DE60003837T2

DE60003837T2 - Tetrapeptid, das die funktionelle aktivität von neuronen stimuliert, dieses enthaltendes pharmakologisches mittel und seine verwendung

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Publication number: DE60003837T2
Application number: DE60003837T
Authority: DE
Inventors: Vladimir Khatskelevich Khavinson; Vyacheslav Grigorievich Vsevolozhsk Len. obl. MOROZOV; Vladimir Viktorovich Malinin; Evgeny Iosifovich Grigoriev
Original assignee: SANKT PETERBURGSKAYA OBSCHESTV; Sankt-Peterburgskaya Obschestvennaya Organizatsiya "Sankt-Peterburgsky Institut Biroregulyatsii i Gerontologii SZO RAMN"
Current assignee: GEROPHARM LTD., ST.PETERSBURG, RU
Priority date: 1999-10-20
Filing date: 2000-05-25
Publication date: 2004-06-03
Anticipated expiration: 2020-05-26
Also published as: US7189701B1; AU784578B2; AU5258500A; EP1224212A1; JP2003532630A; WO2001029067A1; JP4668497B2; IL149243A0; RU2155063C1; ATE244727T1; EP1224212B1; CA2388357A1; DE60003837D1

Description

Bereich der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Arzneimittel, dieses soll als ein Mittel, das die funktionale Aktivität der Neuronen bei Erkrankungen und Traumata des zentralen Nervensystems stimulieren soll, verwendet werden.
Hintergrund der Erfindung
Es gibt verschiedene bekannte Arzneimittel, wie Pyracetam, Aminalon, Pyriditol, Pantogam, Natriumoxybutyrat usw. (1), die im cerebralen Gewebe Redoxoprozesse stimulieren, die Verwendung von Glukose verstärken und den örtlichen Blutfluss verbessern. Diese Wirkungen führen zu einer erhöhten Widerstandskraft der Neuronen gegenüber einer Hypoxie.
Die Nachteile dieser Mittel sind, dass sie nur die Synthese von neurotrophen Faktoren stimulieren, selbst aber eine keine neurotrophe Aktivität besitzen (2). Diese Mittel sind nicht frei von Nebenwirkungen und Kontraindikationen. Solange die Möglichkeiten der intrazellulären Biosynthese in veränderten Neuronen nicht wesentlich sind, scheint die Stimulation der Regeneration durch Zuführen natürlicher neurotropher Faktoren angebrachter.
Es ist ebenfalls Cerebrolysin bekannt, ein cerebrales Hydrolysat, das kein Protein ist, umfassend freie Aminosäuren und niedermolekulare Peptide (3). Dieses Mittel erhöht die Wirksamkeit des aeroben Energie-Stoffwechsels, verbessert die intrazelluläre Proteinsynthese, zeigt neuroprotektive und neurotrophe Aktivität und zeigt eine positive Wirkung bei kognitiven Veränderungen auf.
Der Nachteil dieses Mittels ist, dass dessen neurotrophe Wirkungen weniger potent sind als die der natürlichen neurotrophen Faktoren. Die Verabreichung des Arzneimittels führt zu keiner deutlichen Verbesserung der anatomen Struktur und der funktionalen Aktivität in geschädigten cerebralen und spinalen Neuronen (4, 5, 6). Die Anwendung von Cerebrolysin kann Nebenwirkungen umfassen. Weiterhin ist ein akutes Nierenversagen eine Kontraindikation dieses Mittels.
Es gibt bekannte neurotrophe Faktoren, die niedermolekulare Proteine sind (15-30 kDa), und durch die zellulären Bausteine des Zentralen Nervensystems synthesisiert werden: Neuronenwachstumsfaktor, neurotropher Faktor aus dem Cerebrum, 3-, 4- und 5-Neurotrophine, basische und saure Fibroblasten Wachstumsfaktoren, epidermaler Wachstumsfaktor, Astrocytenfaktor-S-100-Protein, Lipoprotein (7, 8). Das Zuführen dieser Mittel in niedrigen Dosen zu Neuronenkulturen stellt eine Zellfunktion bereit, erlaubt das Bilden und Wachstum von Axonen durch Stimulation der RNA, DNA und proteinbiosynthese. Neurotrophe Faktoren sind sowohl notwendig für das Überleben als auch zur Differenzierung der Neuronen während der Embryogenese und zur Aufrechterhaltung der morphologischen und funktionellen Eigenschaften der reifen Zellen. Es wurde allerdings in Studien gezeigt, dass ihre Wirksamkeit nur auf die neuroprotektive Wirkung begrenzt ist und die neurotrophen Wirkungen erst in den späteren Abschnitten auftreten. Endogene Peptidsubstanzen im Zentralen Nervensystem sind als Signalvermittler bei der zwischenneuronalen oder Neuroeffektortransmission bekannt, und sie können als Neurohormone, Neurotransmitter oder Neuromodulatoren funktionieren (9, 10, 11). Diese endogenen Substanzen, Neuropeptide, werden von kommunizierenden neuronalen Elementen freigesetzt, so dass eine Zielstruktur diese als Information erkennt. Neuropeptide wurden als Mittel der integralen Modulation von CNS-Funktionen, wie regenerierenden Prozessen, Gedächtnis, emotionellen Wirkungen, Empfindung von Schmerz und Freude usw. gefunden.
Es gibt bekannte Peptide, Corexin und Epithalamin, die aus den Hirn von Kühen extrahiert werden (Molekulargewicht – 10 kDa) und in der Lage sind, strukturelle und funktionelle Homöostasis von Zellpopulationen, die diese Peptide sekretieren, zu unterstützen (12, 13).
Die vorliegende Anmeldung unterscheidet sich von dem Stand der Technik durch eine neue Aminosäuresequenz L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro und wurde zur Lösung des Problems gemacht, neue Peptide mit funktioneller stimulierender Aktivität auf Neuronen zu erhalten.
Offenbarung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung zielt auf ein Erhalten einer neuen biologisch aktiven, von Peptid abstammenden Substanz, die in der Lage ist, die funktionelle Aktivität von Neuronen zu stimulieren. Die offenbarte Peptidverbindung, ein Tetrapeptid, hat keine strukturellen Analoga.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird ein Tetrapeptid, L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin, L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro, offenbart.
Erfindungsgemäß zeigt das Tetrapeptid L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin mit der vorliegenden Aminosäuresequenz L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro eine biologische Aktivität, nämlich sie stimuliert die funktionelle, neuronale Aktivität im zentralen und peripheralen Nervensystemen aufgrund der Normalisierung von Stoffwechselprozessen, der Stimulation von Parametern der Antioxidationsabwehr, der Verbesserung von elektrophysiologischen Indices.
Das Tetrapeptid wird durch ein klassisches Verfahren der Peptidsynthese in Lösung erhalten (9).
Die stimulierende Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die funktionelle Aktivität von Neuronen wurde experimentell gefunden. Die biologische Aktivität wurde in Explantaten des Nervengewebes untersucht, wobei gewebespezifische Wirkungen des Tetrapeptids in Ratten untersucht wurden unter Aus nutzung der Indices der Antioxidationsabwehr und des Serotoninstoffwechsels im Gehirn und der cerebroprotektiven Wirkung im Falle von toxischen und traumatischen Einwirkungen.
Erfindungsgemäß enthält das pharmakologische Mittel zur Stimulation der neuronalen funktionellen Aktivität als aktive Basis eine wirksame Menge des Tetrapeptids der allgemeinen Formel L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin (L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro) oder dessen Salze.
Erfindungsgemäß kann das pharmakologische Mittel zur Stimulation der neuronalen funktionellen Aktivität Salze der Aminogruppe (Acetat, Hydrochlorid, Oxalat) oder der Carboxylgruppen (Metallsalze – Natrium, Kalium, Calcium, Lithium, Zink, Magnesium und von anderen organischen oder anorganischen Anteilen, wie Ammonium und Triethylammonium) enthalten.
Erfindungsgemäß ist das pharmazeutische Mittel so gestaltet, dass es zur parenteralen, intranasalen oder oralen Verabreichung geeignet ist.
Das verwendete pharmazeutische Mittel zur Stimulation der funktionalen Aktivität von Neuronen ist in der Lage, den Stoffwechsel und das Wachstum von veränderten Nervengewebestrukturen wiederherzustellen.
In der Erfindung einschl. den Beispielen und bevorzugten Ausführungsformen wird die folgende allgemein verwendete Terminologie genutzt.
"Pharmazeutisches Mittel" bezieht sich in der vorliegenden Erfindung auf die Verwendung irgendeiner Arzneimittelform enthaltend das Tetrapeptid oder dessen Salze, wie sie in der Medizin zu vorbeugenden oder therapeutischen Zwecken verwendet werden können, als Mittel zur Wiederherstellung der strukturellen und funktionalen Integrität von Nervengewebe.
"Wirksame Menge" bezieht sich in der vorliegenden Erfindung auf die Verwertdung einer solchen Menge einer aktiven Grundsubstanz, die gemäß quantitativen Indices der Aktivität und Toxizität, sowie auf Grundlage der Kenntnis des Fachmanns, in seiner Arzneimittelform wirksam ist.
"Pharmazeutische Zusammensetzung" bezieht sich in der vorliegenden Erfindung auf die Verwendung von verschiedenen Arzneiformen des medizinischen Mittels.
Um entsprechende erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzungen zu erhalten, wird bevorzugt das verwendete Tetrapeptid oder pharmazeutisch annehmbare Derivate davon als wirksamer Inhaltsstoff mit einem pharmazeutischen Träger gemäß den Verfahren zum Mischen, wie sie in der pharmazeutischen Industrie anerkannt sind, vermischt.
Der Träger kann in verschiedenen Formen in Abhängigkeit von der Arzneiform des Mittels, wie es dem Körper verabreicht werden soll, z.B. parenteral, intranasal oder oral gestaltet sein.
Um Zusammensetzungen in der bevorzugten Dosisform zur oralen Verabreichung herzustellen, können irgendwelche bekannten pharmazeutischen Komponenten verwendet werden.
Zur parenteralen (intranasalen) Verabreichung umfasst der Träger normalerweise steriles Wasser, obwohl andere Inhaltsstoffe, die zur Stabilität oder Sterilität beitragen, zugefügt werden können.
Erfindungsgemäß beinhaltet das Verfahren die therapeutische und vorbeugende Verabreichung des beanspruchten pharmazeutischen Mittels an einen Patienten mit 0,01 bis 100 μg/kg Körpergewicht, mindestens einmal täglich für einen Zeitraum der notwendig ist, um eine therapeutische Wirkung zu erzielen, von 10 bis 50 Tagen in Abhängigkeit von den Eigenschaften und der Schwere der pathologischen Prozesses.
Erfindungsgemäß ist das Tetrapeptid wirksam, wenn es in Dosen von 0,01 bis 100 μg/kg Körpergewicht verabreicht wird, natürlich können auch niedrigere (oder höhere) Dosen in Abhängigkeit von den Eigenschaften und der Schwere des pathologischen Prozesses verwendet werden.
Industrielle Anwendung
Die Erfindung wird beispielhaft dargestellt durch ein Beispiel zur Synthese des Tetrapeptids mit der Formel L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin (L-Alqa-L-Glu-L-Asp-L-Pro) (Beispiel 1), durch Beispiele zum Testen der Toxizität und der biologischen Aktivität des Tetrapeptids (Beispiele 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9) und durch Beispiele der klinischen Anwendung des Tetrapeptids, die die pharmazeutischen Eigenschaften aufzeigt und die Möglichkeit bestätigt, eine vorbeugende und/oder therapeutische Wirkung zu erzielen (Beispiel 9 und 10).
Beispiel 1
Synthese von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid

1. Produktname: L-Alanyl-L-Glutamyl-L-Aspartyl-L-Prolin
2. Strukturformel: H-Ala-Glu-Asp-Pro-OH
3. Summenformel ohne Ionenpaar: C₁₇H₂₆N₄O₉
4. Molekulargewicht ohne Ionenpaar: 430,41
5. Ionenpaar: Acetat
6. Aussehen: Weißes, amorphes, geruchloses Pulver
7. Syntheseverfahren: Das Peptid wurde durch ein klassisches Verfahren zur Synthese in Lösung gemäß dem folgenden Schema erhalten.
Z – Benzyloxycarbonylgruppe; BOC – Tert.Butyloxycarbonylgruppe; Osu – N-oxysuccinimidester; Obzl – Benzylester; DCC – N,N'-D-dicyclohexylcarbodiimid; HOBT – N-oxybenzotriazol.

N,N'-dimethylformamid wurde als Lösungsmittel verwendet. Durch Einfügen von Asparaginsäure wurde die α-COOH-Gruppe durch Salzbildung mit Triethylamin geschützt. Die BOC-Schutzgruppe wurde mit Triflour-Essigsäure- (TFA) Lösung geschützt und die Z-Schutzgruppe wurde mittels katalytischer Hydrierung geschützt. Das Produkt wurde extrahiert und gereinigt mittels dem Verfahren der preparativen Hochleistungs-Flüssigchromatographie (HPLC) auf einer Umkehrphasensäule.
Spezifikation des Endprodukts: Aminosäure-Assay

– Peptidgehalt: 98,56% (mittels HPLC, 200 nm);
– Dünnschicht-Chromatographie (TLC) – individuell; R_f = 0,67 (Acetonitril- Essigsäure-Wasser 5:1:3);
– Feuchtigkeitsgehalt: 7%;
– pH der 0,001 %-Lösung: 4,24;
– spezifische Drehung [α]_D ²⁵: –78,9°(c = 1,09, H₂O), "Polamat A", Carl
Zeiss, Jena.

Synthesebeispiel
1) BOC-Glu(Obzl)-Asp(Obzl)-OH (I), N-tert.butyloxycarbonyl-(γ-benzyl)-glutamyl(β-benzyl)aspartat
4,34 g (0,0100 mol) N-oxysuccinimidester N-tert.butyloxycarbonyl-(γ-benzyl)glutaminsäure BOC-Glu(OBzl)-OSu wurden, in 20 ml Dimethylformamid gelöst und 1,72 ml (0,0125 mol) Triethylamid und 2,80 g (0,0125 mol) β-benzylaspartat wurden hinzugefügt. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur für 24 Stunden gerührt. Das Produkt wurde mit 0,5 N Schwefelsäure (150 ml), präzipitiert, mit Ethylacetat (3 × 30 ml) extrahiert, mit 0,5 N Schwefelsäure (2 × 20 ml), Wasser, 5% Natriumbicarbonat (1 × 20 ml), Wasser, 0,5 N Schwefelsäure (2 × 20 ml), Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Ethylacetat wurde filtriert und im Vakuum bei 40°C entfernt. Der Rest wurde im Vakuum über P₂O₅ getrocknet. Als Ergebnis wurden 5,68 g (≈ 100%) eines Öls erhalten.
R_f = 0,42 (Benzol-Aceton 2:1, Sorbfilplatten, 8 – 12 μm Silikatgel, Entwicklung UV und Chlor/Benzidin).
2) TFA H-Glu(Obzl)-Asp(Obzl)-OH (II), Trifluoracetat (γ-benzyl)-glutamyl-(β-benzyl)aspartat
5,68 g (≈ 0,01 mol) N-tert.butyloxycarbonyl-(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartat (I) wurden in 20 ml Dichlormethan-Trifluoressigsäuremischung (3:1) gelöst. Innerhalb von 2 Stunden wurde das Lösungsmittel in vacuo bei 40°C entfernt, das Entfernen wurde mit einer Zugabe von einem weiteren Teil Dichlormethan (2 × 10 ml) wiederholt und der Rest wurde in vacuo über NaOH getrocknet. Es wurden 5,80 g (≈ 100%) eines Öls erhalten. R_f = 0,63 Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser, 15:10:3:12).
3) Z-Ala-Glu(OBzl)-Asp(Obzl)-OH (III), N-bezyloxycarbonyl Alanyl-(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartat
5,65 g (0,01 mol)γ-benzylglutamyl-(β-benzyl)aspartattrifluoracetat (II) wurden in 10 ml Dimethylformamid gelöst und 2,80 ml (0,02 mol) Triethylamin und 4,14 g (0,013 mol) in N-benzyloxy-carbonylalanin N-oxysuccinimidester wurden hinzugefügt. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur für 24 Stunden gerührt. Das Produkt wurde mit 0,5 N Schwefelsäure (150 ml) präzipitiert, mit Ethylacetat (3 × 30 ml) extrahiert, mit 0,5 N Schwefelsäure (2 × 20 ml), Wasser, 5% Natriumbicarbonat (1 × 20 ml), Wasser, 0,5 N Schwefelsäure (2 × 20 ml), Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Ethylacetat wurde filtriert und in vacuo bei 40°C entfernt und der Rest wurde im Ethylacetat/Hexansystem kristallisiert. Das Produkt wurde filtriert und in vacuo über P₂O₅ getrocknet. Die Ausbeute war 4,10 g (66%). Schmelzpunkt: 154°C. R_f = 0,48 (Benzol-Aceton, 1:1), R_f = 0,72 (n-butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser, 15:10:3:12).
4) Z-Ala-Glu(Obzl)-Asp(Obzl)-Pro-OH(III), N-benzyloxycarbonylalanyl-(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartylprolinbenzylether
0,72 g (3 mmol) HCIH-Pro-Obzl, Prolinbenzylesterhydrochlorid, wurden in 15 ml Tetrahydrofuran suspendiert und 0,4 ml (3 mmol) Triethylamin wurden unter Rühren hinzugefügt; anschließend wurden in 5 Minuten 1,28 g (2 mmol) N-benzyloxycarbonylalanyl(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)-aspartat (III) und 0,27 g (2 mmol) N-oxybenzotriazol hinzugefügt: Die Mischung wurde auf 0 °C heruntergekühlt. Anschließend wurde eine auf 0 °C heruntergekühlte Lösung von 0,42 g (2 mmol) N,N'dicyclohexylcarbodiimid in 5 ml Tetrahydrofuran hinzugefügt. Die Mischung wurde bei 0 °C für 2 Stunden gerührt und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Der Rest des Dicyclohexylharnstoffs wurde abfiltriert, das Lösungsmittel wurde in vacuo entfernt und der Rest wurde in 30 ml Ethylacetat gelöst. Die Lösung wurde mit 1 N Salzsäure, Wasser, 5 % Natriumbicarbonat, Wasser, 1 N Salzsäure, Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde in vacuo entfernt und in Ethylacetat/Hexansystem kristallisiert. Die Ausbeute war 1,50 g (90 %). T_ml = 125 – 128 °C, R_f = 0,40 (Benzol-Aceton, 2:1).
5) H-Ala-Glu-Asp-Pro-OH (IV), Alanyl-glutamyl-aspartyl-prolin
1,50 g N-benzyloxycarbonylalanyl(γ-benzyl)glutamyl-(β-benzyl)aspartylprolin Benzylester (III) wurde im Methanol-Wasser-Essigsäuresystem (3:1:1) über Pd/C Katalysator hydriert. Der Fortschritt des Entschützens wurde mittels TLC-Verfahren in Benzol-Aceton- (3:1) und Acetonitril-Essigsäure-Wasser- (5:1:3) Systemen überwacht. Nach Beendigung der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert. Das Filtrat wurde in vacuo entfernt und der Rest wurde im Wasser/Methanolsystem kristallisiert. Das Produkt wurde in vacuo über KOH getrocknet. Die Ausbeute war 0,66 g (86 %). R_f = 0,67 (Acetonitril-Essigsäure-Wasser, 5:1:3).
Zur Aufreinigung wurden 508 mg des Produkts in 4 ml 0,01 % Trifluoressigsäure gelöst (pH der Probe 2,23) und eine HPLC mit einer Umkehrphasensäule 50 × 250 mm Diasorb-130-C16T, 7 μ unterworfen. Das verwendete Chromatographiegerät war Beckman System Gold, 126 Solvent Module, 168 Diode Array Detector Module. Chromatographiebedingungen A: 0,1 % TFA; B: 50 % MeCN/0,1 % TFA, Gradient B 0 → 16 % in 240 Minuten. Probe-Volumen entsprach 5 ml, Nachweis wurde durchgeführt bei 215 nm durch Scannen von 190 – 600 nm, Flussrate 10 ml/min. die Fraktion wurde ausgewählt aus dem Bereich von 127 – 155 Minuten. Das Lösungsmittel wurde in vacuo bei einer Temperatur, die nicht 40 °C überschritt, entfernt. Das Entfernen wurde 5 × mit 10 ml 10 % Essigsäure wiederholt. Schließlich wurde der Rest in 20 ml deionisiertem Wasser gelöst und lyophilisiert. Als Ergebnis wurde 303 mg aufgereinigtes Produkt in Form eines amorphen geruchlosen weißen Pulvers erhalten.
Um entsprechende Salze der Carboxylgruppen zu erhalten, wurden dem freien Tetrapeptid eine berechnete Menge einer wässrigen Lösung eines entsprechenden Metallhydroxids (NaOH, KOH, ZnOH₂, LiOH, CaOH₂, MgOH₂, NH₄OH) hinzugegeben. Um ein Triethylamminsalz zu erhalten, wurde das Verfahren in ähnlicher Weise mit Hilfe von Triethylamin als Base wiederholt.
6. Analyse des Endprodukts

– Der Peptidgehalt wurde erhalten durch HPLC-Verfahren auf einer Supelco LC-18-DB-Säule, 4,6 × 250 mm, Gradient LC-18-DB. A: 0,1 % TFA; B: 50 % MeCN/0,1 % TFA; Gradient B 0 → 20 % in 30 Minuten. Flussrate 10 ml/min. Nachweis bei 220 nm, Scannen von 190 – 600 nm, Proben-Volumen entsprach 2 μl. Peptidgehalt – 98,56 %.
– Aminosäureassay wurde mit einem Testgerät AAA "T-339" Prag, durchgeführt. Die Hydrolyse wurde in 6 N HCl bei 125 °C in 24 Stunden durchgeführt.
– TLC: Individuell, R_f = 0,67 (Acetonitril-Essigsäure-Wasser, 5:1:3, Sorb filplatten, 8 – 12 μm Silikatgel, Entwicklung mit Chlor/Benzidin);
– Feuchtigkeitsgehalt: 7 % (gravimetrisch gemäß den Massenverlust durch Trocknen, – 20 mg bei 100 °C).
– pH der 0,001 % Lösung: 4,24 (potentiometrisch).
– spezifische Drehung: [α]_D ²⁵: –78,9° (c = 1,09, H₂O), "Polamat A", Carl Zeiss Jena.

Beispiel 2
Studien zur L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid-Toxizität
Mögliche toxische Wirkungen des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf den Organismus wurden gemäß "Regeln zur Abschätzung der Sicherheit pharmakologischer Mittel" (GLP), wie sie von dem Staatlichen Kontrollinstitut für Medizinische Arzneimittel und Medizinische Ausrüstung der Russischen Föderation vom 29. Dezember 1997 erlassen wurden, durchgeführt.
Das Ziel der Untersuchung bestand in der Definition der tolerierbaren toxischen Arzneidosis des Mittels, Bestimmung des Niveaus und der Eigenschaft der pathologischen Veränderungen in verschiedenen Organen und Systemen und dem Erkennen der Korrelation zwischen den toxischen Wirkungen und der Dosis und der Dauer der Arzneimittelverabreichung.
Die akute Toxizität von L-Ala-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptide wurde gemäß Kerber bestimmt. Die Studie wurde mit 66 weißen männlichen Inzuchtmäusen, die 20 – 23 g wogen und in einem Käfig unter Standardbedingungen und unter Standardernährung gehalten wurden, durchgeführt. Die Tiere wurden zufällig in 6 gleiche Gruppen von jeweils 1 1 Mäusen eingeteilt. Die Tiere wurden einer einzelnen intramuskulären Verabreichung von 0,25 ml der Präparation in Dosen von 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg unterworfen (mehreretausendmal größer als die für klinische Tests empfohlene therapeutische Dosis. Den Kontrolltieren wurden gleiche Mengen an Salzlösung verabreicht.
Innerhalb von 72 Stunden und später innerhalb von 14 Tagen verstarb keine der Mäuse in irgendeiner der Gruppen. Keine Veränderung im allgemeinen Zustand, Verhalten, Bewegungsaktivität, Haar- und Hautaussehen, physiologische Veränderung der Tiere wurden beobachtet.
Somit zeigte das Tetrapepid L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro in Dosen, die einige tausendfach über der empfohlenen therapeutischen für klinische Studien lag, keine akute toxische Reaktion auf, dies zeigt eine breite therapeutische Anwendbarkeit dieser Präparation.
Die subakute Toxizität von Tetrapeptid L-Ala-L-GIu-L-Asp-L-Pro wurde in 60 weißen Inzuchtratten, die 150 bis 250 g wogen, untersucht. Den Tieren des Experiments wurde die Präparation intramuskulär einmal am Tag verabreicht, täglich für 90 Tage in Dosen von 1 μg/kg, 0,3 mg/kg, 3 mg/kg in 0,5 ml Salzlösung. Den Kontrolltieren wurden in gleicher Menge Salzlösung verabreicht.
Über den gesamten Untersuchungszeitraum wurden die Tiere täglich überwacht. Das Verhalten der Tiere, Nahrung- und Wasserverbrauch, der Zustand des Haaraufbaus und der mucosalen Membranen wurde festgestellt. Die Tiere wurden einmal die Woche gewogen. Vor und nach dem 30., 60. und 90. Tag der Arzneiverabreichung wurde die morphologische Zusammensetzung und die Eigen schaften des peripheralen Blutes der Tiere untersucht. Nach Beendigung der Studie wurden biochemische und Blutkoagulotions-Indices erstellt.
Chronische Toxizität von Tetrapeptid L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro, die gemäß den beanspruchten Verfahren erhalten wurden, wurden mittels Langzeitverabreichung davon bei Ratten mit einem Gewicht von 150 – 250 g erhalten. Die Tiere wurden einer täglichen intramuskularen Verabreichung des Arzneimittels in Dosen von 1 μg/kg, 0,1 mg/kg, 1 mg/kg in 0,5 ml Salzlösung für 6 Monate unterworfen. Das Verhalten der Tiere, Nahrungsmittel- und Wasserverbrauch, der Zustand des Haaraufbaus und der mucosalen Membran wurde untersucht. Die Tiere wurden täglich für die ersten Monate des Experiments gewogen und anschließend einmal pro Monat. Hämatologische und biochemische Untersuchungen wurden 3 Monate nach Beginn der Arzneimittelverabreichung durchgeführt und am Ende des Experiments. Die Funktion des kardiovaskulären Systems, Leber, Pankreas, Nieren und adrenalen Drüsen wurden untersucht. Nach Beendigung der Behandlung wurden einige Tiere pathomorphologischen Untersuchungen unterworfen, mit dem Zweck, den Zustand verschiedener Bereiche des Hirns und des Knochenmarks, Herz, Aorta, Lungen, Leber, Nieren, Endokrin- und Immunorganen festzustellen.
Die Beurteilung des allgemeinen Zustandes der Tiere, morphologische und biochemische Indices des peripheren Blutes, des morphologischen Zustands der intrinsischen Organe, der Status des kardiovaskulären und des Atmungssystems, der Leber- und Nierenfunktionen, zeigten keine pathologischen Veränderungen.
Die Untersuchung des Tetrapeptids L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro auf subakute und chronische Toxizität zeigte die Abwesenheit von irgendwelchen Nebeneffekten bei verlängerter Arzneimittelverabreichung in Dosen von 100 bis 1000-fach über der therapeutischen.
Beispiel 3
Wirkung des Tetrapeptids L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro auf die Entwicklung von cerebralen Corteximplantaten
Die Experimente wurden an 73 cerebralen Kortexfragmenten von 10 – 11 Tage alten Hühnerembryos durchgeführt. Das Kulturmedium für die Explantate umfasste 35 % "Eagle's" Lösung, 25 % fötales Kälberserum, 35 % "Hanks"' Lösung, 5 % Hühnerembryonenextrakt. Dem Medium wurden weiterhin Glukose (0,6 %), Insulin (0,5 IU/ml), Penicillin (100 IU/ml), Glutamin (2 mM) zugefügt. Die Fragmente des cerebralen Kortex wurden in dieses Medium gegeben und in Petrischalen in einem Thermostaten bei 36,7 °C 2 Tage kultiviert. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid und Cerebrolysin in Konzentration von 0,5, 1, 2, 20, 50, 100, 200, 400, 800, 1000 ng/ml wurden dem Medium hinzugefügt. Der Flächenindex (Area Index, Al) diente als Kriterium für die biologische Aktivität und reflektiert das Verhältnis an Gesamtexplantatbereich einschließlich der Wachstumszone, zu der anfänglichen Fläche des Kortexfragments. Students's t-Test wurde zur Bewertung der signifikanten Unterschiede zwischen den verglichenen durchschnittlichen Al-Werte verwendet. Al-Werte wurden in Prozent ausgedrückt. Der Kontroll-Al-Wert wurde als 100 % genommen.
Die Wachstumszone der Kontrollkortexexplantate schloss Kurzaxon, Neurogliazellen, die zur Peripherie migrierten und fibroblastenartige Zellen ein.
Die folgenden Serien an Experimenten wurden durchgeführt, um die direkte Wirkung des Arzneimittels auf die cerebralen Kortexfragmente zu untersuchen.
Cerebrolysin in verschiedenen Konzentrationen wurde zu dem Kulturmedium der cerebralen Kortexexplantate der Hühnerembryos gegeben. Am dritten Tag der Kultivierung wurde eine signifikante Zunahme des Al des Explantats beobachtet (mit 30 ± 2%) bei einem Vergleich von 100 ng/ml mit den Kontroll-Al-Werten. Keine signifikanten Al-Werte der Kortexexplantate beim Verwenden anderer Konzentration an Cerebrolysin wurden beobachtet (1). Die Entwicklung der cerebralen Explantate wurde deutlich durch L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid in einer Konzentration von 20 ng/ml stimuliert. Dabei war der Al der Explantate mit 40 ± 7% im Vergleich zu der Al der kontrollcerebralen Kortexfragmente höher.
Die gleiche Axon stimulierende Wirkung durch die gleichen Konzentrationen zeigte sich im Falle von verlängerter (für 7 Tage) Kultivierung der Kortexexplantate. Manchmal wurde ein statistisch nicht signifikanter Rückgang im Explantat I beobachtet, vermutlich aufgrund des Zurückziehens von Nervenfasern bei verlängerter Kultivierung.
Somit wurde bei cerebralen Geweben ein erniedrigter Ausschlusswert für die wirksamen Konzentrationen an L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid im Vergleich zu Cerebrolysin beobachtet. Cerebrolysin stimulierte z.B. kultivierte kortikale Fragmente in Konzentration von 100 ng/ml, während das Tetrapeptid dies in einer Konzentration von 20 ng/ml aufzeigte, dies zeigt eine deutlichere und gezieltere Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf die Neuronen des cerebralen Kortex.
Beispiel 4
Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf die Intensität der Lipidperoxidoxidationsreaktion im cerebralen Kortex
Die Stärke der Lipidperoxidoxidation (LPO) wurde mit Hilfe der Menge an anfänglichen LPO-Produkten, Dienkonjugaten und Endprodukten, Schiffschen Basen, untersucht. Der Grad an Proteinperoxidation wurde bestimmt durch die Menge an Aminosäuren, die von Carbonyl stammen, in Proteinen nach ihrer Interaktion mit 2,4-Dinitrophenylhydrazin.
Die Studie wurde an 20 weißen Inzuchtratten durchgeführt. 1 μg Tetrapeptid wurde den Tieren täglich intraperitoneal für 5 Tage verbreicht.
Das getestete Tetrapeptid stellte sich heraus als eines, dass signifikant die Bildung von LPO-Produkten im cerebralen Kortex unterdrückt. Unter Wirkung des Tetrapeptids nahm die Menge an Dienkonjugaten signifikant ab und die der Schiffschen Basen neigten ebenfalls zu einer Abnahme. Weiterhin hemmte die Gabe von Tetrapeptid die Proteinperoxidation genauso wie die von LPO (Tabelle 1).
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Stärke der Lipidperoxidoxidationsreaktionen im cerebralen Kortex der Ratte
Die erhaltenen Daten zeigen, dass die Anwendung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid die Bildung von Lipidperoxidoxidationsprodukten und Proteinperoxidation im cerebralen Kortex unterdrückt.
Beispiel 5
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die toxischen Wirkungen von neurotrophischen Mitteln
Untersucht wurde die Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf die toxischen Wirkungen von neurotrophischen Mitteln verschiedener pharmakologischer Gruppen.
Innerhalb einer Stunde nach intramuskulärer Injektion von Salzlösung (Kontrolle) oder L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid (5 μg/kg) wurden Ratten intraperitonal toxische Dosen von verschiedenen neuropharmakologischen Mitteln verabreicht (Apomorphin, Haloperidol, Nikotin und Kaffein). Dabei wurden die Parameter der vertikalen (Ängstlichkeit) und horizontalen (lokomotorischen Aktivität) spontanen Bewegungsaktivität aufgezeichnet.
Apomorphin zeigte eine emetische Wirkung aufgrund der Stimulation der chemorezeptiven Triggerzone in der Medulla Oblongata. Weiterhin ist Apomorphin in der Lage mit Dopaminrezeptoren zu interagieren und die dopaminergen Strukturen des Hirns zu stimulieren. In den Experimenten konnte hyperlokomotorische Aktivität, Hyperthermie, "Psychose" und Myotonie beobachtet werden. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wirkte Apomorphin entgegen (verringerte Ängstlichkeit und lokomotorische Aktivität).
Haloperidol bezieht sich auf Neuroleptika und zeigt eine geringe adrenolytische Aktivität. Bei den Experimenten führte dieses Mittel zu Hypothermie, Katalepsie, "Depression", Myoplegie und eine Abnahme der lokomotorischen Aktivität. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wirkte als ein pharmakologischer Antagonist zur Haloperidol (verringerte Ängstlichkeit und lokomotorische Aktivität).
Nikotin besitzt eine n-cholinomimetisch Wirkung. Bei den Experimenten erhöht dieses Mittel die vertikale und horizontale Bewegungsaktivität, genauso wie den muskulären Tonus. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid erniedrigt den Einfluss von Nikotin auf die Ängstlichkeit der Tiere. Kaffein ist ein Psychostimulator. Der Wirkungsmechanismus basiert auf Unterdrückung von Phosphodiesteraseaktivität und einer damit assoziierten Zunahme an cAMP. In den Experimenten verursachte Kaffein hyperlokomotorische Aktivität und fördert soziale Kontakte der Tiere. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid verringert die Kaffein induzierte Ängstlichkeit, hat aber keine Wirkung auf die lokomotorische Aktivität.
Die Eigenschaft des Tetrapeptids L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro, die toxischen Wirkungen von solchen Mitteln, wie Adrenostimulatoren, Neuroleptika, Cholinomimetika und Psychostimulatoren zu unterdrücken, kann Anwendung finden bei der Behandlung von neurotrophen Vergiftungen.
Beispiel 6
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf den Serotoninstoffwechsel
Die Studie wurde in einem Modell eines elektrisch induzierten Schmerzes durchgeführt.
L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wurde den Ratten in einer Dosis von 5 μg/kg sofort vor oder direkt nach Anlegen von elektrisch induziertem Schmerz verabreicht. In einer Stunde wurde der Gehalt an Serotonin und seinen Metaboliten, 5-Oxyindolessigsäure im parietalen und posterialen frontalen Bereich des Gehirns gemessen.
Im Falle von emotionell induziertem Schmerz wurde sowohl die Synthese als auch der Abbau von Serotonin durch die anschließende schnelle Depletion dieser Verfahren stimuliert. In kompensatorischer Art und Weise verringert die Stimulation des Serotoninstoffwechsels das emotionelle Wahrnehmungsvermögen bei Anlegen eines Schmerzes. Ein natürlicher "Nachteil" dieses Mechanismus besteht in einem schnellen Übergang zu einem Dekompensationszustand. Bei der Kontrolle (nicht behandelter Stress) erniedrigt sich das Serotoninniveau, während sich der der 5-Oxyinolessigsäure erhöht (Stoffwechseldepletionsphase).
Ein Zuführen von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrpeptid nach Stress erhöhte die Serotoninmenge und erniedrigte den Gehalt an 5-Oxyindolessigsäure im Gehirn. Verabreichung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid vor dem Stress fördert ähnliche Effekte, diese waren allerdings nicht signifikant. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid führte zu keinen Veränderungen im Niveau des Serotonins und dessen Metaboliten in nicht manipulierten Tieren.
Die Zuführung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid sofort nach elektrisch induziertem Schmerzstress normalisierte den Gehalt an Serotonin und dessen Metaboliten, 5-Oxyindolessigsäure, im Gehirn.
Beispiel 7
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Indices für Gedächtnis und Lernen im Falle von amnesischen Einwirkungen von elektrokonvulsivem Schock und Ethanolvergiftung
Nootrophische Aktivität des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids wurde unter Verwendung des konditionierten Reflexes des passiven Vermeidens (CRPA) in gesunden Tieren und unter Bedingungen von amnesierten Eingriffen (elektrokonvulsive Behandlung und Ethanolvergiftung) durchgeführt.
Die Experimente wurden an männlichen Mäusen mit einem Gewicht von 20 bis 24 g durchgeführt. Für jedes Tier wurde vor dem Trainieren der Zeitraum des Verbleibens im Hell- und Dunkelkammerbereich über 2 Minuten registriert. Nur Tiere, deren Aufenthaltszeitraum im beleuchteten Bereich nicht 40 Sekunden übertraf, wurden in die Experimentalgruppe aufgenommen. Die Tiere wurden mittels eines elektrischen Schmerz Stimulus in dem bevorzugten dunklen Bereich trainiert. Dieser dauerte so lange an, bis das Tier diesen Bereich verließ. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wurde 16 Minuten vor Beginn des Trainings intraperitoneal verabreicht. Das Testen wurde 2 bis 24 Stunden nach dem Training durchgeführt. Der Zeitraum, in das Tier in den Dunkel- und Hellbereich der Kammer verblieb und die Zahl der Tiere, die nicht den dunklen Bereich betraten (trainierte Tiere) wurde aufgezeichnet. Elektrokonvulsiver Schock wurde in der Maus nicht später als 10 Sekunden nach dem Training über corneale Elektroden mit einem elektrischen Impuls von 25 mA, der 0,5 Sekunden andauerte, induziert. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wurde intraperitoneal 60 Minuten vor dem Training zugeführt. Ein Test wurde 24 Stunden nach dem Training durchgeführt.
Ethanol wurde den Mäusen für 13 Tage in Form einer 10%-Lösung oral verabreicht. Ein Training wurde zweimal abgehalten: Am 14. Tag der Ethanolverabeichung und 24 Stunden nach dem ersten Training. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wurden intraperitoneal 30 Minuten vor dem Training verabreicht. Der Test wurde 2 und 24 Stunden nach dem ersten und dem zweiten Training durchgeführt. Die Ergebnisse der Studie sind in Tabelle 2 – 4 dargestellt.
Tabelle 2 Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Bildung von CRPA in normalen weißen Mäusen
Tabelle 3 Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Bildung von CRPA in Mäusen, die einer ECS induzierten amnesischen Einwirkung unterworfen wurden
Tabelle 4 Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Bildung von CRPA in Mäusen, die unter Ethanol induzierter amnesischer Wirkung waren
Bemerkung

1: 2 Stunden nach Training;
2: 24 Stunden nach Training;
3: 2 Stunden nach wiederholtem Training;
4: 24 Stunden nach wiederholtem Training.

Die erhaltenen Daten zeigen, dass L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid nicht die Bildung von CRPA in normalen Tieren beeinflusst. Das Mittel verbessert allerdings die Indices für Gedächtnis und Lernen bei amnesierenden Einwirkungen, dies zeigt die nootrophische Wirkung des getesteten Mittels und seine Fähigkeit, die amnetischen Wirkungen von ECS und Ethanol zu unterdrücken.
Beispiel 8
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Reparaturprozesse im Hirn nach craniocerebraler Verletzung
Die Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Reparaturprozesse im Hirn wurden an einem Modell akuter schwerer craniocerebraler Verletzung untersucht. Die Dynamik der funktionalen CNS-Wiederherstellung wurde trainiert durch Tests der Koordination der Bewegungen und der Muskelanspannung der Tiere, genauso wie auf deren Fähigkeiten zu lernen und zur Wiedergabe von konditionierten Reflexfähigkeiten.
Eine schwere craniocerebrale Quetschung in den Ratten wurde verursacht durch ein Faltenlassen eines Bleigewichts. Nach 1, 12, 48 und 96 wurden Tieren intramuskulär L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid injiziert. Die Tiere der zweiten Gruppe erhielten Cerebrolysin.
Die Fähigkeiten zu lernen und die Fähigkeiten wiederzugeben, wurden bestimmt mit einem Test auf einen konditionierten Reflex des aktiven Vermeidens, engl.: Conditioned Reflex of Active Avoidance (CRAA). Um die Muskelspannung und die Koordination der Bewegung zu bestimmen, wurden die Ratten mit zunehmender Geschwindigkeit um einen Punkt rotiert. Gleichzeitig wurde die Verweilzeit gemessen. Innerhalb von 48 Stunden verloren alle Tiere, die überlebt haben, ihre Fähigkeit zum Trainieren. Innerhalb von 96 Stunden war die Zahl der trainierbaren Tiere bei den Ratten, die mit L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid behandelt wurden, zweimal so hoch wie bei den Kontrollen. Innerhalb von 30 Tagen waren die Indices für das Lernen in den mit Tetrapeptid indizierten Ratten, ebenfalls höher als die der Kontrolle.
Die schwere craniocerebrale Verletzung hat ein hervorgehobenes asthenoneurotisches Syndrom bei den Tieren, die in ihrer Koordination eingeschränkt sind, und in ihrer Muskelanspannung zur Folge. Der Test mit dem "rotierenden Drehpunkt" zeigte, dass L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid die Wiederherstellung der Bewegungskoordination und der Muskelanspannung innerhalb von 48 Stunden nach dem Trauma erleichtert (die Verweilzeit auf dem Drehpunkt war zweimal so hoch wie die bei der Kontrolle).
Im Falle einer schweren craniocerebralen Quetschung war Cerebrolysin weniger wirksam als L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid.
Somit verbessert die Anwendung des untersuchten Mittels die Fähigkeiten der Tiere zu lernen und zur Wiederherstellung von konditionierten Reflexeigenschaften und brachten auch die Bewegungskoordination und die Muskelanspannung zurück. Eine vorteilhafte Wirkung des Arzneimittels wurde bereits am 4. Tag nach dem Trauma beobachtet. Mit dem 13. Tag erreichten die Lernindices die Normalwerte.
Im Falle einer akuten schweren craniocerebralen Verletzung werden die Neuronenpopulationen der grauen Substanz des Gehirns verletzt und zerstört. Eine beschleunigte Wiederherstellung der ZNS-Funktionen im frühen posttraumatischen Zeitraum aufgrund der Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid beweist, dass das vorliegende Tetrapeptid die Reparaturprozesse im Gehirn stimuliert:
Beispiel 9
Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Regenerierung von gequetschten peripheren Nerven
Die Studie wurde mit 22 weißen männlichen Inzuchtmäusen mit einem Gewicht von 25 bis 30 g durchgeführt (7 Experimental- und 15 Kontrolltiere).
In der ersten Stufe der Studie, wurden die Mäuse operiert, um den Fibularnerv dauerhaft zu quetschen. Der Fibularnerv (n. peroneus communus) in den Nembutal narkotisierten Mäusen (60 mg/kg, intraperitoneal) wurde in einer Entfernung von 8 bis 9 mm vom innervierten Muskel, dem großen Fingerstrecker (m. extensor digitorum longus – EDL): Die Tiere wurden am linken Hinterbein operiert, während der entsprechende Nerv und Muskel am rechten Bein intakt blieb und als Kontrolle verwendet wurde.
Danach wurde "vom dritten Tag der Nervenquetschung an. der Maus intraperitoneal L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid in Dosen von 10 μg/kg täglich für 8 Tage injiziert. Die Kontrollmaus wurde mit einer äquivalenten Menge Salzlösung behandelt.
Am 11. Tag nach der Operation zur Quetschung des Nerves (und innerhalb von 24 Stunden nach der letzten Tetrapeptidinjektion) wurde die Nembutal narkotisierte Maus (auf 60 mg/kg) in vivo elektrophysiologischen Tests für verschiedene funktionelle Parameter an bereits regenerierten Nerven und reinnervertierten skeletalen Muskelfasern (EDL) unterworfen.
Die erhaltenen Daten zeigten, dass bei den Experimentaltieren L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid die Wiederherstellung von einem anregbaren Grenzwert verstärkt und entsprechende Änderungen in der "Stärke-Dauer"-Kurve, für die das regenerierende neuromuskulare System vom 11. Tag nach Nervenquetschung an fördert (2). Die 2 zeigt die Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Stärke-Dauerkurve der ab dem Nervenstamm angewendeten Stimuli. Anmerkung:

a: Koeffizient für die Kurvenform (Hyperbol);
b: Koeffizient für die Stärke-Dauerkurve-Verschiebung entlang der Y-Achse;
a und b sind Parameter, die die Merkmale der elektrischen Anregbarkeit und die Anregbarkeitsgrenze der Nerven zeigt.

Das heißt, dass das Einführen von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid signifikant und deutlich (mit 30 bis 50 %) eines der wesentlichen funktionellen Indices des regenerierenden Nerves verbessert, dessen elektrische Schwelle, dies beschleunigt die Zeit der Wiederherstellung auf Normalwerte.
Der latente Zeitraum der M-Antwort stellte sich als weiterer Index heraus, der sich nach Zuführen des Tetrapeptids signifikant im peripheren "Nerven-Muskel-System" veränderte. Die Muskel-M-Antwort ist eine zusammengefasste elektrische Reaktion (Gesamtpotential der Muskelaktion) aufgezeichnet in Antwort auf Anregung des Bewegungsnervs. Es muss hervorgehoben werden, dass das Verkürzen des Zeitraums der latenten M-Antwort deutlicher beim intakten neuromuskulären System (mit 89 %) im Vergleich zum regenerierten Nerv (und dem Muskel) (mit 59 %) war. Der Zeitraum der latenten M-Antwort ist ein integraler Parameter, der das Leiten der Anregungsrate über die Axone, ihren feinen intermuskulären Verzweigungen, genauso wie die synaptische Übertragungsweite in dem peripheren Motorsynapsen anzeigt. Da die Wirkung des Tetrapeptids L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro auf den latenten Zeitraum der M-Antwort deutlicher beim gesunden Nerv und Muskel war, scheint dieses besondere Merkmal der Tetrapeptidaktivität anscheinend nicht direkt mit neuro- und myoregenerativen Prozessen assoziiert zu sein, es zeigt vielmehr die Fähigkeit des vorliegenden Mittels an, periphere anregbare Strukturen zu beeinflussen (Neuralfasern, Endbereiche, Synapsen, usw.) und die Anregungstransmission im peripheren neuromuskulären System zu verstärken.
In Verbindung mit dem Einfügen von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid in Mäuse, wurden eine Tendenz einer verringerten Acetylcholin-Muskelkontraktionsrate beobachtet (3), hervorgerufen durch die verbliebene nicht synaptische Cholinaufnahme, die nach Denervierung auf der Oberfläche der Muskelfasern verbleibt. Die Acetylcholin-Muskelkontraktion ist als eine bekannt, die durch nicht synaptische Cholinaufnahme vermittelt wird, diese ist wiederum ein klassischer Index, um den Grad an neurotrophischem Einfluss auf den Muskel zu manifestieren, hauptsächlich durch Motoneuronen. Dabei kann die Tendenz, die Acetylcholin-Muskelkontraktion bei Einbringen des Tetrapeptids zu unterdrücken, als ein Ergebnis eines neurotrophischen Motoneuroneneinflusses auf die Cholinaufnahme der Muskelfasern angesehen werden, verstärkt durch das vorliegende Mittel oder als eine Indikation von direkten neurotrophischen Wirkungen des Tetrapeptids selbst auf die Muskelfasern, wobei sie eine neurotrophische Motoneuronenaktivität imitieren.
Die Anwendung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid beschleunigt die Wiederherstellung von verschiedenen wichtigen funktionellen Indices bei der Nervenregenerierung nach Quetschung. Somit stimulierte das Tetrapeptid die Regeneration von sowohl den Nerven als auch am Muskel und ermöglicht es, dass sie sich wieder den Zustand von normalen "gesunden" Bewegungseinheiten näherten.
Das heißt, aufgrund der durchgeführten Experimente stellte sich das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als nicht toxisch, als in der Lage, die Aktivität von cerebralen Neuronen, ausgedrückt durch eine deutliche cerebroprotektive Wirkung, Stoffwechselaktivierung und hoher neurotropher Wirkung zu stimulieren, heraus.
Die in den präklinischen Studien und den Eigenschaften des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids erlauben es, dass es für therapeutische und präventive Anwendungen in verschiedenen cerebralen Erkrankungen angewendet werden kann. Die Liste der Erkrankungen und ihre Kodierung sind unten in Übereinstimmung mit der internationalen Klassifizierung von Erkrankungen 1CD-9-CM (14) aufgeführt.
In einer Ausführungsform der Erfindung, kann das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, dass cerebrale reparative Prozesse stimuliert und cerebroprotektive Aktivität aufzeigt, verwendet werden als ein Mittel zur:

– Behandlung und Prävention von traumaassoziierten cerebralen Läsionen (800 – 959), einschließlich: Behandlung von cerebralen Läsionen nach einem Bruch des Schädeldamms (1500), Schädelbasis (801), Mehrfachknochenfrakturen (804);
– Behandlung von cerebralen Läsionen im Falle von intercranialem Trauma (850 bis 854) (posttraumatischen cerebralen Gehirnerschütterung (850), cerebralen Wunden und Prellungen (851), subarachnoidaler, subduraler und extraduraler Blutung (852));
– Behandlung und Vorbeugen von traumatischem Schock (958,4);
– Behandlung von cerebralen Läsionen, die assoziiert sind mit der Einwirkung von Strahlung (990), erniedrigter Temperatur (991), Hitze und Licht (992), Luftdruck (993), elektrischer und ultrahoher Frequenzleistung;
– Behandlung und Vorbeugung von spät einsetzenden Wirkungen von Schädelfrakturen (905.0);
– Behandlung und Vorbeugung von spät einsetzenden Wirkungen von intracranialem Trauma (907.0);
– Behandlung und Vorbeugung von spät einsetzenden cerebralen Läsionen induziert durch Strahlung (909.2), Komplikation nach operativen und anderen medizinischen Einwirkungen (909.3).

In einer anderen Ausführungsform der Erfindung wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Mittel, das unterdrückende Wirkungen für toxische neurotrophe Mittel, stimulierende Wirkung bei cerebralen Reparaturprozessen und eine cerebroprotektive Wirkung aufzeigt, zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Läsionen nach Vergiftung (960 – 999) verwendet, einschließlich:

– Behandlung von cerebralen Läsionen nach Vergiftung mit therapeutischen Mitteln, medizinischen und biologischen Verbindungen (960 – 979);
– Behandlung von cerebraler Schädigung mit Mitteln nicht medizinischen Ursprungs (980 – 989);
– Behandlung und Vorbeugung von verspätet einsetzenden cerebralen Läsionen, induziert durch Vergiftung mit Arzneimitteln (909.0) und nicht-medizinischen Substanzen (909.1).

In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung wird L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel mit stimulierender Wirkung bei cerebralen Reparaturprozessen mit nootopischer Wirkung zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen degenerativen Erkrankungen (330 – 337) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von pädiatrischen cerebralen degenerativen Erkrankungen (330);
– Behandlung und Vorbeugung von Alzheimer Erkrankung (331.0), Pick's Erkrankungen (331.1), seniler cerebraler Degeneration (331.2) und Hydrocephalus (331.3 – 331.4);
– Behandlung und Vorbeugung der Parkinson's Erkrankung (332) und anderer extrapyramidaler Erkrankungen (333) (degenerative Erkrankungen der Basalganglia (333.0), hereditärer Tremor (331.1), Myoclonus (333.2), Zucken organischen Ursprungs (333.3), Huntington's (vererbter) Chorea (333.4) und anderen Arten der Chorea, Torsionsdystonie (33.6 – 33.8));
– Behandlung und Vorbeugung von Spinal-Cerebellum-Erkrankungen (Friedrich's Ataxie (334.0), vererbter spastischer Paraplegie (334.1) und Cerebellum Ataxie bei anderen Erkrankungen (334.4)).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsformen wird L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel mit nootrophischer Wirkung, das cerebrale Reparaturprozesse stimuliert, zur Behandlung und Vorbeugung von senilen und präsenilen organischen psychotischen Erkrankungen (290) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von seniler Demenz (290.1), einschließlich die die Alzheimer Erkrankung (331.0), Jacob-Creutzfeldt-Krankheit (046.0) und Pick's Erkrankung (331.1);
– Behandlung und Vorbeugung von nicht komplizierter seniler Demenz (290.1);
– Behandlung und Vorbeugung von seniler Demenz mit Anzeichen eines Deliriums bei Depression (290.2);
– Behandlung und Vorbeugung von seniler Demenz mit Delirium (290.3);
– Behandlung und Vorbeugung von arteriosklerotischer Demenz (290.4).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel mit nootropischer Wirkung, das cerebrale Reparaturprozesse stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von amnestischen Erkrankungen (294.0) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von nicht-alkoholischen Korsakoff's Psychose (294.0);
– Behandlung und Vorbeugung von Demenz bei verschiedenen Erkrankungen (294.1) (Demenz bei HIV-infizierten Patienten (HIV-Enzephalopathie), cerebraler Lipidose (330.1), Epelepsie (345.0 – 345.9), Syphilis (094.1), hepatolenticularer Degeneration (275.1), vererbter Huntington's Chorea (333.4), Multipler Sklerose (340) und nodolärer Polyarthritis (446.0));
– Behandlung und Vorbeugung eines Syndroms von chronischer undifferenzierter organischer cerebraler Läsion (294.9), einschließlich AIDS-cerebraler Läsion (042.9).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse stimuliert mit cerebroprotektiver Wirkung zur Behandlung und Vorbeugung von Multipler Sklerose (340) und anderen demyelisierenden cerebralen Erkrankungen verwendet.
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel mit nootrophischer Wirkung, mit Stimulation der cerebralen Reparaturprozesse zur Behandlung und Vorbeugung mentaler Defizite verwendet (317 – 319).
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse und die Beweglichkeit stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von paralytischen Erkrankungen (342 – 344) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von Hemiplegie (342);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebraler Kinderlähmung (343);
– Behandlung und Vorbeugung anderer paralytischer Syndrome (344) (Quadriplegie (344.0), Paraplegie (344.1), Diplegie der oberen Extremitä ten (344.2), Monoplegie der unteren Extremitäten (344.3 – 344.4)).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse mit cerebroprotektiver Wirkung stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeu gung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von chromosomalen Anomalien (758) verwendet, einschließlich dem Down-Syndrom.
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse mit cerebroprotektiver Wirkung stimuliert, als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von entzündlichen cerebralen Erkrankungen (320 – 326) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von bakterieller Meningitis (320), einschließlich Cryptococcus Meningitis bei AIDS-Patienten;
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von nicht-bakterieller Meningitis (321);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Meningitis unklaren Ursprungs (322);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle Enzephalitis, Myelitis und Enzephalomyelitis (323), einschließlich cerebraler Toxoplasmose bei AIDS-Patienten;
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von intracranialen Abzessen (324);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Phlebitis und Thrombophlebitis bei intracranialem enösen Sinus (325);
– Behandlung und Vorbeugung von Sequalae nach intracranialen Abzessen oder eitriger Entzündung (326).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturprozesse mit cerebroprotektiver und nootropher Wirkung stimuliert verwendet als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von cerebral-vaskulären Erkrankungen (439 – 438) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von subarachnoider Blutung (430);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von cerebraler Blutung (431);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Verschluss und Stenose von präcerebralen Arterien (433);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Verschluss von cerebralen Arterien (434);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von vorübergehender cerebraler Ischämie (435);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von anderen cerebral-vaskulären Erkrankungen (akuter cerebral-vaskulärer Erkrankungen (436), cerebraler Atherosklerose (437.0) und anderen allgemein cerebral vaskulären Erkrankungen (437.1), Bluthochdruck-Enzephalopathie (437.2), cerebraler Aneurysmus (437.3), cerebraler Arthritis (472.4) und nicht-eitriger Thrombose bei intracranialem venösen Sinus (437.5)).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das die cerebralen Reparaturmechanismen stimuliert, mit cerebroprotektiver und nootropher Aktivität als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von alkoholischen Psychosen (291) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von Delirium Tremens als Abstinenzsyndrom (291.1);
– Behandlung und Vorbeugung von alkoholischem amnesischen Syndrom (291.1) und andere Alkohol-Demenzerkrankungen (291.2);
– Behandlung und Vorbeugung von pathologischer alkoholischer Vergiftung (291.3);
– Behandlung und Vorbeugung von alkoholischer Paranoia und alkoholischer Psychose von paranoidem Typ (291.5).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das cerebrale Reparaturprozesse stimuliert und mit cerebroprotektiver nootrophischer Aktivität als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von Alkoholismus (303) verwendet.
In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wir das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das toxische Wirkungen von neurotrophen Mitteln unterdrückt und eine cerebroprotektive nootrophische Aktivität aufzeigt, als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von Arzneimittel induzierter Psychose (292) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von Abstinenzsyndrom bei Arzneimitteln (292.0);
– Behandlung und Vorbeugung von Arzneimittel induzierter paranoiden und/oder halluzinatorischen Erkrankungen (292.1);
– Behandlung und Vorbeugung von pathologischen Vergiftungen mit medizinischen Mitteln (292.2);
– Behandlung und Vorbeugung von anderen Arzneimittel induzierten psychischen Erkrankungen (292.8) (Delirium (292.81), Demenz (292.82), amnesischem Syndrom (292.83) und organischem Affektsyndrom (292.84)).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das die toxischen Wirkungen von neurotrophen Mitteln unterdrückt und eine cerebroprotektive Wirkung aufzeigt, als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von Arzneimittelabhängigkeit (304) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung einer Sucht bei opioiden Mitteln (304.1);
– Behandlung und Vorbeugung einer Sucht für Barbiturate, Beruhigungsmittel und Tranquilizer (304.1);
– Behandlung und Vorbeugung von Kokainsucht (304.2);
– Behandlung und Vorbeugung einer Sucht auf Cannabisderivate (304.3);
– Behandlung und Vorbeugung einer Sucht auf Amphetamin- und psychostimulierende Mittel (304.4);
– Behandlung und Vorbeugung einer Sucht für halluzinogene Mittel (304.5);
– Behandlung und Vorbeugung von Drogenmissbrauch ohne Drogensucht (305) (Missbrauch von Alkohol (305.0), Tabak (305.1), Cannabis (305.2), Halluzinogenen (305.3), Opioiden (305.5), Kokain (305.6), psychostimulierende Mittel (305.7), Antidepressiva (305.8)).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wir L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von psychischen Symptomen und Syndromen (306 – 309) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von psychischen physiologischen Beeinträchtigungen (306);
– Behandlung und Vorbeugung von anderen psychischen Symptomen und Syndromen (306) (Stammeln und Sprachfehler (307.0), psychische Anorexie (307.1), Zuckungen (307.2), wiederholter stereotypischer Bewegung (307.3), nicht-organischen Schlaferkrankungen (307.4), psychischen Diäterkrankungen (307.5), Bettnässen (307.7), Psychalgie (307.8));
– Behandlung und Vorbeugung von akuter Stressantwort (308);
– Behandlung und Vorbeugung von Reaktionen durch psychologische Gerichtetheit (309).

In weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrpeptid als Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von nicht-organischen Psychosen (295 – 299) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von Schizophrenie-Erkrankungen (295);
– Behandlung und Vorbeugung von Gemütspsychosen (296);
– Behandlung und Vorbeugung von paranoiden Zuständen (297);
– Behandlung und Vorbeugung von anderen nicht-organischen Psychosen (298) (Psychosen durch Depression (298.1) und Erregung (298.2), reaktive Konfusion (298.2), akute paranoide Reaktion (298.3), psychische paranoide Psychosen (298.4) und nicht-differenzierte Psychosen (298.9), einschließlich Psychosen induziert durch cerebrale Beeinträchtigungen bei AIDS-Patienten (042.9));
– Behandlung und Vorbeugung von infantilen Psychosen (299), einschließlich infatilem Autismus (299.1) und disintegrativen Psychosen (299.2).

In einer weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid als Arzneimittel, das cerebrale Reparaturprozesse stimuliert und eine cerebroprotektive und nootrophe Wirkung aufzeigt, als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen im Falle von anderen cerebralen Erkrankungen (348) verwendet, einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen bei cerebralen Zysten (348.0);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Schädigungen bei Hypoxie (348.1);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen bei intracranialer Hypertension (348.2);
– Behandlung und Vorbeugung von cerebralen Beeinträchtigungen bei Enzephalopathie (348.3).

In weiteren erfindungsgemäßen Ausführungsform wird das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid, das als Arzneimittel cerebrale Reparaturprozesse und Bewegungsaktivität stimuliert, mit cerebroprotektiver und nootrophischer Wirkung verwendet als ein Mittel zur Behandlung und Vorbeugung von Symptomen und Syndromen bei verschiedenen cerebralen Störungen, verwendet einschließlich:

– Behandlung und Vorbeugung von kognitiven Zuständen, Gedächtnis und Aufmerksamkeitsbeeinträchtigungen (z.B. im Falle von amnesischen Erkrankungen, Gedächtnisdefiziten, nicht-organischen Psychosen, usw.);
– Behandlung und Vorbeugung von Aphasie und Apraxie (z.B. im Falle von amnesischen Erkrankungen, nicht-organischen Psychosen, cerebralen Einschränkungen aufgrund chromosomaler Anomalien, usw.);
– Behandlung und Vorbeugung von emotionalen Zuständen (z.B. im Falle von nicht-organischen Psychosen, demyelisierten cerebralen Zuständen usw.);
– Behandlung und Vorbeugung von psychopathologischem Syndrom (z.B. im Falle von vorübergehenden organischen psychotischen Zuständen, drogeninduzierten-Psychosen, Drogenabhängigkeit, usw.);
– Behandlung und Vorbeugung von asthenisch-depressivem Syndrom (z.B. im Falle von nicht-organischen Psychosen, cerebralen Beeinträchtigungen aufgrund chromosomaler Anomalien, usw.);
– Behandlung und Vorbeugung von Deliriumssyndrom (z.B. im Falle von drogeninduzierten Psychosen und Drogensucht, nicht-organischen Psychosen, usw.);
– Behandlung und Vorbeugung von Schlafzuständen (z.B. im Falle von cerebralen Tumoren, vorübergehenden organischen psychotischen Zuständen, usw.);
– Behandlung und Vorbeugung von fokalem cerebralen Syndrom (fokalen pathologischen Symptomen) (z.B. im Falle von cerebralen Beeinträchtigungen aufgrund von Komplikationen bei operativen oder anderen medizinischen Eingriffen, demyelisierenden cerebralen Erkrankungen, usw.);
– Behandlung und Vorbeugung eines Syndroms einer Bewegungserkrankung (z.B. im Falle von cerebralen Tumoren, cerebralen Beeinträchtigungen aufgrund von Vergiftung, usw.).

Die klinische Anwendung des Tetrapeptids L-alanyl-L-glutamyl-L-asparagyl-L-prolin (L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro) bestätigt die experimentellen Daten zur Wirksamkeit dieses Mittels bei Erkrankungen. und Zuständen aufgrund von oder assoziierten Mitteln der Schädigung oder der Verlust von cerebralen Neuronen.
Die unten aufgeführten Beispiele für klinische Tests mit dem Tetrapeptid zeigen die pharmakologischen Eigenschaften davon und bestätigen die Möglichkeit, die Erfindung zu nutzen.
Beispiel 10
Wirksamkeit der Anwendung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid bei Komplikationen bei craniocerebralen Verletzungen
Das Experiment wurde bei 35 Patienten mit Erinnerungsproblemen bei craniocerebraler Verletzung durchgeführt. Sie wurden in 3 Gruppen unterteilt: Eine Kontrollgruppe mit 10 Patienten, Standardbehandlung), eine Untersuchungsgruppe (15 Patienten, Standardbehandlung + 1 μg L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid, intramuskulär verabreicht, täglich über 10 Tage) und eine Vergleichsgruppe (10 Patienten, Standardbehandlung + Cerebrolysin). Die Erinnerungsschwäche der an craniocerebraler Verletzung leidenden Patienten bestand 1 bis 10 Jahre. Eine Dekompensation des posttraumatischen Prozesses trat in allen Patienten auf und wurde manifestiert durch liquordynamischem Zustand, neurozirkulatorischer Dystonie, cerebrofokalen und psychopathologischen Syndromen.
Wirkung einer Behandlung mit L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Aufmerksamkeit der Patienten durch Untersuchung mittels Beweistestdaten vor und nach Behandlung. Eine signifikante Zunahme der Zahl an wiedererkannten Symbolen und eine verringerte Zahl an Fehlern wurde bemerkt, dies zeigt die ver stärkte Aufmerksamkeit und erhöhte Aufmerksamkeitsdauer, gefördert durch die Wirkung des Tetrapeptids (Tabelle 5).
In Patienten, die mit dem Tetrapeptid behandelt wurden, wurde bessere Ergebnisse bei der Analyse der Veränderungen in Beweistest (proof test) vor und nach Therapie erhalten im Vergleich zu den Patienten aus anderen Gruppen. Dies wurde bestätigt durch die Abwesenheit von scharfen Fluktuationen in der Zahl der erkannten Symbole gleiche Zeiträume, im "Anpassungszeitraum" zur Mitte der Aufgabe und in einer graduellen Abnahme der Kurve am Ende der Aufgabe, dies zeigte eine größere Dauer der Aufmerksamkeit nach Behandlung mit dem vorliegenden Mittel auf.
Tabelle 5 Wirkung von L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid auf die Indices der Leistung bei dem Beweistest
Um den Einfluss des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf die cerebrale bioelektrische Aktivität zu untersuchen, wurde ein visuelles EEG- (Elektroenzephalo graphie) Test durchgeführt, mit dessen Verteilung auf die EEG-Arten und der Berechnung des α-Index vor und nach der Behandlung. Der EEG-Test wurde selektiv bei Patienten aus verschiedenen Gruppen, die die deutlichsten Anzeichen der Erkrankung aufzeigten, durchgeführt.
Vor der Behandlung herrschten die pathologischen EEG-Arten (III, IV und V) bei den Patienten in allen Gruppen vor. Die III-rd EEG-Art wurde charakterisiert durch die Abwesenheit eine sogenannten "nicht-dominanten" Kurve, zusammen mit einer niedrigen Amplitudenrate (nicht höher als 30 bis 35 μV), mit ungleichmäßiger oder sogar nicht vorhandener α-Aktivität. Der IV-th EEG-Typ war gekennzeichnet durch eine extrem betonte Rhythmusgleichmäßigkeit und unscharfen Bereichsunterschieden. Der V-th EEG-Typ war gekennzeichnet von einer ungleichmäßigen geringen Akivität (die Amplitude übertraf 35 μV), scharfen Wellen und paroxysmalen Entladungen.
Die deutlichsten Veränderungen in der cerebralen bioelektrischen Aktivität wurde bei Patienten, die mit dem Tetrapeptid behandelt wurden, beobachtet, dieses wurde im EEG vor allem durch eine mehr distinctere Modulierung und die Wiederherstellung der α-Rhythmus zonalen Unterschiede, eines verringerten Auftretens von Reizprozessen und in einigen Fällen Verschwinden paroxysmalen Entladungen deutlich.
Es stellte sich heraus, dass die Behandlung zu einer signifikant erhöhenden Wirkung auf den α-Index der untersuchten Patienten führte. Der Grad der α-Index-Veränderungen in den Patienten mischt sich aber mit den verschieden Therapieansätzen. Die Veränderung des α-Index war signifikant höher als bei Patienten, die mit dem vorliegenden Tetrapeptid behandelt wurden im Vergleich zu den Parametern der anderen Gruppen.
Tabelle 6 Wirkung des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids auf die Variation des α-Index im EEG bei den Patienten
Die erhaltenen Daten zeigen eine signifikante Zunahme des α-Index bei allen untersuchten Gruppen, gleichzeitig eine deutlichere Zunahme dieses Index bei den Patienten, die mit dem Tetrapeptid behandelt wurden.
Der Vergleich der subjektiven Indices des Zustandes der Patienten vor und nach der Behandlung mit dem Tetrapeptid zeigte Verbesserungen des Gedächtnisses und der geistigen Beweglichkeit, Reduktion der Stärke und der Dauer von Kopfschmerzen, Gleichgültigkeit, Aktivität des Willens und Erholung der Nachtruhe bei 71 % der Fälle.
Das heißt die folgenden therapeutischen Wirkungen einer L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid-Verbreichung konnte bei Patienten mit Spätfolgen einer craniocerebralen Verletzung im Zeitraum der posttraumatischen Prozessdekompensation beobachtet werden: Verbesserung der kognitiven Funktionen des Gehirns, des Gedächtnisses und der Aufmerksamkeit, Wiederherstellung der cerebralen bioelektrischen Aktivität.
Beispiel 11
Wirksamkeit des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids bei der Behandlung von vaskulärer Demenz
12 Patienten in einem Alter von 69 bis 76 Jahren (7 Männer und 5 Frauen), die an Bluthochdruckerkrankung und Atherosklerose von cerebralen Gefäßen über einen langen Zeitraum litten, wurden für dies Studie ausgewählt. 3 von diesen hatten in ihrer Krankengeschichte einen Gehirnschlag. Daten, die von ähnlichen Patienten vor der Behandlung erhalten wurden, wurden als Kontrolle verwendet. L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid wurde intramuskulär in einer Einzeldosis von 3 μg einmal täglich über 30 Tage injiziert.
Die Ergebnisse nach Behandlung wurden verglichen mit den Daten erhalten vor der Behandlung. Aufgrund der Untersuchungsergebnisse wurden Veränderungen im Zustand der Patienten gemäß der folgenden Einteilung definiert: Verbesserung (wesentlich, durchschnittlich oder gering), Verschlechterung, keine Veränderung.
Vor der Behandlung wurde in allen Patienten Zeichen von intellektuellen amnesischen Defekten beobachtet: Einschränkungen des Gedächtnis, intellektuelle Einschränkung, Aphasie-, Apraxie- und Agraphiezustände. Bei 9 Patienten wurden Zeichen einer Desorientierung in Ort und Zeit gefunden. Der Gefühlszustand der Patienten war labil, dies zeigte sich in periodischen Veränderungen einer Apathie und Euphorie, Selbstzufriedenheit und einer Neigung sich zu ärgern. Die psychologische Untersuchung zeigte, dass eine deutliche Einschränkungen des Gedächtnisses und der Fähigkeit eine effiziente intellektuell Aktivität, Aphasie, zu zeigen, besteht. Der klinische Zustand verbesserte sich mit den Tagen 4 bis 5. Eine erhöhte Aktivität und Aufmerksamkeit für einige Tätigkeiten wurden bemerkt, die Patienten verblieben weniger im Bett und ihre Gefühlsinstabilität nahm ab. An den Tagen 5 bis 7 normalisierte sich ihr Schlaf, die Müdigkeit bei Arbeiten war reduziert, die Patienten konnten sich besser in ihrer Umgebung orientieren. Die Zeichen einer Amnesie, Aphasie und Apraxie verschwanden. Weiterhin war die Fähigkeit vorherige Ereignisse zu wiederholen verbessert und das Gedächtnis für derzeitige Ereignisse verbesserte sich. Die Veränderungen des Ge fühlszustandes hingen von dem vorherigen Gefühlshintergrund ab. Patienten mit Depression bemerkten Verbesserungen ihrer Stimmung zusammen mit einem erhöhten allgemeinen Tonus und einem besseren somatischen Zustand; apathische Patienten wurden aktiver. Im Falle einer emotionalen Labilität und erhöhter Reizbarkeit wurde der Gefühlszustand der Patienten im Laufe der Behandlung stabiler.
Neuropsychologische uns psychophysiologische Untersuchungen zeigten, dass unter Einfluss des Tetrapeptids ein verbessertes Kurzzeitgedächtnis, eine Fokussierung, eine Erhöhung der Menge der gemerkten Informationen auftrat. Weiterhin zeigten die Patienten eine Verkürzung der Zeit von arithmetische Berechnungen, zusammen mit einer verringerten Zahl an Fehlern. Nach der Behandlung zeigten die Patienten eine signifikante Zunahme in ihrer Aufmerksamkeitsspanne auf und ebenfalls in Parametern komplizierter sensomotorischer Reaktionen mit verbesserter Selektion.
Somit zeigten erste klinische Untersuchungen bei Patienten mit vaskulärer Demenz, dass das L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptid eine signifikante therapeutische Wirkung aufzeigte, da im Laufe der Behandlung mit niedriger Dosierung des Arzneimittels 74,8 % der Patienten eine umgekehrte Entwicklung der pathologischen Symptome aufzeigte.
Die gezeigten Daten zeigen die hohe Wirksamkeit des L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro Tetrapeptids in Fällen einer kognitiven Beeinträchtigung, Gedächtnis- und Aufmerksamkeitserkrankungen, Aphasie, Apraxie und Gefühlserkrankungen bei Patienten mit vaskulärer Demenz.
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Claims

Tetrapeptid L-Alanyl-L-glutamyl-L-aspartyl-L-prolin der allgemeinen Formel L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro.
Tetrapeptid L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro zur Verwendung als aktive pharmazeutische Substanz, insbesondere als Agens, welches die funkionelle Aktivität von Neuronen stimuliert.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend L-Ala-L-Glu-L-Asp-L-Pro als aktiven Wirkstoff sowie gegebenenfalls einen pharmazeutisch annehmbaren Träger und/oder Verdünnungsmittel und/oder Additive.
Die pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass sie Salze der Aminogruppe enthält, vorzugsweise Acetat, Hydrochlorid und/oder Oxalat.
Die pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, dass sie Salze der Carboxylgruppen enthält, vorzugsweiss die Salze von Natrium, Kalium, Kalzium, Lithium, Zink, Magnesium, oder die Salze organischer und anorganischer Kationen, vorzugsweise Ammonium oder Triethylammonium.
Die pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 3 bis 5, angepasst und geeignet für parenterale, intranasale oder orale Verabreichung.