DE69409641T2

DE69409641T2 - Anwendung von indolocarbazol-derivaten zur behandlung von prostataerkrankungen

Info

Publication number: DE69409641T2
Application number: DE69409641T
Authority: DE
Inventors: Patricia C. West Chester Pa 19380 Contreras; Craig A. Harleysville Pa 19438 Dionne; Chikara Tokyo 192-03 Murakata
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd; Cephalon LLC
Current assignee: KH Neochem Co Ltd; Cephalon LLC
Priority date: 1993-05-28
Filing date: 1994-05-27
Publication date: 1998-11-26
Anticipated expiration: 2014-05-28
Also published as: NZ267337A; JP2002356487A; EP0699204A4; US5516771A; FI114864B; US5654427A; JP3727613B2; JP3344586B2; KR960702838A; FI955709A0; NO954816L; DE69409641D1; CA2163904C; FI113537B; EP0699204B1; WO1994027982A1; JP2002504064A; ES2118414T3; AU6960794A; CA2163904A1

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung bestimmter Indolocarbazol- Verbindungen zur Herstellung eines Medikamentes zur Verwendung bei der Behandlung eines pathologischen Zustandes der Prostata.
Erkrankungen der Prostata sind bei alternden Männern häufig. Beispielsweise sind 90 % aller 80-jährigen Männer von Prostata-Hyperplasie betroffen. Wenn dieser Hyperplasie-Zustand zu Harnstau führt, wird er durch operative Verfahren erleichtert. Prostatakrebs, der bei Männern zurzeit am häufigsten diagnostizierte Krebs, wird am häufigsten operativ, durch Radiotherapie oder durch Androgen-Entfernung, z. B. mittels Kastration, östrogentherapie, Verabreichen von Analoga des adrenocorticotropen Hormons (ACTH) (Harrison's Principles of Internal Medicine, 12th ed., Wilson et al. (Hrsg.), McGraw-Hill, NY., Seiten 1629-32) oder Verabreichen von Suramin, einem nichtspezifischen und hochtoxischen Wachstumsfaktor-Inhibitor, behandelt.
Die Neurotrophin-Familie der Wachstumsfaktoren umfasst den Nerve Growth Factor (NGF), Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF), Neurotrophin-3 (NT-3) und Neurotrophin 4/5 (NT-4/5). Diese basischen Proteine sind etwa 120 Aminosäuren lang, zeigen etwa 50 %-ige Sequenzhomologie und sind unter Säugerspezies hochkonserviert (Issackson et al., FEBS Lett. 285: 260-64, 1991). NGF war der zuerst entdeckte Wachstumsfaktor und bleibt das am besten charakterisierte Neurotrophin. NGF wird benötigt für die normale Entwicklung der sensorischen und sympathischen Neuronen und zur normalen Funktion dieser Zellen beim Erwachsenen (Levi-Montalcini, Annu. Rev. Neurosci. 5: 341-362, 1982; Yankner et al., Annu. Rev. Biochem. 51: 845-868, 1982).
Die Neurotrophinbindung und -aktivierung eines Satzes von Hochaffinitätsrezeptoren (Trks) ist notwendig und ausreichend, um die meisten biologischen wirkungen der Neurotrophine zu vermitteln. Die Trks sind Transmembranproteine, die eine extrazelluläre Ligandenbindungsdomäne, eine Transmembransequenz und eine cytoplasmische Tyrosinkinase- Domäne enthalten. Die Trks umfassen eine Familie strukturell verwandter Proteine mit bevorzugten Bindungsspezifitäten für die einzelnen Neutrophine. TrkA, das manchmal auch als Trk bezeichnet wird, ist ein Hochaffinitätsrezeptor für NGF, kann aber unter bestimmten Bedingungen auch biologische Antworten auf NT-3 vermitteln (Kaplan et al., Science 252: 554-558, 1991; Klein et al., Cell 65: 189-197, 1991; Cordon-Cardo et al., Cell 66: 173-183, 1991). TrkB bindet und vermittelt Funktionen von BDNF, NT-3 und NT4/5 (Klein et al., Cell 66: 395-403, 1991; Squinto et al., Cell 65: 885-893, 1991; Klein et al., Neuron 8: 947-956, 1992). TrkC ist relativ spezifisch für NT-3 (Lamballe et al, Cell 66: 967-979, 1991).
Aus der Literatur ist bekannt, dass verschiedene Indolocarbazol- Verbindungen eine Reihe therapeutischer Verwendungen aufweisen. Eine Wirksamkeit gegen pathologische Zustände der Prostata ist jedoch nicht vorgeschlagen worden. Beispiele für solche Literaturstellen sind: EP- A-303 697, EP-A-558 962, EP-A-328 000, WO 94/02488, US-A-5,438,050, Chemical Abstracts 107: 236751z (1987), Chemical Abstracts 108: 221497t (1988), Chemical Abstracts 111: 77750n (1989), Chemical Abstracts 111: 194456g (1989), Battistone et al., in Cancer Chemotherapy and Pharmacology 31: 401-411 (1993) und Akinaga et al., in Cancer Chemotherapy and Pharmacology 29: 266-272 (1992).
Unter einem Gesichtspunkt betrifft die Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder der Formel II
worin entweder:
a) Z¹ und Z² jeweils für Wasserstoff stehen, wobei
1) R ausgewählt ist unter OH, O-n-Alkyl mit 1-6 Kohlenstoffatomen und O-Acyl mit 2-6 Kohlenstoffatomen
2) X ausgewählt ist unter H; CH&sub2;Y (worin Y steht für: OR&sup7; (worin R&sup7; für H oder C&sub2;&submin;&sub5;-Acyl, bevorzugt Acetyl);
SOR&sup8; (worin R&sup8; für C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl oder eine ein Stickstoffatom enthaltende heterocyclische Gruppe steht, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl);
NR&sup9;R¹&sup0; (worin R&sup9; und R¹&sup0; unabhängig voneinander für H oder C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl stehen oder einer der Reste R&sup9; und R¹&sup0; für H oder C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl steht und der andere für Pro, Ser, Gly, Lys oder C&sub2;&submin;&sub5;-Acyl steht);
SR¹&sup6; (worin R¹&sup6; für C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl oder eine ein Stickstoffatom enthaltende heterocyclische Gruppe steht, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl);
CONR¹¹R¹² (worin R¹¹ und R¹² unabhängig voneinander für H, C&sub1;&submin;&sub6;- Alkyl, C&sub6;H&sub5;, C&sub1;&submin;&sub6;-Hydroxyalkyl stehen oder R¹¹ und R¹² zusammen -CH&sub2;CH&sub2;OCH&sub2;-CH&sub2;- bilden);
CO&sub2;CH&sub3;; CH=NNHCONH&sub2;; CONHOH; CH=NOH; CH=NNHC(=NH)NH&sub2;;
CH=NN(R¹&sup7;)&sub2; (worin R¹&sup7; für C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl steht);
CH&sub2;NHCONHR¹&sup8; (worin R¹&sup8; für eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppe oder eine C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylgruppe steht);
oder, wenn R¹ und R² für Wasserstoff stehen, X auch für CONHC&sub6;H&sub5; stehen kann;
oder X und R zusammen -CH&sub2;NHCO&sub2;-, -CH&sub2;OC(CH&sub3;)&sub2;O-, =O oder -CH&sub2;N(CH&sub3;)CO&sub2; bilden;
3) jeder Rest R¹, R², R&sup5; und R&sup6; unabhängig voneinander für H steht oder bis zu zwei dieser Reste für F, Cl, Br, I, NO&sub2;, CN, OH, NHCONHR¹³ (worin R¹³ fur C&sub6;H&sub5; oder C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl steht, mit der Maßgabe, dass nur einer der Reste R¹, R², R&sup5; und R&sup6; für NHCONHR¹³ steht), CH&sub2;OR¹³, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl, CH&sub2;OCONHR¹&sup4;, NHCO&sub2;R¹&sup4; (worin R¹&sup4; für eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;- Alkylgruppe steht),
CH(SC&sub6;H&sub5;)&sub2; oder
stehen; oder R¹ für CH&sub2;S(O)pR²¹ (worin p = 0 oder 1 ist und R²¹ für Aryl, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl, CH&sub2;CH&sub2;N(CH&sub3;)&sub2;,
oder eine Stickstoffatom enthaltende heterocyclische Gruppe steht, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl) steht und R², R&sup5; und R&sup6; für H stehen; oder R für CH=NNR²²R²³ (worin R²² und R²³ unabhängig voneinander für H, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl, C(=NH)NH&sub2; oder eine ein Stickstoffatom enthaltende heterocyclische Gruppe stehen, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl, oder R²² und R²³ zusammen eine -(CH&sub2;)&sub4;-, -(CH&sub2;CH&sub2;OCH&sub2;CH&sub2;)- oder -(CH&sub2;CH&sub2;N(CH&sub3;)CH&sub2;CH&sub2;)-Brückengruppe bilden, mit der Maßgabe, dass R²² und R²³ nicht gleichzeitig für H stehen können und dass wenigstens einer der Reste R²² oder R²³ für H steht, sofern nicht beide für Alkyl stehen oder zu sammen eine Brückengruppe bilden) steht und R², R&sup5; und R&sup6; für H stehen;
oder:
b) Z¹ und Z² zusammen für 0 stehen; X für CO&sub2;CH&sub3; steht; R für OH steht und R¹, R², R&sup5; und R&sup6; jeweils für Wasserstoff stehen oder
worin:
a) R³ und R&sup4; unabhängig voneinander ausgewählt sind unter H, C&sub1;&submin;&sub6;- Alkyl, C&sub1;&submin;&sub3;-Hydroxyalkyl und C&sub3;&submin;&sub6;-Alkenyl, mit der Maßgabe, dass R³ und R&sup4; nicht gleichzeitig für H stehen; und
b) Z¹ und Z² beide für Wasserstoff stehen; und R¹, R², R&sup5; und R&sup6; unabhängig voneinander für H stehen oder bis zu zwei dieser Reste für F, Cl, Br, I, NO&sub2;, CN, OH, NHCONHR¹³ (worin R¹³ für C&sub6;H&sub5; oder C&sub1;&submin;&sub3;- Alkyl steht, mit der Maßgabe, dass nur einer der Reste R¹, R², R&sup5; und R&sup6; für NHCONHR¹³ steht), CH&sub2;OR¹³, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl, CH&sub2;OCONHC&sub2;H&sub5; oder NHCO&sub2;CH&sub3; stehen; oder
c) Z und Z zusammen für 0 stehen und R¹, R², R&sup5; und R&sup6; jeweils für Wasserstoff stehen
oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung eines pathologischen Zustandes der Prostata.
Bei dem pathologischen Zustand der Prostata kann es sich um einen Zustand handeln, der aus einer exzessiven Proliferation der Prostatazellen resultiert. Der Zustand kann behandelt werden, indem man einem Säuger eine therapeutische Menge einer Indolocarbazol-Verbindung, z. B. K-252a, oder ein funktionelles Derivat davon verabreicht, d. h. eine Verbindung der Formel I oder II oder ein Salz davon.
Die obige Formel I umfasst die Verbindung K-252a. K-252a, ein alkaloidähnliches Material, das aus der Kulturbrühe von Nocardiosis sp. Und Actinomadula sp. isoliert wird, ist ein Inhibitor der Proteinkinase C, A und G sowie der leichtkettigen Myosinkinase und Phosphorylas ekinase.
Bestimmte funktionelle Derivate von K-252a können verwendet werden, um Prostatagewebewachstum zu verhindern, und können dadurch Zustände abschwächen oder den Rückgang von Zuständen bewirken, die eine pathologische Proliferation von Prostatazellen, z. B. gutartige Prostatahypertrophie, oder Prostatakrebs, d. h. örtlich begrenzter oder metastasischer Prostatakrebs, zeigen. Eine exzessive, oder pathologische Proliferation von Prostatazellen kann indiziert sein durch eine Anzahl zellulärer Veränderungen, welche neoplastische Transformation, ein verändertes Verhältnis von Muskelfaser- (stromalen) Zellen zu Epithel- (sekretorischen) Zellen in der Prostata oder durch eine Gesamtveränderung im Grad der Prostatavergrößerung oder -schwellung umfassen, ohne darauf beschränkt zu sein. Dies kann zu Symptomen wie Verzögerung, schwachem Harnfluss, unterbrochenem Harnfluss oder Zellwachstum außerhalb der Organkapsel führen.
Unter "funktionellem K-252a-Derivat versteht man ein K-252a- Derivat, das die Tyrosinkinase- (TK)-Aktivität in Zusammenhang mit einem Neurotrophinrezeptor, wie TrkA, TrkB oder TrkC, inhibiert. Bevorzugt handelt es sich bei dem Neurotrophinrezeptor um TrkA, welcher aktiviert wird, wenn er mit NGF in Kontakt kommt. Die TK-Aktivität der Trks in Anwesenheit des K-252a-Derivates ist bevorzugt geringer als die TK-Aktivität der Trks in Abwesenheit des K-252a-Derivates. Die TK- Aktivität der Trks kann gemäß der hier offenbarten Verfahren gemessen werden
Im folgenden sind die bevorzugten Verbindungen der Formel I als Verbindungen I-1 bis einschließlich 1-76 bezeichnet.
Im folgenden sind die bevorzugten Derivate der Formel II als Verbindungen II-1 bis einschließlich II-4 bezeichnet.
Zur erfindungsgemäßen Verwendung bevorzugte Verbindungen der Formel I und der Formel II sind die in den Tabellen I und Ia gezeigten, wobei die folgenden Substitutionen vorgenommen sind. Tabelle 1
(1) R² steht für Wasserstoff, außer wie in Fußnote 6, 7 und 8 ange merkt. R&sup5; und R&sup6; stehen für wasserstoff.
(2) Z¹ und Z² stehen beide für Wasserstoff oder beide zusammen stehen für Sauerstoff, wie angezeigt.
(3) X und R zusammen bilden die Bindungsgruppe.
(4) Die NH-Aminosäurebindung ist eine Amidbindung an die Carboxygruppe der Aminosäure.
(5) Glc steht für Glucose; die Bindung besteht an der 1-Position.
(6) R² steht für Br.
(7) R² steht für Cl.
(8) R³ und R&sup4; stehen für CH&sub2;CH=CH&sub2;.
(9) R³ steht für CH&sub2;CH=CH&sub2;; R&sup4; steht für H.
(10) R³ steht für H; R&sup4; steht für CH&sub2;CH=CH&sub2;.
(11) Ein 1,5:1,0-Gemisch der Komponenten II-2 und II-3.
(12) Die Verbindung liegt in der Form des Hydrochlorids vor. Tabelle 1A
(1) Z¹ und Z² stehen beide für Wasserstoff. R², R³ und R&sup4; stehen für Wasserstoff, außer wie in Fußnote 4, 5 und 6 angemerkt. R&sup5; und R&sup6; stehen für Wasserstoff.
(2) X und R bilden gemeinsam die Bindungsgruppe.
(3) Die NH-Aminosäurebindung ist eine Amidbindung an die Carboxylgruppe der Aminosäure.
(4) R² steht für CH&sub2;OH.
(5) R steht für CH&sub2;S(O)C&sub2;H&sub5;.
(6) R³ und R&sup4; stehen für CH&sub2;CH&sub2;CH&sub2;OH; R² steht für H.
Gemäß einer Ausführungsform betrifft die Erfindung daher die Verwendung einer Indolocarbazol-Verbindung, die ausgewählt ist unter I-1, I-2, I-5, I-8, I-12, I-15, I-16, I-19, I-20, I-22 und I-42.
Gemäß einer anderen Ausführungsform betrifft die Erfindung die Verwendung einer Indolocarbazol-Verbindung, die ausgewählt ist unter I-52, I-53, I-54, I-55, I-56, I-57, I-58, I-59, I-60, I-61, I-62, I- 63, I-64, I-65, I-66, I-67, I-68, I-69, I-70, I-71, I-72, I-73, I-74, I-75 und I-76.
Gemäß einer anderen Ausführungsform ist die Indolocarbazol Verbindung ausgewählt aus I-6, I-9, I-11, I-13, I-14, I-16, I-17, I-18, I-19, I-24, I-25, I-27, I-31, I-33, I-34, I-35, I-37, I-40, I-41, I-43, I-45, I-46, I-47, I-48, I-49, I-50 und I-51.
In einer bevorzugten Ausführungsform ist die Indolocarbazol- Verbindung I-1, I-5, I-8, I-12, I-15, I-16, I-19, I-20, I-22 oder I-42.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform ist die Indolocarbazol-Verbindung I-1, I-5, I-12, I-19 oder I-42.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform stehen Z¹ und Z² jeweils für Wasserstoff.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung die Verwendung einer Indolocarbazol-Verbindung, die ausgewählt ist aus II-1, II-2, II-3 und II-4.
Die erfindungsgemäß verwendeten Indolocarbazol-Derivate können in Kombination mit einem pharmakologischen Exzipienten oder in Form eines pharmazeutisch verträglichen Salzes verabreicht werden.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung von Verbindungen der folgenden Formel (III):
worin R¹ für Halogen, CH&sub2;OCONHR¹&sup4; oder NHCO&sub2;R¹&sup4; steht (worin R¹&sup4; für geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl steht); R² für Wasserstoff oder Halogen steht; und X für CO&sub2;CH&sub3;, CH&sub2;OH oder CONHR¹&sup5; steht ( worin R¹&sup5; für Wasserstoff, hydroxy-substituiertes geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;- &sub6;-Alkyl oder C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl steht), wobei (i) R² nicht für Wasserstoff steht, wenn R¹ Halogen und X CO&sub2;CH&sub3; oder CH&sub2;OH bedeuten, (ii) R² nicht die gleiche Bedeutung wie R¹ besitzt, wenn R¹ Halogen und X CO&sub2;CH&sub3; bedeuten und (iii) X nicht für CONHC&sub6;H&sub5; steht, wenn R¹ und R² für Br stehen. Die Verwendung pharmazeutisch verträglicher Salze der Verbindungen der Formel III ist Bestandteil der Erfindung.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung von Verbindungen der folgenden Formel (IV):
worin X für CH&sub2;S(O)R¹&sup6; (worin R¹&sup6; für C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl oder eine ein Stickstoffatom enthaltende heterocyclische Gruppe steht, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl), CH&sub2;SR¹&sup6;, CH=NN(R¹&sup7;)&sub2; (worin R¹&sup7; für C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl steht), CH&sub2;NHCONHR¹&sup8; (worin R¹&sup8; für geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl steht) oder CH&sub2;CO&sub2;CH&sub3; steht. Die Verwendung pharmazeutisch verträglicher Salze der Verbindungen der Formel IV ist Bestandteil der Erfindung.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der Verbindungen der folgenden Formel (V):
worin einer der Reste R¹&sup9; und R²&sup0; für Wasserstoff und der andere für Allyl steht oder beide Reste für Allyl stehen, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der Verbindungen der folgenden Formel (VI):
worin R¹ für CH(SC&sub6;H&sub5;)&sub2;,
CH&sub2;SR²&sup4; (worin R²&sup4; für Benzimidazol-2-yl, Furfuryl, 2-Dimethylaminoethyl oder 1H-1,2,5-triazol-3- yl steht), oder CH=NR²&sup5; (worin R²&sup5; für Pyrrolidin-1-yl, Pyridin-2- ylamino, Guanidino, Morpholino, Dimethylamino oder 4-Methylpiperazin- 1-yl steht) steht, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
In bevorzugten Ausführungsformen betrifft die Erfindung die Verwendung der neuen Verbindungen I-35, I-37, I-40, I-42 und I-43. Die Erfindung umfasst auch die Verwendung der neuen Verbindungen II-1, II- 2 und II-3. Die Erfindung umfasst auch die Verwendung der neuen Verbindungen I-58, I-59, I-60, I-61, I-62, I-63, I-64, I-65, I-66, I-67, 1.68, I-69, I-70, I-71, I-72, I-73, I-74, I-75 und I-76.
In anderen bevorzugten Ausführungsformen handelt es sich bei dem pathologischen Zustand der Prostata bei einem Säuger um gutartige Prostatahypertrophie oder Prostatakrebs; die Aktivität der Trks in Anwesenheit einer Verbindung I oder einer Verbindung II ist geringer als die Aktivität der Trks in Abwesenheit einer Verbindung I oder einer Verbindung II.
In den Definitionen der Gruppen in den obigen Formeln bedeutet niedriges Alkyl eine geradkettige oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl, Propyl, i-Propyl, Butyl, i-Butyl, sek-Butyl, tert-Butyl, Pentyl, Neopentyl und Hexyl. Aryl bedeutet eine Arylgruppe mit 6 bis 10 Kohlenstoffatomen, wie Phenyl und Naphthyl. Beispiele für heterocyclische Gruppen sind Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl. Halogen umfasst Fluor, Chlor, Brom und bd.
Bevorzugt umfassen die pharmazeutisch verträglichen Salze der Verbindungen der Formeln III, IV, V und VI pharmazeutisch verträgliche Säure-Additionssalze, Metallsalze, Ammoniumsalze, organische Amin- Additionssalze und Aminosäure-Additionssalze.Beispiele für pharmazeutisch verträgliche Säure-Additionssalze sind anorganische Säure- Additionssalze, wie Hydrochlorid, Sulfat und Phosphat, und organische Säure-Additionssalze, wie Acetat, Maleat, Fumarat, Tartrat und Citrat. Beispiele für pharmazeutisch verträgliche Metallsalze sind Alkalimetallsalze, wie Natriumsalz und Kaliumsalz, Erdalkalimetallsalze, wie Magnesiumsalz, Kalziumsalz, Aluminiumsalz und Zinksalz. Beispiele für pharmazeutisch verträgliche Ammoniumsalze sind Ammoniumsalz und Tetramethylammoniumsalz. Beispiele für pharmazeut isch verträgliche organische Amin-Additionssalze sind Salze mit Morpholin und Piperidin. Beispiele für pharmazeutisch verträgliche Aminosäure-Additionssalze sind Salze mit Lysin, Glycin und Phenylalanin
Die Erfindung wird nun unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele und die beigefügten Zeichnungen weiter beschrieben, wobei:
Fig. 1 ein Autoradiogramm eines Western-Blot darstellt, das die Inhibierung der ligandenabhängigen Trk-Tyrosinkinase-Phosphorylierung durch K-252a-Derivate erläutert.
Fig. 2 eine schematische Darstellung der Synthese von Verbindung III-2 ist.
Fig. 3 eine schematische Darstellung der Synthese von Verbindung III-3 ist.
Fig. 4 eine schematische Darstellung der Synthese von Verbindung III-4 ist.
Fig. 5 eine schematische Darstellung der Synthese von Verbindung IV-5 ist.
Fig. 6 eine schematische Darstellung der Synthese der Verbindungen der Formel (V) ist.
Die Anmelder haben gefunden, dass die Befähigung einer Testverbindung, die Autophosphorylierung der Trks zu inhibieren, eine Vorhersage ihres Potentials bei der Behandlung eines pathologischen Zustandes der Prostatdrüse erlaubt. Das rührt, wie hier gezeigt, daher, dass eine pharmakologische Intervention mit Trk-Inhibitoren spezifisch das Wachstum der Prostatazellen in vivo inhibieren kann. Proliferierende Prostatazellen verhalten sich dieser Hinsicht besonders, da, obwohl Trk auf einem großen Subset proliferierender Nicht-Prostata-Zelltypen vorhanden ist, dieses nicht notwendigerweise die Proliferation verursacht und auch nicht unterstützt. Daher kann die Wahl der zur Behandlung eines pathologischen Zustandes der Prostata brauchbaren Verbindungen im Wesentlichen entsprechend der Befähigung der Verbindung, Trk-Autophosphorylierung zu inhibieren, eingeengt werden.
Verbindungen, welche positive Ergebnisse beim Trk- Autophosphorylierungs-Screen zeigen, werden besonders auf ihre Befähigung getestet, die Proliferation von Prostata-Zellen sowohl in Prostata-derivierten Zelllinien als auch in einem geeigneten in vivo- Tiermodell zu inhibieren. Die hier offenbarten Testergebnisse zeigen eine direkte Korrelation zwischen der Fähigkeit einer Verbindung, die Autophosphorylierung in vitro zu inhibieren und seiner Fähigkeit, die Prostatazellproliferation zu inhibieren.
Es folgte eine Analyse der Fähigkeit bestimmter Derivate des Kinase-Inhibitors K-252a, die pathologische Prostatazellproliferation zu inhibieren, basierend auf ihrer Fähigkeit, Trk-Autophosphorylierung zu inhibieren.

Beispiel 1: Auswahl der Inhibitoren der Trks

Die Testverbindungen für die Inhibierung der Prostatazellproliferation wurden ausgewählt entsprechend ihrer Fähigkeit, die Tyrosinkinase-Aktivität, die in Zusammenhang mit Trks steht, zu inhibieren. Als Ergebnis der Aktivierung seiner Tyrosinkinase-Domäne unterliegt TrkA nach der Bindung von NGF der Autophosphorylierung (Kaplan et al., Nature 350: 158-160, 1991). Der Grad der Trk-Autophosphorylierung kann gemessen werden und ist als zuverlässiger Test für Trk-Kinase- Aktivität anerkannt (Kaplan, 1991, oben).
PC12-Zellen (ATCC 'CRL1721) sind Ratten-Pheochromocytom-Zellen, welche TrkA tragen und welche sich in sympathetischen Neuronen differenzieren, wenn sie mit NGF behandelt werden. Man ließ diese Zellen in 100 mm-Schalen in DMEM-Medium (GIBCO), enthaltend 7,5 % fötales Rinderserum, 7,5 % Pferdeserum, 2 mM Glutamin und 1 mM Pyruvat, wachsen. Man inkubierte die Zellen bei 37 ºC in einer feuchten Atmosphäre mit 10 % CO&sub2; und 90 % Luft. Man inkubierte subkonfluente Zellkulturen 1 Stunde in Medium ohne Serum, inkubierte 1 Stunde mit einer K-252a- Verbindung bei einer Konzentration von 100 nM oder 500 nM und stimulierte 5 Minuten mit NGF bei einer Konzentration von 50 ng/ml. Man zerstörte die Zellen jeder Zellkultur und präparierte die Zelllysate nach dem Fachmann bekannten Standardverfahren. Man inkubierte jedes Lysat mit Anti-Trk-Antikörper, wobei sich Immunkomplexe bildeten. Gegenüber den C-terminalen 16 Aminosäuren von Trk stellte man polyklonale Anti-TrkA-, -B- und -C-Antikörper her (Kaplan et al., 1991, oben). Man vereinigte die Immunkomplexe auf Protein A-Sepharose-Perlen, trennte sie durch SDS-Polyacrylamidgel-Elektrophorese (SDS-PAGE) und transferierte sie auf Polyvinylidendifluorid-(PVDF)-Membrane (Millipore Corp., Bedford, MA), indem man dem Fachmann bekannte Verfahren verwendete. Man inkubierte die Membranen mit Anti-Phophotyrosin-Antikörper, die an die Tyrosin-phosphorylierten Trks aber nicht an die unphosphorylierten Trk-Formen bindet. Man visualisierte die an Anti-Phosphotyrosin-Antikörper gebundenen Proteine mit Enhanced Chemiluminescence (ECL, Amersham); sie sind als dunkle "Flecken" in Fig. 1 gezeigt.
Die Messung der Trk-Autophosphorylierung ergibt einen guten Index für die Trk-Tyrosinkinase-Aktivität und damit für die Trk-Stimulierung. Die NGF-Zugabe in Abwesenheit der Testinhibitoren ergab ein Ansteigen der Trk-Tyrosinphosphorylierung. In Bezug auf Fig. 1, die mit DMSO(+) (Dimethylsulfoxid) überschriebene Spalte, zeigt der Träger wesentliche TrkA-Phosphorylierung in Anwesenheit von NGF und in Abwesenheit einer Testinhibitor-Verbindung. Wenn die Zellkulturen mit NGF in Anwesenheit von 100 nM-Konzentrationen der Verbindungen I-9, I-7 oder I-1 stimuliert wurden, fehlte die Phosphorylierungsantwort (man sah keinen Fleck). In Anwesenheit der 100 nM-Konzentrationen der Verbindungen I-20 und I-39 war die Phosphorylierungsantwort etwas herabgesetzt (man sah einen kleineren Fleck). In Anwesenheit einer 100 nM Konzentration des K-252a-Derivates, Verbindung 734, lag keine Wirkung auf die Autophosphorylierung vor. Die Verbindung 734 ist die nichtaktive, negative Kontrolle und zeigt, dass die inhibitorische Wirkung anderer getesteter Derivate nicht einer unspezifischen Toxizität zuzuschreiben ist.
Man testete die K-252a-Verbindung I-1 und 130 verschiedene K- 252a-Derivate wie oben beschrieben auf ihre Fähigkeit, die Autophosphorylierung der Trk-Tyrosinkinase-Domäne zu inhibieren (die Konzentrationen der Derivatverbindungen betrugen 100 nM und/oder 500 nM). Die Inhibierung wurde durch die Abwesenheit eines mit dem Trk-Marker wandernden Fleckes an der linken Seite der Figur angezeigt. Teilweise Inhibierung wurde durch einen Fleck mit verringerter Größe angezeigt. Bei einer Konzentration von 500 nM oder weniger zeigten 73 Verbindungen wenigstens teilweise Inhibierung der Phosphorylierung. Von diesen Verbindungen, welche in Tabelle 2 zusammengestellt sind, erwartet man, dass sie funktionelle K-252a-Derivate zur Behandlung einer abnormalen Zellproliferation der Prostata sind. Tabelle 2
NT nicht getestet
(+): inhibierte Phosphorylierung
(-): inhibierte Phosphorylierung nicht

Beispiel 2: Wachstumsinhibierung von menschlichen Prostatakrebszellen in Kultur

Man testete die funktionellen K-252a-Derivate auf ihre Fähigkeit in Kultur das Wachstum der androgenunabhängigen menschlichen Prostatakrebszelllinien Tsu-Prl (Iizumi et al., J. Urol. 137: 1304-1306, 1987), DuPro-1 (Gingrich et al., J. Urol. 146: 915-919, 1991), PC-3 (ATCC #CRL1435) und DU-145 (ATCC #HTB81) zu inhibieren. Während des Versuchs hielt man die Tsu-Prl- und die Dupro-1-Zellen in RPMI 1640- Medium (GIBCO), das 10 % fötales Rinderserum (Hyclone), 2 mM Glutamin, 100 Einheiten/ml Penicillin und 100 ug/ml Streptomycin enthielt. Die PC-3-Zellen wurden in Hams F12K-Medium (Irvine Scientific) gehalten, das 10 % fötales Rinderserum (Hyclone), 2 mM Glutamin, 100 Einheiten/ml Penicillin und 100 ug/ml Streptomycin enthielt. Alle Zeillinien wurden bei 37 ºC in einer feuchten Atmosphäre gehalten, die 5 % CO&sub2; enthielt. Die DU-145-Zellen hielt man in essentiellem Minimalmedium (GIBCO), das 10 % fötales Rinderserum, 2 mM Glutamin und keine Antibiotika enthielt.
Man führte die Tests auf Wachstumsinhibierung durch die Testverbindungen nach folgender Prozedur durch. Man gab in jede Vertiefung einer 96er-Platte (Falcon) 2500 Zellen in 0,1 ml Medium. Man inkubierte die Kulturen über Nacht, wonach ein 0,1 ml-Aliquot an Kulturmedium in jede Vertiefung gegeben wurde. Jedes Aliquot enthielt eine unterschiedliche Konzentration von zehn repräsentativen Testverbindungen (I-1, I-5, I-8, I-12, I-15, I-16, I-19, I-20, I-22 und I-42). Zwei weitere Aliquots enthielten die K-252a-Derivate cmp700 oder cmp783, von denen man feststellte, dass sie die Autophosphorylierung der Tyrosinkinase-Domäne von Trk in dem in Beispiel 1 beschriebenen Test nicht inhibierten. Die Derivate cmp700 und cmp783 wurden deshalb als negative Kontrollen einbezogen, um zu zeigen, dass die Inhibierung von krebsverursachtem Prostatazellwachstum mit der Inhibierung von Autophosphorylierung der Tyrosinkinase-Domäne der Trks korreliert. Andere Kontrollvertiefungen erhielten Medium ohne jegliche K-252a- Derivatverbindungen. Man setzte die Inkubation drei Tage fort. Am dritten Tag wurde die Zahl der Zellen in jeder Vertiefung unter Verwendung eines Calceinfluoreszenztests (Bozyczko-Coyne et al., J. Neurosci. Meth. 50: 205-216, 1993) bestimmt.
Calcein AM (Molecular Probes, Eugene, OR), ein Analogon zum "Lebend"-Farbstoff Fluoresceindiacetat, wird von Zellen aufgenommen und intrazellulär zu Fluoreszenzsalzen gespalten, die von intakten Membranen lebensfähiger Zellen zurückgehalten werden. Diese Methode ermöglicht daher eine zuverlässige und quantitative Messung des Überlebensrate von Zellen. Man verdünnte Calcein AM zweimal in Dulbeccos phosphatgepufferter Kochsalzlösung (D-PBS) auf das Zweifache der endgültigen Testkonzentration (6 mM) und gab 100 ul in Kulturvertiefungen, die 100 ul Medium enthielten. Dann inkubierte man die Platten 1 Stunde bei 37 ºC. Danach wusch man die Zellen viermal mit D-PBS, um überschüssiges Calcein, das von den Zellen nicht aufgenommen worden war, zu entfernen. Die Platte wurde unter Verwendung eines Millipore- Plattenlesefluorimeters (Cytofluor 2350) bei Emission = 485 nm und Anregung = 538 nm gelesen. Nach Abzug von Nullwerten (Vertiefungen, die Medium aber keine Zellen enthielten), spiegeln die relativen Fluoreszenz-Werte eine quantitative Messung des Zellüberlebens wider.
Man verglich die Zahl der Zellen in den Vertiefungen, die funktionelle Derivate enthielten, mit der Zahl der Zellen in den Kontrollvertiefungen. Man berechnete die Konzentration, bei der das Zellwachstum um 50 % inhibiert wurde und bezeichnete sie als "IC&sub5;&sub0;". Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 dargestellt. Tabelle 3
NT : nicht getestet
* : als Kontrolle einbezogene Nichtinhibitoren von Trk
Alle in Tabelle 3 aufgeführten Verbindungen inhibierten das Zellwachstum in einer oder mehreren Prostatakrebs-Zelllinien. Das allgemeine Muster der Inhibierung war bei allen Zelllinien gleich (Tabelle 3), obwohl die eigentliche IC&sub5;&sub0;-Konzentration für jede Verbindung unter den getesteten Zelllinien variierte. Beispielsweise waren I-12, I-5 und I-19 die wirksamsten Verbindungen bei der Inhibierung des Wachstums in allen vier Zelllinien, wenn auch mit unterschiedlicher Stärke. Im Gegensatz dazu waren die Verbindungen 700 und 783, die Trks nicht inhibieren, die klar schwächsten Inhibitoren des Prostata-Zelllinien- Wachstums. Das Wachstum der PC-3-Zelllinie schien das am wenigsten von Inihibitoren von Trks betroffene zu sein. Die Zahl, Art und/oder Distribution von Trks kann verglichen mit den anderen verwendeten Zelllinien in PC-3-Zellen verschieden sein. Die in Tabelle 3 vorgestellten Daten unterstützen den Schluss, dass Verbindungen, welche die Autophosphorylierung von Trk inhibieren, das Wachstum von androgenunabhängigen menschlichen Prostatakrebszellen inhibieren.

Beispiel 3: Inhibierung des Prostatawachstums bei nicht-geschlechtsreifen Mäusen

Das folgende Tiermodell kann verwendet werden, um die Wirksamkeit eines funktionellen Derivates zur Behandlung eines proliferativen Prostatazustandes zu testen. Es wurden nicht-geschlechtsreife männliche Mäuse von jeweils 15 bis 20 g (Charles River Laboratories, Raleigh, N.C.) bei der folgenden in vivo-Untersuchung verwendet. Man erlaubte den Mäusen, sich wenigstens 3 Tage nach dem Erwerb zu akklimatisieren, bevor sie in irgendeinem Experiment verwendet wurden.
Man stellte täglich Lösungen der Verbindungen I-1, I-12 und cmp700 her, indem man sie in 10 % Tween 20, 5 % Ethanol und 85 % phosphatgepufferter Kochsalzlösung (TEPBS) auflöste. Jede Testgruppe enthielt 12 Mäuse. Man injizierte den Mäusen 21 Tage täglich TEPBS, TEPBS mit Verbindung I-1 in Konzentrationen von 1 oder 10 mg/kg, TEPBS mit Verbindung I-12 in Konzentrationen von 1 oder 10 mg/kg oder TEPBS mit cmp700 in Konzentrationen von 1 oder 10 mg/kg. Am Ende des 21-tägigen Dosierungszeitraums wurden die Mäuse getötet und das gesamte Körperblut, die Dorsalprostata, die Ventralprostata, die koagulierende Drüsen, die Samenvesikeln, das Herz, die Leber, die Lunge, die Nieren und die Hoden wurden getrennt isoliert und gewogen.
Man bestimmte die Plasma-Testosteron-Konzentration unter Verwendung des Coat-A-Count Total Testosterone RIA-Kits (Diagnostics Products Corporation, Los Angeles, CA 90045). Man tat dies, um zu zeigen, dass die Verbindungen ein epitheliales Wachstum durch einen Mechanismus verhindern, welcher eine Modulation der Serum-Testosteron-Werte nicht einbezieht.
Das Durchschnittsgewicht eines jeden Gewebes ist in den Tabellen 4, 5, 6 und 7 dargestellt. Man verglich die Ergebnisse der Mäuse, die Injektionen von TEPBS mit Verbindung I-1, von TEPBS mit Verbindung I- 12 oder von TEPBS mit cmp7oo erhielten, mit denen der Mäuse, die nur TEPBS erhielten, indem man Dunnett's T-Test oder einen Group T-Test verwendete (Tabellen 4 und 5). Die Ergebnisse von Mäusen, die Injektionen von TEPBS mit Verbindung I-19 erhielten, wurden mit denen der Mäuse verglichen, die nur TEPBS erhielten, indem man einen Dunnett's T-Test, einen Newman-Keul-Test oder einen Group T-Test verwendete (Tabellen 6 und 7) (Tallarida et al., Manual of Pharmacologie Calcula tion with Computer Programs. 2. Aufl, Springer Verlag, NY, 1987, S. 121-125, 131-134, 145-148). Tabelle 4 Wirkung der Verbindungen I-1, I-12 und cmp700** auf Körpergewicht und Gewicht der Prostata
* signifikant verschieden von den TEPBS-Werten nach Dunnett's T- Test p< 0,05
a signifikant verschieden von TEPBS-Werten nach Group T-Test p< 0,05
** Nicht-Inhibitoren von Trk als Kontrollen einbezogen Tabelle 5 Wirkung von Verbindung I-1, cmp700** und Verbindung I-12 auf das Gewicht der peripheren Organe
* signifikant verschieden vom Träger nach Dunnett's T-Test p< 0,05
a signifikant verschieden vom Träger nach Group T-Test p< 0,05
** Nicht-Inhibitoren von Trk als Kontrolle einbezogen Tabelle 6 Wirkung der Verbindung I-19 auf Körpergewicht und Gewicht der Prostata
* signifikant verschieden vom Träger nach Dunnett's T-Test p< 0,05
a signifikant verschieden vom Träger nach Group T-Test p< 0,05
b signifikant verschieden von 1 mg/kg I-19 nach Newman-Keul-Test p< 0,05 Tabelle 7 Wirkung von Verbindung I-19 auf das Gewicht der peripheren Organe
Keine der getesteten Verbindungen reduzierte das Körpergewicht oder das Gewicht von Magen, Herz, Lungen, Hoden, Nieren oder Leber (Tabelle 5 und 7) in signifikanter Weise. Dagegen reduzierte (wie in Tabellen 4 und 6 dargestellt) die Verbindung I-1 bei einer Dosis von 1 mg/kg in signifikanter Weise das Gewicht der Ventralprostata und der Samenvesikeln. Die höhere Dosis von Verbindung I-1 erzeugte keine bessere Wirkung. Verbindung I-12 reduzierte bei Dosen von 1 mg/kg und 10 mg/kg das Gewicht der Ventralprostata und der Samenvesikeln. Das Gewicht der Dorsalprostata wurde nur nach Behandlung mit 1 mg/kg Verbindung I-12 reduziert. Verbindung I-19 reduzierte in signifikanter Weise bei Konzentrationen von 1 mg/kg und 10 mg/kg die Gewichte von Ventralprostata, Dorsalprostata, Samenvesikeln und koagulierende Drüsen. Cmp700, das Derivat, welches die Tyrosinkinaseaktivität von Trk nicht inhibierte, inhibierte nicht das Prostatagewebewachstum, sondern verursachte eine Reduzierung des Gewichtes der Samenvesikeln bei einer Dosis von 1 mg/kg, aber nicht bei 10 mg/kg.
Es gab keinen signifikanten Unterschied in der Konzentration von Plasma-Testosteron zwischen den Gruppen. Daher rührte die Reduzierung des Gewichtes der Ventralprostatas, der Dorsalprostatas oder der Samenvesikeln nicht von einer verringerten Menge an zirkulierendem Testosteron her.

Beispiel 4: Inhibierung von Prostatakrebs mit funktionellen Derivaten

Zusätzlich zu den im obigen Beispiel 3 vorgestellten Verfahren kann die Verwendbarkeit der hier bereitgestellten K-252a-Derivate speziell für die Behandlung von Prostatakrebs in einigen Tiermodellen getestet werden. Zwei dieser Modelle umfassen 1) einen Test der Wirkung eines funktionellen Derivates auf das Wachstum menschlicher Prostatakrebszelllinien in Nacktmäusen; und 2) einen Test der Wirkung eines funktionellen Derivates auf das Wachstum von Dunning-Prostatatumoren in Ratten.
Um Verbindungen an Nacktmäusen zu testen, kann man eine menschliche Prostatazelllinie, z. B. die in Beispiel 2 beschriebenen Tsu-Pr1-, DuPro-1-, PC-3- oder DU-145-Zelllinien unter Standardbedingungen wachsen lassen und subkutan (zu 1 x 10&sup6; Zellen/0,1 ml - 10&sup7; Zellen /1 ml) in die hintere Hüftpartie erwachsener athymischer Nacktmäuse injizieren (Gleave et al., Cancer Res. 51: 3753-3761, 1991). Man testet die Wirkung der Testverbindungen auf das Wachstum des Tumors, indem man die Größe und die Wachstumsrate des Tumors in Anwesenheit und Abwesenheit der Testverbindung misst.
Die Dunning-Rattenprostatatumorlinien sind transplantierbare Rattentumoren, die Standardmodelle zum Testen potentieller Krebsbehandlungsmethoden geworden sind. Ein Verfahren zur Verwendung der Dunning- Tumoren zum Testen der Wirkungen potentieller Anti-Krebs-Verbindungen wurde detailliert beschrieben (Isaacs, Cancer Res. 49: 6290-6294, 1989). Die Verwendbarkeit der hier bereitgestellten K-252a-Derivate zur Reduzierung von Tumoren in diesem Modell beinhaltet das Messen der Wirkung von Testverbindungen auf die Wachstumsrate des Tumors. Die Testverbindungen werden wie oben beschrieben gelöst und injiziert.

Beispiel 5: Wirksamkeit von Trk-Antagonisten in Prostatakrebs-Tiermodellen

Die Wirksamkeit von Trk-Antagonisten beim Inhibieren des Wachstums Androgen-unabhängiger Prostatakrebszellen in vitro wies darauf hin, dass die Moleküle in in vivo-Modellen von Androgen-unabhängigem Prostatakrebs wirksam sein würden. Wir entschieden uns dafür, die Wir kungen der Verbindungen I-19 und I-5 auf das Wachstum des Androgenunabhängigen Dunning-R3327 AT-2-Rattenprostatakrebstumors in vivo zu untersuchen. Der AT-2-Tumor ist eine äußerst anaplastische Zelllinie die von dem ursprünglichen langsam wachsenden Androgen-abhängigen Dunning R-3327 H-Rattenprostatatumor abgeleitet ist (Isaacs et al., Prostate 9: 261-281, 1986). Man hat das AT-2-Tumormodell verwendet, um andere mögliche Anti-Prostatakrebsmittel zu charakterisieren, einschließlich Linomid (Ichikawa et al., Cancer Research 52: 3022-3028, 1992) und Suramin (Morton et al., Prostate 17: 327-336, 1990), welches einer Bewertung in klinischen Versuchen gegen Androgen-unabhängigen Prostatakrebs unterzogen wird (Eisenberger et al., J. Natl. Can Inst. 85: 6II-621, 1993)
Versuchsprotokoll: Man inokulierte 24 gezüchtete männliche Kopenhagen-Ratten subkutan in die Weiche mit 1 x 10&sup6; lebensfähigen AT-2.1 Tumorzellen. Man erlaubte bei allen Tieren die Entwicklung von etwa 2,3 cm³ großen Tumoren (innerhalb etwa 14 Tage), bevor man die Tiere zufällig in drei Gruppen zu je 8 Tieren aufteilte. Gruppe 1 erhielt täglich subkutane Injektionen des Trägers allein (1 ml/kg Körpergewicht). Gruppe 2 erhielt täglich subkutane Injektionen der Verbindung I-19 (1 ml/kg einer Lösung, die I-19 zu 10 mg/ml enthielt). Gruppe 3 erhielt täglich subkutane Injektionen der Verbindung I-5 (1 ml/kg einer Lösung, die I-5 zu 3 mg/ml enthielt). Die Tumorgrößen aller Tiere wurden über einen Zeitraum von 16 Tagen gemessen. Man kalkulierte das Tumorvolumen, indem man die Formel (1xw²) x 0,5 verwendete.
Ergebnisse: Die Ergebnisse des Experimentes sind in Tabelle 8 dargestellt. Sowohl Verbindung I-19 (10 mg/kg/Tag) als auch Verbindung I-5 (3 mg/kg/Tag) inhibierten das Wachstums der AT-2.1-Tumoren um ungefähr 50 bis 60 %. Diese Ergebnisse zeigen die Verwendbarkeit dieser Verbindungen bei der Inhibierung des Wachstums von Prostatakrebszellen in vivo. Tabelle 8 Wirksamkeit der Verbindungen I-19 und I-5 bei der Inhibierung des Wachstums von Dunning-R-3327 AT-2.1-Prostatatumor bei erwachsenen männlichen Kopenhagen-Ratten

Synthese der Verbindungen

Die Verfahren zur Herstellung der Verbindungen (III), Verbindungen (IV), Verbindungen (V) und Verbindungen (VI) sind unten beschrieben.

Beispiel 6: Verbindung I-45

Man löste die Verbindung (A-2-1; Fig. 2; R1a=Br, R²=H) (250 mg, 0,46 mmol) in 1 ml Dimethylformamid, gab danach 0,25 ml einer wässrigen Lösung von 23,5 mg Natriumhydroxid dazu, und rührte anschließend 4 Stunden bei Raumtemperatur. Nachdem man 1 N Salzsäure zugegeben hatte, um den pH der Lösung auf 1 bis 2 einzustellen, vereinigte man die Präzipitate durch Filtration und erhielt 223 mg (Ausbeute 91 %) der Verbindung (B-1; R1a=Br, R²=H).
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,00 (1H, dd, J=5,1, 14,0 Hz), 2,22 (3H, s), 5,01 (2H, s), 7,10 (1H, dd, J=5,7, 7,0 Hz), 7,26-8,08 (6H, m), 8,65 (1H, s), 9,36 (1H, d, J=2 Hz)
Man löste die Verbindung (B-1; R =Br, R =H) (210 mg, 0,39 mmol) in 3 ml Pyridin, gab danach 0,44 ml (4,7 mmol) Acetanhydrid zu und rührte anschließend 4 Tage bei Raumtemperatur. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels gab man 4 ml Salzsäure zum Rückstand, vereinigte die Präzipitate durch Filtration und erhielt 223 mg (Ausbeute 99 %) der Verbindung (C-1; R1a=Br, R²=H).
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 1,66 (3H, s), 2,48 (3H, s), 5,02 (2H, s), 7,16-8,08 (7H, m), 8,69 (1H, s), 9,34 (1H, d, J=2 Hz)
Man suspendierte die Verbindung (C-l; Rla=Br, R²-H) (100 mg, 0,17 mmol) in 3 ml Thionylchlorid und rührte anschließend 4,5 Stunden bei 90 ºC. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels gab man Diethylether zum Rückstand, vereinigte die Präzipitate durch Filtration und erhielt 84 mg (Ausbeute 83 %) der Verbindung (D-1; R1a=Br, R²=H).
Man löste die Verbindung (D-1; R =Br, R =H) (84 mg, 0,39 mmol) in 2 ml Ethylendichlorid, gab danach 3 ml 0,8 %-iges NH&sub3;/Tetrahydrofuran unter Eiskühlung dazu und rührte anschließend 1 Stunde bei gleicher Temperatur. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels löste man den Rückstand in einem Gemisch aus 2 ml Tetrahydrofuran und 0,5 ml Methanol, gab danach 1 ml 1N NaOH dazu und rührte anschließend 3 Stunden bei Raumtemperatur. Zur Neutralisation gab man 1 N Salzsäure (1,2 ml) zu der Lösung und verdünnte anschließend mit Tetrahydrofuran. Man wusch das Gemisch mit einer Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 98/2) und erhielt 54 mg (Ausbeute 72 %) der Verbindung I-45.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,018 (1H, dd, J=4,6, 13,7 Hz), 2,183 (3H, s), 4,985 (1H, d, J=17,0 Hz), 5,054 (1H, d, J=17,1 Hz), 6,308 (1H, s), 7,057 (1H, dd, J=4,9, 7,5 Hz), 7,353-8,092 (8H, m), 8,696 (1H, s), 9,385 (1H, d, J=2,1 Hz)
SIMS (m/z): 531 (M+1)&spplus;

Beispiel 7: Verbindung I-35

Man löste die Verbindung (F; Fig. 3) (70 mg, 0,12 mmol) in einem Gemisch aus 3 ml Tetrahydrofuran und 1 ml Dimethylformamid, gab danach 34 ul (0,24 mmol) Triethylamin und 19 ul (0,24 mmol) Ethylisocyanat zu und rührte anschließend 6 Stunden bei 50 ºC. Nach dem Verdünnen mit Chloroform wusch man das Gemisch nacheinander mit Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 99/1) und erhielt 71 mg (Ausbeute 91 %) der Verbindung (G).
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 1,16 (3H, t, J=7,3 Hz), 1,800 (3H, s), 2,150 (1H, dd, J=5,1, 14,5 Hz), 2,282 (3H, s), 2,849 (3H, s), 3,273 (1H, m), 3,978 (1H, dd, J=7,5, 14,5 Hz), 4,011 (3H, s), 5,355 (2H, brs), 5,406 (1H, d, J=17,4 Hz), 5,499 (1H, d, J=17,4 Hz), 7,007 (1H, dd, J=5,1, 7,4 Hz), 7,427-8,098 (6H, m), 9,245 (1H, s)
FAB-MS (m/z): 652 (M)&spplus;
Man löste die Verbindung (G) (44 mg, 0,067 mmol) in einem Gemisch aus 1 ml Ethylendichlorid und 0,5 ml Methanol, gab danach 13 ul 28 %- iges Natriummethoxid/Methanol dazu und rührte anschließend 20 Minuten bei Raumtemperatur. Zur Neutralisation gab man Amberlist 15 zu dem Gemisch und filtrierte unlösliche Bestandteile ab. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer präparativen TLC (Chloroform/Methanol = 95/5) und erhielt 68,9 mg (Ausbeute 24 %) der Verbindung I-35.
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 1,103 (3H, t, J=7,2 Hz), 2,163 (3H, s), 2,282 (1H, dd, J=5,0, 14,3 Hz), 3,184 (2H, q, J=7,2 Hz), 3,288 (1H, dd, J=7,5, 14,3 Hz), 4,023 (3H, s), 4,866 (1H, d, J=17,0 Hz), 4,937 (1H, d, J=16,9 Hz), 5,230 (2H, s), 6,856 (1H, dd, J=5,0, 7,5 Hz), 7,306-7,882 (6H, m), 9,148 (1H, s)
FAB-MS (m/z): 569 (M+1)&spplus;

Beispiel 8: Verbindung I-37

Man löste die Verbindung (; Fig. 4) (98 mg, 0,17 mmol) in 5 ml Ethylendichlorid, gab danach 39 ul Methylchlorformiat und 71 ul Triethylamin dazu und rührte anschließend 1,5 Stunden bei Raumtemperatur.
Man gab Methanol (1 ml) zu der Lösung und verdampfte das Lösungsmittel. Man unterzog den Rückstand einer präparativen TLC (Chloroform/Methanol = 98/2) und rekristallisierte das Rohprodukt aus Ethylacetat und erhielt 18 mg (Ausbeute 17 %) der Verbindung (=-1; R¹&sup4;=CH&sub3;).
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 1,783 (3H, s), 2,125 (1H, dd, J=5,0, 14,6 Hz), 2,269 (3H, s), 2,810 (3H, s), 3,828, (3H, s), 3,965 (1H, dd, J=7,4, 14,6 Hz), 4,007 (4H, s), 5,357 (1H, d, J=17,8 Hz), 5,403 (1H, d, J=17,6 Hz), 7,936 (1H, dd, J=4,9, 7,6 Hz), 7,411-8,0.71 (6H, m), 8,944 (1H, d, J=2,0 Hz)
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 7, indem man 8 mg (0,013 mmol) der oben erhaltenen Verbindung (O-1; R¹&sup4;=CH&sub3;) verwendete, und erhielt 5 mg (Ausbeute 71 %) der Verbindung I-37.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 1,999 (1H, dd, J=4,6, 13,9 Hz), 2,146 (3H, s), 3,373 (1H, dd, J=7,7, 14,2 Hz), 3,688 (3H, s), 3,924 (3H, s), 4,959 (1H, d, J=17,6 Hz), 5,020 (1H, d, J=17,6 Hz), 6,311 (1H, s), 7,081 (1H, dd, J=5,0, 7,0 Hz), 7,333-8,052 (6H, m), 8,553 (1H, s)
FAB-MS (m/z) 541 (M+1)&spplus;

Beispiel 9: Verbindung I-42

Man löste die Verbindung (A-I-1, Verfahren 1; R1a=R2a=Br) (62,5 mg, 0,1 mmol) in einem Gemisch aus 3 ml Tetrahydrofuran und 1 ml Methanol, gab danach 19 mg (0,5 mmol) Natriumtetraborhydrid zu und rührte anschließend 12 Stunden bei Raumtemperatur. Nachdem man den pH mit 1N Salzsäure auf 1 bis 2 eingestellt hatte, wusch man das Gemisch mit Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer präparativen TLC (Chloroform/Methanol = 95/5) und erhielt 37 mg (Ausbeute 62 %) der Verbindung I-42.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 1,918 (1H, dd, J=4,9, 5,1 Hz), 2,140 (3H, s), 3,149 (1H, dd, J=7,3, 7,6 Hz), 3,728-3,836 (2H, m), 5,009 (1H, t, J=5,1 Hz), 5,439 (1H, s), 6,994 (1H, dd, J=4,9, 7,5 Hz), 7,573-8,184 (5H, m), 8,701 (1 H, s), 9,387 (1H, d, J=2,2 Hz)
FAB-MS (m/z): 598 (M+1)&spplus;

Beispiel 10: Verbindung I-43

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Amidierungsverfahren wie in Beispiel 6, indem man 67 mg (0,1 mmol) der Verbindung (D-2; R1a=R2a=Br) und 120 ul Ethanolamin verwendete und wiederholte danach im Wesentlichen dasselbe Deacetylierungsverfahren wie in Beispiel 7 und erhielt 30 mg der Verbindung I-43.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,009 (1H, dd, J=4,7, 13,9 Hz), 2,102 (3H, s), 4,832 (1H, t, J=5,5 Hz), 5,004 (1H, d, J=17,3 Hz), 5,073 (1H, d, J=17,3 Hz), 6,509 (1H, s), 7,055 (1H, dd, J=4,7, 7,3 Hz), 7,586- 8,270 (6H, m), 8,659 (1H, s), 9,380 (1H, d, J=2,2 Hz)
FAB-MS (m/z): 655 (M+1)&spplus;

Beispiel 11: Verbindung I-46

Man löste die Verbindung (J, Verfahren 7) (43,8 mg, 0,1 mmol) in 1 ml Tetrahydrofuran, gab danach 12 ul (0,15 mmol) Ethylisocyanat und 28 ul (0,2 mmol) Triethylamin zu und rührte anschließend 2 Stunden bei Raumtemperatur. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand präparativer TLC (Chloroform/Methanol = 9/1) und erhielt 11 mg (Ausbeute 22 %) der Verbindung I-46.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 1,051 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,964 (1H, dd, J=5,3, 13,5 Hz), 2,145 (3H, s), 2,959 (1H, dd, J= 7,6, 13,8 Hz), 3,111 (2H, m), 4,965 (1H, d, J=17,4 Hz), 5,031 (1H, d, J= 17,6 Hz), 5,835 (1H, s), 6,138 (1H, t, J=5,7 Hz), 6,265 (1H, t, J=5,4 Hz), 6,925 (1H, dd, J=5,4, 7,4 Hz), 7,253-8,059 (7H, m), 8,584 (1H, s), 9,200 (1H, d, J=7,8 Hz)
FAB-MS (m/z): 510 (M+1)&spplus;

Beispiel 12: Verbindung I-47

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 11, indem man 43,8 mg (0,1 mmol) der Verbindung (J) und 13 ul Phenylisocyanat verwendete, und erhielt 13 mg (Ausbeute 23 %) der Verbindung I-47.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,063 (1H, dd, J=5,2, 13,4 Hz), 2,180 (3H, s), 2,999 (1H, dd, J=7,3, 13,6 Hz), 3,635-3,727 (2H, m), 4,965 (1H, d, J=17,1 Hz), 5,043 (1H, d, J=17,4 Hz), 5,776 (1H, s), 6,445 (1H, dd, J=4,6, 6,6 Hz), 6,928 (1H, t, J=7,4 Hz), 7,007 (1H, dd, J=5,5, 514 Hz), 7,243-8,074 (11H, m), 8,583 (1H, s), 8,830 (1H, s), 9,198 (1H, d, J=7,8 Hz)
FAB-MS (m/z): 558 (M+1)&spplus;

Beispiel 13: Verbindung I-48

Man löste Verbindung (K, Verfahren 8) (44 mg, 0,1 mmol) in einem Gemisch aus 3 ml Tetrahydrofuran und 0,3 ml Wasser, gab danach 110 mg (0,5 mmol) 1,1-Diphenylhydrazinhydrochlorid zu und rührte anschließend 4 Stunden bei Raumtemperatur. Nach Verdünnen mit Chloroform wusch man das Gemisch nacheinander mit einer 10 %-igen wässrigen Salzsäure- Lösung, mit Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer praparativen TLC (Chloroform/Methanol = 97/3) und erhielt 30 mg der Verbindung I-48.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2.012 (3H, s), 2,137 (1H, dd, J=5,2, 13,5 Hz), 3,588 (1H, dd, J=7,4, 13,2 Hz), 4,973 (1H, d, J=17,3 Hz), 5,031 (1H, d, J=17,3 Hz), 6,086 (1H, S)l 6,885 (1H, s), 7,105 (1H, dd, J=5,4, 7,3 Hz), 7,250-8,045 (17H, m), 8,590 (1H, s), 9,230 (1H, d, J=7,8 Hz)
FAB-MS (m/z): 604 (M+1)+

Beispiel 14: Verbindung I-49

Man löste die Verbindung (H, Verfahren 5) (59,3 mg, 0,1 mmol) in 1 ml Dimethylformamid, gab danach 21 ul Thiophenol und 8 mg (0,2 mmol) Natriumhydrid (60 %) zu und rührte anschließend 3,5 Stunden bei Raumtemperatur. Nach dem Verdünnen mit Chloroform wusch man das Gemisch nacheinander mit einer gesattigten wässrigen Natriumhydrogencarbonat- Lösung, mit Wasser und mit Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 99/1) und erhielt 22 mg (Ausbeute 41 %) der Verbindung I-49.
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 2,211 (3H, s), 2,661 (1H, dd, J=5,7, 14,4 Hz), 3,423 (1H, dd, J=7,6, 14,5 Hz), 3,537 (1H, d, J=13,0 Hz), 3,734 (1H, d, J=13,0 Hz), 4,545 (1H, d, J=17,3 Hz), 4,761 (1H, d, J=17,3 Hz), 6,568 (1H, dd, J=5,5, 714 Hz), 7,091-8,003 (12H, m), 8,736 (1H, d, J=7,9 Hz)
FAB-MS (m/z): 532 (M+1)+

Beispiel 15: Verbindung I-50

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 14, indem man 59,3 mg der Verbindung (H) und 22 mg 2- Mercaptopyridin verwendete, und erhielt 38,7 mg (Ausbeute 73 %) der Verbindung I-50.
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 2,326 (3H, s), 2,401 (1H, m), 3,339 (1H, dd, J=7,4, 14,5 Hz), 3,571 (1H, d, J=14,9 Hz), 4,130 (1H, d, J=14,8 Hz), 4,918 (1H, d, J=16,6 Hz), 5,002 (1 H, d, J=16,7 Hz), 6,723 (1H, dd, J=6,0, 7,4 Hz), 7,173-8,468 (11H, m), 9,177 (1H, d, J=7,7 Hz)
FAB-MS (m/z): 533 (M+1)&spplus;

Beispiel 16: Verbindung I-51, siehe Verfahren 6

Man löste die Verbindung I-49 (Verfahren 5; 15 mg, 0,028 mmol) in 0,38 ml Chloroform, gab danach 0,2 ml Chloroform, enthaltend 4,8 mg m- Chlorbenzoesäure, bei -48 ºC zu und rührte anschließend 2 Stunden bei derselben Temperatur. Nach dem Verdünnen mit Chloroform wusch man das Gemisch nacheinander mit einer gesättigten wässrigen Natriumbicarbonat-Lösung und mit Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels rekristallisierte man den Rückstand aus Chloroform und erhielt 6,1 mg (Ausbeute 40 %) der Verbindung I-51.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,100 (0,87 H, s), 2,189 (2,13H, s), 4,982 (1H, d, J=18,0 Hz), 5,038 (1H, d, J=17,9 Hz), 6,056 (0,71 H, s), 6,337 (0,29 H, s), 7,145-8,073 (12H, m), 8,583 (1H, s), 9,200 (0,29H, d, J=7,4 Hz), 9,207 (0,71H, d, J=8,3 Hz)
FAB-MS (m/z): 548 (M+1)&spplus;

Beispiel 17: Verbindung I-40

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 16, indem man 30 mg der Verbindung I-50 und 9,5 mg m- Chlorbenzoesäure verwendete, und erhielt 12,8 mg (Ausbeute 42 %) der Verbindung I-40.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,134 (0,25H, s), 2,185 (0,75H, s), 4,981 (1H, d, J=7,9 Hz), 5,040 (1H, d, J=7,6), 6,212 (0,75H, s), 6,449 (0,25H, s), 7,088-8,228 (11H, m), 8,598 (1H, s), 8,809 (0,25H, m), 8,919 (0,75H, m), 9,198 (0,25H, d, J=7,2 Hz), 9,213 (0,75H, d, J=7,7 Hz)
FAB-MS (m/z): 549 (M+1)&spplus;

Beispiel 18: Verbindung I-31

Man löste die Verbindung (H; fig. 5) (360 mg) in 5 ml Dimethylformamid, gab danach 90 mg Natriumcyanid zu und rührte anschließend 4 Stunden bei 80 ºC. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels hydrolysierte man zu der entsprechenden Säure und veresterte mit Diazomethan. Man unterzog den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 98/2) und erhielt 30 mg der Verbindung I-31.
¹H-NMR (CDCl&sub3; + DMSO-d&sub6;; 9/1) δ (ppm): 2,20 (3H, s), 4,90 (2H, brs), 6,84 (1H, m), 7,12-8,00 (7H, m), 9,20 (1H, d, J=8,0 Hz), EI-MS (m/z): 448 (M)&spplus;

Beispiel 19: Verbindungen II-1, II-2 und II-3

Man löste die Verbindung (M; Fig. 6) (337 mg, 0,85 mmol) in 10 ml Dimethylformamid, gab unter Eiskühlung 41 mg (1,02 mmol) Natriumhydrid (60 %) zu und rührte anschließend 10 Minuten bei derselben Temperatur. Man gab Allylbromid (88 ul, 1,02 mmol) zu und rührte die Lösung 1 Stunde unter Eiskühlung. Man gab 1 ml Methanol zu der Lösung und verdünnte anschließend mit Chloroform. Man wusch das Gemisch nacheinander mit Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Ethylacetat/Toluol = 1/9) und erhielt 217 mg (Ausbeute 54 %) der Verbindung (P-1; R¹&sup9;=R²&sup0; Allyl) und 109 mg (Ausbeute 30 %) eines Gemisches aus Verbindung (P-2; R¹&sup9;=H, R²&sup0;=Allyl) und Verbindung (P-3; R¹&sup9; Allyl, R²&sup0;=H) (1/1,4).
Verbindung (P-1; R¹&sup9;=R²&sup0;=Allyl)
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm) 5,044-5,478 (11H, m), 6,084-6,223 (2H, m), 7,295-8,176 (7H, m), 9,415 (1H, d, J=7,8 Hz)
FAB-MS (m/z): 476 (M+1)&spplus;
Ein Gemisch aus Verbindung (P-2; R¹&sup9;=H, R²&sup0;=Allyl) und Verbindung (P-3; R¹&sup9;=Allyl, R²&sup0;=H) (1/1,4)
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 4,694 (0,58H, dd, J=1,3, 17,3 Hz), 4,757 (0,42H, d, J=17,0 Hz), 5,003-5,172 (3H, m), 4,465 (1H, dd, J=1,7, 10,9 Hz), 5,565-5,619 (2H, m), 6,111-6,222 (1H, m), 7,135-8,177 (7H, m), 9,302 (0,42H, d, J=8,l Hz), 9,353 (0,58H, d, J=8,1 Hz), 11,555 (0,42H, s), 11,713 (0,58H, s)
FAB-MS (m/z): 436 (M+1)&spplus;
Man löste die Verbindung (P-1; R -R Allyl) (205 mg, 0,43 mmol) in 20 ml Tetrahydrofuran, gab 16 ml einer wässrigen Schwefelsäurelösung zu und rührte anschließend 8 Stunden bei 70 CC. Nach dem Verdünnen mit Ethylacetat wusch man das Gemisch nacheinander mit Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels rekristallisierte man den Rückstand aus Chloroform/Ethylacetat und erhielt 112 mg (Ausbeute 66 %) der Verbindung II- 1.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 4,965 (2H, s), 5,067-5,371 (8H, m), 6,080-6,211 (2H, m), 7,276-8,051 (7H, m), 8,571 (1H, s), 9,434 (1H, d, J=7,8 Hz)
FAB-MS (m/z) 392 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen das oben beschriebene Verfahren, indem man 100 mg (0,23 mmol) eines Gemisches aus Verbindung (P-2; R¹&sup9;=H, R²&sup0;=Allyl) und Verbindung (P-3; R¹&sup9;=Allyl, R²&sup0;=H) (1/1,4) verwendete, und erhielt 39 mg (Ausbeute 50 %) eines Gemisches aus Verbindung II-3 und Verbindung II-2 (1,5/1).
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 4,694 (0,6 H, d, J=17,1 Hz), 4,755 (0,4H, d, J=17,2 Hz), 4,967 (2H, s), 5,008-5,556 (3H, m), 6,145 (1H, m), 7,219-8,278 (7H, m), 8,463 (1H, s), 9,318 (0,4H, d, J=7,9 Hz), 9,369 (0,6 H, d, J=7,9 Hz)
FAB-MS (m/z): 352 (M+1)&spplus;

Beispiel 20: Verbindung I-58

Man löste die Verbindung (A-3) (japanische veröffentlichte ungeprüfte Patentanmeldung mit der Nummer 295588/88) (69 mg, 0,12 mmol) in 3,5 ml Dichlorethan, gab danach unter Eiskühlung 66 ul (0,6 mmol) Thiophenol und 23 ul (0,18 mmol) Bortrifluoridether-Komplex zu und rührte anschließend 4,5 Stunden bei derselben Temperatur. Man wusch das Reaktionsgemisch nacheinander mit gesättigter wässriger Natriumbicarbonat-Lösung, Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Toluol/Ethylacetat = 90/10) und erhielt 84 mg (Ausbeute 90 %) der N,O-diacetylierten Verbindung VI-1.
FAB-MS (m/z): 781 (M+1)&spplus;
Man löste die N,O-diacetylierte Verbindung VI-1 (70 mg, 0,09 mmol) in einem Gemisch aus 6 ml Chloroform und 3 ml Methanol, gab danach 18 ul (0,09 mmol) 5,1N Natriummethoxid zu und rührte anschließend 20 Minuten bei Raumtemperatur. Man gab Amberlist 15 (100 mg) zu dem Reaktionsgemisch, rührte anschließend 1 Stunde und trennte unlösliche Bestandteile durch Filtration ab. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer präparativen Dünnschichtchromatographie (Chloroform/Methanol = 97/3) und erhielt 15 mg (Ausbeute 24 %) der Verbindung I-58.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2.035 (1H, dd, J=4,9, 14,1Hz), 2,135 (3H, s), 3,921 (3H, s), 4,982 (1H, d, J=16,9 Hz), 5,033 (1H, d, J=17,1 Hz), 6,231 (1H, s), 6,348 (1H, s), 7,096 (1H, dd, J=4,9, 7,3 Hz), 7,196-8,060 (16H, m), 8,577 (1H, s), 9,457 (1H, d, J=1,9 Hz)
FAB-MS (m/z): 698 (M+1)&spplus;

Beispiel 21: Verbindung I-59

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 58 mg (0,1 mmol) der Verbindung (A-3) und 25 ul (0,3 mmol) Ethandithiol verwendete, und erhielt 50 mg (Ausbeute 76 %) der N,O-diacetylierten Verbindung VI-1.
FAB-MS (m/z): 656 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 35 mg (0,05 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung VI-1 verwendete, und erhielt 26 mg (Ausbeute 91 %) der Verbindung I-59.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,013 (1H, dd, J=4,9, 14,0 Hz), 2,148 (3H, s), 3,590-3,641 (2H, m), 3,925 (3H, s), 4,984 (1H, d, J=17,7 Hz), 5,034 (1H, d, J=17,7 Hz), 5,931 (1H, s), 6,331 (1H, s), 7,113 (1H, dd, J=5,0, 7,4 Hz), 7,345-8,060 (6H, m), 8,588 (1H, s), 9,318 (1H, d, J=1,5 Hz)
FAB-MS (m/z): 572 (M+1)&spplus;

Beispiel 22: Verbindung I-67

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 16, unten, indem man 50,1 mg (0,0862 mmol) der Verbindung (A-3) und 129,5 mg (0,862 mmol) 2-Mercaptobenzimidazol verwendete, und erhielt 46,0 mg (Ausbeute 75 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-67.
FAB-MS (m/z): 714 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 33,4 mg (0,0468 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-67 verwendete, und erhielt 17,5 mg (Ausbeute 59 %) der Verbindung I-67.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,995 (1H, dd, J=4,9, 14,1 Hz), 2,139 (3H, s), 3,914 (3H, s), 4,779 (2H, s), 4,979 (1H, d, J=17,3 Hz), 5,028 (1H, d, J=17,3 Hz), 6,342 (1H, s), 7,101 (1H, dd, J=4,9, 7,3 Hz), 7,123-8,056 (10H, m), 8,617 (1H, s), 9,278 (1H, m)
FAB-MS (m/z): 630 (M+1)&spplus;

Beispiel 23: Verbindung I-68

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 16, unten, indem man 50 mg (0,0861 mmol) der Verbindung A-3 und 0,0868 ml (0,861 mmol) Furfurylmercaptan verwendete, und erhielt 36,0 mg (Ausbeute 62 %) der N,o-diacetylierten Verbindung I-68.
FAB-MS (m/z): 678 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 22,7 mg (0,0335 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-68 verwendete und erhielt 17,7 mg (Ausbeute 89 %C) der Verbindung I-68.
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 2,209 (3H, s), 2,607 (1H, dd, J=4,9, 14,5 Hz), 3,401 (1H, dd, J=7,5, 14,5 Hz), 3,671 (2H,s}, 3,857 (2H, s), 4,103 (3H, s), 4,532 (1H, brs), 4,789 (1H, d, J=16,1 Hz), 4,873 (1H, d, J=16,1 Hz), 5,690 (1H, s), 6,378 (1H, dd, J=1,9, 3,2 Hz), 6,416 (1H, dd, J=0,6, 3,2 Hz), 6,846 (1H, dd, J=4,8, 7,5 Hz), 7,334-7,932 (7H, m) , 8,961 (1H, m)
FAB-MS (m/z): 593 (M)&spplus;

Beispiel 24: Verbindung I-69

Man löste die Verbindung (A-3) (100 mg, 0,173 mmol) in 4 ml Chloroform, gab danach 34,0 mg (0,277 mmol) 1-Aminopyrrolidinhydrochlorid zu und rührte anschließend 4 Stunden bei Raumtemperatur. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter verringertem Druck unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 99/1) und erhielt 100,5 mg (Ausbeute 90 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-69.

FAB-MS (m/z): 648 (M+1)&spplus;

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 40 mg (0,0618 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-69 verwendete, und erhielt 30 mg (Ausbeute 86 %) der Verbindung I-69.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 1,910-1,937 (4H, m), 2,031 (1H, dd, J=4,9, 14,1 Hz), 2,142 (3H, s), 2,329-2,635 (4H, m), 3,395 (1H, dd, J=7,3, 14,1 Hz), 3,925 (3H, s), 4,981 (1H, d, J=17,0 Hz), 5,030 (1H, d, J=17,0 Hz), 7,110 (1H, dd, J=4,9, 7,3 Hz), 7,345-8,057 (6H, m), 7,425 (1H, s), 8,596 (1H, s), 9,210 (1H, d, J=1,4 Hz)
FAB-MS (m/z): 564 (M+1)&spplus;

Beispiel 25: Verbindung I-70

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 20, indem man 49,0 mg (0,0846 mmol) der Verbindung (A-3) und eine Lösung aus 15,8 mg (0,145 mmol) 2-Hydrazinopyridin in Chloroform verwendete, und erhielt 35,8 mg (Ausbeute 64 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-70.
FAB-MS (m/z): 671 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 24,6 mg (0,0367 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-70 verwendete, und erhielt 11,8 mg (Ausbeute 55 %) der Verbindung I-70.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,039 (1H, dd, J=5,0, 13,9), 2,153 (3H, s), 3,418 (1H, dd, J=7,2, 13,9 Hz), 3,933 (3H, s), 5,001 (1H, d, J=17,5 Hz), 5,057 (1H, d, J=17,5 Hz), 6,366 (1H, s), 6,748 (1H, m), 7,164 (1H, dd, J=5,0, 7,2 Hz), 7,301-8,120 (9H, m), 8,242 (1H, s), 8,656 (1H, s), 9,368 (1H, s), 10,738 (1H, s)
FAB-MS (m/z): 587 (M+1)&spplus;

Beispiel 26: Verbindung I-71

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 16, indem man 50 mg (0,0861 mmol) der Verbindung (A-3) und 200 mg (1,41 mmol) 2-Dimethylaminoethanthiolhypochlorid verwendete, und erhielt 56,3 mg (Ausbeute 98 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-71.
FAB-MS (m/z): 668 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 36,6 mg (0,0548 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-71 verwendete, und erhielt 28,4 mg (Ausbeute 89 %) der Verbindung I-71.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm) 2,011 (1H, dd, J=4,9, 14,1 Hz), 2,142 (9H, s), 2,460-2,584 (4H, m), 3,404 (1H, dd, J=7,3, 14,1 Hz), 3,923 (3H, s), 3,950 (2H, s), 4,951-5,054 (2H, m), 6,336 (1H, s), 7,111 (1H, dd, J=4,9, 7,3 Hz), 7,338-8,060 (6H, m), 8,595 (1H, s), 9,137 (1H, d, J=1,3 Hz)
FAB-MS (m/z): 585 (M+1)&spplus;

Beispiel 27; Verbindung I-72

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 16, indem man 30 mg (0,0516 mmol) der Verbindung (A-3) und 52,2 mg (0,516 mmol) 1H-1,2,4-Triazol-3-thiol verwendete, und erhielt 31,4 mg (Ausbeute 92 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-72.
FAB-MS (m/z): 665 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 15 mg (0,0226 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-72 verwendete, und erhielt die rohe Verbindung I-72. Man gab Chloroform/Methanol (90/10) dazu, rührte anschließend und erhielt 10,9 mg (Ausbeute 83 %) der Verbindung I-72 als Präzipitat.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,006 (1H, dd, J=4,9, 13,9Hz), 2,114 (3H, s), 3,375 (1H, dd, J=7,3, 13,9), 3,921 (3H, s), 4,559 (2H brs), 4,977 (1H, d, J=17,4 Hz), 5,033 (1H, d, J=17,4 Hz), 6,332 (1H, s), 7,106 (1H, dd, J=4,9, 7,3 Hz), 7,341-8,062 (6H, m), 8,614 (1H, s), 9,202 (1H, d, J=1,5 Hz)
FAB-MS (m/z) 581 (M+1)&spplus;

Beispiel 28: Verbindung I-73

Man löste die Verbindung (A-3) (97,5 mg, 0,168 mmol) in 4 ml Tetrahydrofuran, gab danach eine wässrige Lösung aus 25,1 mg (0,0950 mmol) Aminoguanidinsulfat zu und rührte anschließend 3 Stunden bei Raumtemperatur. Man gab Ethylacetat dazu, rührte anschließend und entfernte die unlöslichen Bestandteile durch Futration und unterzog sie einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol 85/15) und erhielt 87,1 mg (Ausbeute 82 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-73.
FAB-MS (m/z): 636 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 69,9 mg (0,110 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-73 verwendete, und erhielt 37,2 mg (Ausbeute 62 %) der Verbindung I-73.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,046 (1H, dd, J=4,9, 14,2 Hz), 2,148 (3H, s), 3,406 (1H, dd, J=7,5, 14,2 Hz), 3,929 (3H, s), 4,988 (1H, d, J=17,3 Hz), 5,045 (1H, d, J=17,3 Hz), 5,637-6,129 (4H, m), 6,350 (1H, 5> 1 7,156 (1H, dd, J=4,9, 7,5 Hz), 7,345-8,092 (6H, m), 8,206 (1H, s), 8,603 (1H, s), 9,271 (1H, d, J=1,7 Hz)
FAB-MS (m/z): 552 (M+1)&spplus;

Beispiel 29: Verbindung I-74

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 20, indem man 103,8 mg (0,179 mmol) der Verbindung (A-3) und 0,020 ml (0,207 mmol) 4-Aminomorpholin verwendete, und erhielt 82,8 mg (Ausbeute 70 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-74.
FAB-MS (m/z): 663 (M)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 50,6 mg (0,0763 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-74 verwendete, und erhielt 36,4 ing (Ausbeute 82 %) der Verbindung I-74.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,042 (1H, dd, J=4,8, 14,3 Hz), 2,144 (3H, S), 3,129-3,163 (4H, m), 3,404 (1H, dd, J=7,5, 14,3 Hz), 3,792- 3,815 (4H, m), 3,927 (3H, s), 4,984 (1H, d, J=17,3 Hz), 5,040 (1H, d, J=17,3 Hz), 6,352 (1H, s), 7,132 (1H, dd, J=4,8, 7,5 Hz), 7,344-8,065 (6H, m), 7,897 (1H, s), 8,610 (1H, s), 9,316 (1H, d, J=1,7 Hz)
FAB-MS (m/z): 580 (M+1)&spplus;

Beispiel 30: Verbindung I-75

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 20, indem man 100 mg (0,173 mmol) der Verbindung (A-3) und 16,7 mg (0,173 mmol) 1,1-Dimethylhydrazinhydrochlorid verwendete, und erhielt 52,3 mg (Ausbeute 49 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-75.
FAB-MS (m/z) δ22 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in beispiel 20, indem man 38,4 mg (0,0618 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-75 verwendete, und erhielt 10,9 mg (Ausbeute 33 %) der Verbindung I-75.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,037 (1H, dd, J=5,0, 14,1 Hz), 2,142 (3H, s), 2,939 (6H, s), 3,399 (1H, dd, J=7,5, 14,1 Hz), 3,926 (3H, s), 4,981 (1H, d, J=17,7 Hz), 5,037 (1H, d, J=17,7 Hz), 6,342 (1H, s), 7,118 (1H, dd, J=5,0, 7,5 Hz), 7,342-8,063 (6h&sub7; m), 7,533 (1H, s), 8,601 (1H, s), 9,258 (1H, s)
FAB-MS (m/z): 538 (M+1)&spplus;

Beispiel 31: Verbindung I-76

Man folgte im Wesentlichen demselben Verfahren wie in Verfahren 20, indem man 99,5 mg (0,172 mmol) der Verbindung (A-3) und 42,4 mg 1- Amino-4-Methylpiperazin verwendete, und erhielt die N,O-diacetylierte Verbindung I-76.
Danach wiederholte man im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man die obige N,O-diacetylierte Verbindung I-76 verwendete, und erhielt 19,4 mg [Ausbeute aus Verbindung (A-3) 19 %] der Verbindung I-76.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2.040 (1H, dd, J=5,0, 14,0 Hz), 2,144 (3H, s), 2,268 (3H, s), 2,553 (4H, m), 3,167 (4H, m), 3,401 (1H, dd, J=7,2, 14,0 Hz), 3,927 (3H, s), 4,982 (1H, d, J=17,1 Hz), 5,038 (1H, d, 17,1 Hz), 6,345 (1H, s), 7,128 (1H, dd, J=5,0, 7,2 Hz), 7,343-8,065 (6H, m), 7,827 (1H, s), 8,609 (1H, s), 9,299 (1H, d, J=1,2 Hz)
FAB-MS (m/z): 593 (M+1)&spplus;

Verfahren 1

Man kann die Verbindung (III-1) [Verbindung (III), worin R¹ und R² unabhängig voneinander für Halogen stehen und X für CH&sub2;OH steht] durch folgenden Umsetzungsschritt herstellen: Reduktion
(In der Formel stehen R1a und R2a unabhängig voneinander für Halogen.)
Das Halogen in der Definition von R1a und R2a hat dieselbe Bedeutung wie oben beschrieben.
Die Ausgangsverbindung (A-1) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 120388/87 offenbart.
Man kann die Verbindung (III-1) erhalten, indem man die Verbindung (A-1) mit 2 bis 10 Äquivalenten eines Reduktionsmittels in einem inerten Lösungsmittel behandelt. Ein Beispiel für ein Reduktionsmittel ist Natriumborhydrid. Ein Beispiel für ein inertes Lösungsmittel ist ein Lösungsmittelgemisch aus einem Ether, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran, und einem Alkohol, wie Methanol oder Ethanol. Das Verhältnis von Ether zu Alkohol beträgt bevorzugt 1:1 bis 5:1. Die Umsetzung ist nach 3 bis 24 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.

Verfahren 2

Die Verbindung (III-2) [Verbindung (III), worin R¹ für Halogen steht, R² für Wasserstoff oder Halogen steht und X für CONHR¹&sup5; steht] kann durch folgende Umsetzungsschritte hergestellt werden, welche in Fig. 2 dargestellt sind. (In den Formeln besitzen R1a, R² und R¹&sup5; die oben definierten Bedeutungen.)
Die Ausgangsverbindung (a-2) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 120388/87 (oben) offenbart.
Man kann Verbindung (B) durch Hydrolyse der Verbindung (A-2) mit 1 bis 1,5 Äquivalenten eines Alkalimetallhydroxids erhalten. Beispiele für Alkalimetallhydroxid sind Natriumhydroxid und Kaliumhydroxid. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Dimethylformamid oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 24 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.
Man kann Verbindung (C) durch Umsetzung der Verbindung (B) mit 3 bis 20 Äquivalenten eines Acetylierungsmittels erhalten. Ein Beispiel für ein Acetylierungsmittel ist Acetanhydrid. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Pyridin oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 Stunde bis zu 4 Tagen bei 0 bis 50 ºC beendet.
Man kann Verbindung (D) durch Umsetzung der Verbindung (C) mit einem Halogenierungsmittel einer Carboxylgruppe erhalten, welches auch als Lösungsmittel dient. Beispiele für das Halogenierungsmittel sind Thionylchlorid und Oxalylchlorid. Die Umsetzung ist nach 1 bis 3 Stun den bei 50 bis 100 ºC beendet.
Man kann Verbindung (E) durch Umsetzung der Verbindung (D) mit 5 bis 30 Äquivalenten R¹&sup5;NH&sub2; erhalten. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man einen halogenierten Kohlenwasserstoff, wie Methylenchlorid, Chloroform, Ethylendichlorid oder Dimethylformamid, oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 24 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.
Man kann die Verbindung (111-2) durch Deacetylierung der Verbindung (E) mit 0,5 bis 10 Äquivalenten eines Deacetylierungsmittels erhalten. Beispiele für das Deacetylierungsmittel sind Alkalimetallalkoxylate, wie Natriummethylat, und Alkalimetallhydroxide, wie Natriumhydroxid. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man ein Lösungsmittelgemisch aus einem halogenierten Kohlenwasserstoff, wie Methylenchlorid, Chloroform oder Ethylendichlorid, und einem Alkohol, wie Methanol oder Ethanol, ein Lösungsmittelgemisch aus einem Ether, wie Dioxan oder Tetrahydrofuran, und einem Alkohol, wie Methanol oder Ethanol oder dergleichen. Das Verhältnis von halogeniertem Kohlenwasserstoff zu Alkohol oder von Ether zu Alkohol beträgt 1:5 bis 1:1. Die Umsetzung ist nach 5 Minuten bis 1 Stunde bei 0 bis 50 ºC beendet.

Verfahren 3

Man kann die Verbindung (III-3) [Verbindung (III), worin R¹ für CH&sub2;OCONHR¹&sup4; steht und X für CO&sub2;CH&sub3; steht] durch die folgenden Umsetzungsschritte herstellen, welche in Fig. 3 dargestellt sind. (In den Formeln steht R¹&sup4; für Niedrigalkyl.)
Die Ausgansverbindung (F) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 295588/88 offenbart.
Man kann die Verbindung (G) durch Umsetzung der Verbindung (F) mit 1 bis 5 Äquivalenten R¹&sup4;NCO in Anwesenheit einer Base erhalten. Ein Beispiel für eine Base ist Triethylamin. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man ein Lösungsmittelgemisch aus Tetrahydrofuran und Dimethylformamid oder dergleichen. Das Verhältnis von Tetrahydrofuran zu Dimethylformamid beträgt 5:1 bis 1:1. Die Umsetzung ist nach 5 bis 24 Stunden bei 10 bis 70 ºC beendet.
Man kann Verbindung (III-3) aus Verbindung (G) in einer der Herstellung der Verbindung (III-2) ähnlichen Weise erhalten.

Verfahren 4

Man kann die Verbindung (III-4) [Verbindung (III), worin R¹ für NHCO&sub2;R¹&sup4; steht und X für CO&sub2;CH&sub3; steht] durch die folgenden, in Fig. 4 dargestellten, Umsetzungsschritte herstellen. (In den Formeln steht R¹&sup4; für Niedrigalkyl.)
Die Ausgangsverbindung (N) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 295588/88 offenbart (auf die hiermit Bezug genommen wird).
Man kann Verbindung (O) durch Umsetzung der Verbindung (N) mit 1 bis 5 Äquivalenten ClCO&sub2;R¹&sup4; in Anwesenheit von 1 bis 5 Äquivalenten einer Base erhalten. Ein Beispiel für die Base ist Triethylamin. Als Umsetzunglösungsmittel verwendet man einen halogenierten Kohlenwasserstoff, wie Methylenchlorid, Chloroform oder Ethylendichlorid, oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 3 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.
Man kann Verbindung (III-4) aus Verbindung (O) in einer der Herstellung der Verbindung (III-2) ähnlichen Weise erhalten.

Verfahren 5

Man kann Verbindung (IV-1) [Verbindung (IV), worin X für CH&sub2;SR¹&sup6; steht] durch folgenden Umsetzungsschritt herstellen:
(In den Formeln besitzt R¹&sup6; die oben definierte Bedeutung.)
Die Ausgangsverbindung (H) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 155285/87 offenbart.
Man kann Verbindung (IV-1) durch Umsetzung der Verbindung (H) mit 1 bis 5 Äquivalenten R¹&sup6;SH in Anwesenheit von 1 bis 5 Äquivalenten einer Base herstellen. Ein Beispiel für die Base ist ein Alkalimetallhydrid, wie Natriumhydrid. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Dimethylformamid oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 2 bis 5 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.

Verfahren 6

Man kann Verbindung (IV-2) [Verbindung (IV), worin X für CH&sub2;S(O)R¹&sup6; steht] durch den folgenden Umsetzungsschritt herstellen: Oxidation
(In den Formeln steht R¹&sup6; für Aryl oder eine ein Stickstoffatom enthaltende heterocyclische Gruppe.)
Man kann Verbindung (IV-2) durch Umsetzung der Verbindung (IV-1) mit 1 bis 1,5 Äquivalenten eines Oxidationsmittels erhalten. Ein Beispiel für das Oxidationsmittel ist m-Chlorperbenzoesäure. Als Umsetzungslöungsmittel verwendet man einen halogenierten Kohlenwasserstoff, wie Methylenchlorid, Chloroform oder Ethylendichlorid, oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 8 Stunden bei -70 bis 0 ºC beendet.

Verfahren 7

Man kann Verbindung (IV-3) [Verbindung (IV), worin X fur CH&sub2;NHCONHR¹&sup8; steht] durch den folgenden Umsetzungsschritt herstellen:
(In den Formeln steht R¹&sup8; für Niedrigalkyl oder Aryl.)
Die Ausgangsverbindung (J) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 155285/87 offenbart.
Man kann die Verbindung (IV-3) durch Umsetzung der Verbindung (J) mit 1 bis 3 Äquivalenten R¹&sup8;NCO in Anwesenheit von 1 bis 3 Aquivalenten einer Base erhalten. Ein Beispiel für die Base ist Triethylamin. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Tetrahydrofuran oder degleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 5 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.

Verfahren 8

Man kann die Verbindung (IV-4) [Verbindung (IV), worin X für CH=NN(R¹&sup7;)&sub2; steht] durch den folgenden Umsetzungsschritt herstellen:
(In den Formeln steht R¹&sup7; für Aryl.)
Die Ausgangsverbindung (K) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 295588/88 (oben) offenbart.
Man kann die Verbindung (IV-4) durch Umsetzung der Verbindung mit 2 bis 10 Äquivalenten R¹&sup7;&sub2;NNH&sub2; HCl erhalten. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man ein Lösungsmittelgemisch aus einem Ether, wie Dioxan oder Tetrahydrofuran, und Wasser oder dergleichen. Das Verhältnis von Ether zu Wasser beträgt 1:10 bis 1:2. Die Umsetzung ist nach 2 bis 8 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.

Verfahren 9

Man kann Verbindung (IV-5) [Verbindung (IV), worin X für CH&sub2;CO&sub2;CH&sub3; steht] durch die folgenden Umsetzungsschritte herstellen, die in Fig. 5 dargestellt sind.
Man kann Verbindung (L) durch Umsetzung der Verbindung (H) mit 1 bis 5 Äquivalenten eines Cyanierungsmittels erhalten. Ein Beispiel für das Cyanierungsmittel ist ein Alkalimetallcyanid, wie Natriumcyanid. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Dimethylformamid oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 24 Stunden bei 20 bis 100 ºC beendet.
Man kann Verbindung (IV-5) durch Hydrolyse der Verbindung (L) mit 10 bis 50 ml/mmol einer wässrigen Lösung eines Alkalimetallhydroxids und anschließender Umsetzung mit 2 bis 10 Äquivalenten CH&sub2;N&sub2; erhalten. Beispiele für die wässrige Alkalimetallhydroxidlösung sind eine 30 %- ige wässrige Natriumhydroxidlösung und eine 30 %-ige wässrige Kaliumhydroxidlösung. Bei der Hydrolyse verwendet man Ethylenglycol oder dergleichen als Umsetzungslösungsmittel, und die Umsetzung ist nach 1 bis 3 Stunden bei 120 bis 180 ºC beendet. Bei der Behandlung mit CH&sub2;N&sub2; verwendet man Dimethylformamid als Umsetzungslösungsmittel, und die Umsetzung ist nach 1 bis 5 Stunden bei 0 bis 30 ºC beendet.

Verfahren 10

Man kann die Verbindung (V) durch die folgenden Umsetzungsschrit te, welche in Fig. 6 dargestellt sind, herstellen. (In den Formeln steht THP für Tetrahydropyranyl; einer der beiden Reste R¹&sup9; und R² steht für Wasserstoff, der andere für Allyl, oder beide Reste stehen für Allyl.)
Die Ausgangsverbindung (M) ist in J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2475 (1990) offenbart.
Man kann Verbindung (P) durch Umsetzung der Verbindung (M) mit 1 bis 1,5 Äquivalenten Allylbromid in Anwesenheit von 1 bis 1,5 Äquivalenten einer Base erhalten. Ein Beispiel für eine Base ist ein Alkalimetallhydrid, wie Natriumhydrid. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Dimethylformamid. Die Umsetzung ist nach 1 bis 5 Stunden bei -10 bis 10 ºC beendet.
Man kann Verbindung (V) durch Umsetzung von Verbindung (P) mit 3 bis 50 ml/mmol einer wässrigen Lösung einer Säure erhalten. Ein Beispiel für eine wässrige Lösung einer Säure ist 2M H&sub2;SO&sub4;. Als Umset zungslösungsmittel verwendet man Tetrahydrofuran oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 5 bis 24 Stunden bei 50 bis 100 ºC beendet.

Verfahren 11

Man kann Verbindung (VI-1) [Verbindung (VI), worin R¹ für CH(SC&sub6;H&sub5;)&sub2; oder CH(-SCH&sub2;CH&sub2;S-) steht] durch den folgenden Umsetzungsschritt herstellen: Mercaptan, Lewis-Säure Deacetylierung
[In den Formeln steht R1b für CH(SC&sub6;H&sub5;)&sub2; oder CH(-SCH&sub2;CH&sub2;S-).]
Die Ausgangsverbindung (A-3) ist in der japanischen veröffentlichten ungeprüften Patentanmeldung Nr. 295588/88 offenbart.
Man kann die N,O-diacetylierte Verbindung (VI-1) durch Umsetzung der Verbindung (A-3) mit 1 bis 10 Äquivalenten eines entsprechenden Mercaptans in Anwesenheit einer Lewis-Säure in einem inerten Lösungsmittel erhalten. Ein Beispiel für die Lewis-Säure ist der Bortrifluoridether-Komplex. Ein Beispiel des inerten Lösungsmittels ist Dichlorethan. Die Umsetzung ist nach 1 bis 24 Stunden bei 0 ºC bis Raumtemperatur beendet.
Danach kann man die Verbindung (VI-1) durch Hydrolyse der N,O- diacetylierten Verbindung (VI-1) mit 1 bis 5 Äquivalenten eines Alkalimetallalkoxids erhalten. Beispiele für das Alkalimetallalkoxid sind Natriummethoxid und Kaliumethoxid. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Chloroform, Methanol, ein Gemisch davon oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 0,1 bis 24 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet

Verfahren 12

Man kann die Verbindung (VI-2) [Verbindung (VI), worin R¹ für CH&sub2;SR²&sup4; steht] durch den folgenden Umsetzungsschritt herstellen: Mercaptan, Säure Deacetylierung
(In den formeln steht R1d für CH&sub2;SR²&sup4;.)
Man kann die N,O-diacetylierte Verbindung (VI-2) durch Umsetzung der Verbindung (A-3) mit 1 bis 10 Äquivalenten eines entsprechenden Mercaptans in Anwesenheit einer Säure in einem inerten Lösungsmittel erhalten. Ein Beispiel für die Säure ist (±)-10-Kampfersulfonsäure. Als inertes Lösungsmittel verwendet man Chloroform, Methanol, ein Gemisch davon oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 48 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.
Danach kann man Verbindung (VI-2) durch Hydrolyse der N,O- diacetylierten Verbindung (VI-2) mit 1 bis 5 Äquivalenten eines Alkalimetallalkoxids erhalten. Beispiele für das Alkalimetallalkoxid sind Natriummethoxid und Kaliumethoxid. Als Umsetzumgslösungsmittel verwendet man Chloroform, Methanol, ein Gemisch davon oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 0,1 bis 24 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.

Verfahren 13

Man kann die Verbindung (VI-3) [Verbindung] (VI), worin R¹ für CH=NR²&sup5; steht] durch den folgenden Umsetzungsschritt herstellen: Hydrazin-Derivat Deacetylierung
(In den Formeln steht R für CH=NR .)
Man kann die N,o-diacetylierte Verbindung (VI-3) durch Umsetzung der Verbindung (A-3) mit 1 bis 10 Äquivalenten eines entsprechenden Hydrazin-Derivates in Anwesenheit einer Säure in einem inerten Lösungsmittel erhalten. Ein Beispiel für die Säure ist Salzsäure. Als inertes Lösungsmittel verwendet man Chloroform, Methanol, Tetrahydrofuran, Wasser, ein Mischung davon oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 48 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.
Alternativ kann man die N,O-diacetylierte Verbindung (VI-3) durch Umsetzung der Verbindung (A-3) mit 1 bis 10 Äquivalenten eines Säureadditionssalzes des entsprechenden Hydrazin-Derivates in einem inerten Lösungsmittel erhalten. Beispiele für die Säure sind Salzsäure und Schwefelsäure. Als inertes Lösungsmittel verwendet man Chloroform, Methanol, Tetrahydrofuran, Wasser, eine Mischung davon oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 1 bis 48 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.
Danach kann man Verbindung (VI-3) durch Hydrolyse der N,O- diacetylierten Verbindung (VI-3) mit 1 bis 5 Äquivalenten eines Alkalimetallalkoxids erhalten. Beispiele für das Alkalimetallalkoxid sind Natriummethoxid und Kaliumethylat. Als Umsetzungslösungsmittel verwendet man Chloroform, Methanol, ein Gemisch davon oder dergleichen. Die Umsetzung ist nach 0,1 bis 24 Stunden bei 0 bis 50 ºC beendet.

Verfahren 14: Verbindung I-57

Man löste die Verbindung (B-1) (siehe japanische ungeprüfte Patentanmeldung Nr. 155285/87) (393 mg, 0,9 mmol), α,&epsi;- Dibenzyloxycarbonyl-L-lysin (1,06 g, 2,6 mmol), 4-Methylmorpholin (0,1 ml, 0,9 mmol) und N-Hydroxysuccinimid (312 mg, 2,7 mmol) in 25 ml Tetrahydrofuran, gab danach unter Eiskühlung 6 ml Tetrahydrofuran, das 558 mg (2,7 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid enthielt, zu und rührte anschließend 12 Stunden bei Raumtemperatur. Nachdem man unlösliche Bestandteile abfiltriert und das Lösungsmittel verdampft hatte, unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 98/2) und erhielt 385 mg (Ausbeute 51 %) der geschützten Verbindung I-57. Die Verbindung (B-1) ist unten dargestellt:
SI-MS (m/z): 835 (M+1)&spplus;
Man löste die obige geschützte Verbindung I-57 (355 mg, 0,42 mmol) in 10 ml Dimethylformamid, gab danach 500 mg 10 %-ige Palladiumkohle zu und rührte anschließend in einer Wasserstoffatmosphäre 10 Stunden bei 50 ºC. Nach Filtration mit Celite und Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol/28 %-iger wässriger Ammoniak = 80/20/2), behandelte mit 1,7N Salzsäure/Ethylacetat und erhielt 120 mg (Ausbeute 44 %) der Verbindung I-57 als Hydrochlorid.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;/D&sub2;O = 10/1) δ (ppm): 1,40-2,32 (7H, m), 2,22 (3H, s), 2,64-3,24 (3H, m), 3,40-4,20 (3H, m), 5,04 (2H, s), 7,10 (1H, m), 7,30-8,20 (7H, m), 8,96 (1H, brs), 9,20 (1H, d, J=8 Hz)
SI-MS (m/z): 567 (M+1)&spplus;

Verfahren 15: Verbindung I-66

Man löste Verbindung I (Z¹, Z², R&sup5;, R&sup6; H; R = OH; X = CO&sub2;CH&sub3;; R¹=R²=CH&sub2;SC&sub2;H&sub5;) (siehe WO 94/02488) (10 mg, 0,016 mmol) in 0,5 ml Chloroform, gab danach 5,6 mg (0,032 mmol) m-Chlorperbenzoesäure bei -48 ºC zu und rührte anschließend 0,5 Stunden bei derselben Temperatur. Man wusch das Reaktionsgemisch nacheinander mit einer gesättigten wässrigen Natriumbicarbonatlösung, Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 90/10) und erhielt 10 mg (quantitative Ausbeute) der Verbindung I-66.
¹H-NMR (CDCl&sub3;/CD&sub3;OD = 10/1) δ (ppm): 1,334-1,429 (6H, m), 2,120, 2,136, 2,148, 2,157 (3H, ls), 3,270-3,372 (1H, m), 4,082 (3H, s), 4,619-4,792(2H, m), 6,832 (1H, brs), 7,225-7,857 (5H, m), 8,939 (0,6H, d, J=7,6 Hz), 8,997 (0,4H, d, J=8,3 Hz)
FAB-MS (m/z): 648 (M+1)&spplus;

Verfahren 16: Verbindung I-60

Man löste Verbindung (A-3) (58 mg, 0,1 mmol) in 3 ml Chloroform, gab danach 112 mg (1 mmol) 2-Mercaptopyridin und 49 mg (0,21 mmol) (±)-10-Kampfersulfonsäure zu und rührte anschließend 12 Stunden bei Raumtemperatur. Man wusch das Reaktionsgemisch nacheinander mit einer gesättigten wässrigen Natriumbicarbonatlösung, Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer präparativen Dünnschichtchromatographie (Chloroform/Methanol = 99/1) und erhielt 44 mg (Ausbeute 65 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-60.
FAM-MS (m/z): 675 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Bei spiel 20, indem man 38 mg (0,056 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-60 verwendete, und erhielt 29 mg (Ausbeute 87 %) der Verbindung I-60.
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 2,160 (M, s), 2,849 (1H, dd, J=4,9, 14,4 Hz), 4,054 (3H, s)4,556(1H, d, J=12,9Hz), 4,622(1H, d, J=14,9 Hz), 4,656(1H, d, J=12,7 Hz), 4,734(1H, d, J=16,1 Hz), 5,048 (1H, brs), 5,352 (1H, s), 6,807(1H, dd, J=2,6, 7,4 Hz), 7,000-7,949 (9H, m), 8,533-8,553 (1H, m), 8,918 (1H, d, J=1,2 Hz)
FAB-MS (m/z): 591 (M+1)&spplus;

Verfahren 17: Verbindung I-62

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Verfahren 16, indem man 58 mg (0,1 mmol) der Verbindung (A-3) und 112 mg (1 mmol) 2-Mercaptopyrimidin verwendete, und erhielt 65 mg (Ausbeute 96 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-62.
FAB-MS /m/z): 676 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 58 mg (0,086 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-62 verwendete, und erhielt 49 mg (Ausbeute 96 %) der Verbindung I-62.
¹H-NMR (CDCL&sub3;) δ (ppm): 2,200 (3H, s), 4,066 (3H, s), 4,595 (1H, d, J=13,2 Hz), 4,657 (1H, d, J=13,2 Hz), 4,793 (1H, d, J=17,1 Hz), 4,892 (1H, d, J=17,1 Hz), 6,878 (1H, dd, J=4,8, 7,4 Hz), 6,987-7,920 (7H, m), 8,583 (2H, d, J=4,8 Hz), 9,162 (1H, s)
FAB-MS (m/z): 592 (M+1)&spplus;

Verfahren 18: Verbindung I-64

Man löste Verbindung I-60 (19 mg, 0,032 mmol) in 0,5 ml Chloroform, gab danach bei -48 ºC 5,5 mg (0,032 mmol) m-Chlorperbenzoesäure zu und rührte anschließend 1,5 Stunden bei derselben Temperatur. Man wusch das Reaktionsgemisch nacheinander mit einer gesättigten wässrigen Natriumbicarbonatlösung und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer präparativen Dünnschichtchromatographie (Chloroform/Methanol = 85/15) und erhielt 13 mg (Ausbeute 67 %) der Verbindung I-64.
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 2,184 (l,5H, s), 2,191 (1,5H, s), 2,572 (0,5H, dd, J=4,6, 14,4 Hz), 2,609 (0,5H, dd, J=4,5, 14,7 Hz), 3,449 (0,5H, dd, J=7,4, 11,6 Hz), 3,485 (0,5H, dd, J=7,7, 11,4 Hz), 4,095 (3H, s), 4,173 (0,5H, d, J=13,1 Hz), 4,230 (0,5H, d, J=13,2 Hz), 4,485 (0,5H, d, J=13,2 Hz), 4,538 (0,5H, d, J=12,9 Hz), 4,588-4,828 (3H, m), 5,582 (0,5H, brs), 5,723 (0,5H, brs), 6,819-6,873 (1H, m), 7,227-7,894 (9H, m), 8,371 (0,5H, s), 8,607 (0,5H, s), 8,716-8,747 (1H, m)
FAB-MS (m/z): 607 (M+1)&spplus;

Verfahren 19: Verbindung I-63

Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Verfahren 18, indem man 36 mg (0,06 mmol) der Verbindung I-62 verwendete, und erhielt 20 mg (Ausbeute 55 %) der Verbindung I-63.
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 2,170 (M, s), 2,501 (0,6H, dd, J=4,7, 14,6 Hz), 2,564 (0,4H, dd, J = 4,6, 14,5 Hz), 3,410-3,487 (1H, m), 4,076 (1,2H, s), 4,082 (1,8H, s), 4,326-4,765 (5H, m), 5,682 (0,4H, brs), 5,796 (0,6H, brs), 6,7886,834 (1H, m), 7,203-7,877 (7H, m), 8,267 (1H, s), 8,736-8,751 (2H, m)
FAB-MS (m/z): 608 (M+1)&spplus;

Verfahren 20: Verbindung I-61

Man löste Verbindung (A-3) (58 mg, 0,1 mmol) in einem Gemisch aus 6 ml Chloroform und 3 ml Methanol, gab danach 0,5 ml einer wässrigen Lösung von 91 mg (0,5 mmol) 2-Hydrazino-2-imidazolin und 0,05 ml 3N Salzsäure zu und rührte anschließend 3 Stunden bei Raumtemperatur. Man wusch das Reaktionsgemisch nacheinander mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung und Kochsalzlösung und trocknete über Natriumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 90/100) und erhielt 57 mg (Ausbeute 86 %) der N,O-diacetylierten Verbindung I-61.
FAB-MS (m/z): 662 (M+1)&spplus;
Man wiederholte im Wesentlichen dasselbe Verfahren wie in Beispiel 20, indem man 47 mg (0,07 mmol) der N,O-diacetylierten Verbindung I-61 verwendete, und erhielt 34 mg (Ausbeute 84 %) der Verbindung I-61.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 2,052 (1H, dd, J=4,9, 14,0 Hz), 2,150 (3H, s), 3,933 (3H, s), 4,995 (1H, d, J=17,3 Hz), 5,044 (1H, d, J=17,3 Hz), 6,372 (1H, brs), 7,164 (1H, dd, J=5,0, 7,2 Hz), 7,353-8,166 (6H, m), 8,213 (1H, s), 8,619 (1H, s), 9,214 (1H, d, J=1,3 Hz)
FAB-MS (m/z): 578 (M+1)&spplus; Verfahren 21: Verbindung II-4
Man löste Verbindung (D-1) (J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1: 2475, 1990) (823,7 mg, 2,083 mmol) in 20 ml Dimethylformamid, gab danach un ter Eiskühlung 166,4 mg (4,16 mmol) Natriumhydrid (60 %) dazu und rührte anschließend 10 Minuten bei gleicher Temperatur. Man gab Allylbromid (0,45 ml, 5,2 mmol) dazu und rührte die Lösung 2 Stunden unter Eiskühlung. Nach Verdünnen mit Chloroform gab man Wasser dazu und trennte die organische Phase ab, wusch mit Kochsalzlösung und trockne te über Magnesiumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel-Säulenchromatographie (Ethylacetat/Toluol = 1/15) und erhielt 735,0 mg (Ausbeute 74 %) der Verbindung (E-1).
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 1,563-2,154 (6H, m), 3,657 (1H, m), 4,008 (1H, m), 5,044-5,478 (11H, m), 6,153 (2H, m), 7,240-7,640 (6H, m), 8,167 (1H, d, J=7,8 Hz), 9,415 (1H, d, J=7,8 Hz)
FAB-MS (m/z): 476 (M+1)&spplus;
Man suspendierte Natriumtetrahydroborat (77,7 mg, 2,05 mmol) in 20 ml Tetrahydrofuran, gab 231,0 mg (1,82 mmol) bd bei 0 ºC in einer Argonatmosphäre dazu und rührte anschließend 15 Minuten bei gleicher Temperatur. Man gab Verbindung (E-1) (136,7 mg, 0,287 mmol) bei gleicher Temperatur zu und rührte das Gemisch 4,5 Stunden bei Raumtemperatur. Nachdem man das Reaktionsgemisch auf 0 ºC gekühlt hatte, gab man 3,7 ml 1N Natriumhydroxid und 3,7 ml einer 35 %-igen wässrigen Wasserstoffperoxidlösung zu und rührte anschließend weitere 30 Minuten. Man verdünnte das Reaktionsgemisch mit Wasser und extrahierte mit Ethylacetat. Man wusch die Ethylacetat-Phase nacheinander mit Wasser und Kochsalzlösung und trocknete über Magnesiumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Silicagel- Säulenchromatographie (Chloroform/Methanol = 15/1) und erhielt 88,9 mg (Ausbeute 61 %) der Verbindung (F-1).
¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ (ppm): 1,60-2,11 (10H, m), 3,129 (2H, t, J=5,9 Hz), 3,192 (2H, t, J=5,9 Hz), 3,798 (1H, dt, J=2,8, 11,7 Hz), 4,09- 4,15 (1H, m), 4,723 (2H, t, J=7,2 Hz), 4,807 (2H, t, J=7,2 Hz), 4,943 (1H, d, J=16,6 Hz), 5,107 (1H, d, J=16,6 Hz), 5,652 (1H, dd, J=2,4, 10,5 Hz), 7,15-7,18 (1H, m), 7,318 (1H, ddd, J=1,1, 7,0, 8,0 Hz), 7,35-7,39 (1H, m) 7,461 (1H, ddd, J=l,2, 6,8, 8,0 Hz), 7,519 (1H, dd, J=l,0, 8,0 Hz), 7,610 (1H, d, J=8,0 Hz), 7,951 (1H, d, J=8,0 Hz), 9,490 (1H, d, J=8,0 Hz)
FAB-MS (m/z): 512 (M+1)&spplus;
Man löste die Verbindung (F-1) (88,9 mg, 0,174 mmol) in 10 ml Tetrahydrofuran, gab 8 ml 4N Schwefelsäure zu und rührte anschließend 24 Stunden bei 60 ºC. Nachdem man das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur gekühlt hatte, gab man Eis dazu und extrahierte anschließend mit Ethylacetat. Man wusch die Ethylacetat-Phase nacheinander mit Wasser und einer Kochsalzlösung und trocknete über Magnesiumsulfat. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unterzog man den Rückstand einer Dünnschichtchromatographie (Chloroform/Methanol 15/1) und erhielt 37,6 mg (Ausbeute 51 %) der Verbindung II-4.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) δ (ppm): 1,59-1,65 (2H, m), 1,70-1,82 (2H, m), 3,03-3,27 (2H, m), 3,09-3,14 (2H, m) 4,371 (1H, t, J=5,0 Hz), 4,419 (1H, t, J=5,0 Hz), 4,780 (2H, t, J=7,3 Hz), 4,818 (2H, t, J=7,4 Hz), 4,972 (2H, s), 7,288 (1H, ddd, J=0,8, 7,0, 7,8 Hz), 7,370 (1H, t, J=7,2 Hz), 7,50, (1H, ddd, J=1,2, 7,0, 8,2 Hz), 7,563 (1H, ddd, J=1,1, 7,2, 8,3 Hz), 7,779 (1H, d, J=8,3 Hz), 7,848 (1H, d, J=8,2 Hz), 8,043 (1H, d, J=7,2 Hz), 9,412 (1H, dd, J=0,8, 7,8 Hz)
FAB-MS (m/z): 428 (M+1)&spplus;

Herstellung der K-252a-Derivate

Weitere funktionelle Derivate von I-1 können durch dem Fachmann bekannte Verfahren der chemische Synthese und durch die folgenden Verfahren, auf die hiermit Bezug genommen wird, neu hergestellt werden. Beispielsweise sind Verfahren zur Herstellung der Verbindung I von Murakata et al. (US-Patent 4,923,986) beschrieben, worauf hiermit Bezug genommen wird. Verfahren zur Herstellung von Verbindung II sind beschrieben von Moody et al., J. Org. Chem. 57: 2105-2114 (1992), Steglich et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 19: 459-460 (1980); Nakanishi et al., J. Antibiotics 39: 1066-1071 (1986); und in der japanischen Patentanmeldung Nr. 60-295172 (1985). Weitere Verfahren für Verbindung I sind in den japanischen Patentanmeldungen mit den Nummern 60-295173 (198s), 62-327858 (1987), 62-327859 (1987) und 60-257652 (1985) [Meiji Seika Kaisha Ltd.] beschrieben.

Therapie

Man kann die Verbindungen der Formel A und deren Salze zu pharmazeutische Zubereitungen durch Zugabe von pharmazeutisch verträglichen nichttoxischen Exzipienten und Trägern formulieren. Wie oben schon bemerkt, kann man solche Zubereitungen zur Verwendung bei der parenteralen Verabreichung, insbesondere in Form flüssiger Lösungen oder Suspensionen, für die orale Verabreichung, insbesondere in Form von Tabletten oder Kapseln, oder für die intranasale Verabreichung, insbesondere in Form von Pulvern, Nasentropfen oder Aerosols, herstellen.
Vorteilhafterweise kann die Zubereitung in Form von Dosiseinheiten verabreicht und durch jegliche dem pharmazeutischen Fachmann bekannte Verfahren hergestellt werden, z. B. wie in Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. Easton, PA, 1980) beschrieben. Als übliche Exzipienten können Formulierungen für die parenterale Verabreichung sterilisiertes Wasser oder Kochsalzlösung, Polyalkylenglycole, wie Polyethylenglycol, Öle pflanzlichen Ursprungs, hydrierte Naphthaline und dergleichen enthalten. Insbesondere können biokompatibles, biologisch abbaubares Lactidpolymer, Lactid/Glycolid-Copolymer oder Polyoxyethylen-Polyoxypropylen-Copolymere brauchbare Exzipienten zur Kontrolle der Freisetzung der wirksamen Verbindungen sein. Andere potentiell verwendbare parenterale Abgabesysteme für diese wirksamen Verbindungen umfassen Ethylen-Vinylacetat-Copolymerpartikel, osmotische Pumpen, implantierbare Infusionssysteme und Liposome. Formulierungen zur Verabreichung durch Inhalation enthalten als Exzipienten beispielsweise Lactose oder können wässrige Lösungen sein, die bei spielsweise Polyoxyethylen-9-laurylether, Glycocholat oder Deoxycholat enthalten, oder ölige Lösungen zur Verabreichung in Form von Nasentropfen oder als Gel zum intranasalen Auftragen. Formulierungen für die parenterale Verabreichung können auch Glycocholat für die buccale Verabreichung, Methoxysalicylat für die rektale Verabreichung oder Zitronensäure für die vaginale Verabreichung umfassen.
Die Konzentrationen der hier beschriebenen Verbindungen in einer therapeutischen zusammensetzung wird abhängig von einer Vielzahl von Faktoren variieren, einschließlich der Dosierung der zu verabreichenden Arznei, den chemischen Eigenschaften (z. B. der Hydrophobizität) der verwendeten Verbindungen und des Verabreichungsweges. Im Allgemeinen können die erfindungsgemäßen Verbindungen in einer wässrigen physiologischen Pufferlösung mit etwa 0,1 bis 10 % w/v Verbindung für die parenterale Verabreichung bereitgestellt werden. Typische Dosierungen liegen im Bereich von etwa 1 ug/kg bis etwa 1 g/kg Körpergewicht pro Tag; eine bevorzugte Dosierung liegt im Bereich von 0,01 mg/kg bis 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Die bevorzugte Dosierung der zu verabreichenden Arznei wird wahrscheinlich abhängig sein von solchen Variablen wie Typ und Ausmaß der Progression der Prostataerkrankung, dem allgemeinen Gesundheitszustand des speziellen Patienten, der relativen biologischen Wirksamkeit der ausgewählten Verbindung, die Formulierung der Verbindungsexzipienten und ihr Verabreichungsweg.

Claims

1. Verwendung einer Verbindung der Formel I

(worin entweder:

a) Z¹ und Z² jeweils für Wasserstoff stehen, wobei:

1) R ausgewählt ist unter OH, O-n-Alkyl mit 1-6 Kohlenstoffatomen und O-Acyl mit 2-6 Kohlenstoffatomen;

2) X ausgewählt ist unter H; CH&sub2;Y (worin Y steht für

OR&sup7; (worin R&sup7; für H oder C&sub2;&sub5;-Acyl steht);

SOR&sup8; (worin R&sup8; für C&sub1;&sub3;-Alkyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl oder eine Stickstoffatom-enthaltende, heterocyclische Gruppe steht, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl);

NR&sup9;R¹&sup0; (worin R&sup9; und R¹&sup0; unabhängig voneinander für H oder C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl stehen oder einer der Reste

R&sup9; und R¹&sup0; für H oder C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl steht und der andere für Pro, Ser, Gly, Lys oder C&sub2;&submin;&sub5;-Acyl steht);

SR¹&sup6; (worin R¹&sup6; für C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl oder eine Stickstoffatom-enthaltende, heterocyclische Gruppe steht, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl);

N&sub3;; CO&sub2;CH&sub3;; oder S-Glc);

CONR¹¹R¹² (worin R¹¹ und R¹² unabhängig voneinander für H, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub6;H&sub5;, C&sub1;&submin;&sub6;-Hydroxyalkyl stehen oder R¹¹ und R¹² zusammen -CH&sub2;CH&sub2;OCH&sub2;-CH&sub2;- bilden);

CO&sub2;CH&sub3;; CH=NNHCONH&sub2;; CONHOH; CH=NOH; CH=NNHC(=NH)NH&sub2;;

CH=NN(R¹&sup7;)&sub2; (worin R¹&sup7; für C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl steht);

CH&sub2;NHCONHR¹&sup8; (worin R¹&sup8; für eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppe oder eine C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylgruppe steht);

oder wenn R¹ und R² beide für Wasserstoff stehen, X auch für CONHC&sub6;H&sub5; stehen kann;

oder X und R zusammen -CH&sub2;NHCO&sub2;-, -CH&sub2;OC(CH&sub3;)&sub2;O-, = oder -CH&sub2;N(CH&sub3;)CO&sub2;- bilden;

3) R¹, R², R&sup5; und R&sup6; unabhängig voneinander für H stehen oder bis zu zwei dieser Reste für F, Cl, Br, I, NO&sub2;, CN, OH, NHCONHR¹³ (worin R¹³ für C&sub6;H&sub5; oder C&sub1;&submin;&sub3;- Alkyl steht, mit der Maßgabe, daß nur einer der Reste R¹, R², R&sup5; und R&sup6; für NHCONHR¹³ steht), CH&sub2;OR¹³, C&sub1;&submin;&sub3;- Alkyl; CH&sub2;OCONHR¹&sup4;, NHCO&sub2;R¹&sup4; (worin R¹&sup4; für eine geradkettige oder verzweigte C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppe steht), CH(SC&sub6;H&sub5;)&sub2; oder

stehen; oder R¹ für CH&sub2;S(O)pR²¹ (worin p 0 oder 1 ist und R²¹ für Aryl, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl, CH&sub2;CH&sub2;N(CH&sub3;)&sub2;,

oder eine Stickstoffatomenthaltende, heterocyclische Gruppe steht, die ein Stickstoffatom aufweist und ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl, und R², R&sup5; und R&sup6; für H stehen; oder R¹ für CH=NNR²²R²³ (worin R²² und R²³, jeweils unabhängig voneinander, für H, C&sub1;&sub3;-Alkyl, C(=NH)NH&sub2; oder eine ein Stickstoffatom aufweisende heterocyclische Gruppe stehen, die ausgewählt ist unter Pyrrolyl, Pyranyl, Thiopyranyl, Pyridyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrimidyl, Triazinyl, Indolyl, Chinolyl, Purinyl und Benzothiazolyl, oder R²² und R²³ zusammen eine -(CH&sub2;)&sub4;-, -(CH&sub2;CH&sub2;OCH&sub2;CH&sub2;)- oder (CH&sub2;CH&sub2;N(CH&sub3;)CH&sub2;CH&sub2;)-Brückengruppe stehen, mit der Maßgabe, daß R²² und R²³ nicht gleichzeitig für H stehen können und wenigstens einer der Reste R²² oder R²³ für H steht, sofern nicht beide für Alkyl stehen oder zusammen eine Brückengruppe bilden), und R², R&sup5; und R&sup6; für H stehen; oder:

b) Z¹ und Z² zusammen für O stehen; X für CO&sub2;CH&sub3; steht; R für OH steht und R¹, R², R&sup5; und R&sup6; jeweils für Wasserstoff stehen)

oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung eines pathologischen Zustandes der Prostata.

2. Verwendung einer Verbindung der Formel II

(worin:

a) R³ und R&sup4; unabhängig voneinander ausgewählt sind unter H, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub3;-Hydroxyalkyl und C&sub3;&submin;&sub6;-Alkenyl, mit der Maßgabe, daß R³ und R&sup4; nicht beide für H stehen; und

b) Z¹ und Z² beide für Wasserstoff stehen; und R¹, R², R&sup5; und R&sup6;jeweils unabhängig voneinander für H stehen oder bis zu zwei dieser Reste für F, Cl, Br, I, NO&sub2;, CN, OH, NHCONHR¹³ (worin R¹³ für C&sub6;H&sub5; oder C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl stehen, mit der Maßgabe, daß nur einer der Reste R¹, R², R&sup5; und R&sup6; für NHCONHR¹³ steht), CH&sub2;OR¹³, C&sub1;&submin;&sub3;-Alkyl; CH&sub2;OCONHC&sub2;H&sub5; oder NHCO&sub2;CH&sub3; stehen; oder

c) Z¹ und Z² zusammen für 0 stehen und R¹, R², R&sup5; und R&sup6; jeweils für Wasserstoff stehen)

3. Verwendung nach Anspruch 1 einer Verbindung der Formel I-1, I-2, I-5, I-8, I-12, I-15, I-16, I-19, I-20, I-22 oder I-42

oder eines Salzes davon.

4. Verwendung nach Anspruch 1 einer Verbindung der Formel I- 1, I-5, I-12, I-19 oder I-42

oder eines Salzes davon.

5. Verwendung nach Anspruch 1 einer Verbindung der Formel I-2

oder eines Salzes davon.

6. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Prostata-Hypertrophie oder Prostatakrebs.