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Bereich der
Erfindung
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Die vorliegende Erfindung betrifft
ein Arzneimittel, dieses soll als ein Mittel, das die funktionale
Aktivität der
Neuronen bei Erkrankungen und Traumata des zentralen Nervensystems
stimulieren soll, verwendet werden.
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Hintergrund
der Erfindung
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Es gibt verschiedene bekannte Arzneimittel,
wie Pyracetam, Aminalon, Pyriditol, Pantogam, Natriumoxybutyrat
usw. (1), die im cerebralen Gewebe Redoxoprozesse stimulieren, die
Verwendung von Glukose verstärken
und den örtlichen
Blutfluss verbessern. Diese Wirkungen führen zu einer erhöhten Widerstandskraft der
Neuronen gegenüber
einer Hypoxie.
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Die Nachteile dieser Mittel sind,
dass sie nur die Synthese von neurotrophen Faktoren stimulieren, selbst
aber eine keine neurotrophe Aktivität besitzen (2). Diese Mittel
sind nicht frei von Nebenwirkungen und Kontraindikationen. Solange
die Möglichkeiten
der intrazellulären
Biosynthese in veränderten
Neuronen nicht wesentlich sind, scheint die Stimulation der Regeneration
durch Zuführen
natürlicher
neurotropher Faktoren angebrachter.
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Es ist ebenfalls Cerebrolysin bekannt,
ein cerebrales Hydrolysat, das kein Protein ist, umfassend freie Aminosäuren und
niedermolekulare Peptide (3). Dieses Mittel erhöht die Wirksamkeit des aeroben
Energie-Stoffwechsels, verbessert die intrazelluläre Proteinsynthese,
zeigt neuroprotektive und neurotrophe Aktivität und zeigt eine positive Wirkung
bei kognitiven Veränderungen
auf.
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Der Nachteil dieses Mittels ist,
dass dessen neurotrophe Wirkungen weniger potent sind als die der natürlichen
neurotrophen Faktoren. Die Verabreichung des Arzneimittels führt zu keiner
deutlichen Verbesserung der anatomen Struktur und der funktionalen
Aktivität
in geschädigten
cerebralen und spinalen Neuronen (4, 5, 6). Die Anwendung von Cerebrolysin
kann Nebenwirkungen umfassen. Weiterhin ist ein akutes Nierenversagen
eine Kontraindikation dieses Mittels.
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Es gibt bekannte neurotrophe Faktoren,
die niedermolekulare Proteine sind (15-30 kDa), und durch die zellulären Bausteine
des Zentralen Nervensystems synthesisiert werden: Neuronenwachstumsfaktor,
neurotropher Faktor aus dem Cerebrum, 3-, 4- und 5-Neurotrophine,
basische und saure Fibroblasten Wachstumsfaktoren, epidermaler Wachstumsfaktor,
Astrocytenfaktor-S-100-Protein, Lipoprotein (7, 8). Das Zuführen dieser
Mittel in niedrigen Dosen zu Neuronenkulturen stellt eine Zellfunktion
bereit, erlaubt das Bilden und Wachstum von Axonen durch Stimulation
der RNA, DNA und proteinbiosynthese. Neurotrophe Faktoren sind sowohl
notwendig für
das Überleben
als auch zur Differenzierung der Neuronen während der Embryogenese und
zur Aufrechterhaltung der morphologischen und funktionellen Eigenschaften
der reifen Zellen. Es wurde allerdings in Studien gezeigt, dass
ihre Wirksamkeit nur auf die neuroprotektive Wirkung begrenzt ist
und die neurotrophen Wirkungen erst in den späteren Abschnitten auftreten.
Endogene Peptidsubstanzen im Zentralen Nervensystem sind als Signalvermittler
bei der zwischenneuronalen oder Neuroeffektortransmission bekannt,
und sie können
als Neurohormone, Neurotransmitter oder Neuromodulatoren funktionieren
(9, 10, 11). Diese endogenen Substanzen, Neuropeptide, werden von
kommunizierenden neuronalen Elementen freigesetzt, so dass eine
Zielstruktur diese als Information erkennt. Neuropeptide wurden
als Mittel der integralen Modulation von CNS-Funktionen, wie regenerierenden
Prozessen, Gedächtnis,
emotionellen Wirkungen, Empfindung von Schmerz und Freude usw. gefunden.
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Es gibt bekannte Peptide, Corexin
und Epithalamin, die aus den Hirn von Kühen extrahiert werden (Molekulargewicht – 10 kDa)
und in der Lage sind, strukturelle und funktionelle Homöostasis
von Zellpopulationen, die diese Peptide sekretieren, zu unterstützen (12,
13).
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Die vorliegende Anmeldung unterscheidet
sich von dem Stand der Technik durch eine neue Aminosäuresequenz
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro und wurde zur Lösung des Problems gemacht,
neue Peptide mit funktioneller stimulierender Aktivität auf Neuronen
zu erhalten.
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Offenbarung
der Erfindung
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Die vorliegende Erfindung zielt auf
ein Erhalten einer neuen biologisch aktiven, von Peptid abstammenden
Substanz, die in der Lage ist, die funktionelle Aktivität von Neuronen
zu stimulieren. Die offenbarte Peptidverbindung, ein Tetrapeptid,
hat keine strukturellen Analoga.
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Gemäß der vorliegenden Erfindung
wird ein Tetrapeptid, L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin, L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro,
offenbart.
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Erfindungsgemäß zeigt das Tetrapeptid L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin
mit der vorliegenden Aminosäuresequenz
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro eine biologische Aktivität, nämlich sie stimuliert die funktionelle, neuronale
Aktivität
im zentralen und peripheralen Nervensystemen aufgrund der Normalisierung
von Stoffwechselprozessen, der Stimulation von Parametern der Antioxidationsabwehr,
der Verbesserung von elektrophysiologischen Indices.
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Das Tetrapeptid wird durch ein klassisches
Verfahren der Peptidsynthese in Lösung erhalten (9).
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Die stimulierende Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf die funktionelle Aktivität von Neuronen wurde experimentell
gefunden. Die biologische Aktivität wurde in Explantaten des
Nervengewebes untersucht, wobei gewebespezifische Wirkungen des
Tetrapeptids in Ratten untersucht wurden unter Aus nutzung der Indices
der Antioxidationsabwehr und des Serotoninstoffwechsels im Gehirn
und der cerebroprotektiven Wirkung im Falle von toxischen und traumatischen
Einwirkungen.
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Erfindungsgemäß enthält das pharmakologische Mittel
zur Stimulation der neuronalen funktionellen Aktivität als aktive
Basis eine wirksame Menge des Tetrapeptids der allgemeinen Formel
L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin (L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro) oder dessen Salze.
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Erfindungsgemäß kann das pharmakologische
Mittel zur Stimulation der neuronalen funktionellen Aktivität Salze
der Aminogruppe (Acetat, Hydrochlorid, Oxalat) oder der Carboxylgruppen
(Metallsalze – Natrium, Kalium,
Calcium, Lithium, Zink, Magnesium und von anderen organischen oder
anorganischen Anteilen, wie Ammonium und Triethylammonium) enthalten.
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Erfindungsgemäß ist das pharmazeutische Mittel
so gestaltet, dass es zur parenteralen, intranasalen oder oralen
Verabreichung geeignet ist.
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Das verwendete pharmazeutische Mittel
zur Stimulation der funktionalen Aktivität von Neuronen ist in der Lage,
den Stoffwechsel und das Wachstum von veränderten Nervengewebestrukturen
wiederherzustellen.
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In der Erfindung einschl. den Beispielen
und bevorzugten Ausführungsformen
wird die folgende allgemein verwendete Terminologie genutzt.
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"Pharmazeutisches
Mittel" bezieht
sich in der vorliegenden Erfindung auf die Verwendung irgendeiner Arzneimittelform
enthaltend das Tetrapeptid oder dessen Salze, wie sie in der Medizin
zu vorbeugenden oder therapeutischen Zwecken verwendet werden können, als
Mittel zur Wiederherstellung der strukturellen und funktionalen
Integrität
von Nervengewebe.
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"Wirksame
Menge" bezieht sich
in der vorliegenden Erfindung auf die Verwertdung einer solchen
Menge einer aktiven Grundsubstanz, die gemäß quantitativen Indices der
Aktivität
und Toxizität,
sowie auf Grundlage der Kenntnis des Fachmanns, in seiner Arzneimittelform
wirksam ist.
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"Pharmazeutische
Zusammensetzung" bezieht
sich in der vorliegenden Erfindung auf die Verwendung von verschiedenen
Arzneiformen des medizinischen Mittels.
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Um entsprechende erfindungsgemäße pharmazeutische
Zusammensetzungen zu erhalten, wird bevorzugt das verwendete Tetrapeptid
oder pharmazeutisch annehmbare Derivate davon als wirksamer Inhaltsstoff
mit einem pharmazeutischen Träger
gemäß den Verfahren
zum Mischen, wie sie in der pharmazeutischen Industrie anerkannt
sind, vermischt.
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Der Träger kann in verschiedenen Formen
in Abhängigkeit
von der Arzneiform des Mittels, wie es dem Körper verabreicht werden soll,
z.B. parenteral, intranasal oder oral gestaltet sein.
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Um Zusammensetzungen in der bevorzugten
Dosisform zur oralen Verabreichung herzustellen, können irgendwelche
bekannten pharmazeutischen Komponenten verwendet werden.
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Zur parenteralen (intranasalen) Verabreichung
umfasst der Träger
normalerweise steriles Wasser, obwohl andere Inhaltsstoffe, die
zur Stabilität
oder Sterilität
beitragen, zugefügt
werden können.
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Erfindungsgemäß beinhaltet das Verfahren
die therapeutische und vorbeugende Verabreichung des beanspruchten
pharmazeutischen Mittels an einen Patienten mit 0,01 bis 100 μg/kg Körpergewicht,
mindestens einmal täglich
für einen
Zeitraum der notwendig ist, um eine therapeutische Wirkung zu erzielen,
von 10 bis 50 Tagen in Abhängigkeit
von den Eigenschaften und der Schwere der pathologischen Prozesses.
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Erfindungsgemäß ist das Tetrapeptid wirksam,
wenn es in Dosen von 0,01 bis 100 μg/kg Körpergewicht verabreicht wird,
natürlich
können
auch niedrigere (oder höhere)
Dosen in Abhängigkeit
von den Eigenschaften und der Schwere des pathologischen Prozesses
verwendet werden.
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Industrielle Anwendung
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Die Erfindung wird beispielhaft dargestellt
durch ein Beispiel zur Synthese des Tetrapeptids mit der Formel
L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin (L-Alqa-L-Glu-L-Asp-L-Pro) (Beispiel
1), durch Beispiele zum Testen der Toxizität und der biologischen Aktivität des Tetrapeptids
(Beispiele 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9) und durch Beispiele der klinischen
Anwendung des Tetrapeptids, die die pharmazeutischen Eigenschaften
aufzeigt und die Möglichkeit
bestätigt,
eine vorbeugende und/oder therapeutische Wirkung zu erzielen (Beispiel
9 und 10).
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Beispiel 1
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Synthese von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid
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- 1. Produktname: L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin
- 2. Strukturformel: H-Ala-Glu-Asp-Pro-OH
- 3. Summenformel ohne Ionenpaar: C17H26N4O9
- 4. Molekulargewicht ohne Ionenpaar: 430,41
- 5. Ionenpaar: Acetat
- 6. Aussehen: Weißes,
amorphes, geruchloses Pulver
- 7. Syntheseverfahren: Das Peptid wurde durch ein klassisches
Verfahren zur Synthese in Lösung
gemäß dem folgenden
Schema erhalten. Z – Benzyloxycarbonylgruppe;
BOC – Tert.Butyloxycarbonylgruppe;
Osu – N-oxysuccinimidester;
Obzl – Benzylester;
DCC – N,N'-D-dicyclohexylcarbodiimid;
HOBT – N-oxybenzotriazol.
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N,N'-dimethylformamid wurde als Lösungsmittel
verwendet. Durch Einfügen
von Asparaginsäure
wurde die α-COOH-Gruppe
durch Salzbildung mit Triethylamin geschützt. Die BOC-Schutzgruppe wurde
mit Triflour-Essigsäure-
(TFA) Lösung
geschützt
und die Z-Schutzgruppe wurde mittels katalytischer Hydrierung geschützt. Das
Produkt wurde extrahiert und gereinigt mittels dem Verfahren der
preparativen Hochleistungs-Flüssigchromatographie
(HPLC) auf einer Umkehrphasensäule.
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Spezifikation
des Endprodukts:
Aminosäure-Assay
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- – Peptidgehalt:
98,56% (mittels HPLC, 200 nm);
- – Dünnschicht-Chromatographie
(TLC) – individuell;
Rf = 0,67 (Acetonitril- Essigsäure-Wasser 5:1:3);
- – Feuchtigkeitsgehalt:
7%;
- – pH
der 0,001 %-Lösung:
4,24;
- – spezifische
Drehung [α]D
25: –78,9°(c = 1,09,
H2O), "Polamat
A", Carl
- Zeiss, Jena.
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Synthesebeispiel
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1) BOC-Glu(Obzl)-Asp(Obzl)-OH
(I), N-tert.butyloxycarbonyl-(γ-benzyl)-glutamyl(β-benzyl)aspartat
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4,34 g (0,0100 mol) N-oxysuccinimidester
N-tert.butyloxycarbonyl-(γ-benzyl)glutaminsäure BOC-Glu(OBzl)-OSu
wurden, in 20 ml Dimethylformamid gelöst und 1,72 ml (0,0125 mol)
Triethylamid und 2,80 g (0,0125 mol) β-benzylaspartat wurden hinzugefügt. Die
Mischung wurde bei Raumtemperatur für 24 Stunden gerührt. Das
Produkt wurde mit 0,5 N Schwefelsäure (150 ml), präzipitiert,
mit Ethylacetat (3 × 30
ml) extrahiert, mit 0,5 N Schwefelsäure (2 × 20 ml), Wasser, 5% Natriumbicarbonat
(1 × 20
ml), Wasser, 0,5 N Schwefelsäure
(2 × 20
ml), Wasser gewaschen und über
wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Ethylacetat wurde filtriert
und im Vakuum bei 40°C
entfernt. Der Rest wurde im Vakuum über P2O5 getrocknet. Als Ergebnis wurden 5,68 g
(≈ 100%)
eines Öls
erhalten.
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Rf = 0,42
(Benzol-Aceton 2:1, Sorbfilplatten, 8 – 12 μm Silikatgel, Entwicklung UV
und Chlor/Benzidin).
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2) TFA H-Glu(Obzl)-Asp(Obzl)-OH
(II), Trifluoracetat (γ-benzyl)-glutamyl-(β-benzyl)aspartat
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5,68 g (≈ 0,01 mol) N-tert.butyloxycarbonyl-(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartat (I)
wurden in 20 ml Dichlormethan-Trifluoressigsäuremischung (3:1) gelöst. Innerhalb
von 2 Stunden wurde das Lösungsmittel
in vacuo bei 40°C
entfernt, das Entfernen wurde mit einer Zugabe von einem weiteren
Teil Dichlormethan (2 × 10 ml)
wiederholt und der Rest wurde in vacuo über NaOH getrocknet. Es wurden
5,80 g (≈ 100%)
eines Öls
erhalten. Rf = 0,63 Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser,
15:10:3:12).
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3) Z-Ala-Glu(OBzl)-Asp(Obzl)-OH
(III), N-bezyloxycarbonyl Alanyl-(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartat
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5,65 g (0,01 mol)γ-benzylglutamyl-(β-benzyl)aspartattrifluoracetat
(II) wurden in 10 ml Dimethylformamid gelöst und 2,80 ml (0,02 mol) Triethylamin
und 4,14 g (0,013 mol) in N-benzyloxy-carbonylalanin N-oxysuccinimidester
wurden hinzugefügt.
Die Mischung wurde bei Raumtemperatur für 24 Stunden gerührt. Das Produkt
wurde mit 0,5 N Schwefelsäure
(150 ml) präzipitiert,
mit Ethylacetat (3 × 30
ml) extrahiert, mit 0,5 N Schwefelsäure (2 × 20 ml), Wasser, 5% Natriumbicarbonat
(1 × 20
ml), Wasser, 0,5 N Schwefelsäure
(2 × 20 ml),
Wasser gewaschen und über
wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Ethylacetat wurde filtriert
und in vacuo bei 40°C
entfernt und der Rest wurde im Ethylacetat/Hexansystem kristallisiert.
Das Produkt wurde filtriert und in vacuo über P2O5 getrocknet. Die Ausbeute war 4,10 g (66%).
Schmelzpunkt: 154°C.
Rf = 0,48 (Benzol-Aceton, 1:1), Rf = 0,72 (n-butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser,
15:10:3:12).
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4) Z-Ala-Glu(Obzl)-Asp(Obzl)-Pro-OH(III),
N-benzyloxycarbonylalanyl-(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartylprolinbenzylether
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0,72 g (3 mmol) HCIH-Pro-Obzl, Prolinbenzylesterhydrochlorid,
wurden in 15 ml Tetrahydrofuran suspendiert und 0,4 ml (3 mmol)
Triethylamin wurden unter Rühren
hinzugefügt;
anschließend
wurden in 5 Minuten 1,28 g (2 mmol) N-benzyloxycarbonylalanyl(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)-aspartat (III) und
0,27 g (2 mmol) N-oxybenzotriazol hinzugefügt: Die Mischung wurde auf
0 °C heruntergekühlt. Anschließend wurde
eine auf 0 °C
heruntergekühlte
Lösung
von 0,42 g (2 mmol) N,N'dicyclohexylcarbodiimid
in 5 ml Tetrahydrofuran hinzugefügt.
Die Mischung wurde bei 0 °C
für 2 Stunden
gerührt
und anschließend über Nacht
bei Raumtemperatur. Der Rest des Dicyclohexylharnstoffs wurde abfiltriert,
das Lösungsmittel
wurde in vacuo entfernt und der Rest wurde in 30 ml Ethylacetat
gelöst.
Die Lösung
wurde mit 1 N Salzsäure,
Wasser, 5 % Natriumbicarbonat, Wasser, 1 N Salzsäure, Wasser gewaschen und über wasserfreiem
Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde
in vacuo entfernt und in Ethylacetat/Hexansystem kristallisiert.
Die Ausbeute war 1,50 g (90 %). Tml = 125 – 128 °C, Rf = 0,40 (Benzol-Aceton, 2:1).
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5) H-Ala-Glu-Asp-Pro-OH
(IV), Alanyl-glutamyl-aspartyl-prolin
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1,50 g N-benzyloxycarbonylalanyl(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartylprolin
Benzylester (III) wurde im Methanol-Wasser-Essigsäuresystem
(3:1:1) über
Pd/C Katalysator hydriert. Der Fortschritt des Entschützens wurde
mittels TLC-Verfahren in Benzol-Aceton- (3:1) und Acetonitril-Essigsäure-Wasser-
(5:1:3) Systemen überwacht.
Nach Beendigung der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert.
Das Filtrat wurde in vacuo entfernt und der Rest wurde im Wasser/Methanolsystem
kristallisiert. Das Produkt wurde in vacuo über KOH getrocknet. Die Ausbeute
war 0,66 g (86 %). Rf = 0,67 (Acetonitril-Essigsäure-Wasser,
5:1:3).
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Zur Aufreinigung wurden 508 mg des
Produkts in 4 ml 0,01 % Trifluoressigsäure gelöst (pH der Probe 2,23) und
eine HPLC mit einer Umkehrphasensäule 50 × 250 mm Diasorb-130-C16T,
7 μ unterworfen.
Das verwendete Chromatographiegerät war Beckman System Gold,
126 Solvent Module, 168 Diode Array Detector Module. Chromatographiebedingungen
A: 0,1 % TFA; B: 50 % MeCN/0,1 % TFA, Gradient B 0 → 16 % in
240 Minuten. Probe-Volumen entsprach 5 ml, Nachweis wurde durchgeführt bei
215 nm durch Scannen von 190 – 600
nm, Flussrate 10 ml/min. die Fraktion wurde ausgewählt aus
dem Bereich von 127 – 155
Minuten. Das Lösungsmittel
wurde in vacuo bei einer Temperatur, die nicht 40 °C überschritt,
entfernt. Das Entfernen wurde 5 × mit 10 ml 10 % Essigsäure wiederholt.
Schließlich
wurde der Rest in 20 ml deionisiertem Wasser gelöst und lyophilisiert. Als Ergebnis
wurde 303 mg aufgereinigtes Produkt in Form eines amorphen geruchlosen
weißen
Pulvers erhalten.
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Um entsprechende Salze der Carboxylgruppen
zu erhalten, wurden dem freien Tetrapeptid eine berechnete Menge
einer wässrigen
Lösung
eines entsprechenden Metallhydroxids (NaOH, KOH, ZnOH2,
LiOH, CaOH2, MgOH2,
NH4OH) hinzugegeben. Um ein Triethylamminsalz
zu erhalten, wurde das Verfahren in ähnlicher Weise mit Hilfe von
Triethylamin als Base wiederholt.
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6. Analyse des Endprodukts
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- – Der
Peptidgehalt wurde erhalten durch HPLC-Verfahren auf einer Supelco
LC-18-DB-Säule,
4,6 × 250 mm,
Gradient LC-18-DB. A: 0,1 % TFA; B: 50 % MeCN/0,1 % TFA; Gradient
B 0 → 20
% in 30 Minuten. Flussrate 10 ml/min. Nachweis bei 220 nm, Scannen
von 190 – 600
nm, Proben-Volumen entsprach 2 μl. Peptidgehalt – 98,56
%.
- – Aminosäureassay
wurde mit einem Testgerät
AAA "T-339" Prag, durchgeführt. Die
Hydrolyse wurde in 6 N HCl bei 125 °C in 24 Stunden durchgeführt.
- – TLC:
Individuell, Rf = 0,67 (Acetonitril-Essigsäure-Wasser,
5:1:3, Sorb filplatten, 8 – 12 μm Silikatgel,
Entwicklung mit Chlor/Benzidin);
- – Feuchtigkeitsgehalt:
7 % (gravimetrisch gemäß den Massenverlust
durch Trocknen, – 20
mg bei 100 °C).
- – pH
der 0,001 % Lösung:
4,24 (potentiometrisch).
- – spezifische
Drehung: [α]D
25: –78,9° (c = 1,09,
H2O), "Polamat
A", Carl Zeiss Jena.
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Beispiel 2
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Studien zur L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid-Toxizität
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Mögliche
toxische Wirkungen des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf
den Organismus wurden gemäß "Regeln zur Abschätzung der
Sicherheit pharmakologischer Mittel" (GLP), wie sie von dem Staatlichen Kontrollinstitut
für Medizinische
Arzneimittel und Medizinische Ausrüstung der Russischen Föderation
vom 29. Dezember 1997 erlassen wurden, durchgeführt.
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Das Ziel der Untersuchung bestand
in der Definition der tolerierbaren toxischen Arzneidosis des Mittels,
Bestimmung des Niveaus und der Eigenschaft der pathologischen Veränderungen
in verschiedenen Organen und Systemen und dem Erkennen der Korrelation
zwischen den toxischen Wirkungen und der Dosis und der Dauer der
Arzneimittelverabreichung.
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Die akute Toxizität von L-Ala-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptide wurde gemäß Kerber
bestimmt. Die Studie wurde mit 66 weißen männlichen Inzuchtmäusen, die
20 – 23
g wogen und in einem Käfig
unter Standardbedingungen und unter Standardernährung gehalten wurden, durchgeführt. Die
Tiere wurden zufällig
in 6 gleiche Gruppen von jeweils 1 1 Mäusen eingeteilt. Die Tiere
wurden einer einzelnen intramuskulären Verabreichung von 0,25
ml der Präparation
in Dosen von 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg unterworfen
(mehreretausendmal größer als
die für
klinische Tests empfohlene therapeutische Dosis. Den Kontrolltieren
wurden gleiche Mengen an Salzlösung
verabreicht.
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Innerhalb von 72 Stunden und später innerhalb
von 14 Tagen verstarb keine der Mäuse in irgendeiner der Gruppen.
Keine Veränderung
im allgemeinen Zustand, Verhalten, Bewegungsaktivität, Haar-
und Hautaussehen, physiologische Veränderung der Tiere wurden beobachtet.
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Somit zeigte das Tetrapepid L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
in Dosen, die einige tausendfach über der empfohlenen therapeutischen
für klinische
Studien lag, keine akute toxische Reaktion auf, dies zeigt eine
breite therapeutische Anwendbarkeit dieser Präparation.
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Die subakute Toxizität von Tetrapeptid
L-Ala-L-GIu-L-Asp-L-Pro wurde in 60 weißen Inzuchtratten, die 150
bis 250 g wogen, untersucht. Den Tieren des Experiments wurde die
Präparation
intramuskulär
einmal am Tag verabreicht, täglich
für 90
Tage in Dosen von 1 μg/kg,
0,3 mg/kg, 3 mg/kg in 0,5 ml Salzlösung. Den Kontrolltieren wurden
in gleicher Menge Salzlösung
verabreicht.
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Über
den gesamten Untersuchungszeitraum wurden die Tiere täglich überwacht.
Das Verhalten der Tiere, Nahrung- und Wasserverbrauch, der Zustand
des Haaraufbaus und der mucosalen Membranen wurde festgestellt.
Die Tiere wurden einmal die Woche gewogen. Vor und nach dem 30.,
60. und 90. Tag der Arzneiverabreichung wurde die morphologische
Zusammensetzung und die Eigen schaften des peripheralen Blutes der
Tiere untersucht. Nach Beendigung der Studie wurden biochemische
und Blutkoagulotions-Indices erstellt.
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Chronische Toxizität von Tetrapeptid
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro, die gemäß den beanspruchten
Verfahren erhalten wurden, wurden mittels Langzeitverabreichung
davon bei Ratten mit einem Gewicht von 150 – 250 g erhalten. Die Tiere
wurden einer täglichen
intramuskularen Verabreichung des Arzneimittels in Dosen von 1 μg/kg, 0,1
mg/kg, 1 mg/kg in 0,5 ml Salzlösung
für 6 Monate
unterworfen. Das Verhalten der Tiere, Nahrungsmittel- und Wasserverbrauch,
der Zustand des Haaraufbaus und der mucosalen Membran wurde untersucht.
Die Tiere wurden täglich
für die
ersten Monate des Experiments gewogen und anschließend einmal
pro Monat. Hämatologische
und biochemische Untersuchungen wurden 3 Monate nach Beginn der
Arzneimittelverabreichung durchgeführt und am Ende des Experiments.
Die Funktion des kardiovaskulären
Systems, Leber, Pankreas, Nieren und adrenalen Drüsen wurden
untersucht. Nach Beendigung der Behandlung wurden einige Tiere pathomorphologischen
Untersuchungen unterworfen, mit dem Zweck, den Zustand verschiedener Bereiche
des Hirns und des Knochenmarks, Herz, Aorta, Lungen, Leber, Nieren,
Endokrin- und Immunorganen festzustellen.
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Die Beurteilung des allgemeinen Zustandes
der Tiere, morphologische und biochemische Indices des peripheren
Blutes, des morphologischen Zustands der intrinsischen Organe, der
Status des kardiovaskulären und
des Atmungssystems, der Leber- und Nierenfunktionen, zeigten keine
pathologischen Veränderungen.
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Die Untersuchung des Tetrapeptids
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro auf subakute und chronische Toxizität zeigte
die Abwesenheit von irgendwelchen Nebeneffekten bei verlängerter
Arzneimittelverabreichung in Dosen von 100 bis 1000-fach über der
therapeutischen.
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Beispiel 3
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Wirkung des Tetrapeptids
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro auf die Entwicklung von cerebralen Corteximplantaten
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Die Experimente wurden an 73 cerebralen
Kortexfragmenten von 10 – 11
Tage alten Hühnerembryos durchgeführt. Das
Kulturmedium für
die Explantate umfasste 35 % "Eagle's" Lösung,
25 % fötales
Kälberserum,
35 % "Hanks"' Lösung,
5 % Hühnerembryonenextrakt.
Dem Medium wurden weiterhin Glukose (0,6 %), Insulin (0,5 IU/ml),
Penicillin (100 IU/ml), Glutamin (2 mM) zugefügt. Die Fragmente des cerebralen
Kortex wurden in dieses Medium gegeben und in Petrischalen in einem
Thermostaten bei 36,7 °C
2 Tage kultiviert. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid und Cerebrolysin in Konzentration von 0,5, 1, 2, 20,
50, 100, 200, 400, 800, 1000 ng/ml wurden dem Medium hinzugefügt. Der
Flächenindex
(Area Index, Al) diente als Kriterium für die biologische Aktivität und reflektiert
das Verhältnis
an Gesamtexplantatbereich einschließlich der Wachstumszone, zu
der anfänglichen
Fläche
des Kortexfragments. Students's
t-Test wurde zur Bewertung der signifikanten Unterschiede zwischen
den verglichenen durchschnittlichen Al-Werte verwendet. Al-Werte
wurden in Prozent ausgedrückt.
Der Kontroll-Al-Wert wurde als 100 % genommen.
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Die Wachstumszone der Kontrollkortexexplantate
schloss Kurzaxon, Neurogliazellen, die zur Peripherie migrierten
und fibroblastenartige Zellen ein.
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Die folgenden Serien an Experimenten
wurden durchgeführt,
um die direkte Wirkung des Arzneimittels auf die cerebralen Kortexfragmente
zu untersuchen.
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Cerebrolysin in verschiedenen Konzentrationen
wurde zu dem Kulturmedium der cerebralen Kortexexplantate der Hühnerembryos
gegeben. Am dritten Tag der Kultivierung wurde eine signifikante
Zunahme des Al des Explantats beobachtet (mit 30 ± 2%) bei
einem Vergleich von 100 ng/ml mit den Kontroll-Al-Werten. Keine
signifikanten Al-Werte der Kortexexplantate beim Verwenden anderer
Konzentration an Cerebrolysin wurden beobachtet (1). Die Entwicklung der cerebralen Explantate
wurde deutlich durch L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid in einer
Konzentration von 20 ng/ml stimuliert. Dabei war der Al der Explantate
mit 40 ± 7%
im Vergleich zu der Al der kontrollcerebralen Kortexfragmente höher.
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Die gleiche Axon stimulierende Wirkung
durch die gleichen Konzentrationen zeigte sich im Falle von verlängerter
(für 7
Tage) Kultivierung der Kortexexplantate. Manchmal wurde ein statistisch
nicht signifikanter Rückgang
im Explantat I beobachtet, vermutlich aufgrund des Zurückziehens
von Nervenfasern bei verlängerter
Kultivierung.
-
Somit wurde bei cerebralen Geweben
ein erniedrigter Ausschlusswert für die wirksamen Konzentrationen
an L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid im Vergleich zu Cerebrolysin
beobachtet. Cerebrolysin stimulierte z.B. kultivierte kortikale
Fragmente in Konzentration von 100 ng/ml, während das Tetrapeptid dies
in einer Konzentration von 20 ng/ml aufzeigte, dies zeigt eine deutlichere
und gezieltere Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids
auf die Neuronen des cerebralen Kortex.
-
Beispiel 4
-
Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptids auf die Intensität
der Lipidperoxidoxidationsreaktion im cerebralen Kortex
-
Die Stärke der Lipidperoxidoxidation
(LPO) wurde mit Hilfe der Menge an anfänglichen LPO-Produkten, Dienkonjugaten
und Endprodukten, Schiffschen Basen, untersucht. Der Grad an Proteinperoxidation
wurde bestimmt durch die Menge an Aminosäuren, die von Carbonyl stammen,
in Proteinen nach ihrer Interaktion mit 2,4-Dinitrophenylhydrazin.
-
Die Studie wurde an 20 weißen Inzuchtratten
durchgeführt.
1 μg Tetrapeptid
wurde den Tieren täglich intraperitoneal
für 5 Tage
verbreicht.
-
Das getestete Tetrapeptid stellte
sich heraus als eines, dass signifikant die Bildung von LPO-Produkten
im cerebralen Kortex unterdrückt.
Unter Wirkung des Tetrapeptids nahm die Menge an Dienkonjugaten
signifikant ab und die der Schiffschen Basen neigten ebenfalls zu
einer Abnahme. Weiterhin hemmte die Gabe von Tetrapeptid die Proteinperoxidation
genauso wie die von LPO (Tabelle 1).
-
Wirkung
von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Stärke der
Lipidperoxidoxidationsreaktionen im cerebralen Kortex der Ratte
-
Die erhaltenen Daten zeigen, dass
die Anwendung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid die Bildung
von Lipidperoxidoxidationsprodukten und Proteinperoxidation im cerebralen
Kortex unterdrückt.
-
Beispiel 5
-
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf die toxischen Wirkungen von neurotrophischen Mitteln
-
Untersucht wurde die Wirkung des
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf die toxischen Wirkungen von
neurotrophischen Mitteln verschiedener pharmakologischer Gruppen.
-
Innerhalb einer Stunde nach intramuskulärer Injektion
von Salzlösung
(Kontrolle) oder L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid (5 μg/kg) wurden
Ratten intraperitonal toxische Dosen von verschiedenen neuropharmakologischen
Mitteln verabreicht (Apomorphin, Haloperidol, Nikotin und Kaffein).
Dabei wurden die Parameter der vertikalen (Ängstlichkeit) und horizontalen
(lokomotorischen Aktivität)
spontanen Bewegungsaktivität
aufgezeichnet.
-
Apomorphin zeigte eine emetische
Wirkung aufgrund der Stimulation der chemorezeptiven Triggerzone
in der Medulla Oblongata. Weiterhin ist Apomorphin in der Lage mit
Dopaminrezeptoren zu interagieren und die dopaminergen Strukturen
des Hirns zu stimulieren. In den Experimenten konnte hyperlokomotorische
Aktivität,
Hyperthermie, "Psychose" und Myotonie beobachtet
werden. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid wirkte Apomorphin entgegen (verringerte Ängstlichkeit
und lokomotorische Aktivität).
-
Haloperidol bezieht sich auf Neuroleptika
und zeigt eine geringe adrenolytische Aktivität. Bei den Experimenten führte dieses
Mittel zu Hypothermie, Katalepsie, "Depression", Myoplegie und eine Abnahme der lokomotorischen
Aktivität.
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid wirkte als ein pharmakologischer Antagonist zur Haloperidol
(verringerte Ängstlichkeit
und lokomotorische Aktivität).
-
Nikotin besitzt eine n-cholinomimetisch
Wirkung. Bei den Experimenten erhöht dieses Mittel die vertikale
und horizontale Bewegungsaktivität,
genauso wie den muskulären
Tonus. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid erniedrigt den Einfluss
von Nikotin auf die Ängstlichkeit
der Tiere. Kaffein ist ein Psychostimulator. Der Wirkungsmechanismus
basiert auf Unterdrückung
von Phosphodiesteraseaktivität
und einer damit assoziierten Zunahme an cAMP. In den Experimenten
verursachte Kaffein hyperlokomotorische Aktivität und fördert soziale Kontakte der
Tiere. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid verringert die Kaffein
induzierte Ängstlichkeit, hat
aber keine Wirkung auf die lokomotorische Aktivität.
-
Die Eigenschaft des Tetrapeptids
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro, die toxischen Wirkungen von solchen Mitteln,
wie Adrenostimulatoren, Neuroleptika, Cholinomimetika und Psychostimulatoren
zu unterdrücken,
kann Anwendung finden bei der Behandlung von neurotrophen Vergiftungen.
-
Beispiel 6
-
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf den Serotoninstoffwechsel
-
Die Studie wurde in einem Modell
eines elektrisch induzierten Schmerzes durchgeführt.
-
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid
wurde den Ratten in einer Dosis von 5 μg/kg sofort vor oder direkt nach
Anlegen von elektrisch induziertem Schmerz verabreicht. In einer
Stunde wurde der Gehalt an Serotonin und seinen Metaboliten, 5-Oxyindolessigsäure im parietalen
und posterialen frontalen Bereich des Gehirns gemessen.
-
Im Falle von emotionell induziertem
Schmerz wurde sowohl die Synthese als auch der Abbau von Serotonin
durch die anschließende
schnelle Depletion dieser Verfahren stimuliert. In kompensatorischer
Art und Weise verringert die Stimulation des Serotoninstoffwechsels
das emotionelle Wahrnehmungsvermögen
bei Anlegen eines Schmerzes. Ein natürlicher "Nachteil" dieses Mechanismus besteht in einem
schnellen Übergang
zu einem Dekompensationszustand. Bei der Kontrolle (nicht behandelter
Stress) erniedrigt sich das Serotoninniveau, während sich der der 5-Oxyinolessigsäure erhöht (Stoffwechseldepletionsphase).
-
Ein Zuführen von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrpeptid nach Stress erhöhte
die Serotoninmenge und erniedrigte den Gehalt an 5-Oxyindolessigsäure im Gehirn.
Verabreichung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid vor dem Stress
fördert ähnliche
Effekte, diese waren allerdings nicht signifikant. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid führte
zu keinen Veränderungen
im Niveau des Serotonins und dessen Metaboliten in nicht manipulierten
Tieren.
-
Die Zuführung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid sofort nach elektrisch induziertem Schmerzstress normalisierte
den Gehalt an Serotonin und dessen Metaboliten, 5-Oxyindolessigsäure, im
Gehirn.
-
Beispiel 7
-
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf die Indices für
Gedächtnis
und Lernen im Falle von amnesischen Einwirkungen von elektrokonvulsivem
Schock und Ethanolvergiftung
-
Nootrophische Aktivität des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptids wurde unter Verwendung des konditionierten Reflexes
des passiven Vermeidens (CRPA) in gesunden Tieren und unter Bedingungen
von amnesierten Eingriffen (elektrokonvulsive Behandlung und Ethanolvergiftung)
durchgeführt.
-
Die Experimente wurden an männlichen
Mäusen
mit einem Gewicht von 20 bis 24 g durchgeführt. Für jedes Tier wurde vor dem
Trainieren der Zeitraum des Verbleibens im Hell- und Dunkelkammerbereich über 2 Minuten
registriert. Nur Tiere, deren Aufenthaltszeitraum im beleuchteten
Bereich nicht 40 Sekunden übertraf, wurden
in die Experimentalgruppe aufgenommen. Die Tiere wurden mittels
eines elektrischen Schmerz Stimulus in dem bevorzugten dunklen Bereich
trainiert. Dieser dauerte so lange an, bis das Tier diesen Bereich
verließ.
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid wurde 16 Minuten vor Beginn des Trainings intraperitoneal
verabreicht. Das Testen wurde 2 bis 24 Stunden nach dem Training
durchgeführt.
Der Zeitraum, in das Tier in den Dunkel- und Hellbereich der Kammer
verblieb und die Zahl der Tiere, die nicht den dunklen Bereich betraten (trainierte
Tiere) wurde aufgezeichnet. Elektrokonvulsiver Schock wurde in der
Maus nicht später
als 10 Sekunden nach dem Training über corneale Elektroden mit
einem elektrischen Impuls von 25 mA, der 0,5 Sekunden andauerte,
induziert. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid wurde intraperitoneal 60 Minuten vor dem Training zugeführt. Ein
Test wurde 24 Stunden nach dem Training durchgeführt.
-
Ethanol wurde den Mäusen für 13 Tage
in Form einer 10%-Lösung
oral verabreicht. Ein Training wurde zweimal abgehalten: Am 14.
Tag der Ethanolverabeichung und 24 Stunden nach dem ersten Training. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid wurden intraperitoneal 30 Minuten vor dem Training verabreicht.
Der Test wurde 2 und 24 Stunden nach dem ersten und dem zweiten
Training durchgeführt.
Die Ergebnisse der Studie sind in Tabelle 2 – 4 dargestellt.
-
Tabelle
2
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Bildung
von CRPA in normalen weißen
Mäusen
-
Tabelle
3
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Bildung
von CRPA in Mäusen,
die einer ECS induzierten amnesischen Einwirkung unterworfen wurden
-
Tabelle
4
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Bildung
von CRPA in Mäusen,
die unter Ethanol induzierter amnesischer Wirkung waren
-
Bemerkung
-
- 1: 2 Stunden nach Training;
- 2: 24 Stunden nach Training;
- 3: 2 Stunden nach wiederholtem Training;
- 4: 24 Stunden nach wiederholtem Training.
-
Die erhaltenen Daten zeigen, dass
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid nicht die Bildung von CRPA in
normalen Tieren beeinflusst. Das Mittel verbessert allerdings die
Indices für
Gedächtnis
und Lernen bei amnesierenden Einwirkungen, dies zeigt die nootrophische
Wirkung des getesteten Mittels und seine Fähigkeit, die amnetischen Wirkungen
von ECS und Ethanol zu unterdrücken.
-
Beispiel 8
-
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf die Reparaturprozesse im Hirn nach craniocerebraler Verletzung
-
Die Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf die Reparaturprozesse im Hirn wurden an einem Modell
akuter schwerer craniocerebraler Verletzung untersucht. Die Dynamik
der funktionalen CNS-Wiederherstellung wurde trainiert durch Tests
der Koordination der Bewegungen und der Muskelanspannung der Tiere,
genauso wie auf deren Fähigkeiten
zu lernen und zur Wiedergabe von konditionierten Reflexfähigkeiten.
-
Eine schwere craniocerebrale Quetschung
in den Ratten wurde verursacht durch ein Faltenlassen eines Bleigewichts.
Nach 1, 12, 48 und 96 wurden Tieren intramuskulär L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid
injiziert. Die Tiere der zweiten Gruppe erhielten Cerebrolysin.
-
Die Fähigkeiten zu lernen und die
Fähigkeiten
wiederzugeben, wurden bestimmt mit einem Test auf einen konditionierten
Reflex des aktiven Vermeidens, engl.: Conditioned Reflex of Active
Avoidance (CRAA). Um die Muskelspannung und die Koordination der
Bewegung zu bestimmen, wurden die Ratten mit zunehmender Geschwindigkeit
um einen Punkt rotiert. Gleichzeitig wurde die Verweilzeit gemessen.
Innerhalb von 48 Stunden verloren alle Tiere, die überlebt
haben, ihre Fähigkeit
zum Trainieren. Innerhalb von 96 Stunden war die Zahl der trainierbaren
Tiere bei den Ratten, die mit L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid
behandelt wurden, zweimal so hoch wie bei den Kontrollen. Innerhalb
von 30 Tagen waren die Indices für
das Lernen in den mit Tetrapeptid indizierten Ratten, ebenfalls
höher als
die der Kontrolle.
-
Die schwere craniocerebrale Verletzung
hat ein hervorgehobenes asthenoneurotisches Syndrom bei den Tieren,
die in ihrer Koordination eingeschränkt sind, und in ihrer Muskelanspannung
zur Folge. Der Test mit dem "rotierenden
Drehpunkt" zeigte,
dass L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid die Wiederherstellung der Bewegungskoordination
und der Muskelanspannung innerhalb von 48 Stunden nach dem Trauma
erleichtert (die Verweilzeit auf dem Drehpunkt war zweimal so hoch
wie die bei der Kontrolle).
-
Im Falle einer schweren craniocerebralen
Quetschung war Cerebrolysin weniger wirksam als L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid.
-
Somit verbessert die Anwendung des
untersuchten Mittels die Fähigkeiten
der Tiere zu lernen und zur Wiederherstellung von konditionierten
Reflexeigenschaften und brachten auch die Bewegungskoordination und
die Muskelanspannung zurück.
Eine vorteilhafte Wirkung des Arzneimittels wurde bereits am 4.
Tag nach dem Trauma beobachtet. Mit dem 13. Tag erreichten die Lernindices
die Normalwerte.
-
Im Falle einer akuten schweren craniocerebralen
Verletzung werden die Neuronenpopulationen der grauen Substanz des
Gehirns verletzt und zerstört.
Eine beschleunigte Wiederherstellung der ZNS-Funktionen im frühen posttraumatischen
Zeitraum aufgrund der Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid
beweist, dass das vorliegende Tetrapeptid die Reparaturprozesse
im Gehirn stimuliert:
-
Beispiel 9
-
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf die Regenerierung von gequetschten peripheren Nerven
-
Die Studie wurde mit 22 weißen männlichen
Inzuchtmäusen
mit einem Gewicht von 25 bis 30 g durchgeführt (7 Experimental- und 15
Kontrolltiere).
-
In der ersten Stufe der Studie, wurden
die Mäuse
operiert, um den Fibularnerv dauerhaft zu quetschen. Der Fibularnerv
(n. peroneus communus) in den Nembutal narkotisierten Mäusen (60
mg/kg, intraperitoneal) wurde in einer Entfernung von 8 bis 9 mm
vom innervierten Muskel, dem großen Fingerstrecker (m. extensor digitorum
longus – EDL):
Die Tiere wurden am linken Hinterbein operiert, während der
entsprechende Nerv und Muskel am rechten Bein intakt blieb und als
Kontrolle verwendet wurde.
-
Danach wurde "vom dritten Tag der Nervenquetschung
an. der Maus intraperitoneal L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid
in Dosen von 10 μg/kg
täglich
für 8 Tage
injiziert. Die Kontrollmaus wurde mit einer äquivalenten Menge Salzlösung behandelt.
-
Am 11. Tag nach der Operation zur
Quetschung des Nerves (und innerhalb von 24 Stunden nach der letzten
Tetrapeptidinjektion) wurde die Nembutal narkotisierte Maus (auf
60 mg/kg) in vivo elektrophysiologischen Tests für verschiedene funktionelle
Parameter an bereits regenerierten Nerven und reinnervertierten skeletalen
Muskelfasern (EDL) unterworfen.
-
Die erhaltenen Daten zeigten, dass
bei den Experimentaltieren L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid die Wiederherstellung
von einem anregbaren Grenzwert verstärkt und entsprechende Änderungen
in der "Stärke-Dauer"-Kurve, für die das
regenerierende neuromuskulare System vom 11. Tag nach Nervenquetschung
an fördert
(2). Die 2 zeigt die Wirkung von
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Stärke-Dauerkurve der ab dem Nervenstamm
angewendeten Stimuli. Anmerkung:
- a: Koeffizient
für die
Kurvenform (Hyperbol);
- b: Koeffizient für
die Stärke-Dauerkurve-Verschiebung
entlang der Y-Achse;
- a und b sind Parameter, die die Merkmale der elektrischen Anregbarkeit
und die Anregbarkeitsgrenze der Nerven zeigt.
-
Das heißt, dass das Einführen von
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid signifikant und deutlich (mit 30
bis 50 %) eines der wesentlichen funktionellen Indices des regenerierenden
Nerves verbessert, dessen elektrische Schwelle, dies beschleunigt
die Zeit der Wiederherstellung auf Normalwerte.
-
Der latente Zeitraum der M-Antwort
stellte sich als weiterer Index heraus, der sich nach Zuführen des Tetrapeptids
signifikant im peripheren "Nerven-Muskel-System" veränderte.
Die Muskel-M-Antwort ist eine zusammengefasste elektrische Reaktion
(Gesamtpotential der Muskelaktion) aufgezeichnet in Antwort auf
Anregung des Bewegungsnervs. Es muss hervorgehoben werden, dass
das Verkürzen
des Zeitraums der latenten M-Antwort deutlicher beim intakten neuromuskulären System
(mit 89 %) im Vergleich zum regenerierten Nerv (und dem Muskel)
(mit 59 %) war. Der Zeitraum der latenten M-Antwort ist ein integraler Parameter,
der das Leiten der Anregungsrate über die Axone, ihren feinen
intermuskulären
Verzweigungen, genauso wie die synaptische Übertragungsweite in dem peripheren
Motorsynapsen anzeigt. Da die Wirkung des Tetrapeptids L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
auf den latenten Zeitraum der M-Antwort deutlicher beim gesunden
Nerv und Muskel war, scheint dieses besondere Merkmal der Tetrapeptidaktivität anscheinend
nicht direkt mit neuro- und myoregenerativen Prozessen assoziiert
zu sein, es zeigt vielmehr die Fähigkeit
des vorliegenden Mittels an, periphere anregbare Strukturen zu beeinflussen
(Neuralfasern, Endbereiche, Synapsen, usw.) und die Anregungstransmission
im peripheren neuromuskulären
System zu verstärken.
-
In Verbindung mit dem Einfügen von
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid in Mäuse, wurden eine Tendenz einer
verringerten Acetylcholin-Muskelkontraktionsrate beobachtet (3), hervorgerufen durch
die verbliebene nicht synaptische Cholinaufnahme, die nach Denervierung
auf der Oberfläche
der Muskelfasern verbleibt. Die Acetylcholin-Muskelkontraktion ist
als eine bekannt, die durch nicht synaptische Cholinaufnahme vermittelt
wird, diese ist wiederum ein klassischer Index, um den Grad an neurotrophischem
Einfluss auf den Muskel zu manifestieren, hauptsächlich durch Motoneuronen.
Dabei kann die Tendenz, die Acetylcholin-Muskelkontraktion bei Einbringen
des Tetrapeptids zu unterdrücken,
als ein Ergebnis eines neurotrophischen Motoneuroneneinflusses auf
die Cholinaufnahme der Muskelfasern angesehen werden, verstärkt durch
das vorliegende Mittel oder als eine Indikation von direkten neurotrophischen
Wirkungen des Tetrapeptids selbst auf die Muskelfasern, wobei sie
eine neurotrophische Motoneuronenaktivität imitieren.
-
Die Anwendung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid beschleunigt die Wiederherstellung von verschiedenen
wichtigen funktionellen Indices bei der Nervenregenerierung nach
Quetschung. Somit stimulierte das Tetrapeptid die Regeneration von
sowohl den Nerven als auch am Muskel und ermöglicht es, dass sie sich wieder
den Zustand von normalen "gesunden" Bewegungseinheiten
näherten.
-
Das heißt, aufgrund der durchgeführten Experimente
stellte sich das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als nicht toxisch, als in der Lage, die Aktivität von cerebralen
Neuronen, ausgedrückt
durch eine deutliche cerebroprotektive Wirkung, Stoffwechselaktivierung
und hoher neurotropher Wirkung zu stimulieren, heraus.
-
Die in den präklinischen Studien und den
Eigenschaften des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids erlauben es, dass es
für therapeutische
und präventive
Anwendungen in verschiedenen cerebralen Erkrankungen angewendet
werden kann. Die Liste der Erkrankungen und ihre Kodierung sind
unten in Übereinstimmung mit
der internationalen Klassifizierung von Erkrankungen 1CD-9-CM (14)
aufgeführt.
-
In einer Ausführungsform der Erfindung, kann
das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, dass cerebrale
reparative Prozesse stimuliert und cerebroprotektive Aktivität aufzeigt,
verwendet werden als ein Mittel zur:
- – Behandlung
und Prävention
von traumaassoziierten cerebralen Läsionen (800 – 959),
einschließlich:
Behandlung von cerebralen Läsionen
nach einem Bruch des Schädeldamms
(1500), Schädelbasis
(801), Mehrfachknochenfrakturen (804);
- – Behandlung
von cerebralen Läsionen
im Falle von intercranialem Trauma (850 bis 854) (posttraumatischen
cerebralen Gehirnerschütterung
(850), cerebralen Wunden und Prellungen (851), subarachnoidaler, subduraler
und extraduraler Blutung (852));
- – Behandlung
und Vorbeugen von traumatischem Schock (958,4);
- – Behandlung
von cerebralen Läsionen,
die assoziiert sind mit der Einwirkung von Strahlung (990), erniedrigter
Temperatur (991), Hitze und Licht (992), Luftdruck (993), elektrischer
und ultrahoher Frequenzleistung;
- – Behandlung
und Vorbeugung von spät
einsetzenden Wirkungen von Schädelfrakturen
(905.0);
- – Behandlung
und Vorbeugung von spät
einsetzenden Wirkungen von intracranialem Trauma (907.0);
- – Behandlung
und Vorbeugung von spät
einsetzenden cerebralen Läsionen
induziert durch Strahlung (909.2), Komplikation nach operativen
und anderen medizinischen Einwirkungen (909.3).
-
In einer anderen Ausführungsform
der Erfindung wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Mittel, das unterdrückende Wirkungen
für toxische
neurotrophe Mittel, stimulierende Wirkung bei cerebralen Reparaturprozessen
und eine cerebroprotektive Wirkung aufzeigt, zur Behandlung und
Vorbeugung von cerebralen Läsionen
nach Vergiftung (960 – 999)
verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
von cerebralen Läsionen
nach Vergiftung mit therapeutischen Mitteln, medizinischen und biologischen
Verbindungen (960 – 979);
- – Behandlung
von cerebraler Schädigung
mit Mitteln nicht medizinischen Ursprungs (980 – 989);
- – Behandlung
und Vorbeugung von verspätet
einsetzenden cerebralen Läsionen,
induziert durch Vergiftung mit Arzneimitteln (909.0) und nicht-medizinischen
Substanzen (909.1).
-
In einer weiteren Ausführungsform
der Erfindung wird L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel
mit stimulierender Wirkung bei cerebralen Reparaturprozessen mit
nootopischer Wirkung zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen
degenerativen Erkrankungen (330 – 337) verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von pädiatrischen
cerebralen degenerativen Erkrankungen (330);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Alzheimer Erkrankung (331.0), Pick's Erkrankungen (331.1),
seniler cerebraler Degeneration (331.2) und Hydrocephalus (331.3 – 331.4);
- – Behandlung
und Vorbeugung der Parkinson's
Erkrankung (332) und anderer extrapyramidaler Erkrankungen (333)
(degenerative Erkrankungen der Basalganglia (333.0), hereditärer Tremor
(331.1), Myoclonus (333.2), Zucken organischen Ursprungs (333.3),
Huntington's (vererbter)
Chorea (333.4) und anderen Arten der Chorea, Torsionsdystonie (33.6 – 33.8));
- – Behandlung
und Vorbeugung von Spinal-Cerebellum-Erkrankungen (Friedrich's Ataxie (334.0),
vererbter spastischer Paraplegie (334.1) und Cerebellum Ataxie bei
anderen Erkrankungen (334.4)).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsformen
wird L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel mit nootrophischer Wirkung, das cerebrale
Reparaturprozesse stimuliert, zur Behandlung und Vorbeugung von
senilen und präsenilen
organischen psychotischen Erkrankungen (290) verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von seniler Demenz (290.1), einschließlich die
die Alzheimer Erkrankung (331.0), Jacob-Creutzfeldt-Krankheit (046.0)
und Pick's Erkrankung
(331.1);
- – Behandlung
und Vorbeugung von nicht komplizierter seniler Demenz (290.1);
- – Behandlung
und Vorbeugung von seniler Demenz mit Anzeichen eines Deliriums
bei Depression (290.2);
- – Behandlung
und Vorbeugung von seniler Demenz mit Delirium (290.3);
- – Behandlung
und Vorbeugung von arteriosklerotischer Demenz (290.4).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel mit nootropischer Wirkung, das cerebrale
Reparaturprozesse stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung und
Vorbeugung von amnestischen Erkrankungen (294.0) verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von nicht-alkoholischen Korsakoff's Psychose (294.0);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Demenz bei verschiedenen Erkrankungen (294.1)
(Demenz bei HIV-infizierten Patienten (HIV-Enzephalopathie), cerebraler
Lipidose (330.1), Epelepsie (345.0 – 345.9), Syphilis (094.1), hepatolenticularer
Degeneration (275.1), vererbter Huntington's Chorea (333.4), Multipler Sklerose (340)
und nodolärer
Polyarthritis (446.0));
- – Behandlung
und Vorbeugung eines Syndroms von chronischer undifferenzierter
organischer cerebraler Läsion
(294.9), einschließlich
AIDS-cerebraler Läsion
(042.9).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse
stimuliert mit cerebroprotektiver Wirkung zur Behandlung und Vorbeugung
von Multipler Sklerose (340) und anderen demyelisierenden cerebralen
Erkrankungen verwendet.
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel mit nootrophischer Wirkung, mit Stimulation
der cerebralen Reparaturprozesse zur Behandlung und Vorbeugung mentaler
Defizite verwendet (317 – 319).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse
und die Beweglichkeit stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung
und Vorbeugung von paralytischen Erkrankungen (342 – 344) verwendet,
einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von Hemiplegie (342);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebraler Kinderlähmung (343);
- – Behandlung
und Vorbeugung anderer paralytischer Syndrome (344) (Quadriplegie
(344.0), Paraplegie (344.1), Diplegie der oberen Extremitä ten (344.2),
Monoplegie der unteren Extremitäten
(344.3 – 344.4)).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse
mit cerebroprotektiver Wirkung stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung
und Vorbeu gung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von chromosomalen
Anomalien (758) verwendet, einschließlich dem Down-Syndrom.
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse
mit cerebroprotektiver Wirkung stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von entzündlichen
cerebralen Erkrankungen (320 – 326)
verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von bakterieller
Meningitis (320), einschließlich
Cryptococcus Meningitis bei AIDS-Patienten;
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von nicht-bakterieller
Meningitis (321);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Meningitis
unklaren Ursprungs (322);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle Enzephalitis,
Myelitis und Enzephalomyelitis (323), einschließlich cerebraler Toxoplasmose
bei AIDS-Patienten;
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von intracranialen
Abzessen (324);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Phlebitis
und Thrombophlebitis bei intracranialem enösen Sinus (325);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Sequalae nach intracranialen Abzessen oder eitriger
Entzündung (326).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse
mit cerebroprotektiver und nootropher Wirkung stimuliert verwendet
als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen
im Falle von cerebral-vaskulären
Erkrankungen (439 – 438)
verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von subarachnoider
Blutung (430);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von cerebraler
Blutung (431);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Verschluss
und Stenose von präcerebralen
Arterien (433);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Verschluss
von cerebralen Arterien (434);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von vorübergehender
cerebraler Ischämie
(435);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von anderen
cerebral-vaskulären
Erkrankungen (akuter cerebral-vaskulärer Erkrankungen (436), cerebraler
Atherosklerose (437.0) und anderen allgemein cerebral vaskulären Erkrankungen
(437.1), Bluthochdruck-Enzephalopathie
(437.2), cerebraler Aneurysmus (437.3), cerebraler Arthritis (472.4)
und nicht-eitriger Thrombose bei intracranialem venösen Sinus
(437.5)).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturmechanismen
stimuliert, mit cerebroprotektiver und nootropher Aktivität als ein
Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von alkoholischen Psychosen
(291) verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von Delirium Tremens als Abstinenzsyndrom (291.1);
- – Behandlung
und Vorbeugung von alkoholischem amnesischen Syndrom (291.1) und
andere Alkohol-Demenzerkrankungen (291.2);
- – Behandlung
und Vorbeugung von pathologischer alkoholischer Vergiftung (291.3);
- – Behandlung
und Vorbeugung von alkoholischer Paranoia und alkoholischer Psychose
von paranoidem Typ (291.5).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das cerebrale Reparaturprozesse stimuliert
und mit cerebroprotektiver nootrophischer Aktivität als ein
Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen
im Falle von Alkoholismus (303) verwendet.
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wir das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das toxische Wirkungen von neurotrophen
Mitteln unterdrückt
und eine cerebroprotektive nootrophische Aktivität aufzeigt, als ein Mittel
zur Behandlung und Vorbeugung von Arzneimittel induzierter Psychose
(292) verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von Abstinenzsyndrom bei Arzneimitteln (292.0);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Arzneimittel induzierter paranoiden und/oder
halluzinatorischen Erkrankungen (292.1);
- – Behandlung
und Vorbeugung von pathologischen Vergiftungen mit medizinischen
Mitteln (292.2);
- – Behandlung
und Vorbeugung von anderen Arzneimittel induzierten psychischen
Erkrankungen (292.8) (Delirium (292.81), Demenz (292.82), amnesischem
Syndrom (292.83) und organischem Affektsyndrom (292.84)).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das die toxischen Wirkungen von neurotrophen
Mitteln unterdrückt
und eine cerebroprotektive Wirkung aufzeigt, als ein Mittel zur
Behandlung und Vorbeugung von Arzneimittelabhängigkeit (304) verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung einer Sucht bei opioiden Mitteln (304.1);
- – Behandlung
und Vorbeugung einer Sucht für
Barbiturate, Beruhigungsmittel und Tranquilizer (304.1);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Kokainsucht (304.2);
- – Behandlung
und Vorbeugung einer Sucht auf Cannabisderivate (304.3);
- – Behandlung
und Vorbeugung einer Sucht auf Amphetamin- und psychostimulierende
Mittel (304.4);
- – Behandlung
und Vorbeugung einer Sucht für
halluzinogene Mittel (304.5);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Drogenmissbrauch ohne Drogensucht (305) (Missbrauch
von Alkohol (305.0), Tabak (305.1), Cannabis (305.2), Halluzinogenen
(305.3), Opioiden (305.5), Kokain (305.6), psychostimulierende Mittel
(305.7), Antidepressiva (305.8)).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wir L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von psychischen
Symptomen und Syndromen (306 – 309)
verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von psychischen physiologischen Beeinträchtigungen
(306);
- – Behandlung
und Vorbeugung von anderen psychischen Symptomen und Syndromen (306)
(Stammeln und Sprachfehler (307.0), psychische Anorexie (307.1),
Zuckungen (307.2), wiederholter stereotypischer Bewegung (307.3),
nicht-organischen Schlaferkrankungen (307.4), psychischen Diäterkrankungen
(307.5), Bettnässen
(307.7), Psychalgie (307.8));
- – Behandlung
und Vorbeugung von akuter Stressantwort (308);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Reaktionen durch psychologische Gerichtetheit
(309).
-
In weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrpeptid als Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von nicht-organischen
Psychosen (295 – 299)
verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von Schizophrenie-Erkrankungen (295);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Gemütspsychosen
(296);
- – Behandlung
und Vorbeugung von paranoiden Zuständen (297);
- – Behandlung
und Vorbeugung von anderen nicht-organischen Psychosen (298) (Psychosen
durch Depression (298.1) und Erregung (298.2), reaktive Konfusion
(298.2), akute paranoide Reaktion (298.3), psychische paranoide
Psychosen (298.4) und nicht-differenzierte Psychosen (298.9), einschließlich Psychosen
induziert durch cerebrale Beeinträchtigungen bei AIDS-Patienten
(042.9));
- – Behandlung
und Vorbeugung von infantilen Psychosen (299), einschließlich infatilem
Autismus (299.1) und disintegrativen Psychosen (299.2).
-
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid als Arzneimittel, das cerebrale Reparaturprozesse stimuliert
und eine cerebroprotektive und nootrophe Wirkung aufzeigt, als ein
Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen
im Falle von anderen cerebralen Erkrankungen (348) verwendet, einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen bei cerebralen Zysten
(348.0);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Schädigungen bei Hypoxie (348.1);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen bei intracranialer
Hypertension (348.2);
- – Behandlung
und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen bei Enzephalopathie
(348.3).
-
In weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform
wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid, das als Arzneimittel cerebrale Reparaturprozesse und
Bewegungsaktivität
stimuliert, mit cerebroprotektiver und nootrophischer Wirkung verwendet
als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von Symptomen und Syndromen
bei verschiedenen cerebralen Störungen,
verwendet einschließlich:
- – Behandlung
und Vorbeugung von kognitiven Zuständen, Gedächtnis und Aufmerksamkeitsbeeinträchtigungen
(z.B. im Falle von amnesischen Erkrankungen, Gedächtnisdefiziten, nicht-organischen
Psychosen, usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Aphasie und Apraxie (z.B. im Falle von amnesischen
Erkrankungen, nicht-organischen Psychosen, cerebralen Einschränkungen
aufgrund chromosomaler Anomalien, usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung von emotionalen Zuständen (z.B. im Falle von nicht-organischen
Psychosen, demyelisierten cerebralen Zuständen usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung von psychopathologischem Syndrom (z.B. im Falle von
vorübergehenden organischen
psychotischen Zuständen,
drogeninduzierten-Psychosen, Drogenabhängigkeit, usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung von asthenisch-depressivem Syndrom (z.B. im Falle
von nicht-organischen Psychosen, cerebralen Beeinträchtigungen
aufgrund chromosomaler Anomalien, usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Deliriumssyndrom (z.B. im Falle von drogeninduzierten
Psychosen und Drogensucht, nicht-organischen Psychosen, usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung von Schlafzuständen
(z.B. im Falle von cerebralen Tumoren, vorübergehenden organischen psychotischen
Zuständen,
usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung von fokalem cerebralen Syndrom (fokalen pathologischen
Symptomen) (z.B. im Falle von cerebralen Beeinträchtigungen aufgrund von Komplikationen
bei operativen oder anderen medizinischen Eingriffen, demyelisierenden
cerebralen Erkrankungen, usw.);
- – Behandlung
und Vorbeugung eines Syndroms einer Bewegungserkrankung (z.B. im
Falle von cerebralen Tumoren, cerebralen Beeinträchtigungen aufgrund von Vergiftung,
usw.).
-
Die klinische Anwendung des Tetrapeptids
L-alanyl-L-glutamyl-L-asparagyl-L-prolin (L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro) bestätigt die
experimentellen Daten zur Wirksamkeit dieses Mittels bei Erkrankungen.
und Zuständen
aufgrund von oder assoziierten Mitteln der Schädigung oder der Verlust von
cerebralen Neuronen.
-
Die unten aufgeführten Beispiele für klinische
Tests mit dem Tetrapeptid zeigen die pharmakologischen Eigenschaften
davon und bestätigen
die Möglichkeit,
die Erfindung zu nutzen.
-
Beispiel 10
-
Wirksamkeit der Anwendung
von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid bei Komplikationen bei craniocerebralen
Verletzungen
-
Das Experiment wurde bei 35 Patienten
mit Erinnerungsproblemen bei craniocerebraler Verletzung durchgeführt. Sie
wurden in 3 Gruppen unterteilt: Eine Kontrollgruppe mit 10 Patienten,
Standardbehandlung), eine Untersuchungsgruppe (15 Patienten, Standardbehandlung
+ 1 μg L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid, intramuskulär
verabreicht, täglich über 10 Tage)
und eine Vergleichsgruppe (10 Patienten, Standardbehandlung + Cerebrolysin).
Die Erinnerungsschwäche
der an craniocerebraler Verletzung leidenden Patienten bestand 1
bis 10 Jahre. Eine Dekompensation des posttraumatischen Prozesses
trat in allen Patienten auf und wurde manifestiert durch liquordynamischem
Zustand, neurozirkulatorischer Dystonie, cerebrofokalen und psychopathologischen
Syndromen.
-
Wirkung einer Behandlung mit L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptid auf die Aufmerksamkeit der Patienten durch Untersuchung
mittels Beweistestdaten vor und nach Behandlung. Eine signifikante
Zunahme der Zahl an wiedererkannten Symbolen und eine verringerte
Zahl an Fehlern wurde bemerkt, dies zeigt die ver stärkte Aufmerksamkeit
und erhöhte
Aufmerksamkeitsdauer, gefördert
durch die Wirkung des Tetrapeptids (Tabelle 5).
-
In Patienten, die mit dem Tetrapeptid
behandelt wurden, wurde bessere Ergebnisse bei der Analyse der Veränderungen
in Beweistest (proof test) vor und nach Therapie erhalten im Vergleich
zu den Patienten aus anderen Gruppen. Dies wurde bestätigt durch
die Abwesenheit von scharfen Fluktuationen in der Zahl der erkannten
Symbole gleiche Zeiträume,
im "Anpassungszeitraum" zur Mitte der Aufgabe
und in einer graduellen Abnahme der Kurve am Ende der Aufgabe, dies
zeigte eine größere Dauer
der Aufmerksamkeit nach Behandlung mit dem vorliegenden Mittel auf.
-
Tabelle
5
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Indices
der Leistung bei dem Beweistest
-
Um den Einfluss des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptids auf die cerebrale bioelektrische Aktivität zu untersuchen,
wurde ein visuelles EEG- (Elektroenzephalo graphie) Test durchgeführt, mit
dessen Verteilung auf die EEG-Arten und der Berechnung des α-Index vor
und nach der Behandlung. Der EEG-Test wurde selektiv bei Patienten
aus verschiedenen Gruppen, die die deutlichsten Anzeichen der Erkrankung
aufzeigten, durchgeführt.
-
Vor der Behandlung herrschten die
pathologischen EEG-Arten (III, IV und V) bei den Patienten in allen Gruppen
vor. Die III-rd EEG-Art wurde charakterisiert durch die Abwesenheit
eine sogenannten "nicht-dominanten" Kurve, zusammen
mit einer niedrigen Amplitudenrate (nicht höher als 30 bis 35 μV), mit ungleichmäßiger oder
sogar nicht vorhandener α-Aktivität. Der IV-th
EEG-Typ war gekennzeichnet durch eine extrem betonte Rhythmusgleichmäßigkeit
und unscharfen Bereichsunterschieden. Der V-th EEG-Typ war gekennzeichnet
von einer ungleichmäßigen geringen
Akivität
(die Amplitude übertraf
35 μV),
scharfen Wellen und paroxysmalen Entladungen.
-
Die deutlichsten Veränderungen
in der cerebralen bioelektrischen Aktivität wurde bei Patienten, die
mit dem Tetrapeptid behandelt wurden, beobachtet, dieses wurde im
EEG vor allem durch eine mehr distinctere Modulierung und die Wiederherstellung
der α-Rhythmus
zonalen Unterschiede, eines verringerten Auftretens von Reizprozessen
und in einigen Fällen
Verschwinden paroxysmalen Entladungen deutlich.
-
Es stellte sich heraus, dass die
Behandlung zu einer signifikant erhöhenden Wirkung auf den α-Index der
untersuchten Patienten führte.
Der Grad der α-Index-Veränderungen
in den Patienten mischt sich aber mit den verschieden Therapieansätzen. Die
Veränderung
des α-Index
war signifikant höher
als bei Patienten, die mit dem vorliegenden Tetrapeptid behandelt
wurden im Vergleich zu den Parametern der anderen Gruppen.
-
Tabelle
6
Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf die
Variation des α-Index
im EEG bei den Patienten
-
Die erhaltenen Daten zeigen eine
signifikante Zunahme des α-Index
bei allen untersuchten Gruppen, gleichzeitig eine deutlichere Zunahme
dieses Index bei den Patienten, die mit dem Tetrapeptid behandelt
wurden.
-
Der Vergleich der subjektiven Indices
des Zustandes der Patienten vor und nach der Behandlung mit dem
Tetrapeptid zeigte Verbesserungen des Gedächtnisses und der geistigen
Beweglichkeit, Reduktion der Stärke
und der Dauer von Kopfschmerzen, Gleichgültigkeit, Aktivität des Willens
und Erholung der Nachtruhe bei 71 % der Fälle.
-
Das heißt die folgenden therapeutischen
Wirkungen einer L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid-Verbreichung konnte
bei Patienten mit Spätfolgen
einer craniocerebralen Verletzung im Zeitraum der posttraumatischen
Prozessdekompensation beobachtet werden: Verbesserung der kognitiven
Funktionen des Gehirns, des Gedächtnisses
und der Aufmerksamkeit, Wiederherstellung der cerebralen bioelektrischen
Aktivität.
-
Beispiel 11
-
Wirksamkeit des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro
Tetrapeptids bei der Behandlung von vaskulärer Demenz
-
12 Patienten in einem Alter von 69
bis 76 Jahren (7 Männer
und 5 Frauen), die an Bluthochdruckerkrankung und Atherosklerose
von cerebralen Gefäßen über einen
langen Zeitraum litten, wurden für
dies Studie ausgewählt.
3 von diesen hatten in ihrer Krankengeschichte einen Gehirnschlag.
Daten, die von ähnlichen Patienten
vor der Behandlung erhalten wurden, wurden als Kontrolle verwendet.
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wurde intramuskulär in einer
Einzeldosis von 3 μg
einmal täglich über 30 Tage
injiziert.
-
Die Ergebnisse nach Behandlung wurden
verglichen mit den Daten erhalten vor der Behandlung. Aufgrund der
Untersuchungsergebnisse wurden Veränderungen im Zustand der Patienten
gemäß der folgenden Einteilung
definiert: Verbesserung (wesentlich, durchschnittlich oder gering),
Verschlechterung, keine Veränderung.
-
Vor der Behandlung wurde in allen
Patienten Zeichen von intellektuellen amnesischen Defekten beobachtet:
Einschränkungen
des Gedächtnis,
intellektuelle Einschränkung,
Aphasie-, Apraxie- und Agraphiezustände. Bei 9 Patienten wurden
Zeichen einer Desorientierung in Ort und Zeit gefunden. Der Gefühlszustand der
Patienten war labil, dies zeigte sich in periodischen Veränderungen
einer Apathie und Euphorie, Selbstzufriedenheit und einer Neigung
sich zu ärgern.
Die psychologische Untersuchung zeigte, dass eine deutliche Einschränkungen
des Gedächtnisses
und der Fähigkeit
eine effiziente intellektuell Aktivität, Aphasie, zu zeigen, besteht.
Der klinische Zustand verbesserte sich mit den Tagen 4 bis 5. Eine
erhöhte
Aktivität
und Aufmerksamkeit für
einige Tätigkeiten
wurden bemerkt, die Patienten verblieben weniger im Bett und ihre
Gefühlsinstabilität nahm ab.
An den Tagen 5 bis 7 normalisierte sich ihr Schlaf, die Müdigkeit
bei Arbeiten war reduziert, die Patienten konnten sich besser in
ihrer Umgebung orientieren. Die Zeichen einer Amnesie, Aphasie und Apraxie
verschwanden. Weiterhin war die Fähigkeit vorherige Ereignisse
zu wiederholen verbessert und das Gedächtnis für derzeitige Ereignisse verbesserte
sich. Die Veränderungen
des Ge fühlszustandes
hingen von dem vorherigen Gefühlshintergrund
ab. Patienten mit Depression bemerkten Verbesserungen ihrer Stimmung zusammen
mit einem erhöhten
allgemeinen Tonus und einem besseren somatischen Zustand; apathische
Patienten wurden aktiver. Im Falle einer emotionalen Labilität und erhöhter Reizbarkeit
wurde der Gefühlszustand der
Patienten im Laufe der Behandlung stabiler.
-
Neuropsychologische uns psychophysiologische
Untersuchungen zeigten, dass unter Einfluss des Tetrapeptids ein
verbessertes Kurzzeitgedächtnis,
eine Fokussierung, eine Erhöhung
der Menge der gemerkten Informationen auftrat. Weiterhin zeigten
die Patienten eine Verkürzung
der Zeit von arithmetische Berechnungen, zusammen mit einer verringerten
Zahl an Fehlern. Nach der Behandlung zeigten die Patienten eine
signifikante Zunahme in ihrer Aufmerksamkeitsspanne auf und ebenfalls
in Parametern komplizierter sensomotorischer Reaktionen mit verbesserter
Selektion.
-
Somit zeigten erste klinische Untersuchungen
bei Patienten mit vaskulärer
Demenz, dass das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid eine signifikante
therapeutische Wirkung aufzeigte, da im Laufe der Behandlung mit
niedriger Dosierung des Arzneimittels 74,8 % der Patienten eine
umgekehrte Entwicklung der pathologischen Symptome aufzeigte.
-
Die gezeigten Daten zeigen die hohe
Wirksamkeit des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids in Fällen einer
kognitiven Beeinträchtigung,
Gedächtnis-
und Aufmerksamkeitserkrankungen, Aphasie, Apraxie und Gefühlserkrankungen
bei Patienten mit vaskulärer
Demenz.
-
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