DE60021109T2

DE60021109T2 - Amycomycin, verfahren zu dessen herstellung und seine verwendung als arzneimittel

Info

Publication number: DE60021109T2
Application number: DE60021109T
Authority: DE
Inventors: Cordula Hopmann; Michael Kurz; Heinrich Decker; Dominique Le Beller; Jozsef Aszodi
Original assignee: Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Current assignee: Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Priority date: 1999-12-08
Filing date: 2000-11-25
Publication date: 2006-05-04
Anticipated expiration: 2020-11-26
Also published as: US20010018450A1; JP4750993B2; CZ294370B6; AU781398B2; KR20020063205A; HRP20020497B1; SI1237866T1; JP2003516389A; KR100728514B1; RU2002118116A; HU225194B1; DK1237866T3; IL149904A0; SK286776B6; SK7872002A3; RU2261916C2; ZA200204420B; US6642391B2; CN1217929C; RS50288B

Description

Diese Erfindung betrifft eine Verbindung, genannt Amycomycin, die durch Züchtung des Mikroorganismus Amycolatopsis sp., ST101170 (DSM 12216), erhältlich ist, und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze und Derivate. Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung von Amycomycin, die Verwendung von Amycomycin und seine pharmazeutisch verträglichen Salze und Derivate als Pharmazeutika, insbesondere deren Verwendung als Antibiotika, und pharmazeutische Zusammensetzungen, die Amycomycin umfassen, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder Derivat davon.
Methicillin-resistente Staphylococcus aureus (MRSA)-Infektionen kommen bekanntlich vorwiegend bei verschiedenen infektiösen Zuständen, wie Wunden und Verbrennungen, vor. Vancomycin und Teicoplanin, die zu der Glukopeptidklasse gehören, sind nur zwei Antibiotika, die klinisch für die Behandlung von MRSA-Infektionen verwendet werden. Jedoch aufgrund des kürzlichen Auftauchens von Vancomycin- und Teicoplanin-resistenten Stämmen wird von diesen Infektionen berichtet, dass sie bedrohlich und fatal werden können. Eine intensive Suche nach einer strukturell anderen Klasse von Verbindungen, die gegen diese Vancomycin- und Teicoplaninresistenten Stämme aktiv sind, begann daher. Beispielsweise wurde bereits Methylsulfomycin I, ein cyclisches Thiopeptid, [EP-A-0818539, eingereicht am 11. Juli 1996] als ein Antibiotikum beschrieben, das gegen Vancomycin- und Teicoplaninresistente Stämme wirksam ist.
JP 5317068 beschreibt das antibiotische Magenesidin (1-Acetyl-5-ethyliden-4-hydroxy-3-octanoylpyrrolidin-2-on), das durch Züchten des Mikroorganismus Vibrio gazogenes erhalten wurde (ATCC-29988).
Es wurde nun gefunden, dass eine neue Amycomycin genannte Verbindung antibiotisch wirksam ist. Die vorliegende Erfindung betrifft somit eine Verbindung der Formel
und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze und Derivate davon, wie Ester und Ether, in allen ihren stereoisomeren Formen und allen tautomeren Formen.
Amycomycin hat eine charakteristische Tetraamidsäureeinheit mit einer hoch oxygenierten C45-Seitenkette. Es hat die Molekülformel C₆₅H₁₁₅NO₁₈ und ist durch Züchtung des Mikroorganismus Amycolatopsisspezies ST101170 (DSM 12216) unter aeroben Bedingungen in einem Quellen von Kohlenstoff und Stickstoff enthaltenden Nährmedium erhältlich, gefolgt von Isolierung und Reinigung in üblicher Weise. Der Mikroorganismus ST101170 gehört zu der Ordnung Actinomycetales, Gattung Amycolatopsis, und wurde am 4. Juni 1998 bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ – Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH), Braunschweig, Deutschland, hinterlegt und ihm wurde die Zugangsnummer DSM-Nr. 12216 gegeben.
Die vorliegende Erfindung stellt weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindung, genannt Amycomycin, aus Amycolatopsisspezies ST101170, ihren Mutanten und Varianten unter aeroben Bedingungen in einem ein oder mehrere Quellen an Kohlenstoff und ein oder mehrere Quellen an Stickstoff und gegebenenfalls anorganische Salze von Nährmittel- und oder Spurenelementen enthaltendem Nährmedium, gefolgt von Isolierung der Verbindung und Reinigung in üblicher Weise, bereit.
Mutanten und Varianten des Mikroorganismus ST101170 können auch in der Lage sein, die erfindungsgemäße Verbindung zu synthetisieren. Solche Mutanten können in einer durch physikalische Mittel bekannten Weise hergestellt werden, beispielsweise Bestrahlung, wie mit Ultraviolett- oder Röntgenstrahlen, oder chemischen Mutagenen, wie Ethylmethylansulfonat (EMS), 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon (MOB) oder N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG).
Das Screening von geeigneten Mutanten und Varianten, die die erfindungsgemäße Verbindung herstellen können, kann durch Bestimmung der biologischen Aktivität der in der Kulturbrühe akkumulierten Wirkstoffe, beispielsweise durch Testen der antibakteriellen Wirkung, insbesondere gegen Vancomycin-resistente Stämme (siehe nachstehende Tabelle 2), bestätigt werden.
Bevorzugte, für die aerobe Fermentation geeignete Kohlenstoffquellen sind assimilierbares Kohlenhydrat und Zuckeralkohole, wie Glukose, Laktose oder D-Mannit, sowie Kohlenhydrat enthaltende natürliche Produkte, wie Malzextrakt. Geeignete Quellen von Stickstoff sind beispielsweise Aminosäuren, Peptide und Proteine einschließlich deren Abbauprodukte, wie Peptone oder Tryptone, Fleischextrakt, vermahlene Samen, beispielsweise Mais-, weiße Bohnen-, Soja- oder die Baumwollpflanzen, Destillationsrückstände aus der Alkoholproduktion, Fleischmehl und Hefeextrakte, jedoch auch Ammoniumsalze und Nitrate. Geeignete anorganische Salze, die die Nährlösung enthalten können, sind beispielsweise Chloride, Carbonate, Sulfate oder Phosphate von Alkalimetallen oder Erdalkalimetallen, Eisen, Zink, Kobalt oder Mangan.
Die Bildung von Amycomycin verläuft teilweise gut, beispielsweise in einem Nährmedium, das etwa 0,5 bis 5 Stärke (löslich), vorzugsweise 1 bis 2 %, etwa 0,5 bis 5 Glukose, vorzugsweise 1 bis 3 %, etwa 0,5 bis 5 % Glycerin, vorzugsweise 1 bis 2 %, etwa 0,1 bis 0,5 % Maisquellwasser, vorzugsweise 0,2 bis 0,3 %, etwa 0,2 bis 1 % Pepton, vorzugsweise 0,4 bis 0,6 %, etwa 0,1 bis 0,5 % Hefeextrakt, vorzugsweise 0,2 bis 0,4 %, etwa 0,05 bis 0,2 % Natriumchlorid, vorzugsweise 0,1 bis 0,2 %, und etwa 0,1 bis 0,5 % CaCO₃, vorzugsweise 0,2 bis 0,3 %, umfasst. Diese Mengen basieren auf dem Gewicht des gesamten Nährmediums.
Die Züchtung von ST101170 wird aerob ausgeführt, beispielsweise submers unter Schütteln oder Rühren in Schüttelkolben oder Laborfermentern, gegebenenfalls unter Einführung von Luft oder Sauerstoff. Die Züchtung durch Fermentation kann beispielsweise in sterilen Weithalskolben oder Rundbodenkolben von verschiedenen Volumina in Glasfermentern oder V2A-Stahlbehältern ausgeführt werden.
Die Züchtung von ST101170 kann bei Temperaturen zwischen etwa 20 und etwa 35°C, vorzugsweise zwischen etwa 25 und etwa 30°C, und pH zwischen 4 und 10, vorzugsweise zwischen 6 und 8, ausgeführt werden. Unter diesen Bedingungen wird der Mikroorganismus im Allgemeinen über einen Zeitraum von 20 bis 200 Stunden, vorzugsweise 24 bis 150 Stunden, gezüchtet.
Die Züchtung wird vorteilhafterweise in verschiedenen Stufen ausgeführt. Zuerst kann eine oder mehrere Vorkulturen in einem flüssigen Nährmedium hergestellt werden. Eine Hauptkultur, das tatsächliche Herstellungsmedium, wird dann mit der Vorkultur in beispielsweise einem Volumenverhältnis von 1:10 inokuliert. Die Vorkultur wird beispielsweise durch Inokulieren eines Nährmediums mit mit Sporen versehenem Mycelium und Wachsenlassen für etwa 20 bis etwa 120 Stunden, vorzugsweise 24 bis 90 Stunden, erhalten. Das mit Sporen versehene Mycelium kann durch beispielsweise Wachsenlassen des Mikroorganismus für etwa 1 bis etwa 40 Tage, vorzugsweise 5 bis 12 Tage, in einem festen oder flüssigen Nährmedium, wie Hefemalzagar oder Kartoffeldextroseagar, erhalten werden.
Der Verlauf der Fermentation und die Bildung von Amycomycin kann durch dem Fachmann bekannte Verfahren, wie durch Messen der biologischen Aktivität der Kulturbrühe in Bioassays oder durch chromatographische Verfahren, wie Dünnschichtchromatographie (DC) oder Hochdruckflüssigchromatographie (HPLC), verfolgt werden.
Die Verbindung Amycomycin liegt in dem Kulturfiltrat sowie in dem Mycelium vor. Gewöhnlich liegt jedoch die Hauptmenge in dem Mycelium vor. Die Verbindung kann unter Anwendung bekannter Trenntechniken isoliert werden. Somit kann sie aus dem Kulturfiltrat durch beispielsweise Filtration oder Zentrifugierung gewonnen werden. Das Filtrat kann mit einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, wie 1-Butanol, Essigsäureethylester, Chloroform, Dichlormethan oder dergleichen, vorzugsweise Butanol oder Essigsäureethylester, extrahiert werden. Das aktive Material kann auch aus dem Mycelium durch Extraktion mit einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel, wie Methanol, Aceton, Acetonitril, N-Propanol oder Isopropanol, vorzugsweise Methanol oder Aceton, oder einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, wie t-Butanol, Essigsäureethylester, Chloroform, Dichlormethanol oder dergleichen, vorzugsweise Butanol oder Essigsäureethylester, gewonnen werden.
Die Extraktion des Kulturfiltrats kann über einen breiten pH-Wert-Bereich ausgeführt werden. Es ist jedoch bevorzugt, dass die Extraktion, in einem neutralen oder schwach sauren Medium, vorzugsweise bei einem pH-Wert zwischen 4 und 9, ausgeführt wird. Der organische Extrakt kann im Vakuum auf konzentriert und getrocknet werden, um das aktive Rohmaterial zu ergeben.
Die Isolierung oder Reinigung der Verbindung Amycomycin kann in bekannter Weise unter Anwenden der chemischen, physikalischen und biologischen Eigenschaften der natürlichen Verbindung ausgeführt werden.
Ein erfindungsgemäßes Isolierungsverfahren von Amycomycin ist die Lösungsteilung in an sich bekannter Weise.
Ein weiteres Verfahren zur Reinigung von dem Amycomycin erfolgt durch Chromatographie an Adsorptionsharzen, wie Diaion^® HP-20 (Mitsubishi Casei Corp., Tokio), an Amberlite^® XAD 7 (Rohm and Haas, USA), an Amberchrom^® CG (Toso Haas, Philadelphia, USA) oder an ähnlichen Harzen. Die Trennung kann bei einem pH-Bereich ausgeführt werden. Vorzugsweise ist der pH-Bereich 1 bis 9, bevorzugter 2 bis 8. Auch geeignet sind zahlreiche Umkehrphasenträger, beispielsweise RP₈ und RP₁₈, wie im Allgemeinen im Zusammenhang mit Hochdruckflüssigchromatographie (HPLC) veröffentlicht. Eine weitere Möglichkeit der Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindung besteht in der Anwendung von so genannten Normalphasenchromatographieträgern, wie Kieselgel oder Al₂O₃ (Aluminiumoxid) oder anderen in einer an sich bekannten Weise. Viele Elutionsmittel sind dafür geeignet, wie Dichlormethan, Chloroform, Methanol, Essigsäureethylester, Aceton, Petrolether oder Kombinationen davon. Der pH-Wert kann beispielsweise durch Zugabe von Triethylamin variiert werden.
Ein alternatives Isolierungsverfahren für die Verbindung Amycomycin ist die Anwendung von Molekularsieben, wie Fractogel^® TSK HW-40, Sephadex^® LH-20 und anderen in einer an sich bekannten Weise. Es ist darüber hinaus möglich, die Verbindung Amycomycin aus dem Rohmaterial durch Kristallisation zu gewinnen. Geeignet dafür sind beispielsweise organische Lösungsmittel und deren Gemische, wasserfrei oder mit dem Zusatz von Wasser.
Ein weiteres Verfahren für die Isolierung und Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindung besteht in der Anwendung von Anionenaustauschern, vorzugsweise im pH-Bereich von 7 bis 10, und Kationenaustauschern, vorzugsweise im pH-Bereich von 3 bis 7. Besonders geeignet für diesen Zweck ist die Anwendung von Pufferlösungen, zu denen Mengen der organischen Lösungsmittel gegeben wurden.
Außerdem ist Gegenstromchromatographie unter Anwendung eines Zweiphasenelutionssystems, hergestellt aus zwei oder mehreren Lösungsmitteln, wie Wasser, Methanol, Ethanol, Butanol, Isopropanol, Aceton, Dichlormethan, Essigsäureethylester oder Petrolether, ein mögliches Reinigungsverfahren.
Die Verbindung Amycomycin oder chemische Derivate davon können zu den entsprechenden pharmakologisch verträglichen Salzen durch dem Fachmann bekannte Verfahren umgewandelt werden.
Pharmakologisch verträgliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen sind anorganische oder organische Salze, wie in Remington's Pharmaceutical Sciences (17. Ausgabe, Seite 1418 (1985)), beschrieben. Mögliche Salze sind Alkalimetallsalze, Ammoniumsalze, Erdalkalimetallsalze, Salze mit physiologisch verträglichen Aminen und Salze mit anorganischen oder organischen Säuren, wie HCl, HBr, H₂SO₄, Maleinsäure und Fumarsäure.
Ester gemäß der vorliegenden Erfindung können beispielsweise durch Umsetzen von Amycomycin mit Carbonsäuren in Gegenwart von Reagenzien, wie Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), oder durch Behandeln der Verbindung mit einem Acylierungsmittel, wie einem Säurechlorid, hergestellt werden.
Ether gemäß der vorliegenden Erfindung können beispielsweise aus Amycomycin durch Reaktion mit alkylierenden Mitteln unter basischen Bedingungen hergestellt werden.
Andere Herstellungsverfahren von Estern und Ethern werden in der Literatur, beispielsweise in Advances Organic Synthesis, 4. Ausgabe, J. March, John Wiley & Sons, 1992, angegeben.
Die physikalisch-chemischen sowie die spektroskopischen Eigenschaften der Verbindung Amycomycin gemäß der Erfindung sind wie nachstehend:
Aussehen: farbloser Feststoff, löslich in Methanol, DMSO, Pyridin
Molekülformel: C₆₅H₁₁₅NO₁₈
HPLC (Hochleistungsflüssigchromatographie):
Säule: Purospher Star RP.18e (Merck), 55 × 4 mm, 3 μm
Elutionsmittel: CH₃CN/0,01 % H₃PO₄ (85 %) Gradient:

Zeit (min) % CH₃CN

0,00 5,0

3,00 95,0

5,00 95,0

6,00 5,0

10,00 5,0

Fließgeschwindigkeit; 2 ml/min
Temperatur: 40°C
Detektion: 210 nm, 254, 280, 320, 380
t_R: 2,67 min
Molekulargewicht: 1198,64 Da
HR-FAB-MS: 1220,801187 [M+Na]⁺
¹H- und ¹³C-NMR: siehe Tabelle 1
UV/VIS: MeOH, _max(log) = 229 nm (3,29), 281 (3,16) Tabelle 1: Chemische Verschiebung von Amycomycin in MeOH bei 300 K.

b) Breite Signale
c) Diese Signale sind nicht sichtbar. C60 und C69 könnten nur mit dem HMQC-Spektrum zugeordnet werden.

Amycomycin hat außergewöhnliche antibakterielle Wirkung, insbesondere gegen grampositive Bakterien, wie beispielsweise Staphylo- und Enterokokken. Minimale Inhibitorkonzentrationen von Amycomycin gegen einen breiten Bereich von Bakterien werden in Tabelle 2 nachstehend angegeben. Diese Stämme haben sich zunehmend als Problemstämme erwiesen, d.h., jene Mikroorganismen, die gegen bekannte Antibiotika resistent geworden sind. Die Überlegenheit der vorliegenden Erfindung bezüglich anderer Antibiotika wird beispielsweise in der Inhibierung der Vancomycin- und Teicoplaninresistenten Stämme, wie beispielsweise E. faecalis, E. faecium oder E. gallinarium, gezeigt. Tabelle 2: Minimale Inhibierungskonzentration (mg/l) (Mikroverdünnungstest)
Amycomycin und seine pharmazeutisch verträglichen Salze und Derivate können an Lebewesen, vorzugsweise an Säuger und insbesondere an Menschen, als Pharmazeutika selbst, in Gemischen miteinander und in Form von pharmazeutischen Zusammensetzungen, die parenterale oder andere Verabreichungsarten erlauben, verabreicht werden. Folglich betrifft die vorliegende Erfindung auch Amycomycin und seine pharmazeutisch verträglichen Salze und Derivate zur Verwendung als Pharmazeutika und die Verwendung von Amycomycin und seinen pharmazeutisch verträglichen Salzen und Derivaten zur Herstellung von Arzneimitteln mit antibakterieller Aktivität. Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine wirksame Menge von Amycomycin und/oder einem oder mehreren pharmazeutisch verträglichen Salzen und/oder Derivaten davon, zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger, enthalten.
Amycomycin kann enteral (oraler Weg), parenteral (intravenös oder intramuskulär), rektal oder lokal (topisch) verabreicht werden. Pharmazeutische Zusammensetzungen, die Amycomycin oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder Derivat davon mit anderen pharmazeutisch aktiven Substanzen enthalten, können durch Vermischen der Wirkstoffe mit einem oder mehreren pharmakologisch tolerierten Hilfsstoffen und/oder Exzipienten und Umwandeln des Gemisches in eine geeignete pharmazeutische Form, wie Lösungen, Pulver (Tabletten, Kapseln, einschließlich Mikrokapseln), Salben (Cremes oder Gele), Liposomenzubereitungen, Lipidkomplexe, kolloidale Dispersionen oder Suppositorien, die zur Verabreichung geeignet sind, hergestellt werden.
Mögliche Hilfsmittel und/oder Exzipienten für Formulierungen dieses Typs sind die pharmazeutisch üblichen flüssigen oder festen Füllstoffe und Extender, Lösungsmittel, Emulgatoren, Gleitmittel, geschmackskorrigierende Mittel, Färbemittel und/oder Puffersubstanzen.
Normalerweise hängen die galenische Formulierung und das Verabreichungsverfahren sowie der Dosierungsbereich, die in einem speziellen Fall geeignet sind, von der zu behandelnden Spezies und dem Status des entsprechenden Zustands oder Erkrankung ab und kann unter Anwendung auf dem Fachgebiet bekannter Verfahren optimiert werden. Als ein Beispiel kann eine Dosis von 0,001 bis 10 mg, vorzugsweise 0,1 bis 5 mg, bevorzugter 1,0 mg für ein Körpergewicht von ungefähr 75 kg ge eignet sein. Die Dosis sollte mindestens ausreichend sein, um den gewünschten Effekt zu erzeugen.
Das Nachstehende sind erläuternde Beispiele der vorliegenden Erfindung, jedoch nicht auf deren Umfang beschränkt.
Beispiel 1:
Herstellung von Saatmaterial
100 ml Nährlösung (4 g/l Hefeextrakt, 15 g/l lösliche Stärke, 1 g/l K₂HPO₄, 0,5 g/l MgSO₄ × 7 H₂O, gefüllt mit Wasser auf 1000 ml, pH 7,0 vor der Sterilisierung) in einem sterilen 300-ml-Erlenmeyer-Kolben wird mit dem Stamm Amycolatopsis sp. (DSM 12216) inokuliert und 5 Tage bei 28°C und 180 U/min an einem Rotationsschüttler inkubiert. 1,5 ml dieser Kultur werden anschließend mit 1,5 ml 99%igem Glycerin verdünnt und bei 20°C gelagert.
Beispiel 2:
Herstellung der Kultur oder Vorkultur vom Amycolatopsis sp., ST101170 (DSM 12216) in Erlenmeyer-Kolben
Ein steriler Erlenmeyer-Kolben, der 100 ml des nachstehenden Nährmediums enthält: 10 g/l Stärkelösung, 10 g/l Glukose, 10 g/l Glycerin 99 %, 2,5 g/l Maisquellwasser oder -lauge, 5 g/l Pepton, 2 g/l Hefeextrakt, 1 g/l NaCl und 3 g/l CaCO₃ wird mit einer Schleife voll Wachstumskultur (gleiche Nährmittellösung, jedoch mit 2 % Agar) oder mit 1 ml einer Glycerinkultur (siehe Beispiel 1) inokuliert und auf einem Schüttler bei 180 U/min und 28°C inkubiert. Maximale Erzeugung der Verbindung Amycomycin wird nach 72 Stunden erreicht.
Eine 72 Stunden alte submerse Kultur (hergestellt gemäß dem beschriebenen Verfahren für die Schüttelkultur, Beispiel 1, jedoch mit dem nachstehenden Medium: 15 g/l Glukose, 15 g/l Sojamehl, 3 g/l CaCO₃ und 5 g/l NaCl, pH 7,5) ist ausreichend für die Inokulierung von 10- und 200-l-Fermentern in einer Inokulationsmenge von 10 %.
Beispiel 3:
Herstellung der Verbindung Amycomycin
Ein 200-l-Fermenter wurde mit den nachstehenden Parametern gefahren:
Nährmedium:

10 g/l Stärke
10 g/l Glukose
10 g/l Glycerin 99
2,5 g/l Maisquellwasser
5 g/l Pepton
2 g/l Hefeextrakt
7 g/l NaCl
3 g/l CaCO₃

pH 7,2 (vor der Sterilisierung)
Inokulum: 10 % Fermentervolumen
Inkubationszeit: 60 bis 80 Stunden
Inkubationstemperatur: 28°C
Bewegen: 50 U/min
Belüftung: 150 l/min

Durch Zugabe von 1 bis 2 ml einer ethanolischen Polyollösung war es möglich, die Schaumbildung zu begrenzen. Das Herstellungsmaximum war nach 69 Stunden erreicht.
Beispiel 4:
Isolierung der Verbindung Amycomycin
200 l der aus Beispiel 3 erhaltenen Kulturlösung wurden zentrifugiert und das Mycelium wurde mit Methanol erschöpfend extrahiert. Der Methanolextrakt wurde zu einem Verhältnis von ungefähr 1:10 auf konzentriert unter Gewinnung eines farblosen Niederschlags, der abfiltriert wurde. Dieses Verfahren wurde wiederholt, bis die Substanz Amycomycin nicht mehr in dem Filtrat nachgewiesen werden konnte (HPLC). Der Rückstand wurde gefriergetrocknet und anschließend durch HPLC gereinigt:

1. Säule: ^®Fractogel TSK-HW 40 (4 l, 500 × 100 mm) Elutionsmittel: MeOH Fließgeschwindigkeit: 20 ml/min Detektion: 204 und 236 nm

Die mit Amycomycin angereicherten Fraktionen eluierten nach 125 Minuten. Die Fraktionen wurden, bezogen auf HPLC (vorstehend erwähnte Bedingungen), vereinigt. Die aktiven vereinigten Fraktionen mit der gewünschten Verbindung wurden im Vakuum aufkonzentriert und gefriergetrocknet.

2. Säule: Kieselgel 60 (Merck); Erimatech (300 × 20 mm, 100 ml) Elutionsmittel: A) CH₂Cl₂ B) CH₂Cl₂:MeOH 9:1 C) MeOH

Der Wirkstoff Amycomycin eluierte nach 42 Minuten. Die Fraktionen wurden, bezogen auf HPLC (vorstehend erwähnte Bedingungen), vereinigt. Die aktiven vereinigten Fraktionen mit der gewünschten Verbindung wurden im Vakuum aufkonzen-triert und gefriergetrocknet.

3. Säule: ^®Fractogel TSK-HW 40 (1 l, 500 × 50 mm) Elutionsmittel: MeOH Fließgeschwindigkeit: 5 ml/min Detektion: 204 und 236 nm

Die Wirkkomponente Amycomycin eluierte nach 112 Minuten.
Aus 200 l Fermentationsbrühe konnten 110 mg Amycomycin gemäß dem vorstehenden Verfahren gewonnen werden.

Claims

Verbindung der Formel:
und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze, Ester und Ether in allen ihren stereoisomeren und tautomeren Formen.
Verbindung der Molekülformel C₆₅H₁₁₅NO₁₈, erhältlich durch Züchten des Mikroorganismus der Art Amycolatopsis, ST101170 (DSM 12216), unter aeroben Bedingungen in einem Nährmedium, das Quellen von Kohlenstoff und Stickstoff enthält, gefolgt von Isolierung und Reinigung in üblicher Weise, und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze in allen ihren stereoisomeren und tautomeren Formen.
Verfahren zur Herstellung der Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, umfassend Züchten des Mikroorganismus der Art Amycolatopsis, ST101170 (DSM 12216), unter aeroben Bedingungen in einem Nährmedium, das Quellen von Kohlenstoff und Stickstoff enthält, gefolgt von Isolierung und Reinigung der Verbindung in üblicher Weise.
Verfahren nach Anspruch 3, das weiterhin Umwandlung der erhaltenen Verbindung in ein pharmakologisch tolerierbares Salz umfasst.
Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2 zur Verwendung als Arzneimittel.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine wirksame Menge einer Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2 zur Verwendung als Antibiotikum.