DE69711527T2

DE69711527T2 - Benzofluorenverbindungen, Zwischenverbindungen, Zusammensetzungen und Verfahren

Info

Publication number: DE69711527T2
Application number: DE69711527T
Authority: DE
Inventors: Henry Uhlman Bryant; Thomas Alan Crowell; Charles David Jones
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1996-09-26
Filing date: 1997-09-25
Publication date: 2002-10-31
Anticipated expiration: 2017-09-26
Also published as: EP0832881A3; DE69711527D1; PT832881E; CA2214935A1; ES2175277T3; US5958917A; EP0832881A2; ATE215536T1; EP0832881B1; DK0832881T3; JPH10130211A

Description

Osteoporose beschreibt eine Krankheitsgruppe, die aus unterschiedlichen Ätiologien hervorgeht, die aber durch den Nettoverlust an Knochenmasse pro Volumeneinheit gekennzeichnet ist. Die Konsequenz dieses Verlusts an Knochenmasse und die daraus resultierende Knochenfraktur ist das Versagen des Skeletts, eine angemessene Unterstützung für den Körper bereitzustellen. Einer der bekanntesten Typen der Osteoporose ist der, der mit der Menopause zusammenhängt. Die meisten Frauen verlieren etwa 20% bis etwa 60% der Knochenmasse im Trabekelkompartiment des Knochens innerhalb von 3 bis 6 Jahren nach dem Einstellen der Menstruation. Dieser rapide Verlust geht im allgemeinen mit einer Erhöhung der Knochenresorption und Bildung einher. Jedoch ist der resorptive Zyklus dominanter und das Ergebnis ist ein Nettoverlust an Knochenmasse. Osteoporose ist eine bekannte und ernste Erkrankung bei postmenopausalen Frauen.
Es gibt alleine in den Vereinigten Staaten geschätzte 25 Millionen Frauen, die von dieser Erkrankung betroffen sind. Die Folgen von Osteoporose sind für die Person schwerwiegend und sind für einen großen ökonomischen Verlust aufgrund ihrer chronischen Erscheinung und dem Bedarf für eine ausgiebige und langanhaltende Versorgung (Krankenhausaufenthalt und Heimpflege) dieser Krankheitsfolgen verantwortlich. Dies trifft insbesondere für ältere Patienten zu. Dazu kommt, obwohl Osteroporose im allgemeinen nicht als lebenbedrohender Zustand angesehen wird, daß die Sterblichkeitsrate von 20% bis 30% mit Hüftfrakturen bei älteren Frauen zusammenhängt. Ein großer Prozentsatz dieser Sterblichkeitsrate kann direkt mit postmenopausaler Osteoporose zusammenhängen.
Das anfälligste Gewebe im Knochen für die Wirkungen der postmenopausalen Osteoporose ist der Trabekelknochen. Dieses Gewebe wird oft als spongiöser oder schwammiger Knochen bezeichnet und konzentriert sich insbesondere an den Enden des Knochens (nahe den Gelenken) und in der Wirbelsäule. Das Trabekelgewebe ist durch kleine Osteoidstrukturen gekennzeichnet, die miteinander verbunden sind, wie auch durch das festere und dichtere cortikale Gewebe, das die äußere Oberfläche und den zentralen Schaft des Knochens aufbaut. Dieses untereinander verbundene Netzwerk an Trabekeln vermittelt eine laterale Unterstützung für die äußere cortikale Struktur und ist für die biomechanische Stärke der Gesamtstruktur entscheidend. Bei der postmenopausalen Osteoporose ist es primär die Nettoresorption und der Verlust der Trabekel, die zum Versagen und zur Fraktur des Knochens führen. In Anbetracht des Verlusts der Trabekel bei postmenopausalen Frauen ist es nicht überraschend, daß die meisten herkömmlichen Frakturen die sind, die bei Knochen vorkommen, welche stark von der Trabekelunterstützung abhängen, beispielsweise die Wirbel, der Hals der gewichttragenden Knochen, wie der Oberschenkel und der Unterarm. Tatsächlich sind Hüftfraktur, Schenkelhalsfrakturen und Wirbelbruchfrakturen Merkmale der postmenopausalen Osteoporose.
Die am allgemeinsten akzeptierte Methode zur Behandlung der postmenopausalen Osteoporose ist die Östrogenersatztherapie. Obwohl die Therapie allgemein erfolgreich ist, ist die Patientenakzeptanz der Therapie gering, da die Östrogenbehandlung häufig unerwünschte Nebenwirkungen hervorruft. Eine zusätzliche Behandlungsmethode wäre die Verabreichung einer Bisphosphonatverbindung, beispielsweise Fosamax® (Merck & Co., Inc.).
Vor der Menopause weisen die meisten Frauen eine geringere Häufigkeit für kardiovaskuläre Erkrankungen auf, als gleichaltrige Männer. Nach der Menopause erhöht sich jedoch langsam die Rate der kardiovaskulären Erkrankung bei Frauen, um die beim Mann beobachtete zu erreichen. Dieser Schutzverlust wurde dem Verlust an Östrogen und insbesondere dem Verlust der Fähigkeit des Östrogens zugeschrieben, die Serumlipidspiegel zu regulieren. Die Art der Fähigkeit des Östrogens, die Serumlipidspiegel zu regulieren, ist nicht gut verstanden, aber Erkenntnisse deuten darauf hin, daß Östrogen die Rezeptoren für Lipid niedriger Dichte (LDL) in der Leber hochregulieren kann, um überschüssiges Cholesterin zu entfernen. Zusätzlich scheint Östrogen eine Wirkung auf die Biosynthese von Cholesterin und andere nützliche Effekte auf die kardiovaskuläre Gesundheit zu haben.
Es wurde in der Literatur berichtet, daß die Serumlipidkonzentrationen bei postmenopausalen Frauen mit einer Östrogenersatztherapie auf die Konzentrationen des prämenopausalen Zustands zurückkehren. Daher scheint Östrogen eine sinnvolle Behandlung für diesen Zustand zu sein. Jedoch sind die Nebenwirkungen der Östrogenersatztherapie nicht für jede Frau akzeptabel, was die Verwendung dieser Therapie limitiert. Eine ideale Therapie für diesen Zustand wäre ein Mittel, das die Serumlipidspiegel auf eine ähnliche Weise reguliert, wie dies Östrogen tut, dem aber die Nebenwirkungen und Risiken fehlen, die mit einer Östrogentherapie zusammenhängen.
Die vorliegende Erfindung liefert Benzofluorenverbindungen, pharmazeutische Formulierungen hiervon und Verfahren zur Verwendung solcher Verbindungen zumindest beispielsweise zur Hemmung, Behandlung oder Prävention der wie hierin erwähnten Krankheitszustände.
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen der Formel. I
worin
R¹ für -H, -OH, -O(C&sub1;-C&sub4; Alkyl), -OCO(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -O(CO)O(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -OCOAr, -O(CO)OAr, worin Ar für Phenyl oder wahlweise substituiertes Phenyl steht, oder -OSO&sub2;(C&sub2;-C&sub6; Alkyl) steht,
R² für -OH, -O(C&sub1;-C&sub4; Alkyl), -OCO(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -O(CO)O(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -OCOAr, -O(CO)OAr, worin Ar für Phenyl oder wahlweise substituiertes Phenyl steht, oder -OSO&sub2;(C&sub1;-C&sub6; Alkyl) steht,
R³ für 1-Piperidinyl, 1-Pyrrolidinyl, Methyl-1-pyrrolidinyl, Dimethyl-1-pyrrolidinyl, 4-Morpholino, Dimethylamino, Diethylamino, Diisopropylamino oder 1-Hexamethylenimino steht, und n für 2 oder 3 steht,
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat hiervon.
Die vorliegende Erfindung liefert ferner pharmazeutische Formulierungen, die Verbindungen der Formel I enthalten, und die Verwendung dieser Verbindungen zumindest zur Hemmung des Knochenverlusts oder der Knochenresorption, insbesondere Osteoporose und kardiovaskulär bedingter pathologischer Zustände, einschließlich Hyperlipidämie und Östrogen-abhängigem Krebs.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch Zwischenproduktverbindungen der Formel II, die zur Herstellung der pharmazeutisch wirksamen Verbindungen der vorliegenden Erfindung brauchbar sind, und sind im folgenden gezeigt
worin
R1a für -H oder -OR&sup5; steht, worin R&sup5; für eine Hydroxyschutzgruppe steht,
R2a für -OR&sup6; steht worin R&sup6; für eine Hydroxyschutzgruppe steht,
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat hiervon,
Allgemeine Ausdrücke, die bei der Beschreibung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden, haben die gewöhnlichen Bedeutungen. Beispielsweise bezieht sich "C&sub1;-C&sub6; Alkyl" auf gerade oder verzweigte aliphatische Ketten mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen einschließlich Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, n-Butyl, Pentyl, Isopentyl, Hexyl und Isohexyl. Ähnlich steht der Ausdruck "-OC&sub1;-C&sub4; Alkyl" für eine C&sub1;-C&sub4; Alkylgruppe, die über einen Sauerstoff gebunden ist, wie beispielsweise Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy und Isopropoxy. Von diesen C&sub1;-C&sub4; Alkoxygruppen ist Methoxy bevorzugt.
Der Ausdruck "Hydroxyschutzgruppe" ist ausgewählt aus Acylen, Mesyl, Tosyl, Benzyl, Alkylsilyl und C&sub1;- C&sub4; Alkylen. Es sind mehrere Reaktionen zur Bildung und Entfernung solcher Schutzgruppen in mehreren Standardwerken beschrieben, einschließlich beispielsweise Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (London und New York, 1973), T.W. Greene. Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley (New York, 1981) und The Peplides, Band I, Schrooder und Lubke, Academic Press (London und New York, 1965). Verfahren zur Entfernung der bevorzugten Hydroxyschutzgruppen, insbesondere Methyl und Alkylsilyloxy, sind im wesentlichen in den späteren Beispielen beschrieben.
Wahlweise substituiertes Phenyl ist ausgewählt aus Phenyl und Phenyl, das einmal oder zweimal substituiert ist mit C&sub1;-C&sub6; Alkyl, C&sub1;-C&sub4; Alkoxy, Hydroxy, Nitro, Chlor, Fluor oder Trichlor- oder Trifluormethyl. Der Ausdruck "Solvat" steht für ein Aggregat, das eines oder mehrere Moleküle des Soluts, wie eine Verbindung der Formel I, mit einem oder mehreren Molekülen des Lösemittels umfaßt.
Der Ausdruck "hemmen" umfaßt die allgemein anerkannte Bedeutung, die die Verhinderung, Vermeidung, Unterdrückung und Verlangsamung, das Anhalten oder die Umkehr des Fortschreitens, der Schwere oder die Linderung eines entstehenden Symptoms oder Effekts umfaßt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden als Derivate des Benzo[a]fluorens gemäß dem Ring Index, The American Chemical Society folgendermaßen benannt:
Die Verbindungen der Formel I umfassen
3,8-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8-Dihydroxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3-Hydroxy-8-methoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3-Methoxy-8-hydroxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8,9-Trimethoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8,10-Trimethoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
9-Fluor-3,8-dimethoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
9-Chlor-3,8-dimethoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8-Dimethoxy-9-methyl-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8-Dimethoxy-9-ethyl-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Methoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Hydroxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8,9-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8,10-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
9-Fluor-8-methoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
9-Chlor-8-methoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Methoxy-9-ethyl-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Methoxy-9-ethyl-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethory]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8-Dihydroxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3-Hydroxy-8-methoxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3-Methoxy-8-hydroxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Methoxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Hydroxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8,9-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8,10-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-methylpyrrolidinyl]ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8-Dihydroxy-11-[4-[2-(1-hexamethylenimino)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3-Hydroxy-8-methoxy-11-[4-[2-(1-morpholino)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3-Methoxy-8-hydroxy-11-[4-[2-(N,N-dimethylamino)ethoxy]phenyl]11-benzo[a]fluoren
3,8,9-Trimethoxy-11-[4-[2-(N,N-diethylamino)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
3,8,10-Trimethoxy-11-[4-[2-(1-methylpyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
9-Fluor-3,8-dimethoxy-11-[4-[2-(N,N-dimethylamino)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
9-Chlor-3,8-dimethoxy-11-[4-[2-(N,N-diisopropylamino)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Methoxy-11-[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8-Hydroxy-11-[4-[2-(1-methylpyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
8,9-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-methylpyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-henzo[a]fluoren
8,10-Dimethoxy-11-[4-[2-(1-methylpyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]-11-ibenzo[a]fluoren
Die Verbindungen der Formel II umfassen
4-(3,8-Dimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(3,8,9-Trimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(3,8,10-Trimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(9-Fluor-3,8-dimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(9-Chlor-3,8-dimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(3,8-Dimethoxy-9-methyl-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(3,8-Dimethoxy-9-ethyl-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(8-Methoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(8,9-Dimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(8,10-Dimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(9-Fluor-8-methoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(9-Chlor-8-methoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
4-(8-Methoxy-9-methyl-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol und
4-(8-Methoxy-9-ethyl-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol.
Das Ausgangsmaterial zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist eine Verbindung der Formel III
worin R1a für -H oder -OR&sup5; steht, worin R&sup5; für eine Hydroxyschutzgruppe steht.
Die Verbindungen der Formel III sind in der Technik gut bekannt und werden im wesentlichen hergestellt, wie dies beschrieben ist in Jones et al. US 4 400 543 A und Jones ca al.. US 5 147 880 A. Siehe auch Jones et al., J. Med. Chem., 35: 931-938 (1992) und Jones et al., J. Med. Chem., 22: 962 (1979).
Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird im allgemeinen ein 1-acyliertes 2-Tetralon der Formel III mit einer Base unter Bildung des entsprechenden Anions behandelt, das dann mit Diphenylchlorphosphat unter Bildung eines Enolphosphatderivats der Formel IV umgesetzt wird. Die Verbindung der Formel IV macht eine formale Additions-Eliminierung durch, wenn sie mit einem Aryl-Grignardreagenz behandelt wird, was zur Substitution des 2-Phosphatsubstituenten durch den Arylrest führt, wobei eine Verbindung der Formel V gebildet wird. Eine Dealkylierung der Verbindung der Formel V durch ein Thiolatanionendemethylierungsreagenz dealkyliert die Gruppe selektiv, die para zur Elektronen-ziehenden Carbonylgruppe steht. Das Ergebnis einer solchen selektiven Dealkylierung ist eine phenolische Verbindung der Formel VI, die unter dem Einfluß von Säurekatalysatoren cyclisiert werden kann. Eine Cyclisierung des Zwischenprodukts der Formel VI wird von einem Dehydrierungsprozeß begleitet, der einen vollkommen aromatischen Naphthalinring im Produkt der Formel II bildet. Eine Verbindung der Formel II dient als Zwischenprodukt für die erfindungsgemäßen Verbindungen. Diese Syntheseroute läuft ab, wie dies im folgenden Schema I gezeigt ist, und R1a und R2a werden wie oben definiert. Schema I
Im ersten Schritt des vorliegenden Verfahrens wird eine Verbindung der Formel III in ein Dihydronaphthalinderivat der Formel(1992) über ein Zweischrittprotokoll umgewandelt wie dies im wesentlichen von Jones et al., J. Med. Chem: 35, 931-938 (1992) beschrieben wird. Im wesentlichen wird eine enolische Verbindung der Formel III durch ein oder mehr Äquivalente eines Phosphorylierungsmittels phosphoryliert, das ein Diarylchlor- oder Diarylbromphosphat und vorzugsweise Diphenylchlorphosphat ist. Die Umsetzung kann in einer Vielzahl an inerten Lösemitteln ausgeführt werden, einschließlich Ethern, THF, Dioxan, Ethylacetat, Toluol und Acetonitril, und in Gegenwart eines Säurefängers, wie einem Alkalimetallhydrid, Alkylimetallhydroxid oder Alkalimetallcarbonat oder einem Trialkylamin, wie Triethylamin. Die Alkalimetallbase oder das tertiäre Amin kann auch als basischer Katalysator im Phosphorylierungsverfahren wirken. Obwohl es bevorzugt ist, die Umsetzung bei Eisbadtemperatur auszuführen, um unerwünschte Nebenprodukte zu vermeiden, können auch erhöhte Temperaturen verwendet werden, sie sind aber gewöhnlich unnötig, um die Phosphorylierungsreaktion zu vervollständigen. Das Produkt der Phosphorylierungsreaktion, nämlich ein Enolphosphatderivat der Formel IV, wird durch gewöhnliche Techniken isoliert, wie Chromatographie. Jedoch ist es bequemer, das Enolphosphat mittels einer Lösemittel/Säurefängerkombination zu erzeugen, die mit dem nächsten Schritt der Reaktion (der Zugabe eines Grignardreagenzes) kompatibel ist. Daher ist die Kombination aus Natriumhydrid in THF unter einer Stickstoffatmosphäre bevorzugt und führt zu einer schnellen Phosphorylierung, die eine Verbindung der Formel IV liefert.
Das Zwischenproduktenolphosphat kann dann entweder isoliert oder in situ erzeugt mit einem oder mehreren Äquivalenten eines Aryl-Grignardreagenzes oder eines Aryllithiumorganocupratreagenzes umgesetzt werden. Ein oder zwei Äquivalente eines Arylmagnesiumbrotmds sind bevorzugt und Phenylmagnesiumbromid oder 4- Methoxvnaphthylmagnesiumbromid ist besonders bevorzugt. Die Umsetzung wird typischerweise bei Eisbadtemperatur ausgeführt, um Nebenreaktionen zu minimieren, aber erhöhte Temperaturen können auch verwendet werden, um die Geschwindigkeit der Reaktion zu erhöhen. Die Addition des Arylrests gefolgt von der Eliminierung der Phosphatabgangsgruppe (formell ein Additions-Eliminierungsprozeß) führt zu einem Dihydronaphthalinderivat der Formel V, das dann durch herkömmliche Techniken, wie Kristallisation oder Chromatographie isoliert wird.
Das entstehende Dihydronaphthalinderivat der Formel V wird dann unter Bildung eines Zwischenprodukts der Formel VI demethyliert. Um eine regioselektive Demethylierung an der Methoxygruppe para zum Carbonyl zu erreichen wird ein nukleophiles Demethylierungsmittel verwendet und Alkalimetallthiolate (Alkalimetallsalz eines organischen Thiols) sind bevorzugt. Besonders bevorzugt sind Lithiumthioethylat oder Lithiumthiomethylat im Überschuß im Bereich von etwa 1, 2 oder mehr Äquivalenten des Demethylierungsreagenzes gegenüber dem Substrat. Die Umsetzung wird unter einer inerten Atmosphäre ausgeführt, um das Demethylierungsmittel zu schützen und in einem Lösemittel, das gegenüber der nukleophilen Art des Thiolatreagenzes praktisch inert ist. Geeignete Lösemittel für die Demethylierung sind die, die für bimolekulare nukleophile Austauschreaktionen am förderlichsten sind und diese umfassen Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid, Dimethylacetamid und THF. Wasserfreies Dimethylformamid ist bevorzugt. Um gleichzeitig eine befriedigende Reaktionsgeschwindigkeit und auch eine gute Kontrolle der Selektivität für die Demethylierung an der para Stellung zur Carbonylgruppe zu erreichen ist es wichtig, die Temperatur der Reaktion sorgfältig zu kontrollieren. Obwohl der Demethylierungsvorgang im allgemeinen im Temperaturbereich von etwa 60ºC bis 120ºC stattfindet, ist es vorteilhaft, eine Temperatur im Bereich von etwa 80-90ºC zu verwenden, um die Ausbeute des gewünschten Produkts zu optimieren. Eine Temperatur von etwa 80ºC ist besonders bevorzugt. Unter den bevorzugten Reaktionsbedingungen ist die Umwandlung einer Verbindung der Formel VI in eine Verbindung der Formel V nach einem Erhitzen für etwa 2 bis 4 Stunden bei der angegebenen Temperatur vollständig.
In der letzten in Schema I gezeigten Umwandlung macht das Dihydronaphthalinderivat der Formel VI einen Cvclisierungs-Dehydrierungs-Prozess durch, der das Benzofluorenderivat der Formel II bildet. Dieses Verfahren ist säurekatalysiert und es kann eine Vielzahl an Mineralsäuren, Lewis-Säuren und organischen Säuren verwendet werden. Unter diesen Katalysatoren sind Alkylsulfonsäuren, Arylsulfonsäuren. Schwefelsäure, Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Polyphosphorsäure und Bortrifluoridetherat. Methansulfonsäure (rein) und Bortrifluoridetherat werden bevorzugt und Methansulfonsäure ist besonders bevorzugt. Die Reaktionen laufen typischerweise bei Raumtemperatur ab, aber höhere Temperaturen können vorteilhafterweise bei der Beschleunigung der Reaktionsgeschwindigkeit verwendet werden.
Unter den bevorzugten Reaktionsbedingungen ist die Umwandlung einer Verbindung der Formel VI in eine Verbindung der Formel II nach dem Rühren für etwa 5 Minuten bis etwa 3 Stunden bei Umgebungstemperaturen vollständig.
Die Verbindungen der Formel II sind zur Herstellung von pharmazeutisch wirksamen Verbindungen der Formel I der vorliegenden Erfindung brauchbar.
Bei der Herstellung der Verbindung der Formel II wird sie mit einer Verbindung der Formel VII
R³-(CH&sub2;)n-Q VII
worin R³ und n wie oben definiert sind und Q für einen Brom- oder vorzugsweise einen Chlorrest steht, unter Bildung einer Verbindung der Formel Ia umgesetzt. Von der Verbindung der Formel Ia werden dann die Schutzgruppen unter Bildung einer Verbindung der Formel Ib abgespalten, wenn R&sup5; und/oder R&sup6; Hydroxyschutzgruppen vorkommen. Diese Verfahrensschritte sind im folgenden Schema II gezeigt. Schema II
worin
R1a, R2a, R³ und n wie oben definiert sind.
R1b für -H oder -OH steht, und
R2b für -OH steht,
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat hiervon.
Im ersten Schritt des in Schema II gezeigten Verfahrens wird die Alkylierung über Standardverfahren durchgeführt. Die Verbindungen der Formel VII sind im Handel erhältlich oder werden durch Mittel hergestellt, die dem Fachmann gut bekannt sind. Vorzugsweise wird das Hydrochloridsalz einer Verbindung der Formel VII verwendet, insbesondere wird 2-Chlorethylpiperidinhydrochlorid verwendet.
Im allgemeinen wird zumindest etwa I Äquivalent des Substrats der Formel II mit 2 Äquivalenten einer Verbindung der Formel VII in Gegenwart von mindestens etwa 4 Äquivalenten eines Alkalimetallcarbonats, vorzugsweise Cäsiumcarbonat oder Kaliumcarbonat, und einem geeigneten Lösemittel umgesetzt.
Lösemittel für diese Reaktion sind Lösemittel oder Lösemittelgemische, die während der Reaktion inert bleiben. N,N-Dimethylformamid, insbesondere die wasserfreie Form hiervon, ist bevorzugt.
Die in diesem Schritt verwendete Temperatur sollte ausreichen, uni die Vervollständigung dieser Alkylierungsreaktion zu bewirken. Oft ist Umgebungstemperatur ausreichend und bevorzugt, aber in bestimmten Fällen können höhere Temperaturen erforderlich sein.
Die vorliegende Reaktion wird vorzugsweise unter einer inerten Atmosphäre durchgeführt, insbesondere Stickstoff.
Unter den bevorzugten Reaktionsbedingungen ist diese Reaktion in etwa 16 bis etwa 20 Stunden vollständig. Natürlich kann der Verlauf der Reaktion über Standardchromatographietechniken verfolgt werden.
Als Alternative zur Herstellung der Verbindungen der Formel Ia wird eine Verbindung der Formel II mit einem Überschuß eines Alkylierungsmittels der Formel
Q-(CH&sub2;)n-Q'
worin Q und Q' Dir gleiche oder unterschiedliche Abgangsgruppen stehen in einer Alkalilösung umgesetzt. Geeignete Abgangsgruppen sind die Sulfonate, wie Methansulfonat, 4-Brombenzolsulfonat, Toluolsulfonat, Ethansulfonat, Isopropylsulfonat, 4-Methoxybenzolsulfonat, 4-Nitrobenzolsulfonat, 2-Chlorbenzolsulfonat, Triflat und dergleichen, Halogene, wie Brom, Chlor und Iod und andere verwandte Abgangsgruppen. Halogene sind die bevorzugten Abgangsgruppen und Brom ist besonders bevorzugt.
Die bevorzugte Alkalilösung für diese Alkylierungsreaktion enthält Kaliumcarbonat in einem inerten Lösemittel, wie beispielsweise Methylethylketon (MEK) oder DMF. In dieser Lösung kommt die 4-Hydroxygruppe des phenolischen Rests einer Verbindung der Formel II als Phenoxidion vor, das eine der Abgangsgruppen des Alkylierungsmittels verdrängt.
Diese Reaktion läuft am besten, wenn die Alkalilösung, die die Reaktanden und Reagenzien enthält, bis zur Rückflußtemperatur erhitzt wird und vollständig ablaufen kann. Wenn MEK als bevorzugtes Lösemittel verwendet wird, reichen die Reaktionszeiten von etwa 6 Stunden bis etwa 20 Stunden.
Das Reaktionsprodukt aus diesem Schritt wird dann mit 1-Piperidin, 1-Pyrrolidin, Methyl-1-pyrrolidin, Dimethyl-1-pyrrolidin, 4-Morpholin, Dimethylamin, Diethylamin oder 1-Hexamethylenimin oder anderen sekundären Aminen über Standardtechniken unter Bildung von Verbindungen der Formel Ia umgesetzt. Vorzugsweise wird das Hydrochloridsalz von Piperidin mit der alkylierten Verbindung der Formel 111, in einem inerten Lösemittel, we wasserfreiem DMF, umgesetzt, und auf eine Temperatur im Bereich von etwa 60ºC bis etwa 110ºC erhitzt. Wenn das Gemisch auf eine bevorzugte Temperatur von etwa 90ºC erhitzt wird, dauert die Reaktion nur etwa 30 Minuten bis etwa 1 Stunde. Die Veränderungen in den Reaktionsbedingungen beeinflussen jedoch den Zeitbedarf dieser Reaktion, bis zur Vollständigkeit zu laufen. Natürlich kann der Verlauf dieser Reaktion durch Standardchromatographietechniken verfolgt; werden.
Eine alternative Route zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist in Schema III gezeigt, worin R1a, R2a und R³ wie oben definiert sind. Schema III
In dieser Alternative enthält das Ausgangsmaterial, ein 1-acyliertes 2-Tetralon der Formel VIII, bereits die basische Seitenkette. Die Verbindung der Formel VIII wird mit einer Base unter Bildung des entsprechenden Anions behandelt, das mit Diphenylchlorphosphat unter Bildung eines Enolphosphatderivats der Formel IX umgesetzt wird. Die Verbindung der Formel IX macht eine formale Addition-Eliminierung durch, wenn sie mit einem Aryl- Grignardreagenz behandelt wird, die zu einer Substitution des 2-Phosphatsubstituenten durch den Arylrest führt, wobei eine Dihydronaphthalinverbindung der Formel X der Erfindung gebildet wird. Die Verbindung X kann unter sauren Bedingungen zu einer erfindungsgemäßen Verbindung der Formel Ia cyclisiert werden.
Eine enolische Verbindung der Formel VIII, die bereits die basische Seitenkette trägt, wird durch ein oder mehrere Äquivalente eines Phosphorylierungsmittels phosphoryliert, das ein Diarylchlor- oder Diarylbromphosphat und vorzugsweise Diphenylchlorphosphat ist. Die Umsetzung kann ün einer Vielzahl an inerten Lösemitteln ausgeführt werden, einschließlich Ethern, THF, Dioxan, Ethylacetat, Toluol und Acetonitril, und in Gegenwart eines Säurefängers, wie einem Alkalimetallhydrid, Alkylimetallhydroxid oder Alkalimetallcarbonat oder einem Trialkylamin, wie Triethylamin. Die Alkalimetallbase oder das tertiäre Amin kann auch als basischer Katalysator im Phsphorylierungsverfahren wirken. Obwohl es bevorzugt ist, die Umsetzung bei Eisbadtemperatur auszuführen, um unerwünschte Nebenprodukte zu vermeiden, können auch erhöhte Temperaturen verwendet werden, sie sind aber gewöhnlich unnötig, um die Phosphorylierungsreaktion zu vervollständigen. Das Produkt der Phosphorylierungsreaktion, nämlich ein Enolphosphatderivat der Formel IX, kann durch gewöhnliche Techniken isoliert werden, wie Chromatographie. Jedoch ist am bequemsten, das Enolphosphat mittels einer Lösemittel/Säurefängerkombination zu erzeugen, die mit dem nächsten Schritt der Reaktion kompatibel ist (der Zugabe eines Grignardreagenzes). Daher ist die Kombination aus Natriumhydrid in THF unter einer Stickstoffatmosphäre bevorzugt und führt zu einer schnellen Phosphorylierung, die eine Verbindung der Formel IX liefert.
Das Zwischenproduktenolphosphat der Formel IX wird entweder isoliert oder in situ erzeugt und dann mit einem oder mehreren Äquivalenten eines Aryl-Grignardreagenzes oder eines Aryllithiumorganocupratreagenzes umgesetzt. Ein oder zwei Äquivalente eines Arylmagnesiumbromids sind bevorzugt und Phenylmagnesiumbromid oder 4-Methoxyphenylmagnesiumbromid ist besonders bevorzugt. Die Umsetzung wird typischerweise bei Eisbadtemperatur ausgeführt, um Nebenreaktionen zu minimieren, aber erhöhte Temperaturen können auch verwendet werden, um die Geschwindigkeit der Reaktion zu erhöhen. Die Addition des Arylrests gefolgt von der Eliminierung der Phosphatabgangsgruppe (formell ein Additions-Eliminierungsprozeß) führt direkt zu einem Dihydronaphthalinderivat der Formel X, das dann durch herkömmliche Techniken, wie Kristallisation der freien Base oder von Salzen oder durch Chromatographie der ersteren isoliert wird.
In der letzten in Schema III gezeigten Umwandlung macht das Dihydronaphthalinderivat der Formel X einen Cyclisierungs-Dehydrierungs-Prozess durch, der das Benzofluorenderivat der Formel Ia bildet. Dieses Verfahren ist säurekatalysiert und es kann eine Vielzahl an Mineralsäuren, Lewis-Säuren und organischen Säuren verwendet werden. Unter diesen Katalysatoren sind Alkylsulfonsäuren, Arylsulfonsäuren, Schwefelsäure, Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Polyphosphorsäure und Bortrifluoridetherat. Methansulfonsäure (pur) und Bortrifluoridetherat sind bevorzugt und Methansulfonsäure ist besonders bevorzugt. Die Umsetzungen laufen typischerweise bei Raumtemperatur ab, aber höhere Temperaturen können bei der Beschleunigung der Reaktionsgeschwindigkeit vorteilhaft sein.
Unter den bevorzugten Reaktionsbedingungen ist die Umwandlung der Verbindung der Formel X in eine Verbindung der Formel IIa nach dem Rühren für etwa 5 Minuten bis etwa 3 Stunden bei Umgebungstemperatur vollständig.
Die Verbindungen der Formel Ia, worin R&sup5; und/oder R&sup6; wenn sie vorkommen für C&sub1;-C&sub4; Alkyl, vorzugsweise Methyl stehen, sind für die hierin beschriebenen Verfahren pharmazeutisch aktiv. Demnach werden solche Verbindungen durch die Definition der Verbindungen der Formel I hierin umfaßt.
Bevorzugte Verbindungen der Formel I erhält man durch Abspalten der R&sup5; und R&sup6; Hydroxyschutzgruppen, wenn sie vorkommen, der Verbindungen der Formel Ia durch gut bekannte Techniken. Es sind mehrere Reaktionen zur Bildung und Entfernung solcher Schutzgruppen in mehreren Standardwerken beschrieben, einschließlich beispielsweise Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (London und New York, 1973), T. W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley (New York, 1981) und The Peptides, Band I, Schrooder und Lubke, Academic Press (London und New York, 1965). Verfahren zur Entfernung der bevorzugten R&sup5; und/oder R&sup6; Hydroxyschutzgruppen, insbesondere Methyl, sind im wesentlichen in den, späteren Beispielen beschrieben.
Andere bevorzugte Verbindungen der Formel I werden durch Ersetzen der neu gebildeten Hydroxyreste an der Position 3 und/oder 8, wenn sie vorkommen, durch einen Rest der Formel -O-CO-(C&sub1;-C&sub6; Alkyl) oder -O-SO&sub2;-(C&sub2;-C&sub6; Alkyl) durch gut bekannte Verfahren hergestellt. Siehe beispielsweise US 4 358 593 A.
Wenn beispielsweise eine -O-CO(C&sub1;-C&sub6; Alkyl)-Gruppe gewünscht wird, wird eine Mono- oder Dihydroxyverbindung der Formel I mit einem Acylierungsmittel, wie einem Acylchlorid, -bromid, -cyanid oder -azid oder mit einem geeigneten Anhydrid oder gemischten Anhydrid umgesetzt. Die Reaktionen werden bequemerweise in einem basischen Lösemittel ausgeführt, wie Pyridin, Lutidin, Chinolin oder Isochinolin, oder in einem tertiären Aminlösemittel, wie Triethylamin, Tributylamin, Methylpiperidin und dergleichen. Die Reaktion kann auch in einem inerten Lösemittel ausgeführt werden, wie Ethylacetat. Dimethylformamid. Dimethylsulfoxid, Dioxan, Dimethoxyethan, Acetonitril, Aceton. Methylethylketon und dergleichen, zu dem mindestens ein Äquivalent eines Säurefängers (außer wie unten erwähnt) zugegeben wurde, wie ein tertiäres Amin. Falls erwünscht, können Acylierungskatalysatoren verwendet werden, wie 4-Dimethylaminopyridin oder 4-Pyrrolidinopyridin. Siehe beispielsweise Haslam et al.. Tetrahedron, 36: 2409-2433 (1980).
Die vorliegenden Reaktionen werden bei moderaten Temperaturen im Bereich von etwa -25ºC bis etwa 100ºC häufig unter einer inerten Atmosphäre durchgeführt, wie Stickstoffgas. Jedoch ist gewöhnlich Umgebungstemperatur zur Durchführung der Reaktion geeignet.
Die Acylierung einer Hydroxygruppe an der Position 3 und/oder Position 8 kann auch durch säurekatalysierte Reaktionen der geeigneten Carbonsäuren in inerten organischen Lösemitteln durchgeführt werden. Säurekatalysatoren, wie Schwefelsäure, Polyphosphorsäure, Methansulfonsäure und dergleichen werden verwendet.
Die vorher erwähnten R¹ und/oder R² Gruppen der Verbindungen der Formel I können auch durch die Bildung eines aktiven Esters der geeigneten Säure bereitgestellt werden, wie den Estern, die durch bekannte Reagenzien gebildet werden, wie Dicyclohexylcarbodiimid, Acylimidazole, Nitrophenole, Pentachlorphenol.
N-Hydroxysuccinimid und 1-Hydroxybenzotriazol. Siehe beispielsweise Bull. Chem. Soc. Japan, 38: 1979 (1965) und Chem. Ber., 788 und 2024 (1970).
Jede der obigen Techniken, die -O-CO-(C&sub1;-C&sub6; Alkyl) Reste liefern, wird in Lösemitteln durchgeführt, wie sie oben diskutiert werden. Die Techniken, die im Verlauf der Retkaion kein Säureprodukt bilden, brauchen natürlich auch keinen Säurefänger im Reaktionsgemisch.
Wenn eine Verbindung der Formel I gewünscht wird, worin die Hydroxygruppe an der Position 3 und/oder 8 einer Verbindung der Formel I in eine Gruppe der Formel -O-SO&sub2;-(C&sub4;-C&sub6; Alkyl) umgewandelt wird, wird die Mono- oder Dihydroxyverbindung beispielsweise mit einem Sulfonsäureanhydrid oder einem Derivat der geeigneten Sulfonsäure umgesetzt, wie einem Sulfonylchlorid, -bromid oder Sulfonylammoniumsalz, wie dies von King und Monoir, J. Am. Chem. Soc., 97: 2566-2567 (1975) beschrieben wurde. Die Dihydroxyverbindung kann auch mit dem geeigneten Sulfonsäureanhydrid oder gemischten Sulfonsäureanhydriden umgesetzt werden. Solche Rektionen werden unter Bedingungen durchgeführt, wie sie oben bei der Diskussion der Reaktion mit Säurehalogeniden und dergleichen beschrieben wurden.
Obwohl die freie Basenform der Verbindungen der Formel I in den Verfahren der vorliegenden Erfindung verwendet werden kann, ist es bevorzugt eine pharmazeutisch annehmbare Salzform herzustellen und zu verwenden. Daher bilden die in den erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Verbindungen mit einer großen Vielzahl an organischen und anorganischen Säuren primär pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze und beinhalten die physiologisch annehmbaren Salze, die oft in der pharmazeutischen Chemie verwendet werden. Solche Salze sind auch Teil der Erfindung.
Typische anorganische Säuren, die zur Bildung solcher Salze verwendet werden, sind unter anderem Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Iodwasserstoff-, Salpeter-, Schwefel-, Phosphor- und Hypophosphorsäure. Salze, die von organischen Säuren stammen, wie aliphatischen Mono- und Dicarbonsäuren, phenylsubstituierten Alkansäuren, Hydroxyalkan- und Hydroxyalkandisäuren, aromatischen Säuren, aliphatischen und aromatischen Sulfonsäuren, können ebenfalls verwendet werden. Solche pharmazeutisch annehmbaren Salze sind daher unter anderem Acetat, Phenylacetat, Trifluoracetat, Acrylat, Ascorbat, Benzoat, Chlorbenzoat, Dinitrobenzoat, Hydroxybenzoat, Methoxybenzoat, Methylbenzoat, o-Acetoxybenzoat, Naphthalin-2-benzoat, Bromid, Isobutyrat, Phenylbutyrat, β-Hydroxybutyrat, Butin-1,4-dioat, Hexin-1,4-dioat, Caproat, Caprylat, Chlorid, Cinnamat, Citrat, Formiat, Fumarat, Glycollat, Heptanoat, Hippurat, Lactat, Malat, Maleat, Hydroxymaleat. Malonat, Mandelat, Mesylat, Nicotinat, Isonicotinat, Nitrat, Oxalat, Phthalat, Terephthalat, Phosphat, Monohydrogenphosphat, Dihydrogenphosphat, Metaphosphat, Pyrophosphat, Propiolat, Propionat, Phenylpropionat, Salicylat, Sebacat, Succinat, Suberat, Sulfat, Bisulfat, Pyrosulfat, Sulfit, Bisulfit. Sulfonat, Benzolsulfonat, p-Bromphenylsulfonat, Chlorbenzolsulfonat, Ethansulfonat, 2-Hydroxyethansulfonat, Methansulfonat, Naphthalin-1-sulfonat, Naphthalin-2-sulfonat, p-Toluolsulfonat. Xylolsulfonat und Tartrat. Ein bevorzugtes Salz ist das Hydrochloridsalz.
Die pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze wenden typischerweise durch die Umsetzung einer Verbindung der Formel I mit einer äquimolaren oder überschüssigen Menge einer Säure gebildet. Die Reaktanden werden im allgemeinen in einem gemeinsamen Lösemittel vereinigt, wie Diethylether oder Ethylacetat. Das Salz fällt normalerweise innerhalb von etwa einer Stunde bis 10 Tagen aus der Lösung aus und kann durch Filtration isoliert werden oder das Lösemittel kann durch herkömmliche Verfahren abgezogen werden. Die vorliegende Erfindung liefert ferner pharmazeutisch annehmbare Formulierungen zur Verabreichung an einen Säuger, einschließlich dem Menschen, der einer Behandlung bedarf die gekennzeichnet ist durch eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel I und einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger.
Wie hierin verwendet, meint der Ausdruck "wirksame Menge" eine Menge einer Verbindung der vorliegenden Erfindung, die zur Hemmung, Linderung, Besserung, Behandlung oder Prävention weiterer Symptome bei Säugern einschließlich dem Menschen fähig ist, die an Knochenverlust oder Knochenresorption, insbesondere Osteoporose, und cardiovaskulär zusammenhängenden pathologischen Zuständen leiden, einschließlich Hyperlipidämie und verwandten cardiovaskulären Pathologien.
Im Fall von Östrogen-abhängigen Krebsarten meint der Ausdruck "wirksame Menge" die Menge der erfindungsgemäßen Verbindung, die zur Linderung, Verbesserung, Hemmung des Krebswachstums, Behandlung oder Prävention des Krebses und/oder dessen Symptome in Säugern, einschließlich des Menschens fähig ist.
Mit "pharmazeutisch annehmbare Formulierung" ist gemeint, daß der Träger, das Verdünnungsmittel, die Hilfsstoffe und das Salz mit dem Wirkstoff (einer Verbindung der Formel I) der Formulierung kompatibel sind und für den Empfänger hiervon nicht schädlich sind. Pharmazeutische Formulierungen können durch in der Technik bekannte Verfahren hergestellt werden. Beispielsweise können die ertindungsgemäßen Verbindungen mit herkömmlichen Hilfsstoffen, Verdünnungsmitteln oder Trägern formuliert und, zu Tabletten, Kapseln und dergleichen geformt werden. Beispiele für Hilfsstoffe, Verdünnungsmittel und Träger, die für solche Formulierungen geeignet sind, beinhalten die folgenden: Füllstoffe und Streckmittel, wie Stärke, Zuckerarten, Mannit und Kieselsäurederivate, Bindemittel, wie Carboxymethylcellulose und andere Cellulosederivate, Alginate, Gelatine und Polyvinylpyrrolidon, Befeuchtungsmittel, wie Glycerin, Zerfallshilfsmittel, wie Agar-Agar, Calciumcarbonat und Natriumbicarbonat, Mittel zur Verzögerung der Auflösung, wie Paraffin, Resorptionsbeschleuniger, wie quarternäre Ammoniumverbindungen, oberflächenaktive Mittel, wie Cetylalkohol, Glycerinmonostearat, adsorptive Träger, wie Kaolin und Bentonit und Gleitmittel, wie Talkum, Calcium- und Magnesiumstearat und feste Polyethylenglycole. Schließliche pharmazeutische Formen können sein: Pillen, Tabletten, Pulver, Lonzetten, Sirupe, Aerosole, Sachets, Cachets, Elixiere, Suspensionen, Emulsionen, Salben, Zäpfchen, sterile injizierbare Lösungen oder sterile verpackte Pulver und dergleichen in Abhängigkeit des verwendeten Hilfsstofftyps.
Zusätzlich sind die erfindungsgemäßen Verbindungen gut geeignet zur Formulierung als verzögert freisetzende Dosierungsformen. Die Formulierungen können so gestaltet werden, daß sie den Wirkstoff nur oder vorzugsweise in einen bestimmten Teil des Verdauungstrakts möglicherweise über eine bestimmte Zeitspanne freisetzen. Solche Formulierungen können Beschichtungen, Umhüllungen und Schutzmatrizes umfassen, die aus polymeren Substanzen oder Wachsen hergestellt werden können.
Die bestimmte Dosis einer Verbindung der Formel I, die zur Behandlung, Hemmung oder Verhinderung der Symptome und/oder der Erkrankung eines Säugers, einschließlich des Menschen erforderlich ist, der an den obigen Erkrankungen leidet, hängt ab von der einzelnen Erkrankung, den Symptomen und der Schwere. Die Dosierung, die Verabreichungswege und die Häufigkeit der Dosierung werden am besten vom behandelnden Arzt bestimmt. Im allgemeinen anerkannte und wirksame Dosierungen betragen 15 mg bis 1000 mg und typischer 15 mg bis 80 mg ein bis dreimal am Tag. Solche Dosierungen werden einem Patienten, der einer Behandlung bedarf für mindestens 1 Monat, typischer mindestens 6 Monate oder chronisch verabreicht.
Die folgenden Formulierungen werden zu Erläuterungszwecken angegeben und sollen nicht beschränkend wirken. Die gesamten Wirkstoffe in solchen Formulierungen umfassen 0,1 bis 99,9 Gewichtsprozent der Formulierung. Die Ausdruck "Wirkstoff" meint eine Verbindung der Formel I.

Formulierung 1: Gelatinekapseln

Bestandteil Menge (mg/Kapsel)

Wirkstoff 0,1-1000
Stärke, NF 0-500
Stärke, fließfähiges Pulver 0-500
Siliconflüssigkeit 350 Centistoke 0-15
Die Bestandteile werden gemischt, durch ein Nr. 45 Mesh US gegeben und in Hartgelatinekapseln gefüllt.

Formulierung 2: Tabletten

Bestandteil Menge (mg/Tablette)

Wirkstoff 2,5-1000
Stärke 10-50
Cellulose, mikrokristallin 10-20
Polyvinylpyrrolidon (als 10% Lösung in Wasser) 5
Natriumcarboxymethylcellulose 5
Magnesiumstearat 1
Talkum 1-5
Der Wirkstoff, die Stärke und die Cellulose werden durch ein Nr. 45 Mesh US Sieb gegeben und gründlich I gemischt. Die Lösung des Polyvinylpyrrolidons wird mit den entstehenden Pulvern gemischt, die dann durch ein Nr. 14 Mesh US Sieb gegeben werden. Die so hergestellten Granula werden bei 50ºC-60ºC getrocknet und durch ein Nr. 18 Mesh US Sieb gegeben. Die Natriumcarboxymethylcellulose, das Magnesiumstearat und das Talkum, die vorher durch ein Nr. 60 Mesh US Sieb gegeben wurden, werden dann, zu den obigen Granula gegeben und sorgfältig gemischt. Das entstehende Material wird in einer Tablettenmaschine unter Bildung von Tabletten gepreßt.

Formulierung 3: Aerosol

Bestandteil Menge (Gewichtsprozent)

Wirkstoff 0,25
Ethanol 29,75
Propellant 22 (Chlordifluormethan) 70,00
Gesamt 100,00
Der Wirkstoff wird mit Ethanol gemischt und das Gemisch wird zu einem Teil Propellant 22 gegeben, auf -30ºC abgekühlt und in ein Abfüllgerät gegeben. Die erforderliche Menge wird anschließend in einen Edelstahlbehälter gefüllt und mit dem Rest des Propellants verdünnt. Die Ventileinheiten werden anschließend am Behälter angebracht.

Formulierung 4: Zäpfchen

Bestandteil Gewitcht

Wirkstoff 150 mg
Gesättigte Fettsäureglyceride 3000 mg
Der Wirkstoff wird durch ein Nr. 60 Mesh U. S. Sieb gegeben und in den gesättigten Fettsäureglyceriden suspendiert, die vorher auf ihren Schmelzpunkt erhitzt wurden. Das Gemisch wird anschließend in eine Zäpfchenform gegossen und abgekühlt.

Formulierung 5: Suspension

Suspensionen, die jeweils 0,1-1000 mg einer Verbindung der Formel I pro 5 ml Dosis enthalten.

Bestandteil Gewicht

Wirkstoff 0,1-1000 mg
Natriumcarboxymethylcellulose 50 mg
Sirup 1,25 ml
Benzoesäurelösung (0,1 M) 0,10 ml
Geschmacksstoff q.v.
Farbstoff q.v.
gereinigtes Wasser auf gesamt 5 ml
Eine Verbindung der Formel I wird durch ein Nr. 45 Mesh US Sieb gegeben und mit der Natriumcarboxymethylcellulose und dem Sirup unter Bildung einer glatten Paste vermischt. Die Benzoesäurelösung, der Geschmacks- und der Farbstoff werden mit etwas Wasser verdünnt und unter Rühren zugegeben. Dann wird ausreichend Wasser zugegeben, um die Formulierung auf das Endvolumen zu bringen.
Die folgenden Beispiele und Präparationen iwerden bereitgestellt, um die Durchführung der vorliegenden Erfindung besser darzustellen Alle Veröffentlichungen und Patentanmeldungen, die in der Beschreibung erwähnt werden, sollen die Kenntnisse des Fachmanns darstellen, den die Erfindung betrifft.
Die NMR Daten für die folgenden Beispiele wurden auf einem GE 300 MHz NMR Gerät erzeugt und wasserfreies CDCl&sub3; wurde als Lösemittel verwendet, falls nichts anderes angegeben ist. Die Feldstärke für die ¹³C NMR Spektren beträgt 75.5 MHz, falls nichts anderes angegeben ist. Beispiele Präparation 1 3,4-Dihydro-1-(4-methoxybenzoyl)]-6-methoxy-2-naphthalinyldiphenylphosphorsäureester
Zu einer Lösung aus 3,4-Dihydro-6-methoxy-1-(4-methoxybenzoyl)-2(1H)-naphthalinon (1,50 g, 0,0048 mol) in 15 ml CH&sub2;Cl&sub2; werden bei 5ºC unter N&sub2; Diphenylchlorphosphat (1,36 g, 0,0051 mol) und 4-Dimethylaminopyridin (5 mg) gegeben. Triethylamin (0,514 g, 0,0051 mol) in CH&sub2;Cl&sub2; (20 ml) wird dann tropfenweise über 10 Minuten zugegeben, wobei die Reaktionstemperatur unter 5ºC gehalten wird. Das entstehende Gemisch wird über Nacht gerührt und dann wird es über Kochsalzlösung und Eis gegossen und das Rohprodukt wird mit EtOAc (50 ml) extrahiert. Die organische Phase wird gut mit Kochsalzläsung gewaschen, über wasserfreiem K&sub2;CO&sub3; getrocknet und unter Bildung von 2,92 g eines gelben Öls eingedampft. Eine Silicagelchromatographie, die 10% EtOAc in Toluol verwendet, ergibt das gewünschte Produkt als gelbes Öl mit 2,17 g (83%). Dieses Material ergibt einen starken Peak im Felddesorptionsmassenspektrum bei m/e 542 und ist in der NMR Spektroskopie im wesentlichen eine einzelne Komponente. Jedoch kann sie nicht kristallisiert werden und ergibt auch keine annehmbare Elementaranalyse für Kohlenstoff. Analyse (C&sub3;&sub1;H&sub2;&sub7;PO&sub7;) Berechnet C 68,63, H 5,02, O 12,96. Gefunden: C 65,37, H 4,89, O 13,26.
¹H NMR (CDCl&sub3;) δ 7,91 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,20-6,97 (m, 9H), 6,955,73 (m, 5H), 6,58 (dd, J = 8,5 Hz, J = 2,4 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,07 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,88 (t, J = 7,8 Hz, 2H), MS (FD) m/e 542 (M&spplus;). Präparation 2 3,4-Dihydro-1-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]benzoyl]-6-methoxy-2-naphthalinyldiphenylphosphorsäureester
Die Verbindung wird auf analoge Weise zur Verbindung von Präparation 1 hergestellt.
Erscheinungsbild: Dunkelgelbes Öl
¹H NMR (CDCl&sub3;) δ 7,85 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,39-6, 92 (m, 9H), 6,92-6,69 (m, 5H), 6,57 (dd, J = 8,5 Hz, J = 2,4 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,07 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 2,89 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 2,78 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,62-2,42 (m, 4H), 1,77-1,55 (m, 4H), 1,55-1,37 (m, 2H), MS (FD) m/e 639 (M&spplus;). Präparation 3 [3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl](4-methoxyphenyl)methanon
Natriumhydrid (60% in Mineralöl, 5,4 g, 0,135 mol) wird in wasserfreiem TEE (80 ml) unter einer Stickstoffatmosphäre suspendiert und das Gemisch wird in einem Eisbad auf 5ºC gekühlt. Eine Lösung, die 3,4-Dihydro- 6-methoxy-1-(4-methoxybenzoyl)-2(1H)-naphthalinon (38,0 g, 0,122 mol) und Diphenylchlorphosphat (36,3 g, 28,0 ml, 0,135 mol) in THF (150 ml) enthält, wird mit einer solchen Geschwindigkeit zugegeben, daß die Temperatur des Reaktionsgemisches unter 10ºC bleibt. Nach der anfänglichen schnellen Wasserstoffgasentwicklung wird das Reaktionsgemisch für 2 Stunden mit einer kontinuierlichen Kühlung durch das Eisbad gerührt. Die Analyse einer kleinen Probe durch DC (SiO&sub2;. Toluol : EtOAc 9 : 1) zeigt eine im wesentlichen quantitative Bildung des Enolphosphatzwischenprodukts. Das Reaktionsgemisch wird nahe 0ºC gehalten und 3-Methoxyphenylmagnesiumbromid (250 ml einer 0,74 M Lösung in THF, 0,185 mol) wird über eine Kanüle über etwa 5 Minuten zugegeben. Das entstehende Gemisch wird bei 0ºC für 2 Stunden gerührt und dann kann es sich über Nacht auf 25ºC erwärmen. Gemäß DC Analyse wird deutlich, daß das Verschwinden von Enolphosphat durch die Bildung eines Hauptprodukts begleitet wird, das mit einem hohen Rf läuft. Die Reaktion wird durch Gießen in einen großen Überschuß an eiskalter NH&sub4;Cl Lösung aufgearbeitet und das Rohprodukt wird mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte werden mit Kochsalzlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach der Filtration und der Entfernung der Lösemittel erhält man ein braunes Öl. Das Öl wird durch Chromatographie über Silicagel gereinigt, die einen Gradienten von Hexan nach Chloroform verwendet. Das Vereinigen und Konzentrieren der geeigneten Fraktionen ergibt ein bernsteinfarbenes Öl, das 40,3 g (83%) ausmacht. ¹H NMR (CDCl&sub3;) δ 7,85 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7, 10-7,0 (m, 1H), 6,90-6,70 (m, 6H), 6,70-6,60 (m, 2H), 3,80 (s, 6H), 3,67 (s, 3H), 3,10-2,90 (m, 2H), 2,90-2,70 (m, 2H), MS (FD) m/e 400 (M&spplus;), Analyse berechnet für C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub4;O&sub4;: C 77,98, H 6,04, N 0,00. Gefunden: C 77,49, H 6,20, N 0.00. Präparation 4 [3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl][4-(2-(1- piperidinyl)ethoxy]phenyl]methanonhydrochlorid
Natriumhydrid (60% in Mineralöl, 2,68 g, 0,067 mol) wird in wasserfreiem THF (300 ml) unter einer Stickstoffatmosphäre suspendiert und die Suspension wird in einem Eisbad auf 5ºC gekühlt. Eine Lösung, die aus einer Verbindung von Präparation 2 (26,0 g, 0,0638 mol) in einem Minimum THF besteht, wird tropfenweise zugegeben und nachdem die Wasserstoffentwicklung aufgehört hat, wird das Gemisch gekühlt gehalten und für eine Stunde gerührt, um die Bildung des Enolats zu vervollständigen. Unter anhaltendem Kühlen wird Diphenylchlorphosphat (17,1 g, 13,2 ml, 0,0638 mol) in THF (75 ml) mit einer solchen Geschwindigkeit zugegeben, daß die Temperatur des Reaktionsgemisches unter 10ºC bleibt. Nach der vollständigen Zugabe kann sich das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen, wobei weiterhin gerührt wird. Eine Analyse einer kleinen Probe durch DC (SiO&sub2;, Toluol : EtOAc 9 : 1) zeigt eine im wesentlichen vollständige Bildung des Enolphosphatzwischenprodukts. Das Reaktionsgemisch wird nahe 5ºC gehalten und 3-Methoxyphenylmagnesiumbromid (150 ml einer 0,64 M Lösung in THF, 0,096 mol) wird durch eine Kanüle zugegeben. Das entstehende Gemisch wird bei 0ºC für 1 Stunde gerührt und kann sich dann auf 25ºC erwärmen und wird für eine weitere Stunde gerührt. Die Umsetzung wird kühl gehalten und sorgfältig durch die graduelle Zugabe von 50 ml 1 N Schwefelsäure gestoppt. Nach dem Einstellen des pH auf 7,0 wird das meiste THF unter verringertem Druck entfernt. Der wäßrige Rückstand wird zwischen Wasser und Chloroform aufgeteilt. Die organische Phase wird mit Kochsalzlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Eine Konzentrierung ergibt ein Öl das durch Chromatographie über Silicagel gereinigt wird, die einen Gradienten von Chloroform zu 95 : 5 Chlorform : Methanol zur Elution des Produkts verwendet. Geeignete Fraktionen liefern 36 g der rohen freien Base, die in Methanol gelöst und mit einem Überschuß einer 5 N HCl Lösung behandelt und dann zur Trockne konzentriert wird. Der Rückstand wird aus Methanol-Ethylacetat unter Bildung von 27,8 g (82%) des gewünschten Hydrochloridsalzes umkristallisiert: ¹H NMR (DMSO-d&sub6;) δ 10,09 (bs, 1H), 7,76 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,11-7,02 (m, 2H), 6,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,81-6,72 (m, 2H), 6,66 (dd, J = 8,2 Hz, 2,5, 1H), 6,61 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 4,37 (t, J = 4,6 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,01-2,82 (m, 4H), 2,78-2,63 (m, 2H), 1,81-1,58 (m, 5H), 1,31 (m, 1H), MS (FD) m/e 497 (M&spplus;, Verlust von HCl), Analyse berechnet für C&sub3;&sub2;H&sub3;&sub6;ClNO&sub4;: C 71,96, H 6,79, N 2,62. Gefunden: C 71,69, H 6,77, N 2,48. Präparation 5 [3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl](4-hydroxyphenyl)methanon
Zu EtSH (12,5 g, 14,9 ml, 0,20 mol) in wasserfreiem Ethylether (300 ml) werden bei -78ºC unter einer trockenen Stickstoffatmosphäre in einem 1 l Einhalsrundbodenkolben über eine Spritze langsam 1,6 M n-BuLi (113 ml, 0,180 mol) über 1 Stunde gegeben. Nachdem die Zugabe vollständig ist, wird der Ether unter Vakuum entfernt und eine Lösung aus [3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl](4-methoxyphenyl)methanon (24,0 g, 0,065 mol) in wasserfreiem DMF (150 ml) wird zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 2,5 Stunden auf 70-80ºC erhitzt und dann für 20 Stunden auf 65ºC. Eine DC Analyse (SiO&sub2;, Toluol : EtOAc 9 : 1) zeigt, daß das Ausgangsmaterial fast verschwunden ist. Bei geringeren Rf sind zwei Flecken vorhanden. Diese werden dem gewünschten Produkt und dem entsprechendem Diphenol (niedrigster Fleck) zugeordnet. Das Reaktionsgemisch kann sich abkühlen und wird dann in 500 ml eiskalte 1 N HCl Lösung gegossen. Das Rohprodukt wird in EtOAc extrahiert. Die EtOAc Phase wird mit gesättigter wäßriger NaCl Lösung gewaschen, über wasserfreiem MgSO&sub4; getrocknet und zu einem gelben Öl eingedampft. Das Produkt wird durch Chromatographie über Silicagel mittels eines Gradienten untersucht, der aus Chloroform besteht und linear zu 95 : 5 Chloroform : Methanol wechselt. Nach der Verdampfung der geeigneten Fraktionen erhält man ein gelbes Öl, das aus Ethylether unter Bildung von 21,3 g (54 %) des gewünschten Produkts umkristallisiert wird, Smp. 197-198ºC. ¹H NMR (CDCl&sub3;) δ 7,76 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,10-7,00 (m, 1H), 6,90-6,70 (m, 4H), 6,70-6,60 (m, 4H), 6,07 (bs, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,10-2,90 (m, 2H), 2,90-2,70 (m, 21H), MS (FD) m/e 386 (M&spplus;), Analyse berechnet für C&sub2;&sub5;H&sub2;&sub2;O&sub4;: C 77,70, H 5,74. Gefunden: C 77,45, H 5,66. Präparation 6 3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl][4-(2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenylmethanon
3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl](4-hydroxyphenyl)methanon (3,5 g, 9,0 mmol), wasserfreies K&sub2;CO&sub3; (6,25 g, 45 mmol), N-2-Chlorethylpiperidinhydrochlorid (1,75 g, 9,5 mmol, Aldrich Chem. Co.) 10 mg KI und wasserfreies DMF (ISO ml) werden unter einer Stickstoffatmosphäre vereinigt und das entstehende Gemisch wird bei Raumtemperatur für 16 Stunden gerührt. Das DMF wird unter verringertem Druck entfernt und der Rückstand wird zwischen Wasser und Ethylacetat verteilt. Die organische Phase wird abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach einer Konzentrierung zu einem Öl wird das Produkt durch Säulenchromatographie über Silicagel mit einem Gradienten aus Chloroform bis 95 : 5 Chloroform : Methanol gereinigt. Die geeigneten Fraktionen ergeben bei einer Verdampfung des Lösemittels und einer Vakuumtrocknung des Rückstands bei 80ºC über Nacht ein Öl, das 3,1 g wiegt (69%). ¹H NMR (CDCl&sub3;) 67,80 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,10-7,00 (m, 1H), 6,90-6,70 (m, 6H), 6,70-6,68 (m, 2H), 4,09 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,02 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 2,90-2,70 (m, 4H), 2,60-2,40 (m, 3H), 1,70-1,50 (m, 5H), 1,50-1,01 (m, 2H), MS (FD) m/e 497 (M&spplus;), Analyse berechnet für C&sub3;&sub2;H&sub3;&sub5;NO&sub4;: C 77,24, H 7,09, N 2,82. Gefunden: C 77,05, H 7,19, N 3,05. Beispiel 1 4-(3,8-Dimethoxy-11H-benzo[a]fluoren-11-yl)phenol
3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalenyl](4-methoxyphenyl)methanon (5,0 g, 12,95 mmol) wird zu 98% Methansulfonsäure (50 ml) gegeben und dann stark bei 25ºC unter einer Stickstoffatmosphäre gerührt. Das entstehende dunkle Reaktionsgemisch kann für 15 Minuten rühren und wird dann durch die Zugabe von Eis (300 g) gestoppt. Das Rohprodukt wird dann zweimal mit 100 ml Portionen Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit Kochsalzlösung und mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und konzentriert. Der enmtstehende ölige Feststoff wird durch eine Chromatographie über Silicagel gereinigt, die ein Gradientensystem verwendet, das anfänglich aus Toluol : Ethylacetat 95 : 5 besteht und linear zu 75 : 25 über 40 Minuten bei einer Flußrate von 150 ml/min wechselt. Die geeigneten Fraktionen werden vereinigt und unter Bildung von 3,0 g des gewünschten Produkts als amorpher Feststoff konzentriert.
¹H NMR (DMSO-d&sub6;) δ 9,18 (s, 1H), 8,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,51-7,43 (m, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,07 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 9,0 Hz, J = 2,5 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,72 (dd, J = 8,4 Hz, J = 2,3 Hz, 1H), 6,57 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 5,27 (s, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), MS (FD) m/e 368 (M&spplus;), Analye berechnet für C&sub2;&sub5;H&sub2;&sub0;O&sub3;: C 81,50, H 5,47, O 13,03. Gefunden: C 81,21, H 5,63. Beispiel 2 3,8-Methoxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluoren
Durch ein Verfahren, das zu dem in Beispiel 1 verwendeten analog ist, wird das Hydrochloridsalz des Produkts von Präparation 4 (300 mg) mittels Methansulfonsäure (3 ml) cyclisiert. Die Reaktion kann für 15 Minuten ablaufen und wird dann durch die vorsichtige Zugabe von kleinen Portionen des Reaktionsgemisches zu einem großen Überschuß an mi Eis versetzter Natriumbicarbonatlösung gegeben. Wenn die Gasentwicklung aufhört wird das Produkt zweimal mit 100 ml Portionen Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte werden mit Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter Bildung des gewünschten Produkts (253 mg, 94%) als cremefarbener Feststoff konzentriert, Smp. 158-159ºC.
¹H NMR (DMSO-d&sub6;) δ 8,04 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,51-7,43 (m, 2H), 7,36 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,09-6,94 (m, 2H), 6,90 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,80-6,65 (m, 3H), 5,34 (s, 1H), 3,94 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,55 (t, J = 5,65 Hz, 2H), 2,40-2,22 (m, 4H), 1,51-1,32 (m, 5H), 1,31-1,22 (m, 1H).
(M&spplus;), Analyse berechnet für C&sub3;&sub2;H&sub3;&sub3;NO&sub3; · 0,5 mol H&sub2;O: C 80,14, H 6,93, N 2,92. Gefunden: C 78,66, H 7,01, N 2,87. Beispiel 3 3,8-Dihydroxy-11-[4-(2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluorenhydrochlorid
Zu einer Lösung aus [3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl][4-[2-(1-piperidinyl)- ethoxy]phenylmethanon]hydrochlorid (10,00 g, 18,7 mmol) in 500 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird unter N&sub2; bei 0ºC Bortribromid (8,85 ml, 0,00 mmol) gegeben. Das entstehende Gemisch kann bei 0-5ºC für 5 Stunden rühren. Die Reaktion wird dann in eine gerührte Lösung aus kaltem gesättigtem Natriumbicarbonat (großer Überschuß) gegossen. Wenn die Gasentwicklung aufhört wird die wäßrige Phase mit 5% Methanol/Chloroform (3 · 200 ml) extrahiert. Die organische Phase wird vereinigt, getrocknet (Natriumsulfat) und im Vakuum zu einem Öl konzentriert. Dieses Öl wird durch Chromatographie über eine Silicagelsäule mit THF : Methanol 9 : 1 als Elutionslösemittel gereinigt. Die rohe freie Base, die ein grünlicher Feststoff ist und 8,46 g wiegt, wird in 100 ml Methanol gelöst und mit 4 ml 5 N Chlonwasserstoffsäure behandelt und dann zur Trockne konzentriert. Der entstehende Feststoff wird mit 11 Chloroform : Methanol gewaschen, durch Filtration gewonnen und im Vakuum getrocknet. Nach dem Trocknen wird das gewünschte Produkt (5,5 g, 60%) als weißer, kristalliner Feststoff erhalten, Smp 183-184ºC.
¹H NMR (DMSO-d&sub6;) δ 9,93 (bs, 1H), 9,70 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 7,85 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 14,2 Hz, 2H), 7,00-6,9 (m, 4H), 6,81 (d, J = 8,40 Hz, 2H), 6,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,28 (s, 1H), 4,30-4,20 (m, 2H), 3,50-3,30 (m, 4H), 3,00-2,80 (m, 2H), 1,80-1,50 (m, 5H), 1,32 (bs, 1H), MS (FD) m/e 452 (M&spplus;), Analyse berechnet für C&sub3;&sub0;H&sub3;&sub0;NO&sub3;: C 73,84, H 6,20, N 2,87. Gefunden: C 73,46, H 6,16, N 2,76. Beispiel 4 3,8-Dihydroxy-11-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-11H-benzo[a]fluorenhydrochlorid
Eine Lösung aus [3,4-Dihydro-6-methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-naphthalinyl][4-2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenylmethanon]hydrochlorid (8,4 g, 16,9 mmol) in wasserfreiem Methylenchlorid (300 ml) wird fast auf 0ºC gekühlt und mit AlCl&sub3; (15,4 g, 118 mmol), gefolgt von Ethanthiol (10,4 g, 12,5 ml, 16,9 mmol) behandelt. Die Reaktion wird kalt gehalten und für 30 Minuten gerührt, wobei ein roter Niederschlag auftritt. Die Zugabe von zusätzlichem Ethanthiol (80 ml) löst etwas des Niederschlags und das Rühlen wird für weitere 2 Stunden bei Eisbadtemperatur fortgesetzt. Das Reaktionsgemisch wird mit 100 ml FHF behandelt, das viel des jetzt reichlich vorhandenen roten Niederschlags löst. Methanol (200 ml) wird dann zugegeben und der rote Niederschlag löst sich vollständig auf. Das Reaktionsgemisch wird fast bis zur Trockne konzentriert und die entstehende weiße Suspension wird in einen Überschuß aus Natriumcarbonat und Eis gegossen. Das entstehende Gemisch wird mit warmem Chloroform: Methanol 85 : 15 extrahiert und die Extrakte werden zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird auf ein Silicagelkissen aufgetragen und mit 75 : 25 Ethylacetat : Methanol eluiert. Geeignete Fraktionen ergeben 4,1 g Rohprodukt, für das eine Reinigung durch Umkristallisation (aus einem Gemisch aus Methanol, Ethylacetat und Chloroform) versucht wird. Es wird eventuell eine kleine Menge an Kristallen als Hydrochlorid unter Bildung von 0,49 g (6%) des gewünschten Materials isoliert.

Testverfahren

In den Beispielen, die die Verfahren erläutern, wird ein postmenopausales Modell verwendet, worin die Wirkungen der unterschiedlichen Behandlungen auf die zirkulierenden Lipide bestimmt werden.
Fünfundsiebzig Tage alte weibliche Sprague Dawley Ratten (Gewichtsbereich 200 bis 225 g) erhält man von den Charles River Laboratories (Portage, MI). Die Tiere werden entweder beidseitig ovarektomiert (OVX) oder einem operativen Scheinverfahren bei den Charles River Laboratories unterzogen und dann nach einer Woche geliefert. Nach der Ankunft werden sie in Metallhängekäfigen in Gruppen von 3 oder 4 pro Käfig gehalten und haben für eine Woche freien Zugang zu Futter (Calciumgehalt etwa 0,5%) und Wasser. Die Raumtemperatur wird bei 22,2ºC ± 1,7ºC mit einer minimalen relativen Luftfeuchte von 40% gehalten. Die Lichtperiode im Raum beträgt 12 Stunden Licht und 12 Stunden Dunkelheit.

Dosierungsplan zur Gewebeentnahme

Nach einer Woche Akklimatisierungszeit (daher zwei Wochen nach OVX) wird die tägliche Dosierung mit der Testverbindung begonnen. 17α-Ethinylöstradiol oder die Testverbindung werden als Suspension 1% Carboxymethylcellulose oder gelöst in 20% Cyclodextrin oral verabreicht, falls nichts anderes angegeben ist. Die Tiere erhalten die Dosen 4 Tage lang. Nach dem Dosierungsplan werden die Tiere gewogen und mit einem Gemisch aus Ketamin : Xylazin (2 : 1, V : V) betäubt und es wird eine Blutprobe durch eine cardiale Punktion entnommen. Die Tiere werden dann durch Erstickung mit CO&sub2; getötet, der Uterus wird durch eine Mittellinienincision entfernt und das Naßgewicht des Uterus wird bestimmt.

Cholesterinanalyse

Die Blutproben können bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerinnen und das Serum wird nach der Zentrifugation für 10 Minuten bei 3000 Upm erhalten. Das Serumcholesterin wird mittels eines Hochleistungscholesterintests von Boehringer Mannheim Diagnostics bestimmt. Kurz gesagt wird das Cholesterin zu Cholest-4- en-3-an und Wasserstoffperoxid oxidiert. Das Wasserstoffperoxid wird dann mit Phenol und 4-Aminophenazon in Gegenwart von Peroxidase unter Bildung eines p-Chinoniminfarbstoffs umgesetzt, der spektrophotometrisch bei 500 nm ausgelesen wird. Die Cholesterinkonzentration wird dann aus einer Standardkurve errechnet.

Uteruseosinophilenperoxidasetest (EPO)

Die Uteri werden bis zur enzymatischen Analyse bei 4ºC aufbewahrt. Die Uteri werden dann in 50 Volumina 50 mM Tris-Puffer (pH 8,0) homogenisiert, worin 0,005% Triton-X 100 enthalten sind. Nach der Zugabe von 0,01% Wasserstoffperoxid und 10 mM o-Phenylendiamin (Endkonzentrationen) in Tris-Puffer, wird die Absorptionszunahme für eine Minute bei 450 nm verfolgt. Die Anwesenheit von Eosinophilen im Uterus ist ein Zeichen für die östrogene Aktivität einer Verbindung. Die maximale Geschwindigkeit eines 15 Sekunden langen Intervalls wird über den anfänglichen, linearen Teil der Reaktionskurve bestimmt.

Quelle der Verbindung

17α-Ethinylöstradiol erhält man von Sigma Chemical Co., St. Louis. MO.

Einfluß der Verbindungen der Formel I auf das Serumcholesterin und die Bestimmung der Agonist/Nicht-Agonist Aktivität

Die in der folgenden Tabelle 1 gezeigten Daten zeigen vergleichende Ergebnisse zwischen ovarektomierten Ratten, Ratten, die mit 17α-Ethinylöstradiol (EE&sub2;, einer oral verfügbaren Form von Östrogen) behandelt wurden und Ratten, die mit bestimmten erfindungsgemäßen Verbindungen behandelt wurden. Obwohl EE&sub2; eine Verringerung beim Serumcholesterin verursacht, wenn es oral mit 0,1 mg/kg/Tag verabreicht wird, ruft es auch eine deutliche stimulatorische Wirkung auf den Uterus hervor, so daß das Uterusgewicht von EE&sub2; behandelten Ratten wesentlich höher ist, als das Uterusgewicht von ovarektomierten Testtieren. Die Uterusreaktion gegenüber Östrogen ist in der Technik gut bekannt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen verringern nicht nur das Serumcholesterin im Vergleich zu ovarektomierten Kontrolltieren, sondern das Uterusgewicht wird bei der Mehrzahl der getesteten Verbindungen der Formel I nur minimal erhöht bis leicht verringert. Im Vergleich zu in der Technik bekannten Östrogenverbindungen, ist der Vorteil der Verringerung des Serumcholesterins ohne schädliche Beeinflussung des Uterusgewichts ziemlich selten und erwünscht.
Wie es in den folgenden Daten ausgedrückt ist, wird die Ostrogenität auch durch die Evaluierung der schädlichen Reaktion der Eosinophileninfiltration in den Uterus ermittelt. Die erfindungsgemäßen Verbindungen verursachen keine Erhöhung der Anzahl der Eosinophilen, die in der Stromaschicht von ovarektomierten Ratten beobachtet werden, während Östradiol eine wesentliche, erwartete Erhöhung der Eosinophileninfiltration verursacht.
Die in den folgenden Tabellen 1 und 2 gezeigten Daten spiegeln die Reaktion von 5 bis 6 Ratten pro Behandlung wider.
Vier Tage dauernder OVX Rattentest: Tabelle 1 Experiment 1 Tabelle 2 Experiment 2
a mg/kg PO
b Prozentuale Uterusgewichtszunahme gegenüber den ovarektomierten Kontrollen
c Eosinophilenperoxidase Vmax
d Serumcholesterinabnahme gegenüber den ovarektomierten Kontrollen
e 17-α-Ethinylöstradiol
Zusätzlich zu den gezeigten Nutzen der erfindungsgemäßen Verbindungen, speziell im Vergleich zu Östradiol, zeigen die obigen Daten deutlich, daß die Verbindungen der Formel I keine Östrogennachahmer sind. Darüberhinaus werden keine schädlichen toxikologischen Effekte (beispielsweise Anzahl der Überlebenden) bei den Behandlungen beobachtet.

Osteoporosetestverfahren

Durch Befolgen des oben beschriebenen allgemeinen Präparationsverfahrens werden die Ratten täglich für 35 Tage (6 Ratten pro Behandlungsgruppe) behandelt und durch Erstickung mit Kohlendioxid am 36, Tag getötet. Die 35 Tage dauernde Periode reicht aus, um eine maximale Reduktion der Knochendichte zu erhalten, wobei dies wie hierin beschrieben gemessen wird. Zum Tötungszeitpunkt werden die Uteri entfernt, von andersartigem Gewebe befreit und der Flüssigkeitsinhalt wird vor der Bestimmung des Naßgewichts entleert, um die mit der vollständigen Ovarektomie zusammenhängende Östrogendefizienz zu bestätigen. Das Uterusgewicht wird routinemäßig in Reaktion auf die Ovarektomie um etwa 75% verringert. Die Uteri werden dann in neutral gepufferte 10% Formalinlösung gegeben, um die anschließende histologische Untersuchung zu ermöglichen.
Die rechten Femuren werden entnommen und digitalisierte Röntgenstrahlen werden an der distalen Metaphyse erzeugt und durch ein Bildanalyseprogramm (NIH image) analysiert. Der proximale Bereich der Tibia aus diesen Tieren wird auch durch quantitative Computertomographie gescannt.
Gemäß den obigen Verfahren werden die erfindungsgemäßen Verbindungen und Ethinylöstradiol (EE&sub2;) in 20% Hydroxypropyl-β-cyclodextrin oral an Testtiere verabreicht. Die Daten der distalen Femurmetaphyse und proximalen Tibia sind die Ergebnisse der Behandlungen mit den Verbindungen der Formel I im Vergleich zu intakten und ovarektomierten Testtieren. Die Ergebnisse sind als proztentualer Schutz relativ zur Ovarektocnie angegeben, wie dies in der folgenden Tabelle 3 gezeigt ist.
Zusammengefaßt verursacht die Ovarektomie der Testtiere eine signifikante Verringerung der Femurdichte verglichen mit intakten, nur mit Träger behandelten Kontrollen. Oral verabreichtes Ethinylöstradiol (EE&sub2;) verhindert diesen Verlust, aber das Risiko der Uterusstimulierung mit dieser Behandlung ist immer gegenwärtig. Tabelle 3

MCF-7 Proliferationstest

MCF-7 Brustadenocarzinomzellen (ATCC HTB 22) werden in MEM (Minimal Essential Medium, Phenolrot-frei, Sigma, St. Louis, MO) gehalten, das mit 10% fetalem Rinderserum (FBS) (V/V), L-Glutamin (2 mM), Natriumpyruvat (1 mM), HEPES {(N-[2-Hydroxyethyl]piperazin-N'-[2-ethansulfonsäure] 10 mM}, nicht essentiellen Aminosäuren und Rinderinsulin (1 ug/ml) supplementiert ist (Erhaltungsmedium). Zehn Tage vor dem Test werden die MCF-7 Zellen in Erhaltungsmedium überführt, das mit 10% mit dextranbeschichteter Aktivkohle behandeltem fetalem Rinderserum (DCC-FBS) anstelle von 10% FBS supplementiert ist, um die internen Steroidvorräte abzubauen. Die MCF-7 Zellen werden aus dem Erhaltungskolben mittels Zelldissoziationsmedium entfernt (Ca²&spplus;/Mg²&spplus; freies HBSS (Phenolrot-frei), das mit 10 mM HEPES und 2 mM EDTA supplementiert ist). Die Zellen werden zweimal mit Testmedium gewaschen und auf 80 000 Zellen/ml eingestellt. Etwa 100 ul (8000 Zellen) werden in Flachbodenmikrotiterkulturplatten (Costar 3596) gegeben und bei 37ºC in einem befeuchteten Inkubator mit 5% CO&sub2; für 48 Stunden inkubiert, um die Zellhaftung und die Äquilibrierung nach dem Transfer zu ermöglichen. Es werden serielle Verdünnungen der Arzneimittel oder von DMSO als Verdünnungskontrolle in Testmedium hergestellt und 50 ul werden in dreifach angelegten Mikrokulturen gefolgt von 50 ul Testmedium auf ein Endvolumen von 200 ul überführt. Nach weiteren 48 Stunden bei 37ºC in einem befeuchteten Inkubator mit 5% CO&sub2; werden die Mikrokulturen mit Tritium-versetztem Thymidin für 4 Stunden markiert (1 uCi/Vertiefung). Die Kulturen werden durch Einfrieren bei -70ºC für 24 Stunden gefolgt von einem Auftauen und Ernten der Mikrokulturen mittels eines Skatron Semiautomatic Cell Harvester beendet. Die Proben werden durch Flüssigscintillation mittels eines Wallac BetaPlace β-Zählgeräts gemessen. Die Verbindungen der Formel I sind wirksam und stark bei der Hemmung des Tumorzellwachstums, wobei beispielsweise die Verbindung von Beispiel 3 eine HK&sub5;&sub0; von 0,11 nM aufweist.

DMBA-induzierte Brusttumorhemmung

Es werden östrogenabhängige Brusttumoren in weiblichen Sprague-Dawley Ratten gebildet, die von Harlan Industries, Indianapolis, Indiana bezogen werden. Bei einem Alter von etwa 55 Tagen erhalten die Ratten eine einzelne orale Gabe aus 20 mg 7,12-Dimethylbenzo[a]anthrazen (DMBA). Etwa 6 Wochen nach der DMBA Verabreichung werden die Brustdrüsen in wöchentlichen Intervallen auf das Vorkomnen von Tumoren palpiert. Immer wenn ein oder mehrere Tumoren auftreten, werden die längsten und kürzesten Durchmesser jedes Tumors mit einem Mikrometer gemessen, die Messungen werden aufgezeichnet und das Tier wird für das Experiment ausgewählt. Es wird der Versuch unternommen, die verschiedenen Tumorgrößen in den Behandlungs- und Kontrollgruppen so gleich zu verteilen, daß die Tumoren der mittleren Größe zwischen den zwei Testgruppen gleich verteilt sind. Die Kontrollgruppen und die Testgruppen für jedes Experiment enthalten 5 bis 9 Tiere.
Die Verbindungen der Formel I werden entweder über intraperitoneale Injektionen in 2% Akaziengummi oder oral verabreicht. Oral verabreichte Verbindungen werden entweder gelöst oder in 0,2 ml Maisöl suspendiert. Jede Behandlung, einschließlich Kontrollbehandlungen mit Akaziengummi und Maisöl, wird einmal am Tag jedem Testtier verabreicht. Nach der anfänglichen Tumormessung und der Auswahl der Testtiere werden die Tumoren jede Woche durch das oben erwähnte Verfahren gemessen. Die Behandlung und die Messungen der Tiere werden für 3 bis 5 Wochen fortgesetzt, wonach die schließlichen Tumorflächen bestimmt werden. Für jede Verbindung und die Kontrollbehandlung wird die Veränderung der mittleren Tumorfläche berechnet.

Claims

1. Verbindung der Formel I

worin

R¹ für -H, -OH, -O(C&sub1;-C&sub4; Alkyl), -OCO(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -O(CO)O(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -OCOAr, -O(CO)OAr, worin Ar für Phenyl steht, das wahlweise ein- oder zweimal substituiert ist mit C&sub1;-C&sub6; Alkyl, C&sub1;-C&sub4; Alkoxy, Hydroxy, Nitro, Chlor, Fluor, Trichlor- oder Trifluormethyl, oder -OSO&sub2;(C&sub2;-C&sub6; Alkyl) steht,

R² für -OH, -O(C&sub1;-C&sub4; Alkyl), -OCO(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -O(CO)O(C&sub1;-C&sub6; Alkyl), -OCOAr, -O(CO)OAr, worin Ar für Phenyl steht, das wahlweise ein- oder zweimal substituiert ist mit C&sub1;-C&sub6; Alkyl, C&sub1;-C&sub4; Alkoxy, Hydroxy, Nitro, Chlor, Fluor, Trichlor- oder Trifluormethyl, oder -OSO&sub2;(C&sub2;-C&sub6; Alkyl) steht,

R³ für 1-Piperidinyl, 1-Pyrrolidinyl, Methyl-1-pyrrolidinyl, Dimethyl-1-pyrrolidinyl, 4-Morpholino, Dimethylamino, Diethylamino, Diisopropylamino oder 1-Hexamethylenimino steht, und

n für 2 oder 3 steht,

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat hiervon.

2. Verbindung nach Anspruch 1, worin n für 2 steht.

3. Verbindung nach Anspruch 2, worin R³ für 1-Piperidinyl steht.

4. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung nach Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon, und wahlweise eine wirksame Menge Östrogen oder Progestin, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff enthält.

5. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome des postmenopausalen Syndroms.

6. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome des postmenopausalen Syndroms des pathologischen Zustands der Osteoporose.

7. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome des postmenopausalen Syndroms des pathologischen Zustands, der mit einer kardiovaskulären Erkrankung zusammenhängt.

8. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome einer kardiovaskulären Erkrankung, die mit Hyperlipidämie zusammenhängt.

9. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome des postmenopausalen Syndroms des pathologischen Zustands von östrogenabhängigem Krebs.

10. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome von Brust- oder Uteruskrebs.

11. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome der fibroiden Uteruserkrankung.

12. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome der Endometriose.

13. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome der glatten Muskelzellproliferation der Aorta.

14. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Linderung der Symptome der Restenose.

15. Verbindung der Formel II

worin

R1a für -H oder -OR&sup5; steht, worin R&sup5; für eine Hydroxyschutzgruppe steht,

R2a für -OR&sup6; steht, worin R&sup6; für eine Hydroxyschutzgruppe steht,

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Solvat hiervon,

worin die Hydroxyschutzgruppe ausgewählt ist aus Acyl, Mesyl, Tosyl, Benzyl, Alkylsilyl und C&sub1;-C&sub4; Alkyl.