DE69726007T2

DE69726007T2 - Prodrogs und analoga von camptothecin und deren verwendung als arzneimittel

Info

Publication number: DE69726007T2
Application number: DE69726007T
Authority: DE
Inventors: Dennis Bigg; Olivier Lavergne; Jerry Harnett; Alain Rolland; Anne-Marie Liberatore; Christophe Lanco
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1996-12-20
Filing date: 1997-12-05
Publication date: 2004-06-03
Anticipated expiration: 2017-12-06
Also published as: HUP0001385A2; CN1090634C; CA2275345A1; NZ335938A; PT946566E; CN1241192A; MY122042A; DE69726007D1; BR9713977B1; EP0946566B1; CZ299794B6; BR9713977A; IL129892A0; WO1998028304A1; CA2275345C; DK0946566T3; ES2206760T3; NO324973B1; JP2001506270A; AU5326498A

Description

Camptothecin ist eine natürliche Verbindung, die zum ersten Mal aus den Blättern und aus der Rinde der chinesischen Pflanze camptotheca acuminata isoliert wurde (vergleiche Wall und Mitarbeiter, J. Amer. Chem. Soc. 88: 3888 (1966)). Camptothecin ist eine pentacyclische Verbindung, die aus einem Indolizino[1,2-b]chinolin-Fragment (Ringe A, B, C und D) besteht, das mit einem α-Hydroxylacton mit sechs Kettengliedern (Ring E) verschmolzen ist. Der Kohlenstoff in Position 20, der die α-Hydroxygruppe trägt, ist asymmetrisch und verleiht dem Molekül ein Drehvermögen. Die natürliche Form des Camptothecins besitzt die absolute Konfiguration "S" bei dem Kohlenstoff 20 und entspricht der folgenden Formel:
Camptothecin und seine Analoge besitzen eine antiproliferative Wirkung in mehreren Krebszelllinien, die die Zelllinien von menschlichen Dickdarm-, Lungen- und Brusttumoren umfassen (Suffness, M. und Mitarbeiter: The Alkaloids Chemistry and Pharmacology, Bross, A., ed., Band 25, S. 73 (Academic Press, 1985)). Man schlägt vor, dass die antiproliferative Wirkung von Camptothecin mit seiner hemmenden Wirkung gegenüber der DNA-Topoisomerase I in Zusammenhang steht.
Ferner sind Camptothecin und manche seiner Analoge nicht wasserlöslich, was ihre parenterale Verabreichung schwierig macht. Es wurden wasserlösliche Camptothecin-Derivate hergestellt, bei denen die Ringe A und B versalzbare Substi tuenten tragen (vergleiche beispielsweise US 4 981 968 , US 5 049 668 , EP 540 099 ). Diese Produkte haben jedoch gegenüber den nicht wasserlöslichen Derivaten eine verminderte antitumorale Wirkung ergeben. Ferner wurden andere wasserlösliche Derivate von Camptothecin hergestellt, bei denen die Hydroxylgruppe der Position 20 durch eine Säure verestert ist, die einen versalzbaren Rest trägt, wie z. B. Glycin (vergleiche die Patente US 4 943 579 und PCT WO 96/02546). Diese Derivate werden vom Fachmann mit "Prodrugs" bezeichnet, da sie so, wie sie sind, nicht biologisch aktiv sind, sondern erst nach einem ersten Schritt der Metabolisierung nach Verabreichung bei dem Patienten. Die Prodrug-Formen der α-Hydroxylacton-Analoge von Camptothecin haben eine gute antitumorale Wirkung beim Tier und in der Klinik gezeigt, sind jedoch von schädlichen Nebenwirkungen begleitet, wie z. B. Auftreten von schweren Durchfällen, die das Leben des Patienten gefährden können. Es ist deshalb erforderlich, wasserlösliche Analoge von Camptothecin zu entwickeln, die wirksamer und verträglicher sind.
Ferner wurde aufgezeigt, dass das α-Hydroxylacton eine absolute Notwendigkeit für die Wirkung der Camptothecine in vivo und gleichzeitig in vitro ist (Camptothecins: New Anticancer Agents, Putmesil, M. und Mitarbeiter, ed., S. 27 (CRC Press, 1995); Wall, M. und Mitarbeiter, Cancer Res. 55: 753 (1995); Hertzberg und Mitarbeiter, J. Med. Chem. 32: 715 (1982) und Crow und Mitarbeiter, J. Med. Chem. 35: 4160 (1992)). Die Anmelderin hat jedoch entdeckt, dass die β-Hydroxylactone mit 7 Kettengliedern eine biologische Wirkung besitzen, die mit der der α-Hydroxylactone vergleichbar oder stärker als diese ist (nicht veröffentlichte PCT-Anmeldung FR 96/00980). Die vorliegende Erfindung betrifft neue Derivate dieser Klasse von Analogen des Camptothecins, bei denen ein β-Hydroxylacton mit sieben Kettengliedern das natürliche α-Hydroxylacton von Camptothecin ersetzt. Unter β-Hydroxylacton versteht man ein Lacton, das ein zusätzliches Kohlenstoffatom zwischen dem Kohlenstoff des Carboxyls und dem das Hydroxyl im α-Hydroxylacton tragenden α-Kohlenstoff aufweist.
Zur Erhöhung der Wasserlöslichkeit der Analoge von Camptothecin wurden zwei Lösungen gewählt: die erste besteht darin, dass auf den Ring A des Moleküls ein Oxazin aufgepfropft wird, und das zweite besteht darin, dass Prodrug-Formen geschaffen werden, indem die Hydroxyfunktion des β-Hydroxylactons acetyliert wird.
Aus dieser neuen Klasse von Analogen des Camptothecins sind die Verbindungen gemäß der vorliegenden Verbindung, genauer gesagt, entweder Analoge, die durch Fixierung eines Oxazinrings an den Kohlenstoffen 10 und 11 modifiziert sind, oder Prodrug-Formen, bei denen ein β-Hydroxylacton das natürliche α-Hydroxylacton des Camptothecins ersetzt. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind also β-Hydroxylacton-Analoge des Camptothecins, an denen ein Oxazinring aufgepfropft wurde, oder wasserlösliche Prodrugs und besitzen eine starke biologische Aktivität, die hinsichtlich des Stands der Technik unerwartet ist.
Gegenstand der Erfindung sind insbesondere Verbindungen der Formel (I)
in racemischer Form, Enantiomerform oder allen Kombinationen dieser Formen, in der
R₁ eine Ethylgruppe darstellt;
R₂ H oder Halogen darstellt;
R₃ H, Niederalkyl, Halogen oder OR₆ darstellt, worin R₆ H, Niederalkyl oder Arylniederalkyl darstellt;
R₄ H oder – (CH₂)_mNR₆R₇ darstellt, worin R₆ und R, unabhängig voneinander H oder Niederalkyl darstellen;
R₅ H, Niederalkyl oder – (CH₂)_n[N ≈ X] , substituiert oder nicht substituiert, darstellt und [N ≈ X] eine Piperidyl-, Morpholinyl-, Piperazinyl- oder Indolyl-Gruppe darstellt und der Substituent Niederalkyl ist;
oder R₃ und R₄ einen Oxazin-Ring bilden, der ggf. an dem Stickstoffatom durch einen Rest R₉ substituiert ist, der Niederalkyl darstellt;
R_p H oder eine leicht abspaltbare Gruppe der Formel -C(O)–(A₁)-NH₂ darstellt, in der A₁ (CH₂)_m oder einen verzweigten Niederalkylrest darstellt;
m eine ganze Zahl zwischen 0 und 6 ist;
n 1 oder 2 ist;
wobei, wenn R_p ein Wasserstoffatom ist, R₃ und R₄ zusammen einen ggf. substituierten Oxazin-Ring bilden,
und, wenn der Ausdruck "Nieder" sich auf Alkyl oder Alkylen bezieht, dieser höchstens 6 Kohlenstoffatome bedeutet;
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Der hier in Bezug auf die Gruppen Alkyl oder Alkylen verwendete Begriff "Nieder" bezeichnet verzweigte oder lineare gesättigte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, t-Butyl, Vinyl, Allyl, Isopropenyl, Pentenyl, Hexanyl und Propenyl Ethinyl.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben zwei mögliche Enantiomerformen, d. h. in den Konfigurationen "R" und "S". Die vorliegende Erfindung schließt die beiden Enantiomerformen und alle Kombinationen dieser Formen, einschließlich der racemischen Mischungen "RS" ein. Wenn aus Gründen der Einfachheit in den Strukturformen keine spezifische Konfi guration angegeben ist, so ist dies so zu verstehen, dass beide Enantiomerformen und ihre Mischungen dargestellt sind.
Beispiele von substituierten Camptothecinen, die als Ausgangsprodukte verwendet werden, können in den amerikanischen Patenten 4 473 692, 4 604 463, 4 894 956, 5 162 532, 5 395 939, 5 315 007, 5 264 579, 5 258 516, 5 254 690, 5 212 317 und 5 341 745, den Patentanmeldungen PCT US91/08028, US94/06451, US90/05172, US92/04611, US93/10987, US91/09598, EP94/03058 und EP95/00393 und den europäischen Patentanmeldungen 325 247, 495 432, 321 122 und 540 099 gefunden werden.
Bei den Verbindungen, die einen Oxazinring aufweisen:
– behandelt man mit einem primären Amin unter Mannich-Bedingungen eine β-Hydroxylactonverbindung der allgemeinen Formel D
in der R₃ ein Hydroxylrest ist, R₄ H ist und R₁ und R₂ die oben angegebene Bedeutung haben, um eine β-Hydroxylactonverbindung der allgemeinen Formel Ia
zu erhalten, in der R₁, R₂, R₅ und R₉ die oben angegebene Bedeutung haben.
Dieses Verfahren besteht darin, dass das Ausgangsprodukt in Gegenwart eines primären Amins, wie z. B. Benzylamin, und von Formaldehyd in einem sauren Lösungsmittel, wie z. B. Essigsäure oder Propionsäure, während einer Zeit von 0,5 bis 5 Stunden auf eine Temperatur von 30°C bis 80°C erhitzt wird. Alternativ kann man eine Suspension des Ausgangsprodukts in Essigsäure mit einem tri-N-substituiertes Hexahydrotriazin, wie z. B. Hexahydro-1,3,5-trimethyltriazin, 1,3,5-Triethylhexahydrotriazin oder 1,3,5-Tribenzylhexahydrotriazin, während einer Zeit von 0,5 bis 5 Stunden auf eine Temperatur von 30°C bis 80°C erhitzen.
– gegebenenfalls acyliert man diese Verbindung der allgemeinen Formel D oder Ia vorzugsweise mit einem Derivat des Rests C(O)-A₁-NH₂, wie oben definiert, um die β-Hydroxylactonverbindung der allgemeinen Formel I zu erhalten, wobei R_p von H verschieden ist (Prodrug-Form der Erfindung).
In dem vorstehenden Verfahren können die Gruppen R₂, R₃, R₄ und R₅ nötigenfalls nach den herkömmlichen Schutzmethoden geschützt werden (Greene, T., Protective Groups in Organic Synthesis 10–86 (John Wiley & Sons 1981)). Wenn mindestens eine der Gruppen R₂₂ oder R₂₃ H ist oder mindestens eine mit dem Acylierungsverfahren chemisch inkompatible Funktion, wie z. B. ein primäres oder sekundäres Amin, enthält, muss eine Schutzgruppe herangezogen werden, die gegenüber den Acylierungsbedingungen beständig ist. Eine für die Amine gewöhnlich verwendete Schutzgruppe ist tert-Butyloxycarbonyl (BOC). Die Acylierungsreaktion wird nun auf die oben beschriebene Weise durchgeführt und dann wird die Schutzgruppe beispielsweise durch eine Behandlung mit Trifluoressigsäure im Fall von BOC abgespalten, um die Verbindung der allgemeinen Formel (I) oder (II) zu ergeben. Die Verwendung der Schutzgruppen ist dem Fachmann bekannt (für weitere Beispiele wird verwiesen auf Greene, T., Protectives Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1981).
Die Verbindungen der Formel D werden folgendermaßen hergestellt:
– man koppelt eine Verbindung der allgemeine Formel M
in der R₁ die oben angegebene Bedeutung hat und R₂₀ Wasserstoff oder ein Halogenatom darstellt, mit einem 2-Halogen-3-chinolinmethanol der allgemeinen Formel N
in der R₂, R₃, R₄ und R₅ die oben angegebene Bedeutung haben und X ein Halogenatom darstellt, um die Verbindung der Formel O zu erhalten
– dann cyclisiert man die Verbindung der allgemeinen Formel 0, um die Verbindung der oben definierten allgemeinen Formel D zu erhalten.
In dem vorstehenden Verfahren können die Gruppen R₁, R₂, R₃ und R₄ nötigenfalls nach den herkömmlichen Schutzmethoden geschützt werden (Greene, T., Protective Groups in Organic Synthesis 10–86 (John Wiley & Sons 1981)). Die Bildung der Verbindung O ausgehend von den Verbindungen der allgemeinen Formel M und N geht mit Hilfe einer dem Fachmann unter dem Namen Mitsunobu-Reaktion bekannten Behandlung vor sich (vergleiche Mitsunobu, O. und Mitarbeiter, Synthesis, S. 1 (1981)). Dabei wird die Hydroxylfunktion der Verbindung N durch ein Nucleophil, wie z. B. die Verbindung M oder ein deprotoniertes Derivat dieser Verbindung, verlagert, und zwar durch eine Behandlung mit einem Phosphin, beispielsweise Triphenylphosphin, und einem Azodicarboxylatderivat, beispielsweise Diethylazodicarboxylat, in einem aprotischen Lösungsmittel, wie z. B. Tetrahydrofuran oder N,N-Dimethylformamid. Die Cyclisierung der Verbindung O geht vorzugsweise in Gegenwart eines Palladium-Katalysators (beispielsweise Palladiumdiacetat) unter basischen Bedingungen (die beispielsweise von einem alkalischen Acetat geliefert werden, das gegebenenfalls mit einem Phasenübergangsmittel, wie z. B. Tetrabutylammoniumbromid kombiniert ist) in einem aprotischen Lösungsmittel, wie z. B. Acetonitril oder N,N-Dimethylformamid bei einer Temperatur zwischen 50°C und 120°C vor sich (R. Grigg und Mitarbeiter, Tetrahedron 46, Seite 4003 (1990)).
Die Verbindungen der allgemeinen Formel M können gemäß einem Verfahren hergestellt werden, das dadurch gekennzeichnet ist, dass
– man das Carbonyl eines Pyridins der allgemeinen Formel
in der R₁ die oben angegebene Bedeutung hat und R₂₄ ein Halogenatom oder ein Niederalkoxy darstellt, durch eine Acetalfunktion schützt, um die Verbindung der allgemeinen Formel F
zu erhalten, in der die Gruppen Z und Z' unabhängig voneinander ein Niederalkyl darstellen oder zusammen eine gesättigte kohlenwasserstoffhaltige Kette mit 2 bis 4 Kohlenstoffatomen bilden;
– man in die Verbindung der allgemeinen Formel F eine Hydroxymethylfunktion einführt, um eine Verbindung der allgemeinen Formel G
zu erhalten,
– dann die Alkoholfunktion der Verbindung der allgemeinen Formel G schützt, um eine Verbindung der allgemeinen Formel H
zu erhalten, in der R₁ und Z und Z' die oben angegebene Bedeutung haben und R₂₅ eine Schutzgruppe der Alkoholfunktion darstellt,
– das Acetal der Verbindung der allgemeinen Formel H entschützt, um die Verbindung der allgemeinen Formel I' zu erhalten
– die Verbindung der Formel I' mit einem funktionalisierten Alkylierungsmittel behandelt, um einen β-Hydroxyester der allgemeinen Formel J zu erhalten,
in der R₁, R₂₄ und R₂₅ die oben angegebene Bedeutung haben und R₁₇ OR₆ oder NHR₆ darstellt und R₆ H, ein Niederalkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylniederalkyl, Niederalkenyl, Niederalkoxyniederalkyl oder Aryl oder Arylniederalkyl darstellt;
– man die Schutzgruppe R₂₅ der Verbindung der allgemeinen Formel J abspaltet, um eine Verbindung der allgemeinen Formel K zu erhalten
in der R₁, R₁₈, R₁₉, R₂₄ und R₂₄ die oben angegebene Bedeutung haben und R₁₇ OR₆ oder NHR₆ und R₆ H, Niederalkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylniederalkyl, Niederalkenyl, Niederalkoxyniederalkyl oder Aryl oder Arylniederalkyl darstellt;
– die Verbindung der allgemeinen Formel K zur Verbindung der allgemeinen Formel L cyclisiert
und schließlich den Rest R₂₄ der Verbindung L in Carbonyl überführt, um die Verbindung der allgemeinen Formel M zu
Die Carbonylfunktion eines 4-Acyl-2-halogenpyridins (beispielsweise hergestellt nach Lamattina, J. L., J. Heterocyclic Chem. 20, S. 553 (1983)) wird vorzugsweise durch eine Acetalfunktion, vorzugsweise cyclisches Acetal, gemäß dem Fachmann bekannten herkömmlichen Bedingungen geschützt (Greene, T., Protective Groups in Organic Synthesis 10–86 (John Wiley & Sons 1981)). Das auf diese Weise erhaltene Zwischenprodukt wird mit einem Natrium- oder Kaliumalkoholat in einem aprotischen Lösungsmittel (beispielsweise Acetonitril) oder in dem Alkohol, von dem das Alkoholat abgeleitet ist, bei einer Temperatur zwischen 0°C und 100°C behandelt, um die Verbindung der allgemeinen Formel F zu ergeben. Diese kann in Position 3 durch Behandlung mit einem Aryl- oder Alkyllithium (beispielsweise Mesityllithium) in einem Ether-Lösungsmittel, wie z. B. Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur zwischen –100°C und 0°C lithiiert werden. Dem auf diese Weise erhaltenen lithiierten Zwischenprodukt setzt man ein formylierendes Elektrophil zu, wie z. B. N,N-Dimethylformamid, und der auf diese Weise erhaltene Aldehyd wird nach Hydrolyse mit einem Reduzierungsmittel, wie z. B. Natriumborhydrid behandelt, um die Verbindung der allgemeinen Formel G zu ergeben. Der Schutz der Alkoholfunktion der Verbindung G geht unter dem Fachmann bekannten herkömmlichen Bedingungen vor sich, um eine Verbindung der allgemeinen Formel H zu ergeben. Beispiele von Schutzgruppen der Alkoholfunktion umfassen diejenigen, die die Ether [das heißt Methyl, Methoxymethyl, Tetrahydropyranyl, 2-Methoxyethoxymethyl, Benzyloxymethyl, t-Butyl und Benzyl (substituiert oder nicht)] und die Ester (das heißt Format, Acetat und Isobutyrat) bilden. Für weitere Beispiele von primären Hydroxylschutzgruppen wird auf Greene, T., Protective Groups in Organic Synthesis, 10–86 (John Wiley & Sons, 1981) verwiesen. Die Entschützung der Verbindung der allgemeinen Formel H, um die Verbindung der allgemeinen Formel I' zu ergeben, findet unter selektiven Bedingungen statt, die die Unversehrtheit des Rests R₂₅ gewährleisten, und zwar beispielsweise durch eine Behandlung unter sauren Bedingungen (beispielsweise mit Trifluoressigsäure). Die selektiven Schutz- und Entschützungsbedingungen der funktionellen Gruppen sind dem Fachmann bekannt (Greene, T., Protective Groups in Organic Synthesis, 10–86 (John Wiley & Sons, 1981)). Die Behandlung der Verbindung I' mit einem funktionalisierten Alkylierungsmittel, um einen β-Hydroxyester der allgemeinen Formel J zu ergeben, kann mit Hilfe eines Lithiumenolats oder eines Zinkderivats eines Carboxylesters in einem wasserfreien aprotischen Lösungsmittel, beispielsweise Tetrahydrofuran, durchgeführt werden. Die Schutzgruppe R₂₅ der Verbindung der allgemeinen Formel J wird abgespalten, um eine Verbindung der allgemeinen Formel K zu ergeben, und zwar unter dem Fachmann bekannten Entschützungsbedingungen. Beispielsweise kann man, wenn R₂₅ eine Benzylgruppe ist, eine alkoholische Lösung der Verbindung der allgemeinen Formel J, die mit einem Palladiumkatalysator versetzt ist, einer Wasserstoffatmosphäre unter einem Druck von 0,5 bis 10 bar aussetzen. Die Cyclisierung der auf diese Weise erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel K kann unter sauren Bedingungen (beispielsweise durch Behandlung mit Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoffgas, das in einem wasserfreien Lösungsmittel, wie z. B. Dichlormethan oder Dioxan, gelöst ist) durchgeführt werden, um einen β-Hydroxylacton-Ring mit sieben Kettengliedern wie in der Verbindung der allgemeinen Formel L zu ergeben. Die Verbindungen der allgemeinen Formel L können beispielsweise durch eine Behandlung mit Salzsäure in der wärme oder durch eine Behandlung mit Trimethylsilyliodid in Pyridone der allgemeinen Formel M überführt werden.
Die 2-Halogen-3-chinolinmethanole der allgemeinen Formel N können aus Acetaniliden der allgemeinen Formel P erhalten
in der R₂, R₃ und R₄ die in den allgemeinen Formeln der Verbindungen I und II angegebene Bedeutung haben. In den nachstehenden Verfahren können die Gruppen R₂, R₃ und R₄ nötigenfalls nach den herkömmlichen Schutzmethoden geschützt werden, (Greene, T., Protective Groups in Organic Synthesis, 10–86 (John Wiley & Sons, 1981)).
Die Verbindungen der Formel N können also nach dem folgenden Verfahren hergestellt werden: die Aniline der Formel P werden durch Behandlung mit einem Acetylierungsmittel, wie z. B. Essigsäureanhydrid, N-acetyliert. Die auf diese Weise erhaltenen Acetanilide werden bei einer Temperatur zwischen 50°C und 100°C, vorzugsweise 75°C, mit einem dem Fachmann unter dem Namen Vilsmeyer-Reagenz bekannten Reagenz (hergestellt durch die Einwirkung von Phosphoryloxychlorid auf N,N,-Dimethylformamid bei einer Temperatur zwischen 0°C und 10°C) behandelt, um den entsprechenden 2-Chlor-3-chinolincarbaldehyd zu ergeben (vergleiche beispielsweise Meth-Cohn und Mitarbeiter, J. Chem. Soc., Perkin Trans. I S. 1520 (1981); Meth-Cohn und Mitarbeiter, J. Chem. Soc., Perkin Trans. I S. 2509 (1981); und Nakasimhan und Mitarbeiter J. Am. Chem. Soc., 112, S. 4431 (1990)). Das Chlor in Position 2 der 2-Chlor-3-chinolincarbaldehyde kann durch Iod oder Brom substituiert werden, indem das Produkt in einem inerten Lösungsmittel, wie z. B. Acetonitril, in Gegenwart eines Iod- oder Bromsalzes (beispielsweise Natriumiodid oder Tetrabutylammoniumbromid) erhitzt wird. Eine Spur Säure, wie z. B. konzentrierte Salzsäure, kann erforderlich sein, um diese Umwandlung zu katalysieren. Die 2-Halogen-3-chinolincarbaldehyde werden leicht zu den entsprechenden 2-Halogen-3-chinolimethanolen der allgemeinen Formel N unter dem Fachmann bekannten gebräuchlichen Bedingungen reduziert, wie z. B. Behandlung in einem alkoholischen Lösungsmittel (wie beispielsweise Methanol) mit Natriumborhydrid bei einer Temperatur zwischen 0°C und 40°C.
Die Verbindungen N können auch nach dem folgenden Verfahren erhalten werden: die Aniline der oben beschriebenen allgemeinen Formel P werden durch Reaktion mit einem Nitril (wie z. B. Chloracetonitril oder Propionitril) in Gegenwart von Bortrichlorid und einer anderen Lewis-Säure, wie z. B. Aluminiumtrichlorid, Titantetrachlorid oder Diethylaluminiumchlorid, in einem aprotischen Lösungsmittel oder in einer aprotischen Lösungsmittelmischung acyliert, worauf eine Hydrolyse folgt (vergleiche Sugasawa, T, und Mitarbeiter, J. Am. Chem. Soc. 100, S. 4842 (1978)). Die auf diese Weise erhaltene Zwischenverbindung wird dann mit Ethylmalonylchlorid in einem aprotischen Lösungsmittel, wie z. B. Acetonitril, in Gegenwart einer Base, wie z. B. Triethylamin, behandelt und wird dann mit einem Alkalialkoholat, z. B. Natriummethylat, in Methanol behandelt, um ein in Position 4 substituiertes 2-Hydroxy-3-chinolinethylcarboxylat zu ergeben. Dieses wird durch eine Behandlung mit Phosphoryl oxychlorid in 2-Chlor-3-chinolinethylcarboxylat umgewandelt. Wenn die Position 4 des Chinolins eine Chlormethylgruppe trägt, kann eine nucleophile Substitution durch Behandlung mit einem sekundären Amin, wie z. B. Dimethylamin, N-Methylpiperazin, Morpholin oder Piperidin, vorgenommen werden. Das 2-Chlor-3-chinolinethylcarboxylat wird dann durch Diisobutylaluminiumhydrid in einem aprotischen Lösungsmittel, wie z. B. Dichlormethan, reduziert, um 2-Chlor-3-chinolinmethanol der allgemeinen Formel N zu ergeben. Analoge der Zwischenverbindungen (N) wurden in der Literatur und insbesondere in der Anmeldung PCT 95/05427 beschrieben.
Manche Verbindungen der Erfindung können mit Hilfe der herkömmlichen Verfahren in Form von pharmazeutisch verträglichen Salzen hergestellt werden. Pharmazeutisch verträgliche Salze umfassen, als nicht begrenzende Beispiele, mit anorganischen Säuren gebildete Additionssalze, wie z. B. Chlorhydrat, Sulfat, Phosphat, Diphosphat, Bromhydrat und Nitrat, oder mit organischen Säuren gebildete Additionssalze, wie z. B. Acetat, Maleat, Fumarat, Tartrat, Succinat, Citrat, Lactat, Methansulfonat, p-Toluolsulfonat, Pamoat, Salicylat, Oxalat und Stearat. Unter den Anwendungsbereich der Erfindung fallen auch, wenn sie verwendbar sind, die aus Basen, wie z. B. Natrium- oder Kaliumhydroxid, gebildeten Salze. Für weitere Beispiele von pharmazeutisch verträglichen Salzen wird auf "Pharmaceutical Salts", F. M. Berge, J. Pharm. Sci. 66: 1 (1977), verwiesen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen interessante pharmakologische Eigenschaften. So besitzen die erfindungsgemäßen Verbindungen eine hemmende Wirkung gegenüber der Topoisomerase I und eine antitumorale Wirkung. Der Stand der Technik legt nahe, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen eine antiparasitäre Wirkung und/oder eine antivirale Wirkung besitzen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können somit bei verschiedenen therapeutischen Anwendungen eingesetzt werden.
Im nachstehenden experimentellen Teil werden die pharmakologischen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Verbindungen veranschaulicht.
Die Verbindungen können bei einem Patienten, beispielsweise einem Säuger, wie dem Mensch, durch Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) die Topoisomerase hemmen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen auch eine antitumorale Wirkung. Sie können zur Behandlung von Tumoren, beispielsweise von Tumoren, die eine Topoisomerase exprimieren, bei einem Patienten durch Verbreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) verwendet werden. Beispiele von Tumoren oder Krebsarten sind Krebs des Ösophagus, des Magens, der Därme, des Rektum, der Mundhöhle, des Pharynx, des Larynx, der Lunge, des Dickdarms, der Brust, des cervix uteri, des corpus endometrium, der Eierstöcke, der Prostata, der Hoden, der Blase, der Nieren, der Leber, des Pankreas, der Knochen, der Bindegewebe, der Haut, der Augen, des Gehirns und des Zentralnervensystems sowie Schilddrüsenkrebs, Leukämie, Hodgkin, andere Lymphome als Hodgkin, multiple Myelome u. a..
Sie können auch zur Behandlung von parasitären Infektionen durch Inhibiton der Hämoflagellaten (z. B. bei Trypanosomie oder Leishmania-Infektionen) oder durch Inhibition der Plasmodie (wie z. B. bei der Malaria), jedoch auch bei der Behandlung von viralen Infektionen oder Krankheiten verwendet werden.
Aufgrund dieser Eigenschaften sind die Produkte der allgemeinen Formel (I) für eine pharmazeutische Verwendung ge eignet. Gegenstand der vorliegenden Anmeldung sind deshalb auch Verbindungen der oben beschriebenen allgemeinen Formel (I) sowie die mit mineralischen oder organischen Säuren gebildeten, pharmazeutisch verträglichen Additionssalze der Produkte der allgemeinen Formel (I) sowie pharmazeutische Zusammensetzungen, die als Wirkstoff mindestens eine der oben genannten Verbindungen enthalten, in Form von Arzneimitteln.
Die Erfindung betrifft somit pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine Verbindung der oben genannten allgemeinen Formel (I) oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz dieser Verbindung in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger enthalten, der in Abhängigkeit von der Art der Verabreichung gewählt wird (z. B. orale, intravenöse, intraperitoneale, intramuskuläre, transdermale oder subkutane Verabreichung). Die pharmazeutische (beispielsweise therapeutische) Zusammensetzung kann in fester Form, flüssiger Form, in Form von Liposomen oder Lipidmizellen vorliegen.
Die pharmazeutische Zusammensetzung kann in fester Form vorliegen, wie z. B. in Form von Pulvern, Pillen, Granula, Tabletten, Liposomen, Gelatinekapseln oder Suppositorien. Pillen, Tabletten oder Gelatinekapseln können mit einer Substanz umhüllt sein, die die Zusammensetzung gegenüber der Wirkung der Magensäure oder der Enzyme im Magen des Patienten während einer Zeit schützen kann, die ausreicht, damit diese Zusammensetzung unverdaut in den Dünndarm des Patienten gelangen kann. Die Verbindung kann auch lokal, beispielsweise an der Stelle des Tumors selbst, verabreicht werden. Die Verbindung kann auch nach dem Langzeitfreigabeverfahren verabreicht werden (z. B. eine Zusammensetzung mit Langzeitfreigabe oder einer Infusionspumpe). Geeignete feste Träger können beispielsweise Calciumphosphat, Magnesiumstearat, Magnesiumcarbonat, Talk, Zucker, Lactose, Dextrin, Stärke, Gelatine, Cellulose, Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose, Polyvinylpyrrolidin und Wachs sein. Die eine erfindungsgemäße Verbindung enthaltenden pharmazeutischen Zusammensetzungen können also auch in flüssiger Form vorliegen, wie z. B. in Form von Lösungen, Emulsionen, Suspensionen oder als Formulierung mit Langzeitfreigabe. Geeignete flüssige Träger sind beispielsweise Wasser, organische Lösungsmittel, wie z. B. Glycerin, oder Glykole, wie z. B. Polyethylenglykol, sowie ihre Mischungen in Wasser in unterschiedlichen Mischungsverhältnissen.
Gegenstand der Erfindung ist ferner die Verwendung der Produkte der oben genannten Formel (I) für die Herstellung von Arzneimitteln zur Hemmung der Topoisomerase, von Arzneimitteln zur Behandlung von Tumoren, von Arzneimitteln zur Behandlung von parasitären Infektionen sowie von Arzneimitteln zur Behandlung von viralen Infektionen oder Krankheiten.
Die für die Behandlung der oben genannten Krankheiten oder Störungen vorzusehende Dosis einer erfindungsgemäßen Verbindung variiert je nach Verabreichungsart, Alter und Körpergewicht des zu behandelnden Patienten sowie dessen Zustand und wird endgültig durch den Arzt oder Tierarzt festgelegt. Eine solche Menge, die durch den behandelnden Arzt oder Tierarzt festgelegt wird, wird im vorliegenden Text "therapeutisch wirksame Menge" genannt.
Sofern sie nicht anders definiert werden, haben alle hier verwendeten technischen und wissenschaftlichen Begriffe die Bedeutung, unter der ein normaler Fachmann des Gebiets, zu dem die Erfindung gehört, sie gewöhnlich kennt. Ferner gelten alle hier erwähnten Veröffentlichungen, Patentanmeldungen, Patente und anderen Texte als hier mit aufgenommen.
Die folgenden Beispiele dienen zur Veranschaulichung der vorstehenden Verfahre und dürfen in keinem Fall als Begrenzung der Reichweite der Erfindung betrachtet werden.
EXPERIMENTELLER TEIL
Herstellung 1: 5-Ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]-indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
1.a. 4-Ethyl-3,4-dihydroxy-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-14(4H,12H)-on
Man setzt portionsweise Natriumborhydrid (14 g, 370 mmol) einer Suspension von (S)-(+)-Camptothecin (14 g, 40 mmol, das man bei verschiedenen Händlern beziehen kann, wie z. B. Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI)) in Methanol (750 ml) zu und erhitzt die gebildete Mischung vorsichtig auf 55°C, um eine klare Lösung zu erhalten, die man 16 Stunden bei Raumtemperatur rührt. Dann wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgedampft und der Rückstand wird in Wasser (250 ml) aufgenommen, durch Zusatz von Essigsäure (21 ml) neutralisiert und 2 Stunden bei 4°C ruhen gelassen. Die gebildete Suspension wird filtriert und nacheinander mit kaltem Wasser, Aceton und Diethylether gewaschen, was nach Trocknung unter vermindertem Druck die gesuchte Verbindung in Form eines weißen Feststoffs ergibt. Schmelzpunkt 280°C.
1.b. 8-Formyloxymethyl-7-propionylindolizino[1,2-b]chinolin-9(11H)-on
Man setzt tropfenweise eine Lösung von Natriummetaperiodat (14 g, 65 mmol) in Wasser (140 ml) einer Suspension von 4-Ethyl-3,4-dihydroxy-1H-pyrano[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-14(4H, 12H)-on (13,4 g, 38 mmol) in Eisessigsäure (720 ml) zu und rührt die gebildete Lösung während einer Stunde bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wird dann in eine Eis/Wasser-Mischung (650 ml) geschüttet und die gebildete Suspension wird eine halbe Stunde gerührt, dann filtriert und nacheinander mit Wasser, Isopropylalkohol und Diethylether gewaschen, so dass man nach Trocknung unter vermindertem Druck die gewünschte Verbindung (11,5 g) in Form eines blassgelben Feststoffs erhält. Schmelzpunkt > 200°C (Zersetzung).
1.c. β-Ethyl-β-hydroxy-β-(8-hydroxymethyl-9-oxo(11H)-indolizino-[1,2-b]chinolin-7-yl)-tert-butylpropionat
Eine Zinksuspension (6,5 g, 100 mmol), die mit einem Magnetrührer gerührt wird, in wasserfreiem Diethylether (50 ml) unter Argon wird durch tropfenweises Zusetzen von Chlortrimethylsilan (0,75 ml, 5,7 mmol) aktiviert. Man rührt noch 15 Minuten bei Raumtemperatur und erhitzt dann zum Rückfluss. Das Erwärmungsbad wird dann entfernt und man setzt tert-Butylbromacetat (15 ml, 100 mmol) tropfenweise mit einer Geschwindigkeit zu, die die Aufrechterhaltung des Rückflusses gewährleistet. Die äußere Erwärmung wird wieder aufgenommen und noch eine Stunde aufrechterhalten. Man lässt die gebildete Etherlösung des Reformatsky-Reagenz auf Raumtemperatur abkühlen und überträgt sie dann mit Hilfe einer Kanüle in eine Suspension von 8-Formyloxymethyl-7-propionylindolizino[1,2-b]chinoline-9(11H)-on (1,6 g, 4,7 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (40 ml) unter Argon. Das Reaktionsgemisch wird während einer Stunde unter Rückfluss gerührt, und dann lässt man es auf Raumtemperatur abkühlen, die Reaktion wird durch Zusatz von gesättigtem Ammoniumchlorid (100 ml) abgebrochen und man extrahiert mit Chloroform (3 × 100 ml). Die kombinierten Chloroformextrakte werden über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft und der Rückstand wird durch Chromatographie auf Siliciumoxidgelsäule gereinigt (1–2% MeOH/CH₂Cl₂), was 0,64 g der gesuchten Verbindung (31%) in Form eines blassgelben Feststoffs ergibt. Schmelzpunkt 146–149°C.
¹H-NMR (CDCl₃): 0,93 (t, 3H); 1,37 (s, 9H); 1,99 (m, 2H); 2,97 (dd, 2H); 3,5 (se, 1H); 5,10 (s, 2H); 5,24 (s, 2H); 7,40 (s, 1H); 7,59 (t, 1H); 7,83 (t, 1H); 7,90 (d, 1H); 8,20 (d, 1H); 8,34 (s, 1H).
¹³C-MR (CDCl₃): 8,18; 27,90; 34,59; 45,34; 49,91; 58,55; 77,39; 82,42; 100,52; 127,67; 127,97; 128,10; 128,64; 129,44; 129,79; 130,42; 130,99; 142,86; 148,69; 152,75; 155,16; 162,38, 172,24.
IR (KBr): 764; 1016; 1157; 1580, 1651, 1726.
1.d. 5-Ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]-indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
β-Ethyl-β-hydroxy-β-(8-hydroxymethyl-9-oxo(11H)-indolizino-[1,2-b]-chinolin-7-yl)tert-butylpropionat (1,45 g, 3,32 mmol) wird in wasserfreiem Dichlormethan (25 ml) gelöst und mit einer gesättigten Chlorwasserstofflösung in Dichlormethan (100 ml) behandelt. Die gebildete Mischung wird während 16 Stunden auf –20°C gehalten. Der Niederschlag wird filtriert, mit Methanol gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet, was 662 mg (55%) der gesuchten Verbindung in Form eines gelben Feststoffs ergibt. Schmelzpunkt > 300°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,90 (t, 3H); 1,20 (q, 2H); 3,27 (dd, 2H); 5,29 (s, 2H); 5,49 (dd, 2H); 7,42 (s, 1H); 7,73 (t, 1H); 7,90 (t, 1H); 8,16 (t, 2H); 8,71 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,45; 36,48; 42,54; 50,68; 61,44; 73,34; 99,78; 122,71; 127,83; 128,15; 128,75; 129,08; 130,07; 130,61; 131,81; 144,66; 148,04; 152,80; 155,91; 159,26; 172,08.
IR (KBr): 761; 1127; 1204; 1285; 1580; 1653; 1757.
Herstellung 2: Aufspaltung von 5-Ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]-indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Man bringt eine Mischung von (3-Ethyl-β-hydroxy-(8-hydroxymethylindolizino[1,2-b]chinolin-9-(11H)-on-7yl)-propion säure (19,5 g, 51 mmol) und L-(-)-α-Methylbenzylamin (12,12 g, 100 mmol) in absolutem Ethanol (1 l) zum Kochen, filtriert in der Wärme und lässt 68 h ruhen. Man filtriert den Niederschlag und wäscht ihn mit Ethanol und mit Ether, um 9,8 g eines weißen Feststoffs zu erhalten. Eine Hochdruck-Flüssig-Chromatographie auf chiraler stationärer Phase ("chirale HPLC" auf Säule Chiral-AGP (Chromtech, Stockholm, Schweden) 100 × 4 mm, Eluierungsmittel 2%-iges Acetonitril in Phosphatpuffer 10 mM, pH 6,9, Eluierungspeaks bei 4,5 und 7,5 min) ergibt zwei Integrationspeaks mit 24% bzw. 76% der Gesamtfläche der beiden Peaks. Man nimmt den Feststoff in 93%-igem Ethanol (350 ml) unter Rückfluss auf und lässt 48 h ruhen. Man filtriert den Niederschlag und wäscht ihn dann mit Ethanol und Ether, um 4,8 g eines weißen Feststoffs zu erhalten, der zwei Integrationspeaks mit 9% bzw. 91% der Gesamtfläche der beiden Peaks bei chiraler HPLC ergibt. Man nimmt den Feststoff in 50%-igem Ethanol (48 ml) unter Rückfluss auf und lässt dann 48 h ruhen. Man filtriert den Niederschlag und wäscht ihn dann mit Ethanol und mit Ether, um 2,7 g eines weißen Feststoffs zu erhalten, der zwei Integrationspeaks mit 3% bzw. 97% der Gesamtfläche der beiden Peaks bei chiraler HPLC ergibt. Man nimmt den Feststoff in 50%-igem Ethanol (22 ml) unter Rückfluss auf und lässt dann 48 h ruhen. Man filtriert den Niederschlag und wäscht ihn dann mit Ethanol und mit Ether, um 1,6 g eines weißen Feststoffs zu erhalten, der zwei Integrationspeaks mit 1% bzw. 99% der Gesamtfläche der beiden Peaks bei chiraler HPLC ergibt. Man behandelt das gebildete diastereoisomerisch angereicherte Salz, das in destilliertem Wasser (20 ml) aufgenommen wurde, mit Essigsäure (0,35 ml, 6,4 mmol) während 15 min. Man filtriert den gebildeten Niederschlag, wäscht ihn mit Wasser, Aceton und Ether und trocknet ihn dann unter Vakuum bei 80°C, um 1,1 g eines weißen Feststoffs zu erhalten. Diesen nimmt man in absolutem Ethanol (55 ml), das mit konzentrierter Salzsäure (11,5 N, 11 ml) versetzt ist, auf, um eine gelbe Lösung zu erhalten, die 68 h bei Raumtempera tur unter Rühren gehalten wird. Man filtriert den auf diese Weise gebildeten Niederschlag und wäscht ihn mit Wasser, Ethanol und Ether und trocknet ihn dann unter Vakuum bei 80°C, um 770 mg enantiomerisch angereichertes 5-Ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]-indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H, 13H)-dion zu erhalten. Eine Analyse durch chirale HPLC (Säule Chiral-AGP, eluiert mit einem Gradienten von 2 bis 5% Acetonitril in Phosphatpuffer 10 mM, pH 6,9, Eluierungspeaks bei 15 und 20 min) ergibt einen Enantiomerüberschuss von 98%. Man wiederholt die oben beschriebene Prozedur, indem man L-(-)-α-Methylbenzylamin durch D-(+)-α-Methylbenzylamin ersetzt. Man erhält auf diese Weise das andere Enantiomer von 5-Ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]-indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H, 13H)-dion.
Herstellung 3: 5,12-Diethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]-indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird ähnlich wie in Herstellung 1 hergestellt, jedoch mit der Ausnahme, dass im Schritt 1.a. 7-Ethylcamptothecin (Sawada und Mitarbeiter, Chem. Parm. Bull. 39: 2574 (1991)) anstelle von Camptothecin verwendet wird. Man erhält die gesuchte Verbindung in Form eines hellgelben Feststoffs. Schmelzpunkt > 270°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,92 (t, 3H); 1,39 (t, 3H); 1,93 (q, 2H); 3,08 (d, 2H); 3,25 (q, 2H); 3,51 (d, 2H); 5,32 (s, 2H); 5,52 (dd, 2H); 7,42 (s, 1H); 7,76 (t, 1H); 7,89 (t, 1H); 8,18 (d, 1H); 8,32 (d, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,46; 14,15; 22,42; 36,50; 42,54; 49,95; 61,45; 73,35; 99,68; 122,61; 124,27; 126,76; 127,70; 128,27; 129,92; 130,18; 145,17; 145,82; 148,57; 152,15; 155,89; 159,26; 172,08.
Herstellung 4: 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
4.a. 2-Ethyl-2-(2-methoxy-4-pyridyl)-1,3-dioxolan
Man destilliert Wasser azeotrop (eine ganze Nacht) mit einem Dean-Stark-Gerät ausgehend von einer Mischung von 2-Chlor-4-propionylpyridin (10 g, 59 mmol), das wie in Lamattina, J. L. J. Heterocyclic Chem. 20, S. 553 (1983) erhalten wurde, Ethylenglycol (20 ml) und p-Toluolsulfonsäure (250 mg) in Toluol (150 ml). Das Lösungsmittel wird dann unter vermindertem Druck abgezogen, die Säure wird mit gesättigtem wässrigem Natriumbicarbonat (100 ml) neutralisiert und das Produkt wird mit Ether extrahiert. Die kombinierten Etherextrakte werden mit Salzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, was 13,3 g (96%) durch die Carbonylgruppe geschütztes Rohprodukt ergibt, das mit drei Äquivalenten Natriummethoxid in Acetonitril bis zum Ende der Reaktion zum Rückfluss gebracht wird (Kontrolle durch Dünnschichtchromatographie: SiO₂, tert-Butylmethyloxid/hexan (TBMO/HX) 50/50). Die Acetonitrillösung wird dann filtriert und eingedampft. Der Rückstand wird in Ether aufgenommen, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, was ein kastanienbraunes Öl ergibt, das destilliert wird (70–75°C, 0,04 mbar); man gewinnt 10,7 g (Gesamtausbeute 81%) Produkt (F) in Form eines klaren Öls.
4.b. 2-Ethyl-2-(3-hydroxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-1,3-dioxolan
Man setzt tropfenweise mit Hilfe einer Kanüle tert-Butyllithium (1,7 M in Pentan, 100 ml, 170 mmol) einer Brommesitylenlösung (13 ml, 85 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (300 ml) bei –78°C und unter Argon zu. Der gebildete weiße Niederschlag wird bei –78°C während einer Stunde gerührt und dann wird 2-Ethyl-2-(2-methoxy-4-pyridyl)-1,3-dioxolan (10 g, 44,8 mmol) zugesetzt und das Reaktionsgemisch wird 15 Minuten bei –78°C, eine Stunde bei 0°C und eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Nach einer neuerlichen Abkühlung auf –78°C wird wasserfreies N,N-Dimethylformamid (100 mmol) zugesetzt und man lässt das Reaktionsgemisch sich auf Raumtemperatur erwärmen; dann wird es während 16 Stunden gerührt, worauf eine Analyse durch Dünnschichtchromatographie (SiO₂, TBMO/HX: 50/50) den vollständigen Verbrauch des Ausgangsprodukts erkennen läßt. Die Reaktion wird mit gesättigtem Ammoniumchlorid gestoppt und das Reaktionsgemisch wird mit Diethylether (200 ml, 50 ml, 50 ml) extrahiert. Die kombinierten Extrakte werden über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, was ein gelbes Öl ergibt, das durch Säulenchromatographie (SiO₂, TBMO/HX: 0/100 bis 5/95, um die Mesytylenderivate zu eluieren, und dann 20/80 bis 50/50, um das Produkt zu eluieren) gereinigt wird, um den Zwischenaldehyd (7 g) zu ergeben. Der Aldehyd wird in Methanol (100 ml) gelöst und mit Natriumborhydrat (5 g, 132 mmol) behandelt und die gebildete Mischung wird bis zum vollständigen Verbrauch des Zwischenaldehyds gerührt (etwa 1 Stunde), und zwar unter analytischer Kontrolle durch Dünnschichtchromatographie. Das Lösungsmittel wird dann eingedampft, der Rückstand wird in Ether aufgenommen, mit Wasser und mit Salzlösung gewaschen, getrocknet und das Lösungsmittel wird abgedampft. Die Säulenchromatographie (SiO₂, TBMO/HX: 10/90 bis 50/50) des Rückstands ergibt 7 g (Gesamtausbeute 62%) Produkt (G) in Form eines gelben Öls.
4.c. 2-(3-Benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-2-ethyl-1,3-dioxolan
Man setzt tropfenweise eine Lösung von 2-Ethyl-2-(3-hydroxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-1,3-dioxolan (7 g, 30 mmol) und Benzylchlorid (5 ml, 45 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (50 ml) einer Natriumhydridsuspension (80% in Mineralöl, 1,85 g, 61 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (100 ml) zu und hält das Reaktionsgemisch während 16 Stunden unter Rückfluss. Man lässt das Reaktionsgemisch dann auf Raumtemperatur abkühlen, stoppt die Reaktion mit Wasser (50 ml) und konzentriert das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck. Der Rückstand wird in Diethylether (150 ml) gelöst, mit Wasser und Salzlösung gewaschen, getrocknet und eingedampft. Eine Reinigung durch Säulenchromatographie (SiO₂, TBMO/HX: 5/95 bis 20/80) ergibt das durch Benzyl geschützte Produkt (H), 9 g (87%) in Form eines klaren Öls.
4.d. 1-(3-Benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-propan-1-on
Man behandelt 2-(3-Benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-2-ethyl-1,3-dioxolan (9 g, 27 mmol) mit Trifluoressigsäure (10 ml) und Wasser (5 ml) bei einer Badtemperatur von 120°C während 3 Stunden. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck konzentriert und die Restspuren von Säuren werden durch Zusetzen von gesättigtem wässrigem Natriumbicarbonat neutralisiert. Die Extraktion mit Ether und darauf folgende Säulenchromatographie (SiO₂, TBMO/HX: 10/90) ergibt 5,5 g (70%) Produkt (I).
4.e. β-Ethyl-β-hydroxy-β-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)tert-butylpropionat
Man setzt tropfenweise tert-Butylbromacetat (13 ml, 80 mmol) einer Zinksuspension (5,3 g, 80 mmol, durch Behandlung mit 6 N HCl in 10 Sekunden aktiviert und dann nacheinander mit Wasser bis zu neutralem pH, Aceton und Diethylether gewaschen) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (60 ml) unter Rückfluss zu. Das Reaktionsgemisch wird noch 10 Minuten nach Beendigung der Zugabe unter Rückfluss gehalten. Dann setzt man eine Lösung von 1-(3-Benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-propan-1-on (5,8 g, 20 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (20 ml) zu und rührt das Reaktionsgemisch während einer weiteren Stunde unter Rückfluss.
Die Reaktion wird bei 0°C mit gesättigtem wässrigem Ammoniumchlorid (100 ml) gestoppt und das Reaktionsgemisch wird mit Diethylether extrahiert. Die kombinierten Extrakte werden über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, was ein gelbes Öl ergibt, das durch Säulenchromatographie (SiO₂, TBMO/HX: 5/95 bis 10/90) gereinigt wird, um den tert-Butylester (J) (7 g, 95%) in Form eines klaren Öls zu ergeben.
4.f. β-Ethyl-β-hydroxy-β-(3-hydroxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)tert-butylpropionat
Man hydrogenolysiert β-Ethyl-β-hydroxy-β-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)tert-butylpropionat (1 g, 2,5 mmol) bei atmosphärischem Druck und bei Raumtemperatur unter Verwendung von 5%-igem PD/C als Katalysator (50 mg) und absolutem Ethanol als Lösungsmittel (10 ml). Nach Beendigung der Reaktion (6 Stunden) wird der Katalysator durch Filtrieren abgetrennt und das Lösungsmittel wird abgedampft, was 0,7 g (90%) Produkt (K) mit einer für eine weitere synthetische Verwendung ausreichenden Reinheit ergibt.
4.g. 5-Ethyl-1,5-dihydro-5-hydroxy-9-methoxy-oxepino[3,4-c]pyridin-3(4H)-on
β-Ethyl-β-hydroxy-β-(3-hydroxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)tert-butylpropionat (8,8, 28 mmol) wird während 3 Stunden bei Raumtemperatur mit Trifluoressigsäure (30 ml) behandelt. Die flüchtigen Bestandteile werden abgedampft und der Rückstand wird durch Säulenchromatographie gereinigt (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH: 100/0 bis 98/2), was ein klares Öl ergibt, das nach Behandlung mit Toluol 5,9 g Produkt (L) (89%) in Form von weißen Kristallen ergibt. Schmelzpunkt 97–98°C.
4.h. 5-Ethyl-1,5-dihydro-5-hydroxy-oxepino[3,4-c]pyridin-3,9(4H, 8H)-dion
Man erhitzt in Salzsäure 1 N (20 ml) während 9 Stunden unter Rückfluss 5-Ethyl-1,5-dihydro-5-hydroxy-9-methoxyoxepino[3,4-c]pyridin-3(4H)-on (0,5 g, 2,1 mmol). Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck konzentriert und der Rückstand wird noch durch Zusetzen und Abdampfen von Toluol in zwei Malen getrocknet, dann eine ganze Nacht unter vermindertem Druck in Gegenwart von Phosphorpentoxid belassen. Das gebildete Öl wird in wasserfreiem Acetonitril (5 ml) gelöst und während 24 Stunden unter Argon gerührt. Der Niederschlag wird filtriert und getrocknet, was 0,23 g (49%) eines weißen Feststoffs (M) ergibt. Schmelzpunkt 118 –119°C.
4.i. 2-Chlor-6,7-difluor-3-chinolinmethanol
Zur Anwendung kommt das Verfahren nach Meth-Cohn und Mitarbeiter, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, S. 1520 (1981); Meth-Cohn, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, S. 2509 (1981). 3,4-Difluoracetanilid (38 g, 22 mmol) wird dem Vilsmeyer-Reagenz zugesetzt, das durch tropfenweisen Zusatz von Phosphoryloxychlorid (103 ml, 1,1 mol) zu wasserfreiem Dimethylformamid (34 ml, 44 mmol) erhalten wurde, mit einem Wasser/Eis-Bad gekühlt und während 0,5 Stunden unter Argonatmosphäre gerührt. Das gebildete Gemisch wird 16 Stunden auf 70°C erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch einer Mischung von Eis und Wasser (400 ml) zugesetzt, die 2 Stunden unter Rühren gehalten wird, dann filtriert und nacheinander mit Wasser, Ethanol und Ether gewaschen wird, um 9 g 2-Chlor-6,7-difluorchinolin-3-carbaldehyd in Form eines gelben Feststoffs zu ergeben. Schmelzpunkt 222–224°C. Dieses Zwischenprodukt wird mit Natriumborhydrid (2 g, 52 mmol) in Methanol (400 ml) bei Raumtempratur während 0,5 Stunden behandelt, und dann wird der Reagenzüberschuss durch Zusatz von Essigsäure (2 ml) zerstört. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abgezogen, der Rückstand wird in Ethylacetat in Lösung gebracht und nacheinander mit verdünntem Natriumbicarbonat, mit Wasser und mit einer mit Natriumchlorid gesättigten wässrigen Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und konzentriert. Der gebildete Feststoff wird in 1,2-Dichlorethan umkristallisiert, um 8 g 2-Chlor-6,7-difluor-3-chinolinmethanol in Form eines beigen Feststoffs zu ergeben.
4.j. 5-Ethyl-8-(2-chlor-6,7-difluor-3-chinolinmethyl)-1,5-dihydro-5-hydroxyoxepino[3,4-c]pyridin-3,9(4H,8H)-dion
Man setzt tropfenweise während 5 Minuten Diethylazodicarboxylat (570 μl, 3,6 mmol) einer Lösung von 5-Ethyl-1,5-dihydro-5-hydroxyoxepino[3,4-c]pyridin-3,9(4H, 8H)-dion (400 mg, 1,79 mmol), der im vorhergehenden Schritt 4.i erhaltenen Verbindung (770 mg, 2,23 mmol) und von Triphenylphospin (934 mg, 3,58 mmol) in wasserfreiem N,N-Dimethylformamid (45 ml) zu und rührt die gebildete Mischung während 16 Stunden bei Raumtemperatur unter Argon. Das Reaktionsgemisch wird dann unter vermindertem Druck konzentriert und der Rückstand wird in Ether gelöst (100 ml). Die gebildete Lösung wird mit Salzlösung (4 × 50 ml) gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird durch Säulenchromatographie gereinigt (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH: 99/1 bis 98/2), was 650 mg (66%) des Produkts (O) in Form eines weißen Feststoffs ergibt. Schmelzpunkt 165–167°C.
4.k. 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
5-Ethyl-8-(2-chlor-6,7-difluor-3-chinolinmethyl)-1,5-dihydro-5-hydroxyoxepino[3,4-c]pyridin-3,9(4H, 8H)-dion (600 mg, 1,1 mmol), Tetrabutylammoniumbromid (352 mg, 1,1 mmol) Natriumacetat (359 mg, 4,4 mmol) und Palladium (II)-Acetat (98 mg, 0,43 mmol) werden in wasserfreiem Acetonitril (40 ml) gelöst und während 16 Stunden unter Argon auf 90°C erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird ein weißer Niederschlag von der rötlichen Lösung getrennt. Dieser Niederschlag wird filtriert und unter vermindertem Druck getrocknet. Das Rohprodukt wird in Wasser in Suspension gebracht, filtriert und unter vermindertem Druck über Phosphorpentoxid getrocknet, was 250 mg der gesuchten Verbindung in Form eines beigen Feststoffes ergibt. Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,91 (t, 3H); 1,87 (m, 2H); 3,08 (d, 1H); 3,51 (d, 1H); 4,45 (s, 4H); 5,19 (s, 2H); 5,47 (dd, 2H); 6,02 (se, 1H); 7,33 (s, 1H); 7,54 (s, 1H); 7,55 (s, 1H); 8,43 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,43; 36,47; 42,54; 50,52; 61,43; 64,43 (2C); 73,31; 99,07; 112,27; 113,14; 122,00; 124,24; 128,18; 129,74; 144,59; 145,01; 145,33; 147,63; 150,88; 155,88; 159,23; 172,07.
Herstellung 5: 5-Ethyl-4,5-dihydro-5,10-dihydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
10-Benzyloxy-5-ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion (370 mg, 0,79 mmol) wird mit Wasserstoff unter atmosphärischem Druck und bei Raumtemperatur unter Verwendung von Palladium 10% auf Kohle als Katalysator (60 mg) und Trifluoressigsäure als Lösungsmittel (15 ml) behandelt. Nach Beendigung der Reaktion (16 Stunden) werden dem Reaktionsgemisch Dichlormethan (50 ml) und Methanol (50 ml) zugesetzt, der Katalysator wird filtriert und die flüchtigen Bestandteile werden unter vermindertem Druck abgedampft, was die gesuchte Rohverbindung ergibt, die Spuren von Trifluoressigsäure enthält. Diese Spuren werden durch Codestillation mit 1,4-Dioxan entfernt. Man erhält das Produkt in Form eines orangefarbenen Feststoffs, Schmelzpunkt 150°C (Zersetzung) mit einer für die spätere synthetische Verwendung ausreichenden Reinheit.
¹H-NMR (DMSO): 0,89 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,02 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 5,19 (s, 2H); 5,37 (d, 1H); 5,50 (d, 1H); 5,98 (se, 1H); 7,26 (s, 1H); 7,31 (s, 1H); 7,40 (d, 1H); 8,00 (d, 1H); 8,42 (s, 1H); 10,32 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,47; 36,50; 42,61; 50,57; 61,46; 73,35; 98,84; 109,02; 121,83; 123,18; 129,50; 129,85; 130,12; 130,80; 143,39; 145,10; 149,69; 155,97; 156,82; 159,30; 172,11.
Herstellung 6: 5-Ethyl-9-fluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-methoxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 3-Fluor-4-methoxyanilin gemäß der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,89 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,08 (d, 1H); 3,49 (d, 1H); 4,00 (s, 3H); 5,25 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,00 (s, 1H); 7,32 (s, 1H); 7,72 (d, 1H); 7,91 (d, 1H); 8,58 (d, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,43; 36,48; 42,51; 50,68; 56,60; 61,42; 73,29; 99,25; 108,68; 113,52, 122,23; 126,33; 129,99; 130,30; 143,79; 144,70; 148,42; 151,18; 153,19; 155,81, 159,20; 172,06.
IR (KBr): 1259; 1503; 1602; 1737.
Herstellung 7: 9-Chlor-5-ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-methyl-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 3-Chlor-4-methoxyanilin gemäß der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 2,55 (s, 3H); 3,07 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,05 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 8,10 (s, 1H); 8,20 (s, 1H); 8,60 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,43; 20,20; 36,47; 42,49; 50,67; 61,41; 73,28; 99,87; 122,82; 126,98; 127,99; 129,60; 130,53; 131,08; 135,64; 136,56; 144,39; 147,11; 153,10; 155,85; 159,18; 172,03.
IR (KBr): 1208; 1479; 1606; 1656; 1724.
Herstellung 8: 8-Ethyl-2,3,8,9-tetrahydro-8-hydroxy-10H, 12H-[1,4]dioxin[2,3-g]oxepino [3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-10,13(15H)-dion
Diese Verbindung wird aus 3,4-Ethylendioxyanilin gemäß der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,47 (d, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,05 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 8,15 (q, 1H); 8,25 (q, 1H); 8,68 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,41; 36,45; 42,48; 56,68; 61,40; 73,25; 99,92; 114,44; 115,42; 115,58; 122,96; 125,52; 130,56; 131,46; 144,21; 145,25; 142,36; 153,41; 155,85; 159,15; 172,00.
IR (KBr): 1266; 1512; 1581; 1618; 1751.
Herstellung 9: 7-Ethyl-7,8-dihydro-7-hydroxy-9H,11H-[1,3]dioxolo[4,5-g] oxepino [3',4': 6,7]indolizino(1,2-b]chinolin-9,12[14H]-dion
Diese Verbindung wird aus 3,4-Methylendioxyanilin gemäß der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Kremfarbener Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 5,20 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,00 (s, 1H); 6,30 (s, 2H); 7,30 (s, 1H); 7,49 (d, 2H); 8,45 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,43; 36,49; 42,56; 50,58; 61,42; 73,31; 98,87; 102,75; 103,33; 104,92; 121,76; 125,74; 128,59; 130,33; 145,08; 146,69; 148,78; 150,19; 151,49; 155,90; 159,24; 172,08.
IR (KBr): 1248; 1459; 1606; 1731.
Herstellung 10: 9-Chlor-5-ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-methoxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 3-Chlor-4-methoxyanilin nach der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Weißer Feststoff; Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 4,01 (s, 3H); 5,22 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,02 (s, 1H); 7,31 (s, 1H); 7,68 (s, 1H); 8,20 (s, 1H); 8,55 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,22; 36,27; 42,30; 50,48; 56,69; 61,23; 73,08; 99,16; 107,44; 122,16; 127,12; 128,12; 129,25; 130,02; 130,53; 143,29; 144,37; 151,12; 153,29; 155,71; 158,98; 171,84.
IR (KBr): 1056; 1256; 1483; 1592; 1657; 1747.
Herstellung 11: 5-Ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-methoxy-1H-oxepino[3'4': 6,7]indolizino [1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 4-Methoxyanilin gemäß der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 3,95 (s, 3H); 5,28 (s, 2H); 5,40 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,00 (s, 1H); 7,38 (s, 1H); 7,51 (d, 2H); 8,07 (d, 1H); 8,55 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,45; 36,48; 42,51; 50,64; 55,92; 61,42; 73,33; 99,01; 106,49; 122,02; 123,19; 129,59; 130,20; 130,43; 144,17; 144,94; 150,40; 155,92; 158,31; 159,26; 172,07.
IR (KBr): 1251; 1604; 1655; 1735.
Herstellung 12: 9,11-Dichlor-5-ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 3,5-Dichloranilin nach der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 5,30 (s, 2H); 5,41 (d, 1H); 5,55 (d, 1H); 6,08 (s, 1H); 7,41 (s, 1H); 8,05 (s, 1H); 8,21 (s, 1H); 8,91 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,39; 36,45; 42,51; 51,03; 61,39; 73,25; 100,62; 123,55; 124,63; 127,60; 128,08; 128,56; 132,06; 132,19; 134,53; 143,77; 148,80; 154,88; 155,82; 159,13; 171,98.
IR (KBr): 1064; 1275; 1586; 1651; 1743.
Herstellung 13: 5-Ethyl-9-fluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-methyl-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizi no[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 3-Fluor-4-methylanilin nach der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,89 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 2,49 (s, 3H); 3,08 (d, 1H); 3,49 (d, 1H); 5,21 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,05 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,87 (d, 1H); 8,05 (d, 1H); 8,61 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,40; 15,14; 36,45; 42,52; 50,60; 61,41; 73,28; 99,71; 112,00; 122,66; 125,38; 127,66; 129,59; 130,28; 144,49; 147,88; 152,88; 155,85; 159,18; 162,25; 172,02.
IR (KBr): 1054; 1580; 1651; 1760.
Herstellung 14: 5-Ethyl-10-fluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 4-Fluoranilin nach der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k, der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Weißer Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 5,29 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,55 (d, 1H); 6,30 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,80 (q, 1H); 7,99 (q, 1H); 8,23 (q, 1H); 8,68 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,40; 36,46; 42,48; 50,66; 61,41; 73,31; 99,68; 111,83; 122,75; 128,93; 130,93; 131,22; 131,93; 144,46; 145,27; 152,60; 155,89; 159,21; 172,04.
IR (KBr): 1209; 1589, 1659; 1739.
Herstellung 15: 10-Chlor-5-ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 4-Chloranilin nach der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,47 (d, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,05 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,89 (d,1H); 8,19 (d,1H); 8,29 (s,1H); 8,67 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,40; 36,46; 42,47; 50,70; 61,42; 73,31; 100,00; 122,96; 127,31; 127,42; 128,87; 131,11; 132,12; 144,34; 146,53; 153,38; 155,88; 159,20; 172,04.
IR (KBr): 1069; 1483; 1606; 1741.
Herstellung 16: 9-Chlor-5-ethyl-10-fluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Diese Verbindung wird aus 4-Chlor-3-fluoranilin nach der mit den Schritten 4.i., 4.j. und 4.k. der Herstellung 4 beschriebenen Methode erhalten. Gelber Feststoff, Schmelzpunkt > 250°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,45 (d, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,05 (s, 1H); 7,40 (s, 1H); 8, 20 (d, 1H); 8,40 (d, 1H); 8,68 (s, 1H).
*C-NMR (DMSO): 8,38; 36,47; 42,58; 50,71; 61,40; 73,26; 99,99; 113,59; 123,09; 124,28; 127,74; 130,64; 131,31; 144,13; 145,08; 153,57; 154,13; 155,84; 156,61; 159,14; 172,00.
IR (KBr): 1488; 1583; 1655; 1743.
Herstellung 17: 5,12-Diethyl-9-fluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-methoxy-1H-oxepino [3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
17.a. 5-Fluor-4-methoxy-2-propionylanilin
(Dieses Produkt wird erhalten gemäß Sugasawa T; Toyoda T, Adachi M; Sasakura K, J. Am. Chem. Soc. 100 (1978), S. 4842–4852.) Einer Lösung von 3-Fluor-4-methoxyanilin (20 g, 142 mmol) in wasserfreiem Dichlormethan (200 ml) unter Argonatmosphäre und bei 0°C wird tropfenweise Bortrichlorid (1 M in Heptan, 156 ml, 156 mmol) zugesetzt. Die auf diese Weise erhaltene rosafarbene Suspension wird 5 min unter Rühren gehalten, und dann wird tropfenweise Propionitril (33 ml, 420 mmol) zugesetzt, worauf Aluminiumtrichlorid (20,8 g, 156 mmol) in kleinen Portionen folgt. Das Reaktionsgemisch wird während 3 h unter Rückfluss erhitzt, auf 0°C gekühlt, hydrolysiert, indem vorsichtig Salzsäure 2 N (100 ml) zugesetzt wird, und dann 45 min zum Rückfluss gebracht. Nach Abkühlen auf 0°C erhält man einen Niederschlag, der filtriert, mit Dichlormethan gewaschen und dann in Wasser (300 ml) aufgenommen wird. Die wässrige Phase wird bis zu einem alkalischen pH basisch gemacht und mit Dichlormethan und dann mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄) und dann eingedampft, um ein Rohprodukt zu ergeben, das durch Säulenchromatographie gereinigt wird (SiO₂, AcOEt/Hpt: 1/99 bis 20/80). Man erhält 15,3 g eines gelben Feststoffs.
¹H-NMR (CDCl₃): 1,20 (t, 3H); 2,92 (q, 2H); 3,83 (s, 3H); 6,2 (s, 2H); 6,40 (d, 2H); 7,32 (d, 2H).
IR (KBr): 857; 1148; 1240; 1561; 1583; 1662.
17.b. 4-Ethyl-7-fluor-2-hydroxy-6-methoxy-3-chinolinethylcarboxylat
Einer Lösung von 5-Fluor-4-methoxy-2-propionylanilin (15,3 g, 77,5 mmol) und Triethylamin (13,9 ml, 100 mmol) in wasserfreiem Acetonitril (110 ml) unter Argon und bei 0°C setzt man tropfenweise eine Lösung von Ethylmalonylchlorid (12,9 ml, 100 mmol) in wasserfreiem Acetonitril (30 ml) zu. Man lässt das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur zurückkehren, setzt mit einer Kanüle tropfenweise unter Argon eine Natriumethylatlösung zu (hergestellt aus 1,8 g, 78 mmol Natrium in 80 ml Ethanol) und belässt dann 12 h bei Raumtemperatur unter Rühren. Man gießt das Reaktionsgemisch in Eiswasser (100 ml) und rührt zwei Stünden und filtriert dann den Niederschlag, der mit Wasser, Ethanol und Ether gewaschen wird. Man erhält 19,4 g eines weißen Feststoffs.
¹H-NMR (DMSO): 1,25 (m, 6H); 2,78 (q, 2H); 3,92 (s, 3H); 4,30 (q, 2H); 7,15 (d, 2H); 7,40 (d, 2H); 11,93 (s, 1H).
IR (KBr): 786; 1083; 1410; 1521; 1644; 1725.
17.c. 2-Chlor-4-ethyl-7-fluor-6-methoxy-3-chinolinethylcarboxylat
Man bringt während 6 h eine Suspension von 4-Ethyl-7-fluor-2-hydroxy-6-methoxy-3-chinolinethylcarboxylat (19,4 g, 0,066 mol) in Phosphorylchlorid (243 ml) zum Rückfluss. Man destilliert das Phosphorylchlorid. Man gießt die Reaktionsmischung in Eiswasser um. Man nimmt mit Dichlormethan auf, um zu solubilisieren. Man wäscht die organische Phase mit Wasser und dann mit einer gesättigten Natriumchloridlösung. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft das Lösungsmittel ab. Man bringt den Rückstand in Ether in Suspension und filtriert das nicht umgewandelte Ausgangsprodukt (4 g). Man dampft das Filtrat ein und reinigt den Rückstand durch Säulenchromatographie (SiO₂, AcOEt/Hpt. 5/95 bis 20/80). Man erhält 10,9 g eines weißen Feststoffs.
¹H-NMR (DMSO): 1,30 (t, 3H); 1,39 (t, 3H); 3,08 (q, 2H); 4,09 (s, 3H); 4,49 (q, 2H); 7,64 (d, 2H); 7,86 (d, 2H).
IR (KBr): 865; 1016; 1082; 1190; 1224; 1253; 1272; 1508; 1571; 1732.
17.d. 2-Chlor-4-ethyl-7-fluor-6-methoxy-3-chinolinmethanol
Eine Lösung von 2-Chlor-4-ethyl-7-fluor-6-methoxy-3-chinolinethylcarboxylat (10,8 g, 35 mmol) in wasserfreiem Dichlormethan (200 ml) wird tropfenweise bei Raumtemperatur unter Inertatmosphäre mit Diisobutylaluminiumhydrid (1M in Dichlormethan, 65 ml, 65 mmol) behandelt und dann während 4 h auf 40°C erhitzt. Man kühlt auf 0°C, setzt vorsichtig eine 20%-ige wässrige Rochelle-Salzlösung (105 ml) und Dichlormethan (200 ml) zu und belässt 1 h unter Rühren. Man dekantiert, wäscht dreimal mit Wasser, trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft das Lösungsmittel ab. Der Rückstand wird durch Säulenchromatographie gereinigt (SiO₂, AcOEt/Hpt: 5/95 bis 50/50). Man erhält 6 g eines weißen Feststoffs.
¹H-NMR (DMSO): 1,28 (t, 3H); 3,25 (q, 2H); 4,04 (s, 3H); 4,77 (d, 2H); 5,27 (t, 1H); 7,55 (d, 2H); 7,73 (d, 2H).
IR (KBr): 840; 864; 1023; 1232; 1267; 1317; 1444; 1511; 1569.
17e: 5,12-Diethyl-9-fluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-10-methoxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Das 2-Chlor-4-ethyl-7-fluor-6-methoxy-3-chinolinmethanol wird auf die im Schritt 4.j. der Herstellung 4 beschriebenen Weise mit der Verbindung (M) gekoppelt. Das gebildete Kopplungsprodukt wird nach dem Verfahren des Schritts 4.k. cyclisiert. Man erhält einen gelben Feststoff, Schmelzpunkt > 275°C
¹H-NMR (CF₃COOD): 1,07 (m, 3H); 1,62 (m, 3H); 2,27 (m, 2H); 3,44 (d, 1H); 3,54 (m, 2H); 3,91 (d, 1H); 4,25 (s, 3H); 5,60 (d, 1H); 5,74 (s, 2H); 5,98 (d, 1H); 7,85 (m, 1H); 8,16 (m, 1H); 8,31 (s, 1H).
¹³C-NMR (CF₃COOD): 9,03; 14,20; 26,68; 38,77; 43,98; 53,79; 58,27; 64,73; 77,93; 106,85; 109,24; 110,15; 128,99; 129,20; 131,61; 137,32; 141,23; 144,13; 154,79; 158,32; 160,25; 160,81; 179,30.
IR (KBr): 1013; 1068; 1265; 1466; 1514; 1601; 1655; 1748.
Herstellung 18: 5-Ethyl-4,5-dihydro-5-hydroxy-12-methyl-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Man wendet auf 2-Acetylanilin das in den Beispielen 17.b., 17.d. beschriebene Verfahren an, 17.c. und um 2-Chlor-4-methyl-3-chinolinmethanol zu erhalten. Dieses wird auf die im Schritt 4.j. der Herstellung 4 beschriebene Weise mit der Verbindung (M) gekoppelt. Das erhaltene Kopplungsprodukt wird nach dem Verfahren von Schritt 4.k. cyclisiert. Man erhält einen gelben Feststoff, Schmelzpunkt > 260°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,87 (t, 3H); 1,87 (q, 2H); 2,78 (s, 3H); 2,80 (d, 1H); 3,55 (d, 1H); 5,27 (s, 2H); 5,42 (d, 1H); 5,52 (d, 1H); 6,04 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,75 (t, 1H); 7,88 (t, 1H); 8,13 (d, 1H); 8,25 (d, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,23; 36,26; 42,36; 62,00; 73,11; 78,65; 79,13; 79,25; 99,52; 122,36; 124,30; 127,67; 129,54; 129,55; 129,56; 140,11; 145,06; 148,07; 152,00; 155,79; 159,09; 171,89.
IR (KBr): 1649; 1751; 3404.
Herstellung 19: 10-Benzyloxy-5-ethyl-9-fluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Man wendet auf 3-Fluor-4-methoxyacetanilid das im Schritt 4.i. als Beispiel beschriebene Verfahren an, um 2-Chlor-7-fluor-6-methoxychinolin-3-carbaldehyd zu erhalten, der mit einem Bortribromid-Überschuss in Dichlormethan bei Raumtemperatur während 24 Stunden behandelt wird. Man erhält 2-Chlor-7-fluor-6-hydroxychinolin-3-carbaldehyd, der in Dimethylformamid in Gegenwart von Benzylbromid und Kaliumcarbonat O-benzyliert wird, um 6-Benzyloxy-2-chlor-7-fluorchinolin-3-carbaldehyd zu ergeben, der mit Natriumborhydrid in Methanol reduziert wird, um das entsprechende Chinolinmethanol zu ergeben. Dieses wird auf die in Schritt 4.j. der Herstellung 4 beschriebene Weise mit der Verbindung (M) gekoppelt. Das gebildete Kopplungsprodukt wird nach dem Verfahren von Schritt 4.k. cyclisiert. Man erhält einen gelben Feststoff, Schmelzpunkt > 275°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,86 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,05 (d, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,37 (s, 2H); 5,45 (dd, 2H); 6,05 (s, 1H); 7,4–7,6 (m, 5H); 7,88 (d, 1H); 7,95 (d, 1H); 8,56 (s, 1H).
Herstellung 20: 5-Ethyl-9-fluor-4,5-dihydro-5,10-dihydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Man behandelt die Verbindung der Herstellung 19 (0,79 mmol), die in Trifluoressigsäure (15 ml) gelöst ist, mit Wasserstoff, in dem 10% Palladium auf Kohle (60 mg) verwendet wird. Man erhält einen gelben Feststoff, Schmelzpunkt > 275°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,86 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,05 (d, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,37 (s, 2H); 5,45 (dd, 2H); 6,05 (s, 1H); 7,8 (d, 1H); 7,90 (d, 1H); 8,56 (s, 1H).
Die oben beschriebenen Herstellungen dienen als Grundlage für die Veranschaulichung der Erfindung durch die folgenden Beispiele:
BEISPIEL 1:
5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-(2-amino-1-oxoethoxy)-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
a. 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-(2-(t-butyloxycarbonylamino)-oxoethoxy)-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dionchlorhydrat
Eine Mischung von 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion (200 mg, 0,526 mmol, hergestellt gemäß Herstellung 4), N-Boc-glycin (185 mg, 1,051 mmol) und einer katalytischen Menge von 4-Dimethylaminopyridin (20 mg) in wasserfreiem Pyridin (10 ml) wird bei 0°C unter Argon mit Dicyclohexylcarbodiimid (239 mg, 1,16 mmol) behandelt und dann während 48 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die flüchtigen Bestandteile werden unter Vakuum abgezogen und der Rückstand wird chromatographisch behandelt (SiO₂, 1% Methanol in Chloroform), um das gewünschte Zwischenprodukt (40 mg, 14%), einen gelben Feststoff, zu ergeben.
¹H-NMR (CDCl₃): 1,20 t, 3H); 1,38 (s, 9H); 1,40–1,70 (m, 2H); 3,10 (d, 1H); 4,00 (d, 2H); 4,30 (d, 1H); 5,00 (t, 1H); 5,20 (s, 2H); 5,30–5,90 (dd, 2H); 7,20 (s, 1H); 7,50–8,10 (m, 2H); 8,30 (s, 1H).
b. 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-(2-amino-1-oxoethoxy)-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dionchlorhydrat
Dem oben erhaltenen Zwischenprodukt (40 mg, 0,072 mmol), das in Dichlormethan (10 ml) gelöst ist und auf 0°C gehalten wird, wird tropfenweise mit Chlorwasserstoff gesättigtes Dioxan (8 ml) zugesetzt. Die auf diese Weise gebildete gelbe Suspension wird während 2 Stunden unter Rühren belassen, und dann werden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abgezogen. Der in Wasser (5 ml) aufgenommene Rückstand wird mit Dichlormethan (3 × 30 ml) gewaschen. Die wässrige Phase wird tiefgefroren und lyophilisiert, um das erwartete Salz, einen hygroskopischen gelben Feststoff (20 mg, 50%), zu ergeben.
¹H-NMR (CDCl₃): 1,00 (t, 3H); 2,15 (m, 1H); 2,30 (m, 1H); 3,60 (d, 1H); 3,90 (d, 1H); 4,15 (s, 2H); 5,10 (s, 2H); 5,40 (d, 1H); 5,70 (d, 2H); 7,40 (s, 1H); 7,80 (m, 2H); 8,50 (s, 1H).
BEISPIEL 2:
5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-(2-amino-1-oxopropoxy)-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion
Man wendet das Verfahren von Beispiel 1 auf 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-hydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H, 13H)-dion an, indem N-Boc-b-alanin anstelle von N-Boc-glycin verwendet wird, und spaltet dann das Schutz-Boc des auf diese Weise erhaltenen Zwischenprodukts durch eine Behandlung mit Trifluoressigsäure in Dichlormethan ab. Man dampft die flüchtigen Be standteile unter Vakuum ab und nimmt den Rückstand in Dichlormethan auf. Die gebildete Lösung wird mit verdünntem Bicarbonat gewaschen, getrocknet und eingedampft. Man erhält einen gelben Feststoff.
Unter Anwendung der Methode der Beispiele 1 und 2 auf andere Verbindungen erhält man ähnliche Ergebnisse. Auf diese Weise hat man Zugang zu einer ganzen Klasse von Analogen des Camptothecins in Prodrug-Form.
BEISPIEL 3:
1,8-Diethyl-8,9-dihydro-8-hydroxy-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f]oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-10,13(15H)-dion.
Eine Suspension von 5-Ethyl-4,5-dihydro-5,10-dihydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H, 13H)-dion (84 mg, erhalten gemäß Herstellung 5) in Essigsäure (2,5 ml) wird mit 1,3,5-Triethylhexahydrotriazin (0,5 ml). behandelt. Das Reaktionsgemisch wird während 30 min bei 70°C gerührt und dann unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit Ethanol aufgenommen, filtriert und mit Ether gewaschen. Man erhält einen Feststoff, Schmelzpunkt > 275°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,87 (t, 3H), 1,50 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 2,77 (q, 2H); 3,05 (d, 1H); 3,47 (d, 1H); 4,37 (s, 2H); 5,00 (s, 2H); 5,22 (s, 2H); 5,45 (dd, 2H); 6,00 (s, 1H); 7,34 (s, 1H); 7,36 (d, 1H); 7,93 (d, 1H); 8,53 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,46; 13,48; 36,46; 42,49; 45,49; 46,44; 50,75; 61,43; 73,33; 82,06; 99,02; 112,90; 122,00; 122,98; 125,42; 127,04; 129,04; 130,20; 144,09; 144,97; 149,87; 152,92; 155,98; 172,07.
IR (KBr): 1045; 1215; 1502; 1604; 1657; 1722.
BEISPIEL 4:
8-Ethyl-8,9-dihydro-8-hydroxy-1-methyl-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f]oxepino [3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-10,13(15H)-dion.
Eine Suspension von 5-Ethyl-4,5-dihydro-5,10-dihydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H, 13H)-dion (200 mg, erhalten gemäß Herstellung 5) in Essigsäure (5 ml) wird mit Hexahydro-1,3,5-trimethyltriazin (110 mg) behandelt. Das Reaktionsgemisch wird 30 min bei 70°C gerührt und dann unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit Ethanol aufgenommen, filtriert und mit Ether gewaschen. Man erhält einen Feststoff, Schmelzpunkt > 275°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,87 (t, 3H), 1,85 (q, 2H); 3,04 (d, 1H); 3,48 (d, 1H); 4,33 (s, 2H); 4,93 (s, 2H); 5,28 (s, 2H); 5,45 (dd, 2H); 6,01 (s, 1H); 7,35 (s, 1H); 7,38 (d, 1H); 7,94 (d, 1H); 8,49 (s, 1H).
¹³C-NMR (DMSO): 8,46; 36,43; 37,85; 42,55; 48,68; 50,79; 61,43; 73,35; 83,82; 99,04; 112,49; 122,04; 123,00; 125,46; 127,14; 129,07; 130,27; 144,99; 149,95; 152,46; 155,99; 172,09
IR (KBr): 1047; 1058; 1219; 1246; 1295; 1439; 1504; 1604; 1655; 1735.
BEISPIEL 5:
8-Ethyl-8,9-dihydro-8-hydroxy-1-benzyl-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f]oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-10,13(15H)-dion.
Eine Suspension von 5-Ethyl-4,5-dihydro-5,10-dihydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H,13H)-dion (200 mg, erhalten gemäß Herstellung 5) in Essigsäure (5 ml) wird mit 1,3,5-Tribenzylhexahydrotriazin (285 mg) behandelt. Das Reaktionsgemisch wird 30 min bei 70°C ge rührt und dann unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in Ethanol aufgenommen, filtriert und mit Ether gewaschen. Man erhält einen Feststoff, Schmelzpunkt > 275°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H), 1,85 (q, 2H); 3,05 (d, 1H); 3,47 (d, 1H); 3,96 (s, 2H); 4,33 (s, 2H); 5,04 (s, 2H); 5,17 (s, 2H); 5,44 (dd, 2H); 6,01 (s, 1H); 7,38 (m, 6H); 7,42 (d, 1H); 7,97 (d, 1H); 8,42 (s, 1H).
¹H-NMR (DMSO): 8,42; 19,96; 36,45; 42,51; 46,36; 50,78; 55,38; 61,39; 73,31; 99,00; 112,55; 122,01; 123,08; 125,38; 127,09; 127,47; 128,70; 129,14; 130,35; 128,40; 139,19; 144,18; 149,99; 152,84; 155,92; 159,24; 172,05.
IR (KBr): 1056; 1205; 1225; 1248; 1504; 1535; 1599; 1655; 1726.
BEISPIEL 6:
8-Ethyl-8,9-dihydro-4-fluor-8-hydroxy-1-benzyl-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f]oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-10,13(15H)-dion.
Eine Suspension von 5-Ethyl-9-fluor-4,5-dihydro-5,10-dihydroxy-1H-oxepino[3',4': 6,7)indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H, 13H)-dion (200 mg, erhalten gemäß Herstellung 20) in Essigsäure (5 ml) wird mit 1,3,5-Tribenzylhexahydrotriazin (285 mg) behandelt. Das Reaktionsgemisch wird 30 min bei 70°C gerührt und dann unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in Ethanol aufgenommen, filtriert und mit Ether gewaschen. Man erhält einen Feststoff, Schmelzpunkt > 275°C.
¹H-NMR (DMSO): 0,85 (t, 3H), 1,85 (q, 2H); 3,05 (d, 1H); 3,48 (d, 1H); 3,95 (s, 2H); 4,45 (s, 2H); 5,20 (s, 4H); 5,45 (dd, 2H); 6,05 (s, 1H); 7,40 (s, 7H); 7,90 (d, 1H); 8,45 (s, 1H).
IR (KBr): 1248; 1451; 15001; 1598; 1657, 1727.
Pharmakologische Untersuchung der erfindungsgemäßen Produkte
Untersuchung der durch die Topoisomnerase 1 induzierten DNA-Relaxationswirkung
Alle Reaktionen werden in einem Reaktionspuffer von 20 μl durchgeführt, der aus 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM KCl, 0,5 mM Dithiothreitol, 10 mM MgCl₂, 0,1 mM Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), 30 μg/ml Rinderserumalbumin und 300 ng superspiralisiertes pUCl9 (Pharmacia Biotech, Orsay, Frankreich) mit oder ohne Testverbindungen in bestimmten Konzentrationen besteht. Alle Testverbindungen sind anfangs in 50 mM Dimethylsulfoxid (DMSO) oder, bei wasserlöslichen Verbindungen, in Wasser gelöst, wobei die anderen Verdünnungen in destilliertem Wasser durchgeführt wurden. Die endgültige DMSO-Konzentration überschreitet nicht 1% (v/v). Die Reaktion wird durch ein gestaltetes Zusetzen von einer Topoisomerase 1 der DNA aus gereinigtem Kalbs-Thymus (Life technologies/Gibco-BRL, Paisley, England) ausgelöst, daß die Reaktion bei 37°C in 15 Minuten vollständig ist. Die Reaktionen werden durch Zusatz von 3 μl einer Mischung gestoppt, die 1%iges Natriumdodecylsulfat, 20 mM EDTA und 500 μg/ml Proteinase K (Boehringer Mannheim, Meylan, Frankreich) enthält. Nach einer zusätzlichen Inkubationszeit von 30 Minuten bei 37°C werden 2 μl eines Ladungspuffers, der 10 mM Na₂HPO₄, 0,3%iges Bromphenolblau und 16%iges Ficoll enthält, den Proben zugesetzt, die während 20 Stunden einer Elektrophorese in 1,2%igen Agarose-Gels mit 1 V/cm in einem Puffer ausgesetzt werden, der 36 mM Tris-HCl pH 7,8, 30 mM Na₂HPO₄, 1 mM EDTA und 2 μg/ml Chlorochin enthält. Die Gels werden mit 2 μg/ml Ethidiumbromid gefärbt, unter UV-Licht mit 312 nm mit einer CCD-Camera (charge coupled device) photographiert, und die Fluoreszenzstärke wird mit Hilfe eines Bildanalysiergeräts bioProfil (Vilber Lourmat, Lyon, Frankreich) gemessen, um den Prozentsatz der entspannten DNA zu bestimmen.
Bei jedem Test wird die superspiralisierte Plasmid-DNA allein oder mit Topoisomerase 1 inkubiert. Die Reaktion ist im Zeitraum von 15 Minuten vollständig. Bei jeder Testverbindung oder Vergleichsverbindung (Vergleichsverbindung nennt man den Träger allein) wird die superspiralisierte Plasmid-DNA in Gegenwart der für den Test gewählten Höchstkonzentration der Testverbindung oder der Vergleichsverbindung ohne Enzym oder in Gegenwart der Testverbindung in Konzentrationen von 1 μM bis 200 μM oder der Vergleichsverbindung und in Gegenwart von Enzymen inkubiert. Wie in der Tabelle I angegeben wird, inhibieren die Beispiele 3 bis 6 die durch die Topoisomerase 1 begünstigte Relaxationswirkung in einer dosisabhängigen Weise.
TABELLE 2

Claims

Eine Verbindung, dadurch gekennzeichnet, daß diese Verbindung der Formel (I) ist:
in racemischer Form, Enantiomerform oder allen Kombinationen dieser Formen, in der R₁ eine Ethylgruppe darstellt; R₂ H oder Halogen darstellt; R₃ H, Niederalkyl, Halogen oder OR₆ darstellt, worin R₆ H, Niederalkyl oder Arylniederalkyl darstellt; R₄ H oder – (CH₂)_mNR₆R₇ darstellt, worin R₆ und R₇ unabhängig voneinander H oder Niederalkyl darstellen; R₅ H, Niederalkyl oder – (CH₂)_n[N≈ X], substituiert oder nicht substituiert, darstellt und [N ≈ X] eine Piperidyl-, Morpholinyl-, Piperazinyl- oder Indolyl-Gruppe darstellt und der Substituent Niederalkyl ist; oder R₃ und R₄ einen Oxazin-Ring bilden, der ggf. an dem Stickstoffatom durch einen Rest R₉ substituiert ist, der Niederalkyl darstellt; R_p H oder eine leicht abspaltbare Gruppe der Formel -C(O)–(A₁)-NH₂ darstellt, in der A₁(CH₂)_m oder einen verzweigten Niederalkylrest darstellt; m eine ganze Zahl zwischen 0 und 6 ist; n 1 oder 2 ist; wobei, wenn R_p ein Wasserstoffatom ist, R₃ und R₄ zusammen einen ggf. substituierten Oxazin-Ring bilden, und, wenn der Ausdruck "Nieder" sich auf Alkyl oder Alkylen bezieht, dieser höchstens 6 Kohlenstoffatome bedeutet; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Eine Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R₃ und R₄ einen ggf. substituierten Oxazin-Ring bilden; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Eine Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R_p eine leicht abspaltbare Gruppe ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Eine Verbindung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß diese Verbindung aus den Verbindungen ausgewählt ist, die den folgenden Formeln entsprechen: – 1,8-Diethyl-8,9-dihydro-8-hydroxy-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chi nolin-10,13(15H)-dion; – 8-Ethyl-8,9-dihydro-8-hydroxy-1-methyl-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f]oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]-chinolin-10,13(15H)-dion; – 8-Ethyl-8,9-dihydro-8-hydroxy-1-benzyl-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f]oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]-chinolin-10,13(15H)-dion; – 8-Ethyl-8,9-dihydro-4-fluor-8-hydroxy-1-benzyl-2H,10H,12H-[1,3]oxazino[5,6-f]oxepino[3',4' :6,7]-indolizino[1,2-b]chinolin-10,13(15H)-dion; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Eine Verbindung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß diese Verbindung aus den Verbindungen ausgewählt ist, die den folgenden Formeln entsprechen: – 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-(2-amino-1-oxoethoxy)-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]chinolin-3,15(4H, 13H)-dion; – 5-Ethyl-9,10-difluor-4,5-dihydro-5-(2-amino-1-oxopropoxy)-1H-oxepino[3',4': 6,7]indolizino[1,2-b]-chinolin-3,15(4H, 13H)-dion; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Eine Verbindung nach einem der vorhergehenden Ansprüche oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon in Form eines Medikaments.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die als Wirkstoff mindestens eine der Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 5 enthält.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 5 für die Herstellung von antitumoralen Medikamenten.
Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel Ia, die den Produkten der Formel I entsprechen, in der R₃ und R₄ einen Oxazin-Ring bilden, nach einem der Ansprüche 1, 2 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß: – man eine β-Hydroxylacton-Verbindung der allgemeinen Formel D
in der R₃ ein Hydroxyl-Rest ist, R₄ H ist, und R₁ und R₂ die oben angegebene Bedeutung haben, mit einem primären Amin unter Mannich-Bedingungen behandelt, um eine β-Hydroxylacton-Verbindung der allgemeinen Formel Ia zu erhalten,
in der R₁, R₂, R₅ und R₉ die oben angegebene Bedeutung haben.
Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel Ib, die den Produkten der Formel I entsprechen, in der R_p nicht ein Wasserstoffatom ist, nach einem der Ansprüche 1, 2, 3 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß: – man die Verbindung der allgemeinen Formel D
mit einem Derivat des Rests -C(O)-A₁-NH₂, wie in Anspruch 1 definiert, acyliert, um die β-Hydroxylacton-Verbindung der allgemeinen Formel I zu erhalten, worin R_p von H verschieden ist.