe beseitigen.
Zusammenfassend wurden bei der hier beschriebenen Hauptstudie zur Bestimmung der Wirkung eines humanen Lactobacillus-Stamms (Lactobacillus reuteri-Stamm SD 2112) auf die Heilung einer akuten Diarrhöe (75% Rotavirus) 40 Patienten im Alter zwischen 6 und 36 Monaten untersucht. Dieser L. reuteri-Stamm wurde bei der American Type Culture Collection als ATCC Nr. 55730 gemäß dem Budapester Vertrag am 7. Dezember 1995 hinterlegt und wurde ursprünglich aus humaner Brustmilch isoliert.
Nach elterlicher Zustimmung wurden die Patienten auf eine von zwei Gruppen randomisiert und erhielten für die Dauer des Krankenhausaufenthalts oder bis zu 5 Tagen entweder täglich 10¹⁰ bis 10¹¹ CFU von L. reuteri SD 2112 oder ein entsprechendes Placebo. Die Behandlungen erfolgten in 50 bis 100 ml Flüssigkeit. Die mittlere (SD) Dauer der wäßrigen Diarrhöe nach Beginn der Therapie betrug 1,7 [1,6] Tage bei der L. reuteri-Gruppe und 2,9 [2,3] Tage bei der Placebogruppe (p = 0,07). Am zweiten Tag der Behandlung hatten nur 26% der Patienten, die L. reuteri erhielten, wäßrige Diarrhöe, im Vergleich mit 81 von denen, die das Placebo erhielten (p = 0,0005). Lactobacillus-Kulturen aus Stuhlproben zeigten, daß die Verabreichung von L. reuteri für mehr als 75% der gesamten Lactobazillen verantwortlich war, die bei Kindern gefunden wurden, denen dieses Produkt gegeben wurde. Daraus ist zu schließen, daß L. reuteri als Therapeutikum bei akuter Diarrhöe bei Kindern wirksam ist.
Klinische Ergebnisse, die durch Fäkalanalysen gestützt werden, zeigen, daß die Ansiedelung von L. reuteri im GI-Trakt zu einer Verkürzung und Besserung akuter Diarrhöe, hauptsächlich mit Rotavirus-Ätiologie, führte. Die vorteilhafte Wirkung einer Therapie mit L. reuteri wurde innerhalb von 24 Stunden nach Beginn der Behandlung beobachtet, wonach bei den meisten Patienten eine Abnahme der wäßrigen Diarrhöe zu sehen war. Die Beobachtung, daß 74% der behandelten Patienten und nur 19% der Placebopatienten am zweiten Tag der Therapie frei von Diarrhöe waren, ist klinisch eindeutig signifikant. Dieses Ergebnis ist im Vergleich mit der früheren Erfahrung mit Lactobacillus GG vorteilhaft (Isolauri E. et al., Pediatrics 1991; 88: 90–7; Majamaa H. et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr 1995; 20: 333–8), der sich wiederum bei der Behandlung von akuter Diarrhöe klinisch wirksamer als eine Kombination von Streptococcus thermophilous und L. delbrückii subsp. Bulgaricus (Yalacta) und L. casei subsp. Rhamnosus (Lactophilus) erwies. Die vorliegenden Ergebnisse lassen sich durch eine frühere Verabreichung von L. reuteri noch weiter verbessern. Bei der hier beschriebenen Hauptstudie wurde die Therapie mit L. reuteri in einem relativ späten Stadium der Diarrhöe bei Patienten begonnen, bei denen eine Einweisung ins Krankenhaus erforderlich war, und auch erst nach Rehydration und Einholen der elterlichen Zustimmung. In vielen Fällen war die Verzögerung beträchtlich.
Die klinischen Resultate wurden durch die bakteriologischen Ergebnisse bestätigt, die bei den Placeboempfängern eine geringe Gesamtzahl von Lactobazillen und praktisch keinen L. reuteri und in der Behandlungsgruppe eine hohe Gesamtzahl von Lactobazillen und Ansiedelung von L. reuteri zeigten. Die Daten für die Ansiedelung lassen vermuten, daß die Anwesenheit von L. reuteri im GI-Trakt die Ökologie des Darms verbessern könnte, indem sie das Wachstum anderer vorteilhafter Mikroorganismen erleichtert (Fuller R., Gut 1991; 32: 439–42).
Die Merkmale und Vorteile der vorliegenden Erfindung sind mit Blick auf die folgenden Beispiele besser verständlich.
BEISPIELE Untersuchte Patienten
Die Studie wurde zwischen dem 29. Januar und dem 2. Juli 1995 durchgeführt, entsprechend der Jahreszeit einer Rotavirusepidemie. Das Studienprotokoll war vom Ethical Review Committee des Tampere University Hospitals, Tampere, Finnland, gebilligt. Es handelte sich um, eine randomisierte Doppelblindstudie. Die Untersuchungspatienten umfaßten 41 gut genährte Patienten (61% männlich) im Alter zwischen 6 und 36 Monaten, die nacheinander wegen akuter Diarrhöe mit einer Dauer von weniger als 7 Tagen und mit mehr als einem wäßrigen Stuhl während der vorangegangenen 24 Stunden in die kinderklinischen Abteilung des Tampere University Hospitals eingewiesen worden waren. Die Kinder wurden auf Basis der folgenden Aufnahme- und Ausschlußkriterien in die Studie aufgenommen oder davon ausgeschlossen. Patienten waren für die Studie auswählbar, wenn sie 6 bis 36 Monate alt waren, wegen akuter Diarrhöe eingewiesen worden waren, in ihrer Anamnese die Aufnahme boviner Milchprodukte (Milch, Joghurt, Babynahrung usw.) als Teil ihrer normalen Ernährung aufwiesen und einen Elternteil oder einen gesetzlichen Vormund besaßen, der eine Zustimmungserklärung unterzeichnete. Patienten wurden von der Studie ausgeschlossen, wenn sie eine immunsuppressive Therapie durchmachten oder an Immundefizienz litten, in der Anamnese eine Allergie gegen Kuhmilch aufwiesen, eine schwere zugrundeliegende Krankheit hatten, während des vorigen Monats ein Prüfarzneimittel genommen hatten, oder einen Elternteil oder einen gesetzlichen Vormund hatten, der die Zustimmungserklärung nicht unterzeichnen wollte.
Es wurde ein Randomisierungsschema erstellt, um jeder Behandlungsgruppe (L. reuteri und Placebo) etwa 50% der in die Studie aufgenommenen Patienten zuzuordnen. Den Patienten wurden entsprechend ihrer Aufnahme in die Untersuchung nacheinander Randomisierungsnummern zugeteilt.
Datenaufnahme vor der Untersuchung
Zum Zeitpunkt der Aufnahme wurden die Kinder gewogen, klinisch untersucht, und es wurde die Schwere der Dehydration bestimmt. Der akute Gewichtsverlust wurde als Differenz zwischen dem erwarteten Gewicht (entsprechend den individuellen Wachstumskurven) und dem beobachteten Gewicht berechnet. Dann wurde das Flüssigkeitsdefizit (Prozent Dehydration) aus den klinischen Dehydrationssymptomen und aus dem akuten Gewichtsverlust mit einer Abnahme von 0,5 bis 1% pro Tag Diarrhöe definiert, der wenigstens 3 Tage lang andauerte und den Gewichtsverlust aufgrund niedriger Kalorienaufnahme widerspiegelte. Serumspiegel von Natrium und Kalium sowie das Säure-Base-Gleichgewicht im Blut wurden aus einer bei der Aufnahme entnommenen Blutprobe bestimmt.
Behandlung
Nach Krankenhausaufnahme wurden die Patienten entsprechend einem Standardbehandlungsschema behandelt, zuerst mit oraler Rehydration, der eine rasche Wiederaufnahme der vollen Ernährung folgte (Isolauri E. et al., J Pediar Gastroenterol Nutr 1985; 4: 366–74), aber ohne Medikamente gegen Diarrhöe. Die orale Rehydration erfolgte innerhalb von 6 Stunden mit einer Lösung, die Na⁺ (60 mmol/l) und Glucose (84 mmol/l enthielt und in der doppelten Menge des Flüssigkeitsdefizits und im Minimum von 30 ml/kg gegeben wurde (Rautanen T. et al., Acta Paediatr 1993; 82: 52–4).
Die Patienten wurden gleichermaßen auf eine von zwei Gruppen randomisiert. Gruppe 1 (n = 19) erhielt einmal täglich 10¹⁰ bis 10¹¹ CFU L. reuteri SD 2112. Gruppe 2 (n = 21) erhielt einmal täglich ein passendes Placebo. Das Placebo bestand aus fettfreiem Trockenmilchpulver. L. reuteri- und Placeboformulierungen wurden von BioGaia Biologics, Inc. (Raleigh, North Carolina, USA) hergestellt und vor Transport einer Qualitätskontrolle und einer Qualitätssicherung unterzogen. Jede Ein-Gramm-Dosis (10¹⁰ bis 10¹¹ CFU/g) von L. reuteri war in gefriergetrockneter Form mit fettfreiem Trockenmilchpulver als Träger in steril verschweißten Plastikröhrchen verpackt. Ein Gramm der gefriergetrockneten L. reuteri-Präparate oder des Placebos wurden in 50 bis 100 ml einer Flüssigkeit nach Wahl rekonstituiert. Warme Nahrungsmittel wurden vor dem Vermischen mit den Formulierungen temperiert. Mit der Gabe des zugewie senen Präparats wurde sofort nach Erhalt der Zustimmungserklärung begonnen. Die Patienten erhielten 5 Tage lang oder, falls kürzer, für die Dauer des Krankenhausaufenthalts, L. reuteri oder Placebo.
Die Patienten wurden täglich auf der Station gewogen. Anzahl und Qualität des Stuhls und des Erbrochenen wurden von den diensthabenden Schwestern aufgezeichnet. Die Stühle wurden als wäßrig, lose oder fest beurteilt. Die Dauer der Diarrhöe wurde aus dem letztmaligen Auftreten von wäßrigem Stuhl berechnet. Die Dauer der Diarrhöe wurde in Dezimaltagen berechnet. Die Patienten wurden entsprechend dem klinischen Urteil des behandelnden Arztes entlassen. Sie wurden gebeten, die Forscher zu kontaktieren, falls innerhalb einer "Follow-up"-Periode von 1 Monat wieder Diarrhöe auftreten sollte, zu welchem Zeitpunkt sie sich zur Abnahme einer Blutprobe wieder zeigten.
Aufnahme von Patientendaten
Die Konzentrationen von Natrium und Kalium im Serum und die Säure-Base-Analyse des Bluts wurden im Krankenhauslabor nach Standardverfahren bestimmt.
Rotavirus-Antigen wurde mit einem handelsüblichen Enzymimmunoassay (Dakopatts AS, Dänemark) im Department of Virology, Medical School, University of Tampere, nachgewiesen. Blutproben zur Rotavirus-Serologie wurden am gleichen Tag oder einen Tag nach Aufnahme und vier Wochen später zum Nachweis von Rotavirus-Antikörpern entnommen. Rotavirus-IgA-Antikörper wurden mittels eines ELISA-Verfahrens bestimmt (Isolauri E. et al., Vaccine 1995; 13: 310–2).
Stuhl von jeder Testperson wurde zur Analyse von Lactobazillen insgesamt und von L. reuteri gesammelt. Fäzesproben wurden zu Beginn vor Verabreichung des Prüfprodukts, 48 Stunden nach Verabreichung des Prüfprodukts und bei Entlassung aus dem Krankenhaus gesammelt. Zur mikrobiellen Analyse wurden nicht weniger als 2 g Stuhl genommen. Die Proben wurden homogenisiert und in 0,1%igem Peptonwasser im Endverhältnis 1 : 5 verdünnt. Fünf Aliquote von jeweils 1,6 ml gut vermischter Präparate wurden schockgefroren und bei –70°C aufbewahrt. Verdünnte Stuhlproben wurden zur Bestimmung von gesamten fäkalen Lactobazillen und von L. reuteri zu BioGaia Biologics, Inc., Raleigh, NC USA, geschickt.
Die Aktivitäten der Enzyme Urease, β-Glucuronidase und β-Glucosidase in Fäzes wurden wie früher beschrieben im Labor des Clinical Nutrition Department der University of Kuopio bestimmt (Ling W. H. et al., Ann Nutr Metab 1992; 36: 162–6).
Statistische Verfahren
Die statistische Analyse erfolgte mittels Student's t-Test und Varianzanalyse (Anova), um statistische Unterschiede zwischen den Studiengruppen zu bestimmen. Beim Vergleich wiederholter Messungen wurden der gepaarte t-Test und Anova für wiederholte Messungen angewandt.
Ergebnisse
Einundvierzig Patienten wurden anfänglich in die Studie aufgenommen. Ein Kind aus der Placebogruppe wurde aus der Analyse genommen, weil in den Stuhlproben L. reuteri gefunden wurde. Seine Schwester, die ebenfalls an dem Versuch teilnahm, wurde der L. reuteri-Gruppe zugeordnet. Es war offensichtlich, daß zwischen diesen Kindern eine Kreuzkontamination stattgefunden hatte. Von den verbleibenden 40 Kindern wurden 19 und 21 Patienten für die Behandlungen mit L. reuteri bzw. mit Placebo eingeteilt. Dreißig (75%) Patienten wiesen gemäß Enzymimmunoassay Rotavirus-Antigen in den Stuhlproben auf. Rotavirus wurde in der L. reuteri-Gruppe bei 12 (63%) Patienten und in der Placebogruppe bei 18 (86%) Patienten gefunden.
Die relevanten klinischen Haupteigenschaften der gesamten Studiengruppe (n = 40) sind in Tabelle 1 dargestellt.
Klinische Haupteigenschaften von Kindern, die wegen akuter Diarrhöe ins Krankenhaus eingewiesen und in die Studie aufgenommen wurden
Die mittlere (SD) Dauer der Diarrhöe bis zur Behandlung betrug 3,0 (1,7) Tage. Bei Aufnahme zeigten die meisten Patienten eine leichte Dehydration, im Mittel 3,4 (1,4)%. Das Serumnatrium lag zwischen 130 und 144 mmol/l bei einem Mittelwert von 138 mmol/l. Die Rotavirus-positiven Patienten hatten zu Hause 2,6 (1,5) Tage Diarrhöe im Vergleich mit 3,1 (1,9) Tagen von Rotavirus-negativen Patienten (Unterschied nicht signifikant). Der Grad der Dehydration war bei Rotavirus-positiven Kindern nicht signifikant schwerer als bei Rotavirus-negativen Patienten, sie zeigten jedoch bei Aufnahme mehr metabolische Azidose (Basendefizit 7,8 (4,3) mmol/l) als die Rotavirus-negativen Patienten (mittleres Basendefizit 4,8 (3,8) mmol/l) (p = 0,07).
Die Haupteigenschaften von Patienten, die L. reuteri oder Placebo erhielten, sind in Tabelle 2 dargestellt. Bei der Aufnahme waren die Gruppen vergleichbar, außer daß die Kinder in der L. reuteri-Gruppe dehydrierter waren als in der Placebogruppe. Die Gewichtszunahme nach Rehydration war in beiden Gruppen ähnlich, ebenso die Besserung der metabolischen Azidose.
Tabelle 2 Klinische Haupteigenschaften von Patienten, die L. reuteri oder Placebo erhielten, bei Aufnahme
Das klinische Ergebnis der beiden Behandlungen war hinsichtlich Gewichtszunahme, Besserung der Azidose und Elektrolytspiegel ähnlich (Tabelle 3).
Tabelle 3 Klinisches Ergebnis bei Patienten, die L. reuteri oder Placebo erhielten
Die Dauer wäßriger Diarrhöe war in der L. reuteri-Gruppe kürzer (p = 0,07). Tage 0, 1, 2, 3, 4, 5 und 6 wurden als 24-Stunden-Perioden vor oder nach Verabreichung von L. reuteri oder Placebo berechnet. Die Wirkung von L. reuteri auf die Fortdauer der wäßrigen Diarrhöe ist in Tabelle 4 und den 1a und 1b näher dargestellt.
Tabelle 4 Prozent der Patienten mit wäßriger Diarrhöe
Am zweiten Behandlungstag dauerte die wäßrige Diarrhöe nur bei 26% der L. reuteri-Empfänger an, im Vergleich mit 81% der Placeboempfänger. Am zweiten Tag nahm die Häufigkeit von wäßrigem Stuhl in der L. reuteri-Gruppe ab; die Mittelwerte betrugen 1,0 (SD 2,3) in der L. reuteri-Gruppe und 2,5 (SD 2,3) in der Placebogruppe (p = 0,05) (1a). Am dritten Tag betrug die durchschnittliche Häufigkeit von wäßrigem Stuhl 0,5 (SD 1,9) in der L. reuteri-Gruppe und 1,7 (SD 2,6) in der Placebogruppe (p = 0,12).
Im Vergleich mit den Patienten, die ein Placebo erhielten, zeigten mit Beginn des zweiten Behandlungstags weniger Patienten, die L. reuteri erhielten, Erbrechen (Tabelle 5).
Tabelle 5 Prozent der Patienten mit Erbrechen
Die 2a und 2b veranschaulichen ebenfalls die Ergebnisse für das Erbrechen. Erbrechen hörte in der L. reuteri-Gruppe praktisch nach dem ersten Tag der Therapie auf, während es sich in der Placebogruppe noch bis zum sechsten Tag fortsetzte.
Die Verabreichung von L. reuteri führte zu einer guten Besiedelung des Gastrointestinaltrakts (3–5 und Tabelle 6).
Tabelle 6 Gesamtzahl an Lactobazillen und L. reuteri in Fäkalien bei mit L. reuteri oder Placebo behandelten Patienten
Wie gezeigt wurde nach 48 Stunden Verabreichung von L. reuteri eine Nettozunahme von 10⁷ CFU/g L. reuteri in Fäzes beobachtet. Die Gesamt-Lactobacillus-CFUs zeigten 48 Stunden nach der Initialdosis von L. reuteri ebenfalls eine Zunahme von 10⁵ CFU/g in Fäzes (Tabelle 6). L. reuteri machte mehr als 75 der gesamten in den Stuhlproben nachgewiesenen Lactobazillen aus. Die Gesamtzahl an Lactobazillen war in den Stühlen von mit Placebo behandelten Kindern niedrig und in keiner dieser Stuhlproben wurde L. reuteri nachgewiesen. Während der ganzen Studie lag die Gesamtzahl an fäkalen Lactobazillen von Placebobehandelten Kindern im Bereich von 10¹ bis 10⁵ CFU/g.
Die Aktivität der Bakterienenzyme Urease, β-Glucuronidase (β-GLN) und β-Glucosidase (β-GLS) in Fäzes war in der L. reuteri-Gruppe geringer als in der Placebogruppe (Tabelle 7).
Tabelle 7 Enzymaktivitäten in Fäzes: β-GLN, β-GLS und Urease in der L. reuteri- und der Placebogruppe (mmol × min^–1 × mg Protein^–1)
(Zirkulierende) Rotavirus-Antikörper der IgA-Klasse waren in beiden Studiengruppen ähnlich. Bei Aufnahme war der mittlere Rotavirus-IgA-Antikörperspiegel in der L. reuteri-Gruppe 22,5 (SD 39,8) "Enzyme Immunounits" (EIU) und in der Placebogruppe 7,99 (SD 21,8) EIU (p = 0,163). Vier Wochen später betrug der mittlere Rotavirus-IgA-Antikörperspiegel 74,2 (SD 33,9) und 66,3 (SD 31,9) (p = 0,4705) in der L. reuteri- bzw. in der Placebogruppe, was zeigt, daß die Diarrhöesymptome anders als bei den bei Lactobacillus GG beobachteten Ergebnissen abgenommen hatten, ohne daß eine sichtbare Zunahme im IgA-Spiegel nötig war.
Frühe Verabreichung
Die erfindungsgemäße Verabreichung von L. reuteri erfolgt am besten, sobald Diarrhöesymptome auftreten. Wenn die oben diskutierte erfindungsgemäße Behandlung also am ersten Tag erfolgt, wenn Diarrhöesymptome auftreten, gibt es im Vergleich mit den Kontrollen eine deutliche Abnahme bei wäßriger Diarrhöe und Erbrechen. Dieser Unterschied ist bei einer Rotavirus-Gastroenteritis besonders deutlich.
Niedrige Dosierungsmengen
Den Patienten werden verschiedene L. reuteri-Mengen von 10⁷ bis 10¹⁰ pro Tag verabreicht, wobei die Behandlungen zu einer ähnlichen Abnahme der Diarrhöesymptome führen, die Heilungsgeschwindigkeit aber bei größeren Mengen größer ist.
Form der Behandlung mit L. reuteri
Zusätzlich zur Verwendung einer flüssigen Suspension von L. reuteri, entweder frisch gezüchtet oder in Form lyophilisierter Zellen, die in einer gewählten Flüssigkeit resuspendiert sind, wird Patienten einmal täglich die gleiche Anzahl von L. reuteri-Zellen in einer Gelatinekapsel gegeben. Insbesondere bei Säugern, die schon eine pastenartige Nahrungsmittelergänzung erhalten, kann die L. reuteri-Therapie in der dem Säuger auf wenigstens täglicher Basis gegebenen Paste enthalten sein, wenn Diarrhöesymptome wahrgenommen werden oder wenn der Säuger voraussichtlich anfällig gegen Diarrhöe ist (z. B. bei Entwöhnung). Bei jeder dieser Art Formulierung werden die gleichen Ergebnisse, nämlich weniger Diarrhöesymptome, beobachtet.
Mehrfache tägliche Verabreichung
In Fällen, in denen die Diarrhöesymptome bei Beginn der erfindungsgemäßen Therapie besonders schwer sind, lindert die Verabreichung mehrerer L. reuteri-Aliquote das Problem, daß das Therapeutikum aus dem Körper ausgeschieden wird, bevor es eine Chance auf Wirkung hat. Solche Fälle umfassen schwere Diarrhöe beim Säugling oder Kind.
Behandlung anderer Säuger
Die gleiche Verringerung von Diarrhöesymptomen wird mit der erfindungsgemäßen Therapie bei anderen Säugersystemen beobachtet. So verringert die Verabreichung von etwa 10⁷ bis 10¹⁰ Zellen pro Tag an Ferkel vor und/oder bei Entwöhnung das Auftreten von Rotavirus-induzierter Diarrhöe bei Schweinen.
Bevorzugte Ausführungsform der Erfindung
Vorzugsweise beinhaltet die erfindungsgemäße Behandlung von akuter Diarrhöe, wie einer Diarrhöe als Folge einer Rotavirus-Infektion, eine Behandlung, die die Dehydration bei jungen Patienten sowie bei anderen Säugern wirksam und rasch unterbindet, das Feststellen, daß der Patient Diarrhöe hat oder imminent gegen Diarrhöe anfällig ist; Auswählen eines Lactobacillus reuteri-Stamms; Herstellen wenigstens eines Aliquots lyophilisierter Zellen des Stamms, das etwa 10⁷ bis 10¹⁰ Zellen enthält, zur Verabreichung an den Patienten; und orale Verabreichung des wenigstens einen Aliquots an den Patienten sobald wie möglich nach Diagnose der Diarrhöe, und ganz besonders bevorzugt umfaßt sie ferner einen Schritt, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Suspendieren der lyophilisierten Zellen in Flüssigkeit, Einkapseln der lyophilisierten Zellen in eine Gelatinekapsel, und Einschließen der lyophilisierten Zellen in einem feuchtigkeitsundurchlässigen Behälter zur Aufbewahrung bis zur Verabreichung an den Patienten. Die Zellen können bis zur Verabreichung an den Säuger zur Aufbewahrung in einem feuchtigkeitsundurchlässigen Behälter eingeschlossen sein. Die Zellen können zur Verabreichung an den Säuger in einer Flüssigkeit wie Wasser, Milchprodukten und Fruchtsäften suspendiert werden oder können in eine Gelatinekapsel gegeben werden.
Gewerbliche Anwendbarkeit
Die Erfindung stellt eine Behandlung gegen akute Diarrhöe bereit, die die Dehydration junger Patienten wirksamer und schneller unterbindet als frühere Behandlungen und daher für die Gesundheitssysteme kosten- und zeitsparend ist.

Claims

Verwendung eines Lactobacillus reuteri-Stamms zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung oder einer Nährstoffzusammensetzung zur Unterbindung der Dehydration eines Säugers in Verbindung mit akuter Diarrhöe oder Erbrechen.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Säuger ein Mensch ist.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei der Mensch ein junger Patient ist.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 1–3, wobei der Stamm aus der gleichen Säugerart isoliert wurde wie dem Säuger, an dem die Therapie durchgeführt wird.
Verwendung nach Anspruch 4, wobei der Stamm aus einem Menschen isoliert wurde.
Verwendung nach Anspruch 5, wobei der Stamm aus humaner Brustmilch isoliert wurde.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 1–6, wobei dem Säuger wenigstens ein Aliquot Zellen des Stamms mit etwa 10⁷–10¹⁰ Zellen verabreicht wird.
Verwendung nach Anspruch 5, wobei das wenigstens eine Aliquot lyophilisierte Zellen umfaßt.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die lyophilisierten Zellen vor Verabreichung in einer Flüssigkeit suspendiert werden.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei die Flüssigkeit aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Säften, Milchprodukten und Wasser besteht.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 8–10, ferner umfassend das Einkapseln der lyophilisierten Zellen in einer Gelatinekapsel zur Verabreichung an den Säuger.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 8–11, ferner umfassend das Einschließen der lyophilisierten Zellen in einem feuchtigkeitsundurchlässigen Behälter zur Aufbewahrung bis zur Verabreichung an den Säuger.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 1–12, wobei dem Säuger lebensfähige Zellen verabreicht werden.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 1–13, wobei dem Säuger einmal täglich wenigstens etwa 10⁸ Zellen verabreicht werden, bis der Säuger frei von Diarrhöe ist.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 1–14, wobei die Zusammensetzung wenigstens etwa 10⁷ lebensfähige Zellen umfaßt.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 1–15, wobei die Zusammensetzung oral verabreicht wird.
Verwendung nach irgendeinem der Ansprüche 1–16, wobei die Diarrhöe mit einer Rotavirus-Infektion assoziiert ist.