JPH06504795A - 新規アミリン拮抗剤ペプチドおよびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規アミリン拮抗剤ペプチドおよびその使用背景 本出願は、１９９１年８月１４日付けの米国特許出願第０７／７４４．５８６号 「改良低血糖治療剤」の一部継続出願であり、該開示をここに一体化させる。

発明の説明 本発明は、アミリン活性を阻害する化合物を指向する。これらの化合物を、２型 糖尿病および肥満症、インシュリン耐性、耐グルコース能欠損、アミリン過剰反 応、ならびにアミリン活性が有益に減少する他の疾患に用いることができる。

関連技術の説明および本発明の導入 本発明は、アミリン活性を阻害する化合物ならびに２型糖尿病および他の疾病を 指向する。

アミリンは、グルコースのグリコーゲンへの取り込み阻害、骨格筋におけるグリ コーゲン分解促進をはじめとする、生体内および生体外における炭水化物代謝に 著しい影響を及ぼす、新たに発見されたペプチドである。クーパー、ジー・シー ・ニス（Ｃｏｏｐｅｒ、　Ｇ、　Ｃ，Ｓ、　）ら、プロシーディンゲス・オン・ ナショナル・アカデミ−・オン・サイエンス・ニーニスニー（Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ）８５ニア７６３−７７６６　（１９８ ８）参照。アミリン恒常性維持欠損は、インシュリン耐性および２型糖尿病（ク ーパー、ジー・シー・ニス（Ｃｏｏｐｅｒ、Ｇ、　Ｃ，Ｓ、　）ら、バイオキム ・バイオフィズ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、＾Ｃｔａ、）　 １０１４　：　２４７−２５８　（１９８９）参照）のみならず他の代謝異常に よるものと考えられている。

アミリンは３７個のアミノ酸からなり（図１）、骨格筋におけるグリコーゲン合 成に関する生物学的活性を最大限に発揮するには、未修飾の分子内ジスルフィド 結合およびＣ−末端アミドを必要とする。ロバーツ、エイ・エヌ（Ｒｏｂｅｒｔ ｓ、＾。

Ｎ、）ら、プロシーディンゲス・オン・ナショナル・アカデミ−・オン・サイエ ンス−ニーｚスエ−（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ）　８６ 　：　９６６２−９６６６　（１９８９）参照。

発明の概要 本発明は、アミリンおよびアミリン様化合物（後者も「アミリン作用剤」と称す ）の効果を調節する新規化合物を指向する。これらの化合物は、アミリンおよび アミリン作用剤を阻害し、「アミリン阻害剤」または「アミリン拮抗剤」と称す る。

いくつかの分析を行い、アミリン活性を測定し、新たな化合物を評価した。本明 細書記載の受容体結合分析を用いて、アミリン受容体に結合し、それゆえ、アミ リン作用剤および拮抗剤となりつる化合物を、検索、同定できる。ラットのヒラ メ筋分析を、アミリン作用剤および拮抗剤を検索、評価、区別するための２番目 の方法として用いることができる。アミリン拮抗剤は、インシュリン刺激グリコ ーゲン分解の回復を引き起こすアミリン阻害に対抗する。

本発明のアミリン阻害剤を、３つの類型に細分できる。（ｉ）切形ペプチド、（ ｉｉ）構造的に変形したペプチドおよび（ｉｉｉ）自然界に存在するペプチド配 列における１個またはそれ以上のアミノ酸を、異常または非天然型アミノ酸で置 換したペプチドである。

３種の異なるペプチドを、これらの類型の範囲内の化合物の調製に用いた。以後 、これらを、ペプチドＡ、ＢおよびＣと称す。これらのペプチド配列を図２に示 す。

発明の詳細な説明 以下の記載は、アミリン阻害剤からなる本発明の新規化合物を詳細に説明するも のである。これらの化合物を分類し、拮抗剤の類型およびそれらが調製されるペ プチドの類型に従って詳説する。

本発明のアミリン拮抗剤は、ペプチドＡ１ペプチドＢおよび／またはペプチドＣ の修飾ペプチドを包含する（図２参照）。

■、切形ペプチド拮抗剤 切形ペプチドアミリン拮抗剤は、Ｎ−末端欠失ペプチドを包含する。これらの化 合物のアミリン拮抗活性を高めるために、好ましくは、７個のＮ−末端アミノ酸 残基（すなわちアミノ酸１〜７）を欠失させる。より好ましくは、はじめの８個 のＮ−末端アミノ酸を欠失させる。鎖中欠失ペプチド、Ｃ−末端欠失ペプチドお よび欠失の組み合わせを有するペプチドも包含する。これらの切形ペプチドは、 例えば、ペプチドＡ、ＢおよびＣに基づくものであり、出発物質由来のアミノ酸 を除去されている。Ｎ−末端欠失化合物の場合、記載した残基のみの集合体であ る。例えば、ト３フベブチドＡは、Ｃ−末端から３０個のアミノ酸を有する。Ｎ −末端およびＣ−末端欠失ペプチドの例は、′−３５ペプチドＢであり、２８残 基を有し、ペプチドＢと比べて、Ｃ−末端において２個、Ｎ−末端において７個 の残基が少ない。「鎖中欠失」に分類されるペプチドは、参照すべきペプチドに ついて用いる番号づけシステムを用いて記載した残基を有する。該命名法は、欠 失している部分をコンマで表してペプチド配列を表す。１ないし７および２４な いし２９番目の残基を欠失したペプチドについては、８−２３・３＠−３７ペプ チドと命名する。

このペプチドは、Ｎ−末端の８番目の残基から始まり、２３番目までの直線的に 並んだ残基、ならびに２４および２９番目の間の残基を欠失し、Ｃ−末端の３７ 番目の残基までを有する。

ペプチドＡに基づくＮ−末端欠失化合物からなるアミリン拮抗剤の類型は、ト３ ７ペプチドＡ１および、Ｈ−１７ペプチドＡに至るまでの、その１連のＮ−末端 アミノ酸欠損ペプチドを包含する。かかるペプチドにおいて、＠ＡｌａをＶａｌ あるいはＬｅｕまたはＮｌｅのごとき他の疎水性残基で置換してもよい。”Ａｒ ｇをＨｉｓ、ＬｙｓまたはＰｈｅ残基で置換してもよい。”ＳｅｔをＴｈｒをは じめとする水酸基のある側鎖を有する残基で置換してもよい。”ＬｅｕをＰｈｅ 。

１−ナフチルアラニン（１−Ｎａｌ）または２−ナフチルアラニン（２−Ｎａｌ ）のごとき別の疎水性残基で置換してもよい。”ＶａｌをＩｌｅあるいはＬｅｕ 。

Ａｌａ、およびＮｌｅのごとき他の疎水性残基で置換してもよい。”ＬｅｕをＴ ｙｒまたはＮａｌで置換してもよい。”ＰｒｏをＡｒｇまたはＬｙｓで置換して もよい。”ＡｓｎをＬｙｓまたはＡｒｇで置換してもよい。

同系列のアミリン拮抗剤が、ペプチドＢに基づいていてもよく、５−３７ペプチ ドＢ、および２１３フベブチドＢに至るまでのＮ−末端アミノ酸を連続欠損した ペプチドを包含する。かかるペプチドにおいて、”ＡｓｎをＡｌ　ａ、ＡｓｐＳ ＧｌｎまたはＧｌｕで置換してもよい。

Ｎ−末端切形アミリン拮抗剤がペプチドＣに由来してもよく、８−３２ペプチド Ｃ１および２４−３２ペプチドＣに至るまでのＮ−末端アミノ酸を連続欠損した ペプチド包含してもよい。かかるペプチドにおいて、”ＡｓｎをＡｌａ、Ａｓｐ ＳＧｉｎまたはＧｌｕで置換してもよい。”ＴｈｒをＶａｌで置換してもよい。

”ＳｅｔをＡｌａまたはＧｌｙで置換してもよい。５ＯＧｌｙをＰｈｅ％Ａｓｎ ５Ｌｙｓ。

ＡｒｇまたはＡｌａで置換してもよい。

ペプチドＡｌａに基づくＣ−末端欠失アミリン拮抗剤あるいはＮ−末端切形ペプ チドＡ化合物が、トコ６ペプチドＡおよびａ−１＠ペプチドＡに至るまでの一連 のＣ−末端アミノ酸欠失を有していてもよい。

ペプチドＢ由来の一連のＣ−末端切形ペプチドあるいはＮ−末端欠失ペプチドＢ 化合物が、トコ６ペプチドＢおよびト！９ペプチドＢに至るまでの一連のＣ−末 端アミノ酸欠失を有していてもよい。

拮抗剤であり、ペプチドＣに基づくＣ−末端切形ペプチドあるいはＮ−末端欠失 ペプチドＣ化合物は、８°３ＩペプチドＣおよび＠−２！ペプチドＣに至るまで の一連のＣ−末端アミノ酸欠失を含んでいてもよい。

Ｃ−末端アミノ酸をより多（欠失しているよりもむしろ、その欠失が少ないほう が好ましい。従って、５−ｓｓペプチドＡは、８−ｔｈ９ペプチドＡよりも好ま しい。

ペプチドＡのＮ−末端欠失断片の基づく鎖中欠失ペプチド拮抗剤は、１９〜２９ 番目の残基間の欠失を有するペプチドを包含する。これは、ペプチドＡの２０〜 ３７番目の残基にペプチド結合を介してペプチドＡの８〜１８番目の残基が結合 したａ−ｕ＋　２０−３？ペプチドＡを含む。２０〜２９番目の残基のの領域の さらなる鎖内残基を連続的に除去し、この族の最も小さいペプチドであるト１８ ・５ｏ−ｓｔペプチドＡをはじめとする、対応する鎖内欠失ペプチドを生じさせ てもよい。同様に、この族は、ト！８・３ト３フペプチドＡおよびト１＠・３０ ４ＴペプチドＡをはじめとする他の鎖内欠失ペプチドを生じる、２８〜１９番目 の残基の領域中のさらなる鎖内残基を欠失させたものを含む。実施例は、８−２ ３・３ト３７ペプチドＡを包含する。

ペプチドＢのＮ−末端欠失断片に基づく鎖内欠失ペプチドからなる一連の拮抗剤 は、ト１１＋　２０−３？ペプチドＢおよびａ−１８＋　３１１−ＦＴペプチド Ｂを含む、この領域における一連のＮ−末端欠失を有するペプチドを包含する。

同様に、この族は、１ｔｌａ・３ト３フペプチドＢおよびト１９・３ト３７ペプ チドＢを含む一連の鎖内欠失を有するペプチドを包含する。

ペプチドＣのＮ−末端欠失断片に基づくこの族の拮抗剤は、１９〜２４番目の残 基を欠失および／または含有するペプチドを包含する。このものは、８−！３・ ２ト３２ペプチドＣおよびａ−１８・３ト３２ペプチドＣをはじめとする一連の 鎖内欠失ペプチドを包含する。ト１８・ｇｏ−ｓｚペプチドＣ１およびト１８・ ２４−１１ペプチドＣをはじめとする、Ｃ−末端（鎖内）欠失を有するペプチド も包含される。

鎖内欠失ペプチド拮抗剤に関しては、鎖内アミノ酸欠失が多いものよりもむしろ 小さいものの方が好ましい。

欠失の組み合わさったペプチドアミリン拮抗剤は、ペプチドのＮ−末端部分の８ 〜１０番目の残基およびＣ−末端の３０〜３７番目の残基を欠失したペプチドを 包含する。例えば、このものは、ト！６ペプチドＡおよびト！９ペプチドＡに至 る一連のＣ−末端欠失を有するペプチド、１ト３・ペプチドＡおよび！６−Ｈペ プチドＡに至る一連のＣ−末端欠失を有するペプチド、ｘトコ６ペプチドＡおよ び１１−２８ペプチドＡに至る一連のＣ−末端欠失を有するペプチドを包含する 。

ペプチドＢに基づくこの族の拮抗剤は、分子のＮ−末端部分の８〜１０番目の残 基およびＣ−末端の３０〜３７０〜３７番目欠失したペプチドを包含する。

十３６ペプチドＢおよびト２・ペプチドＢに至る一連のＣ−末端欠失を有するペ プチドのみならず、１０−１６ペプチドＢおよびおよびｌ　１−３１ペプチドで Ｂはじまる同様のペプチドも包含する。

ペプチドＣ由来のこれらの拮抗剤は、Ｎ−末端の８〜１０番目の残基およびＣ− 末端の２５〜３２５〜３２番目欠失したペプチドを包含する。特に、このものは 、ト３１ペプチドＣおよびト２４ペプチドＣに至る一連のＣ−末端欠失を有する ペプチドのみならず、１０−ＨペプチドＣおよびｌ　１−３１ペプチドＣからは じまる同様のペプチドも包含する。

上記のごとく、Ｃ−末端アミノ酸の欠失が多いよりもむしろ少ないほうが好まし い。

Ｉｌ、構造的に変形したペプチド Ａ、ヘリックスの安定化 この類型の化合物は、共有結合または非共有結合により、構造的に変形したペプ チドを包含する。変形したペプチドアミリン拮抗剤は、アミノ酸置換のみ、また は例えば、ペプチドＡ、ＢおよびＣの８〜２４番目の残基の領域に相当する領域 中の、ヘリックスにとって好ましい共有結合と組み合わさったアミノ酸置換を有 する。この族のペプチドは、上記Ｎ−末端、Ｃ−末端または鎖内欠失ペプチド、 あるいはこの範躊の何等かの構造的変形ペプチドのみならず、異常もしくは非天 然型アミノ酸を有する、以下に記載のペプチドをはじめとする、本明細書記載の いずれかの化合物に基づくペプチドを包含する。

塩橋を形成し、よってヘリックスを安定化しうるアミノ酸置換体は、ペプチドＡ 、ＢまたはＣに基づ（ペプチドの８〜２４番目の領域内に、ＧｌｕまたはＡｓｐ のごときカルボキシル側鎖をもつ残基を、「ｉ」と命名した位置に、そして、Ｌ ｙｓ、Ａｒｇまたはオルニチンのごとき、正に帯電した側鎖をもつ残基を、１＋ ３またはｉ＋４の位置に有する。このものは、例えば、以下のペプチドを包含す る。ＩＢＧｌ　ｕｌａＬｙｓトｓフペプチドＡ、　”Ａ　ｓ　ｐ”Ｏｒ　ｎ’− ”フペプチドＡ１１８Ｑｌ　ｕＩＩＬｙＳＩ−３？ペプチドＡ、ｌｌＧ１　ｕＩ ＩＩ、ｙｓ８４ｆｆペプチドＢ、１ｓＡｓｐ１１Ｑ　ｒｎｇ−＄７ペプチドＢに Ｍ　Ｑ　ｌ　ｕ　Ｉ　ａ　Ｌ　ｙ　３５−ｓｙペプチドＢｓ　”Ｇｌｕ”Ｌｙｓ ト３！ペプチドＣ，”Ａｓｐ”Ｏｒｎ””ペプチドＣ，”Ｇ　Ｉ　ｕ’曾Ｌ　ｙ 　ｓ　ａ−１！ペプチドＣのみならず、上記各ペプチドの８番目の残基を欠失し たものである。

これらのアミリン拮抗剤は、両親媒性ヘリックス形成にとり好ましいアミノ酸置 換を有する。以下の置換を、単一または組み合わせのいずれかにより、ペプチド Ａ、ＢまたはＣの構造について行ってもよい。残基８はＬｅｕまたはＡｌａであ ってよく、残基１０はＧｌｎ、残基１１はＧｉｎ、ＬｙｓまたはＡｒｇであって よく、残基１２はＴｒｐであってよく、残基１３はＧｉｎ、残基１４はＬｙｓで あってよく、残基１５はＬｅｕ、Ｐｈｅ、ＡｓｎまたはＧｌｎであってよく、残 基１７はＧｉｎ、ＶａｌまたはＨｉｓであってよく、残基１８はＡｒｇ、Ｈｉｓ ＳＬｙｓまたはＰｈｅであってよ（、残基２２はＬｅｕであってよい。

切形ペプチド類のペプチドは、ヘリックス安定化のために共有結合を有していて もよい。以下の残基置換を用いて、これらの拮抗剤ペプチドを変形させてもよい 。ある位置のＡｓｐまたはＧ　１　ｕ−、および別の位置のＬｙｓまたはオルニ チン。

これらの残基を濃縮し、アミド結合を形成させる。別法として、残基対としてＣ ｙｓ残基を用い、酸化させて分子内ジスルフィド結合を形成させる。特に、この 族は、ペプチドＡ％ＢまたはＣの８〜２４番目の領域の、ｉおよびｉ＋４番目に 架橋を有するペプチドを包含する。

Ｂ、形態的安定化 構造的に変形した範噂のペプチドはまた、ペプチドＡ、ＢまたはＣのみ、あるい は切形ペプチド類もしくはこの範躊のペプチドのいずれかの部分において、２個 のアミノ酸の側鎖間の共有結合を有するペプチドを包含する。変形のみにより、 あるいは該ペプチドの形態の安定化と組み合わせて、アミリン受容体に対する結 合を強めてもよい。例えば、際立った変形は、３１または３２番目の残基に共有 結合した１５または１６番目の残基からなる。以下の残置換対を用いて、この結 合を容品ならしめてもよい。ある位置のＡｓｐまたはＧｌｕ、および別の位置の Ｌｙｓまたはオルニチン。これらの残基を濃縮し、アミド結合を形成させる。

別法として、スルフヒドリル基含有残基を、上記残基位置における残基対として 用い、酸化させて分子内ジスルフィド結合を形成させてもよい。いずれかの組み 合わせに用いることのできる残基は、Ｌ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｌ−ペニシラミ ンおよびＤ−ペニシラミンを包含する。Ｎ−末端側の位置に用いることのできる ジスルフィド結合に参加する残基は、β−メルカプトプロピオン酸である。以下 のペプチドは、この族を包含する。〔シクロ１５・ＩＩｌ　１５［、ｙＢ２Ｊ　 ５　ｐｇ−″７ペプチドＢおよび１６＋　３１ｃｙｓ８−３７ベブチドＢの環状 物、［シフ０１１１−２６コＩ　６　Ｌ　ｙ　５２６Ａｓｐ１３！ペプチドＣな らびに＋５・２）（ｙｓＩＩ−１２ペプチドＣの環状物。

ＩＩｌ、異常または非天然型アミノ酸置換上記およびここに記載のペプチドを、 異常アミノ酸残基を有するように調製または修飾し、生じたペプチドが、結合能 力を増加させ、および／または酵素的分解に対する耐性を増加させるようにして もよい。その結果、高活性かつ活性寿命の長いアミリン拮抗剤が提供される。

例えば、ペプチド中のＬｙｓおよび／またはＡｒｇ残基を、（Ｄ）−Ｌｙｓおよ び／または（Ｄ）−Ａｒｇあるいは他の塩基性アミノ酸もしくは塩基性でない残 基と置換し、血漿中でのより高い安定性を付与してもよい。上記ペプチド配列の 生物学的活性のあるアナログもまた、本発明の範囲内であり、１個またはそれ以 上の部位において、個々のアミノ酸の立体構造を（Ｌ）／Ｓから（Ｄ）／Ｒに変 換してもよい。

Ａｓｎ、Ｓｅｒおよび／またはＴｈｒ残基の糖付加あるいはＣ−α−メチル−ア ミノ酸およびＮ−α−メチルアミノ酸のごとき立体的に変形したアミノ酸により アナログ的に修飾したものも、この範躊に属する。

アミリンの拮抗剤アナログは、ペプチド的性質が少ないが、本発明の範囲内であ る。かかるペプチド模倣物は、例えば、−Ｃｏ−ＮＨ−アミド結合に関して、次 に挙げる１個またはそれ以上の置換を有していてもよい。デブシペプチド（−Ｃ ｏ−０−）　、イミノエチレン（−ＣＨｔ−ＮＨ−）　、）ランス−アルケン（ −ＣＨ＝ＣＨ−）　、β−エナミノニトリル（−Ｃ（＝ＣＨ−ＣＮ）−ＮＨ−） 、チオアミド（−Ｃ８−ＮＨ−）　、チオメチレン（−３−ＣＨ，−または−Ｃ Ｈ，−８−）、ジメチレン（−ＣＨｔ−ＣＨ２−）　、ケトメチレン（ＣＯＣＨ ｔ）　、Ｎ−メチルペプチド（ＣＯＮ　（ＣＨｓ））およびレトロ−アミド（− ＮＨ−Ｃｏ−）。

天然型または非天然型アミノ酸をペプチド配列中に挿入することによりアナログ 的に修飾したものも、この範喝に属する。例えば、アミノカプロン酸（Ａｃａ） のごときアミノ酸のアルキル鎖を配列中に有するペプチドはこの範噂に属する。

上記ペプチドに基づ（生物学的に活性のあるアミリン拮抗剤は、都合よ（出発物 質の疎水性を上昇させたペプチドおよび／または出発化合物の立体配置を変化さ せたペプチドに包含される。１個または組み合わせて、次に挙げる異常または非 天然型アミノ酸置換を用いてもよい。β−アラニン、３，４−デヒドロプロリン 、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、Ｌ−３（２°−ナフチル）−アラニン、 Ｄ−３−（２’−ナフチル）−アラニン、シクロへキシルアラニン、１−アミノ ルシクロペンタンカルボン酸、サルコシン、β−チェニル−Ｌ−アラニン、β− チェニルーＤ−アラニン、Ｄ−３−（３−ピリジル）−アラニン、アミノオクタ ン酸、アミノカプロン酸、７−アミノへブタン酸、アミノバレリン酸、Ｓ−アセ トアミドメチル−〇−システィン、Ｓ−アセトアミドメチル−Ｌ−システィン、 ｔ−ブチル−Ｄ−システィン、ｔ−ブチル−し−システィン、Ｓ−エチル−Ｄ− システイン、Ｓ−エチル−Ｌ−システィン、Ｌ−アスパラギン酸（ベーターベン ジルエステル）、Ｄ−アスパラギン酸（ベーターベンジルエステル）、Ｌ−グル タミン酸（ガンマ−ベンジルエステル）、Ｄ−グルタミン酸（ガンマ−ベンジル エステル）、Ｎ−イプシロン−２（２−クロロ−ＣＢＺ）−Ｌ−リジン、Ｎ−イ プシロン−２（２−クロロ−ＣＢＺ）−Ｄ−リジン、Ｎ−イプシロン−２（ＣＢ Ｚ）−Ｌ−リジン、Ｎ−イブノロンー２　（ＣＢＺ）−Ｄ−リジン、ｐ−クロロ −Ｄ−フェニルアラニン、ｐ−クロロ−し−フェニルアラニン、Ｌ−セリン（Ｏ Ｂｚｌ）、Ｄ−セリン（ＯＢｚ　］）　、］Ｄ−スレオニンＯＢｚ　１）　、Ｌ −スレオニン（ＯＢｚ　ｌ）　、Ｏ−（２，６−ジクｏｏベンジル）−Ｌ−チロ シン、０−１−ブチル−し−チロシン、０−ｔ−ブチル−Ｄ−チロシン。

ペプチドＡ、ＢまたはＣに基づく化合物の一般的置換本発明化合物は、以下の一 般的置換を有していてもよい。本発明のペプチドは、上記の個々の範−または族 に由来する化合物を包含し、他の化合物に関連した置換を包含し、それらの範鴫 または族のみならず、他の範晴または族のペプチドに関して記載した置換の範囲 内である。この範−の化合物の命名法を用いて、いずれの基本ペプチド配列に基 づいた配列および修飾の双方を有するペプチドも表示する。肩数字の後ろのアミ ノ酸は、そのアミノ酸が、基本的なアミノ酸配列における肩数字の位置にあるア ミノ酸に置き換わったものであることを示す。例えば、ｒ”Ａｓｐ”Ｖａｌ”Ａ ｌａ−ペプチドＣ」は、ペプチドＣに基づくペプチドであって、以下の置換を有 するペプチドを表す。２６番目でＡｓｎがＡｓｐに置き換わり、２７番目でＴｈ ｒがＶａｌに置き換わり、そして２９番目でＳｅｒがＡｌａに置き換わっってい る。

Ａ、Ｎ−末端またはＣ−末端における置換ここに記載した化合物のＮ−末端が、 Ｎ−末端アミノ基の１個の水素に置き換わったＸ基を有していてもよい。ここで 、Ｘを、低級（Ｃ＋〜Ｃ，）アルキル、低級（Ｃ，〜Ｃｓ）アルキル置換アリー ル、低級（Ｃ，−Ｃａ）アシル、低級（Ｃ，〜Ｃｍ）アシル置換アリール、アロ イル、ヘテロアロイル、シクロアルキル、低級（Ｃ，〜Ｃ，）アルキル置換シク ロアルキル、シクロアシル、Ｈ−Ｔｙｒ１アセチル、Ｈ−Ｌ−Ｎａｌ、Ｈ−Ｄ− Ｎａｌ、シクロヘキサンペンタン酸、シクロヘキサンプロピオン酸（Ｃｈｐ）、 ミリスチン酸、アダマンタンカルボン酸、アダマンタン酢酸、アダマンチルアラ ニン、アルキル−カルバモイルまたは遊離アルファーアミン（Ｈ）から選択する 。Ｘがアセチルである本発明化合物が好ましい。

ここに記載の化合物のＣ−末端基（ＣＯ−Ｚ）において、Ｚを、ヒドロキシル、 アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、シクロアルキル アミ人アラルキルアミノ、アルコキシ、シクロアルコキシ、アリールオキシ、ア ラルコキシまたはへテロアリールオキシから選択する。Ｚがアミノである本発明 化合物が好ましい。

Ｂ、ペプチドＡに対する特異的アミノ酸置換ペプチドＡに対して、以下の置換を 行ってもよい（図２参照）。

残基８：ＡＩａをＶａｌまたはＭｅｔで置換してもよい。残基９：ＴｈｒをＬｅ ｕで置換してもよい。残基１０：ＧＩｎをＨｉｓＳＧｌｙまたはＴｈｒで置換し てもよい。残基ｉ１：ＡｒｇをＬｙｓまたはＴｈｒで置換してもよい。残基１２ ：ＬｅｕをＴｙｒで置換してもよい。残基１３：ＡｌａをＴｈｒまたはＳｅｒで 置換してもよい。残基１４　：ＡｓｎをＧｌｙ、Ａｓｐ、またはＧｉｎで置換し てもよい。残基１５：ＰｈｅをＬｅｕＳＧｌｕまたはＡｓｐで置換してもよい。

残基１６：ＬｅｕをＰｈｅで置換してもよい。残基１７：ＶａｌをＩｌｅ、Ｓｅ ｒ、ＡｓｎまたはＨｉｓで置換してもよい。残基１８　：ＡｒｇをＨｉｓまたは Ｌｙｓで置換してもよい。残基１９　：　Ｓｅ　ｒをＴｈｒ、ＰｈｅまたはＬｅ ｕで置換してもよい。残基２０　：ＡｓｎをＧｌで置換してもよい。残基２１： ＡｓｎをＨｉｓまたはＧｌｙで置換してもよい。残基２２＋ＡｓｎをＶａｌまた はＭｅｔで置換してもよい。残基２３　：　ＬｅｕをＰｈｅ、Ｖａ　］またはＧ Ｉｙで置換してもよい。残基２４：ＧｌｙをＡｓｎまたはＬｙｓで置換してもよ い。残基２５：ＰｒＯをＡｌａ、Ａｓｎ、ＳｅｒまたはＡｓｐで置換してもよい 。残基２６：ＶａｌをＡｌａ、ＩｌｅまたはＡｓｎで置換してもよい。残基２７ ：ＬｅｕをＰｈｅで置換してもよい。残基２８：ＰｒｏをＳｅｒ、Ｌｅｕまたは Ｖａｌで置換してもよい。残基２９　：　ＰｒｏをＧｉｎ、５ｅｒＳＬｙｓまた はＡｒｇで置換してもよい。残基３１　：ＡｓｎをＡｓｐ、ＡｌａまたはＳｅｔ で置換してもよい。残基３２：ＶａｌをＴｈｒまたはＩｃｅで置換してもよい。

残基３３：ＧｌｙをＡｓｎで置換してもよい。残基３４：ＳｅｒをＡｌａまたは Ｖａｌで置換してもよい。

残基３５：ＡｓｎをＬｙｓ、ＡｒｇＳＧｌｕまたはＧｌｙで置換してもよい。残 基３６：ＴｈｒをＡｈａで置換してもよい。残基３７：ＴｙｒをＰｈｅ、Ｐｒ。

またはヒドロキシプロリンで置換してもよい。

Ｃ，ペプチドＢに対する特異的アミノ酸置換ペプチドＢに対して、以下の置換を 行ってもよい（図２参照）。

残基８：ＶａｌをＡｌａまたはＭｅｔで置換してもよい。残基９：ＴｈｒをＬｅ ｕで置換してもよい。残基ＩＱ：ＨｉｓをＧｌｎ、ＧｌｙまたはＴｈｒで置換し てもよい。残基１１：ＡｒｇをＬｙｓまたはＴｈｒで置換してもよい。残基１２ ：Ｌ、ｅｕをＴｙｒで置換してもよい。残基１３：ＡｌａをＴｈｒまたはＳｅｒ で置換してもよい。残基１４：ＧｌｙをＡｓｎまたはＧｌｎで置換してもよい。

残基１５：ＬｅｕをＰｈｅＳＧｌｕまたはＡｓｐで置換してもよい。残基１６： ＬｅｕをＰｈｅで置換してもよい。残基１７：Ｓｅｒを１ｉｅＳＶａｌ、Ａｓｎ またはＨｉｓで置換してもよい。残基１８　：ＡｒｇをＨｉｓまたはＬｙｓで置 換してもよい。残基１９：ＳｅｒをＴｈｒ、ＰｈｅまたはＬｅｕで置換してもよ い。

残基２０：ＧＩｙをＳｅｒまたはＡｓｎで置換してもよい。残基２１：Ｇｌｙを ＡｓｎまたはＨｉｓで置換してもよい。残基２２：Ｖａ１をＡｓｎまたはＭｅｔ で置換してもよい。残基２３：ＶａｌをＰｈｅｌＬｅｕまたはＧｌｙで置換して もよい。残基２４＋ＬｙｓをＡｓｎまたはＧｌｙで置換してもよい。残基２５・ ＡｓｎをＡｌａＳＰｒｏ、ＳｅｒまたはＡｓｐで置換してもよい。残基２６：Ａ ｓｎをＡｌａ、ｌｉｅまたはＶａｌで置換してもよい。残基２７：ＰｈｅをＬｅ Ｕで置換してもよい。残基２８：ｖａｌを５ｅｒＳＬｅｕまたはＰｒｏで置換し てもよい。残基２９：ＰｒｏをＧｉｎ、ＳｅｒまたはＡｒｇで置換してもよい。

残基３１　：ＡｓｎをＡｓｐＳＡｌａまたはＳｅｔで置換してもよい。残基３２ ：ＶａｌをＴｈｒまたはＩｌｅで置換してもよい。残基３３：ＧＩｙをＡｓｎで 置換してもよい。残基３４：Ｓｅｒ＠ＡｌａまたはＶａｌで置換してもよい。残 基３５：ＬｙｓをＡｓｎ、ＧｌｕまたはＧｌｙで置換してもよい。残基３６：Ａ ｌａをＴｈｒで置換してもよい。残基３７：ＰｈｅをＴｙｒＳＰｒｏまたはヒド ロキシプロリンで置換してもよい。

ＤペプチドＣに対する特異的アミノ酸置換ペプチドＣに対して、以下の置換を行 ってもよい（図２参照）。

残基８：ＶａｌをＡｌａまたはＭｅｔで置換してもよい。残基９：ＬｅｕをＴｈ ｒで置換してもよい。残基１０：ＧＩｙをＨｉｓ、ＧｉｎまたはＴｈｒで置換し てもよい。残基１１：ＬｙｓをＬｙｓ、ＡｒｇまたはＴｈｒで置換してもよい。

残基１２：ＬｅｕをＴｙｒで置換してもよい。残基１３：５ｅｒｔｃＡ１ａまた はＴｈｒで置換してもよい。残基１４：ＧＩｎをＡｓｎ、ＧｌｙまたはＡｓｐで 置換してもよい。残基１５：ＧＩｕをＡｓｐＳＬｅｕ、ＡｌａまたはＰｈｅで置 換してもよい。残基１６　：　ＬｅｕをＰｈｅで置換してもよい。残基１７：Ｈ ｉｓをＩ　Ｉｅ、Ｓｅｒ、ＡｓｎまたはＶａｌで置換してもよい。残基１８：Ｌ ｙｓをＨｉｓまたはＡｒｇで置換してもよい。残基１９：ＬｅｕをＴｈｒ、Ｓｅ ｒまたはＰｈｅで置換してもよい。残基２０：ＧｌｎをＨｉｓで置換してもよい 。残基２２：ＴｙｒをＰｈｅで置換してもよい。残基２４：ＡｒｇをＬｙｓ、Ｓ ｅｒ、ホモ−Ａｒｇ、０ｒｎＳＧｉｎまたはＰｒｏで置換してもよい。残基２６ 　：ＡｓｎをＡｓｐ、Ａｓｎ５ＡｌａまたはＳｅｔで置換してもよい。残基２７ ：ＴｈｒをＶａｌまたはＩｌｅで置換してもよい。残基２９：ＳｅｒをＡｌａま たはＶａｌで置換してもよい。残基３０：ＧｌｙをＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕまた はＡｓｎで置換してもよい。残基３１：ＴｈｒをＡｌａで置換してもよい。残基 ３２：ＰｒＯをＰｈｅ、Ｔｙｒまたはヒドロキシプロリンで置換してもよい。残 基１９．２０および２１をアミノカプロン酸で置換してもよい。

好ましい拮抗化合物 アミリン阻害活性を有する化合物の好ましい一群は、ペプチドＣに基づ＜Ｎ−末 端欠失を含んでいる。これらの化合物は、都合よくＮ−末端の１〜７または１〜 ８番目のアミノ酸欠失を有している。発明者は、これらのペプチド由来のこれら のアミノ酸の欠失が、都合よくアミリン作用剤活性を減少させることを見いだし ている。所望により、これらの化合物が、都合よ（アミリン阻害能力を上昇させ るアミノ酸配列中における、ある位置でのあるアミノ酸置換を有していてもよい 。

これらのＮ−末端欠失ペプチドは、８−３訟ブチドＣ１および２４−３２ペプチ ドＣを含むその連続したＮ−末端アミノ酸欠失を含んでいる。これらのペプチド が、１個またはそれ以上の、次に挙げるアミノ酸置換を有していてもよい。”Ａ ｓｎ残基を、ＡｌａＳＡｓｐｌＧＩｎまたはＧｌｕで置換してもよい。２７Ｔｈ ｒ残基をＶａｌで置換してもよい。”Ｓｅｒ残基をＡｈａまたはＧｌｙで置換し てもよい。！＋１Ｑｌｙ残基をＡｓｎ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＡｌａで置換して もよい。

”Ｐｒｏ残基をＴｙｒ、Ｐｈｅまたはヒドロキシプロリンで置換してもよい。所 望により、これらのＮ−末端欠失が、アセチル化したＮ−末端アミノ酸を有して いてもよい。

これらの一群の化合物は、８−３２ペプチドＣまたは９−３２ペプチドＣに基づ くペプチドを包含する。これらの化合物が、上記アミノ酸置換を有していてもよ い。好ましいアミノ酸置換は、残基１１および１８のＬｙｓのＡｒｇへの置換、 残基１５のＧｌｕのＬｅｕへの置換、残基３０のＧｌｙのＡｓｎへの置換および 残基３２のＰｒｏのＴｙｒまたはヒドロキシプロリンへの置換である。１の好ま しい態様によれば、これらの化合物を、Ｎ−末端においてアシル化（特に、アセ チル基で）する。

これらの化合物の２番目の群は、約９〜１１個のアミノ酸残基を有するペプチド を包含する。これらのアミリン拮抗化合物の特に好ましい群は、１２−３訟ブチ ドＣに基づく。所望により、これらの化合物が、該アミノ酸配列中のある位置に 、あるアミノ酸置換を有していてもよい。これらのアミノ酸置換は、以下のごと くである。残基２２のＴｙｒの非天然型アミノ酸Ｄ−またはＬ−ナフチルアラニ ンへの置換、残基２６のＡｓｎのＤ−またはＬ−Ａｓｐへの置換、残基２７のＴ ｈｒのｖａｌへの置換、残基３０のＧｌｙのＡｓｎ５Ｐｈｅ、ＬｙｓまたはＡｒ ｇのいずれかへの置換および残基３２のＰｒｏのＴｙｒまたはヒドロキシプロリ ンへの置換。アミリン拮抗化合物の別の好ましい群は　２４−３２ペプチドＣに 基づき、図２に示したアミノ酸配列に対する上記アミノ酸置換のいずれかまたは すべてを含む。

他の上記アミノ酸置換の他の順列および／または組み合わせは、本発明の範囲内 に包含される。

拮抗活性 これらのアミリン拮抗剤の活性を、ここに記載したある種の生物学的分析を用い て評価してもよい。受容体結合分析により、アミリン作用剤および拮抗剤双方の 可能性を分析できる。一方、骨格筋分析により、アミリン作用剤および拮抗剤を 区別する。

好ましくは、これらの拮抗化合物が、受容体結合分析において、約１〜５ｎＭ、 好ましくは約１ｎＭ、より好ましくは約５０ｐＭ以下のオーダーで、活性を示す ものとする。骨格筋分析において、これらの化合物が、好ましくは、約１〜２マ イクロモラーのオーダーで、ｒｃｓ、値を示すものとする。

受容体結合分析が、１９９１年３月１５日付けの米国特許出願第６７０．２３１ 号に記載されており、その開示をここに一体化させる。受容体結合分析は、膜結 合アミリン受容体に対する化合物の特異的吸着能を測定する競争的分析である。

該分析に用いる好ましい膜調製物は、中核および周辺部由来の膜からなる底部前 脳である。分析すべき化合物は、！２５１標識ポルトン・ハンター（Ｂｏｌｔｏ ｎ　Ｈｕｎｔｅｒ）・ラットのアミリンに関して、これらの受容体調製物と競争 的に結合する。結合量（Ｂ）を、リガンド濃度の対数の関数としてプロットして 得られる競争特性を、４−パラメーター論理学的等式に対する非線形回帰分析（ インプロット・ログラム（Ｉｎｐｌｏｔ　ｐｒｏｇｒａｍ）　；グラフパッド・ ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰＡＤ　ｓｏｆｔｗａｒｅ）、カリフォルニア州サン ・ジェゴまたはドウリーン（ＤｅＬｅａｎ）らのオールフィツト・ログラム（＾ ＬＬＦ丁Ｔ　ｐｒｏｇｒａｍ）　（オールフィ・ソト・バージョン２．７）、エ ヌ・アイ・エイチ、メリーランド州ベセスダ２０８９２　（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅ ｓｄａ、　ＭＤ　２０８９２）　）を用いて分析する。チンサン。ピー・ニー（ Ｎｕｎｓｕｎ、　Ｐ、　Ｕ、　）およびロドバード。

ディー　（Ｒｏｄｂａｒｄ、　Ｄ、　）アナリティカル・バイオケミストリー（ Ａｎａｌ。Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）１０７：２２０−２３９　（１９８０）参照。

骨格筋中のアミリン調製物の生物学的活性の分析を、以前記載された方法（レイ トン、ビー（Ｌｅｉｇｈｔｏｎ、　Ｂ、　）およびクーパー、ジー・シー・ニス （Ｃｏｏｐｅｒ、　Ｇ、　Ｃ。

Ｓ、）（１９８８年）ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）　３３５　：　６３２−６ ３５　；クーパー。

ジー・シー・ニス（Ｃｏｏｐｅｒ、　Ｇ、　Ｃ，Ｓ、　）　、レイトン、ビー（ Ｌｅｉｇｈｔｏｎ、　Ｂ、　）ディミド　−リアディス、ジー・ディー　（Ｄｉ ｍｉｔｒｉａｄｉｓ、　Ｇ、　Ｄ、　）　、バリー−ビリンゲス、エム（Ｐａｒ ｒｙ−Ｂｉｌｌｉｎｇｓ、　Ｍ、　）　、コワルチュク、ジェイ・エム（Ｋｏｖ ａｌｃｈｕｋ、　Ｊ、　Ｍ、　）　、ハウランド、ケイ（Ｈｏｗｌａｎｄ、に、 ）　、ｏスバード、ジエイ・ビー（Ｒｏｔｈｂａｒｄ、　Ｊ、　Ｂ、　）、クイ リス。エイ・シー（Ｗｉｌｌｉｓ、　Ａ、　Ｃ，）およびレイド、ケイ・ビー・ エム（Ｒｅｉｄ。

Ｋ、Ｂ、Ｍ、）（１９８８年）プロシーディンゲス・オン・ナショナル・アカデ ミ−・オン・サイエンス−ニーニスニー（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ）　８５　：　７７６３−７７６６参照）を用いて行う。要約すると 、アミリン作用剤活性を、アミリン作用剤に対応した骨格筋中におけるインシュ リン刺激グリコーゲン合成の阻害を測定することにより評価する。アミリン拮抗 活性を、１１００ｎのラット・アミリンおよびアミリン拮抗剤の存在下、インシ ュリン刺激グリコーゲン合成の回復を測定することにより、評価する。担体のな い緩衝液に溶解したペプチド濃度を、定量的アミノ酸分析で測定する。この分析 における拮抗剤としての化合物の活性を、ＩＣ５ｏ値を測定することにより決定 する。標準的な誤差を、４パラメ一ター論理学的等式（ドウリーン、エイ（Ｄｅ Ｌｅａｎ、　Ａ、　）　、マンソン、ビー・ジェイ（Ｉｌｌｕｎｓｏｎ、　Ｐ、 　Ｊ、　）　、グアルダバッソ、ブイ（Ｇｕａｒｄｂａｓｓｏ、　Ｖ、　）およ びロドバード。

ディー（Ｒｏｄｂａｒｄ、　Ｄ、　）　（１９８８年）オールフィツト、バージ ョン２．７、メリーランド州ベセスダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）のナショナル・イン スティテウート・オン・チャイルド・ヘルス・アンド・ヒユーマン・ディベロッ プメント（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅｏｆ　Ｃｈｉｌｄ　Ｈｅａｌ ｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）　、Ｈ，Ｉ　、　Ｈ，， １ディスケット）を用いて、Ｓ字型投与応答曲線の合致により決定する。

アミリン拮抗剤の数を、これらの生物学的分析を用いて決定する。Ｎ−末端欠失 ペプチドド３丁ペプチドＡ、　ト３”ペプチドＢおよびトコ２ペプチドＣは、す べて、受容体結合分析においてアミリンと競争することが見いだされた。これら のペプチドは、骨格筋分析において、作用剤活性は無視でき、アミリン拮抗剤と して作用することが分かうた。拮抗化合物１４Ａｓｐ１５Ｐｈｅ”Ｇｌｙト３７ ペプチドＢ１ト３フペプチドＢ、　ｌｌ−３？ペプチドＢ、Ｉト３７ペプチドＢ 、”Ａｓｐ”Ｖａｌ”Ａｌａト３！ペプチドＣ，３０Ａｓｎ”Ｔｙｒ”−”ペプ チドＣ１Ａｃ　Ｇ−３２ペプチドＣ１Ａ　Ｃ−ａｌｌ　Ａ　Ｓ　ｎ　３２　Ｔｙ 　ｒ　Ｇ　−３２ペプチドＣ，ト２３ペプチドＣ２ト３７ペプチドＡ、Ａｃｅ− ２ｓペプチドＣ２ト３７ペプチドＡＳＡｄｍ−’−”ペプチドＣ２９−３？ペプ チドＡ１Ａｃ−”ＡｒｇＩＳＬｅｕ”Ａｒｇ３０Ａｓｎ”Ｔｙｒト３”ペプチド Ｃ５Ａｃ−”Ａｒｇ”Ａｒ、ｇ”Ａｓｎ”Ｔｙｒ”−”ペプチドＣ，Ａｃ−”Ａ ｒｇ３０Ａｓｎ”Ｔｙｒ９−３２ペプチドＣに関して同様な結果を得た。ト３７ ベブチドＢ、　８−３１ペプチドＣおよびＡｃ−”Ａｒｇ”Ａｒｇ”Ａｓｐ”Ｔ ｙｒトｊ”ペプチドＣをラットに注射すると、アミリン投与により引き起こされ るインシュリン耐性の逆転が、それぞれ確認された。

アミリン作用剤活性がなく、アミリン受容体においてアミリンと競争する本発明 化合物は、アミリン受容体に対する特異的結合能を有するペプチドＡのＣ−末端 欠失および鎖内欠失のごとき他のペプチドを包含する。

ペプチド合成 これらの化合物を、標準的な固相ペプチド合成法および、好ましくは自動または 半自動ペプチド合成装置を用いて調製する。典型的には、α−Ｎ−カルバモイル 保護アミノ酸および樹脂上の伸張ペプチド鎖に結合したアミノ酸を、ジイソブロ ピルエチレンアミドのごとき塩基の存在下、ジシクロ△キシルカルボジイミドお よび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのごときカップリング試薬の存在下、ジ メチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノンまたは塩化メチレンのごとき内部 溶媒中、室温でカップリングさせる。トリフルオロ酢酸またはピペリジンのごと き試薬を用いて、α−Ｎ−カルバモイル保護基を生じたペプチド−樹脂から除去 し、ペプチド鎖に加えるべき次の所望のＮ−保護アミノ酸を用いてカップリング 反応を繰り返す。適当なＮ−保護基は、本発明にとり好ましいｔ−ブチルオキシ カルボニル（ｔＢＯｃ）およびフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）と ともに、当該分野でよく知られている。

ペプチド合成装置に用いる溶媒、アミノ酸誘導体および４−メチルベンズヒドリ ル−アミン樹脂を、特に断らない限り、アプライド・バイオシステムズ・インク （Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　Ｉｎｃ、）　（カリ７ｔルニア州フ オスター・シティ−（Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃ１ｔｙ）より購入した。Ｂｏｃ−Ａｒｇ 　（Ｍｔｓ）　、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　Ｉ） 　、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ　（ｔ−Ｂｕ）　、Ｂ。

ｃ−Ｓｅｒ　（Ｂｚ　１）　、Ｆｍｏｃ−８ｅｒ　（ｔ−Ｂｕ）　、Ｂｏｃ−Ｔ ｙｒ　（ＢｒＺ）　、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ　（ｔ−Ｂｕ）　、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（ ＣＩ−Ｚ）　、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｂｏｃ）　、Ｂｏａ−Ｇｌ　ｕ　（Ｂｚ　 １）　、Ｆｍｏｃ−ＧＩ　ｕ　（ｔ−Ｂｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ　（Ｔｒｔ）、 Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ　（Ｔｒｔ）およびＦｍｏｃ−ＧＩｎ（Ｔｒｔ）をはじめとす る側鎖保護アミノ酸を、アプライド・バイオシステムズ・インクより購入した。

Ｂｏｃ−Ｈｉ　ｓ　（ＢＯＭ）をアプライド・バイオシステムズ・インクまたは バケム・インク（Ｂａｃｈｅｍ　Ｉｎｃ、　）　（カリフォルニア州トランス（ Ｔｏｒｒａｎｃｅ）　）より購入した。アニソール、メチルスルフィド、フェノ ール、エタンジチオールおよびチオアニソールを、アルドリッチ・ケミカル・コ ンパニー　（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）　（ウィス コンシン州ミルウォーキー（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ）　）から購入した。エアー・ プロダクツ・アンド・ケミカルズ（ＡｉｒＰｒｏｄｕｃｔｓ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍ ｉｃａｌｓ）　（ペンシルレバニア州アレンタウン（Ａｌｌｅｎｔｏｗｎ）から ＨＦが供給された。エチルエーテル、酢酸およびメタノールをフィッシャー・サ イエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）　（ペンシルバニ ア州ビッッパーグ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ）　）から購入した。

ＮＭＰ／ＨＯＢｔ　（オプション１）システムおよびｔＢｏｃまたはＦｍｏｃ化 学（アプライド・バイオシステムズのＡＢＩ　４３０Ａ　ペプチド合成装置のユ ーザーズ・マニュアル、バージョン１．３，１９８８年６月１日、セクション６ ．４９〜７０頁参照）を用い、キャッピングをして、自動ペプチド合成装置（４ ３０Ａ型、アプライド・バイオシステムズ、カリフォルニア州フォスター・シテ ィ−）により、固相ペプチド合成を行った。Ｂｏａ−ペプチド−樹脂をＨＦで開 裂させた（−５℃〜０℃、１時間）。別に用意した水および酢酸で、ペプチドを 樹脂から抽出し、濾液を凍結乾燥した。Ｆｍｏｃ−ペプチド樹脂を、標準的方法 （イントロダクシコン・トウ・クリヴエジ・テクニックス（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔ ｉｏｎ　ｔ。

Ｃｌｅａｖａｇｅ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）アプライド・バイオシステムズ・イ ンク、１９９０年、６〜１２頁参照）で開裂させた。いくつかのペプチドもまた 、アドバンスト・サム・チク（Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｗ　Ｔｅｃｈ）合成装 置（ＭＰＳ　３５０型、ケンタッキ州ルイズビル（Ｌｕｏｉｓｖｉｌｌｅ）　） を用いて合成した。ペプチドを、ウォーターズ・デルタ・プレツブ（冒ａｔｅｒ ｓ　Ｄｅｌｔａ　Ｐｒｅｐ）　３０００システムを用いたＲＰ−ＨＰＬＣ（調製 用および分析用）により精製した。Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８調製用カラム（１０ μ、２．２ｘ２５ｃｍ；ビダック（Ｖｙｄａｃ）　、カリフォルニア州へスペリ ア（Ｈｅｓｐｅｒｉａ）　）を用いてペプチドを単離し、純度をＣ４、Ｃ８また はＣ１８分析用カラム（５μ、０．４６Ｘ２５ｃｍ：ビダック）を用いて検定し た。溶媒（Ａ＝０．１％ＴＦＡ／水およびＢ＝０．１％Ｔ　Ｆ　Ａ／　ＣＨｓ　 ＣＮ）を、分析用カラムには１．０ｍｌ／ｍｉｎで、調製用カラムには１５ｍ１ ／ｍｉｎで流した。アミノ酸分析を、ウォーターズ・ピコ・タグ（Ｐｉｃｏ　Ｔ ａｇ）　・システムにより行い、マキシマ（ｉｌａｘｉｍａ）プログラムにより 処理した。気相酸加水分解によりペプチドを加水分解した（１１５℃、２０〜２ ４時間）。加水分解物を誘導体化し、標準的方法（コーエン、ニス・エイ（Ｃｏ ｈｅｎ、　Ｓ、　Ａ、　）　、メイズ、エム（Ｍｅｙｓ、Ｍ、）　オヨＵ９リン 、ティー・エル（Ｔａｒｒｉｎ、　Ｔ、　Ｌ、　）　（１９８９年）ザ・ピコ・ タグ・メソッドニア・マニュアル・オン・アドバンスト・テクエックス・フォア ・アミノ・アシッド・アナリンス（Ｔｈｅ　Ｐｉｃｏ　Ｔａｇ　Ｍｅｔｈｏｄ： ＾Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒＡｍ ｉｎｏ　Ａｃ１ｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ）、１１〜５２頁、ミリポア・コーポレイ ション（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＣＯｒｐｏｒａｔｉｏｎ）　、？サチューセッツ州 ミルフォード（ｌｌｉｌｆｏｒｄ）　）で分析した。

高速原子衝突分析（Ｆａｓｔ　ａｔｏｍ　ｂｏｍｂｅｒｄｍｅｎｔ　ａｎａｌｙ ｓｉｓ）は、エムスキャン・インコーホレイティラド（Ｍ−３ｃａｎ　Ｉｎｃｏ ｒｐｏｒａｔｅｄ、ペンシルバニア州ウェスト・チェスター（ｔｅｓｔ　ｃｈｅ ｓｔｅｒ）　）により行われた。質量分析を、ヨウ化セシウムまたはヨウ化セシ ウム／グリセロールを用いて行った。飛行検出時間（ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｆｌｉｇ ｈｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）を用いたプラズマ脱離イオン化分析（ｐｌａｓｍａ　 ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　１ｏｎｉｚａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ）を、アプライ ド・バイオシステムズのバイオ−イオン（Ｂｉｏ−Ｉｏｎ）　２０質量スペクト ル分析装置により行った。

本発明化合物を、現在当該分野にて既知の組換えＤＮＡ法によっても調製できる 。例えば、サムプルツク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、モレキュラー・クローニング ０１ｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ）　ニア・ラボラトリ−’　マニｘアル （Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ）、第２版、コールド−７、ブリン グ・ハーバ−（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ｆｌａｒｂｏｒ）　（１９８９年）参 照。

化合物および医薬組成物の調製 本発明化合物は、種々の無機および有機の酸および塩基と塩を形成する。かかる 塩としては、有機酸および無機酸、例えばＨＣＩ、ＨＢｒ５Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３Ｐ ０．、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸 、マレイン酸、フマル酸および樟脳スルホン酸で製造された塩が挙げられる。塩 基で製造された塩としては、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えば、ナトリ ムおよびカリウム塩、ならびにアルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムおよび マグネシウム塩が挙げられる。酢酸塩、塩酸塩およびトリフルオロ酢酸塩が好ま しい。

当該塩は、塩が溶解しない溶媒または媒質中で、あるいは真空内でまたは凍結乾 燥によってまたは適切なイオン交換樹脂上で存在する塩のイオンを別のイオンと 交換することによって除去される水のような溶媒中で、生成物の遊離酸または塩 基形と１当量以上の適当な塩基または酸と反応させることによるような慣用手段 によって形成されてよい。

本発明化合物はそれらの薬理的性質を考慮して有用である。特に、本発明化合物 は、それらの哺乳類における高血糖を低下させる能力によって示されるような、 抗アミリンおよび抗糖尿病薬としての活性を有する。

本発明の組成物または生成物は、好都合には、非経口投与（静脈内、筋肉内、お よび皮下を含む）または鼻腔内投与または経口投与に適している溶液剤の形態で 提供されてよい。いくつかの場合には、単一組成物または一緒に投与するための 溶液中に本発明のアミリン拮抗剤およびスルホニル尿素のような他の低血糖剤を 提供するのが好都合である。他の場合、かかるアミリン阻害剤とは別々にスルホ ニル尿素または他の低血糖剤を投与するのがより好都合である。好適な投与型は 、個々に各患者について開業医によって決定されるのが最も良い。好適な医薬的 に許容される担体およびそれらの製剤は、標準的な製剤の論文、例えば、イー・ ダブリュ・マーチン（Ｅ、　Ｗ、　Ｍａｒｔｉｎ）によるレミントンズ・ファー マシューティカル０サイエンシズ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅ ｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ）において開示されている。ワン、ワイ・ジエ イ（Ｗａｎｇ、　Ｙ、　Ｊ　、　）およびハンソン、エム・エイ（Ｈａｎｓｏｎ 、Ｍ、Ａ、）　ｒ蛋白およびペプチドの非経口製剤：安定性および安定剤」（Ｐ ａｒｅｎｔｅｒａｌ　Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａ ｎｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　：　５ｔａｂｉｌｉｔｙ　ａ獅■ Ｓ　ｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ）、ジャーナル・オン・バレンチラル・サイエンス・ アンド・テクノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　５ｃｉ ｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、テクニカル・リポート第１０号、 ５ｕｐｐ、４２　：　２５　（１９８８）も参照。スルホニル尿素のような低血 糖剤を含む好適な製剤は当技術分野で公知である。

本発明の生成物は、通常、注射または輸液用の非経口組成物として提供されるで あろう。それらは、不活性油、好適には、ゴマ油、落花生油、オリーブ油のよう な植物油、または他の許容される担体中に懸濁させることができる。それらは、 水性担体中、例えば、ｐＨ約５．６〜７．４の等張緩衝溶液中に懸濁させるのが 好ましい。これらの組成物は、慣用の滅菌技術によって滅菌され得るか、あるい は、滅菌濾過してよい。当該組成物は、ｐＨ緩衝化剤などの１生理的条件に近づ くため必要とされるような医薬的に許容される補助剤を含有してよい。有用な緩 衝剤としては、クエン酸ナトリウム−クエン酸およびリン酸ナトリウム−リン酸 が挙げられる。リポジトリ−（ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）または「デボ剤」緩効性 調製物の形態を使用することによって、経皮注射またはデリバリ−の後に何時間 または何日間にもわたって、調製物の治療的有効量が血流中に運搬される。

所望の等優性は、塩化ナトリウムまたはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリ ウム、プロピレングリコール、ポリオール（例えば、マンニトールおよびソルビ トール）のような他の医薬的に許容される薬物、他の無機または有機溶質を使用 して達成されてよい。塩化ナトリウムは、ナトリウムイオンを含有する緩衝剤に ついて特に好ましい。

所望により、前記組成物の溶液は、メチルセルロースのような増粘剤で増粘され てよい。それらは、油中水または水中油のいずれの乳化形態で調製されてもよい 。種々の医薬的に許容される乳化剤のいずれも使用してよく、例えば、アラビア ゴム粉末、非イオン性界面活性剤（例えば、トウィーン（Ｔｗｅｅｎ）　）、イ オン性界面活性剤（例えば、アルカリポリエーテルアルコールスルフェートまた はスルホネート、例えば、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ））が挙げられる。

本発明の治療的に有用な組成物は、一般的に許容される方法に従って成分を混合 することによって調製される。例えば、選ばれた成分は、ブレンダーまたは他の 標準的な装置において簡単に混合されてよく、次いで、水または増粘剤および可 能であればｐＨを制御するための緩衝剤または張度を制御するためのさらなる溶 質の添加によって最終濃度および粘度に調節してよい。

医師による使用について、組成物は、他の血糖低下剤を含むかまたは含まずにあ る量の本発明の拮抗化合物を含有する投与単位形態で提供されるであろうし、こ れは選択されたレベルの血糖を制御または再確立するために１回または多数回投 与が有効であろう。２型糖尿病、耐グルコース能低下およびアミリン活性を有益 に低下させる他の症状の治療について本明細書に記載したようなアミリン拮抗剤 の治療的有効量は、血糖レベルを、好ましくは約１４０〜約１９０＋＋ｖ／ｄｌ に低下させる量である（各々、断食および給餌した）。インシュリン抵抗性の治 療のためのアミリン拮抗剤の治療的有効量は、本明細書に記載する方法または当 技術分野で知られている方法を使用して測定されるような、インシュリンの有効 性を、好ましくは約２０％まで増加させる量である。肥満症の治療のためのアミ リン拮抗剤の治療的有効量は、約２５％までアミリン作用を低下させる量、また は節食に関連する体重低下を増加させる量である。当業者に認識されるように、 治療薬の有効量は、患者の年齢および体重、患者の健康状態、血糖レベルまたは 得られるべきアミリン作用の低下、他の要因を含む多（の因子によって変わるで あろう。

かかる医薬組成物は、２型糖尿病および他の障害の治療に有用であり、この場合 、アミリン作用は有益に低下される。

本発明化合物の有効な毎日の抗糖尿病量は、典型的には、７０に９の患者につい て０．０５〜約１０００呼／日、好ましくは、約１〜５００　ｍｅ／日の範囲で あり、−同量または分割量で投与される。投与されるべき正確な用量は、所属臨 床家によって決定され、個々の化合物が前記で引用された範囲内にある場合に依 存し、ならびに個々の年齢、体重および症状に依存する。投与は、症候の第一信 号で、または糖尿病の診断直後に開始されるべきである。

一般に、２型糖尿病を有するヒトの治療において、本発明化合物は、一般に１日 数回投与される患者当たり約０．１１９〜５０哩の投与範囲でかかる治療を必要 とする患者に投与されてよい。結果として、１日当たり約０．３ｕ〜２００１９ の合計用量を投与してよい。

本発明の理解を助けるために、一連の実験の結果を記載する以下の実施例が含ま れる。本発明に関連する以下の実施例は、もちろん、本発明を特に限定すること を意図すべきではな（、当業者の理解範囲内であると思われる現在公知のまたは 後に開発される本発明の変形は、本明細書に記載された本発明の範囲および後記 の請求の範囲であると考えられる。

実施例１ アプライド・バイオシステムズ・インコーホレイテッド（ＡｐｐｌｉｅｄＢ　１ ｏｓｙｓｔｅａ＋ｓ、　Ｉ　ｎｃ、　）からのＢｏＣ−Ｈｉｓ　（ＢＯＭ）を含 むＢｏｃ−保護アミノ酸を使用して４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（０， ７２ｖ、０．６９ｍｅｑ／ｇ、０゜５　ｍｍｏｌ）上で８−３２ペプチドＣを構 築した。当該合成の全体にわたって、ダブルがノブリングサイクルを使用した。

１５回目のカップリングサイクルの後にペプチド樹脂（０，６６９）を除去し、 当該合成を完了し、遊離Ｎ−末端アミノ基を有するト３２ペプチドＣ樹脂（１， ５７９）を得た。完成した樹脂（１，５７ｇ）を脱保護し、アニソール（１６票 ！りおよびＤＭＳ　（１，６＊Ｉ）中、ＨＦ（１６ｍｌ）で切断した。

ペプチドを水（４００１／）で抽出し、一部（２００鳳ｌ）を濾過し、ペプチド の精製において使用した溶媒Ｂで１％ＣＨ３ＣＮに調節した。濾液をｐｒｅｐＣ ８カラムに適用し、精製した（５％Ｂで１０分間、５〜２０％Ｂで１０分間、２ ０％Ｂで３２分間、２０〜２５％で１０分間）。０８分析用カラムを使用して画 分の純度をイソクラティカリ−（１ｓｏｃｒａｔｉｃａｌｌｙ）に測定した（２ ２％Ｂで５分間、２２〜３０％Ｂで４０分間、３０％Ｂで２分間）。純粋な両分 を溜め、白色のペプチド（純度９９％の画分、９８吋）を得た。凍結乾燥したペ プチドブールの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（５〜２２％Ｂで５分間、２２〜２６％Ｂ で４０分間、２６％Ｂで２分間、２６〜１００％Ｂで１０分間、１００％Ｂで５ 分間）は、９９％の純度を示した。アミノ酸分析（６Ｍ　ＨＣＩ、１１５°）は 、以下のとおり示した：Ａｌａ、２．０４　（２）；Ａｒｇ、０．８９　（１） ；Ａｓｘ、１．０２　（１）：Ｇｌｘ、３．１４　（３）；Ｇｌｙ、３．２０　 （３）：Ｈｉｓ、０．８２　（１）：Ｌｅｕ、３．９４　（４）；Ｌｙｓ、２． ２２　（２）：Ｐｒｏ、２．０４　（２）；Ｓｅｒ、２．１３　（２）：Ｔｈｒ 、４．２６　（４）：Ｔｙｒ、０．９５　（１）；Ｖａ　１．０．９６　（１） 、ＦＡＢ質量分析＋　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：　２７２６　；（Ｍ＋Ｈ）’測定値 ：　２７２６゜ ｌトコ２ペプチドＣの調製 実施例１に記載の方法と同様の方法でｌトコ２ペプチドＣを調製した。ＦＡＢ質 量分析：　（Ｍ＋Ｈ）’理論値：１６１９．９　：　（Ｍ＋Ｈ）９測定値：１６ １９．６゜実施例１に記載の方法と同様の方法で１！−ＨペプチドＣを調製した 。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：１１５０．５　：　（Ｍ＋Ｈ）″″ 測定値＋１１５０゜実施例１に記載の方法と同様の方法でａ−＋ｔ・０４Ｎペプ チドＣを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：１８３８　：　（ Ｍ＋Ｈ）”測定値：１８３８゜実施例５ ２６Ａｓ　２フＶａｌ”Ａｌａ’−”ペプチドＣの調製実施例１に記載の方法と 同様の方法で”Ａ　ｓ　ｐ　２７Ｖ　ａ　ｌ　”Ａ　ｌ　ａ　５−３２ペプチド Ｃを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：　２７０９　：　（Ｍ ＋Ｈ）”測定値：２７０９゜ 実施例１に記載の方法と同様の方法で！６ＡＳｐ２？Ｖ　ａ］２Ｊｌ　ａ！！− ３２ペプチドＣを調製した。ＦＡＢ質量分析＋　（Ｍ十Ｈ）’″理論値：１１３ ３；　（Ｍ＋Ｈ）”測定値：１１３３゜ 実施例１に記載の方法と同様の方法で１３！ペプチドＣを調製した。ＦＡＢ質量 分析：　（Ｍ＋Ｈ）”″理論値：２６２５．４；　（Ｍ＋Ｈ：ｒ測定値：２６２ ６．１゜実施例１の記載に従って、Ａｃ−１３２ペプチドＣを構築および精製し た。無水酢酸を含む自動ペプチド合成器およびＡＢＩ　ｒｃａｐＪサイクルを使 用して樹脂上にある間に該ペプチドのＮ−末端をアセチル化した［カルウェル、 エイ（Ｃｕｌｌｖｅｌｌ、Ａ、）、デビス、デ、（（Ｄａｖｉｓ、　Ｄ、　）、 ピアス、エル（Ｐ　１ｅｒｃｅ、　Ｌ　）（１９８７）、アプライド・バイオシ ステムズ・ユーザー・ブリチン（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　Ｕｓｅ ｒ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ）、発行番号第２０号、第６〜７頁コ。ＦＡＢ質量分析： 　（Ｍ＋Ｈ）＋理論値：　２７６６．５　：　（Ｍ＋Ｈ）”測定値：２７６６． ８゜実施例８の記載に従って、Ａ　Ｃ＊−１２ペプチドＣを調製した。ＦＡＢ質 量分析＝（Ｍ十Ｈ）“理論値：　２６６９　；　（Ｍ＋Ｈ）′″測定値：　２６ ６９゜実施例１の記載に従ッテ、”Ｓｅｔ”Ｖａｎ”Ａｓｎ３２Ｔｙｒ”−”ペ プチドＣを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ戸理論値：　２７７７．５　 ；　（Ｍ＋Ｈ）’″測定値：２７７７．３゜ 実施例１の記載に従って、”Ｓｅｒ”Ｖａ１３０Ａｓｎ”Ｔｙｒ′−３２ペプチ ドＣを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）＋理論値：　２６７７．４　： 　（Ｍ＋Ｈ）”″測定値：２６７８．４゜ 樹脂に結合している間に、シングルカップリングサイクルを使用し、４３１アプ ライド・バイオシステムズ・ペプチド合成器を使用してペプチド上で２個のＮ− 末端残基を構築し、当該ペプチドのＮ−末端をアセチル化した（サイクルｇ１Ｂ ｏｃ−化学プロトコール）以外は、実施例８の記載に従ってＡｃ−”Ｓｅｒ”Ｖ ａＩ”Ａｓｎ３２Ｔｙｒ””ペプチドＣを調製した。ＦＡＢ買量分量分析Ｍ＋Ｈ ）“理論値：２７２０：　（Ｍ＋Ｈ戸測定値：　２７２０゜４倍過剰量およびＨ ＯＢｔ−活性化を使用して、樹脂に結合している間に、ペプチドのＮ−末端がア ダマンチル酢酸で手動でキャップされた以外は実施例１２の記載に従って、アダ マンチルＡｃ−”Ｓｅｒ”Ｖａ　１３ｅＡｓｎ”Ｔｙｒ”−３２ペプチドＣを調 製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ十Ｈ）”理論値：２８５３．５；　（Ｍ＋Ｈ） “測定値：２８５４．２゜ 実施例１の記載に従って、３０Ａ　５ｎＮＴ　ｙｒ８−３！ペプチドＣを調製し た。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：　２８４８　；　（Ｍ＋Ｈ）“測 定値：　２８４８゜アドバンスト・ケム・チク・シンセサイザー（Ａ　ｄｖａｎ ｃｅｄ　Ｃｈｅ■Ｔ　ｅｃｈＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）　（モデルＭＰＳ　３５ ０、ルイスビル、ＫＹ）上で”（Ｄ）３−（２’ナフチル）−アラニン”Ａ　ｌ 　ａ　”Ａ　ｓ　ｎ　”Ｔ　ｙ　ｒ　””ペプチドＣを構築した。当該合成は４ −（２’、４°−ジメトキシフェニル−Ｆ　ｗｏｅ−アミノメチルフェノキシ樹 脂（カルビオケム（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、１４ｍａ＋ｏｌ／ｇ）を使用して Ｏ，Ｏｆ　６ｍｍｏｌｍｍ−ルで行った。撹拌しつつ１．５時間、エタンジチオ ール（０，２５＠ｌ）、水（０，２５＋＋７）、およびトリフルオロ酢酸（９， ５ｍＪ）の混合物を使用して樹脂からペプチドを切断した。ペプチド樹脂を濾過 し、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を合わせ、真空下で還元した。ペプチドをエ ーテルで沈殿させ、固体を収集した。

水を使用してペプチドを溶解し、濾液の凍結乾燥によって綿毛のような白色沈殿 物を得た。実施例１の記載に従ってペプチドを精製した。ＦＡＢ質量分析：　（ Ｍ＋Ｈ）゛理論値：１２９１　：　（Ｍ＋Ｈ）”測定値＋　１２９１゜実施例１ ６ ”Ｈｉｓ”Ｐｈｅ”Ａｌａ”Ｉ　Ｉｅ”Ｓｅｔ”Ｓｅｒ’−”フペプチドＡの調 製実施例１に記載の方法と同様の方法で”Ｈｉｓ”Ｐｈｅ”Ａｌａ”Ｉ　Ｉｅ１ ８ＳｅｒＮＳｅｒ８−３？ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ ）”理論値：　３１８３　；　（Ｍ＋Ｈ）！測定値：３１８３゜実施例１７ ”Ｈｉｓ”Ｐｈｅ２５Ａｌａ２６Ｉ　１ｅ”Ｓｅｒ”Ｓｅｒ”３７ペプチドＡの 調製実施例１に記載の方法と同様の方法で”Ｈｉ　ｓ”Ｐｈｅ”Ａｌ　ａ”Ｉ　 １　ｅ２８Ｓｅｒ２１１ＳｅｒＩ８−３７ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量分 析：　（Ｍ＋Ｈ）”″理論値：　２０７０　；　（Ｍ＋Ｈ）”測定値：２０７０ ゜実施例１８ ”Ｐｈｅ”Ａ１　ａ”Ｉ　］　ＩｅＳｅｒ”Ｓｅｒ””ペプチドＡの調製実施例 １に記載の方法と同様の方法で”Ｐｈｅ”Ａｌａ”Ｉ　Ｉｅ”５ｅｒ２９Ｓｅｒ Ｈ−３７ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）＋理論値：１５ ３１　；　（Ｍ＋Ｈ）”測定値：１５３１゜実施例１９ ２８ｓｅ、０Ｓｅｒ２ト３７ペプチドＡの調製実施例１に記載の方法と同様の方 法で２１１Ｓｅｒ２９Ｓ　０１２ｇ−３７ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量分 析：　（Ｍ＋Ｈ）’理論値：１０２９　；　（Ｍ十Ｈ）”測定値：１”Ｔｙ　ｒ ”Ｓ　ｅ　ｒ”Ｓ　ｅ　ｒ２フー３７ペプチドＡの調製実施例１に記載の方法と 同様の方法で２７Ｔｙ　ｒ”Ｓ　ｅ　ｔ”Ｓ　ｅ　ｒ２丁−３７ペプチドＡを調 製した。ＦＡＢ質量分析＋　（Ｍ＋Ｈ）′″理論値：１１９１．５　：（Ｍ＋Ｈ ）”測定値：１１９１．２゜ 実施例２１ 実施例１に記載の方法と同様の方法でト３フペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量 分析：　（Ｍ＋Ｈ）＋理論値：　３２０１　：　（Ｍ＋Ｈ）“測定値：３２０１ ゜実施例１に記載の方法と同様の方法でト２４ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質 量分析＋　（Ｍ＋Ｈ）“理論値：１８６０；　（Ｍ＋Ｈ）″″測定値：１８６０ ゜実施例１に記載の方法と同様の方法で１２＠ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質 量分析＋　（Ｍ十Ｈ）“理論値：　２３６３．３　；　（Ｍ＋Ｈ）”測定値：２ ３６４．Ｏ０実施例１に記載の方法と同様の方法でａ−ｓｓペプチドＡを調製し た。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ十Ｈ）”理論値：　２９３６；　（Ｍ十Ｈ）”″測 定値：　２９３６゜実施例１に記載の方法と同様の方法で１１３５ペプチドＡを 調製した。ＦＡＢ質量分析＋　（Ｍ＋Ｈ）’″理論値：１８２２　；　（Ｍ＋Ｈ ）′″測定値：１８２２゜実施例１に記載の方法と同様の方法でト２３・３ト３ ７ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：　２６３９ ．４　：　（Ｍ十Ｈ）’測定値：２６４０゜実施例１に記載の方法と同様の方法 で１２９ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：２３ ６３．３；　（Ｍ＋Ｈ）”測定値：　２３６４゜実施例２８ ２フＴｙ　ｒ”Ｓ　ｅ　ｒ”Ｓ　ｅ　ｒ３４Ａ　１　ａ”３フペプチドＡの調製 実施例１５に記載の方法と同様の方法で２フＴｙｒ”Ｓｅｔ”Ｓｅｒ”Ａｌａ２ ７−３７ペプチドＡを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：１１ ７５．５；（Ｍ十Ｈ）”測定値：１１７５．７゜ 実施例１に記載の方法と同様の方法で１８−３７ペプチドＢを調製した。ＦＡＢ 質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：　２０７７　：　（Ｍ＋Ｈ）’測定値：２０ ７７゜実施例１に記載の方法と同様の方法で９−３７ペプチドＢを調製した。Ｆ ＡＢ質量分析：　（Ｍ十Ｈ）’″理論値＋　３０２６　；　（Ｍ＋Ｈ）”測定値 ：　３０２６゜実施例１に記載の方法と同様の方法でｌ　＋−３７ペプチドＢを 調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）’″理論値：　２７８８　：　（Ｍ＋ Ｈ）”測定値：２７８８゜実施例３２ ”Ｔｙｒ２７−３７ペプチドＢの調製 実施例１に記載の方法と同様の方法で２４７　ｙｒ２７−３７ペプチドＢを調製 した。

ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）＋理論値：１１８１．６　；　（Ｍ＋Ｈ）”測定 値：１１８１゜ 実施例３３ １４Ａｓｐ１５ｐｈ％！Ｑｌｙｌ！？ペプチドＢの調製実施例１に記載の方法と 同様の方法で１４ＡＳｐ１５ｐｈｅ２３Ｇｌｙａ−３７ペプチドＢを調製した。

ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：　３１７６．６　；　（Ｍ＋Ｈ）”測 定値：３１７６゜ 実施例１に記載の方法と同様の方法で＋４ＡＳｐＨ１ｐｈｅ２３Ｇｌｙト３？ペ プチドＢを調製した。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値＋　２０３５．１ 　；　（Ｍ＋Ｈ）“測定値：２０３５．５゜ １２位および１５位でＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）アミノ酸を使用して、実施例１ の記載と同様に、″・”Ｃｙｓ（Ａｃｍ）”！’ペプチドＢ−（樹脂）を構築す る。ペプチドが樹脂上にある間に、ジスルフィド結合が形成される。−４〜０℃ で、ペプチド樹脂をアニソール／ＴＦＡ　（１，７ｍＭ）の５％混合物と一緒に 撹拌する。

トリフルオロ酢酸第二タリウム（ペプチドに対して１．２当量）を添加し、混合 物を１時間撹拌する。混合物を真空濾過し、樹脂を冷たいエーテルで洗浄した。

樹脂を真空下で少なくとも２時間乾燥し、次いで、前記実施例１の記載と同様に ＨＦで切断した。前記実施例１の記載に従って、ペプチド、（シクロ１２・ｌ５ ）１１・Ｉ！（：ｙｓ１３？ペプチドＢを精製した。

１５位および３２位で、各々、Ｂｏ　ｃ−Ｌｙ　ｓ（Ｆｍｏｃ）およびＢｏｃ− Ａｓｐ（ＯＦｍ）を使用して、実施例１の記載に従って、”Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ） ”Ａｓｐ（ＯＦｍ　）　＋　５−３７ペプチドＢ−（樹脂）を構築した。ペプチ ドが樹脂上にある間に、ラクタム結合が形成される。ＤＭＦ中２０％ピペリジン と一緒に樹脂を振盪することによってＡｓｐおよびＬｙｓ残基を脱保護する。１ ．５％Ｄ　Ｉ　ＥＡ／ＤＭＦ　（１，７５＋ａＭ）およびヘキサフルオロリン酸 ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニ ウム（ＢＯＰ、６当量）の溶液中で膨張したペプチド樹脂（１当量）を添加する 。反応を２時間振盪する。樹脂を濾過し、ＤＭＦで洗浄する。定量的ニンヒドリ ン分析を使用して反応の程度を測定する。収率が９０％未満である場合、当該環 化反応を繰り返す。（シクロ＋５・＄２）＋５Ｌ　ｙＳ３２Ａ　５ｐＩ−３７ペ プチドＢ−（樹脂）の構築は完了し、前記実施例１の記載に従って、ＨＦ切断し 、次いで、精製することによって（シクロ１３４り１ｌｌＬｙ　ｓ　３’ｌＡ　 ｓ　ｐ　−１３？ペプチドＢを得る。

実施例１の記載に従ってペプチドを構築した。ミリスチン酸を用いて最終カップ リングサイクルを行った。実施例１の記載に従って該ペプチドを精製した。ＦＡ Ｂ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）”理論値：１３６０　；　（Ｍ＋Ｈ）”測定値：１３ ６０゜実施例１および２６の記載に従って、ペプチドを構築し、環化し、切断し 、次いで、精製した。残基５および６の代わりにアミノ吉草酸をカップリングし た。

ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）’″理論＊：　３８２９．２７　；　（Ｍ＋Ｈ） ′″測定値：３８実施例１と同様に、リジンのアルファおよびイプシロンアミノ 基の各々に結合した２ト３２ペプチドＣ−Ａｌａ断片を有するこのペプチドを構 築する。樹脂にノルロイシンをカップリングした後に残基ＢｏＣ−Ｌｙｓ（Ｂｏ ｃ）を使用する。

ＡｌａをＬｙｓ残基の両アミノ基にカップリングした後、配列Ｈ−３２ペプチド Ｃの２倍コピーを同時に構築して（２２−ＨペプチドＣ−Ａ１　ａ）２Ｌｙｓ− ＮＩ　ｅ−樹脂を得た。実施例１の記載に従って、ペプチド樹脂をＨＦで切断し 、次いで、精製して２ト３２ペプチドＣ−Ａｌａ）ｚＬｙｓ−Ｎｌｅ−ＮＨｚを 得る。

［（２１ＣｙＳ、　Ｈ−３２ペプチドＣ−ＮＨ２）−８ＣＨ２ＣＯ−ＡＩ　ａ］ ２Ｌｙｓ−ＮＩ　ｅ−ＮＨ，の調製 前記実施例１の記載に従って、２個のペプチドモジュールを構築し、−緒に反応 させてこの分枝鎖状化合物を得る。以下の順序で樹脂にカップリングさせること によって分枝鎖状ペプチドモジュールを調製する：　Ｂｏｃ−Ｎｌ　ｅ、Ｂｏｃ −Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｂｏｃ−Ａｈａ、ブロモ酢酸。前記に従って、他の残基が ＨＯＢｔ−活性エステルにカップリングしている間に、対称的な無水物としてブ ロモ酢酸をカップリングさせる。前記に従って、分枝鎖状モジュールを切断し、 次いで、精製する。実施例１の記載に従って、直線状モジュール、２１Ｃｙ　ｓ １２ト３２ペプチドＣ−ＮＨ２を合成して遊離スルフヒドリル含有ペプチドを得 る。緩衝化塩基性溶液中、直線状モジュールを分枝鎖状モジュールと過剰量に反 応させてスルフィド結合した分枝鎖状ペプチド、［（ＨＣｙｓ、　ｎ−３２ペプ チドＣ−ＮＨ２）−８ＣＨ２ＣＯ−Ａｈａ］、Ｌｙｓ−Ｎｌｅ−ＮＨ２を得る。

実施例１の記載と同様の方法を使用して、”（Ｄ）　３−（２’ナフチル）−ア ラニン２６Ｃｙｓ２′ＱＡＩａ３０Ａｓｎ３２Ｔｙｒ２２−３２ペプチドＣ−Ｎ Ｈ，を合成することによって［（”（Ｄ）３−（２’ナフチル）−アラニン”Ｃ ｙｓ”Ａｌａ”Ａｓｎ”Ｔｙｒ２ト３２ペプチドＣＮＨ２］２　ＢＭＷを調製す る。ｐＨ６，５〜７．５で、溶液中ペプチド（２当量）をビスマレイミドヘキサ ン（ＢＭＨ）と反応させ、得られた混合物を精製して［（”（Ｄ）３−（２°ナ フチル）−アラニン”Ｃｙｓ”Ａｌａ３０Ａｓｎ３！Ｔ　ｙｒ２！−３！ペプチ ドＣ−Ｎ　Ｈ２）］２　Ｂ　ＭＷを得る。ＦＡＢ質量分析＝　（Ｍ＋Ｈ）゛理論 値：２８３５；測定値：　２８３５゜実施例１５の記載と同様の方法でペプチド を調製した。ＴＯＦ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）４理論値：１２７３．３；測定値： １２７２．６゜実施例４３ ３０Ａｒｇ３！Ｔｙ、！！−３！ペプチドＣの調製実施例１５の記載と同様の方 法でペプチドを調製した。ＴＯＦ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）′″理論値：１３１５ ．４；測定値：１２８６．８゜実施例４４ ３０Ｌｙ５ＨＴｙｒ！！−ＨペプチドＣの調製実施例１５の記載と同様の方法で ペプチドを調製した。ＴＯＦ質量質量分析間Ｍ＋Ｈ）′理論値＋１２８７．４； 測定１２８６．６゜実施例１５の記載と同様の方法でペプチドを調製した。ＴＯ Ｆ質量質量分析間＋Ｈ）４理論値＋１２７１．４；測定値１２７０．５゜実施例 ４６ 実施例１の記載と同様の方法でペプチドを調製した。無水酢酸およびジイソプロ ピルエチルアミンを使用してＥＮＤＣＡＰプログラムによってＮ−末端のアセチ ル化を行った。ＦＡＢ質量分析：　（Ｍ＋Ｈ）＋理論値：２８４８．２；測定値 ：２８４−８．２゜ 実施例４７ アセチル−！１＋１８　Ａ　ｒｇｌｓ　Ｌ６　ｕ　２０　Ａ　Ｓ　ｎ　３２Ｔ　 ｙ　ｒ　９−３２ペプチドＣの調製アプライド・バイオンステムズ・インコーホ レイテッド（ＡｐｐｌｉｅｄＢ　ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、　Ｉ　ｎｃ、　）からの Ｆ　ｍｏｃ−保護アミノ酸を使用して４−（２°、４′−ジメトキシフェニル） −Ｆｍｏｃアミノメチルフェノキシ樹脂（ノバビオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅ ｍ）、０．４４ｍｍｏｌｅ／ｇ）上でペプチドを構築した。合成およびＦａｓｔ Ｍｏｃ（ＨＢＴＵ活性化）化学の全体にわたってシングルカップリングサイクル を使用した。無水酢酸を使用してＥＮＤＣＡＰプログラムによってアセチル化を 行った。標準的な方法［イントロダクション・トウ・クリービッジ・テクニクス （Ｉ　ｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｏ　Ｃｌｅａｖａｇｅ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｓ）、アプライド・バイオシステムズ・インコーホレイテッド］に従って、フェ ノール（０，７５ｇ）、エタンジチオール（０，２５ｄ）、チオアニソール（０ ，５ｇ７）、水（０，５ｍｊりおよびトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）の混合物を 使用して、完全なペプチド樹脂を脱保護および切断した。ＦＡＢ質量分析：　（ Ｍ＋Ｈ）”理論値：２８３２．２；測定値：２８３１．３゜実施例４８ アセチル−山１１１Ａｒｇ３１１Ａ　５ｎ０７’ｙｒ９−３２ペプチドＣの調製 実施例４７に記載の方法と同様の方法でペプチドを調製した。ＦＡＢ質量分析＝ （Ｍ＋Ｈ）”″理論値：　２８４８．１　；測定値：２８４７．５゜実施例４９ アセチル−＋８Ａｒｇ３０Ａｓｎ３！ＴｙｒＩ−１！ペプチドＣの調製実施例４ ７に記載の方法と同様の方法でペプチドを調製した。ＦＡＢ質量分析＝（Ｍ＋Ｈ ）“理論値＋２８２０．１：測定値：２８１９．３゜実施例５０ ”Ｔｙｒ”Ｐｒｏ”Ａｒｇ”Ａｌａ”ツー３フペプチドＡの調製実施例１５に記 載の方法と同様の方法でペプチドを調製した。ＴＯＦ質量分析：（Ｍ＋Ｈ）＋理 論値：１２５５．４；測定値：１２５５゜実施例５１ ２フＴ　ｒ”Ｐｒｏ”Ａｒｇ”Ｔｈｒ”Ａｌａ”ツー３フペプチドＡの調製実施 例１５に記載の方法と同様の方法でペプチドを調製した。ＦＡＢ質量分析：（Ｍ ＋Ｈ）’″理論値：１２５７．３゜実施例５２ ”（Ｄ）　３−（２’ナフチル）−アラニンＨＡｌ　ａＨｐｈｅ３２Ｔｙ、！！ −３！ペプチドＣの調製 実施例１５に記載の方法と同様の方法でペプチドを調製した。ＴＯＦ質量分析： （Ｍ＋Ｈ）″″理論値：１３２４．５：測定値：１３２４．９゜”（Ｄ）３−（ ２’ナフチル）−アラニン２９Ａ　ｌ　ａ３０Ａ　５ｎ３２Ｔｙ、２２−３２ペ プチドＣの調製 実施例１５に記載の方法と同様の方法でペプチドを調製した。ＦＡＢ質量分析＝ （Ｍ＋Ｈ）”理論値：１２９１．６：測定値１２９１．３゜実施例５４ ”（Ｄ）３−（２°ナフチル）−アラニン”Ｖａｔ”Ａｌａ”Ａｓｎ３２Ｔｙｒ −２トＳ２ペプチドＣの調製 実施例１５に記載の方法と同様の方法でペプチドを調製した。ＴＯＦ質量分析： Ａｌａ−Ａｓｎ−”Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−”５ｅｒ−Ａｓ ｎ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−ＧＩｙ−２５Ａｌａ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ− ”Ｔｈｒ−Ａｓｎ−ＶａＩ−ＧＩｙ−９ｅｒ−３５Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−（ ＮＨ２） Ｚ■国蔚Ｌし ペプチドＡ 封ｗ−Ｐｒｏ−（町）。

国際調査報告 ｔｍｏ、ｖ　Ａ。ｉ、緬ａＮｅ　ＰＣＴ／ＵＳ　９２／１００１１フロントペー ジの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ （ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ 、ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　Ｃ３，ＦＩ、　ＨＵ。

ＪＰ、　ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　Ｎｏ、　ＰＬ、ＲＯ ，ＲＵ、５Ｄ （７２）発明者　ジョーンズ、ハワードアメリカ合衆国カリフォルニア州９２０ ６４、　１ポーウエイ、セント・ジェームズ・ドライブ１６８７０番 （７２）発明者　アルブレヒト、エリザベスアメリカ合衆国カリフォルニア州９ ２１２６、サンディエゴ、バニスター・ウェイ１０５４０番 （７２）発明者　ブリケット、キャスリンアメリカ合衆国カリフォルニア州９２ １２６、サンディエゴ、トレイルプラッシュ・テラス７６１２番 １７２）発明者　ボーモント、ケビン アメリカ合衆国カリフォルニア州９２１２６、サンディエゴ、シリアス・ロード １１２４８番

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. １．ペプチドＡ、修飾ペプチドＡ、ペプチドＢ、修飾ペプチドＢ、ペプチドＣま たは修飾ペプチドＣのＮ−末端欠失ペプチドからなるアミリン拮抗化合物であっ て、ペプチドＡまたは修飾ペプチドＡの少なくとも最初の２〜７個のＮ−末端ア ミノ酸残基が欠失し、ペプチドＢまたは修飾ペプチドＢの少なくとも最初の８個 のＮ−末端アミノ酸残基が欠失し、ペプチドＣまたは修飾ペプチドＣの少なくと も最初の２〜７個のＮ−末端アミノ酸残基が欠失しており、該アミリン拮抗化合 物が所望によりアセチル化Ｎ−末端アミノ酸、カルボキシアミド化Ｃ−末端アミ ノ酸または両方を有していてよいアミリン拮抗化合物。
2. ２．約５ｎＭ未満のアミリン受容体アッセイのＩＣ５０および約１μＭ未満のヒ ラメ筋拮抗アッセイのＩＣ５０を有する請求項１記載のアミリン拮抗化合物。
3. ３．ペプチドＣまたは修飾ペプチドＣに基づく欠失ペプチドからなる請求項１記 載のアミリン拮抗化合物。
4. ４．ペプチドＣまたは修飾ペプチドＣに基づく欠失ペプチドが８−３２ペプチド Ｃまたは修飾８−３２ペプチドＣからなり、ペプチドが２４−３２ペプチドＣま たは修飾２４−３２ペプチドＣを含む連続Ｎ−末端欠失を有する請求項３記載の アミリン拮抗化合物。
5. ５．修飾ペプチドＣが２６Ａｌａ、２６Ａｓｐ、２６Ｇｌｎ、２６Ｇｌｕ、２７ Ｖａｌ、２９Ａｌａ、２９ＧＩｙ、３０Ａｓｎ、３０Ｌｙｓ、３０Ａｒｇ、３０ Ａｌａ、３０Ｐｈｅ、３２Ｔｙｒ、３２Ｈｙｐ、３２Ｔｈｒ、３２Ｐｈｅまたは ３２ヒドロキシプロリンから選択される少なくとも１個のアミノ酸置換基を有す るペプチドからなる請求項４記載のアミリン拮抗化合物。
6. ６．修飾８−３２ペプチドＣ、修飾９−３２ペプチドＣ、修飾２２−３２ペプチ ドＣまたは修飾２４−３２ペプチドＣからなる請求項５記載のアミリン拮抗化合 物。
7. ７．修飾８−３２ペプチドＣまたは修飾９−３２ペプチドＣからなり、該修飾ペ プチドがＣ−末端ＮＨ２基を有しない請求項５記載のアミリン拮抗化合物。
8. ８．修飾２２−３２ペプチドＣまたは修飾２４−３２ペプチドＣからなり、該修 飾ペプチドがＣ−末端ＮＨ２基を有しない請求項５記載のアミリン拮抗化合物。
9. ９．９−３２ペプチドＣまたは修飾９−３２ペプチドＣからなる請求項３記載の アミリン拮抗化合物。
10. １０．修飾ペプチドＣが、１１Ａｒｇ、１５Ｌｅｕ、１８Ａｒｇ、３０Ａｓｎお よび３２Ｔｙｒからなる群から選択される少なくとも１個のアミノ酸置換基を有 するペプチドからなる請求項９記載のアミリン拮抗化合物。
11. １１．約９〜約１１個のアミノ酸からなる請求項３記載のアミリン拮抗化合物。
12. １２．２２−３２ペプチドＣ、修飾２２−３２ペプチドＣ、２４−３２ペプチド Ｃまたは修飾２４−３２ペプチドＣからなる請求項１１記載のアミリン拮抗化合 物。
13. １３．修飾ペプチドＣが２２Ｄ−Ｎａｌ、２２Ｌ−Ｎａｌ、２６Ｄ−Ａｓｐ、２ ６Ｌ−Ａｓｐ、２７Ｖａｌ、３０Ａｓｎ、３０Ｐｈｅ、３０Ｌｙｓ、３０Ａｒｇ 、３２Ｔｙｒおよび３２ヒドロキシプロリンからなる群から選択される少なくと も１個のアミノ酸置換差を有するペプチドからなる請求項１２記載のアミリン拮 抗化合物。
14. １４．少なくとも１〜７個の欠失アミノ酸を有し、所望により、残基１１でＬｙ ｓとＡｒｇとの置換；残基１５でＬｅｕとＧｌｕとの置換；残基１８でＬｙｓと Ａｒｇとの置換；残基２６でＡｓｎとＡｌａ、Ａｓｐ、ＧｌｎまたはＧｌｕとの 置換；残基２７でＴｈｒとＶａｌとの置換；残基２９でＳｅｒとＡｌａまたはＧ ｌｙとの置換；残基３０でＧｌｙとＡｓｎ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＡｌａとの置 換；残基３２でＰｒｏとＴｙｒ、Ｐｈｅまたはヒドロキシプロリンとの置換から 選択されるアミノ酸配列における置換を含んでいてもよく；所望によりアセチル 化Ｎ−末端アミノ酸、カルボキシアミド化Ｃ−末端アミノ酸または両方を有して いてもよいペプチドＣのＮ−末端欠失ペプチドからなるアミリン拮抗化合物。
15. １５．Ａｃ−１１Ａｒｇ１５Ｌｅｕ１８Ａｒｇ３０Ａｓｎ３２Ｔｙｒ９−３２ペ プチドＣからなる請求項１４記載のアミリン拮抗化合物。
16. １６．Ａｃ−１１Ａｒｇ１８Ａｒｇ３０Ａｓｎ３２Ｔｙｒ９−３２ペプチドＣか らなる請求項１４記載のアミリン拮抗化合物。
17. １７．Ａｃ−１８Ａｒｇ３０Ａｓｎ３２Ｔｙｒ９−３２ペプチドＣからなる請求 項１４記載のアミリン拮抗化合物。
18. １８．請求項１〜１７のいずれか１項記載のアミリン拮抗剤の治療的有効量を患 者に投与することからなる、患者における２型糖尿病または耐グルコース能低下 の治療方法。
19. １９．請求項１〜１７のいずれか１項記載のアミリン拮抗剤の治療的有効量を患 者に投与することからなる、治療によって利益を受けるであろう患者においてア ミリン活性を低下させることによって回復する疾患の治療方法。
20. ２０．疾患が肥満症である請求項１９記載の方法。
21. ２１．疾患がインシュリン抵抗性である請求項１９記載の方法。