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Die
vorliegende Erfindung betrifft 2-Arachidonylglycerol (2-AG), das
als Inhibitor eines Tumor-Nekrosefaktors (TNF-α) verwendet werden kann, und
zwar bei der Verkleinerung eines durch eine geschlossene Kopfverletzung
verursachten Ödems,
sowie bei der Verringerung von durch eine geschlossene Kopfverletzung verursachten
neurologischen Defiziten.
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Zwei
Arten von endogenen Cannabinoiden sind identifiziert worden, wobei
die am gründlichsten
untersuchten Verbindungen Arachidonylethanolamid (Anandamid) und
2-Arachidonylglycerol (2-AG) sind (Mechoulam arid Benshabat, 1999).
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Obwohl
diese Endocannabinoide, insbesondere Anandamid, Gegenstand von Forschungen
in verschiedenen Systemen gewesen sind, ist ihre physiologische
Rolle nicht klar erforscht (Mechoulam et al, 1998). Angesichts der
entzündungshemmenden
Wirkung von pflanzlichen und synthetischen Cannabinoiden, sowie dem
Vorhandensein von Endocannabinoiden und von Cannabinoid-Rezeptoren
in Organen, die mit der Immunregulierung in Verbindung stehen, kann
dem Endocannabinoid-System plausiblerweise eine entzündungshemmende
Rolle zugeschrieben werden. Es konnte nämlich gezeigt werden, dass
Anandamid entzündungshemmende
Auswirkungen hat (Molina-Holdago et al., 1997) und 2-AG unterdrückt Interleukin-2
durch ein Nach-unten-Regulieren des Kernfaktors der aktivierten
T-Zellen (Ouyang et al., 1998).
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Der
Tumor-Nekrosefaktor-a (TNF-α)
spielt eine Rolle bei der Pathogenese verschiedener immunvermittelter
Prozesse und ist der Schlüsselmediator
bei einem septischen Schock (Tracey und Cerami, 1993). Dieses Zytokin
wird hauptsächlich
durch einkernige phagozytische Zellen in Reaktion auf die Injektion
von Versuchstieren mit Lipopolysacharid (LPS, einem von gramnegativen
Bakterien stammendem Endotoxin) freigesetzt. Der TNF-α wirkt gleichermassen
auf das zentrale wie auf das periphere Nervensystem. Er verursacht Fieber,
Krankheitsverhalten, Appetitlosigkeit, sympathischen Ausstoss und
eine Stimulation von Hypophysenhormonen. Er kann auch einen programmiertem
Zelltod bei Neuronen beinhalten. Es konnte gezeigt werden, dass
TNF-α und
andere im Umlauf befindliche Zytokine in das Gehirn befördert werden
und sich auf dessen Funktion auswirken. TNF-α kann im Gehirn in situ synthetisiert
werden, und zwar hauptsächlich
durch die Mikroglia, aber auch durch Astrozyten, Neuronen und Endothelzellen.
Eine TNF-α-Aktivität kann durch
eine ischämische
und traumatische Gehirnverletzung hervorgerufen werden (Newton und
Decicco, 1999 und zitierte Ref.) und spielt eine Doppelrolle bei
der Pathophysiologie dieser Verletzungen (Shohami et al. 1999).
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Da
TNF-α ein
wichtiger Entzündungsmediator
ist, kann die Hemmung seiner Produktion durch einen Körperbestandteil
eine Rolle für
einen solchen endogenen Liganden bei dem entzündungshemmenden Prozess eines
lebenden Gewebes widerspiegeln. Wir protokollieren nun, dass 2-AG
die in vitro-TNF-α-Produktion gleichermassen
bei in-vitro-Makrophagen von Ratten wie auch bei Mäusen hemmt.
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Da
gezeigt werden konnte, dass Cannabinoide antioxidative Eigenschaften
aufweisen (Mechoulam et al., 1998), haben wir auch die Auswirkung
von 2-AG auf die Bildung von radikalen Sauerstoff-Zwischenverbindungen
(ROI) einer genaueren Beobachtung unterzogen.
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Hierbei
handelt es sich um eine hochgiftige Spezies, die bei zahlreichen
biologischen Reaktionen gebildet wird.
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Wir
untersuchten die Auswirkung von 2-AG in verschiedenen Konzentrationsgraden
(0,05 – 50 μg/ml) auf
die Produktion von TNF-α und
die Stickstoffoxydbildung durch Makrophagen. Diese Zellen wurden
aufgrund ihrer Vielseitigkeit ausgewählt, da sie sehr aktiv an angeborenen
Funktionen und an Immunfunktionen beteiligt sind. Sie phagozytieren
zahlreiche Infektionserreger, nehmen sie in sich auf und zerstören sie,
und sie wirken als Effektorzellen sowohl bei humoral übertragenen
als auch bei zellübertragenen
Immunantworten. Makrophagen können
jedoch auch ein breites Spektrum von Entzündungskrankheiten verursachen.
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Peritoneale
Makrophagen von Mäusen
(gewonnen aus C57BL/6-Mäusen)
wurde mit verschiedenen 2-AG-Konzentrationen in vitro entweder zusammen
mit LPS, das eine TNF-α-Produktion
auslöst,
oder zusammen mit LPS und IFNγ,
welche gemeinsam eine Stickstoffoxydbildung auslösen, inkubiert. In der untersuchten Konzentration
(50μg/ml – 0,5 μg/ml) war
2-AG ungiftig für
Makrophagen, welche entweder durch Trypanblau- oder Erythrosin B-Farbstoffausschluss
erfasst wurden. Die TNF-α-Produktion
wurde mittels Biotest unter Verwendung von BALB/c CL.7-Zellen als
Ziele bestimmt (Gallily et al., 1997).
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Die
ROI-Bildung in den Makrophagen wurde durch einen luminolverstärkten Chemilumineszenz-Antworttest
(unter Verwendung von Biolumat LB 85, Belhold, Wildbad, Deutschland
(Avron und Gallily, 1995)) bestimmt.
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Zur
Bestimmung der Auswirkung von 2-AG auf die TNF-α-Konzentrationen im Serum von
LPS-behandelten Mäusen
erhielten 9–11
Wochen alte, 20–23
g schwere, weibliche C57BL/6-Mäuse
eine Injektion i.p. mit entweder 5 mg/kg LPS alleine oder mit LPS
(5 mg/kg) und 2-AG (10 mg/kg) oder mit LPS (5 mg/kg) und 2-AG (1
mg/kg), 2-Linoleoylglycerol (2-LinoG)(10 mg/kg) und 2- Palmitoylglycerol
(2-PalmG)(5 mg/kg). Nach 90 Min. wurden sie zur Ader gelassen und
die TNF-α-Aktivität (Titer)
des Serums wurde, wie weiter oben beschrieben, einem Biotest unterzogen.
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Wie
in 1A dargestellt, kann in vitro kurzfristig als
Reaktion eine durch 2-AG bedingte TNF-α-Hemmung festgestellt werden.
Bei einer Konzentration von 50 bzw. 10 μg/ml wurde ein Hemmungsgrad
von jeweils 97 % bzw. 90 % beobachtet. Selbst bei Konzentrationen
von 0,1 μg/ml
2-AG wurde noch ein Hemmungsgrad von 50 % verzeichnet. Andererseits
kam es durch die Hinzufügung
von 2-AG bei diesen Konzentrationen, d.h. 50μg/ml – 0,05 μg/ml, zu Makrophagenkulturen
mit beidem, LPS und IFNγ,
zu keiner Unterdrückung
der Stickstoffoxydbildung. Die Bestimmung erfolgte auf Basis des
akkumulierten Nitrats in den Überständen der
behandelten Makrophagen unter Verwendung von Griess Reagens (Daten
nicht dargestellt).
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Eine
Behandlung der Makrophagen mit 25 μg/ml 2-AG unterdrückte die
Produktion von Zymosan-induzierten ROI nach 40 Min. laut Ergebnis
einer Chemilumineszenz-Prüfung
um mehr als 85 %.
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Eine
Hemmung der TNF-α-Produktion
wurde bei den Mäusen
ebenfalls festgestellt (Tabelle 1).
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Tabelle
1: UNTERDRÜCKUNG DER
In vivo TNF-α-PRODUKTION
DURCH 2-AG
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Drei
Gruppen von weiblichen C57BL/6-Mäusen
erhielten eine Injektion (i.p.) mit entweder LPS alleine (Gruppe
3), oder mit 2-AG und LPS (Gruppe 1), oder mit einer Mischung aus
2-AG, 2-PalmG, 2-LinoG und LPS (Gruppe 2), und zwar in den in der
Tabelle angeführten
Dosen.
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Wenn
2-AG (10 mg/kg) gemeinsam mit LPS verabreicht wurde, wurde ein TNF-α -Hemmungsgrad
von 73 % beobachtet. Eine gemeinsame Verabreichung von LPS mit AG
(1 mg/kg), 2-LinoG (10 mg/kg) und 2-PalmG (5 mg/kg) hemmte die TNF-α-Produktion
bei 4 von 5 Mäusen
fast zur Gänze
(95 %). Wir konnten bereits früher
zeigen, dass 2-LinoG und 2-PalmG, die im Körper gemeinsam mit 2-AG vorkommen,
zwar in zahlreichen in vivo- und in vitro-Versuchen (einschliesslich
der Bindung an die Cannabinoid-Rezeptoren) inaktiv bleiben, die
2-AG-Aktivität
jedoch erhöhen
(Ben-Shabat et al., 1998). Diese Erhöhung, die wir "Entourage-Effekt" genannt haben, ist
auch hier zu erkennen. Bei Vorhandensein der "Entourage"-Verbindungen war das 2-AG (1 mg/kg)
aktiver als eine beträchtlich
höhere
2-AG-Dosis, nämlich
10 mg/kg (Tabelle 1).
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Bei
verschiedenen pflanzlichen und synthetischen Cannabinoiden konnte
gezeigt werden, dass sie die Produktion von Entzündungs-Zytokinen und Stickstoffoxyd
verringern. Anandamid hemmt ebenfalls die TNF-α-Produktion (in Astrozyten),
seine Auswirkung ist jedoch relativ bescheiden (Molina-Holgado et
al., 1997). Im Gegensatz zu den aktuell berichteten Ergebnissen
betreffend die Auswirkung von 2-AG auf Makrophagen blockierte Anandamid
auch die Abgabe von Stickstoffoxyd bei Astrozyten.
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Da
eine Gehirnverletzung mit entzündlichen
Prozessen verbunden ist, beschlossen wir zu prüfen, ob 2-AG nicht möglicherweise
als Neuroprotektivum in Frage kommen könnte. Wir haben gesehen, dass
es nach einer geschlossenen Kopfverletzung zu einer erhöhten Produktion
von 2-AG im Gehirn kommt. Diese Beobachtung kann möglicherweise
bedeuten, dass die Freisetzung von 2-AG Teil eines endogenen Neural-Schutzmechanismus
des Gehirns ist.
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Eines
der bei einer Kopfverletzung auftretenden Symptome ist der neuronale
Zelltod, welcher sich grob in Form eines Infarktes um den verletzten
Bereich herum äussert.
Mäuse wurden
entweder mit 2-AG (5 mg/kg) oder mit Trägersubstanz behandelt, 24 Stunden
später
dekapitiert und ihre Gehirne wurden auf Veränderungen des Infarktvolumens
hin untersucht. Das Infarktvolumen war bei 2-AG-behandelten Mäusen im
Vergleich zu jenem von trägersubstanzbehandelten
Mäusen
verringert (jeweils 5,6 ± 1,2%
gegenüber
9,9 ± 1,6% des
Gesamtgehirnvolumens; p=0,053). Bei pseudo-operierten Ratten wurde
keinerlei Infarkt beobachtet (Daten nicht dargestellt).
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Wir
testeten die Auswirkung von 2-AG in einem in unserem Labor entwickelten
Tierversuchsmodell einer geschlossenen Kopfverletzung (CHI: closed
head injury) (Chen et al., 1996). In diesem Modell, welches viele
der klinischen Merkmale einer klinischen Kopfverletzung nachahmt,
sind unter anderem die Ödembildung und
die Beeinträchtigung
der Motorik als typische, behindernde Auswirkungen des Traumas zu
nennen. Wir testeten daher die Auswirkung der 2-AG-Behandlung in
Bezug auf diese beiden Parameter nach einer CHI.
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Mäusen wurde
unter Äther-Narkose
und unter Verwendung einer Fallgewicht-Vorrichtung eine CHI zugefügt und der
Schweregrad der Verletzung wurde mittels der Neurologischen Schweregrad-Bewertungsskala (NSS:
Neurological Severity Score) erfasst. Die Motorik und die Reflexe
der verletzten Tiere wurden auch 24 Std. nach der CHI bewertet.
Für das
Fehlen eines getesteten Reflexes bzw. für das Unvermögen, die
Aufgaben auszuführen,
wurde jeweils ein Punkt vergeben. Es wurde eine akkumulierte Bewertungsmethode
angewendet, so dass der NSS zwischen 0 (alle Aufgaben erfolgreich
durchgeführt)
und 10 (an allen Aufgaben gescheitert) variieren konnte. Die Aufgabenreihe
wurde in früheren
Veröffentlichungen
im Detail beschrieben (Chen et al., 1996) und vor kurzem dahingehend
modifiziert, dass nur mehr 10 verschiedene Messungen beinhaltet sind,
wie in Tabelle 2 dargestellt.
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Tabelle
2: Neurologischer Schweregrad bei kopfverletzten Mäusen
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Für jede Unfähigkeit, eine NSS-Aufgabe auszuführen, wird
ein Punkt vergeben.NSS nach 1 Std. im Bereich von 7 – 10: schwere
CHI
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Neurologische Schweregrad-Bewertungsskala:
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Eine
Gruppe von Funktionstests, welche die Grundlage für die Bewertung
des klinischen Status einer Maus nach erfolgter CHI darstellt. Für die Unfähigkeit,
eine Aufgabe auszuführen,
wird ein Punkt vergeben. Je höher
die Punkteanzahl, umso schwerer ist die Verletzung.
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Wir
haben die NSS-Punkteanzahl der verletzten Tiere 1 Stunde und 24
Stunden nach dem Zeitpunkt der Verletzung gemessen, wobei die Differenzen
zwischen diesen Werten die Heilung darstellen. 24 Stunden nach Eintritt
der CHI wurden die Mäuse
dekapitiert, ihre Gehirne entnommen und das Ödem durch Messen des Wassergehalts
des Gewebes ausgewertet, und zwar unter Verwendung der folgenden
Nass-zu-Trocken-Verhältniszahl:
%H2O=[(WW–DW) × 100]/VWV. Eine 2-AG-Behandlung
wurde entweder 15 Min. oder 1 Std. nach Eintritt der CHI in drei
Dosen (1, 5 und 10 mg/kg) verabreicht und den Mäusen einer Kontrollgruppe wurde
zu denselben Zeitpunkten die Trägersubstanz
injiziert. Das Arzneimittel wurde entweder subkutan (s.c.) oder
intravenös
(i.v.) injiziert.
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Wir
fanden dabei heraus, dass 2-AG (in einer Dosis von 1 mg/kg und 5
mg/kg, nicht jedoch bei 10 mg/kg) das Ödem im Vergleich zu den Kontrollgruppen-Mäusen in
beträchtlichem
Ausmass verkleinerte (2 und 3), wenn
es 15 Min. bzw. 1 Stunde nach Eintritt der CHI injiziert wird. Die
Wirkung war nach einer i.v.-Injektion im Vergleich zu einer s.c.-Injektion
stärker
ausgeprägt.
Wir konnten weiterhin feststellen, dass die Verabreichung von 2-AG die klinische
Heilung signifikant verbesserte (basierend auf der NSS-Punkteanzahl). Auch
hier führte
die i.v.-Verabreichung wiederum zu einer besseren Heilung als die
s.c.-Verabreichung (4 und 5). Die Verabreichung
von 2-AG (1 mg) zusammen mit 2-LinoG (10 mg/kg) und 2-PalmG (5 mg/kg) erhöhte die
Wirkkraft beinahe um das doppelte, verglichen mit 2-AG (1 mg/kg)
alleine.
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Der
vorliegende Bericht ist der erste, welcher die Auswirkung des endogenen
Gehirn- und Periphernervensystem-Bestandteils 2-AG auf TNF-α protokolliert.
Es wurde herausgefunden, dass 2-AG, das bis zu einer Dosierung von
50μg/ml
für Makrophagen
ungiftig ist, die TNF-α-Bildung
hemmt. 2-AG unterdrückt
die TNF-α-Produktion
auch in vivo. Ausserdem wurde auch eine Reduktion der ROI-Produktion
durch Makrophagen festgestellt. Wir haben weiterhin herausgefunden,
dass die 2-AG-Verabreichung das Ödem
verkleinert und die klinische Heilung von Mäusen verbessert, welche eine
geschlossene Kopfverletzung erlitten haben.
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Die
vorliegende Erfindung besteht somit in der Verwendung von 2-Arachidonylglycerol
(2-AG) bei der Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen
zur Verwendung als Inhibitor eines Tumor-Nekrosefaktors (TNF-α), in der Verkleinerung eines
durch eine geschlossene Kopfverletzung hervorgerufenen Ödems, sowie
in der Verringerung der durch eine geschlossene Kopfverletzung verursachten
neurologischen Defizite.
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Die
neue, erfindungsgemässe
pharmazeutische Zusammensetzung umfasst 2-AG und als zusätzliche aktive
Verbindungen 2-Linoleoylglycerol und/oder 2-Palmitoylglycerol.
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Die
erfindungsgemässen
Zusammensetzungen sind besonders wirksam zur Linderung und sogar
zur Vermeidung von Neurotoxizität
bedingt durch akute Verletzungen des Zentralnervensystems (CNS),
wie etwa durch länger
anhaltende Anfälle,
beeinträchtigte
oder verringerte Blutzufuhr, den Entzug der Glukosezufuhr und durch
mechanisches Trauma. Die vorliegenden Zusammensetzungen sind auch
wirksam zur Linderung anderer Schäden des CNS, wie etwa giftbedingte
Krämpfe,
von denen angenommen wird, dass sie mit Aminosäure-Rezeptoren in Verbindung
stehen.
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Die
erfindungsgemässen
Zusammensetzungen können
auch bei der Behandlung von gewissen chronisch degenerativen Erkrankungen
wirksam werden, welche durch schrittweise erfolgenden, selektiven
Neuronenverlust gekennzeichnet sind. In diesem Zusammenhang werden
die erfindungsgemässen
Zusammensetzungen bei der Behandlung der Alzheimerschen Krankheit
als therapeutisch wirksam in Betracht gezogen.
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Die
vorliegenden Zusammensetzungen sind von besonderem Wert bei Grand-mal-Epilepsie,
globalen hypoxischen Ischämieanfällen, Gewebesauerstoffmangel,
entweder allein oder in Verbindung mit Blutverminderung (Ischämie), sowie
auch in Fällen
von Herzstillstand und in Fällen
eines abrupten Verschlusses von Hirnarterien (Schlaganfall).
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Die
erfindungsgemässe
pharmazeutische Zusammensetzung kann zusätzliche pharmazeutische, aktive
Verbindungen und/oder ein geeignetes pharmazeutisch verträgliches
Transportsystem, ein Lösungsmittel, Verdünnungsmittel,
einen Feststoff etc. umfassen.
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Feste
Zusammensetzungen zur oralen Verabreichung wie zum Beispiel Tabletten,
Pillen, Kapseln oder dergleichen können zubereitet werden, indem
der aktive Inhaltsstoff mit herkömmlichen
pharmazeutisch verträglichen
Inhaltsstoffen wie zum Beispiel Maisstärke, Lactose, Saccharose, D-Sorbitol,
Talk, Stearinsäure, Magnesiumstearat,
Dicalciumphosphat und Harze mit pharmazeutisch verträglichen
Lösungsmitteln
vermischt wird. Die Tabletten bzw. Pillen können beschichtet werden oder
anderweitig mit einschlägig
bekannten, pharmazeutisch verträglichen
Materialien zu einer Dosierungsform vermischt werden, die eine verlängerte Wirkungsdauer
oder eine länger
anhaltende Freisetzung gewährleisten.
Andere Feststoffzusammensetzungen können in Zäpfchenform zur rektalen Verabreichung
zubereitet werden.
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Flüssige Formen
können
zur oralen Verabreichung oder zur Injektion zubereitet werden, wobei
in diesem Begriff subkutane, transdermale, intravenöse, intrathekale
Verabreichungen und dergleichen beinhaltet sind. Die flüssigen Zusammensetzungen
beinhalten wässerige
Lösungen,
mit Aromastoffen versetzte Sirups, wässerige Suspensionen oder Suspensionen
in Öl,
mit Aromastoffen versetzte Emulsionen mit Speiseölen, sowie Elixiere und ähnliche
pharmazeutische Trägersubstanzen.
Darüber
hinaus können
die erfindungsgemässen
Zusammensetzungen auch als Aerosole für eine intranasale oder ähnliche
Verabreichung ausgebildet sein.
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Die
wirksame Dosis für
Menschen liegt im allgemeinen in einem Bereich zwischen 0,05 mg
und 50 mg pro kg Körpergewicht
bei einer Behandlungsvorgabe von 1 – 4 mal pro Tag.
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Der
bevorzugte Dosierungsbereich liegt zwischen 1,0 mg und 20 mg pro
kg Körpergewicht.
Es ist jedoch für
den einschlägig
gebildeten Fachmann leicht ersichtlich, dass die tatsächliche
Dosierungen von dem behandelnden Arzt in Abhängigkeit von der zu behandelnden
Krankheit, der Verabreichungsmethode, dem Alter und dem Körpergewicht
des Patienten, sowie von allfälligen
Kontraindikationen und dergleichen bestimmt würden.
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Die
Ergebnisse der zur Untermauerung der obigen Aussagen durchgeführten Tests
sind in den beiliegenden Zeichnungen dargestellt, in welchen:
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die 1:
die Hemmung der TNF-α-
und ROI-Produktion durch 2-AG
zeigen. Thioglycolat-ausgelöste Peritonealmakrophagen
wurden aus C57BL/6-Mäusen
gewonnen. Die Zellen wurden über
Nacht inkubiert und anschliessend mit 2-AG behandelt. 1A zeigt
wie 2-AG in Konzentrationen von 0,05 – 5 μg/ml zusammen mit 1 μg/ml LPS
zu den Zellen hinzugefügt
wurde. Die Flüssigkeitsüberstände wurden
nach 24 Std. zur TNF-α-Bestimmung mittels
Biotest gesammelt. Der TNF-α-Titer
ist in S50-Einheiten ausgedrückt, welche
definiert sind als der reziproke Wert der Endprobenverdünnung, welche
erforderlich ist, um 50 % einer CL.7-Ziel-Einschichtzellkultur zu zerstören. Auf
der Kurve ist ein repräsentatives
Experiment bestehend aus 5 in Vierfachaufstrichen durchgeführten Untersuchungen
dargestellt. Die Unterschiede waren durchweg signifikant (p < 0,05, Mann-Whitny
U-Test). Die auf der Abszisse dargestellten Werte wurden mit LPS
(1 μg/ml)
und 2-AG (in μg/ml,
wie in der Figur angegeben) erreicht.
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1B zeigt
wie Makrophagen über
Nacht in Chemolumineszenz-Proberöhrchen
inkubiert wurden, dann gewaschen und mit 25 μg/ml 2-AG Luminol und Zymusan
inkubiert wurden. Die Chemolumineszenz wurde über 65 Min. hinweg aufgezeichnet.
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2:
die Auswirkung von 2-AG auf die Üdembildung
nach einer CHI zeigt. 2-AG in einer Konzentration von 1 oder 5 mg/kg
wurde den Mäusen
15 Min. bzw. 1 Std. nach der CHI s.c. injiziert. Das Ödem wurde nach
24 Std. in Prozent als Wassergehalt des Gewebes ausgewertet.
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3:
die Auswirkung von 2-AG auf die Ödembildung
nach einer CHI zeigt. 2-AG in einer Konzentration von 0,1, 5 oder
10 mg/kg wurde den Mäusen
15 Min. nach der CHI i.v. injiziert. Das Ödem wurde nach 24 Std. in Prozent
als Wassergehalt des Gewebes ausgewertet.
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4:
die Auswirkung von 2-AG auf die klinische Heilung nach einer CHI
zeigt. 2-AG in einer Konzentration von 1 oder 5 mg/kg wurde den
Mäusen
15 Min. bzw. 1 Std. nach der CHI injiziert. Der klinische Zustand wurde
nach 1 Std. und nach 24 Std. unter Verwendung der Neurologischen Schweregrad-Bewertungsskala ausgewertet:
Die Heilung wird ausgedrückt
als: Δ NSS
= NSS 1 Std – NSS
24 Std.
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5:
die Auswirkung von 2-AG auf die klinische Heilung nach einer CHI
zeigt. 2-AG in einer Konzentration von 0,1, 5 oder 10 mg/kg wurde
den Mäusen
15 Min. nach der CHI i.v. injiziert. Die Auswertung der Heilung
erfolgte wie in 4 beschrieben.
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Die
vorliegende Erfindung wird nun durch die folgenden Beispiele veranschaulicht,
wobei sie allerdings nicht auf diese beschränkt ist:
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Beispiel 1:
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Emulphor
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Erfindungsgemässe aktive
Wirkstoffe wurden in Ethanol/Emulphor 620 [GAF, USA] aufgelöst. Zweifach
destilliertes Wasser wurde hinzugefügt. Das Verhältnis Ethanol:Emulphor:Wasser
in der fertigen Lösung betrug
1:1:18.
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Im
allgemeinen kann es sich bei derartigen Transportsystemen um wässerige
Lösungen
handeln, die pharmazeutisch verträgliche Hilfslösungsmittel,
wie zum Beispiel Ethanol, Polyethylenglykol, Propylenglykol, Glycerol
und dergleichen umfassen. In diesem Zusammenhang kann es sich bei
derartigen Transportsystemen um mizellare Lösungen handeln, welche mit
natürlichen
oder synthetischen, ionogenen oder nichtionogenen grenzflächenaktiven
Stoffen zubereitet werden. Bei den Transportsystemen kann es sich
auch um Kombinationen aus diesen Hilfslösungsmitteln und aus mizellaren
Lösungen
handeln.
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Beispiel 2
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Emulsion
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In
manchen Fällen
können
pharmazeutische Zubereitungen in Form von Emulsionen mit speziellen, im
folgenden genauer beschriebenen Inhaltsstoffen von Vorteil sein.
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Diese
Emulsionen werden aus einer öligen
Phase zubereitet, welche pharmazeutisch verträgliche Triglyceride, Lecithin,
Stabilisatoren, Antioxidantien etc. umfasst, in welcher die aktive
Verbindung löslich
gemacht wird und zu welcher wahlweise eine wässerige Phase mit Glycerol
und Emulgatoren hinzugefügt
werden kann.
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Als
bevorzugte Triglyceride kommen mittlere und höhere Triglyceride in Frage.
Desoxycholat ist ein bevorzugter Stabilisator, α-Tocopherol ein bevorzugtes
Antioxidans. Pluronic F-68, ein nichtionogener grenzflächenaktiver
Stoff aus einem Copolymer bestehend aus Polyoxyethylen und Polyoxypropylen,
ist ein bevorzugter Emulgator.
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Ein
allgemeines Beispiel für
eine wünschenswerte
Formulierung einer "Emulsion" kann somit wie folgt lauten:
Triglyceride (von 1,0 % bis 30 %, vorzugsweise 10 %), Lecithin (von
0,10 % bis 5 %, vorzugsweise 1 %), Antioxidans (% wie erforderlich,
entsprechend dem spezifischen verwendeten Antioxidans), Stabilisator (von
0,05 % bis 5 %, vorzugsweise 1 %), Glycerol (% wie erforderlich
für Isotonie),
Emulgator (von 0,20 % bis 10 %, vorzugsweise 2 %), aktive Verbindung
(von 0,05 % bis 5 %) und Wasser als Ergänzung auf 100 (alle % als Masse%).
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Konservierungsmittel
wie zum Beispiel PHB-Ester können
dem hinzugefügt
werden (0,01 – 0,1
%).
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Eine
typische Formulierung (Masse%): 2-AG (5,0) stabilisiert in einer öligen Phase
(20,0), gereinigte Fraktionen Eigelb-Phospholipide (1,2), Pluronic
F-68 (2,0), Glycerol (2,25), α-Tocopherol
(0,02), Methyl-, Butyl-p- Hydroxybenzoesäureester
((0,2) bzw. (0,05)) und zweifach destilliertes Wasser (Rest auf
100).
