DE69012575T2

DE69012575T2 - Auf hydroxaminsäure basierte kollagenaseinhibitoren.

Info

Publication number: DE69012575T2
Application number: DE69012575T
Authority: DE
Inventors: Colin Campion; Michael Crimmin; Alan Davidson; Jonathan Dickens
Original assignee: British Bio Technology Ltd
Current assignee: Vernalis R&D Ltd
Priority date: 1989-08-24
Filing date: 1990-07-20
Publication date: 1995-03-30
Anticipated expiration: 2010-07-21
Also published as: FI920771A0; AU6045490A; JP2871849B2; NO920702D0; AU639706B2; NZ235050A; WO1991002716A3; KR927003624A; ATE111443T1; CA2064786A1; FI920771A7; DE69012575D1; EP0489032B1; ES2063975T3; WO1991002716A2; TW202456B; GB8919251D0; NO920702L; US5910609A; JPH05501864A

Description

Diese Erfindung betrifft pharmazeutisch und veterinärmedizinisch wirksame Verbindungen, die Derivate der Hydroxaminsäure sind.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen wirken als Inhibitoren von Metalloproteasen, die an Gewebezersetzung beteiligt sind, wie beispielsweise Collagenase, die den Collagenabbau initiiert, Stromelysin (Protoglycanase), Gelatinase und Collagenase (IV). Es gibt Beweise dafür, daß Collagenase eines der Schlüsselenzyme beim Abbau von Gelenkknorpel und Knochen bei der rheumatoiden Arthritis ist (Arthritis and Rheumatism, 20, 1231 - 1239, 1977). Potente Inhibitoren der Collagenase und anderer Metalloproteasen, die am Gewebeabbau teilhaben, sind bei der Behandlung der rheumatoiden Arthritis und verwandter Krankheiten, bei denen eine collagenolytische Aktivität wichtig ist, verwendbar. Inhibitoren von Metalloproteasen dieses Typs können daher bei der Behandlung oder Verhinderung von Kranheitszuständen verwendet werden, die Gewebeabbau involvieren; sie sind daher verwendbar bei der Behandlung der Arthropathie, dermatologischer Leiden, Knochenresorption, Endzündungskrankheiten und Tumorbefall und bei der Förderung der Wundheilung. Speziell können erfindungsgemäße Verbindungen verwendbar sein bei der Behandlung von Osteopenien, wie Osteoporose, rheumatoider Arthritis, Osteoarthritis, Periodontitis, Gingivitis, Kornealgeschwüren und Tumorbefall.
Eine Reihe kleiner, peptidartiger Verbindungen, die Metalloproteasen inhibieren, wurde beschrieben. Vielleicht am bemerkenswertesten davon sind solche, die das Angiotensin-umwandelnde Enzym (ACE) betreffen, wobei solche Mittel so wirken, daß sie die Umwandlung des Decapteptids Angiotensin in Angiotensin II, eine potente blutdruckerhöhende Substanz, blockieren. Verbindungen dieser Art sind in EP-A-0012401 beschrieben.
Bestimmte Hydroxaminsäuren wurden als Collagenaseinhibitoren vorgeschlagen, z.B. in US-A-4599361 und in EP-A-0236872. Andere Hydroxaminsäuren wurden als ACE-Inhibitoren vorgeschlagen, beispielsweise in US-A-4105789, wohingegen wiederum andere als Enkephalinaseinhibitoren beschrieben wurden, z.B. in US-A-4496540.
EP-A-0012401 offenbart blutdrucksenkende Verbindungen der Formel:
worin
R und R&sup6; gleich oder verschieden sind und Hydroxy, Alkoxy, Alkenoxy, Dialkylaminoalkoxy, Acylaminoalkoxy, Acyloxyalkoxy, Aryloxy, Alkyloxy, substituiertes Aryloxy oder substituiertes Aralkoxy darstellen, wobei der Substituent Methyl, Halo oder Methoxy, Amino, Alkylamino, Dialkylamino, Aralkylamino oder Hydroxyamino ist;
R¹ ist: Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen, einschließlich verzweigter, cyclischer und ungesättigter Alkylgruppen; substituiertes Alkyl, wobei der Substituent Halogen, Hydroxy, Alkoxy, Aryloxyamino, Alkylamino, Dialkylamino, Acrylamino, Arylamino, Guanidino, Imidazolyl, Indolyl, Mercapto, Alkylthio, Arylthio, Carboxy, Carboxamido, Carbalkoxy, Phenyl, substituiertes Phenyl, wobei der Substituent Alkyl, Alkoxy oder Halo ist; Aralkyl oder Heteroalkyl, Aralkenyl oder Heteroaralkenyl, substituiertes Aralkyl, substituiertes Heteroaralkyl, substituiertes Aralkenyl oder substituiertes Heteroaralkenyl, wobei der Substituent Halo oder Dihalo, Alkyl, Hydroxy, Alkoxy, Amino, Aminomethyl, Acrylamino, Dialkylamino, Alkylamino, Carboxyl, Haloalkyl, Cyano oder Sulfonamido, Aralkyl oder Heteroaralkyl, das am Alkylteil durch Amino oder Acylamino substituiert ist, ist;
R² und R&sup7; Wasserstoff oder Alkyl sind;
R³ ist: Wasserstoff, Alkyl, Phenylalkyl, Aminomethylphenylalkyl, Hydroxyphenylalkyl, Hydroxyalkyl, Acety1aminoalkyl, Acylaminoalkyl, Acylaminoalkylaminoalkyl, Dimethylaminoalkyl, Haloalkyl, Guanidinoalkyl, Imidazolylalkyl, Indolylalkyl, Mercaptoalkyl und Alkylthioalkyl;
R&sup4; Wasserstoff oder Alkyl ist;
R&sup5; Wasserstoff, Alkyl, Phenyl, Phenylalkyl, Hydroxyphenylalkyl, Hydroxyalkyl, Aminoalkyl Guanidinoalkyl, Imidazolylalkyl, Indolylalkyl, Mercaptoalkyl oder Alkylthioalkyl ist;
R&sup4; und R&sup5; zusammen unter Bildung einer Alkylenbrücke mit 2 bis 4 Kohlenstoffatcmen, einer Alkylenbrücke mit 2 bis 3 Kohlenstoffatomen und einem Schwefelatom, einer Alkylenbrucke mit 3 bis 4 Kohlenstoffatomen, die eine Doppelbindung enthält, oder einer Alkylenbrücke wie oben, die substituiert ist mit Hydroxy, Alkoxy oder Alkyl, verbunden sein können,
und deren pharmazeutisch annehmbaren Salze.
US-A-4S99361 offenbart Verbindungen der Formel:
worin
R¹ C&sub1;-C&sub6;-Alkyl ist;
R² C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Benzyl, Benzyloxybenzyl, (C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy)benzyl oder Benzyloxy(C&sub1;-C&sub6;-alkyl) ist;
a ein chirales Zentrum mit wahlweise R oder S Stereochemie ist;
A eine Gruppe
oder eine -(CR³=CR&sup4;)-Gruppe ist, worin b und c chirale Zentren mit wahlweise R oder S Stereochemie sind;
R³ Wasserstoff, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Phenyl oder Phenyl(C&sub1;-C&sub6;-alkyl) ist und R&sup4; Wasserstoff, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, Phenyl oder Phenyl(C&sub1;-C&sub6;-alkyl), Cycloalkyl oder Cycloalkyl-(C&sub1;-C&sub6;-alkyl) ist.
EP-A-0236872 offenbart generisch Verbindungen der Formel:
worin A eine Gruppe der Formel HN(OH)-CO- oder HCO-N(OH)- darstellt;
R¹ eine C&sub2;-C&sub5;-Alkylgruppe darstellt;
R² die charakterisierende Gruppe einer natürlichen α-Aminosäure darstellt, in der die funktionelle Gruppe geschützt sein kann, Aminogruppen acyliert und Carboxylgruppen amidiert sein können, mit der Maßgabe, daß R² nicht Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellen kann;
R³ Wasserstoff oder eine Amino-, Hydroxy-, Mercapto-, C&sub1;-C&sub6;-Alkyl-, C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy-, C&sub1;-C&sub6;-Acylamino-, C&sub1;-C&sub6;-Alkylthio-, Aryl-(C&sub1;-C&sub6;-alkyl)-, Amino-(C&sub1;-C&sub6;-alkyl)-, Hydroxy-(C&sub1;-C&sub6;-alkyl)-, Mercapto-(C&sub1;-C&sub6;-alkyl)- oder Carboxy-(C&sub1;-C&sub6;-alkyl)-Gruppe darstellt, worin die Amino-, Hydroxy, Mercapto- oder Carboxylgruppen geschützt sein können und die Aminogruppen acyliert oder die Carboxylgruppen amidiert sein können;
R&sup4; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt;
R&sup5; Wasserstoff oder eine C&sub1;-C&sub6;-Acyl-, C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy-C&sub1;-C&sub6;-alkyl-, Di(C&sub1;-C&sub6;-alkoxy)methylen-, Carboxy-, (C&sub1;-C&sub6;-Alkyl)carbinyl-, (C&sub1;-C&sub6;- Alkoxy)carbiny -, Arylmethoxycarbinyl-, (C&sub1;-C&sub6;-Alkyl) aminocarbinyl- oder Arylaminocarbinylgruppe darstellt; und
R&sup6; Wasserstoff oder eine Methylengruppe darstellt; oder
R² und R&sup4; zusammen eine Gruppe (CH&sub2;)n darstellen, worin n eine Zahl von 4 bis 11 darstellt; oder
R&sup4; und R&sup5; zusammen eine Trimethylengruppe darstellen;
und pharmazeutisch annehmbare Salze solcher Verbindungen, die sauer oder basisch sind.
US-A-4105789 offenbart generisch Verbindungen mit der allgemeinen Formel
und deren Salze, worin
R¹ ist: Wasserstoff, Niederalkyl, Phenyl-Niederalkylen, Hydroxy- Niederalkylen, Hydroxyphenyl-Niederalkylen, Amino-Niederalkylen, Guanidin- Niederalkylen, Mercapto-Niederalkylen, Niederalkyl-Mercapto-Niederalkylen, Imidazolyl-Niederalkylen, Indolyl-Niederalkylen oder Carbamoyl-Niederalkylen;
R² Wasserstoff oder Niederalkyl ist;
R³ Niederalkyl oder Phenyl-Niederalkylen ist;
R&sup4; Hydroxy, Niederalkoxy oder Hydroxyamino ist; und
n 1 oder 2 ist.
US-A-4396540 offenbart Verbindungen der allgemeinen Formel:
A-B-NHOH
worin A ein Rest der aromatischen Aminosäuren L-Tryptophyl, D-Tryptophyl, L-Tyrosyl, D-Tyrosyl, L-Phenylalanyl oder D-Phenylalanyl ist und B eine der Aminosäuren Glycin, L-Alanin, D-Alanin, L-Leucin, D-Leucin, L-Isoleucin oder D-Isoleucin ist; und deren pharmazeutisch annehmbare Salze.
Es wäre wünschenswert, die Loslichkeit bekannter Collagenaseinhibitoren und/oder Stromelysininhibitoren (sei es als freie Base oder als Salz) zu verbessern, und darüber hinaus wurden auch Aktivitätserhöhungen gewünscht. Es ist jedoch nicht einfach, vorherzusagen, welche Variationen bei bekannten Verbindungen zur Erhohung oder selbst zum Erhalt der Aktivität vorteilhaft wären; man fand, daß gewisse Modifikationen bekannter Hydroxaminsäurederivate zu Aktivitätsverlust führen.
Gemäß einem ersten Aspekt der Erfindung wird eine Verbindung der allgemeinen Formel I zur Verfugung gestellt:
worin:
R¹ darstellt: ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub6;-A1kyl-, C&sub1;-C&sub6;- Alkenyl-, Phenyl-, Phenyl(C&sub1;-C&sub6;)Alkyl-, C&sub1;-C&sub6;-Alkylthiomethyl-, Phenylthiomethyl-, substituierte Phenylthiomethyl-, Phenyl(C&sub1;- C&sub6;)Alkylthiomethyl- oder Heterocyclylthiomethylgruppe; oder R¹ -S-Rx darstellt, wobei Rx eine Gruppe
darstellt;
R² ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl-, C&sub1;-C&sub6;-Alkenyl-, Phenyl (C&sub1;-C&sub6;)alkyl-, Cycloalkyl(C&sub1;-C&sub6;)alkyl-, oder Cycloalkenyl(C&sub1;- C&sub6;)alkylgruppe darstellt;
R³ die Seitenkette einer Aminosäure oder eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl-, Benzyl-, (C&sub1;-C&sub6;)Alkoxybenzyl-, Benzyloxy(C&sub1;-C&sub6;)alkyl- oder Benzyloxybenzylgruppe darstellt;
R&sup4; ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe darstellt;
R&sup5; eine (CH&sub2;)nA-Gruppe darstellt;
n eine ganze Zahl von 1 bis 6 ist; und
A eine Hydroxy-, (C&sub2;-C&sub7;)Acyloxy-, (C&sub1;-C&sub6;)Alkylthio-, Phenylthio-, (C&sub2;- C&sub7;)Acylamino- oder N-Pyrrolidongruppe darstellt,
oder ein Salz und/oder N-Oxid und/oder (wenn die Verbindung eine Thioverbindung ist) ein Sulfoxid oder Sulfon davon.
Im folgenden schließt in dieser Beschreibung der Begriff "Verbindung" ein "Salz" ein, soweit es nicht der Kontext anders erfordert.
Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "C&sub1;-C&sub6;-Alkyl" eine gerad- oder verzweigtkettige Alkyleinheit mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen einschließlich beispielsweise Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, t-Butyl, Pentyl und Hexyl und verwandte Begriffe (wie "C&sub1;-C&sub6;Alkoxy") sind dementsprechend zu konstruieren.
Der Begriff "C&sub1;-C&sub6;-Alkenyl" bezeichnet eine gerad- oder verzweigtkettige Alkyleinheit mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen und außerdem einer Doppelbindung mit gegebenenfalls entweder E- oder Z-Stereochemie. Dieser Begriff würde beispielsweise einschließen: α, β-ungesättigtes Methylen, Vinyl, 1-Propenyl, 1- und 2-Butenyl und 2-Methyl-2-propenyl.
Der Begriff "Cycloalkyl" bezeichnet eine gesättigte alicyclische Einheit mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen und schließt beispielsweise Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl ein.
Der Begriff "Cycloalkenyl" bezeichnet eine ungesättigte alicyclische Einheit mit 3 bis 8 Kohlenstoffatomen und schließt beispielsweise Cyclopropenyl, Cyclobutenyl, Cyclopentenyl und Cyclohexenyl ein.
Der Begriff "Heterocyclylthiomethyl" bezeichnet eine Methylgruppe, die mit einem heterocyclischen Thiol, beispielsweise Pyridin-2-thiol, Pyridin-4-thiol, Thiopen-2-thiol oder Pyrimidin-2-thiol substituiert ist.
Der Begriff "substituiert", im Zusammenhang mit einem Phenyl- oder anderen organischen Ring bedeutet substituiert mit bis zu vier Substituenten, von denen jeder unabhängig sein kann: C&sub1;-C&sub6;-Alkyl, C&sub1;-C&sub6;- Alkoxy, Hydroxy, Thiol, C&sub1;-C&sub6;-Alkylthiol, Amino, Halo (einschließlich Fluoro, Chloro, Bromo und Iodo), Trifluormethyl, Nitro, -COOH, -COONH&sub2; oder CONHRA, wobei RA eine C&sub1;-C&sub6;-Alkylgruppe oder die charakteristische Seitenkette einer Aminosäure, wie Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Phenylalanin, Tryptophan, Methionin, Glycin, Serin, Threonin, Cystein, Tyrosin, Asparagin, Glutamin, Asparaginsäure, Glutaminsäure, Lysin, Arginin oder Histidin, darstellt.
Der Begriff "Aminosäureseitenkette" bedeutet eine charakteristische Seitenkette, die an die -CH(NH&sub2;) (COOH) -Einheit in den folgenden R- oder S- Aminosäuren gebunden ist: Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Phenylalanin, Tyrosin, Tryptophan, Serin, Threonin, Cystein, Methionin, Asparagin, Glutamin, Lysin, Histidin, Arginin, Glutaminsäure und Asparaginsäure.
In den erfindungsgemäßen Verbindungen gibt es aufgrund des Vorliegens von asvmmetrischen Kohlenstoffatomen mehrere chirale Zentren. Das Vorliegen von mehreren asymmetrischen Kohlenstoffatomen erzeugt eine Anzahl von Diastereomeren mit der geeigneten R- oder S-Stereochemie an jedem chiralen Zentrum. Die allgemeine Formel I und, soweit angebracht, alle weiteren Formeln in dieser Beschreibung, sind so zu verstehen, daß sie alle Stereoisomere und Mischungen (z.B. racemische Mischungen) einschließen. Verbindungen, in denen das chirale Zentrum am Substituenten R³ die S- Stereochemie hat, sind bevorzugt.
Stärker oder weitere bevorzugte Verbindungen schließen solche ein, bei denen unabhängig oder in beliebiger Kombination:
R¹ ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub4;-Alkyl-, (beispielsweise Methyl-), Phenylthiomethyl- oder Heterocyclylthiomethyl- (beispielsweise Thiophenylthiomethyl)-Gruppe darstellt;
R² eine C&sub3;-C&sub6;-Alkyl- (beispielsweise Isobutyl oder n-Pentyl)-Gruppe darstellt;
R³ eine Benzyl-, 4-(C&sub1;-C&sub6;)Alkoxyphenylmethyl- oder Benzyloxybenzyloxybenzylgruppe darstellt;
R&sup4; ein Wasserstoffatom darstellt;
n den Wert 1, 2 oder 3 hat; und/oder
A eine Hydroxy-, Acetoxy-, Acetylamino-, Ethylthio- oder N-Pyrrolidongruppe darstellt.
Besonders bevorzugte Verbindungen schließen ein:
1. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl)-L-phenylalanin-N-(2- hydroxyethyl)amid;
2. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-hydroxyethyl)-N-methylamid;
3. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2- ethylthioethyl)amid;
4. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(N-acetyl- 2-aminoethyl)amid;
5. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(2- pyrrolidon)propyl)amid;
6. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(2- pyrrolidon)propyl)amid-Natriumsalz;
7. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2- acetoxyethyl)amid;
8. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (3-(2-pyrrolidon)propyl)amid;
9. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- methyl-N-(2-hydroxyethyl)amid;
10. [4-(N-Hydroxyamino)2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (2-hydroxyethyl)amid;
11. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl)-L-phenylalanin-N- (3-(2-pyrrolidon)propyl)amid-Natriumsalz;
und gegebenenfalls deren freie Basen, freie Säuren und Salze. Verbindungen 8 und 5 sind besonders bevorzugt, und Verbindung 8 ist am stärksten bevorzugt.
Verbindungen der allgemeinen Formel I können nach einem beliebigen geeigneten bekannten Verfahren und/oder nach dem folgenden Verfahren hergestellt werden, das selbst einen Teil der Erfindung darstellt.
Gemäß einen zweiten Aspekt der Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung einer wie oben definierten Verbindung der allgemeinen Formel I zur Verfügung gestellt, welches umfaßt:
(a) Entfernen von Schutzgruppen (beispielsweise durch Hydrieren) von einer Verbindung der allgemeinen Formel III
worin:
R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind und Z eine Schutzgruppe darstellt, beispielsweise eine Benzylgruppe; oder
(b) Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel IV
worin: R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind,
mit Hydroxylamin oder einem Salz davon; und
(c) gegebenenfalls nach Schritt (a) oder Schritt (b), Umwandeln einer Verbindung der allgemeinen Formel I in eine andere Verbindung der allgemeinen Formel I.
Verbindungen der allgemeinen Formel I, die Sulfoxide oder Sulfone sind, können aus Thiolverbindungen der allgemeinen Formel I durch Oxidation erhalten werden. Alternativ können Thiole der allgemeinen Formel III oder IV oxidiert werden. Verbindungen der allgemeinen Formel I, die Disulfide sind (d.h. Verbindungen, in denen R¹ SRx ist), können aus Thiolverbindungen der allgemeinen Formel I durch milde Oxidation mit beispielsweise Iod in Methanol erhalten werden.
Eine Verbindung der allgemeinen Formel III kann durch Kopplung, beispielsweise durch herkömmliche Kopplungstechniken, einer Verbindung der allgemeinen Formel IV mit einen O-geschützten (beispielsweise Benzyl-) Hydroxylamin erhalten werden oder kann erhalten werden, indem man eine Verbindung der allgemeinen Formel V
worin: R¹, R² und R³ wie in der allgemeinen Formel I definiert sind und Z eine Schutzgruppe wie Benzyl darstellt,
mit einer Verbindung der allgemeinen Formel VI
NHR&sup4;R&sup5; (VI)
umsetzt.
Eine Verbindung der allgemeinen Formel V kann durch Hydrolyse einer Verbindung der allgemeinen Formel VII
worin:
R¹, R² und R³ wie in der allgemeinen Formel I definiert sind,
R&sup6; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy-, Benzyloxy- oder substituierte (z.B. 4-Nitro-)- Benzyloxygruppe darstellt und Z eine Schutzgruppe darstellt, in Gegenwart einer Base wie Natriumhydroxid hergestellt werden.
Eine Verbindung der allgemeinen Formel VII kann durch Kopplung, beispielsweise durch herkömmliche Kopplungstechniken, einer Verbindung der allgemeinen Formel VIII mit einem O-geschützten (beispielsweise Benzyl-)hydroxylamin erhalten werden
worin:
R¹, R² und R³ wie in der allgemeinen Formel I definiert sind und R&sup6; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy-, Benzyloxy- oder substituierte Benzyloxygruppe darstellt.
Eine Verbindung der allgemeinen Formel VIII kann hergestellt werden, indem man eine Verbindung der allgemeinen Formel IX hydriert und (z.B. thermisch) decarboxyliert:
worin:
R¹, R² und R³ wie in der allgemeinen Formel I definiert sind, R&sup8; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl- oder Benzylgruppe darstellt, R&sup6; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy-, Benzyloxy- oder substituierte Benzyloxygruppe darstellt und R&sup7; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkoxycarbonyl- oder Benzyloxycarbonylgruppe darstellt.
Eine Verbindung der allgemeinen Formel IX kann durch Umsetzung einer substituierten Säure der allgemeinen Formel X
worin:
R¹ und R² wie in der allgemeinen Formel I definiert sind, R&sup8; eine C&sub1;- C&sub6;-Alkyl- oder Benzylgruppe darstellt und R&sup7; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkoxycarbonyl- oder Benzyloxycarbonylgruppe darstellt,
mit einem Aminosäurederivat der allgemeinen Formel (XI)
worin:
R³ wie in der allgemeinen Formel I definiert ist und R&sup6; eine C&sub1;-C&sub6;- Alkoxy-, Benzyloxy- oder substituierte Benzyloxygruppe darstellt, hergestellt werden.
Alternativ kann eine Verbindung der allgemeinen Formel IV hergestellt werden, indem man bei einer Verbindung der allgemeinen Formel XII (beispielsweise durch Hydrolyse unter Säure- oder Basekatalyse) Estergruppen entfernt:
worin:
R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind und R&sup8; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl- oder Benzylgruppe darstellt.
Eine Verbindung der allgemeinen Formel XII kann auf eine analoge Weise wie bei der Herstellung einer Verbindung der Formel IX hergestellt werden, indern man eine substituierte Säure der allgemeinen Formel XIII
worin
R¹ und R² wie in der allgemeinen Formel I definiert sind und R&sup8; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl- oder Benzylgruppe darstellt,
mit einem Aminosäurederivat der allgemeinen Formel XIV
worin:
R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind, umsetzt.
In einer weiteren Synthesevariante kann eine Verbindung der wie oben definierten allgemeinen Formel X, in der R¹ ein Wasserstoffatom darstellt, umgesetzt werden mit einer Verbindung der allgemeinen Formel XIV unter Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel XV
worin:
R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind, R&sup8; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl- oder Benzylgruppe darstellt, und R&sup7; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkoxycarbonyl- oder Benzyloxycarbonylgruppe darstellt.
Eine Verbindung der allgemeinen Formel XV, worin R&sup8; Benzyl darstellt und R¹ Benzyloxycarbonyl ist, kann zur Malonsäure hydriert werden; dann ergibt eine Behandlung mit wäßrigem Formaldehyd und Piperidin eine Verbindung der Formel XVI
worin:
R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind.
Verbindungen der allgemeinen Formel XVI ergeben durch Behandlung mit den geeigneten Thiolen die Säuren der allgemeinen Formel IV, in denen R¹ ein substituiertes Thiomethylderivat ist. Thiomethylderivate können gegebenenfalls zu Sulfoxiden oder Sulfonen oxidiert werden.
Die Ausgangsstoffe (Verbindungen der allgemeinen Formel IX, X, XIII und XIV) und oben beschriebenen Reagentien sind entweder im Handel erhältlich oder können durch herkömmliche Verfahren aus handelsüblichen Materialien hergestellt werden. Wenn beispielsweise R¹ ein Wasserstoffatom darstellt, dann kann die substituierte Säure der allgemeinen Formel XIII durch Reaktion eines Aldehyds XVII
R&sup9;CHO (XVII)
worin R&sup9; ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub5;-Alkyl-, C&sub1;-C&sub5;-Alkenyl-, Phenyl(C&sub1;-C&sub5;)alkyl-, Cycloalkyl(C&sub1;-C&sub5;)alkyl- oder Cycloalkenyl(C&sub1;-C&sub5;)alkylgruppe darstellt, mit einem Succinatderivat der allgemeinen Formel XVIII
worin
R&sup8; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl- oder Benzylgruppe darstellt
unter Basekatalyse erhalten werden, wobei eine Mischung von Säuren der allgemeinen Formeln XIXa und XIXb entsteht
die durch Hydrierung, Veresterung und Hydrolyse zu den Säuren der allgemeinen Formel XIII umgewandelt werden kann.
Alternativ kann ein Ester der allgemeinen Formel XX mit einem esterstabilisierten Phosphoran der allgemeinen Formel XXI umgesetzt werden
was eine Verbindung der allgemeinen Formel XXII ergibt
worin R&sup8; eine C&sub1;-C&sub6;-Alkylgruppe darstellt, die durch Hydrierung weiter in der Säuren der allgemeinen Formel XIII umgewandelt werden kann.
Außerdem können die substituierten Ester hergestellt werden, indem ein Ester der allgemeinen Formel XXIII
worin Y Halogen darstellt und R&sup8; wie oben definiert ist, und R¹&sup0; entweder R¹ oder R² wie oben definiert ist, mit einem Malonatderivat der allgemeinen Formel XXIV
worin R¹¹ R² oder R¹ wie oben definiert ist, umgesetzt und die Alternative zu diesem Substituenten im Haloester verwendet wird.
Verbindungen der allgemeinen Formel III und IV sind wertvolle Zwischenprodukte bei der Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I. Gemäß einem dritten Aspekt der Erfindung wird daher eine Verbindung der allgemeinen Formel III zur Verfügung gestellt. Gemäß einem vierten Aspekt der Erfindung wird eine Verbindung der allgemeinen Formel IV zur Verfügung gestellt.
Wie oben erwähnt, sind Verbindungen der allgemeinen Formel I verwendbar in der Human- oder Veterinärmedizin, da sie aktive Inhibitoren von Metalloproteasen sind, die an Gewebeabbau beteiligt sind.
Gemäß einem fünften Aspekt der Erfindung wird eine Verbindung der allgemeinen Formel I zur Verwendung in der Human- oder Veterinärmedizin zur Verfügung gestellt, insbesondere in der Kontrolle (worunter Behandlung oder Prophylaxe verstanden wird) von Krankheiten, die mit Gewebeabbau verbunden sind, insbesondere der rheumatoiden Arthritis, und/oder bei der Förderung der Wundheilung.
Gemäß einem sechsten Aspekt der Erfindung wird die Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel I bei der Herstellung eines Mittels zur Kontrolle von Krankheiten zur Verfügung gestellt, die mit Gewebeabbau verbunden sind, insbesondere rheumatoider Arthritis, und/oder zur Förderung der Wundheilung. Verbindungen der allgemeinen Formel I können daher in einem Verfahren zur Behandlung einer Krankheit verwendet werden, die mit Gewebeabbau verbunden ist, insbesondere rheumatoider Arthritis, und/oder in einem Verfahren zur Förderung der Wundheilung, wobei dieses Verfahren in jedem Fall die Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel I an einen Mensch- oder Tierpatienten umfaßt.
Die Potenz von Verbindungen der allgemeinen Formel I zur Wirkung als Inhibitoren der Collagenase (einer Metalloprotease, die am Gewebeabbau beteiligt ist) wurde von Cawston und Barrett bestimmt (Anal. Biochem., 99, 340-345, 1979), und ihre Potenz zur Wirkung als Inhibitoren von Stromelysin wurde unter Verwendung des Verfahrens von Cawston et al (Biochem. J., 195, 159-165, 1981) bestimmt, wobei beide Techniken vollständiger in den Beispielen beschrieben werden und im gesetzlich erlaubten Rahmen als Referenz hier eingeschlossen werden.
Gemäß einem siebten Aspekt der Erfindung wird eine pharmazeutisch oder veterinärmedizinische Formulierung zur Verfügung gestellt, welche eine Verbindung der allgemeinen Formel I und einen pharmazeutisch und oder veterinärmedizinisch annehmbaren Träger umfaßt. Eine oder mehrere Verbindungen der allgemeinen Formel I können in Verbindung mit einem oder mehreren nicht-toxischen pharmazeutisch und oder veterinärmedizinisch annehmbaren Trägern und/oder Verdünnungsmitteln und/oder Hilfsstoffen und gewünschtenfalls anderen Wirkstoffen worliegen.
Gemäß einem achten Aspekt der Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutisch oder veterinärmedizinischen Formulierung gemäß dem siebten Aspekt zur Verfügung gestellt, wobei das Verfahren die Mischung einer Verbindung der allgemeinen Formel I und eines pharmazeutisch und oder veterinärmedizinisch annehmbaren Trägers umfaßt.
Verbindungen der allgemeinen Formel I können zur Verabreichung auf einem beliebigen Weg formuliert werden, der von der zu behandelnden Krankheit abhängen würde. Dies kann in Form von Tabletten, Kapseln, Pulvern, Granulaten, Pastillen, flüssigen oder Gelpräparaten, wie beispielsweise oralen, nasalen, topischen oder sterilen parenteralen Lösungen oder Suspensionen, geschehen.
Tabletten und Kapseln zur oralen Verabreichung können in Dosierungseinheiten-Darreichungsform vorliegen, und können herkömmliche Trägerstoffe, wie Bindemittel, beispielsweise Sirup, Acacia, Gelatine, Sorbit, Tragacanth oder Polyvinylpyrrolidon; Füllstoffe, beispielsweise Lactose, Zucker, Maisstärke, Calciumphosphat, Sorbit oder Glycin; Tablettenschmiermittel, beispielsweise Magnesiumstearat, Talk, Polyethylenglykol oder Silica; Tablettensprengmittel, beispielsweise Kartoffelstärke, oder annehmbare Benetzungsmittel, wie Natriumlaurylsulfat, enthalten. Die Tabletten können nach in der pharmazeutischen Praxis wohlbekannten Verfahren dragiert werden.
Orale Flüssigpräparate können beispielsweise in Form von wäßrigen oder öligen Suspensionen, Lösungen, Emulsionen, Sirupen oder Elixieren vorliegen oder können als trockenes Produkt zur Wiederherstellung mit Wasser oder einem anderen geeigneten Träger vor der Verwendung dargereicht werden. Solche Flüssigpräparate können herkömmliche Additive enthalten wie Suspendiermittel, beispielsweise Sorbit, Sirup, Methylcellulose, Glukosesirup, Gelatine, hydrierte eßbare Fette; Emulgiermittel, beispielsweise Lecithin, Sorbitanmonooleat oder Acacia; nicht-wäßrige Träger (die eßbare Öle einschließen können), beispielsweise Mandelöl, fraktioniertes Kokosnußöl, ölige Ester, beispielsweise mit Glycerin, Propylenglykol oder Ethylalkohol; Konservierungsstoffe, beispielsweise Methyl- oder Propyl-p- hydroxybenzoat oder Sorbinsäure und gewünschtenfalls herkömmliche Aroma- oder Farbstoffe.
Die bei der oralen Verabreichung angewandte Dosierungseinheit kann etwa 1 bis 250 mg, vorzugsweise von etwa 25 bis 250 mg, einer Verbindung der allgemeinen Formel I enthalten. Eine geeignete Tagesdosis für einen Säuger kann in breitem Umfang in Abhängigkeit vom Zustand des Patienten variieren und wird im Ende von der Beurteilung des Arztes oder Tierarztes abhängen. Jedoch kann eine Dosis der Verbindung der allgemeinen Formel I von etwa 0,1 bis 300 mg/kg Körpergewicht, insbesondere von etwa 1 bis 100 mg/kg Körpergewicht, geeignet sein.
Zur topischen Verabreichung auf die Haut kann das Arzneimittel zu einer Creme, Lotion oder Salbe hergerichtet werden. Creme- oder Salbenformulierungen, die für das Arzneimittel verwendet werden können, sind herkömmliche Formulierungen, die fachbekannt sind und beispielsweise beschrieben sind in Standardlehrbüchern der Pharmazie wie beispielsweise der British Pharmacopoeia.
Für topische Anwendung in das Auge kann das Arzneimittel zu einer Lösung oder Suspension in einem geeigneten sterilen wäßrigen oder nicht-wäßrigen Träger hergerichtet werden. Zusatzstoffe, beispielsweise Puffer, wie Natriummetabisulfit oder Dinatriumedeat; Konservierungsstoffe einschließlich bacterizider und fungizider Mittel, wie Phenylquecksilberacetat oder -nitrat, Benzalkoniumchlorid oder Chlorhexidin und Verdicker wie Hypromellose können ebenfalls eingeschlossen werden.
Die zur topischen Anwendung eingesetzte Dosis wird natürlich von der Größe der zu behandelnden Fläche abhängen. Für die Augen wird eine jeweilige Dosis typischerweise im Bereich von 10 bis 100 mg Verbindung der allgemeinen Formel I liegen.
Der Wirkstoff kann auch parenteral in einem sterilen Medium verabreicht werden. Das Arzneimittel kann in Abhängigkeit von dem verwendeten Träger und der Konzentration entweder im Flüssigträger suspendiert oder gelöst sein. Vorteilhafterweise können Hilfsstoffe wie ein Lokalanästhetikum, Konservierungsstoffe und Pufferstoffe im Flüssigträger gelöst werden.
Zur Verwendung bei der Behandlung der rheumatoiden Arthritis können die erfindungsgemäßen Verbindungen auf oralem Weg verabreicht wurden oder durch intra-artikuläre Injektion in das befallene Gelenk. Die Tagesdosis für einen 70 kg Säuger wird im Bereich von 10 mg bis 1 g Verbindung der allgemeinen Formel I liegen.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, sollen aber ihren Umfang in keiner Weise beschränken. Die folgenden Abkürzungen wurden in den Beispielen verwendet:
DCC - Dicyclohexylcarbodiimid
DCM - Dichlormethan
DCU - Dicyclohexylharnstoff
DIPE - Diisopropylether
DMF - N,N-Dimethylformamid
HOBT - Hydroxybenztriazol
NMM - N-Methylmorpholin
TFA - Trifluoressigsäure
THF - Tetrahydrofuran
WSCDI - N-(Dimethylaminoethyl)-N'-ethylcarbodiimid

Beispiele

Beispiel 1

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-hydroxyethyl)-amid

(a) [4-Benzyloxy-3-benzyloxycarbonyl-3R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalaninmethylester

Benzyl-(2-benzyloxycarbonyl-5-methyl-2R-tert-butoxycarbonyl)-hexanoat (52 g, 115 mmol) wurde bei Raumtemperatur mit 5 % Wasser in TFA (250 ml) 1,5 h gerührt. Danach wurde das TFA unter reduziertem Druck abgezogen und dann der Rückstand mit Toluol azeotrop destilliert (3 x 250 ml).
Die rohe Säure aus dieser Reaktion wurde in DCM/DMF (4:1) gelöst, dann wurden HOBT (16 g, 118 mmol), NMM (12 g, 118 mmol) und WSCDI (22 g, 115 mmol) bei Raumtemperatur zugegeben. Nach 20 min wurde ein weiteres Äquivalent NMM (12 g, 118 mmol) zugegeben, gefolgt von L-Phenylalaninmethylesterhydrochlorid (23 g, 107 mmol). Diese Lösung wurde über Nacht gerührt und dann unter Vakuum konzentriert. Der ölige Rückstand wurde in DCM gelöst, dann mit 10 % Citronensäure (2 x 250 ml), mit 10 % Natriumbicarbonat (2 x 250 ml) und einmal mit gesättigter Kochsalzlösung (250 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und dann das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt, was die Titelverbindung als Öl ergab (50,9 g, 79 %).
δH (250 MHz, CDCl&sub3;), Diastereomerenmischung 3:1) Hauptdiastereomer: 0,72 (3H, d, J= 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0,74 (3H, d, J = 6Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0,80 - 1,00 (2H, m, CHCH&sub2; + CHMe&sub2;), 1,40 - 1,60 (2H, m, CHCH&sub2; + CHCH&sub2;), 2,95 (1H, dd, J = 14,6 Hz, CH&sub2;Ph), 3,07 (1H, dd, J = 14,5 Hz, CH&sub2;Ph), 3,64 (3H, s, CO&sub2;Me), 3,82 (1H, d, J = 10 Hz, CH(CO&sub2;Bn)&sub2;), 4,82 (1H, m, CHCO), 5,0 - 5,2 (2H, m, OCH&sub2;Ph), 6,2 (1H, d, J = 8 Hz, NH) und 7,10 - 7,40 (15H, m, Ph). Nebendiastereomer: 0,63 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0,68 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 3,67 (3H, s, CO&sub2;Me) und 3,75 (1H, d, J = 8 Hz, CH(CO&sub2;Bn)&sub2;)

(b) [4-Hydroxy-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalaninmethylester

Das produkt von oben (50,9 g, 91 mmol) wurde in Ethanol (100 ml) gelöst und bei Raumtemperatur mit Aktivkohlepellets 1 h gerührt. 10 % Palladium auf Kohle (20 g) in Ethylacetat wurde in der ethanolischen Lösung aufgeschlämmt. Cyclohexen (20 ml) in Ethanol (100 ml) wurde zugegeben und die Mischung 5 h auf Rückfluß gebracht. Die Reaktionsmischung wurde zur Entfernung des Katalysators filtriert, dann die Lösungsmittel unter reduziertem Druck eingedampft, was ein gelbes Öl hinterließ (29,8 g). Dieses Öl wurde in Xylol (500 ml) aufgenommen und 10 min auf Rückfluß erhitzt. Das Xylol wurde unter reduziertem Druck entfernt, und übrig blieb das Rohmaterial als Öl (26,5 g).

(c) [4-(N-Benzyloxyarnino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalaninmethylester

Die rohe Säure (26,5 g, 79 mmol) wurde in DCM/DMF gelöst (4:1, 500 ml), dann wurden NMM (9,6 g, 95 mmol) HOBT (12,8 g, 95 mmol) und WSCDI (18,2 g, 95 mmol) und die Mischung bei Raumtemperatur gerührt, bis im DC die vollständige Umwandlung in den aktivierten Ester angezeigt wurde (etwa 10 min). Zu dieser Lösung, die den aktiven Ester enthielt, wurde Benzylhydroxylaminhydrochlorid (15,2 g, 95 mmol) und ein weiteres Äquivalent NMM (9,6 g, 95 mmol) in der Lösungsmittelmischung (80 ml) zugegeben. Nach Rühren bei Raumtemperatur über Nacht wurde DCM (250 ml) zugegeben und dann die Mischung mit Citronensäure (2 x 250 ml), 10 % Natriumhydrogencarbonatlösung (2 x 250 ml) und Kochsalzlösung (250 ml) gewaschen und dann schließlich über Natriumsulfat getrocknet. Die Lösung wurde filtriert und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt, was ein Öl (27,2 g) ergab, das durch Säulenchromatographie unter Verwendung von Ether als Eluierungsmittel gereinigt wurde, was die Titelverbindung ergab (11 g, 23,7 mmol, 30 %).
δH (250 MHz, CDCl&sub3;) 0,84 (6H, m, CH(CH&sub3;)&sub2;), 1,16 (1H, m, CHMe&sub2;), 1,51 (2H, m, CH&sub2;CHMe&sub2;), 2,1 - 2,4 (2H, bm, CH&sub3;CONHOBn), 2,73 (1H, m, CH&sub2;CHCO), 3,06 (2H, d, J = 6 Hz, CH&sub2;Ph), 3,68 (3H, s, CO&sub2;Me), 4,8 - 5,0 (3H, s + m, OCH&sub2;Ph und COCHNH), 6,25 (1H, d, J = 8 Hz, NH), 7,05 - 7,50 (10H, m, Ph) und 8,66 (1H, s, NHOBn).

(d) [4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin

[4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutylsuccinyl-L-phenylalaninmethylester (9,5 g, 21 mmol) wurde in Methanol (200 ml) gelöst und eine Lithiumhydroxidlösung (0,5 N, 84 ml, 42 mmo1l) unter Rühren bei Raumtemperatur zugegeben. Als die Reaktion vollständig war, wie durch DC beurteilt wurde, wurde das Methanol durch Eindampfen entfernt und die verbleibende wäßrige Phase auf pH 1 mit Citronensäure angesäuert. Der ausgefallene Feststoff wurde abfiltriert und getrocknet, während das Filtrat mit DCM (500 ml) extrahiert und über Natriumsulfat getrocknet wurde. Entfernung des Lösungsmittels von der organischen Phase hinterließ ein Öl (5,38 g), das aus Diisopropylether und Methanol umkristallisiert werden konnte, so daß ein Material entstand, das mit dem Feststoff, der während der Ansäuerung ausgefallen war, identisch war. Diese zwei Ansätze wurden vereinigt, was die Titelverbindung ergab (6,40 g, 15 mmol, 71 %).
Schmelzpunkt 161-162ºC
νmax (KBr) 3300, 3020, 2980, 1710, 1650, 1630, 1550, 1265, 740 und 700 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, CDCl&sub3;/D&sub6;-DMSO) 0,80 - 0,87 (7H, m), 1,50 (2H, bm), 2,0 - 2,1 (2H, m), 2,91 - 3,14 (2H, m, CH&sub2;Ph), 4,77 (2H, s, OCH&sub2;Ph), und 7,18 - 7,36 (10H, m, Ph).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-CDCl&sub3;) 174,1, 173,1, 167,7, 137,9, 129,2-126,4, 76,9, 53,3, 40,7, 39,9, 36,8, 35,8, 25,3, 23,5 und 22,1.

(e) [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl)]-L-phenylalanin-N-(2- hydroxyethyl)-amid

[4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutylsuccinyl)-L-phenylalanin (7,50 g, 17,6 mmol) wurden in DCM (100 ml) gelöst und in Eis gekühlt. Triethylamin (1,96 g, 19,4 mmol) wurde zusammen mit Ethylchloroformiat (2,10 g, 19,4 mmol) zugesetzt und nach 10 min wurde Ethanolamin (1,55 g, 21,1 mmol) in DCM (10 ml) zugegeben. Nach 3 h bei Raumtemperatur wurde die Lösung mit Ethylacetat verdünnt, dann mit Natriumhydrogencarbonatlösung und Kochsalzlösung gewaschen und schließlich über Natriumsulfat getrocknet. Entfernung des Lösungsmittels unter reduziertem Druck ergab das rohe Benzylhydroxamat, das aus Ethylacetat/Hexan umkristallisiert wurde (2,6 g, 5,5 mmol).
Das obige Rohmaterial wurde in Cyclohexen/Ethanol (10 % Lösung, 55 ml) gelöst, 10 % Palladium auf Kohle (250 mg) zugegeben und dann die Mischung refluxiert, bis das Ausgangsmaterial im DC verschwunden war (ca. 30 min). Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt, was einen Feststoff hinterließ, der aus Methanol und DIPE umkristallisiert werden konnte. Das gewünschte Produkt (1,54 g, 4,00 mmol, 74 %) wurde durch Filtration gesammelt.
Schmelzpunkt 156-158ºC
[α]D = -21,5 (c=1, MeOH)
νmax (KBr) 3300, 2950, 1650, 1550 und 700 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, CDCl&sub3;) 0,72 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0,77 (3H, d, J = 6Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0,95 (1H, m, CHCH&sub2;), 1,28 (2H, m, CH(CH&sub3;)&sub2; + CHCH&sub2;), 1,92 (2H, m, CH&sub2;CONHOH), 2,61 (1H, bm, CHCO), 2,80 (1H, dd, J = 14,12 Hz, CH&sub2;Ph), 2,00 - 3,20 (3H, m, NCH&sub2; + CH&sub2;Ph), 4,41 (1H, m, NCHCO), 4,65 (1H, bt, OH), 7,22 (5H, m, Ph), 7,86 (1H, t, J = 6Hz, CONCH&sub2;), 8.07 (1H, d, J = 8 Hz, CONH) und 8,76 (1H, s, NHOH).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO) 174,0, 171,2, 138,3, 129,2, 128,1, 126,2, 59,8, 54,0, 41,6, 37,3, 35,8, 25,3, 23,5 und 22,0
Analyse berechnet für C&sub1;&sub9;H&sub2;&sub9;N&sub3;O&sub5;
Gefordert C 60,14 H 7,70 N 11,07
Gefunden C 59,97 H 7,68 N 11,10

Beispiel 2

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-hydroxyethyl)-N-methylamid.

Unter Verwendung des in Beispiel 1e beschriebenen Verfahrens wurde [4-(N- Benzyloxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin (0,5 g, 1,17 mmol) mit N-Methylethanolamin (100 mg, 1,29 mmol) gekoppelt und dann das Produkt hydriert, was die Titelverbindung ergab (97 mg, 0,25 mmol, 21 %).
Schmelzpunkt 136,0 - 137,0ºC
[α] = +1,1 (C=1, MeOH)
νmax (KBr) 3600 - 3100, 2960, 1680, 1560, 940, 750 und 700 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, CDCl&sub3;/D&sub6;-DMSO, 1:1) 0,74 (6H, m, CH(CH&sub3;)&sub2;), 1,00 (1H, m, CH&sub2;CHMe&sub2;), 1,36 (2H, m, CH&sub2;CHMe&sub2;), 2,00 (2H, m, CH&sub2;NHOH), 2,60 - 3,00 (3H, m, + 3H, 2xs), 3,39 (2H, m), 4,42 - 4,70 (1H, m, OH), 4,80 - 5,00 (1H, m, CH&sub2;Ph), 7,14 (5H, m, Ph), 7,97 (1H, d, J = 7Hz, NH) und 8,50 (1H, s, NHOH)
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO, 1:1 Rotamerengemisch) 173,9, 173,8, 171,3, 170,3, 167,5, 138,2, 137,9, 129,4, 128,1, 126,4, 126,3, 58,7, 58,4, 51,2, 50,2, 50,0, 49,7, 40,7, 40,5, 39,8, 27,7, 37,4, 36,0, 35,9, 33,9, 25,4, 23,5, 23,4 und 22,1.

Beispiel 3

[4-(N-Hydroxyamirio)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N(2- ethylthioethyl)amid.

Unter Verwendung des in Beispiel 1e beschriebenen Verfahrens wurde [4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin (0,5g, 1,17 mmol) mit 2-(Thioethyl)-1-aminoethanhydrochlorid (183 mg, 1,29 mmol) gekoppelt und dann das Produkt hydriert, was die Titelverbindung ergab (163 mg).
Schmelzpunkt 169 - 171ºC
[α]D = -19,7ºC (c=1, MeOH)
δmax (KBr) 3280, 2950, 2920, 1655, 1640 und 1540 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, D&sub6;-DMSO) 0,72 (3H, d, J = 6 Hz), 0,77 (3H, d, J = 7Hz), 0,95 (1H, m), 1,17 (3H, t, J = 7Hz), 1,29 (2H, m), 1,93 (2H, m), 2,49 (4H, m), 2,62 (1H, m), 2,82 (1H, dd, J = 14,10 Hz), 3,03 (1H, dd, J = 14,5 Hz), 3,19 (2H, m), 4,40 (1H, m), 7,22 (5H, m), 8,07 (2H, m), 8,75 (1H, s) und 10,39 (1H, s).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO) 174,0, 171,1, 167,7, 138,3, 129,2, 128,1, 126,3, 54,1, 40,8, 40,7, 38,8, 37,3, 35,8, 30,0, 25,3, 24,9, 23,5, 22,0 und 14,9.

Beispiel 4

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(N-acetyl- 2-aminoethyl)amid.

Unter Verwendung des in Beispiel 1e beschriebenen Verfahrens wurde [4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin (0,43 g, 1,0 mmol) mit N-Acetyl-1,3-ethyldiamin (133 mg, 1,30 mmol) gekoppelt und dann das Produkt hydriert, was die Titelverbindung ergab (176 mg, 0,42 mmol, 42 %).
Schmelzpunkt 167 - 169ºC
[α]D = -4,2º (c=1, MeOH)
νmax (KBr) 3280, 2930, 1640, 1540 und 700 cm&supmin;¹ (250 MHz, D&sub6;-DMSO) 0,72 (3H, d, J = 6 Hz), 0,77 (3H, d, J = 6 Hz), 1,30 (2H, t, J = 10 Hz), 1,78 (3H, s), 2,06 (1H, m), 2,18 (1H, m), 2,87 (2H, m), 3,04 (2H, s), 3,13 (2H, q, J = 6 Hz), 3,36 (1H, m), 7,21 (5H, m), 7,78 (1H, s), 7,98 (1H, s), 8,08 (1H, d, J = 8 Hz) und 8,77 (1H, s).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO) 174,8, 171,2, 169,4, 167,8, 138,3, 129,2, 128,1, 128,2, 54,2, 37,2, 35,8, 25,3, 23,4, 22,8 und 22,01.
Analyse berechnet für C&sub2;&sub1;H&sub3;&sub2;N&sub4;O&sub5;.0,4H&sub2;O
Gefordert C 58,97 H 7,73 N 13,10
Gefunden C 59,07 H 7,60 N 12,90

Beispiel 5

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(2- pyrrolidon)propyl)amid.

Unter Verwendung des in Beispiel 1e beschriebenen Verfahrens wurde [4-(N- Benzyloxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin (0,43 g, 1,0 mmol) mit 1-(3-Aminopropyl)-2-pyrrolidinon (180 mg, 1,26 mmol) gekoppelt und dann das Produkt hydriert, was die Tite1lverbindung ergab (280 mg, 0,61 mmol, 61 %),
Schmelzpunkt 174 - 176ºC
[α]D = -8,7º (c=1,35, MeOH
νmax (KBr) 3270, 3220, 2960, 1660, 1640 und 1525 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, D&sub6;-DMsO) 0,72 (3H, d, J = 6 Hz), 0,77 (3H, d, J = 6 Hz), 0,98 (1H, m), 1,33 (2H, m), 1,52 (2H, m), 1,87 - 2,06 (4H, m), 2,20 (2H, t, J = 8 Hz), 2,62 (1H, m), 2,83 (1H, dd, J = 14,9 Hz), 2,99 (1H, t, J = 3 Hz), 3,10 (2H, t, J = 7 Hz), 3,28 (2H, m), 4,39 (1H, m), 7,22 (5H, m), 7,91 (1H, m), 8,09 (IH, d, J = 8 Hz), 8,80 (1H, bs) und 10,4 (1H, bs).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMsO) 174,0, 171,0, 167,7, 138,3, 129,2, 128,1 126,2, 54,2, 46,6, 40,9, 40,6, 39,6, 38,7, 37,4, 36,5, 35,8, 30,6, 26,9, 25,3, 23,4, 22,1 und 17,7.
Analyse berechnet für C&sub2;&sub4;H&sub3;&sub6;N&sub4;O&sub5;
Gefordert C 62,59 H 7,88 N 12,16
Gefunden C 62,67 H 7,96 N 12,22

Beispiel 6

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(2- pyrrolidon)propyl)amid-Natriumsalz

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(1- pyrrolidon)propyl)amid (50 mg, 0,109 mmol) wurde in Methanol (20 ml) gelöst und Natronlauge (1,0 M, 0,11 ml) zugegeben, was eine homogene Lösung ergab. Das Methanol wurde unter reduziertem Druck entfernt und dann die restliche wäßrige Lösung gefriergetrocknet, was die Titelverbindung ergab (52 mg, 0,108 mmol, 99 %).
δH (250 MHz, D&sub6;-DMSO) 0,66 (3H, d, J = 6 Hz), 0,75 (3H, d, J = 6 Hz), 0,94 (1H, m), 1,04 (2H, m), 1,56 (2H, m), 1,92 (3H, m), 2,08 (1H, dd, J = 14,8 H&sub2;), 2,14 (2H, t, J = 8 Hz), 2,45 (1H, m), 2,83 (1H, dd, J = 14,10 Hz), 3,03 (2H, d, J = 6 Hz), 3,13 (4H, m), 3,23 - 3,48 (6H, m), 4,35 (1H, m), 7,20 (5H, m), 8,20 (1H, d, J = 8 Hz) und 8,53 (1H, s).

Beispiel 7

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-acetoxyethyl)amid

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-hydroxyethyl)-amid (Beispiel 1e, 148 mg, 0,22 mmol) wurde mit Dimethylaminopyridin (40 mg, 0,33 mmol) in DCM bei -30ºC gemischt, dann Essigsäureanhydrid (32 mg, 0,32 mmol) zugegeben und die Reaktion 25 min gerührt. Die Mischung wurde zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt, die organische Schicht abgetrennt und nacheinander mit Natriumhydrogencarbonat, Citronensäure und Kochsalzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet Reinigung durch Säulenchromatographie (Ethylacetat als Eluierungsmittel) ergab das geschützte Material (130 mg), das wie zuvor hydriert wurde, wodurch die Titelverbindung entstand (62 mg, 0,15 mmol, 46 %).
Schmelzpunkt 136 - 137 ºC
[α]D = -19,9º (c=1,2, MeOH)
νmax (KBr) 3280, 2955, 1745, 1660, 1645, 1550 und 1235 cm&supmin;¹ (250 MHz, CDCl&sub3;/D&sub6;-DMSO) 0,71 (3H, d, J = 6 Hz), 0,75 (3H, d, J = 6Hz), 0,99 (1H, m), 1,2 - 1,4 (2H, m), 1,96 (1H, m + 3H, s), 2,11 (1H, dd, J = 14,8 Hz), 2,59 (1H, m), 2,86 (1H, dd, J = 14,9 Hz), 3,06 (1H, dd, J = 14,5 Hz), 3,30 (2H, m), 3,95 (2H, t, J = 6 Hz), 4,44 (1H, m), 7,16 (5H, m) und 8.00 (2H, m).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO) 174,1, 171,3, 170,1, 168,0, 138,0, 129,1, 127,9, 126,0, 78,8, 62,4, 41,0, 40,9, 37,8, 37,3, 35,8, 25,3, 23,1, 21,9 und 20,7
Analyse berechnet für C&sub2;&sub1;H&sub3;&sub1;N&sub3;O&sub6;.0,4H&sub2;O
Gefordert C 58,84 H 7,48 N 9,80
Gefunden C 58,91 H 7,33 N 9,55

Beispiel 8

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(2- pyrrolidon)propyl)amid.

(a) 2S-tert-Butyl(3,3-di(benzyloxycarbonyl)-2,5-dimethyl)hexanoat

Benzyl(2-benzyloxycarbonyl-5-methyl)pentanoat (100 g, 0,29 mol) wurde in trockenem DMF (150 ml) gelöst und gekühlt, während Kalium-tert-butoxid (31,1 g, 0,28 mol) im Verlauf von 10 min portionsweise zugegeben wurde. Der Ansatz wurde dann eine weitere Stunde gerührt, bis der Feststoff gelöst war. Zur resultierenden Mischung, die auf -20 bis -30ºC gekühlt wurde, wurde trockenes tert-Butyl-2S-bromopropionat (60,6 g, 0,29 mol) in trockenem DMF (50 ml) im Verlauf von etwa 30 min zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei -20ºC 3 Tage lang und dann bei 5ºC 1 Tag stehengelassen, bevor sie durch Verteilung zwischen Ether und Ammoniumchloridlösung aufgearbeitet wurde. Die wäßrige Schicht wurde dreimal mit Ether extrahiert und dann die vereinigten organischen Schichten mit Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet. Entfernung des Lösungsmittels ergab die rohe Titelverbindung (141,2 g, 0,30 mol, 100 %).
[α]D = 33,0º (c=1,00, MeOH)
δH (250 MHz, CDCl&sub3;) 0,82 (6H, d, J = 6Hz), 1,28 (3H, t, J = 7 Hz), 1,40 (9H, s), 1,46 (2H, m), 1,76 (1H, m), 1,92 (1H, dd, J = 6,2 Hz), 5,11 (4H, m) und 7,27 (10H, m)
δC (62,9 MHz, CDCl&sub3;) 172,7, 170,3, 135,3, 128,2, 80,8, 66,9, 58,7, 45,2, 42,5, 27,8, 24,4, 23,9, 23,8 und 14,3

(b) 2S,3R-tert-Butyl-(3-carbonsäure-2,5-dimethyl)-hexanoat

Das Rohmaterial aus Beispiel 8a (141,2 g, 0,30 mol) wurde in Ethanol (200 ml) aufgenommen und mit Aktivkohle (10 g) 1 h refluxiert, um Katalysatorgifte zu entfernen. Cyclohexen (100 ml) und 10 % Palladium auf Kohle (14 g) wurde zugegeben und die Mischung 2 h am Rückfluß gehalten. Der Katalysator wurde durch Filtration durch Celite entfernt, und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck abgezogen.
Der ölige Rückstand wurde in Xylol (200 ml) aufgenommen und 30 min zur Decarboxylierung refluxiert. Die Lösung wurde mit Natriumcarbonatlösung (3 x 300 ml) extrahiert und diese wäßrige Lösung mit Ether gewaschen und dann auf pH 5 mit Citronensäure angesäuert. Die saure Lösung wurde mit Ethylacetat (3 x 200 ml) extrahiert und dann über Natriumsulfat getrocknet. Entfernung des Lösungsmittels ergab dann das rohe Titelprodukt (53,2 g, 0,22 mol, 73 %).
[α]D = 8,0º (c=1,00, MeOH)
δH (250 MHz, CDCl&sub3;) 0,76 (6H, 2 x d, J = 6 Hz), 1,02 (3H, m), 1,28 (9H, s), 1,46 (2H, m), 2,42 (1H, m) und 2,58 (1H, m)
δC (62,9 MHz, CDCl&sub3;) 173,9, 128,7, 46,5, 43,0, 39,1, 27,8, 26,2, 23,5, 21,4 und 14,9.

(c)[4-(tert-Butyloxy)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalaninmethylester

Die rohe Säure aus Beispiel 8b (45,0 g, 0,18 mol) wurde in DCM gelöst und dann HOBT (24,9 g, 0,18 mol) zugegeben. Die Lösung wurde abgekühlt und NMM (18 g, 0,18 mol), Phenylalaninmethylesterhydrochlorid (36,1 g, 0,17 mol) und DCC (38 g, 0,18 mol) zugegeben. Diese Lösung wurde über Nacht gerührt, im Vakuum konzentriert und dann der ausgefällte DCU abfiltriert. Der ölige Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, dann mit 10%iger Citronensäure (2 x 250 ml), mit 10%igem Natriumhydrogencarbonat (2 x 250 ml) und einmal mit gesättigter Kochsalzlösung (250 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und dann das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt, was die rohe Titelverbindung als Öl ergab (80,6 g, 0,20 mol, 120 %).

(d)[4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl)-L-phenylalaninmethylester

Der rohe tert-Butylester (80,6 g, 0,20 mol) wurde in Trifluoressigsäure/Wasser (95:5, 85 ml) gelöst und bei 4ºC über Nacht stehengelassen. Die Lösung wurde in DCM aufgenommen, die wäßrige Schicht mit DCM reextrahiert und dann die vereinigten organischen Schichten mit Natriumhydrogencarbonat (5 x 50 ml) extrahiert. Die basische Schicht wurde auf pH 4 mit Citronensäure angesäuert und dann mit Ethylacetat extrahiert. Trocknen und Entfernung des Lösungsmittels ergab die entsprechende Säure (40,4 g, 0,115 mol, 69 %).
Die rohe Säure (40,4 g, 115 mmol) wurde in DCM/DMF gelöst (4:1, 500 ml) und dann HOBT (17,18 g, 127 mmol) und DCC (26,1 g, 127 mmol) zugegeben und die Mischung bei Raumtemperatur gerührt, bis durch DC die vollständige Umwandlung in den aktivierten Ester angezeigt wurde (etwa 10 min). Zu dieser Lösung, die den aktiven Esster enthielt, wurde Benzylhydroxylamin gegeben (15,6 g, 127 mmol). Nach Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wurde DCM im Vakuum entfernt, der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen und dann der ausgefällte DCU durch Filtration entfernt. Die Lösung wurde mit Citronensäure (2 x 250 ml), 10 % Natriumhydrogencarbonatlösung (2 x 250 ml) und Kochsalzlösung (250 ml) gewaschen und schließlich über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck entfernt, was ein Öl (45,6 g) ergab, das durch Umkristallisation aus Ethanol und DIPE (7,66 g, 17 mmol, 15 %) gereinigt wurde.
δH (250 MHz, CDCl&sub3;) 0,47 (3H, d, J = 7 Hz), 0,74 (3H, d, J = 6 Hz), 0,33 (3H, d, J = 6 Hz), 1,35 (2H, m), 1,94 (1H, dd, J = 7,11 Hz), 2,38 (1H, m), 2,83 (1H, dd, J = 14,11 Hz), 3,06 (1H, dd, J 5,14 Hz), 3,29 (3H, s), 3,62 (3H, s), 4,58 (1H, m), 4,77 (2H, s), 7,20 (5H, m), 7,38 (5H, s) und 8,49 (1H, d, J = 8 Hz).

(e)[4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin

[4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalaninmethylester (7,66 g, 17 mmol) wurde in Methanol (120 ml) gelöst und Natronlauge (1,0 M, 20,3 ml, 20,3 mmol) wurde unter Rühren bei Raumtemperatur zugegeben. Als die Reaktion vollständig war, wie durch DC beurteilt wurde, wurde das Methanol durch Eindampfen entfernt und der Rückstand mit Ether extrahiert, um Ausgangsmaterial zu entfernen (2,1 g, 4,6 mmol, 21 % wiedergewonnen). Die wäßrige Phase wurde mit Citronensäure auf pH 4 angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert, was die Titelverbindung ergab (5,88 g, 13,3 mmol, 79 %).
δH (250 MHz, CDCl&sub3;) 0,47 (3H, d, J = 7 Hz), 0,74 (3H, d, J 6 Hz), 0,83 (3H, d, J = 6 Hz), 1,35 (2H, m), 1,94 (IH, dd, J = 7,11 Hz), 2,38 (1H, m), 2,83 (1H, dd, J = 14,11 Hz), 3,06 (1H, dd, J = 5,14 Hz), 3,29 (3H, s), 3,62 (3H, s), 4,58 (1H, m), 4,77 (2H, s), 7,20 (5H, m), 7,38 (5H, s) und 8,49 (1H, d, J = 8 Hz).

(f) [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-38-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(2-pyrrolidon)propyl)amid.

[4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin (400 mg, 0,9 mmol), HOBT (134 mg, 1,0 mmol) und NMM (102 mg, 1,0 mol) wurden in DCM/DMF (4:1, 10 ml) gelöst und in Eis gekühlt. 1-(3-Aminopropyl)-2-pyrrolidinon (142 mg, 1,0 mmol) wurden zusammen mit WSCDI (192 mg, 1,0 mmol) zugegeben. Nach 2 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mit Ethylacetat verdünnt, dann mit Natriumhydrogencarbonatlösung und Kochsalzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Entfernung des Lösungsmittels unter reduziertem Druck ergab das rohe Benzylhydroxamat, das aus Ethylacetat/Hexan umkristallisiert wurde (385 mg, 0,68 mmol).
Das obige Material wurde in Cyclohexen/Ethanol (10 % Lösung, 20 ml) gelöst, 10 % Palladium auf Kohle (50 mg) zugegeben und dann die Mischung refluxiert, bis gemäß DC das Ausgangsmaterial verschwunden war (ca. 30 min). Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt, was einen Feststoff hinterließ, der aus Ethylacetat/Ethanol umkristallisiert werden konnte. Das gewünschte Produkt (243 mg, 0,51 mmol, 76 %) wurde durch Filtration gewonnen.
Schmelzpunkt 198 - 200ºC
[α]D = 73,0º (c=1,00, MeOH)
νmax (KBr) 3380, 2960, 1635, 1345, 1030 und 715 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, D&sub6;-DMSO) 0,44 (3H, d, J = 7 Hz, CHCH&sub3;), 0,72 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0,80 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 1,32 (2H, m), 1,53 (2H, q, J = 7 Hz), 1,92 (4H, m), 2,21 (2H, t, J = 8 Hz), 2,37 (1H, m), 2,79 (1H, m), 2,93 (1H, d, J = 5 Hz), 3,01 (2H, m), 3,13 (2H, t, J = 7 Hz), 3,32 (6H, m), 4,54 (1H, m), 7,25 (5H, m), 7,80 (1H, t, J = 7 Hz), 8,20 (1H, d, J = 8 Hz, NH), 8,69 (1H, s) und 10,36 (1H, s).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO) 174,0, 173,9, 171,4, 171,2, 138,2, 129,3, 128,0, 126,3, 54,6, 47,0, 46,7, 37,7, 36,3, 30,7, 27,3, 25,4, 24,3, 21,5, 17,7 und 16,1.
Analyse berechnet für C&sub2;&sub5;H&sub3;&sub8;N&sub4;O&sub5;,0,5H&sub2;0
Gefordert C 62,20 H 7,93 N 11,50
Gefunden C 63,27 H 8,07 N 11,81

Beispiel 9

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- methyl-N-(2-hydroxyethyl)amid.

Unter Verwendung des in Beispiel 8f beschriebenen Verfahrens wurde [4-(N-Benzyloxyamino)-2R-isobutyl-38-methylsuccinyl]-L-phenylalanin (0,4 g, 0,91 mmol) mit N-Methylethanolamin (75 mg, 1,00 mmol) gekoppelt und dann das Produkt hydriert, was die Titelverbindung ergab (100 mg, 0,25 mmol, 27 %).
Schmelzpunkt 182 - 183ºC
[α]D = 27,0º (c=0,25, MeOH)
νmax (KBr) 3400, 3240, 2960, 1660 und 1545 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, D&sub6;-DMSO, Rotamerengemisch) 0,46 - 0,54 (3H, d, J = 6 Hz, CHCH&sub3;), 0,72 + 0,79 (6H, m, CH(CH&sub3;)&sub2;), 1,3 (2H, m), 2,0 (1H, m), 2,4 (1H, m), 2,81 + 3,03 (3H, 5, N(CH&sub3;)), 2,8 - 3,9 (8H, m), 5,0 (1H, m), 7,27 (5H, m) , 8,35 (1H, d, J = 8 Hz, NH) und 8,73 (1H, m).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO, Rotamerengemisch) 173,3, 173,2, 171,6, 171,4, 171,0, 138,3, 138.0, 129,4, 128,1, 128,0, 126,4, 126,3, 58,8, 58,5, 51,4, 50,2, 50,1, 49,9, 46,7, 40,1, 37,4, 37,1, 36,2, 33,9, 25,5, 25,4, 24,2, 24,1, 21,8, 21,7, 16,3 und 16,2
Analyse berechnet für C&sub2;&sub1;H&sub3;&sub3;N&sub3;O&sub5;.H&sub2;O
Gefordert C 59,28 H 8,29 N 9,87
Gefunden C 59,30 H 7,91 N 9,94

Beispiel 10

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (2-hydroxyethyl)amid.

Unter Verwendung des in Beispiel 13f beschriebenen Verfahrens wurde [4-(N-Benzyloxyainino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin (0,4g, 0,91 mmol) mit Ethanolamin (61 mg, 1,00 mmol) gekoppelt und dann das-Produkt hydriert, was die Titelverbindung ergab (51 mg, 0,13 mmol, 14 %).
Schmelzpunkt 208 - 210ºC
[α]D = 24,0º (c=0,30, MeOH)
νmax (KBr) 3280, 2960, 1635, 1540, 1450 und 1370 cm&supmin;¹
δH (250 MHz, D&sub6;-DMSO) 0,39 (3H, d, J = 6 Hz, CHCH&sub3;), 0,73 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0,80 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 1,33 (2H, t, J = 10 Hz), 1,94 (1H, t, J = 8 Hz), 2,34 (1H, t, J = 10 Hz), 2,77 (2H, t, J = 12 Hz), 3,01 (2H, dd, J = 11,3 Hz), 3,13 (2H, q, J = 6 Hz), 4,61 (1H, m), 4,66 (1H, m), 7,20 (5H, m), 7,73 (1H, s), 8,18 (1H, d, J = 8 Hz, NH) und 8,69 (1H, s).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO) 173,5, 171,4, 138,3, 128,1, 126,3, 59,9, 54,2, 46,8, 41,6, 37,4, 25,4, 24,3, 21,7 und 16,1.
Analyse berechnet für C&sub2;&sub0;H&sub3;&sub1;N&sub3;O&sub5;.0,5H&sub2;O
Gefordert C 59,68 H 8,01 N 10,44
Gefunden C 59,38 H 7,71 N 10,27

Beispiel 11

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (3-(2-pyrrolidon)propylamid-Natriumsalz

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (3-(1-pyrrolidon)propyl)amid (50 mg, 0,1 mmol) wurde in Methanol (1 ml) gelöst und Natronlauge (1,0 M, 2,0 ml) zugegeben, was eine homogene Lösung ergab. Das Methanol wurde unter reduziertem Druck entfernt und dann die übrige wäßrige Lösung gefriergetrocknet, was die Titelverbindung ergab (53 mg, 0,1 mmol, 100 %).
δH (250 MHz, D&sub6;-DMSO) 0,44 (3H, d, J = 7 Hz, CHCH&sub3;), 0,72 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 0.79 (3H, d, J = 6 Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 1,32 (2H, m), 1,53 (2H, q, J = 7 Hz), 1,92 (4H, m), 2,21 (2H, t, J = 8 Hz), 2,37 (1H, m), 2,79 (1H, m), 2,93 (1H, d, J = 5 Hz), 3,01 (2H, m), 3,13 (2H, t, J = 7 Hz), 3,26 - 3,43 (6H, m), 4,54 (1H, m), 7,22 (5H, m), 7,85 (1H, t, J = 7 Hz) und 8,28 (1H, d, J = 8 Hz NH).
δC (62,9 MHz, D&sub6;-DMSO) 174,0, 173,4, 170,8, 129,2, 127,7, 126,0, 54,6, 47,0, 46,7, 37,7, 36,3, 30,7, 27,3, 25,4, 24,3, 21,5, 17,7 und 16,1.

Beispiel 12

Collagenaseinhibierende Wirkung

Die Potenz von Verbindungen der allgemeinen Formel I zur Wirkung als Inhibitoren der Collagenase (eine Metalloprotenase, die am Gewebeabbau teilnimmt) wurde nach dem Verfahren von Cawston und Barrett, (Anal. Biochem., 99, 340-345, 1979) bestimmt, das hiermit als Referenz eingeschlossen wird, wobei eine 1 mM Lösung des getesteten Inhibitors oder Verdünnungen davon bei 37ºC 16 h lang mit Collagen und Collagenase (gepuffert mit 25 mM Hepes, pH 7,5, enthaltend 5 mM CaCl&sub2;, 0,05 % Brij 35 und 0,02 % NaN&sub3;) inkubiert wurde. Das Collagen war acetyliertes 14C Collagen, das hergestellt wurde nach dem Verfahren von Cawston und Murphy (Methods in Enzymology, 80, 711, 1981), das hiermit als Referenz eingeschlossen wird. Die Proben wurden zentrifugiert, um unverdautes Colagen zu sedimentieren, und ein Aliquot des radioaktiven Überstands wurde zur Untersuchung in einem Szintillationszähler als Maß für die Hydrolyse entfernt. Die Collagenaseaktivität in Gegenwart von 1 mM Inhibitor oder einer Verdünnung davon wurde mit der Aktivität in einer Kontrolle verglichen, der der Inhibitor fehlte, und die Ergebnisse nachstehend als diejenigen Inhibitorkonzentrationen angegeben, die eine 50%ige Inhibierung der Collagenase (IC&sub5;&sub0;) bewirkte. Verbindung von Beispiel Nr.
Beispiele von Dosierungseinheitenzusammensetzungen sind wie folgt: Beispiel 13 Kapseln: Bestandteile Pro Kapsel Pro 10.000 Kapseln Wirkstoff (Verbindung der Formel I) Lactose Magnesiumstearat

Verfahren für Kapseln:

Schritt 1 Mische Bestandteile Nr. 1 und Nr. 2 in einem geeigneten Mischer.
Schritt 2 Siebe die Mischung aus Schritt 1 durch ein Nr. 30 Mesh (0,59 mm)-Sieb.
Schritt 3 Bringe die gesiebte Mischung von Schritt 2 in einen geeigneten Mischer mit Bestandteil Nr. 3 und mische bis die Mischung geschmiert ist.
Schritt 4 Fülle in Nr. 1 Hartgelatinekapselschalen in einer Kapselmaschine. Beispiel 14 Tabletten: Bestandteile Pro Tablette Pro 10.000 Tabletten Wirkstoff (Verbindung der Formel I) Maisstärke Algininsäure Natriumalginat Magnesiumstearat

Verfahren für Tabletten:

Schritt 1 Mische Bestandteile Nr. 1 und Nr. 2 in einem geeigneten Mischer.
Schritt 2 Gib hinreichend Wasser portionsweise zur Mischung aus Schritt 1 unter sorgfältigem Mischen nach jeder Zugabe zu. Solche Zugaben von Wasser und Mischen erfolgen, bis die Masse eine Konsistenz hat, um ihre Umwandlung in ein Naßgranulat zu gestatten.
Schritt 3 Die nasse Masse wird in ein Granulat umgewandelt, indem sie durch einen Oszillationsgranulator unter Verwendung eines Nr. 8 Mesh (2,38 mm)-Siebs geführt wird.
Schritt 4 Das nasse Granulat wird dann in einem Ofen bei 140ºF (60ºC) vollständig getrocknet.
Schritt 5 Die trockenen Granulatkörner werden mit Bestandteil Nr. 5 geschmiert.
Schritt 6 Die geschmierten Granulatkörner werden in einer geeigneten Tablettenpresse gepreßt. Beispiel 15 Intramuskuläre Injektion: Bestandteil Pro ml Pro Liter Verbindung der Formel I Wirkstoff Isotonische Pufferlösung, pH 4,0

Verfahren:

Schritt 1 Löse den Wirkstoff in der Pufferlösung.
Schritt 2 Filtriere die Lösung aus Schritt 1 aseptisch.
Schritt 3 Die sterile Lösung wird nun aseptisch in sterile Ampullen abgefüllt.
Schritt 4 Die Ampullen werden unter aseptischen Bedingungen verschlossen. Beispiel 16 Suppositorien: Bestandteile Pro Suppositorium Pro 1000 Suppositorien Verbindung der Formel I Wirkstoff Polyethylenglycol

Verfahren:

Schritt 1 Schmelze Bestandteil Nr. 2 und Nr. 3 zusammen und rühre, bis zur Gleichmäßigkeit.
Schritt 2 Löse Bestandteil Nr. 1 in der geschmolzenen Masse aus Schritt 1 und rühre bis zur Gleichmäßigkeit.
Schritt 3 Gieße die geschmolzene Masse aus Schritt 2 in Suppositorienformen und kühle.
Schritt 4 Entferne die Soppositorien aus den Formen und verpacke.

Beispiel 17.

Augensalbe

Eine geeignete Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel I wird zu einer Augensalbenbase mit der folgenden Zusammensetzung formuliert:
Flüssigparaffin 10 %
Wollfett 10 %
Gelbes Weichparaffin 80 %

Beispiel 18

Topische Hautsalbe

Eine geeignete Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel wird zu einer topischen Hautsalbenbase mit der folgenden Zusammensetzung formuliert:
Emulgierendes Wachs 30 %
Weißes Weichparaffin 50 %
Flüssigparaffin 20 %

Claims

1. Verbindung der allgemeinen Formel I:

worin:

R¹ darstellt: ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl-, C&sub1;-C&sub6;- Alkenyl-, Phenyl-, Pheny(C&sub1;-C&sub6;)Alkyl-, C&sub1;-C&sub6;-Alkylthiomethyl-, Phenylthiomethyl-, substituierte Phenylthiomethyl-, Phenyl(C&sub1;- C&sub6;)Alkylthiomethyl- oder Heterocyclylthiomethylgruppe; oder R¹ -S-Rx darstellt, wobei Rx eine Gruppe

darstellt;

R² ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl-(C&sub1;-C&sub6;-Alkenyl-, Phenyl(C&sub1;-C&sub6;)alkyl-, Cycloalkyl(C&sub1;-C&sub6;)alkyl-, oder Cycloalkenyl(C&sub1;- C&sub6;)alkylgruppe darstellt;

R³ eine Aminosäureseitenkette oder eine C&sub1;-C&sub6;-Alkyl-, Benzyl-, (C&sub1;- C&sub6;)Alkoxybenzyl-, Benzyloxy(C&sub1;-C&sub6;)alkyl- oder Benzyloxybenzylgruppe darstellt;

R&sup4; ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe darstellt;

R&sup5; eine (CH&sub2;)nA-Gruppe darstellt;

n eine ganze Zahl von 1 bis 6 ist; und

A eine Hydroxy-, (C&sub2;-C&sub7;)Acyloxy-, (C&sub1;-C&sub6;)Alkylthio-, Phenylthio-, (C&sub2;- C&sub7;)Acylamino- oder N-Pyrrolidongruppe darstellt,

oder ein Salz und/oder N-Oxid und/oder (wenn die Verbindung eine Thioverbindung ist) ein Sulfoxid oder Sulfon davon.

2. Verbindung gemäß Anspruch 1, in der das chirale Zentrum, an dem sich der Substituent R³ befindet, die S-Stereochemie hat.

3. Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2, worin R¹ ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub4;-Alkyl-, Phenylthiomethyl - oder Heterocyclylthiomethylgruppe darstellt.

4. Verbindung gemäß Anspruch 1, 2 oder 3, worin R² eine C&sub3;-C&sub6;-Alkylgruppe darstellt.

5. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, worin R³ eine Benzyl- , 4- (C&sub1;-C&sub6;)Alkylphenylmethyl- oder Benzyloxybenzylgruppe darstellt.

6. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, in der n den Wert 1, 2 oder 3 hat.

7. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, worin A eine Pyrrolidon-, Hydroxy- oder Ethylthiogruppe darstellt.

8. [4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-hydroxyethyl)amid;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-hydroxyethyl-N-methylamid;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-ethylthioethyl)amid;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(N-acetyl- 2-aminoethyl)amid;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalan-N-(3-(2- pyrrolidon)propyl)amid;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(3-(2- pyrrolidon)propyl)amid-Natriumsalz;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-(2-acetoxyethyl)amid;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (3-(2-pyrrolidon)propyl)amid;

[4-(N-Hydroxvamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- methyl-N-(2-hydroxyethyl)amid;

[4-(N-Hydroxyamino)-2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (2-hydroxyethyl)amid;

[4-(N-Hydroxyamino)2R-isobutyl-3S-methylsuccinyl]-L-phenylalanin-N- (3-(2-pyrrolidon)propyl)amid-Natriumsalz

oder, wo angebracht, eine freie Base, freie Säure oder ein Salz einer dieser Verbindungen.

9. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Verwendung in der Human- oder Veterinärmedizin.

10. Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8 bei der Herstellung eines Mittels zur Verwendung bei der Kontrolle einer Krankheit, die mit Gewebeabbau verbunden ist, und/oder bei der Förderung der Wundheilung.

11. Pharmazeutische oder veterinärmedizinische Formulierung, umfassend eine Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 und einen pharmazeutisch und/oder oder veterinärmedizinisch annehmbaren Träger.

12. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1, umfassend:

(a) Entfernung von Schutzgruppen bei einer Verbindung der allgemeinen Formel III

worin:

R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind und Z eine Schutsgruppe darstellt; oder

(b) Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel IV

worin:

R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind, mit Hydroxylamin oder einem Salz davon; und

(c) gegebenenfalls nach Schritt (a) oder Schritt (b) Umwandlung einer Verbindung der allgemeinen Formel I in eine andere Verbindung der allgemeinen Formel I.

13. Verbindung der allgemeinen Formel III

worin:

R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind und Z eine Schutzgruppe darstellt.

14. Verbindung der allgemeinen Formel IV

worin:

R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; wie in der allgemeinen Formel I definiert sind.