DE69113893T2

DE69113893T2 - 6,7-Disubstituierte 2-Aminotetraline als Immunomodulatoren und pharmazeutische Zusammensetzungen davon.

Info

Publication number: DE69113893T2
Application number: DE69113893T
Authority: DE
Inventors: Piero Foresta; Mauro Marzi; Maria Ornella Tinti
Original assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Current assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Priority date: 1990-06-15
Filing date: 1991-06-13
Publication date: 1996-04-04
Anticipated expiration: 2011-06-14
Also published as: IT9048066A1; IT1241988B; DK0466662T3; DE69113893D1; IT9048066A0; JP2875061B2; ATE129232T1; US5962525A; ES2078497T3; EP0466662A2; US5637614A; JPH04230247A; HK1005862A1; EP0466662B1; EP0466662A3; GR3017813T3

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung von 6,7-disubstituierten-2-Aminotetralinen der allgemeinen Formel (I)
und ihrer pharmakologisch annehmbaren Salze, worin X und Y, die gleich oder verschieden sind, ausgewählt sind aus Methoxy, Acetoxy und Fluor; und R und R&sub1;, die gleich oder verschieden sein können, ausgewählt sind aus Wasserstoff, Ethyl, Propyl, Cyclopropyl, 2-Hydroxy-2-phenylethyl, 2-Hydroxy-2-(4-methylphenyl)ethyl und 2-Hydroxy-3-(4-methoxyphenoxy)propyl, zur Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen mit immunmodulierender Aktivität.
Unter den 6,7-disubstituierten2-Aminotetralinen der Formel (I) sind ins besondere Verbindungen bevorzugt, worin:
(1) X = Y = Methoxy; R Wasserstoff; R&sub1; = 2-Hydroxy-(4-methylphenyl)ethyl:
2-[(N-2-Hydroxy-2-(4-methylphenyl)ethyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin.
(Im folgenden ST 563);
(2) X = Y Methoxy; R = Ethyl; R&sub1; = 2-Hydroxy-2phenylethyl:
2-[(N-Ethyl,N-2-hydroxy-2-phenylethyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin.
(Im folgenden ST 570).
(3) X = Y = Methoxy; R = R&sub1; = Cyclopropylmethyl:
2-[(N,N-Dicyclopropylmethyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin.
(Im folgenden ST 570).
(4) X = Y = Methoxy; R = Wasserstoff; R&sub1; = 2-Hydroxy-3-(4-methoxyphenoxy)propyl:
2-[(N-2-Hydroxy-3-(4-methoxyphenoxy)propyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin.
(Im folgenden ST 564).
(5) X = Fluor, Y = Methoxy; R = R&sub1; = Wasserstoff:
2-Amino-6-fluor-7-methoxytetralin.
(Im folgenden ST 626); und
(6) X = Y Acetoxy; R = Wasserstoff, R&sub1; = Propyl:
2-N-Propylamino-6, 7-diacetoxytetralin.
(Im folgenden ST 608).
Von den Verbindungen (1) bis (6) sind die Verbindungen (1) bis (5) bereits bekannt, insbesondere die Verbindungen ST 563 und ST 570 sind in der europäischen Patentoffenlegung 273017 offenbart; die Verbindung ST 557 ist in der italienischen Patentanmeldung 47609 A/88 offenbart; die Verbindung ST 564 ist in der italienischen Patentanmeldung Nr. 47652 A/88 offenbart; und die Verbindung ST 626 ist offenbart in J. Med. Chem., 29, 1615 (1986).
Die einzige bekannte pharmakologische Aktivität für all diese Verbindungen ist die van blutdrucksenkenden Mitteln.
Andererseits wurde die Verbindung ST 608 bislang nicht offenbart. Folglich betrifft die Erfindung 2-N-Propylamino-6,7-diacetoxytetralin als neue Verbindung, und eine pharmazeutische Zusammensetzung mit immunmodulierender Aktivität, die 2-N-Propylamino-6,7-diacetoxytetralin als Wirkstoff enthält.
ST 608 kann als Hydrochlorid, wie im folgenden Reaktionschema angegeben, hergestellt werden:
Herstellung von 2-(N-Propyl)amino-6,7-diacetoxytetralinhydrochlorid (ST 608) Step A Step B

SCHRITT A

Herstellung von 2-(N-Propyl)amino-6,7-dihydroxytetralinhydrochlorid.
2-(N-Propyl)amino-6,7-dimethoxyetralin (hergestellt in Beispiel 2 des italienischen Patents 48779 A/86 - 23.12.1986, wie beschrieben) (6,69; 0,026 mol) wurden in 33 ml 47%igem HBr gelöst, und die erhaltene Lösung wurde bei Rückflußtemperatur über Nacht gehalten. Anschließend wurde die Lösung unter Vakuum konzentriert und der Rückstand wiederholt mit Aceton gewaschen, um die Überschlußmenge an Bromwasserstoff zu beseitigen. 8 g eines festen Rückstand wurden erhalten, der als solcher im folgenden Schritt eingesetzt wurde.

SCHRITT B

Herstellung von 2-(N-Propyl)amino-6,7-diacetoxytetralinchlorid ST 608.
Der Festkörper aus dem vorhergehenden Schritt (8 g; 0,026 mol) wurde in 50 ml CF&sub3;COOH gelöst. Acetylchlorid (40 ml; 0,56 mol) wurde zur Lösung zugegeben. Die Lösung wurde unter Rühren 48 Stunden bei Raumtemperatur gehalten und dann unter Vakuum konzentriert. Der so erhaltene ölige Rückstand wurde mit Methylenchlorid gelöst. Die organische Phase wurde mehrere Male mit 5 % NaHCO&sub2;-Lösung und mit Wasser gewaschen, anschließend über wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und dann unter Vakuum konzentriert. Der so erhaltene ölige Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst. Zur bei 0ºC gehaltenen Lösung wurde gasförmiges HCl bis zur Sättigung zugegeben. Es präzipitierte ein weißer Festkörper, der abfiltriert wurde und mit Ethylether gewaschen wurde. Es wurden 7,1 g eines produktes erhalten. Ausbeute 81 %
Schmelzpunkt: 209 - 211ºC
E.A. C&sub1;&sub7;H&sub2;&sub4;ClNO&sub4;
C H N Cl
Berechnet 57,88 6,8 3,91 10,07
Gefunden 58,00 7,2 3,72 10,39
Die biologische Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen wurde in mehreren pharmakologischen Tests überprüft. Einige dieser Tests sind im folgenden angegeben.

TEST 1:

Bewertung des "in vitro-ex vivo"-Effekts von ST 557, ST 563, ST 570 und ST 626 auf die cytotoxische Aktivität von peritonealen Makrophagen (M0).
Männliche Hybrid B&sub6;D&sub2;F&sub1;-Mäuse im Alter von 7 bis 9 Wochen und männliche Inzuchtmäuse C57816 im Alter van 8 Wochen wurden eingesetzt (4 Tiere/Gruppe).
Alle Verbindungen wurden intraperitoneal (25 mg/kg/Tag) verabreicht. ST 557 wurde auch per os (100 mg/kg/Tag) vom Tag -5 bis Tag -1 verabreicht (peritoneales Exudat-Zell-Gewinnen [PEC] am Tag 0).
PEC wurde aus den getöteten Tieren 24 Stunden nach dem Ende der Behandlung durch wiederholte Waschungen der Bauchhöhle gewonnen. Die peritonealen Exudate, die aus jeder Gruppe der Tiere erhalten wurde, wurden vereinigt.
Der Markophagenprozentsatz wurde durch Zählen in einer Burker-Kammer ermittelt; Zellsuspensionen (Konzentration = 2 x 10&sup6; M0/ml) wurden hergestellt.
Die markohagencytoxische Aktivität wurde bewertet unter Verwendung der folgenden beiden Tumorzellinien als Zielzellen: Daudi, abgeleitet von einem humanen Lymphoblastom und CEM-CM3, abgeleitet von humaner Lymphoblastieleukämie (beide Linien sind offenbart in der ATCC - American Type Culture Collection - Cell lines of hybrodoma. 5. Ausgabe - 1985).
Das experimentelle Verfahren ist im wesentlichen dasselbe wie bei Herscowitz H.8. (1981) - Manual of macrophage methodology, Dekker M., Herausgeber, beschrieben.
Insbesondere wurden Proben der Zellinien mit ³H-TdR (tritiertes Thymidin) markiert und ihre Konzentration wurde auf 5 x 10&sup4; Zellen/ml eingestellt. Diese wurden dann zu den Makrophagenpräparationen (unter Verwendung von 96- Well-Mikrotiterplatten) gegen, und die Volumina wurden so eingestellt, um einen Effektor (Makrophage)/Ziel (Tumorzellen)-Verhältnisse von 20:1; 40:1 und 80:1 in einem Gesamtvolumen von 0,3 ml/Well zu erhalten.
Drei Parallelansätze für jede Probe wurden hergestellt; nach 48- und 72- stündiger Inkubation bei 37ºC in S % CO&sub2;. Aliquots zu 0,1 ml Überstand wurden jedem Weil entnommen und in einem β-Counter gezählt.
Die makrophagencytotoxische Aktivität führt zu einer Tumorzellyse, welches die Freisetzung von in den Zellen eingeschlossener Radioaktivität in den Überstand bewirkt.
Bezogen auf die β-Counterdaten (in cpm) wird diese Aktivität ausgedrückt als nach der Lyse freigesetzte Radioaktivität in Bezug auf die in den Tumorzellen eingeschlossene Radioaktivität.
Die entsprechenden Formeln sind wie folgt:
%-Lyse nach 48 Stunden = 48 Stunden-Probe cpm/Gesamt-cpm
%-Lyse nach 72 Stunden = 72 Std.-Probe cpm x 2* + 48 Std.-Probe-cpm/Gesamt-cpm x 3*
* Die Multiplikationsfaktoren betreffen die Volumenvariation des Wellinhalts während der folgenden Probenentnahmen in der 48. und 72. Stunde.
Die an den Proben durchgeführten Messungen sind verantwortlich für in gewisses Lyseausmaß, das spontan in kultivierten Tumorzellen auftritt, die nicht Makrophagen ausgesetzt sind. Die durch die Tumorzellen aufgenommene Gesamtradioaktivität wird durch Durchführen einer Lyse mit 1 % SDS in destilliertem Wasser berechnet.
Wie in den folgenden Tabellen gezeigt, sind die getesteten Verbindungen wirksam bei der Verstärkung der cytotoxischen Aktivität von mäuseperitonealen Makrophagen der behandelten Mäuse. TABELLE 1 "In vitro-ex vivo"-ST 557-Effekt auf die (B&sub6;D&sub2;F&sub1;) peritoneale Mäuse-Makrophagencytoxität gegen ein Tumorziel BEHANDLUNG %-LYSE DES TUMORZIELS BEI: Stunden Kontrolle
a = Effektor/Zielverhältnis
b = wiederholtes Experiment zur Bestätigung der Aktivität
c = Experiment mit C57816-Mäusen
n.b. = nicht bestimmt
Kontrolle = Makrophagen aus dem PEC von nicht-behandelten Tieren TABELLE 2 "In vitro-ex vivo"-ST 563-Effekt auf die (B&sub6;D&sub2;F&sub1;) peritoneale Mäuse-Makrophagencytoxität gegen ein Tumorziel BEHANDLUNG %-LYSE DES TUMORZIELS BEI: Stunden Kontrolle
a = Effektor/Zielverhältnis
b = wiederholtes Experiment zur Bestätigung der Aktivität
n.b. = nicht bestimmt
Kontrolle = Makrophagen aus dem PEC von nicht-behandelten Tieren TABELLE 3 "In vitro-ex vivo"-ST 570-Effekt auf die (B&sub6;D&sub2;F&sub1;) peritoneale Mäuse-Makrophagencytoxität gegen ein Tumorziel BEHANDLUNG %-LYSE DES TUMORZIELS BEI: Stunden Kontrolle
a = Effektor/Zielverhältnis
b = wiederholtes Experiment zur Bestätigung der Aktivität
c = Experiment mit C57B16-Mäusen
n.b. = nicht bestimmt
Kontrolle = Makrophagen aus dem PEC van nicht-behandelten Tieren TABELLE 4 "In vitro-ex vivo"-ST 626-Effekt auf die (B&sub6;D&sub2;F&sub1;) peritoneale Mäuse-Makrophagencytoxität gegen ein Tumorziel BEHANDLUNG %-LYSE DES TUMORZIELS BEI: Stunden Kontrolle
a = Effektor/Zielverhältnis
b = wiederholtes Experiment zur Bestätigung der Aktivität
c = Experiment mit C57816-Mäusen
n.b. = nicht bestimmt
Kontrolle = Makrophagen aus dem PEC von nicht-behandelten Tieren

TEST 2:

Bestimmung des "in vitro-ex vivo"-Effekts von ST 557, ST 563, ST 564, ST 570, ST 608 und ST 626 auf die phagocytische Aktivität eines Exudats peritonealer Zellen (PEC).
Es wurden männliche B&sub6;D&sub2;F&sub1;-Mäuse im Alter von 6 bis 8 Wochen (5 Tiere pro Gruppe) eingesetzt.
Die Verbindungen wurden interperitoneal (20 mg/kg/Tag) verabreicht. ST 557, ST 563 und ST 626 wurden auch per os (100 m/kg/Tag) vom Tag -5 bis Tag -1 verabreicht (PEC-Gewinnung am Tag 0).
Das experimentelle Verfahren war im wesentlichen dasselbe wie bei Williams et al. in "Methods in immunology and immunochemistry", Acad. Press. 5, 261 (1976) beschrieben.
Insbesondere wurden 24 Stunden nach dem Ende der Behandlung die PECs aus jeder experimentellen Gruppe gewonnen, vereinigt und ihre Konzentration wurde auf 4 x 10&sup6; Zellen/ml eingestellt.
Zu Volumeneinheiten von 250 ul einer jeden PEC-Probe wurden gleiche Volumina von 0,4 % SREC (rote Blutzellen aus dem Schaft), das mit Hyperimmunserum opsoniert war, zugegeben.
Proben (Duplikate) wurden 1 Stunde inkubiert und dann einem hypotonen Schock unterzogen, um nicht-phagoctyierte SRBC zu entfernen. Nach wiederherstellen der Osmolarität wurden die Phagocyten cytozentrifugiert, mit einem differenzierenden Farbstoff gefärbt und unter dem Mikroskop beobachtet.
Die Ergebnisse sind ausgedrückt als:
(a) Prozentsatz von Zellen, die in Bezug auf 100 phagocytierenden Zellen phagocytiert wurden;
(b) Gesamtzahl von phagocytierten SRBC;
(c) mittlere Anzahl von SRBC in jedem Phagocyten.
Wie in den folgenden Tabellen gezeigt, verstärken die getesteten Verbindungen deutlich die PEC-phagocytische Aktivität. TABELLE 1 SRBC-Phagocytose durch Mäuse (B&sub6;D&sub2;F&sub1;)-PEC nach ST 557-Verabreichung BEHANDLUNG Phagocytierende Zellen a Gesamtzahl SRBC phagocytiert b SRBC pro phagocytierter Zelle c Kontrolle
a = Prozentsatz von Zellen, die bezogen auf 100 phagocytierenden Zellen phagocytiert wurden.
Mittelwert von 5 vereinigten Proben, in Parallelansätzen geprüft.
b = Gesamt-SRBC phagocytiert durch "a"
c Mittelwert von SRBC in jedem Phagocyten
Kontrolle = PCE unbehandelter Tiere TABELLE 2 SRBC-Phagocytose durch Mäuse (B&sub6;D&sub2;F&sub1;)-PEC nach ST 563-Verabreichung BEHANDLUNG Phagocytierende Zellen a Gesamtzahl SRBC phagocytiert b SRBC pro phagocytierter Zelle c Kontrolle
a = Prozentsatz von Zellen, die bezogen auf 100 phagocytierenden Zellen phagocytiert wurden.
Mittelwert von 5 vereinigten Proben, in Parallelansätzen geprüft.
b Gesamt-SRBC phagocytiert durch "a"
c = Mittelwert von SRBC in jedem Phagocyten
Kontrolle = PCE unbehandelter Tiere TABELLE 3 SRBC-Phagocytose durch Mäuse (B&sub6;D&sub2;F&sub1;)-PEC nach ST 564-Verabreichung BEHANDLUNG Phagocytierende Zellen a Gesamtzahl SRBC phagocytiert b SRBC pro phagocytierter Zelle c Kontrolle
a = Prozentsatz von Zellen, die bezogen auf 100 phagocytierenden Zellen phagocytiert wurden.
Mittelwert von 5 vereinigten Proben, in Parallelansätzen geprüft.
b = Gesamt-SRBC phagocytiert durch "a"
c Mittelwert von SRBC in jedem Phagocyten
Kontrolle = PCE unbehandelter Tiere TABELLE 4 SRBC-Phagocytose durch Mäuse (B&sub6;D&sub2;F&sub1;)-PEC nach ST 570-Verabreichung BEHANDLUNG Phagocytierende Zellen a Gesamtzahl SRBC phagocytiert b SRBC pro phagocytierter Zelle c Kontrolle
a = Prozentsatz von Zellen, die bezogen auf 100 phagocytierenden Zellen phagocytiert wurden.
Mittelwert von 5 vereinigten Proben, in Parallelansätzen geprüft.
b = Gesamt-SRBC phagocytiert durch "a"
c = Mittelwert von SRBC in jedem Phagocyten
Kontrolle = PCE unbehandelter Tiere TABELLE 5 SRBC-Phagocytose durch Mäuse (B&sub6;D&sub2;F&sub1;)-PEC nach ST 608-Verabreichung BEHANDLUNG Phagocytierende Zellen a Gesamtzahl SRBC phagocytiert b SRBC pro phagocytierter Zelle c Kontrolle
a Prozentsatz von Zellen, die bezogen auf 100 phagocytierenden Zellen phagocytiert wurden.
Mittelwert von 5 vereinigten Proben, in Parallelansätzen geprüft.
b = Gesamt-SRBC phagocytiert durch "a"
c = Mittelwert von SRBC in jedem Phagocyten
Kontrolle = PCE unbehandelter Tiere TABELLE 6 SRBC-Phagocytose durch Mäuse (B&sub6;D&sub2;F&sub1;)-PEC nach ST 626-Verabreichung BEHANDLUNG Phagocytierende Zellen a Gesamtzahl SRBC phagocytiert b SRBC pro phagocytierter Zelle c Kontrolle
a = Prozentsatz von Zellen, die bezogen auf 100 phagocytierenden Zellen phagocytiert wurden.
Mittelwert von 5 vereinigten Proben, in Parallelansätzen geprüft.
b = Gesamt-SRBC phagocytiert durch "a"
c = Mittelwert von SRBC in jedem Phagocyten
Kontrolle = PCE unbehandelter Tiere

TEST 3:

Bewertung des "in vitro-ex vivo"-Effekts von ST 557, ST 563 und ST 570 auf die cytostatische Aktivität peritonealer Makrophagen.
Es wurden männliche B&sub6;D&sub2;F&sub1;-Mäuse im Alter von 7 bis 9 Wochen (5 Tiere pro Gruppe) verwendet.
Die Verbindungen wurden i.p. verabreicht (25 mg/kg/Tag). ST 557 und ST 563 wurden ebenfalls per os (100 mg/kg/Tag) vom Tag -5 bis Tag -1 verabreicht (Gewinnung der peritonealen Zellen am Tag 0).
Die Makrophagen und die Zieltumorzellinien wurden wie in Test 1 hergestellt und ihre Konzentrationen wurden auf 1 x 10&sup6; M0/ml und 5 x 10&sup4; Zellen/ml eingestellt.
Es wurden Einheiten an Tumorzellen zu den Makrophagenpräparationen zugegeben, um so Tumor/Zielverhältnisse von 10:1, 20:1 und 40:1 zu erhalten.
Jede Probe wurde mit ³H-TdR 18 Stunden gepulst, um die Tumorzellen zu markieren, die dann auf Filter gesammelt wurden und in einen β-Counter gezählt wurden.
Die makrophagencytostatische Aktivität wird ausgedrückt als Prozentsatz der Inhibierung der Tumorzellreplikation durch Messen der Radioaktivität, die von den Tumorzellen in jeder Probe in Bezug auf die maximale eingebaute Radioaktivität durch eine Probe, die nur aus Tumorzellen besteht, aufgenommen wurde.
%-Cytostase = 100 - Probe-cpm/Gesamt-cpm x 100
Wie in den folgenden Tabellen gezeigt, sind die getesteten Verbindungen wirksam bei der Verstärkung der cytostatischen Aktivität von peritonealen Makrophagen von behandelten Mäusen. TABELLE 1 "In vitro-ex vivo ST 557-Effekt auf die cytostatische Aktivität peritonealer Makrophagen behandelter Mäuse BEHANDLUNG %-INHIBIERUNG DES ZIELTUMORWACHSTUMS BEI DEN FOLGENDEN E/T-VERHÄLTNISSEN: Kontrolle
Kontrolle PCE-Makrophagen unbehandelter Mäuse TABELLE 2 "In vitro-ex vivo ST 563-Effekt auf die cytostatische Aktivität peritonealer Makrophagen behandelter Mäuse BEHANDLUNG %-INHIBIERUNG DES ZIELTUMORWACHSTUMS BEI DEN FOLGENDEN E/T-VERHÄLTNISSEN: Kontrolle
Kontrolle = PCE-Makrophagen unbehandelter Mäuse TABELLE 3 "In vitro-ex vivo ST 570-Effekt auf die cytostatische Aktivität peritonealer Makrophagen behandelter Mäuse BEHANDLUNG %-INHIBIERUNG DES ZIELTUMORWACHSTUMS BEI DEN FOLGENDEN E/T-VERHÄLTNISSEN: Kontrolle
Kontrolle = PCE-Makrophagen unbehandelter Mäuse

TEST 4:

Bewertung des "in vitro-ex vivo"-Effekts von ST 557, ST 563, ST 608 auf die Mytogen (PHA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in Mäusen.
Männliche B&sub6;D&sub2;F&sub1;-Mäuse im Alter von 6 bis 8 Wochen (4 Tiere pro Gruppe) wurden verwendet.
Die Verbindungen wurden i.p. 25 mg/kg/Tag von Tag -5 bis Tag -1 verabreicht (Milzherausnahme am Tag 0).
PHA (aktiv auf T-Lymphocyten) und LPS (aktiv auf 8-Lymphocyten) wurden als Mytogene verwendet. Jedes Mytogen wurde in drei unterschiedlichen Konzentrationen (suboptimal, optimal, superoptimal) getestet: 0,5, 4 und 6 mcg/ml/Well und 0,5, 150 und 500 mcg/ml/Well.
Das experimentelle Verfahren wurde im wesentlichen wie bei Kirchner et al., "Splenic suppressor macrophages induced in mice by injection of C. parvum", J. Immunol., 1975, 115:1212, durchgeführt.
Insbesondere wurden die aus der Milz der Tiere aus derselben Gruppe erhaltenen Zellsuspensionen vereinigt und die Zellkonzentration wurde auf 5 x 10 Zellen/ml eingestellt.
Zu Volumeneinheiten von 0,1 ml einer jeden Probe wurden gleiche Volumeneinheiten der Mytogenpräparationen zugegeben, um so für jedes Mytogen die zuvor angegebenen Endkonzentrationen zu erreichen.
Jede Probe wurde in Dreifachansätzen in U-Boden-Mikrotitern hergestellt. Eine Kontrolle, zu der 0,1 ml Medium zugegeben wurde anstelle des Mytogens, wurde ebenfalls hergestellt. Die Kontrolle erlaubt die Bewertung des Ausmaßes der spontanen Proliferation in Abwesenheit einer Stimulation.
Die Proben wurden bei 37ºC 48 Stunden inkubiert und dann mit 20 ul ³H-TdR (25 uCi/ml) gepulst.
Nach weiterer Inkubation von 18 Stunden wurden die Zellen auf Filter gesammelt und in einen β-Counter gezählt.
Die Ergebnisse für jede Probe sind ausgedrückt durch Berechnen des Werts der Fläche unterhalb der Kurve (AUC), erhalten durch Auftragen der Werte der eingebauten Radioaktivität (in cpm) gegen verschiedene Konzentrationen eines jeden Mytogens.
Zusätzlich zum AUC wird auch der Stimulationsindex (51) bewertet, der wie folgt definiert ist.
SI = AUC behandelt/AUC-Kontrolle
Wie in den folgenden Tabellen gezeigt, sind die getesteten Verbindungen auch bei der Verstärkung der mytogeninduzierten Splenocytenproliferation wirksam. TABELLE 1 Mytogen (PHA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in mit ST 557 behandelten Mäusen BEHANDLUNG Kontrolle
a = Fläche unter der Kurve (x 10&supmin;³): X ± Variationsbereiche.
b = Stimulationsindex; Variationsbereiche sind in Klammern angegeben.
Kontrolle = Mytrogen-induzierte Splenocytenproliferation in unbehandelten Mäusen.
n.b. = nicht bestimmt. TABELLE 2 Mytogen (PHA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in mit ST 563 behandelten Mäusen BEHANDLUNG Kontrolle
a = Fläche unter der Kurve (x 10&supmin;³): X ± Variationsbereiche.
b = Stimulationsindex; Variationsbereiche sind in Klammern angegeben.
Kontrolle = Mytrogen-induzierte Splenocytenproliferation in unbehandelten Mäusen. TABELLE 3 Mytogen (PHA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in mit ST 608 behandelten Mäusen BEHANDLUNG Kontrolle
a = Fläche unter der Kurve (x 10&supmin;³): X ± Variationsbereiche.
b = Stimulationsindex; Variationsbereiche sind in Klammern angegeben.
Kontrolle = Mytrogen-induzierte Splenocytenproliferation in unbehandelten Mäusen.

TEST 5:

Bewertung des "in vitro-ex vivo"-Effekts von ST 557, ST 563, ST 564 auf die Mytogen (PHA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in mit Cyclophosphamid immundeprimierten Mäusen.
Es wurden männliche B&sub6;D&sub2;F&sub1;-Mäuse im Alter von 7 bis 9 Wochen (5 Tiere pro Gruppe) verwendet.
Der Immunsuppressor (Cyclophosphamid) wurde i.p. in einer Dosis von 100 mg/kg am Tag -5 verabreicht. Die Verbindungen wurden i.p. (25 mg/kg/Tag) und per os (100 mg/kg/Tag) vom Tag -5 bis Tag -1 (Milzherausnahme am Tag 0) verabreicht.
Die Splenocytenproliferation wurde durch drei verschiedene Mytogene induziert: PHA- und ConA-aktive auf T-Lymphocyten und LPS-aktive auf 8-Lymphocyten. Jedes Mytogen wurde in drei verschiedene Konzentrationen (suboptimal, optimal, superoptimal) entsprechend 0,5, 4 und 6 mcg/ml/Well für PHA; 0,5, 4 und 8 mcg/ml/Well für ConA und 0,5, 150 und 500 mcg/ml/Well für LPS getestet.
Das experimentelle Verfahren ist dasselbe wie im Test 4 beschrieben.
Die Ergebnisse sind sowohl als AUC (siehe Test 4) als auch als S.I. ausgedrückt. Zu Bewertung der Wirksamkeit des Immunsuppressors und der Aktivität der getesteten Verbindungen wurde S.I. sowohl für die immundeprimierten Kontrollen (in Bezug auf normale Kontrollen), und für die immundeprimierten behandelten Tiere (in Bezug auf die immundeprimierten Kontrollen) bewertet.
(a) SI = AUC immundeprimierte Kontrollen/AUC normale Kontrollen
(b) SI = AUC immundeprimierte getestete Tiere/AUC immundeprimierte Kontrollen
Wie in den folgenden Tabellen gezeigt, sind die getesteten Verbindungen bei der Verstärkung der mytogeninduzierten Splenocytenproliferation in immundeprimierten aktiv. TABELLE 1 Mytogen (PHA, ConA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in immundeprimierten Mäusen behandelt mit ST 557 BEHANDLUNG Kontrolle Immundeprimierte Kontrolle Immundeprimiert
a = Fläche unter der Kurve (x 10&supmin;³) Variationsbereich in Klammern.
b = Stimulationsindex mit Variationsbereich in Klammern
c = 25 mg/kg/Tag.
d = 100 mg/kg/Tag
n.b. = nicht bestimmt. TABELLE 2 Mytogen (PHA, ConA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in immundeprimierten Mäusen behandelt mit ST 563 BEHANDLUNG Kontrolle Immundeprimierte Kontrolle Immundeprimiert
a = Fläche unter der Kurve (x 10&supmin;³) Variationsbereich in Klammern.
b = Stimulationsindex mit Variationsbereich in Klammern
c = 25 mg/kg/Tag.
d = 100 mg/kg/Tag
n.b. = nicht bestimmt. TABELLE 3 Mytogen (PHA, ConA, LPS)-induzierte Splenocytenproliferation in immundeprimierten Mäusen behandelt mit ST 557 BEHANDLUNG Kontrolle Immundeprimierte Kontrolle Immundeprimiert
a = Fläche unter der Kurve (x 10&supmin;³) Variationsbereich in Klammern.
b = Stimulationsindex mit Variationsbereich in Klammern
c = 25 mg/kg/Tag.
d = 100 mg/kg/Tag
n.b. = nicht bestimmt.
Verschiedene Tests haben die niedrige Toxizität der erfindungsgemäßen Verbindungen gezeigt. Einige dieser Test sind im folgenden beschrieben.

TOXOKOLOGISCHE TESTS

(a) TOLERIERBARKEIT

Der Test wurde an männlichen Swiss-Albino-Mäusen mit einem Gewicht von 22 bis 24 g durchgeführt.
Eine Gruppe von vier Tieren (4 Tiere/Dosis), die man unter Fasten für 18 Stunden gehalten hatte, wurden oral die Verbindungen ST 557, ST 563, ST 564 und ST 570, gelöst in zweimal destilliertem Wasser, verabreicht.
Einer weiteren Gruppe von Tieren, die freien Zugang zu Futter und Wasser hatte, wurden intravenös die gleichen Verbindungen, gelöst in Kochsalzlösung bei pH 7, verabreicht. Alle die Tiere wurden unter Beobachtung für 7 Tage gehalten.
Die Testergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt.
(b) LD50
Die LD50 wurde nach dem Verfahren von Carrol S. Weil, Eiometrics, S. 249- 263 (1985) bei männlichen Swiss-Albino-Mäusen mit einem Gewicht von 22 bis 24 g gemessen.
Die verschiedenen Verbindungen, gelöst in 0,9 % Kochsalzlösung, wurden intravenös verabreicht. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 gezeigt. TABELLE 1 TOLERIERBARKEIT Dosis mg/kg Verbindungen TABELLE 2 Verbindung
Die Dosis der Verbindung der Formel (I) der Verabreichung bestimmt sich nach dem Alter, Gewicht und dem allgemeinen Zustand des Patienten. Wirksame Ergebnisse können mit Dosen von ca. 0,5 bis 5 mg/kg Körpergewicht/Tag erreicht werden. Wegen der niedrigen Toxizität der erfindungsgemäßen Verbindungen können größere Dosen verabreicht werden, wie z. B.B bis 10 mg/kg Körpergewicht/Tag.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können durch dem auf dem Gebiet der pharmazeutischen Technologie vertrauten Fachmann bekannten Verfahren in übliche Administrierungsformen formuliert werden, die oral oder parenteral verabreichbare feste und flüssige Einheitsdosierungsformen umfassen. Diese Einheitsdosierungsformen umfassen von ca. 20 bis ca. 100 mg des aktiven Wirkstoffes zusätzlich zu üblichen Exzipienten.

Claims

1. 2-N-Propylamino-6, 7-diacetoxytetralin.

2. Verwendung von 6,7-disubstituierten-2-Aminotetralinen der allgemeinen Formel (I)

und ihrer pharmakologisch annehmbaren Salze, worin X und Y, die gleich oder verschieden sind, ausgewählt sind aus Methoxy, Acetoxy und Fluor; und R und Rl? die gleich oder verschieden sind, ausgewählt sind aus der Gruppe aus Wasserstoff, Ethyl, Propyl, Cyclopropylmethyl, 2-Hydroxy-2-phenylethyl, 2- Hydroxy-2-(4-methylphenyl)ethyl und 2-Hydroxy-3-(4-methoxyphenoxy)propyl, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung mit immunmodulierender Aktivität.

3. Verwendung nach Anspruch 2, worin das 6,7-disubstituierte-2-Aminotetralin 2-[(N-2-Hydroxy-2-(4-methylphenyl)ethyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin ist.

4. Verwendung nach Anspruch 2, worin 6,7-disubstituierte-2-Aminotetralin 2-[(N-Ethyl,N-2-phenyl-2-hydroxylethyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin ist.

5. Verwendung nach Anspruch 2, worin die 6,7-disubstituierte-2-Aminotetralin 2-[(N,N-Dicyclopropylmethyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin ist.

6. Verwendung nach Anspruch 2, worin das 6,7-disubstituierte-2-Aminotetralin 2-[(N-2-Hydroxy-3-(4-methoxyphenoxy)propyl)amino]-6,7-dimethoxytetralin ist.

7. Verwendung nach Anspruch 2, worin das 6,7-disubstituierte-2-Aminotetralin 2-Amino-6-fluor-7-methoxytetralin ist.

8. Verwendung nach Anspruch 2, worin das 6,7-disubstituierte-2-Aminotetralin 2-N-Propylamino-6,7-diacetoxytetralin ist.

9. Pharmazeutische Zusammensetzung mit immunmodulierender Aktivität, umfassend eine wirksame Menge zur Induktion eines immunmodulierenden Effekts bei einem immundeprimierten Patienten von 2-N-Propylamino-6,7-diacetoxytetralin und einem pharmakologisch annehmbaren Exzipienten dafür.