DE69719958T2

DE69719958T2 - Verfahren zur herstellung eines autologen fibrinklebers

Info

Publication number: DE69719958T2
Application number: DE69719958T
Authority: DE
Inventors: Carlo Benincasa; Rocco Iannini; Walter Rao; Flavio Tarantino
Original assignee: CLAROL A G
Current assignee: CLAROL A G
Priority date: 1996-09-18
Filing date: 1997-09-13
Publication date: 2003-12-11
Anticipated expiration: 2017-09-14
Also published as: ATE234644T1; WO1998011925A1; AU4459697A; IT1284550B1; EP0877632A1; EP0877632B1; DE69719958D1; ITMI961914A1; ES2194219T3

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum Bereitstellen eines autogenen Fibrinklebstoffs zur chirurgischen Verwendung, und insbesondere auf ein Verfahren mit einem geschlossenen System, das es erlaubt, einen gebrauchsfertigen Fibrinklebstoff zu erzielen, das es vermeidet, Blut oder seine Derivate der Wirkung von externen Kontaminanten zu unterwerfen.
Fibrinklebstoff bovinen oder menschlichen Ursprungs war seit langer Zeit bekannt und wurde erfolgreich unter verschiedenen chirurgischen Bedingungen eingesetzt. Fibrin ist eine Substanz eiweißartiger Natur und entsteht aus der chemischen Transformation von Fibrinogen, einem in Blutplasma mit einem Molekulargewicht von etwa 320.000 D gelösten Glykoprotid (stickstoffhaltige, organische Substanz), das während des Koagulationsvorganges durch das Enzym Thrombin in eine stabile fasrige Struktur gebracht wird, nämlich die Fibrinstruktur.
Klebstoff, der von Fibrin erzielt ist, übt seine Wirkung durch die schnelle und dauerhafte Verbindung von verschiedenen biologischen Komponenten aus, insbesondere von Geweben, wie Haut, subkutanen Schichten, Muskelbündeln, Gefäßen, Prothesen und Organen wie Leber, Milz, Niere, Lunge. Darüber hinaus kann dieser Klebstoff als Substitut oder Integration chirurgischer Nähte und deren Schutz vor Wasser verwendet werden.
Die zahlreichen chirurgischen Verwendungen dieses Klebstoffs entstehen aus seinen Hauptaktivitäten, wie klebenden, hämostatischen, reparativen und füllenden Merkmalen. Im Hinblick auf seine Klebwirkung wird dieser Klebstoff verwendet bei:
- Füllen von durch Abtragen des sinualen Endosteums erzeugten Räumen, da der Klebstoff zusammen mit Kalziumhydroxitapatit die Regeneration reifer Knochen stimuliert, insbesondere zum Füllen von Knochenzysten;
- Behandlung von Liquoralfistulae;
- Trommelfellplastiken;
- Verbindung von parenchymatösem Gewebe in Operationen von Niere, Leber, Milz, Pankreas, Lunge;
- Verkleben vaskularer Enden miteinander oder mit Prothesen, insbesondere als Stützung und Wasserabdichtung von Nähten;
- Verbindung peripherer Nerven in mikrochirurgischen Operationen, beispielsweise des Armplexus;
- Verkleben von Hauttransplantaten, paradontaler Ränder und anderer.
Darüber hinaus zeigte Fibrinklebstoff bei all diesen Operationen hämostatische Wirkung, was die Hämorrhagie während und nach der Operation vermindert. Eine derartige Eigenschaft erwies sich insbesondere in Operationen als nützlich, bei denen Hämorrhagie durch die Anwesenheit von Hohlräumen begünstigt wird, in denen Hämostase schwierig ist, wie Postextraktions-Knochenhohlräume beispielsweise in Einschlüssen, Zysten, Apikotomien, Prostatekomien und Post- Tonsillektomien.
WO 91/09573 bezieht sich auf ein System zur Verwendung bei der Herstellung autogener Fibrinabdichtungen und ein Verfahren mit einem Prezipitationsschritt unter Einsatz von Fibronogenenprezipitationsmitteln.
US Nr. 4,714,457 bezieht sich auf ein Verfahren und eine Vorrichtung zur Verwendung bei der Herstellung von Fibrinogen aus dem Blut eines Patienten mit einem Kryoprezipitationsschritt zur Prezipitation von Fibrinogen.
Der am häufigsten verwendete Fibrinklebstoff ist unter dem Handelsnamen "Tissucol" bekannt und wird durch Kryoprezipitation bovinen oder menschlichen Bluts hergestellt. Die industrielle Herstellung des Klebstoffs ist langwierig und ergibt ein handelsüblich verfügbares Produkt mit ziemlich hohen Kosten.
Als Stand der Technik gibt es ebenso weitere Fibrinklebstoffe, die durch Konzentration von Thrombozyten und Derivativen erhalten sind, stets ausgehend von bovinem oder menschlichem Blut.
Diese Herkunft des Bluts verursacht, dass die Herstellung der bekannten Fibrinklebstoffe unter das gegenwärtig in hohem Umfang empfundene Problem der Möglichkeit der Übertragung bekannter oder unbekannter Viren oder anderer Krankheiten fällt.
Daher ist es im Hinblick auf die wachsende Nachfrage und in manchen Fällen die Notwendigkeit nach Produkten autogenen Usprungs eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zum Herstellen autogenen Fibrinklebstoffs zur chirurgischen Verwendung zu schaffen.
Das Verfahren zur autogenen Herstellung des Fibrinklebstoffs ermöglicht ebenso, nicht gegen Hindernisse und/oder Überzeugungen ethischer und/oder religiöser Natur zu verstoßen, da es nicht Patientenblut verwendet, sondern nur eine daraus extrahierte und separierte, chemische Verbindung.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung des Fibrinklebstoffs, das preisgünstig ist und eine schnelle Herstellung des Produkts ermöglicht, das gebrauchsfertig ist.
Noch eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung, das die Möglichkeit gibt, dass Grundprodukt von autogenem Fibrinklebstoff herzustellen und dann das Grundprodukt im Hinblick auf eine nachfolgende Verwendung einzufrieren.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist ein Verfahren, das es ermöglicht, Fibrinklebstoff in der durch den Fall erforderlichen Menge zu erhalten, was Gefahren übermäßiger Dosierung vermeidet, da es möglich ist, eine Blutprobe in einer mit der Menge autogenen Fibrinklebstoffs, den man herstellen möchte, konsistenten Menge zu erhalten.
Somit bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren zum Herstellen bzw. Bereitstellen eines autogenen Fibrinklebstoffs zur chirurgischen Verwendung, das durch die Tatsache gekennzeichnet ist, dass es die Schritte aufweist:
a) Schaffen einer Menge einer Blutprobe, die mit der benötigen Menge von Fibrinklebstoff konsistent ist, unkoagulierbar durch Hinzufügen eines Antikoaguliermittels, wodurch eine unkoagulierbare Blutprobe bereitgestellt wird;
b) Platzieren der unkoagulierbaren Blutprobe in einem Zentrifugentestrohr und Unterwerfen derselben einer Zentrifugation, um das Surnatant zu trennen, das hauptsächlich aus Blutplasma besteht, welches Fibrinogen aufweist;
c) Trennen des Surnatants durch eine geeignete Vorrichtung, die mit einem Filter ausgestattet ist;
d) Platzieren des Surnatants in einem Testrohr, das mit einer Filtermembran ausgestattet ist, und Unterwerfen einer Zentrifugation in einer Zentrifuge, die zum Aufnehmen des Testrohrs ausgelegt ist, wodurch Fibrinogen in dem Plasma durch Trennen desselben von einem gefilterten Rest konzentriert wird;
e) Unterwerfen des Plasmas einem Gefrieren zur Lagerung und/oder zur Behandlung im nachfolgenden Schritt f);
f) Mischen des durch Zentrifugation erhaltenen oder getauten Plasmas mit einem geeigneten Auslöser, um Fibrinklebstoff zu erhalten, und mit einem antifibrinolytischen Mittel, wodurch der Fibrinklebstoff erhalten wird.
Die Merkmale des Verfahrens zur Herstellung autogenen Fibrinklebstoffs gemäß der Erfindung werden besser im Verlauf der nachfolgenden ausführlichen Beschreibung veranschaulicht.
Das Verfahren bezieht sich auf die Herstellung autogenen Fibrinklebstoffs zur chirurgischen Verwendung.
Man nimmt bevorzugt eine Menge einer venösen Blutprobe von 20 ml, die durch Hinzufügen eines Antikoagulationsmittels, beispielsweise 1 ml Natriumzitrat oder andere Antikoagulationsmittel wie EDTA (Äthylendiaminotetrazetatsäure) oder Heparin, unkoagulierbar gemacht wird.
Die derart erhaltene Probe wird in zwei Testrohre mit jeweils 10 ml gegeben und in einer herkömmlichen Laborzentrifuge bei 2000 U/min für etwa 5 Minuten zentrifugiert.
Diese Zentrifugation ergibt eine erste Trennung des Blutplasmas von dem Festblutanteil, der hauptsächlich Erythrozyten enthält.
Dann wird das Surnatant von dem Testrohr durch eine Filtervorrichtung entnommen, beispielsweise eine Spritze, die einen Filter besitzt, wobei die Porenabmessungen bevorzugt zwischen 0,22 um und 0.45 um liegen.
Um eine weitere Trennung des Blutplasmas von dem verbleibenden Festanteil zu erzielen, wird das in ein Testrohr platzierte Filtrat einer weiteren Zentrifugation, bevorzugt bei 2500 U/min für eine Stunde, unterworfen.
Das Testrohr ist mit einer Filtermembran ausgestattet, die dazu ausgelegt ist, Partikel mit Abmessungen zwischen 80.000 und 300.000 D zu filtern. Das Testrohr wird für die zweite Zentrifugation des oben genannten Schritts d) in eine Zentrifuge für Testrohre mit 10 ml platziert, jedoch mit derart modifiziertem Kopf, um Testrohre mit 50 ml aufzunehmen.
Das derart erhaltene Grundprodukt ist im wesentlichen durch Fibrinogen und Koagulationsfaktoren gebildet und kann in Fibrinklebstoff bevorzugt innerhalb von 12 Stunden umgewandelt werden.
Das Grundprodukt wird gemäß einer zweiten Ausführungsform für nachfolgenden erwarteten Gebrauch bei -18ºC eingefroren und für eine maximale Dauer von etwa 12 Monaten gelagert. Das Produkt muss, nachdem es getaut ist, bevorzugt innerhalb von 36 Stunden verwendet werden. Das Produkt, das entweder zur sofortigen Verwendung erhalten ist oder aufgetaut ist, wird mit einem Starter, bevorzugt handelsüblich verfügbarem Thrombin tierischen oder menschlichen Ursprungs, für seine Umwandlung in Fibrin und gleichzeitig und/oder nachfolgend mit einem antifibrinolytischen Mittel, bevorzugt Tranexamsäure, zum Erhalten autogenen Fibrinklebstoffs geeigneter Konzentration gemischt.
Eine dritte Ausführungsform der Erfindung besteht im Nehmen kleiner Mengen venöser Blutproben von bevorzugt 5 ml, die schnell konzentriert werden, um kleine Mengen einer sehr starken Zubereitung zu erhalten, die für den Gebrauch mit dem Verfahren der Erfindung bereit ist.
Obwohl die vorhergehenden Ausführungsformen des Verfahrens es ermöglichen, autogenen Fibrinklebstoff zu erhalten, erfordern sie eine angemessene Menge manueller Vorgänge und sind besonders geeignet zum Herstellen kleiner Mengen von Fibrinklebstoff für kleine chirurgische Vorgänge, da sie an die Verwendung von Testrohren, somit an Proben von allgemein etwa 20 ml, gebunden sind.
Eine vierte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ermöglicht es, ein Verfahren zur Herstellung autogenen Fibrinklebstoffs mit einem geschlossenen System durchzuführen, um größere Mengen von Fibrinklebstoff zu erzeugen, die selbst im Falle von Operationen einer bestimmten Relevanz ausreichend sind und gleichzeitig manuelle Eingriffe vermindern, was jegliches Aussetzen von Blut oder seinen Derivaten der Wirkung externer Kontaminanten vermeidet.
Dieses geschlossene System umfasst im wesentlichen drei Beutel, nämlich einen ersten Beutel oder Mutterbeutel, wo das vom Patienten entnommene Blut gesammelt wird, einen mit einer horizontalen Membran ausgestatteten zweiten Beutel, wo eine Plasmaultrazentrifugation durchgeführt wird, und einen dritten Beutel, der mit einem vertikalen Diaphragma ausgestattet ist, von welchem die in den zwei Beutelteilen enthaltenen Inhaltsstoffe gleichzeitig entnommen werden und sich in einer Anschlusspendervorrichtung treffen, wo die Herstellung des Fibrinklebstoffs im selben Moment wie sein Gebrauch durchgeführt wird.
Das geschlossene System wird nun ausführlicher unter Bezugnahme auf das veranschaulichende Diagramm beschrieben, das in der einzigen Figur der begleitenden Zeichnung gezeigt ist.
Die Beutel und Armaturen werden selbstverständlich aus den am meisten geeigneten Materialien und insbesondere aus nichtallergischen, perfekt sterilen Kunststoffen chirurgischer Qualität hergestellt sein.
Darüber hinaus können die Beutel und die Armaturen in verschiedenen Standardabmessungen zum Behandeln standardisierter Blutmengen hergestellt sein, beispielsweise geeignete zur Aufnahme von Proben mit 50, 100, 200 ml etc.
Das Verfahren gemäß der vierten Ausführungsform der Erfindung umfasst die folgenden Schritte, unter Bezugnahme auf das veranschaulichende Diagramm der beigefügten Zeichnung:
a) eine ausreichende Menge einer gesamten Blutprobe wird durch einen venösen Einlass zugeführt und strömt in den Mutterbeutel 2, wo sie mit dem Antikoaguliermittel (CPD, ACD und dergleichen), das in dem Beutel enthalten ist, gemischt wird;
b) nachdem der venöse Einlass 1 abgedichtet worden ist, wird der Zellteil des Plasmas durch Zentrifugation in einer Zentrifuge mit oszillierende Körben getrennt;
c) mittels eines Beutelquetschers wird das Plasma zu dem zweiten Beutel 3 gefördert, der Verbindungsschlauch 4 wird mit einem thermischen Beutelschweißer abgedichtet, und der konzentrierte Erythrozyten enthaltende Mutterbeutel 2 wird gelöst und beseitigt;
d) der das Plasma enthaltende Beutel 3 ist mit einer horizontalen Membran 5 ausgestattet, die es nach angemessener Zentrifugationsdauer bei geeigneter Drehzahl erlaubt, in dem oberen Teil 6 des Beutels 3 ein mit Plasma angereichertes Fibrinogen zu erhalten, während in dem unteren Teil 7 der ultrafiltrierte Rest durch einen geeigneten Ausgang 16 entnommen werden kann;
e) das mit Fibrinogen angereicherte Plasma wird (durch Schwerkraft in der vorbestimmten Menge) in den dritten Beutel 8 übertragen und der entsprechende Verbindungsschlauch 9 wird mit derselben Technik wie in Schritt c) beschrieben, abgedichtet. Der dritte Beutel 8 besteht aus zwei Teilen, die durch ein vertikales Diaphragma 10 geteilt sind, von denen ein Teil 11 (wohin das mit Fibrinogen angereicherte Plasma übertragen worden ist) eine geeignete Menge einer Substanz mit antifibrinolytischer Wirkung wie Aportinin enthält, während der andere Teil 12 eine geeignete Menge einer Lösung von Thrombin und Kalziumchlorid enthält;
f) gleichzeitiges Quetschen (manuell oder mittels einer speziellen Vorrichtung) der zwei Teile 11, 12 dieses letzten Beutels 8 ermöglicht das Fördern der darin enthaltenen Substanzen durch zwei Kunststoffverbindungen 13, 14 zu einer Anschlussnadel 15, was die endgültige, sofortige Herstellung und Verwendung des gebrauchsfertigen Fibrinklebstoffs ermöglicht.
Es ist offenbar möglich, falls es erforderlich sein sollte, sowohl die in dem Mutterbeutel 2 enthaltenen, konzentrierten Erythrozyten als auch das in dem unteren Teil des mit der Membran 5 ausgestatteten Beutels 3 enthaltene Ultrafiltrat zu verwenden.
Es ist möglich, den dritten Beutel 8 oder Spender mit dem Beutel 3, der mit der Membran 5 ausgestattet ist, durch ein Ausflusselement gerade kurz vor der Verwendung des Fibrinklebstoffs zu verbinden, um zu vermeiden, dass der Spender während verschiedener Arbeitsphasen betätigt wird.
Schließlich kann der dritte Beutel 8 oder Spender mit einer äußeren Hülle verschlossen und getrennt von dem Rest des Systems sterilisiert werden, so dass die absolute Sterilität, auch nach außen bis zum Moment des Gebrauchs bewahrt werden kann.
Die Menge der Substanz mit antifibrinolytischer Wirkung, die in Teil 11 des dritten Beutels 8 enthalten ist, beträgt etwa 3000 UIK/ml, wenn die Substanz Aprotinin ist. Die Menge der Lösung von Thrombin und Kalziumchlorid, die in dem anderen Teil 12 des dritten Beutels 8 enthalten ist, beträgt etwa 50 UI Thrombin/ml und 40 umols CaCl/ml.
Es ist klar, dass an dem Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung und dem relevanten geschlossenen System all diejenigen Veränderungen, Hinzufügungen und Substitutionen von Elementen vorgenommen werden können, die dem Fachmann ersichtlich sind, ohne allerdings von ihrem Schutzbereich abzuweichen, noch aus dem Schutzbereich herauszufallen, wie er in den beigefügten Ansprüchen definiert ist.

Claims

1. Verfahren zum Bereitstellen eines autogenen Fibrinklebstoffs, dadurch gekennzeichnet, dass es die Schritte umfasst:

g) Schaffen einer Menge einer Blutprobe, die mit der benötigen Menge von Fibrinklebstoff konsistent ist, unkoagulierbar durch Hinzufügen eines Antikoaguliermittels, wodurch eine unkoagulierbare Blutprobe bereitgestellt wird;

h) Platzieren der unkoagulierbaren Blutprobe in einem Zentrifugentestrohr und Unterwerfen derselben einer Zentrifugation, um das Surnatant zu trennen, das hauptsächlich aus Blutplasma besteht, welches Fibrinogen aufweist;

i) Trennen des Surnatants durch eine geeignete Vorrichtung, die mit einem Filter ausgestattet ist;

j) Platzieren des Surnatants in einem Testrohr, das mit einer Filtermembran ausgestattet ist, und Unterwerfen einer Zentrifugation in einer Zentrifuge, die zum Aufnehmen des Testrohrs ausgelegt ist, wodurch Fibrinogen in dem Plasma durch Trennen desselben von einem gefilterten Rest konzentriert wird;

k) Unterwerfen des Plasmas einem Gefrieren zur Lagerung und/oder zur Behandlung im nachfolgenden Schritt f);

l) Mischen des durch Zentrifugation erhaltenen oder getauten Plasmas mit einem geeigneten Auslöser, um Fibrinklebstoff zu erhalten, und mit einem antifibrinolytischen Mittel, wodurch der Fibrinklebstoff erhalten wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt a) das Blut mittels Natriumzitrat, EDTA (Ethylendiamintetraessig-Säure) oder Heparin unkoagulierbar gemacht wird.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Menge der Blutprobe gemäß Schritt a) 20 ml ist.

4, Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Blut mit einer Menge von 1 ml Natriumzitrat unkoagulierbar gemacht wird.

5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt b) die Blutprobe in Testrohren von 10 ml platziert wird und Zentrifugation bei 2000 g für eine Dauer von 5 Minuten unterworfen wird.

6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Filtervorrichtung aus Schritt c) eine Spritze mit einem Filter ist, der eine Porengröße zwischen 0,22 um und 0,45 um besitzt.

7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Zentrifugation aus Schritt d) des Verfahrens bei 2500 U/min für eine Stunde stattfindet.

8. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Testrohr für die Zentrifugation aus Schritt d) des Verfahrens ein Testrohr ist, das eine Filtermembran besitzt, die Partikel einer Größe zwischen 80.000 D und 300,000 D filtert.

9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Zentrifuge zum Durchführen von Schritt d) des Verfahrens einen Kopf besitzt, der zum Aufnehmen von Testrohren größerer Abmessung modifiziert ist.

10. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das zentrifugierte Basisprodukt bei -18-º C für eine maximale Dauer von 12 Monaten eingefroren werden kann.

11. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Auslöser aus Schritt d) des Verfahrens handelsüblich verfügbares Thrombin tierischen oder menschlichen Ursprunges ist.

12. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das antifibrinolytische Mittel aus Schritt e) Tranexamsäure oder Aprotinin ist.

13. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Blutmenge nach Schritt a) 5 ml ist, um eine sehr robuste Zubereitung für sofortigen Gebrauch zu erhalten.

14. Verfahren zur Herstellung autogenen Fibrinklebstoffs in einem geschlossenen System durch die Verwendung von drei unterschiedlichen Kunststoffbeuteln, die mit abgedichteten Rohren miteinander verbunden sind, gekennzeichnet durch die folgenden Schritte:

- in dem ersten Beutel wird eine Blutprobe mit einem Antikoalugationsmittel gemischt, dann wird Plasma von Erythrozyten durch Zentrifugation getrennt, nachdem der venöse Einlass abgedichtet worden ist;

- das Plasma wird in den zweiten Beutel übertragen, der mit einer horizontalen Membran ausgestattet ist, und nachdem das Verbindungsrohr abgedichtet worden ist, wird mit Fibrinogen angereichertes Plasma durch Ultrazentrifugation in dem oberen Teil des zweiten Beutels getrennt, während der ultrafiltrierte Rest in dem unteren Teil verbleibt;

- das mit Fibrinogen angereicherte Plasma wird zu einer von zwei Kammern übertragen, welche den dritten Beutel bilden, der mit einem vertikalen Diaphragma ausgestattet, ist, wo es mit einer geeigneten Menge einer Substanz mit antifibrinolytischer Wirkung gemischt wird, während die andere Kammer eine Lösung aus Thrombin und Kalziumchlorid enthält, und die Verbindung zwischen dem zweiten und dem dritten Beutel wird abgedichtet; und

- die Inhalte der zwei Kammern des dritten Beutels werden gleichzeitig extrahiert und treffen sich in einer Anschlussnadel, wodurch eine sofortige Zubereitung des Fibrinklebstoffs erzielt wird, der zur Verwendung bereit ist.

15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindungsrohre durch einen thermischen Beutelschweißer abgedichtet sind.

16. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Substanz mit antifibrinolytischer Wirkung Aprotinin bei einer Konzentration von etwa 3000 UIK/ml ist.

17. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Thrombinmenge, die in der Lösung des dritten Beutels enthalten ist, etwa 400 UI/ml ist, und Kalziumchlorid beträgt 40 umol/ml.

18. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die konzentrierten Erythrozyten, die in dem ersten Beutel enthalten sind, und das Ultrafiltrat, das in dem unteren Teil des zweiten Beutels enthalten ist, für weitere Arbeitsvorgänge verwendet werden können.

19. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass der dritte Beutel oder andere Spender mit dem zweiten Beutel verbunden sein können, durch ein Ausgusselement, kurz bevor der Fibrinkleber verwendet wird, um deren Beeinträchtigung während der vorhergehenden Arbeitsphasen zu vermeiden.

20. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass der dritte Beutel oder der Spender mit einem äußeren Umschlag verschlossen sind und getrennt von dem Rest des Systems sterilisiert werden, um auch außerhalb des Zeitpunkts der Verwendung die Sterilität aufrechtzuerhalten.

21. Geschlossenes System zum Durchführen des Verfahrens nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass es drei miteinander durch abdichtbare Verbindungsrohre verbundene Beutel aufweist, nämlich:

- einen ersten Beutel oder Mutterbeutel, der mit einem venösen Einlass ausgestattet ist, an dem eine Blutprobe zugeführt wird, und eine erste Zentrifugation wird durchgeführt, um Plasma von Erythrozyten zu trennen;

- ein mit einer horizontalen Membran ausgestatteter zweiter Beutel, in welchem die Ultrazentrifugation des Plasmas derart ausgeführt wird, um mit Fibrinogen angereichertes Plasma in dem oberen Teil des Beutels zu trennen, während der ultrafiltrierte Rest in dessen unteren Teil gesammelt wird; und

- einen dritten Beutel, der mit einem vertikalen Diaphragma ausgestattet ist, welches diesen in zwei Kammern teilt, in einer von denen das mit Fibrinogen angereicherte Plasma übertragen wird und mit einer Substanz gemischt wird, die antrifibrinolytische Wirkung besitzt, während es in der anderen Kammer eine Lösung aus Thrombin und Kalziumchlorid gibt, wobei jede Kammer des dritten Beutels mit einem Verbindungsrohr ausgestattet ist, die sich in einer gemeinsamen Anschlussspendervorrichtung treffen, so dass gleichzeitiges Quetschen der zwei Kammern die Inhalte der zwei Kammern mischt und es wird die sofortige Zubereitung des einsatzbereiten, autogenen Fibrinklebstoffs erhalten.

22. System nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, dass die Beutel und die Verbindungen aus nichtallergischen, perfekt sterilen Kunststoffen chirurgischer Qualität hergestellt sind.

23. Verwendung des geschlossenen Systems nach Anspruch 21 zur Zubereitung einsatzbereiten, autogenen Fibrinklebstoffs, gemäß dem Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 14 bis 20.