DE69403110T2

DE69403110T2 - Zyklische Angiopeptin Derivate, deren Herstellung und pharmazeutische Zusammensetzungen

Info

Publication number: DE69403110T2
Application number: DE69403110T
Authority: DE
Inventors: Jean-Luc Fauchere; Philip Janiak; Christophe Thurieau; Jean-Paul Vilaine
Original assignee: ADIR SARL
Current assignee: Laboratoires Servier SAS
Priority date: 1993-02-22
Filing date: 1994-02-17
Publication date: 1997-12-04
Anticipated expiration: 2014-02-18
Also published as: US5569647A; ATE153032T1; JPH06306098A; ZA941196B; EP0612763A1; CA2115972A1; EP0612763B1; AU5522794A; FR2701952B1; GR3023941T3; ES2104295T3; AU666244B2; DE69403110D1; FR2701952A1; NZ250933A; DK0612763T3

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Peptidderivate des Angiopeptins, Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Zubereitungen.
Angiopeptin ist ein Octapeptid-amid, welches nicht-natürliche Aminosäuren enthält, nämlich 3-(2-Naphthyl)-D-alanin (D-Nal) und D-Tryptophan (D-Trp). Dieses Octapeptid ist teilweise cyclisch, indem eine Disulfidbrücke die beiden Cystein-Seitenketten in der Position 2 und 7 verbindet, und entspricht der Formel:
Lundergan et al. (Atherosclerosis, 80(1989), 49-55) haben für Angiopeptin in vivo einen antiproliferativen Effekt auf die Zellen der glatten Gefäßmuskulatur bei einem Ratten- Carotisarterienmodell, bei dem eine Austrocknung des Endotheliums an der Luft erfolgt, beschrieben.
Der Stand der Technik wird durch die Patente EP-A-0 203 301 und WO-A- 89/ 12068 verdeutlicht, welche cyclische Octapeptide beschreiben, die einen Lysinrest enthalten.
Die Anmelderin hat festgestellt, daß die pharmakologischen Eigenschaften des Angiopeptins durch die folgenden zwei strukturellen Veränderungen stark verbessert werden können, nämlich:
1) - Ersatz der Disulfidbrücke durch eine Amidbindung und
2) - Optimierung der Größe des Rings durch richtige Auswahl der Länge der Seitenketten der Aminosäuren, über welche die Cyclisierung erfolgt.
Der Ersatz der Disulfidbrücke durch eine Amidbindung wurde durch die fundamentalten strukturellen Unterschiede dieser beiden Cyclisierungstypen geleitet:
Die Größe des Rings zwischen den Positionen 2 und 7 kann in beträchtlichem Maße seine Konformation verändern sowie die Orientierung der Reste 1 und 8 außerhalb des Rings.
Die Anmelderin hat gefunden, daß insbesondere jene Verbindungen, bei denen der Ring 22 Atome umfaßt, eine optimale inhibierende Wirkung gegen eine proliferative Gefäßveränderung entfalten.
Die Derivate der vorliegenden Erfindung besitzen somit pharmakologische Eigenschaften, diejenen analoger Verbindungen überlegen sind, die bisher beschrieben oder beansprucht worden sind. Insbesondere inhibieren sie in vivo die myointimale Proliferation der Ratten-Kopfschlagader in wirksamerer Weise als es Angiopeptin oder andere bekannte analoge Verbindungen vermögen.
Die Erfindung betrifft insbesondere neue Peptidderivate der allgemeinen Formel (I):
in der
- R&sub1; einen Aminosäurerest in der Konfiguration L oder D, der acetyliert oder nicht acetyliert ist,
- R&sub2; einen Aminosäurerest in der Konfiguration L oder D, wie er üblicherweise vom Fachmann verwendet wird, und der eine C-terminale Amidfunktion oder freie Säurefunktion aufweist,
- X&sub1; und X&sub2; ausgewählt sind aus Aminosäureresten, die eine Cyclisierung über eine Amidbindung ermöglichen und in dieser Weise einen Ring mit 22 Atomen ergeben,
- Tyr den L-Tyrosylrest,
- D-Trp den D-Tryptophylrest,
- Lys den L-Lysylrest,
- Val den L-Valylrest
bedeuten,
deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.
Der Begriff Aminosäurerest steht für eine Aminosäure, der ein Wasserstoffatom an der Aminogruppe oder der Hydroxylgruppe der Säurefunktion fehlt oder bei der gleichzeitig ein Wasserstoffatom an der Aminogruppe und an der Hydroxylgruppe der Säuregruppe fehlt.
Ganz allgemein entspricht die in der vorliegenden Erfindung verwendete Nomenklatur der Peptide den Empfehlungen der IUPAC-IUB von 1983 (Eur. J. Biochem., 138 (1984), 9-36).
Insbesondere betrifft die Erfindung die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der:
- R&sub1; den Rest einer Aminosäure in der Konfiguration L oder D, deren entständige Aminogruppe gegebenenfalls acetyliert sein kann, bedeutet und der ausgewählt ist aus Alanin, Cystein, Glycin, Histidin, Leucin, Glutaminsäure, Glutamin, Arginin, Asparagin Asparaginsäure Lysin, Methionin, Phenylalanin, Prolin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin Valin und Naphthylalanin,
- R&sub2; einen Rest einer Aminosäure in der Konfiguration L oder D darstellt, die eine C-terminale Amidfunktion oder freie Säurefunktion aufweist, wobei die Aminosäure ausgewählt ist aus Alanin, Methylalanin, Phenylalanin, Naphthylalanin, Arginin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein Glutamin, Glutaminsäure, Glycin Histidin, Leucin, Lysin, Methionin, Prolin, Hydroxyprolin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin und Valin,
- X&sub1; und X&sub2; derart ausgewählt sind, daß der Ring der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) 22 Atome aufweist, und abhängig voneinander aus den folgenden Aminosäureresten ausgewählt sind:
wobei -Dab- für den Rest der L-Diaminobuttersäure und -Dpr- für den Rest der L-Diaminopropionsäure stehen,
deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.
Als pharmazeutisch annehmbare Säuren kann man in nicht einschränkender Weise nennen Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure Schwefelsäure, Phosphonsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Fumarsäure, Weinsäure, Maleinsäure Citronensäure, Ascorbinsäure, Oxalsäure, Methansulfonsäure, Camphersäure, etc...
Als pharmazeutisch annehmbare Basen kann man in nicht einschränkender Weise nennen Natriumhydroxld, Kallumhydroxld, Tributylamin, tert. -Butylamin, etc...
Die Erfindung erstreckt sich auch auf das Verfahren zur Herstellung der Derivate der Formel (I), das dadurch gekennzeichnet ist, daß sie unter Anwendung unterschiedlicher Methoden erhalten werden können, wie durch sequentielle Synthese auf fester Phase, über die Synthese von Fragmenten und deren Kupplung in Lösung, durch eine enzymatische Synthese, durch eine genetische Synthese durch Klonung und Exprimierung der Gene in transformierten Bakterien oder durch Kombinationen dieser unterschiedlichen Techniken.
Die allgemeinen Methoden der Peptidsynthese auf fester Phase sind von B.W. Erickson und R.B. Merrifield beschrieben worden ("The Proteins", Solid-Phase Peptide Synthesis, 3. Aufl., Band II(1976), 257-527).
Die Synthese auf fester Phase kann in einem Automaten durchgeführt werden, welcher in wiederholter und programmierbarer Weise Zyklen der Abspaltung von Schutzgruppen, der Kupplung und des Waschens durchführt, die zur sequentiellen Einführung der Aminosäuren in die Peptidkette erforderlich sind. Die vorzugsweise C-terminale Aminosäure wird an ein üblicherweise für die Herstellung von Polypeptiden verwendetes Harz, vorzugsweise ein mit Hilfe von 0,5 bis 3,0 % Divinylbenzol vernetzt es Polystyrolharz, welches aktive Reste, wie Chlormethylen- oder Hydroxymethylen-Reste aufweist, welche eine kovalente Bindung der ersten Aminosäure an dem Harz ermöglicht, gebunden. Die geeignete Auswahl des Harzes ermöglicht die Bindung einer C-terminalen Carbonsäure-, Amid- oder Alkoholfunktion.
Die Auswahl der Stelle der Kupplung der Fragmente wird häufig durch die Art der Minimierung des Risikos der Racemisierung bestimmt. Drei mögliche Kupplungsstellen, die nicht racemisierend wirken, sind beispielsweise die C-terminale Funktion von 2-Prolin, 3-Hydroxyprolin und 4-Glycin.
Die Aminosäuren werden dann in der von dem Operator bestimmten Reihenfolge zugeführt. Jeder Synthesezyklus, der der Einführung einer Aminosäure entspricht, umfaßt eine Abspaltung der Schutzgruppe, vorzugsweise der N-terminalen Schutzgruppe der Peptidkette, aufeinanderfolgende Waschvorgänge, die dazu dienen, die Reagenzien zu entfernen, die Kupplung der Aminosäure unter Aktivierung und erneute Waschvorgänge. Jeder dieser Maßnahmen wird von einer Filtration gefolgt, die mit Hilfe einer Glasfritte bewirkt wird, welche in dem Reaktionsgefäß enthalten ist, in dem die Synthese abläuft.
Die verwendeten Kupplungsreagenzien sind klassische Reagenzien der Peptidsynthese, wie Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) und Hydroxybenzotriazol (HOBt) oder Benzotriazol-1-yl-oxytris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorphosphat (BOP) oder schließlich Diphenylphosphorylazld (DPPA). Es ist auch die Aktivierung durch die Bildung gemischter Anhydride möglich.
Jeder Aminosäure wird im Überschuß in das Reaktionsgefäß eingeführt, beispielsweise einen 4-fachen Überschuß, bezogen auf den Substitutionsgrad des Harzes und in einer etwa äquivalenten Menge im Verhältnis zu den Kupplungsmitteln. Die Kupplungsreaktlon kann in jeder Synthesestufe durch den Ninhydrintest ausgeführt werden, der von E. Kaiser et coll. beschrieben worden ist (Analyt. Biochem., 34 (1970), 595-599).
Nach der Ausbildung der Peptidkette auf dem Harz ermöglicht eine Behandlung mit einer starken Säure, wie Trifluoressigsäure oder Fluorwasserstoffsäure in Gegenwart von Anisol, Ethandithiol oder 2-Methylindol die Abtrennung des Peptids von dem Harz und die eventuelle Befreiung des Peptids von seinen Schutzgruppen. Die Verbindung wird dann mit Hilfe klassischer Reinigungsverfahren, insbesondere durch Chromatographie, gereinigt. Die Cyclisierung des Peptids wird anschließend in Gegenwart von BOP und von DIPEA bewirkt.
Die erfindungsgemäßen Peptide können auch durch Kupplung von selektiv geschützten Peptidfragmenten in Lösung erhalten werden, welche ihrerseits auf fester Phase oder in Lösung hergestellt worden sind. Die allgemeinen Methoden der Peptidsynthese sind beispielsweise von F.M. Finn und K. Hofmann ("The Proteins", 3. Aufl., Band II, (1976), 105-253) beschrieben worden. Die Anwendung von Schutzgruppen und die Ausnutzung ihrer differentiellen Stabilität ist analog den Methoden, die auf fester Phase arbeiten mit Ausnahme der Fixierung der Peptidkette an dem Harz. Die C-terminale Carboxylgruppe wird beispielsweise als Methylester oder durch eine Amidfunktion geschützt. Die Methoden der Aktivierung bei der Kupplung sind ebenfalls analog jenen, die bei der Synthese auf fester Phase angewandt werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen sehr interessante pharmakologische Eigenschaften. Die mit den erfindungsgemäßen Produkten durchgeführten Untersuchungen zeigen, daß sie in wirksamer Weise in vivo der Entwicklung einer stenosierenden Gefäßveränderung vorbeugen können, insbesondere durch eine inhibierende Wirkung auf die Proliferationskomponente der Zellen der glatten Gefäßmuskulatur.
Diese Eigenschaften ermöglichen die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen als Arzneimittel bei der Behandlung und der Vorbeugung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen und insbesondere zur Vorbeugung von Gefäßrestenosen nach der Bypaßbildung, der Gefäßerweiterung, insbesondere der Koronargefäße, oder anderer Formen der Repermeabilisierung der Gefäße und nach einer Herztransplantation.
Die erfindungsgemäßen Produkte können auch nützlich sein zur Vorbeugung und zur Behandlung von Gefäßverznderungen, die mit einer arteriellen Hypertension oder dem Diabetes verknüpft sind und insbesondere von Retina erkrankungen.
Die antiproliferierende Wirkung der Verbindungen kann bei der Behandlung bestimmter Krebse und bestimmter dermatologischer Erkrankungen, wie der Psoriasis, ausgenützt werden.
Die vorliegende Erfindung betrifft daher auch pharmazeutische Zubereitungen, welche mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) oder eines ihrer Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base als Wirkstoff allein oder in Kombination mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen Trägermaterialien oder Bindemitteln enthalten.
Als erfindungsgemäße pharmazeutische Zubereitungen kann man insbesondere jene nennen, die auf oralem, parenteralem und nasalem Wege verabreicht werden können, einfache oder dragierte Tabletten, Sublingualtabletten, Sachets, Päckchen, Gelkapseln, Lutschtabletten, Kompretten, Suppositorien, Cremes, Salben, Hautgele und Aerosole.
Die Dosierung variiert inabhängigkeit von demalter und dem Gewicht despatienten, der Art und der Schwere der Erkrankung sowie dem Verabreichungsweg. Dieser kann oral, nasal, rektal oder parenteral sein. Ganz allgemein erstreckt sich die Dosierung zwischen 0,2 und 100 mg pro Behandlung bei einer oder mehreren Gaben im Verlaufe von 24 Stunden.
Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung, ohne sie jedoch einzuschränken. BEISPIEL 1: (Amidbrücke)
Man behandelt 2 g eines zu 0,5 mMol/g Harz substituierten Amidharzes mit 20 % Piperidin in Dimethylformamid (DMF). Die eigentliche Synthese erfolgt dann nach dem folgenden sich wiederholenden Schema:
Die geschützten Aminosäuren wurden in der folgenden Reihenfolge zugeführt:
Fmoc-Thr(But)-OH, Fmoc-Dbu(Boc)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Lys(Z)-OH,
Fmoc-D-Trp-OH, Fmoc-Tyr(But)-OH, Fmoc-Glu(OBut)-OH, Fmoc-D-Nal-OH.
Die Kupplungen erfolgen durch Auflösen von 4 Äquivalenten der geschützten Aminosäure zusammen mit 4 Äquivalenten HOBt und 4,4 Äquivalenten DCC. Die verwendeten Lösungsmittel sind 30 ml DMF und 10 ml Dichlormethan.
Am Ende der sechs Zyklen, welche der sequentiellen Bindung der acht Aminosäuren entsprechen, wird das Harz mit einer Mischung aus Trifluoressigsäure (18 ml), Ethandithiol (1 ml) und Anisol (1 ml) während 4 Stunden bei 30ºC behandelt. Das Filtrat und die Lösungsmittel für das Waschen des Harzes werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Das erhaltene Produkt der Formel:
wird mit Ether ausgefällt.
Die Cyclisierung des Peptids wird anschließend in Lösung in DMF in Gegenwart von BOP und DIPEA durchgeführt. Man rührt die Mischung während 12 Stunden bei Raumtemperatur. Nach dem Verdampfen des DMF wird das erhaltene Öl über der Säule LH20 gereinigt. Das in dieser Weise erhaltene cyclisierte Produkt:
wird mit 20 % Piperidin in DMF behandelt und dann einer katalytischen Hydrierung in einer Methanol/Wasser-Mischung (3/1) unterzogen. Man erhält das erwartete Produkt nach der Reinigung durch präparative HPLC-Chromatographie auf inverser Phase (Säule C&sub1;&sub8;; d =47 mm, Länge 300 mm) und wird anschließend gefriergetrocknet.
Die Analyse des Peptids erfolgt nach seiner Zersetzung in die Aminosäuren durch Hydrolyse in 6N Chlorwasserstoffsäure während 18 Stunden bei 110ºC und durch quantitativen Bestimmung der Aminosäuren durch HPLC.

Aminosäurezusammensetzung:

Glu Thr Val D-Nal Lys Tyr
Berechnet: 1 1 1 1 1 1
Gefunden: 1,04 0,97 0,97 0,95 1,06 1,02
Dab: nicht bestimmt, D-Trp: nicht bestimmt

Massenspektrum (FAB): MH&spplus;: m/z = 1103

Die folgenden Beispiele wurden ebenso wie Beispiel 1 durchgeführt. BEISPIEL2: BEISPIEL3: BEISPIEL 4: BEISPIEL 5: BEISPIEL 6:

PHARMAKOLOGISCHE UNTERSUCHUNG DER ERFINDUNGSGEMÄSSEN VERBINDUNGEN

BEISPIEL 7: Wirkung auf die durch die Endothelialfreisetzung induzierte myointimale Proliferation

Man behandelt männliche Wistar-Ratten (450-500 g, Charles River) auf subkutanem Wege während der der Freilegung des Endotheliums vorausgehenden 2 Tage mit der Verbindung des Beispiels 1(100 µg/kg/Tag) oder lediglich dem Träger. Man verabreicht die tägliche Dosis auf zwei Portionen. Nach einer Vorbehandlung während 2 Tagen wird die linke gemeinsame Kopfschlagader vom Endothelium befreit, indem man 3-mal hintereinander eine Embolektomiesonde (Fogarty 2F, Baxter) hindurchführt und die Behandlung während 5 Tagen fortsetzt. 14 Tage nach der Freilegung des Endotheliums werden die Ratten mit Pentobarbital betäubt (60 mg/kg i.p.) und man fixiert die Kopfschlagadern unter einem Druck (11996 Pa), bevor sie entnommen werden. Man teilt den zentralen Teil einer jeden Arterie in 4 Segmente auf, die in Paraffin eingebracht werden. Dann bewirkt man transversale nicht auf einanderfolgende Schnitte mit einer Dicke von 5 µm eines jeden Segments und färbt sie mit Orcein. Man bestimmt die Oberflächen der Medien und der Neointima durch Bildanalyse (Rechner Histo, Biocom, Les Ulis). Die Ergebnisse sind Inder folgenden Tabelle zusammengefaßt.
Dauer der Behandlung: -2 bis +5 Tage nach der Läsion (Gesamtdauer: 7 Tage) Die Messung erfolgt 14 Tage nach der Läsion der Rattenkopfschlagader n = Anzahl der Ratten
I/M %: Neointima/Media-Verhältnis

BEISPIEL 8: Wirkung auf die Aufnahme von [³H]-Thymidin

Man behandelt männliche Wistar-Ratten (Charles River, 300 g) auf subkutanem Wege während der 2 Tage, die der Freilegung des Endotheliums vorausgehen, mit der Verbindung von Beispiel 1(100 µg/kg/Tag) oder lediglich dem Träger. Man verabreicht die tägliche Dosis in 2 Portionen. Nach der Vorbehandlung während 2 Tagen wird das Endothelium der Tiere nach der folgenden Methode freigelegt. Nach der Betäubung mit Methohexital (Brietal, 60 mg/kg i.p.) führt man eine Embolektomiesonde (Fogarty 2F, Baxter) über die Kopfschlagader in die Aorta ein. Man bewirkt die Endotheliumfreilegung der Aorta durch drei aufeinanderfolgende Passagen der Ballonsonde. Die Behandlung wird während 3 Tagen fortgesetzt.
Drei Tage nach der Freilegung des Endotheliums werden die Ratten getötet und die Aorta zur Bestimmung der Aufnahme von [³H]-Thymidin entnommen. Man reinigt die Thoraxaorta von den benachbarten Fettgeweben in einer Krebs-Henseleit-Lösung der folgenden Zusammensetzung (in mMol/l): NaCl: 120; KCl: 4,8; CaCl&sub2;: 1,8; KH&sub2;PO&sub4;: 1,4; MgSO&sub4;: 1,2; NaHCO&sub3;: 25: Glucose: 5; und Rinderserumalbumin: 10 g/l; pH: 7,4, Carbogen. Man präinkubiert das Gefäßpräparat dann während 1 Stunde bei 37ºC in einer physiologischen Lösung und überführt sie dann in eine Krebs-Henseleit-Lösung dergleichen Zusammensetzung, die jedoch an [³H]- Thymidin angereichert ist (spezifische Aktivität 1,48-2,22 TBq/mMol) und hält sie dort während 1 Stunde bei 37ºC. anschließend bewirkt man eine 1-stündige Post- Inkubation in einer [³H]-Thymidin-verarmten Krebs-Henseleit-Lösung. Nach dem Waschen mit einem Tris-EDTA-Puffer (Tris: 10 mM; EDTA: 10 mM; NaCl: 100 mM) wird die Aorta bei -20ºC gelagert. Nach dem Auftauen wird das Intima-Media entnommen, zerkleinert und während 30 Minuten in Gegenwart von Pronase (Typ B, Nuclease-frei, 4 mg/ml) und SDS (5 mg/ml) inkubiert. Das Homogenisat wird während 10 Minuten bei 10ºC und bei 2250 g zentrifugiert, worauf die überstehende Flüssigkeit in 2 Fraktionen aufgeteilt wird, nämlich eine zur Bestimmung der [³H]- DNA und die andere zur Bestimmung der gesamten DNA.
Für die Bestimmung der [³H]-DNA wird die DNA durch die Zugabe von 13,3 µl BSA (3 mg/ml Tris-EDTA) und 1 ml 20 %-ige Trichloressigsäure pro ml der überstehenden Flüssigkeit ausgefällt. Nach 30 Minuten bei 4ºC wird der Niederschlag über eine Nitrocellulose-Membran (Porosität: 45 µm) filtriert und man bestimmt die Radioaktivität mit Hilfe eines Flüssigkeitsszintillationsspektrofluorimeters. Die Bestimmung der gesamten DNA erfolgt durch Spektrofluorimetrie unter Verwendung einer DAPI-Fluoreszenzsonde (4',6-Diamidino-2-phenylindol) (100 ng/ml), welches zwischen die Basen A und T der DNA eindringt. Die Anregungswellenlänge beträgt 360 nm und die Emissionswellenlänge 450 nm. Die Konzentration der DNA wird im Vergleich zu einem DNA-Standard bestimmt und anschließend wird die in der Aorta enthaltene DNA sowie das Verhältnis cpm/µg der DNA, welches dem Proliferationsindex entspricht, berechnet.
Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle II aufgeführt:
Dauer der Behandlung: -2 bis +3 Tage nach der Verletzung (Gesamtdauer: 5 Tage) Die Messungen erfolgen 3 Tage nach der Verletzung der Kopfschlagader der Ratte

PHARMAZEUTISCHE ZUBEREITUNG

BEISPIEL 9: Bestandteile für die Herstellung von 1000 Tabletten mit einem Wirkstoffgehalt von 2 mg

Verbindung von Beispiel 1 2 g
Hydroxypropylcellulose 2 g
Getreidestärke 10 g
Lactose 100 g
Magnesiumstearat 3 g
Talkum 3 g

Claims

1. Verbindungen der Formel (I)

in der

- R&sub1; einen Aminosäurerest in der Konfiguration L oder D, der acetyliert oder nicht acetyliert ist,

- R&sub2; einen Aminosäurerest in der Konfiguration L oder D, der eine C-terminale Amidfunktion oder freie Säurefunktion aufweist,

- X&sub1; und X&sub2; ausgewählt sind aus Aminosäureresten, die eine Cyclisierung über eine Amidbindung ermöglichen und in dieser Weise einen Ring mit 22 Atomen ergeben,

- Tyr den L-Tyrosylrest,

- D-Trp den D-Tryptophylrest,

- Lys den L-Lysylrest,

- Val den L-Valylrest

bedeuten,

deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

2. Verbindungen nach Anspruch 1, worin X&sub1; den Rest der L-Glutaminsäure (Glu) und X&sub2; den Rest der L-2,4-Diaminobuttersäure (Dab) bedeuten, deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

3. Verbindungen nach Anspruch 1, worin X&sub1; den Rest der L-Asparaginsäure (Asp) und X&sub2; den Rest von L-Ornithin (Orn) bedeuten, deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

4. Verbindungen nach Anspruch 1, worin X&sub1; den Rest der L-Homoglutaminsäure (homo Glu) und X&sub2; den Rest der L-2,3-Diaminopropionsäure (Dpr) bedeuten, deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additions salze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

5. Verbindungen nach Anspruch 1, worin X&sub1; den Rest der L-2,4-Diaminobuttersäure (Dab) und X&sub2; den Rest der Glutaminsäure (Glu) bedeuten, deren Enantiomere, Diastereolsomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

6. Verbindungen nach Anspruch 1, worin X&sub1; den Rest von L-Ornithin (Orn) und X&sub2; den Rest der L-Asparaginsäure (Asp) bedeuten, deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

7. Verbindungen nach Anspruch 1, worin X&sub1; den Rest der L-2,3-Diaminopropionsäure (Dpr) und X&sub2; den Rest der L-Homoglutaminsäure (homo Glu) bedeuten, deren Enantiomere, Diastereoisomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

8. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich: (Amidbrücke)

deren Enantiomere, Diastereolsomere und Epimere sowie deren Additionssalze mit einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder Base.

9. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es mit einem Automaten durchgeführt wird, der in wiederholter und programmierbarer Weise Schutzgruppenabspaltungs-, Kupplungs- und Wasch-Zyklen durchführt, die zur sequentiellen Einführung von Aminosäuren in die Peptidkette erforderlich sind, wobei die vorzugsweise C-terminale Aminosäure an ein üblicherweise für die Herstellung von Polypeptiden verwendetes Harz gebunden ist, die Auswahl des Harzes die Bindung der gewünschten C-terminalen Funktion ermöglicht, wobei die Aminosäuren im Überschuß in bezug auf den Substitutionsgrad des Harzes und in etwa äquivalenter Menge in bezug auf die Kupplungsmittel eine nach der anderen in von dem Operator bestimmten Reihenfolge zugeführt werden, jeder Synthesezyklus der Einführung einer Aminosäure entspricht und eine Schutzgruppenabspaltung, aufeinanderfolgende Waschungen zur Entfernung der Reagenzien, eine Kupplung mit Aktivierung der Aminosäure und erneute Waschvorgänge umfaßt, wobei jeder dieser Vorgänge von einer Filtration über eine Glasfritte, welche in dem Reaktor, in dem die Synthese durchgeführt wird, angeordnet ist, und dann, wenn die Schutzgruppenabspaltungs-, Kupplungs- und Wasch-Zyklen beendet sind, der Behandlung mit einer starken Säure in Gegenwart von Anisol zur Abtrennung des Peptids von dem Harz und der eventuellen Befreiung des Peptids von seinen Schutzgruppen und anschließend der Cyclisierung des Peptids in Gegenwart von BOP und von DIPEA gefolgt wird, wobei die in diese Weise erhaltenen Verbindungen der Formel (I) mit Hilfe klassischer Reinigungsverfahren gereinigt werden.

10. Pharmazeutische Zubereitungen enthaltend als Wirkstoff mindestens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 allein oder in Kombination mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch annehmbaren Trägermaterialien oder Bindemitteln.

11. Pharmazeutische Zubereitungen nach Anspruch 10, enthaltend mindestens einen Wirkstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 8, welche aufgrund ihrer inhibierenden Wirkung auf die Komponente der Vermehrung von glatten Gefäßmuskelzellen bei der Behandlung und Vorbeugung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen, bei der Vorbeugung von Gefäßrestenosen nach der Bypassbildung, der Gefäßerweiterung und nach der Herztransplantation verwendet werden können und für die Vorbeugung und die Behandlung von Gefäßveränderungen, die mit einer arteriellen Hypertension dem Diabetes verknüpft sind sowie bei der Behandlung von Krebsen und dermatologischen Erkrankungen geeignet sind.