CN104368052A - 妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,采用300ml密封三联袋系统,增加血袋中的抗凝剂容量并采集200ml自体血,采血后混匀并储存于4±2.0℃储血冰箱内;贮血时机为手术前15-35天;采集自体血的对象为有自体输血指证的产妇,自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇。本发明为妊娠晚期贮存式自体输血技术规范建立提供科学依据,从而更好地在产科患者中应用贮存式自体输血,使其更加安全,更加有效,更加经济,从而更好促进贮存式自体输血在产科的推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法。
背景技术
贮存式自体输血(preoperative autologous blood donation,PABD):是在手术数周乃至数月前预先采集病人自身血液保存,在其需要输血治疗时进行回输保存的血液。在欧美等一些发达国家,随着人口逐渐进入老龄化,志愿献血者数量不断下降,血液来源也逐渐减少,同时伴随着手术和非手术病人的数量增多和用血量的上升,尤其是整形、心血管和肿瘤等手术输血需求的惊人增加,血源紧缺已经成为一个问题。这也促使医务工作者考虑采用其它方式来满足临床用血,比如发展自体输血,尤其是贮存式自体输血,是一种较好的替代途径。
产科贮存式自体输血以其独特的优点和优势在妇产科领域得到了广泛的应用。尤其是在产科,因为平产或剖腹产手术时间有预期,产前经过充分的检查诊断,产科医生对患者是否出血和出血量有比较准确地估计和把握,对一些稀有血型和不规则抗体阳性的孕妇,选择贮存式自体输血更能成为分娩安全的一份意外保险。
在对产妇自体输血贮存过程中,由于产妇的血液凝血状态和血流变功能有其的独特性,随着孕周的增加,血液日趋高凝状态,纤维蛋白原含量逐渐升高,因产妇自体血在血液贮存过程中时间较长,较高浓度纤维蛋白、与凝血因子容易发生血凝反应而形成小凝块。在本院自体输血实践操作中,妊娠期自体血液采用标准抗凝比例进行贮存,而且随时间增加,血液凝集增加,会导致血液部分凝固,导致输血不畅或无法输注,严重影响自体全血的回输,造成浪费和自体输血无效。这一因素限制贮存式自体输血在产科大规模推广应用的原因。因此, 妊娠未期自体输血患者采用常规抗凝作自体血保存是不合适的,因为产科妊娠未期的高凝状态会导致常规抗凝的自体血因血液部分凝固,保存期出现轻度溶血;第二在经过储存自体血出库时因达不到出库标准,导致自体输血失败引起医疗纠纷;第三在产科需要自体血回输时,因自体血血粘度高,输血速度缓慢,达不到抢救用血的要求。
基于此,提出本发明。
发明内容
针对现有技术的上述技术问题,本发明的目的是提供一种妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,通过研究妊娠晚期自体全血在贮血过程中血液质量变化规律,用改变血液抗凝比例与自体血成分分离两种技术,解决妊娠晚期因血液高凝无法进行贮存式自体贮血和自体血回输血困难问题。
为达到上述目的,本发明是通过以下技术方案实现的:
妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,采用300ml密封三联袋系统,增加血袋中的抗凝剂容量并采集200ml自体血,采血后混匀并储存于4±2.0℃储血冰箱内。
所述的贮血时机为手术前15-25天。
所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇,所述的自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇;且产妇满足标准:Hb>105g/L,Plt>100×109/L。
妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,采用300ml密封三联袋系统,所述密封三联袋中的抗凝剂容量为正常量且采集300ml自体血,并将自体血在6小时内分离制备成分血,全程保证在冷链状态;所述的成分血为成悬浮红细胞和冰冻新鲜血浆。
所述成分血的制备步骤如下:
(1)离心前检查300ml密封三联袋有无破损、标签是否齐全、一致;
(2)将准备进行离心的全血在配平前电脑上进行离心机的使用登 记,登记内容涉及血液品种、献血编号、离心机机号、离心日期、时间、转速和温度;
(3)配平离心:将登记后的全血放置到离心机专用套筒中,然后用血液配平仪进行配平;
(4)配平后,放置入离心机中进行离心;所述的离心参数为:离心温度2-6℃,离心速度5000g,离心时间10分钟;
(5)观察步骤(4)中离心完毕的全血分层是否清晰及血袋外观是否正常,然后在低温操作台上使用血浆挤压器将上层血浆分离至空转移袋,即制得血浆用;并将另一转移袋内红细胞添加液加入红细胞内,将保养液与红细胞充分摇匀,即成红细胞悬液;
(6)热合封口、检查热合点是否密闭,检查母袋与转移袋的献血编号是否一致,观察红细胞内有无凝块、破损等异常情况。
所述的贮血时机为手术前15-35天。
所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇,所述的自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇;且产妇满足标准:Hb>105g/L,Plt>100×109/L。
本发明的有益效果如下:
本发明妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,通过研究妊娠晚期自体全血在贮血过程中血液质量变化规律,用改变血液抗凝比例与自体血成分分离两种技术,解决妊娠晚期因血液高凝无法进行贮存式自体贮血和自体血回输血困难问题。本发明为妊娠晚期贮存式自体输血技术规范建立提供科学依据,对妇产科贮存式自体输血进行完善和补充,从而更好地在产科患者中应用贮存式自体输血,使其更加安全,更加有效,更加经济,从而更好促进贮存式自体输血在产科的推广应用。
附图说明
图1为对比例1中刚采集时红细胞形态图,未形成凝集;
图2为对比例1中采集24小时的红细胞形态图,部分形成线串样 凝集;
图3为对比例1中保存3天时红细胞形态图,红细胞呈形成线串样凝集;
图4为对比例1中保存7天时红细胞形态图,红细胞呈紧密线串样并轻微变形;
图5为对比例1中保存14天时红细胞形态图,出现粘液结构并呈团状;
图6为对比例1中保存21天时红细胞形态图,红细胞连接成网状结构并部分溶血;
图7为对比例1中全血保存时间对游离红细胞与凝集红细胞团百分比关系图;
图8为对比例1中保存时间对血液PT值的影响情况图;
图9为对比例1中保存时间对血液APTT值的影响情况图;
图10为对比例1中保存时间对血液FIB值的影响情况图;
图11为对比例1中标准抗凝全血在不同储存时间内,血粘度全血切率1及红细胞聚集指数指标变化趋势图;
图12为对比例1中标准抗凝自体血在不同储存时间的PH及乳酸变化趋势图;
图13为实施例1中保存24小时时红细胞形态图,红细胞散在分布;
图14为实施例1中保存7天时红细胞形态图,部分细胞出现棘状突起,可见少量凝集;
图15为实施例1中保存14天时红细胞形态图,红细胞出现线串样凝集;
图16为实施例1中保存35天时红细胞形态图,红细胞线串样凝集更加致密,部分破碎;
图17为实施例1中扩大抗凝比例妊娠期全血在不同保存时间的游离红细胞比例图;
图18为实施例2中保存24小时时红细胞形态图,红细胞散在分布;
图19为实施例2中保存7天时红细胞形态图,红细胞呈散在分布,出现微量棘状突起;
图20为实施例2中保存14天时红细胞形态图,红细胞呈散在分布,棘状突起增多;
图21为实施例2中保存21天时红细胞形态图,红细胞无凝集出现,异形红细胞增多;
图22为实施例2中保存28天时红细胞形态图,红细胞无凝集,部分细胞发生破碎;
图23为实施例2中保存35天时红细胞形态图,红细胞的无凝集出现,发生细胞破碎增多;
图24为妊娠全血保存血液凝集机理图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明,但本发明的保护范围并不限于此。
本发明中涉及的“增加血袋中的抗凝剂容量”是指在300ml密封三联袋中采集200ml的自体血,“正常量”是指指在300ml密封三联袋中采集300ml的自体血。
实施例1
本发明妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,采用300ml密封三联袋系统,增加血袋中的抗凝剂容量并采集200ml自体血,采血后混匀并储存于4±2.0℃储血冰箱内。共25例。
本实施例中采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇,自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇;且产妇满足标准:Hb>105g/L,Plt>100×109/L。贮血时机为手术前15-25天。
实施例2
本发明妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,采用300ml密封三联袋系统,密封三联袋中的抗凝剂容量为正常量且采集300ml自体血,并将自体血在6小时内分离制备成分血,全程保证在冷链状 态;所述的成分血为成悬浮红细胞和冰冻新鲜血浆。285例完成全程临床应用研究,其中50例完成全程血液质量检测。
本实施例2中成分血的制备步骤如下:
(1)离心前检查300ml密封三联袋有无破损、标签是否齐全、一致;
(2)将准备进行离心的全血在配平前电脑上进行离心机的使用登记,登记内容涉及血液品种、献血编号、离心机机号、离心日期、时间、转速和温度;
(3)配平离心:将登记后的全血放置到离心机专用套筒中,然后用血液配平仪进行配平;
(4)配平后,放置入离心机中进行离心;所述的离心参数为:离心温度2-6℃,离心速度5000g,离心时间10分钟;
(5)观察步骤(4)中离心完毕的全血分层是否清晰及血袋外观是否正常,然后在低温操作台上使用血浆挤压器将上层血浆分离至空转移袋,即制得血浆用;并将另一转移袋内红细胞添加液加入红细胞内,将保养液与红细胞充分摇匀,即成红细胞悬液;
(6)热合封口、检查热合点是否密闭,检查母袋与转移袋的献血编号是否一致,观察红细胞内有无凝块、破损等异常情况。
本发明中采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇,自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇;且产妇满足标准:Hb>105g/L,Plt>100×109/L。贮血时机为手术前15-25天。
对比例1
采用300ml密封三联袋系统,密封三联袋系统中的抗凝剂容量为正常量,采集300ml自体血;采用CPDA全血保养液抗凝。共30例。
本发明中采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇,自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇;且产妇满足标准:Hb>105g/L,Plt>100×109/L。贮血时机为手术前15-20天。
对对比例1进行各项指标测试
一、妊娠期全血保存期间血液质理变化规律
标本采集与处理:采集标准抗凝的全血保存在含有CPDA保养液血袋(山东威高,血袋批号:20090929、血袋内含红细胞保养液42ml)中,进行全血混匀后采用无菌接管技术从全血中分享50ml血液储存于储存于4±2.0℃储血冰箱。用于观察全血保存期间血液质理变化规律。观察采用时间点0天,3天5天7天14天及21天。样品数目30袋,均来来妊娠自体输血患者,贮血时机一般选于手术前15-20天。
血液外观质量判断:在观察时间点定期,观察血液外观,分离标本前先肉眼观察血液的凝集状况,然后将血液轻微混匀,观察血液溶血情况,溶血判断标准:血细胞与血浆层出现红色,或者离心后血浆层可见红色。
血液细胞形态观察:采用奥林巴斯CX31显微镜成像系统,玻璃压片观察。倍数:50×10倍。同时计数200个红细胞,计算游离红细胞和凝集红细胞团比例。凝集红细胞团判断标准:3个及3个红细胞凝集在一起判断为一个凝集红细胞团。
二、凝血功能检测(PT、APTT和FIB检测):检测时(采集后l小时)、采集后3天,7天,14天PT、APTT和FIB检测,血液标本离心速度3000G/min10分钟。采用法国STAGO Compact型全自动血凝分析仪,试剂PT批号:111469,有效期:2015-09;试剂APTT批号:111430,有效期:2015-10;试剂FIB批号:11452,有效期:2015-10;质控品批号:111033,有效期:2015-05。
血粘度指标检测指标,取新鲜血(采集后l小时)、3天、5天及7天,及14天时相点,取标本前先将血液摇匀,每次取血5ml,作血液流变学检测。采用MOPEL R80型电脑全自动血液流变学测定仪,检测全血高切粘度(切变率200S)、中切变率分别为30S(中切1)、低切粘度1及低切粘度5、血浆粘度、红细胞压积,根据全血粘度计算RBC聚集指数。
扩大抗凝比例的妊娠期全血保存效果监测及与标准抗凝比例全血保存比较
扩大抗凝比例的妊娠期全血保存效果监测妊娠晚期全血保存在 含有扩大抗凝比例CPDA保养液血袋(山东威高,血袋批号:20090929、血袋内含红细胞保养液42ml)中,进行全血混匀后采用无菌接管技术从全血中分享50ml血液储存于储存于4±2.0℃储血冰箱。用于观察扩大抗凝比例的妊娠期全血保存保存期间血液质理变化规律。观察采用时间点0天,7天,14天及35天。样品数目25袋,均来来妊娠自体输血患者,观察血液外观,并取血1ml观察储存期间红细胞形态。
血液细胞形态观察:采用奥林巴斯CX31显微镜成像系统,玻璃压片观察。倍数:50×10倍。同时计数200个红细胞,计算游离红细胞和凝集红细胞团比例。凝集红细胞团判断标准:3个及3个红细胞凝集在一起判断为一个凝集红细胞团。
出库前测定电解质与血浆血红蛋白浓度输血前混匀全血,在输血器抽取在5ml全血于干燥试管中,测定K+、Na+与血浆血红蛋白浓度。比较标准抗凝妊娠期自体全血保存与扩大抗凝比例的在妊娠期自体全血保存质量方面的区别。
三、自体悬浮红细胞的质量指标评价:
血液细胞形态观察:标准抗凝的自体全血,采用成分分离后,分成自体新鲜冰冻血浆及自体悬浮红细胞。对自体悬浮红细胞进行并行留样,对自体悬浮红细胞混匀后采用无菌接管技术从全血中分享30ml血液储存于储存于4±2.0℃储血冰箱。用于观察自体悬浮红细胸形态变化规律。观察采用时间点0天,7天,14天及21天、35天。样品数目51例。
根据2013版国家血液标准,比较血站悬浮红细胸(共40例)与自体红细胞的储存未期血液外观、游离血红蛋白、红细胞比容、血红蛋白浓度及储存未期溶血率。
四、妊娠晚期自体血采三种不同保存方法血液临床输血效果评价比较。
外观大样本比较三组妊娠晚期自体血储存在回输前对三组血液进行外观质量情况分析,观察有无凝块、溶血。
回输过程中观察滴速和输注效果(有无不良反应反馈),并登记护士输血的反馈和抱怨。通过三组比较来判断自体成分血能否解决自体全血在输注时所导致的回输困难等问题,及分析产妇贮存式自体成分 血相对于产妇贮存式自体全血的是否具有显著优点,综合评价自体成分血的效果。
统计分析统计学处理采用SPSS 19..0软件包进行统计分析,计量资料用x±s表示,成组设计资料的结果比较采用单因表方差检验,回输情况分析用卡方检验,P<0.05表示差异有统计学意义。
五、结果
1、妊娠期晚期患者血液质量特点
以同期妇科择期手术的自体输血作为自体输血标准抗凝对照组:妇科肿瘤病人10例,其它择期妇科手术病人:14例,共24例。作为对照组分析妊娠期晚期患者血液质量特点,采血前血常规和凝血功能情况,两组间Hb浓度、HCT有显著性差异(P<0.01),产科组自体输血患者Hb浓度比妇科组略低(P<0.05)。产科组血凝功能呈高凝状态,PT值与FIB值显著高于妇科自体输血组(P<0.01),而APTT两组间无显著性差异。具体见表1:
表1:产科组与妇科组两组贮存式自体输血患者血常规和凝血功能分析
2、标准抗凝妊娠期全血保存期间血液质理变化规律
标准抗凝妊娠期全血保存期间外观变化情况:采用并行留样的办法观察血液外观变化,24小时观察30袋标准抗凝血液外观正常,至第3天时有3袋血液可以看到细小颗粒凝集,轻轻混匀后散开,但未发生溶血。保存至第5天时,有5袋血液可以看到细小颗粒凝集产生颗粒,另有3袋血液可以看到细小颗粒凝集的血袋,保存至第14天,有6袋血液产生明显颗粒凝集现象,还有4袋可见细小颗粒凝集,轻微混匀后部分产生轻微溶血现象。至保存未期,共有17袋血液出现的明显肉眼可见的凝集,其中8袋血液合并出现溶血现象。
保存时间对血液形态变化的影响。血液标准抗凝后,24小时后红细胞出现2-3个细胞凝集,在镜下滴加生理盐水,红细胞恢复正常形 态;保存3天的全血中的红细胞在短时间内发生线串样凝集。在镜下滴加生理盐水红细胞恢复正常形态;第7天时红细胞呈紧密线串样并轻微变形,在镜下滴加生理盐水红细胞未恢复散开形态;保存至14天时,线串样凝集逐渐紧密,同时可见纤维蛋白丝析出在红细胞团周围,并出现团状粘液结构。至保存未期,红细胞连接成网状结构并部分溶血,可见大团粘液结构。保存至21天时,出现粘液结构并呈团状,红细胞连接成网状结构并部分溶血。如图1-6所示。
3、保存时间对游离红细胞数的影响。
我们计数200个红细胞中游离红细胞和凝集红细胞数量,至3天游离红细胞急剧地下降(从第0天195个下降至第3天时16个),凝集红细胞个数急剧上升,第5天游离红细胞数量到达谷底,基本上未见游离红细胞,而红细胞凝集达到顶峰,在第14天时,可见游离红细胞轻微升高,但红细胞部分破裂。不同保存时间的游离红细胞比例见图7。
4、保存时间对血液PT、APTT、FIB值的影响。PT值在保存7天内未发生显著性变化,至第14天时,PT值延长,有显著性差别(P<0.001)如图8;APTT值第3天时已发生显著性改变(P<0.05),APTT值均随保存时间延长而显著下降如图9。FIB浓度第3天浓度显著下降,但3天到14天,浓度无明显变化如图10:0至7天PT值无显著性差异(P>0.05),14天的PT与0天比有有显著性差异(P<0.001);3至7天APPT值无显著性差异(P>0.05),7至14天的APPT与0天比有有显著性差异(P<0.001);0与3天FIB值有显著性差异(P<0.001)。
5、标准抗凝全血在不同储存时间内,血粘度指标变化
对30袋标准抗凝的全血采用并行留样法检测不同时间的血粘度指标,检测发现全血切率1,与全血切率5在不同贮存时间血粘度有显著性差异,采用两两比较发现,全血切率1在采血后2小时与3天时无显著性,3天与5天全血切率1有显著性差异(t=3.61,p<0.001),5天与7天无显著性差异,14天与5天的全血切率1有显著性差异(t=2.29,p=0.026),说明3天内血液粘度无明显变化,5天到7天血粘度开始增高,14天时血粘度明显增高。从红细胞聚集指数组间无显著性差异,从图11中可以看出,红细胞聚集指数在第5天内呈真线 上升,5天后到14天无显著性变化,而全血切率1均数在3天内表现稳定,但随着贮存天数的延长,全血切率1持续上升。
表2:标准抗凝全血在不同储存时间内,血粘度指标变化
6、标准抗凝全血在不同储存时间内,PH及乳酸指标变化
对30袋标准抗凝的全血采用并行留样法检测不同时间的PH值及乳酸浓度,发现随着储存时间的延长,PH值下降,乳酸浓度上升。根据2003根据国家标准6#7,全血保养液为CPDA时,PH值应6.8-7.4之间,当标准抗凝的全血在储存到14天时,PH值的异常率在26.7%(8/30)。当标准抗凝的全血在储存到21天时,PH值的异常率在93.3%(28/30).PH均值为6.68±0.08.。从PH均值中变化趋势图可以看出,PH在3天内有显著下降,3天后下降速度放缓,但持续下降,而乳酸浓度持续升高。如图12。
采用扩大抗凝比的自体全血保存质量变化
1、全血保存期间外观变化情况
采用并行留样的办法观察血液外观变化,24小时观察25袋扩大抗凝比的自体全血外观正常,至第7天时有1袋血液可以看到细小颗粒凝集,轻轻混匀后散开,但未发生溶血。保存至第14天时,有4袋血液可以看到细小颗粒凝集产生颗粒,保存至第14天,有4袋血液产生明显颗粒凝集现象,还有4袋可见细小颗粒凝集,轻微混匀后部分产生轻微溶血现象。至保存未期,共有9袋血液出现的明显的凝集。
2、保存时间对红细胞形态变化的影响。采集后24小时红细胞未出现细胞凝集,在镜下滴加生理盐水,红细胞恢复正常形态;保存7天的全血中的红细胞在短时间内发生线串样凝集。在镜下滴加生理盐水红细胞恢复正常形态;第14天时红细胞呈紧密线串样并轻微变形,在镜下滴加生理盐水红细胞未恢复散开形态;保存至21天时,线串样 凝集逐渐紧密,同时可见纤维蛋白丝析出在红细胞团周围,并出现团状粘液结构。至保存未期,红细胞连接成网状结构。具体见图13-16。
计数200个红细胞中游离红细胞和凝集红细胞数量,24小时时红细胞呈游离状态,至7天时,约五分之一细胞出现凝集(23/200);第14天时游离红细胞数量急剧地下降(从第0天200个下降至第14天时46个),凝集红细胞个数急剧上升,凝集强度至第35天达到顶峰,极个别红细胞呈游离状态,见图17。
3、标准抗凝的自体全血及扩大抗凝的自体全血的出库时血液质量对比
各组间自体血液贮存时间无显著性差异(P>0.05)。K+浓度浓度三组间有显著性差异(P=0.003),产科组自体血到血液输血时K+浓度显著高于妇科组;且采血200ml,采用200ml标准抗凝单袋的A组,K+浓度显著高于B组。产科组A组与B组自体血到血液输血时Na+浓度显著低于妇科C组;且采血200ml,采用200ml标准单袋的A组,Na+浓度显著低于B组(P<0.001)。血浆血红蛋白浓度三组间比较有显著性差异(P<0.001),B浓度与A组相比有显著性差异(P<0.001)。具体见表3。
表3:不同抗凝比例的自体血在贮存未期电解质与血浆血红蛋白浓度比较
注:A组为标准抗凝组,B组为扩大抗凝组,C组为妇科自体血标准抗凝组,F值表示为三组间数据比较
自体悬浮红细胞质量分析
1、不同储存时间红细胸形态变化采集后24小时红细胞未出现细胞凝集,红细胞形态正常;保存7天的自体悬浮的红细胞呈散在分布,出现微量棘状突起。在镜下滴加生理盐水红细胞恢复正常形态;第14天时自体悬浮红细胞红细胞保存至14天自体悬浮红细胞的红细胞形态,红细胞呈散在分布,棘状突起增多。保存至21天自体悬浮红细胞 的红细胞形态,细胞无凝集出现,呈散在分布,异形红细胞增多。保存至28天自体悬浮红细胞的红细胞形态,细胞无凝集,部分细胞发生异型。保存至35天时自体悬浮红细胞的红细胞形态,细胞无凝集出现,发生细胞异型增多。具体见图18-23。
2、自体悬浮红细胞与血站悬浮红细胞质量比较
对51例自体悬浮红细胞以2012版血液质量检测标准并与血站供应悬浮红细胞质量进行对比,检测储存未期血液外观、游离血红蛋白、红细胞比容、血红蛋白浓度及储存未期溶血率。发现自体悬浮红细胸与血站供应的悬浮红细胞并无质量上区别,所有质量指标均无显著性差异(P>0.05)。具体见表4。
表4:储存未期自体悬浮红细胞与异体悬浮红细胞质量比较
注:P值均大于0.05
实施例1、实施例2和对比例1三种同存储方式妊娠期血液出库时外观情况检测情况及临床输血速度对比
异体对照组悬浮红细胞输血,均顺利输血;全血组30例中自体输血6例出库时,因明显凝块未出库,在出库的24例中,4例输血到50ml,因输血器滤网有明显血凝块而中止输血,11例输血速度输慢,输血结束后在输血器滤网可见小凝块,并且输血速度较慢,其余顺利回输血但速度较慢,血液质量有时间依赖效应,时间越长的血液回凝块越多,回输越慢;扩大抗凝组自体输血25例,因出库上清出现轻度溶血未出库,24例自体输血顺利回输,4例自体输血输血速度输慢(回输速度20~40滴/min),输血结束后在输血器滤网可见小凝块;自体成分组自体输血255例自体输血顺利回输,输血器滤网未见小凝块,且与异体悬浮红细胞组输血速度未有显著性差异(P>0.05)。具体见表5。
表5:不同抗凝比例的自体血外观变化情况与回输情况
注:四组之间回输情况分析,FISH精确检验:P<0.001
实施例1、实施例2和对比例1三种同存储方式妊娠期血液临床输血反应对比
对于2012年至2014年所有输血患者进行输血反应统计分析,标准抗凝自体全血组产妇24例回输的患者中,有3例抱怨输血部位疼痛,无发热及过敏反应情况。扩大抗凝比的自体全血24例回输的患者出现1例抱怨输血部位疼痛。自输血成分输血组185例患者出现1例患者出现输血后发热反应,与异体输血组相比,自体组成分组的输血反应比例低于异体输血组(P<0.001)。具体见表6。
表6:三种不同自体输血保存方式的输血不良反应分析
注:自体成分组与异体输血组经FISH精确检验P>0.05.
自体输血在妇产科应用日益广泛,但自体输血在应用过程中,产妇妊娠期特殊的生理状态,影响了贮存式自体输血自体血液保存与回输,进而影响了自体输血在产科的应用。国外有研究表明不建议在妊娠第三阶段做贮存式自体输血。从表1可以看出产科病人的外源性凝血功能指标PT与纤维蛋白浓度都高于妇科病人;APTT值虽然无显著性意义,但产科病人的APTT值还是略低于妇科组。这主要由妊娠期生理因素变化:妊娠3周开始孕妇血液中凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ和Ⅹ逐渐增多,而抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、组织纤溶酶原激活剂(t-PA)和肾合成的尿激酶(u-PA)降低,胎盘产生的纤溶酶原激活物抑制物增多。血液渐趋高凝状态,妊娠末期最明显。由于孕妇血液的高凝状态,在标准抗凝的条件下,孕妇血液随着时间延长,血液呈现部分凝集。日本的学者,发现妊娠期采血的患者在自体血回输时,在输血器中发 现血液凝块。可见标准抗凝的自体全血保存,随着血液贮存时间的延长,血液容易出现凝集。这个结果与我们观察结果相同。
从血液外观角度来看,在标准抗凝的妊娠期全血保存中第3天时有3袋血液可以看到细小颗粒凝集,到保存未期,共有17袋标准抗凝的妊娠期全血出现肉眼可见的凝集。占了56.7%,其中有8袋出现了溶血,比例为26.7%。而扩大抗凝的妊娠期全血储存血液,24小时观察25袋扩大抗凝比的自体全血外观正常,至第7天时有1袋血液可以看到细小颗粒凝集,轻轻混匀后散开,但未发生溶血。保存至第14天时,有4袋血液可以看到细小颗粒凝集产生颗粒,保存至第14天,有4袋血液产生明显颗粒凝集现象,还有4袋可见细小颗粒凝集,轻微混匀后部分产生轻微溶血现象。至保存未期,共有9袋血液出现的明显的凝集,占37.5%。可见标准标准抗凝的妊娠期全血,在3天已开始凝集,到储存未期共有56.7%的血液不符合血液质量标准。采用扩大抗凝的妊娠期全血储存血液,虽然7天只有1例出现小凝块,但到储存未期,依然有37.5%的血液液不符合血液质量标准,所以从外观来看标准抗凝的全血不适合血液保存,而扩大抗凝的妊娠期全血保存方法,在7天内符合液不符合血液质量标准,但对于需超过7天的妊娠期血液依然不适合。
从血液细胞形态观察角度来看,标准抗凝的保存妊娠期全血,在24小时已开始出现的钱串状凝集,至保存7天时的红细胞呈紧密线串样并轻微变形,而到14天时,同时可见纤维蛋白丝析出在红细胞团周围,并出现团状粘液结构。至保存未期,红细胞连接成网状结构并部分溶血,可见大团粘液结构。保存至21天时,出现粘液结构并呈团状,红细胞连接成网状结构并部分溶血。而采用扩大抗凝的妊娠期全血储存血液,保存24小时时红细胞散在分布,至7天开始出现少量凝集,14天时出串样凝集,到35天时同样也出现出现粘液结构并呈团状,红细胞连接成网状结构并部分溶血。从血液微观形态来看,扩大抗凝的妊娠期全血保存不能彻底解决血液凝集问题,但能减缓血液凝集。
妊娠晚期的孕妇血液处于高凝状态甚至血栓前状态,凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ增加,PT和APTT轻度缩短,血浆纤维蛋白含量比非孕妇女约增加50%。从标准抗凝的全血PT、APTT值及FIB浓度来看,血液 在3天内有一个血浆高凝的过程,随着保存时间的延长,PT、APTT值的逐渐升高,而FIB浓度下降,说明在标准标准抗凝的妊娠期全血在保存的过程中,有一个凝血部分激活的过程,随后血浆中凝血因子浓度下降。
从血粘度指标变化情况看,在标准抗凝的妊娠期全血保存测定血液的粘度,反映血液低切指标的全血切率1、全血切率5,随保存时间的延长持续增加,而反映血液中切指标的全血切率30在呈现显著性的变化,而反映血液高切指标的全血切率200在血液储存期间变化不明显。红细胞在储存期间由于受到储存、保养条件限制,使红细胞的物理、化学功能受到损害,从而出现红细胞变形性降低、聚集性增加、细胞黏弹性下降,并由于ATP酶功能抑制、细胞膜流动性和通透性发生改变,而使变形性降低,出现血黏度升高,加之血液在保存中,微聚体的形成,进一步阻碍血液的流动性,从而影响血液的组织供应及输血效果。影响血液黏度的主要因素有Hct、大小、聚集性、变形性及血浆黏度,而低切黏度主要受红细胞聚集性的影响,血液高切黏度主要受红细胞变形性的影响,当红细胞硬度增加、变形能力下降时黏度增高[4]。从血粘度指标可以看出,标准抗凝的妊娠期全血,在3天血液低切度已明显上升,血细胞的聚焦指数7天内持续上升,7天后形成一个平台期。从血粘度侧面,反映标准抗凝的妊娠期全血保存在第一周发生了红细胞聚集。
标准抗凝的妊娠期全血保存测定血液的PH变化,标准抗凝自体血在不同储存时间的pH及乳酸变化趋势图可以看出,标准抗凝的妊娠期全血在保存的3天内pH下降速度较快,随后以一定速度局部下降,而乳酸浓度承受着保存时间的延长逐渐升高。特别到了14天,已经有10%的血液PH值低于6.8,而2003年的血液质量标准规定,CPDA保存在的全血在保存期内PH不得低于6.8.可见标准抗凝的妊娠期全血PH下降速度远远高于一般献血人群全血的pH下降速度。
从微观观察来看红细胞的凝集受红细胞形态的变化、血浆中大分子物质(如纤维蛋白原)及外来切力的共同影响。妊娠晚期的血液,有高浓度的FIB存在及血液的高凝状态下。有高浓度的FIB浓度一方面改变了红细胞表面的负电荷,使负电荷降低,拉近了红细胞间的距 离;另一方面纤维蛋白原是一个链状大分子糖蛋白,易在血液中形成网络,它具有桥联力作用,可使红细胞柔顺性受损、可塑变形能力大大降低,易于聚集。同时血液离体后,缺少体内血流切力的作用,在血流静止状态下,形成具有三维网络结构的红细胞聚集体,出现线串样凝集反应。在镜下观察发现,大部分游离红细胞转化为凝集红细胞团,小的凝集红细胞团连接聚合成大的凝集红细胞团。
在储血后即刻采集血液标本直接进行压片观察,在镜下表现为大部分红细胞游离,但也有极少许红细胞已形成较为牢固的凝集。说明刚离体时,血液中物质变化还很少,但孕妇血液的高凝状态,加上FIB浓度较高,使红细胞出现钱串样聚集,但聚集不是很牢固。保存7天时的红细胞呈紧密线串样并轻微变形,随后,由于抗凝血酶、纤溶酶等物质的大量消耗,及高浓度的纤维蛋白原大量降解,不断地形成纤维蛋白单体,经聚合,并在凝血因子存在下转化成纤维蛋白细丝,形成互相交织的纤维蛋白网,将线串红细胞群包罗在其中形成网格状结构,从而使线串状凝集更为紧密,并形成细小的血细胞凝集块或微栓子,此时,观察血袋时会发现血液呈絮状样,轻微混匀出现发红溶血,在回输时在输液器滤网中出现明显凝块。从直接形态观察血液外观质量在保存至第三天时,部分出现了细小颗粒凝块,其后又出现了溶血,血液发黑,已不符合血液出库要求。血液的凝集先于溶血出现,可能提示凝集而造成的溶血。一方面凝集使红细胞间隙减少,增加碰撞机会,易产生溶血;另一方面凝集后红细胞活动性受损,无氧酵解更易在局部形成低PH环境,促使红细胞膜加速硬化而破裂,同时低PH环境接近于大部分血浆蛋白(如纤维蛋白原等)的等电点,使其析出并反过来加速凝集。凝集后的红细胞,物理、化学功能不断受到损害,细胞膜流动性和通透性发生改变、ATP酶功能抑制,促使红细胞在短时间内产生形态变化,并快速地老化,形成球形、裂口形、棘形等异形红细胞,此细胞形态改变在非妊娠人群的储存全血中出现较为缓慢,一般在第25-30天时才能观察到。同时胞膜的形态变化使红细胞对阳离子通透性增加,最终发生细胞破裂溶解,造成部分红细胞凝集团块散开,第7、14天此时镜下计数游离红细胞可发现游离红细胞和凝集红细胞团增多现象。而观察血袋,大块凝集会发黑变暗。以上过程可 用图24表示。
采集后的全血随着保存时间的延长,部分凝血因子会发生不同程度的衰减,尤其是Ⅷ因子,其半衰期只有8-12h,因为全血的保养液是为保存红细胞而设计,而凝血因子的最佳保存条件是-30℃及以下。在储存期间会出现明显的活性丧失。本次实验数据显示,PT值在0-7天时未表现为明显的差异,表明部分外源性在此时间内未出现明显的活化或消耗,至第14天时才开始出现明显延长;而APTT值至第3天时已有显著性差别,这可能与内源性凝血因子Ⅷ因子明显降低有关。FIB含量至第3天时,出现显著性下降,此后的保存时间内FIB含量不断地降低,这与与国内外的报道较为一致。
综合上述,妊娠晚期孕妇的自体全血在离体后,会快速产生线串样凝集,随着纤维蛋白的不断析出,致使凝集逐渐变得牢固、致密,并在第3天时可使血液质量发生改变,达不到临床使用要求。并且持续影响红细胞,使红细胞快速老化、变性。同时,凝血因子的含量会发生不同程度的衰减,表现为APTT值先于PT值的延长;血浆FIB的含量不断降低,先快后慢。可见妊娠期标准抗凝全血保存的产生凝集的物质基础是血液凝血因子的高浓度状态,使红细胞聚集,使红细胞无氧代谢增加,乳酸产生增加,PH值下降,使红细胞功能受损,激发部分凝血反应。所以要彻底解决妊娠期血液的保存问题,只有把红细胞与血浆分开保存。
从外观看,采用成分分离的妊娠期全血都符合GB18469(2012)全血及成分血质量要求,255例自体成分在出库时外观均合格,未有一袋发生血液凝集情况。在血液的细胞形态观察,保存至35天时自体悬浮红细胞的红细胞形态,细胞无凝集出现,发生细胞异型增多。可见通过血浆与红细胞分离,使血液发生凝集的条件彻底去除,从而达到阻止妊娠期血液凝集,达到长期保存的目的。
以异体对照组悬浮红细胞输血,均顺利输血;全血组30例中自体输血6例出库时,因明显凝块未出库,在出库的24例中,4例输血到50ml,因输血器滤网有明显血凝块而中止输血,11例输血速度能缓慢,输血结束后在输血器滤网可见小凝块,并且输血速度较慢,其余顺利回输血但速度较慢,血液质量有时间依赖效应,储存时间越长的血液 回输时凝块越多,回输越慢;扩大抗凝组自体输血25例,有1例,储存时间超过28天,因出库上清出现轻度溶血未出库,24例自体输血顺利回输,4例自体输血输血速度输慢(回输速度20~40滴/min),输血结束后在输血器滤网可见小凝块;自体成分组自体输血255例自体输血顺利回输,输血器滤网未见小凝块,且与异体悬浮红细胞组输血速度未有显著性差异(P>0.05)。
51例自体悬浮红细胞以2012版血液质量检测标准并与血站供应悬浮红细胞质量进行对比,检测储存未期血液外观、游离血红蛋白、红细胞比容、血红蛋白浓度及储存未期溶血率均无显著性差异。发现自体悬浮红细胸与血站供应的悬浮红细胞并无质量上区别,并达到GB18469(2012)全血及成分血质量。
不管是标准抗凝还是扩大抗凝的妊娠期血液保存,输血不良反应主要为输血部位的疼痛,标准抗凝的妊娠期全血回输发生输血部位的疼痛比例高达12.5%(3/24),而扩大抗凝的妊娠期全血回输发生输血部位的疼痛比例高达4.2%(1/24),分析发生原因可能为,妊娠期全血保存,血液发生部分凝集,输血速度缓慢,红细胞在输血过程中发生破坏,导致血液中K+离子浓度升高,从而发生输血部位的疼痛,而未发现一例发热反应可能为检测例数较少或者自体血液血液相容度好有关。而255例的自体成分血回输,发生过敏性皮疹一例,可能与患者的过敏体质有关。从与异体输血反应比例对照来看,自体输血发生发热等输血不相容反应的可能性小于异体血。
由此可见,对妊娠未期自体输血患者采用标准抗凝作自体血保存是不合适的,一个因为产科妊娠未期的高凝状态会导致常规抗凝的自体血因血液部分凝固,保存期出现轻度溶血;第二在自体血出库时因达不到出库标准,导致自体输血失败引起纠纷;第三在产科需要自体血回输时,因自体血血粘度高,输血速度缓慢,达不到抢救用血的要求。通过改变全血与红细胞保养液的抗凝比例,使妊娠未期自体输血临床应用成为可能,在200ml全血使用56ml红细胞保养液,在贮存过程中,未发生溶血,且在贮存期间从血液外观、K+浓度、Na+浓度、血浆血红蛋白尝试符合全血出库标准。但从实验观察看,扩大抗凝的妊娠期全血只适当从采血到回输时间间隔只有小于7天的患者才可应 用。
只有采用自体成分分离保存技术,解决妊娠期全血保存出现三个问题:第一个因为产科妊娠未期的高凝状态会导致常规抗凝的自体全血因血液部分凝固,保存期出现轻度溶血;第二在经过储存自体血出库时因达不到出库标准,导致自体输血失败引起医疗纠纷;第三在产科需要自体血回输时,因自体血血粘度高,输血速度缓慢,达不到抢救用血的要求。为妊娠晚期贮存式自体输血技术规范建立提供科学依据。对妇产科贮存式自体输血进行完善和补充,从而更好地在产科患者中应用贮存式自体输血,使其更加安全,更加有效,更加经济,从而更好促进贮存式自体输血在产科的推广应用。
上述实施例仅用于解释说明本发明的发明构思,而非对本发明权利保护的限定,凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动,均应落入本发明的保护范围。
Claims (7)
1.妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,其特征在于:采用300ml密封三联袋系统,增加血袋中的抗凝剂容量比例仅采集200ml自体血,采血后混匀并储存于4±2.0℃储血冰箱内。
2.如权利要求1所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,其特征在于:所述的贮血时机为手术前15-25天。
3.如权利要求1所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,其特征在于:所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇,所述的自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇;且产妇满足标准:Hb>105g/L,Plt>100×109/L。
4.妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,其特征在于:采用300ml密闭三联袋系统,所述密闭三联袋中的抗凝剂容量为正常量且采集300ml自体血,并将自体血在6小时内分离制备成分血,全程保证在冷链状态;所述的成分血为成悬浮红细胞和冰冻新鲜血浆。
5.如权利要求4所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,其特征在于所述成分血的制备步骤如下:
(1)离心前检查300ml密封三联袋有无破损、标签是否齐全、一致;(2)将准备进行离心的全血在配平前电脑上进行离心机的使用登记,登记内容涉及血液品种、献血编号、离心机机号、离心日期、时间、转速和温度;
(3)配平离心:将登记后的全血放置到离心机专用套筒中,然后用血液配平仪进行配平;
(4)配平后,放置入离心机中进行离心;所述的离心参数为:离心温度2-6℃,离心速度5000g,离心时间10分钟;
(5)观察步骤(4)中离心完毕的全血分层是否清晰及血袋外观是否正常,然后在低温操作台上使用血浆挤压器将上层血浆分离至空转移袋,即制得血浆用;并将另一转移袋内红细胞添加液加入红细胞内,将保养液与红细胞充分摇匀,即成红细胞悬液;
(6)热合封口、检查热合点是否密闭,检查母袋与转移袋的献血编号是否一致,观察红细胞内有无凝块、破损等异常情况。
6.如权利要求4所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,其特征在于:所述的贮血时机为手术前15-35天。
7.如权利要求4所述妊娠晚期贮存式自体成分输血系统的建立方法,其特征在于:所述采集自体血的对象为有自体输血指证的的产妇,所述的自体采血指征为排除心血管系统疾病、糖尿病、妊娠期高血压疾病、感染性疾病和内科合并症之后,无产兆、病情稳定无阴道出血,胎儿无的生长受限和宫内缺氧的表现的产妇;且产妇满足标准:Hb>105g/L,Plt>100×109/L。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150225 |
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |