JP4668497B2

JP4668497B2 - 神経の機能的活性を刺激するテトラペプチドに基づく薬剤およびその使用方法

Info

Publication number: JP4668497B2
Application number: JP2001531865A
Authority: JP
Inventors: カービンソン、ウラジミール・カツケレビッチ; モロゾフ、ビアチェスラフ・グリゴリービッチ; マリーニン、ウラジミール・ビクトロビッチ; グリゴリエフ、エフゲニー・イオシフォビッチ
Original assignee: Geropharm Ltd
Current assignee: Geropharm Ltd
Priority date: 1999-10-20
Filing date: 2000-05-25
Publication date: 2011-04-13
Anticipated expiration: 2020-05-25
Also published as: RU2155063C1; WO2001029067A1; JP2003532630A; EP1224212B1; EP1224212A1; US7189701B1; AU784578B2; CA2388357A1; IL149243A0; DE60003837T2; ATE244727T1; DE60003837D1; AU5258500A

Description

【０００１】
【発明の分野】
本発明は医薬品に関し、中枢神経系疾患および損傷における脳の機能的活性を刺激する薬剤として使用することを意図したものである。
【０００２】
【発明の分野】
大脳組織における酸化還元工程を刺激し、グルコース利用を高め、局部的血流を改善する、ピラセタム、アミナロン、ピリジトール、パントガム、オキシブチレートナトリウムなどの幾つかの公知の医薬品が存在する（１）。前記効果は、神経の低酸素に対する抵抗性の向上をもたらす。
【０００３】
前記薬剤の欠点は、それらが向神経性因子の合成を刺激するのみであり、それら自身で任意の向神経活性を持っていないことである（２）。これらの薬剤は、副作用および禁忌がないわけではない。ニューロンの変化における細胞内生合成の可能性はさほどではないので、天然の向神経性因子を導入する方法による再生の刺激がより都合がよく見える。
【０００４】
またセレブロリシン、即ち、遊離アミノ酸および低分子ペプチドを含む非タンパク質脳加水分解物も公知である（３）。前記薬剤は、好気性エネルギー代謝の効率を増加させ、細胞内タンパク質合成を改善し、神経保護および向神経活性を顕在化させ、認識変性の場合に、陽性の効果を発揮する。
【０００５】
前記薬剤の欠点は、その向神経性効果が、天然の向神経性因子の活性に比べて弱いことである。薬物投与によって、障害を受けた脳および脊髄神経における解剖学的構造および機能的活性の顕著な回復は提供されない（４、５、６）。セレブロリシン適用は副作用を伴う。さらに、急性腎不全が前記薬剤の禁忌である可能性がある。
【０００６】
中枢神経系の細胞成分によって合成された低分子タンパク質（１５〜３０ｋＤａ）である向神経性因子、神経成長因子、脳派生向神経性因子、３−、４−および５−ニューロトロフィン、塩基性および酸性神経芽成長因子、表皮成長因子、星状細胞因子−Ｓ−１００タンパク質、リポタンパク質が知られている（７、８）。低用量での、前記薬剤のニューロン培養への導入は、細胞の機能化を提供し、ＲＮＡ、ＤＮＡおよびタンパク質生合成を介した軸索の形成および増殖を可能にする。向神経性因子は、胚形成の間、ニューロンの生存および分化のため、そして成熟細胞の形態学的および機能的特性の保持のための両方で必要である。しかしながら、その有効性が、神経保護活性にのみ限定され、向神経性効果はより遅い段階で現れるということが研究により証明された。中枢神経系での内因性ペプチド基質は、ニューロン内でのシグナルトランスデューサまたはニューロエフェクター伝達物であることが知られており、神経ホルモン、神経伝達物質、または神経調節物質として機能しうる（９、１０、１１）。これらの内因性基質、神経ペプチドは、標的構造が情報としてそれらを認識するように、コミュニケーション神経成分から放出される。神経ペプチドは、修繕処理、記憶、運動活性、痛みおよび圧力の感知などのようなＣＮＳ機能の統合調節の手段であることが明らかになった。
【０００７】
ウシの脳から抽出されたペプチドであり、かつ該ペプチドを分ピルする細胞ポピュレーションの構造的および機能的ホメオスタシスを支持できるコルテキシン（Cortexin）およびエピタラミン（Epithalamin）（分子量１０ｋＤａ）が知られている（１２、１３）
本願は、新規なアミノ配列：Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏによって先行技術の刊行物から区別されるものであり、ニューロンの機能的刺激活性をもった新規なペプチドを得る問題を解決するために創作されたものである。
【０００８】
【発明の開示】
本発明は、ニューロンの機能的活性を刺激することが可能な、ペプチド起源の新規な生物学的に活性な物質を得ることを目的とする。開示されたペプチド化合物、即ちテトラペプチドは、任意の構造類似体を持たない。
【０００９】
本発明に従えば、テトラペプチドであるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリン、即ち、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏが開示される。
【００１０】
本発明に従えば、以下のアミノ配列Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏを有するテトラペプチド、即ち、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリンが生物学的活性を示し、代謝工程正常化、坑酸化防御パラメータの刺激、電気生理学的指数の改善によって中枢および末梢神経系での神経機能的活性を刺激する。
【００１１】
当該テトラペプチドは、溶液中でのペプチド合成の古典的方法により得られる（９）。
【００１２】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの、ニューロンの機能的活性における刺激効果が実験で明らかになった。生物学的活性の研究は、脳での坑酸化防御指数およびセロトニン代謝、並びに毒性および外傷衝撃の場合の脳保護活性を調査するラットにおいて、テトラペプチドの組織特異的効果を研究する神経組織外植片に対して行われた。
【００１３】
本発明に従えば、ニューロン機能的活性を刺激する薬剤は、活性塩基として、有効量の一般式、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリン（Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏ）のテトラペプチドまたはその塩を含む。
【００１４】
本発明に従えば、ニューロン機能的活性を刺激する薬剤は、アミノ基の塩（酢酸塩、塩化水素塩、シュウ酸塩）、またはカルボキシル基の塩（金属−ナトリウム、カリウム、カルシウム、リチウム、亜鉛、マグネシウムの塩、およびアンモニウム、トリエチルアンモニウムのような他の有機および塩基カチオンの塩）を含んでよい。
【００１５】
本発明に従えば、薬剤は好ましくは、非経腸、鼻腔内、または経口投与のために設計される。
【００１６】
ニューロンの機能的活性を刺激する適用された薬剤は、変性した神経組織構造の代謝および増殖を回復させることが可能である。
【００１７】
好ましい実施形態の例を含む本願発明においては、本技術分野で認められる以下の語句用法が使用される。
【００１８】
本明細書中の「薬剤」は、神経組織の構造および機能的完全性を回復するための薬剤として、予防的および／または治療的目的のために医薬品中に適用可能なテトラペプチドまたはその塩を含有する任意の薬物形態の利用を意味する。
【００１９】
本明細書中の「有効量」は、その活性および毒性の定量的指標に従って、また当業者の利用可能な知識に基づいて、所定の薬物形態で効果的であるに違いない量の活性基質の使用を意味する。
【００２０】
本明細書中の「薬学的組成物」は、前記薬剤の異なる薬物形態の使用を意味する。
【００２１】
本発明に従った薬学的組成物を得るためには、適用したテトラペプチドまたはその薬学的に適用可能な誘導体を、活性成分として、好ましくは薬理学で認められたコンパウンド化のための方法に従って、製薬担体と混合する。
【００２２】
担体は、身体への適用、例えば非経腸、鼻腔内、または経口のために望ましい薬剤の剤型に依存した異なる形態のものであり得る。
【００２３】
経口投与のために好ましい剤型での組成物を製造するために、任意の公知の製薬成分を使用できる。
【００２４】
非経腸的（鼻腔内）投与ついては、担体は通常は無菌水を含み、また安定性または不活性に関連して有益な他の成分を含むことも可能である。
【００２５】
本発明に従えば、本方法は、治療的効果を達成するために必要な期間、病理学的工程の性質および重症度に関連して１０から４０日間、１日少なくとも１回、０．０１から１００μｇ／体重ｋｇの用量で、請求項に記載の薬剤の患者への予防的、または治療的投与を包含する。
【００２６】
本発明に従えば、当該テトラペプチドは、０．０１から１００μｇ／体重ｋｇの用量で投与する場合に有効であるが、病理学的工程の性質および重症度に関して、より低い（より高い）用量を使用してもよい。
【００２７】
【産業上の利用性】
本発明は、式Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリン（Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏ）を持つテトラペプチドの合成例（例１）によって、前記テトラペプチドの毒性および生物学的活性に関する試験例（例２、３、４、５、６、７、８、９）によって、またその製薬特性を明らかにし、保護および／または治療的効果を達成する可能性を確かめる、テトラペプチド臨床適用の結果における例（例９および１０）によって例示される。
【００２８】
【実施例】
例１
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの合成
１．産物名：Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリン
２．構造式：Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−ＯＨ
【化１】

【００２９】
３．イオン対を除く全体式：Ｃ_１７Ｈ_２６Ｎ_４Ｏ_９
４．イオン対を除く分子量：４３０．４１
５．イオン対：酢酸塩
６．外観：白色非晶質性無臭粉末
７．合成方法：本ペプチドは、以下の概要に従った、溶液中での古典的合成方法によって得る。
【化２】

【００３０】
Ｚ−ベンジルオキシカルボニル基、
ＢＯＣ−テトラブチルオキシカルボニル基、
ＯＳｕ−Ｎ−オキシスクニミドエステル
ＯＢｚｌ−ベンジルエステル
ＤＣＣ−Ｎ，Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド
ＨＯＢＴ−Ｎ−オキシベンゾトリアゾール。
【００３１】
Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドを溶媒として使用した。アスパラギン酸の導入によって、α−ＣＯＯＨ基を、トリエチルアミンによる塩化によって保護した。ＢＯＣ−保護基をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）溶液にて脱保護し、Ｚ−保護基を触媒加水分解の方法によって脱保護した。産物を抽出し、逆相でのカラム上でのプレパラティブ高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の方法にて精製した。
【００３２】
得られた産物の特性
・アミノ酸アッセイ
ＧｌｕＡｓｐＡｌａＰｒｏ
１．１０１．０１１．００１．１０
・ペプチド含量：９８．５６％（ＨＰＬＣ、２００ｎｍ）
・薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）−単一：Ｒ_ｆ＝０．６７（アセトニトリル−酢酸−水５：１：３）
・含水量：７％
・０．００１％溶液のｐＨ：４．２４
・特定偏光力：［α］_Ｄ ^２５：−７８．９℃（ｃ＝１．０９、Ｈ_２Ｏ）、「ＰｏｌａｍａｔＡ」、ＣａｒｌＺｅｉｓｓＪｅｎａ。
【００３３】
合成の例：
１）ＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ（Ｉ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−（γ−ベンジル）グルタミル−（β−ベンジル）アスパラギン酸塩
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−（γ−ベンジル）グルタミン酸のＮ−オキシスクシミドエステル、ＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＳｕ、４．３４ｇ（０．０１００モル）を、２０ｍＬのジメチルホルムアミド中に溶解し、１．７２ｍＬ（０．０１２５モル）のトリエチルアミン、および２．８０ｇ（０．０１２５モル）のβ−ベンジルアスパラギン酸塩を加える。混合液を室温にて２４時間攪拌する。産物を０．５Ｎ硫酸溶液（１５０ｍＬ）にて沈殿させ、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、０．５Ｎ硫酸溶液（２×２０ｍＬ）、水、５％重炭酸ナトリウム溶液（１×２０ｍＬ）、水、０．５Ｎ硫酸溶液（２×２０ｍＬ）、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させる。酢酸エチルを濾過し、４０℃でｉｎｖａｃｕｏにて除去する。残余物をＰ_２Ｏ_５上でｉｎｖａｃｕｏにて乾燥させる。結果として、５．６８ｇ（〜１００％）の油を得る。
【００３４】
Ｒ_ｆ＝０．４２（ベンゼン−アセトン２：１、Ｓｏｒｂｆｉｌプレート、８〜１２μｍのシリカゲル、展開−ＵＶおよび塩素／クロジジン）
２）ＴＦＡＨ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ（ＩＩ）、トリフルオロ酢酸（γ−ベンジル）−グルタミル−（β−ベンジル）アスパラギン酸塩
５．６８ｇ（＝０．０１モル）のＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−（γ−ベンジル）グルタミル−（β−ベンジル）アスパラギン酸塩（Ｉ）を２０ｍＬのジクロロメタン−トリフルオロ酢酸混合液（３：１）中に溶解する。２時間内に、溶媒を４０℃にてｉｎｖａｃｕｏで除去し、さらにジクロロエタン（２×１０ｍＬ）を添加して除去を繰り返し、残余物をＮａＯＨ上で、ｉｎｖａｃｕｏにて乾燥させる。５．８０ｇ（＝１００％）の油を得る。Ｒ_ｆ＝０．６３（ｎ−ブタノール−ピリジン−酢酸−水、１５：１０：３：１２）。
【００３５】
３）Ｚ−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ（ＩＩＩ）、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアラニル−（γ−ベンジル）グルタミル−（β−ベンジル）アスパラギン酸塩
５．６５ｇ（０．０１モル）の、（γ−ベンジル）グルタミル−（β−ベンジル）アスパラギン酸塩（ＩＩ）のトリフルオロ酢酸塩を、１０ｍＬのジメチルホルムアミド中に溶解し、２．８０ｍＬ（０．０２モル）のトリエチルアミンおよび４．１４ｇ（０．０１３モル）のＮ−ベンジルオキシカルボニルアラニンのＮ−オキシスクシンイミドエステルを加える。混合液を室温にて２４時間攪拌する。産物を０．５Ｎ硫酸溶液（１５０ｍＬ）にて沈殿させ、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、０．５Ｎ硫酸溶液（２×２０ｍＬ）、水、５％重炭酸ナトリウム溶液（１×２０ｍＬ）、水、０．５Ｎ硫酸溶液（２×２０ｍＬ）、水中で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させる。酢酸エチルを濾過し、ｉｎｖａｃｕｏにて４０℃で除去し、残余物を酢酸エチル／ヘキサン系にて結晶化する。産物を濾過し、Ｐ_２Ｏ_５上でｉｎｖａｃｕｏにて乾燥させる。収量は４．１０ｇ（６６％）である。融解点−１５４℃。Ｒ_ｆ＝０．４８（ベンゼン−アセトン、１：１）、Ｒ_ｆ＝０．７２（ｎ−ブタノール−ピリジン−酢酸−水、１５：１０：３：１２）。
【００３６】
４）Ｚ−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｓｐ−（ＯＢｚｌ）−Ｐｒｏ−ＯＨ（ＩＩＩ）、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアラニル−（γ−ベンジル）グルタミル−（β−ベンジル）アスパラチルプロリンのベンジルエーテル
０．７２ｇ（３ｍｍｏｌ）のＨＣｌＨ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ、塩化水素プロリンベンジルエステルを、１５ｍＬのテトラヒドロフラン中に懸濁し、０．４ｍＬ（３ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを攪拌しながら加え、続いて５分間、１．２８ｇ（２ｍｍｏｌ）のＮ−ベンジルオキシカルボニルアラニル−（γ−ベンジル）グルタミル−（β−ベンジル）アスパラギン酸塩（ＩＩＩ）および０．２７ｇ（２ｍｍｏｌ）のＮ−オキシベンゾトリアゾールを加える。混合液を０℃まで冷却する。その後、０℃まで冷却した５ｍＬのテトラヒドロフラン中の、０．４２ｇ（２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミドの溶液を加える。この混合液を０℃にて２時間攪拌し、室温にて一晩、攪拌したままにする。ジクロロへキシル尿素の残余物を濾過して取り除き、溶媒をｉｎｖａｃｕｏにて除去し、残余物を３０ｍＬの酢酸エチル中に溶解する。この溶液を１Ｎ塩化水素酸溶液、水、５％重炭酸ナトリウム溶液、水、１Ｎ塩化水素酸溶液、水中で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させる。溶媒をｉｎｖａｃｕｏにて除去し、酢酸エチル／ヘキサン系中で結晶化する。収量は１．５０ｇ（９０％）である。Ｔ_ｍｌ＝１２５〜１２８℃。Ｒ_ｆ＝０．４０（ベンゼン−アセトン、２：１）。
【００３７】
５）Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−ＯＨ（ＩＶ）、アラニル−グルタミル−アスパラチル−プロリン
１．５０ｇのベンジルエステル（ＩＩＩ）のＮ−ベンジルオキシカルボニルアラニル−（γ−ベンジル）グルタミル−（β−ベンジル）アスパラチルプロリンを、Ｐｄ／Ｃ触媒上でメタノール−水−酢酸系（３：１：１）中で水素添加する。脱保護の進行を、ベンゼン−アセトン（２：１）およびアセトニトリル−酢酸−水（５：１：３）系中のＴＬＣ法にてモニタする。反応の完了後、触媒を濾過して除去し、濾液をｉｎｖａｃｕｏにて除去し、残余物を水／メタノール系中で結晶化する。産物をＫＯＨ上、ｉｎｖａｃｕｏにて乾燥させる。収量は０．６６ｇ（８６％）である。Ｒ_ｆ＝０．６７（アセトニトリル−酢酸−水、５：１：３）。
【００３８】
精製のために、５０８ｍｇの産物を４ｍＬの０．０１％トリフルオロ酢酸（試料ｐＨ−２．２３）中に溶解し、逆相５０×２５０ｍｍＤｉａｓｏｒｂ−１３０−Ｃ１６Ｔ、７μでのカラム上のＨＰＬＣにかける。使用したクロマトグラフはベックマンシステムゴールド、１２６溶媒モジュール、１６８ダイオードアレイ検出モジュールである。クロマトグラフ条件Ａ：０．１％ＴＦＡ、Ｂ：５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配、２４０分間でＢ０→１６％。試料容量は５ｍＬであり、検出は２１５ｎｍにより、スキャニング−１９０〜６００ｎｍ、流速は１０ｍＬ／分である。画分を１２７〜１５５分内で選択する。溶媒を、４０℃を超えないように室温にてｉｎｖａｃｕｏで除去する。除去を１０ｍＬの１０％酢酸溶液にて５回繰り返す。最終的に残余物を２０ｍＬの脱イオン水中に溶解し、凍結乾燥する。結果として、３０３ｍｇの精製産物が、非晶質性無臭白色粉末の形態で得られる。
【００３９】
カルボキシル基の相当する塩を得るために、遊離テトラペプチドに、計算量の相当する水酸化金属の水溶液（ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＺｎＯＨ_２、ＬｉＯＨ、ＣａＯＨ_２、ＭｇＯＨ_２、ＮＨ_４ＯＨ）を加える。トリエチルアンモニウム塩を得るために、処理を、塩基としてトリエチルアミンを用いて同様に実施する。
６）得られた産物の解析
・ペプチド含量は、ＳｕｐｅｌｃｏＬＣ−１８−ＤＢカラム、４．６×２５０ｍｍ、ｇｒａｄ．ＬＣ−１８−ＤＢ、Ａ：０．１％ＴＦＡ、Ｂ：５０％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配３０分間、Ｂ０→２０％上のＨＰＬＣ法によって定義する。２２０ｎｍの検出、スキャニング−１９０〜６００ｎｍ、試料容量は２０μｌ。ペプチド含量−９８．５６％。
【００４０】
・アミノ酸アッセイを、テスターＡＡＡ「Ｔ−３３９」Ｐｒａｇｕｅ上で実施する。加水分解を２４時間以内で１５０℃にて６ＮＨＣｌ中で実施する。
ＧｌｕＡｓｐＡｌａＰｒｏ
１．１０１．０１１．００１．１０
・ＴＬＣ：単一、Ｒ_ｆ＝０．６７（アセトニトリル−酢酸−水５：１：３、Ｓｏｒｂｆｉｌプレート、８〜１２μｍシリカゲル、塩素／ベンジジン中で展開）
・含水量：７％（乾燥による質量欠損に重量測定的に従って、１００℃にて−２０ｍｇ）
・０．００１％溶液のｐＨ：４．２４（電位差滴定）
・特定偏光力：［α］_Ｄ ^２５：−７８．９℃（ｃ＝１．０９、Ｈ_２Ｏ）、「ＰｏｌａｍａｔＡ」、ＣａｒｌＺｅｉｓｓＪｅｎａ。
【００４１】
例２
毒性に関するＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの研究
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの、生物における可能性のある毒性効果を、１９９７年１２月２９日のＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｔａｔｅＣｏｎｔｒｏｌｏｎＭｅｄｉｃｉｎａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＭｅｄｉｃａｌＥｑｕｉｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｕｓｓｉａｎＦｅｄｅｒａｔｉｏｎによって承認された「薬剤の安全性の前臨床判断のルール」に従って研究した。
【００４２】
本研究の目的は、薬剤の許容毒性薬物用量を定義すること、種々の器官および系での病理学的変化の段階および特徴を見積もること、および毒性効果と、薬物適用の用量および期間の間の関係を調査することを考慮している。
【００４３】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの急性毒性を、Ｋｅｒｂｅｒに従って測定した。本研究は、標準の比で、標準の処方計画および給餌下で、飼育所においた、２０から２３ｇの体重の、６６匹の白色アンブレッドオスマウスにて実施した。動物を無作為に、それぞれ１１匹のマウスごと、６等群に分けた。動物に１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ（臨床試験に対して推奨される治療適薬剤の数千倍超過）の用量で、０．２５ｍＬの調製物の単一筋肉内投与を行った。対照動物には同量の生理食塩水を投与した。
【００４４】
７２時間以内およびその後１４日間、いずれの群のマウスも死亡しなかった。一般的状態、振る舞い、運動活性、毛および皮膚外皮、動物の生理学的排出に変化は記録されなかった。
【００４５】
従って、臨床試験で推奨される治療適量の数千倍の用量でのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、任意の急性毒性応答を誘導せず、このことは、本調製物の幅広い治療的適用性を示している。
【００４６】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの亜急性毒性を、体重１５０から２５０ｇの６０匹の白色アンブレッドラットで試験した。実験動物に、筋肉内に１日１回、９０日間毎日、０．１ｍＬの食塩水中１μｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇの用量で本調製品を投与した。対照動物には、同量の生理食塩水を投与した。
【００４７】
研究の全期間内で、動物を日々監視下においた。動物の振る舞い、食事および水消費、毛外皮および粘膜の状態を記録した。動物は週に１回体重計測した。薬物投与の前、および３０日目、６０日目、および９０日目に、動物の末梢血の形態学的組成および性質を試験した。研究の完了時に、生化学的、凝固学的血液指標を調査した。
【００４８】
請求した方法によって得たＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの慢性毒性を、１５０〜２５０ｇの体重のラットへの、それらの長期投与によって調査した。動物に、６ヶ月間、０．５ｍＬの食塩水中１μｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ用量で、薬物を筋肉内に毎日投与した。動物の振る舞い、食事および水消費、毛外皮および粘膜の状態を記録した。動物を実験の最初の３ヶ月間毎日、ついでその後１ヶ月に１回体重測定した。血液学的、および生化学的調査を、薬物投与の開始、および実験の完了の後３ヶ月間実施した。心臓血管系、肝臓、膵臓、腎臓および副腎の機能を査定した。処置完了後、何匹かの動物において、脳および脊髄、心臓、大動脈、肺、肝臓、腎臓、内分泌および免疫器官の異なる区域の状態を見積もる目的で、病理形態学的試験を行った。
【００４９】
動物の一般的状態の査定、末梢血の形態学的および生化学的指数、固有の器官の形態学的状態、心臓血管および呼吸器系の状態、肝臓および腎臓機能は、病理学的変化を示さなかった。
【００５０】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの、亜急性および慢性毒性に関する研究により、治療的用量を１００から１０００倍超過した用量での延長した薬物投与の場合でも何の副作用も存在しないことが示唆された。
【００５１】
例３
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの、大脳皮質外植片の発達における効果
実験を、１０〜１１日齢ニワトリ胚の７３の大脳皮質断片にて実施した。外植片のための培養培地は、３５％イーグル溶液、２５％ウシ胎児血清、３５％ハンクス溶液、５％ニワトリ胚抽出液からなる。培地にはまた、グルコース（０．６％）、インスリン（０．５ＩＵ／ｍＬ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、グルタミン（２ｍＭ）を加えた。大脳皮質断片を、前記培養液中におき、３６．７℃にて２日間、サーモスタット内のペトリディッシュ内で培養した。０．５、１、２、２０、５０、１００、２００、４００、８００、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度でのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドおよびセレブロリシンを実験培地内に加えた。面積指数（ＡＩ）を、生物学的活性の基準として利用し、これは皮質断片の初期領域に対する増殖区域を含む全移植領域の比を反映している。スチューデントのｔ検定を適用し、比較平均ＡＩ値間の有意な差を査定した。ＡＩ値はパーセントにて表した。対照ＡＩ値は１００％と認識した。
【００５２】
対照皮質移植片の増殖領域には、短軸索が含まれ、神経膠細胞は末梢および繊維芽細胞様細胞に移動する。
【００５３】
以下の連続実験を実施し、大脳皮質断片における本薬物の直接の効果を研究した。
【００５４】
種々の濃度でのセレブロリシンを、ニワトリ胚の大脳皮質外植片の培養培地に加えた。培養の３日の時点で、対照ＡＩ値と比較して、１００ｎｇ／ｍＬの濃度で、外植片ＡＩ（３０±２％まで）において有意な増加が起こったことが記録された。他の濃度でのセレブロリシンの適用の場合、皮質外植片の有意なＡＩ値は観察されなかった（図１）。大脳皮質の発達は、２０ｎｇ／ｍＬの濃度でのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドによって著しく刺激された。それによって、実験移植片のＡＩは、対照大脳皮質断片のＡＩと比較して４０±７％まで高かった。
【００５５】
同一の濃度での同一の軸索刺激効果が、皮質外植片の延長（７日間）培養の場合に明らかになった。時折、移植片ＡＩにおける統計学的に有意な減少が観察され、それはおそらく、延長培養の場合、神経繊維のためである。
【００５６】
従って、大脳組織に関して、セレブロリシンに関するものとの比較で、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果的濃度の閾値の減少が記録された。例えば、１００ｎｇ／ｍＬの濃度で、セレブロリシンは培養皮質断片を刺激し、一方で、テトラペプチドは、２０ｎｇ／ｍＬの濃度で刺激し、このことは、大脳皮質ニューロンにおけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドのより注目され、標的化された活性を示している。
【００５７】
例４
大脳皮質での脂質過酸化物酸化反応の強度におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
脂質過酸化物酸化（ＬＰＯ）の強度を、初期ＬＰＯ産物の内容−ジエン共役物（diene conjugate）および最終産物−シフ塩基によって査定した。タンパク質過酸化の程度は、２，４−ジニトロフェニルヒドラジンとのその相互作用の後に、タンパク質中のカルボニル誘導アミノ酸の含量によって見積もった。
【００５８】
本研究は、２０匹のアンブレッドラットにて実施した。１μｇのテトラペプチドを動物に、５日間毎日腹膜内に投与した。
【００５９】
試験したテトラペプチドは、大脳皮質でのＬＰＯ産物の形成を有意に抑制することが明らかになった。テトラペプチド効果の下、ジエン共役物の含量が有意に減少し、シフ塩基は同様に増加する傾向にある。さらに、テトラペプチド適用は、タンパク質過酸化ならびにＬＰＯを阻害した（表１）。
［表１］ラットの大脳皮質での過酸化脂質酸化反応の強度におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
【表１】

【００６０】
＊−対照と比較した場合、Ｐ＜０．０１。
【００６１】
得られたデータは、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの適用が、大脳皮質において、過酸化脂質産物の形成およびタンパク質過酸化を抑制することを示した。
【００６２】
例５
向神経性剤の毒性効果におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
種々の製薬群の向神経性剤の毒性効果におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの活性を調査した。
【００６３】
食塩水（対照）またはＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチド（５μｇ／ｋｇ）の筋肉内注射後１時間で、ラットに毒性量の異なる神経薬剤（アポモルフィン、ハロペリドール、ニコチンおよびカフェイン）を腹膜内に投与した。これにより、垂直（不安）および水平（運動活性）自発的運動活性のパラメータを記録した。
【００６４】
アポモルフィンは、延髄での化学受容トリガー領域の刺激により、嘔吐効果を発揮する。さらにアポモルフィンは、ドーパミンレセプターと相互作用可能であり、脳のドーパミン作用性構造を刺激可能である。実験において、高運動活性、高熱、「精神病」および筋緊張症が観察された。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドはアポモルフィンを中和する（不安および運動活性を減少させる）。
【００６５】
ハロペリドールは、神経弛緩薬に関連し、低い抗アドレナリン活性を示す。実験において、前記薬剤は、低体温、強硬症、「鬱病」、ｍｙｏｐｌｅｇｉａおよび運動活性の減少を引き起こした。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドはハロペリドールの製薬アンタゴニストとして働いた（不安および運動活性を増加させた）。
【００６６】
ニコチンはｎ−コリン作用性活性を持つ。実験において、前記薬剤は、垂直および水平運動活性並びに筋肉緊張を増強した。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、動物の不安におけるニコチン影響を減少させた。
【００６７】
カフェインは、神経刺激剤である。その活性の機構は、ホスホジエステラーゼ活性の抑制およびそれに関連したｃＡＭＰ含量の増加に基づいている。実験において、カフェインは動物内で、高運動活性および化膿ｚｏｏｓｏｃｉａｌ接触を引き起こした。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドはカフェイン誘導不安を低下させたが、運動活性には影響を与えなかった。
【００６８】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの、アドレナリン刺激剤、神経弛緩薬、神経遮断薬および神経刺激薬のような薬剤の毒性効果を抑制する性質が、向神経性中毒の処置で利用できる。
【００６９】
例６
セロトニン代謝におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
研究は、電気的誘導痛みストレスのモデルで構築した。
【００７０】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを、電気的誘導痛みストレスの直前または直後に、５μｇ／ｋｇの用量で、ラットに投与した。１時間内で、セロトニンおよびその代謝物、５−オキシインドール酢酸の含量を、脳の頭頂および後前の領域で測定した。
【００７１】
感情的に誘導された痛みストレスの場合、セロトニンの合成および減衰両方が、これらの工程に続く早い枯渇によって刺激された。特徴における補償、セロトニン代謝の刺激が、痛み衝撃の感情知覚を減少させる。前記機構の本来の「欠点」は、代償不全状態への早期の移行にある。対照（未処理ストレス）において、セロトニンの濃度は低く、一方で５−オキシインドール酢酸の濃度は増加した（代謝枯渇相）。
【００７２】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドのストレス後導入により、脳内のセロトニンの含量が増加し、５−オキシインドール酢酸の含量が減少した。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドのストレス前投与も同様の効果を促進したが、しかし、ほんのわずかであった。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、未処理の動物内で、セロトニンおよびその代謝物の濃度に任意の変化を誘導しなかった。
【００７３】
従って、電気的誘導痛みストレスの直後の、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの導入は、脳内の、セロトニンおよびその代謝物、５−オキシインドール酢酸の含量を正常化した。
【００７４】
例７
電気痙攣ショックおよびエタノール中毒の健忘症衝撃の場合の、記憶および学習指数におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドのｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を、未処理の動物での受容回避の条件反射（ＣＲＰＡ）の適用を用いて、健忘症衝撃（電気痙攣ショックおよびエタノール中毒）の条件下で研究した。
【００７５】
実験は、体重２０から２４ｇのオスマウスで実施した。各動物に対し、暗チャンバおよび照光チャンバ部分にいる時間を、２分間記録した。照光部分の滞在時間が４０秒間を越えない動物のみを実験群に加えた。動物を、好ましい暗所部分で電気的痛み刺激を適用して、これを動物が去るまで行ってしつけた。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドをしつけの６０分前に、腹膜内に注入した。試験をしつけの後２および２４時間で実施した。動物が暗所および照光チャンバ部分にいた時間、および暗所部分に入らなかった動物（「学習した」動物）の数を記録した。
【００７６】
電気痙攣ショック（ＥＣＳ）をマウスに、２５ｍＡの電気インパルスにて、角膜電極を介して、しつけの後１０秒以内に、０．５秒間で導入した。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを、しつけの６０分前に腹膜内に導入した。試験をしつけの２４時間後に実施した。
【００７７】
エタノールを、１０％溶液の形態で、１３日間マウスに経口で投与した。しつけを２回、エタノール投与の第１４日目、および最初のしつけ後２４時間で行った。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを、しつけの３０分前に腹膜内に投与した。試験を第一および第二しつけセッションの後、２および２４時間で行った。本研究の結果を表２〜４に示している。
［表２］未処理白色マウスでのＣＲＰＡの形成におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
【表２】

【００７８】
［表３］ＥＣＳ−誘導健忘症衝撃に対するマウス対象でのＣＲＰＡの形成におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
【表３】

【００７９】
＊−対照指数との比較において、Ｐ＜０．００１
［表４］エタノール誘導健忘症衝撃に対するマウス対象でのＣＲＰＡの形成におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
【表４】

【００８０】
＊−対照指数との比較において、Ｐ＜０．００１
注：１−しつけ後２時間
２−しつけ後２４時間
３−繰り返ししつけ後２時間
４−繰り返ししつけ後２４時間
得られたデータは、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドが、未処理動物でのＣＲＰＡの形成に影響を与えないことを示している。しかしながら、本剤は、健忘症衝撃の場合の、記憶および学習の指数を改善し、このことは試験した薬剤のｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性、およびそのＥＣＳおよびエタノールの健忘性効果を抑制する能力を示唆している。
【００８１】
例８
頭蓋外傷後の脳での修復工程におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
脳の修復工程におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果を、急性重症頭蓋外傷のモデルで査定した。ＣＮＳ機能修復の力学を、動物の運動および筋肉緊張の協調における、ならびに学習および条件反射スキルの再生に対するその能力における試験によって定義した。
【００８２】
ラットにおける重症頭蓋圧迫を鉛のおもりの落下によって引き起こした。１、１２、４８および９６時間で、実験動物に、筋肉内にＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを注射した。第二群の動物にはセレブロリシンを与えた。
【００８３】
学習およびスキル再生に関する能力を、受容回避の条件反射（ＣＲＡＡ）における試験によって見積もった。筋肉緊張および運動の協調を見積もるために、ラットを速度を上げながらピボット上で回転させた。同時に、保持時間を測定した。
【００８４】
４８時間に、すべての生存動物はしつけに対するその能力を欠失していた。９６時間に、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドで処理したラットのうちのしつけが可能な動物の数は、対照における数よりも２倍であった。３０日において、テトラペプチド注入ラットでの学習指数はまた、対照での指数に比べて高かった。
【００８５】
重症頭蓋外傷は、動物における明白な無力神経症候群を伴い、その協調および筋肉緊張を減少させる。「回転ピボット」の方法による試験は、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドが、外傷の４８時間後、運動協調および筋肉緊張の再生を促進することを示した（ピボットの保持時間は対照での時間より２倍長い）。
【００８６】
重症頭蓋圧迫の場合、セレブロリシンは、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドよりも効果が小さかった。
【００８７】
従って、研究した薬剤の適用は、学習および条件反射スキル再生に対する動物の能力を有意に改善し、またその運動と筋肉緊張の協調を回復させた。本薬物の都合のよい効果が、外傷後第４日目にすでに観察された。第１３日目までに、学習の指標が正常値に近づいた。
【００８８】
急性重症頭蓋外傷の場合、脳の灰白質中のニューロンの集団が障害を受け、破壊される。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果による、早期外傷後期間でのＣＮＳ機能の回復の加速は、本テトラペプチドが脳での修繕工程を刺激することを証明した。
【００８９】
例９
圧迫末梢神経の再生におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
研究を、２５から３０ｇの体重の、２２匹の白色アンブレッドオスマウスで実施した（７匹実験、１５匹対照動物）。
【００９０】
研究の第一段階にて、マウスを、腓側神経を圧迫するために慢性的に手術を施した。ネンブタール麻酔マウス（６０ｍｇ／ｋｇ、腹膜内）での腓側神経（ｎ．ｐｅｒｏｎｅｕｓｃｏｍｍｕｎｕｓ）を、刺激筋肉−長デジタル伸筋（ｍ．ｅｘｔｅｎｄｏｒｄｉｇｉｔｏｒｕｍｌｏｎｇｕｓ−ＥＤＬ）から８〜９ｍｍの距離で圧迫した。動物を左後ろ足を手術したが、一方で右足の相当する神経および筋肉はそのままであり、これをさらに未処理対照として使用した。
【００９１】
その後、神経圧迫の３日後から、マウスに、８日間毎日、１０μｇ／ｋｇの用量で、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを腹膜内に注射した。対照マウスは等量の生理食塩水で処理した。
【００９２】
神経圧迫手術１１日後（および最終テトラペプチド注射後２４時間以内）に、ネンブタール麻酔マウス（６０ｍｇ／ｋｇ）で、ｉｎｖｉｖｏにて、すでに発生した神経および再刺激した骨格筋繊維（ＥＤＬ）の異なる機能的パラメータに関する電気生理学的試験を実施した。
【００９３】
得られたデータは、実験動物において、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドが、興奮性閾値の回復を高め、神経圧迫後第１１日目までに再生神経筋肉系に対する「強度−期間」曲線での相当する変化を促進したことを示唆している（図２）。図２は、神経幹に適用した刺激の強度−期間曲線におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果を示している。注：
ａ−曲線形態に関する係数（双曲線）
ｂ−Ｙ軸にそった強度−期間曲線移動に関する係数、
ａおよびｂパラメータは、神経電気的興奮およびその興奮閾値の特徴を表している。
【００９４】
このことは、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの導入が、明らかに、そして相当（３０〜５０％まで）、再生神経の主要な機能指標の１つ−再生神経の電気的閾値を改善し、従って、正常値へのその回復の時間を早めていることを意味している。
【００９５】
Ｍ応答の潜在的時間が、テトラペプチド導入後、末梢「神経−筋肉」系で有意に変化した他の指標であることがわかった。筋肉Ｍ応答は、運動神経過敏に対する応答で記録された集約電気応答（筋肉活性の総電位）である。潜在Ｍ応答期間の短縮は、再生神経（および筋肉）（５９％まで）と比較して、もともとの神経筋肉系（８９％まで）で明らかであることに注目すべきである。潜在的Ｍ応答期間は、軸索を介した刺激伝導率、その良好な筋肉内分岐、ならびに末梢運動シナプスでのシナプス伝達率を示している積分パラメータである。Ｍ応答の潜在的期間におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果が、もともとの神経および筋肉でより大きいので、テトラペプチド活性のこの特定の特徴は、神経および筋肉再生工程に直接的に関わっているのではなく、むしろ末梢興奮性構造（神経繊維、末端部位、シナプスなど）に影響を与え、末梢神経筋肉系での刺激伝達を促進する本剤の能力を示しているように見える。
【００９６】
マウスでのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの導入と共に、筋肉繊維の表面上での神経除去の後に保存された残余非シナプス性コリン受容によって引き起こされる、アセチルコリン筋肉収縮率を減少させる傾向が発見された（図３）。アセチルコリン筋肉収縮は、言い換えれば主として運動ニューロンからの、筋肉における向神経性影響の発現程度に関するよく知られた指標である、非シナプス性コリン受容で仲介されることが知られている。それによって、テトラペプチド導入のバックグラウンドに対して、アセチルコリン筋肉収縮を有意に抑制する傾向は、本薬剤によって増強された筋肉繊維のコリン受容における向神経性運動ニューロン作用の結果として、または筋肉繊維模倣向神経性運動ニューロン活性におけるテトラペプチドそれ自身の直接の向神経性効果の示唆として見なされうる。
【００９７】
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの適用は、圧迫の後の神経再生での種々の重要な機能指標の回復を早めた。その上、テトラペプチドは、神経および筋肉両方での再生を刺激し、本来の「健康な」運動単位に対して特徴的な状態にまで近づけた。
【００９８】
従って、実施した実験の後に、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドが非毒性であり、顕著な脳保護活性、代謝活性および高い向神経活性において明らかである脳ニューロンの活性を刺激できることがわかった。
【００９９】
実験的前臨床試験でわかったＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの特性により、このＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを種々の脳疾患での治療的および予防的適用に推奨することが可能である。疾患およびそのコードのリストを、疾患国際分類ＩＣＤ−９−ＣＭ（１４）に準拠して以下に示している。
【０１００】
本発明の１つの実施形態において、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、脳再生工程を刺激し、脳保護活性を表している薬物として利用でき、
・頭蓋円蓋部（１５００）、頭蓋底（８０１）の骨折、多重骨折（８０４）後の脳損傷の治療を含む、外傷に関連した脳損傷（８００〜９５９）の治療および予防、
・頭蓋内外傷（８５０〜８５４）（外傷後脳震とう（８５０）、脳損傷および挫傷（８５１）、くも膜下、硬膜下、および硬膜外出血（８５２））の場合の脳損傷の治療、
・外傷性ショック（９５８．４）の治療および予防、
・照射（９９０）、低温（９９１）、熱および光（９９２）、気圧（９９３）、電気的および超高周波数電流の衝撃に関連した脳損傷の治療、
・頭蓋骨骨折（９０５．０）の遅延兆候影響の治療および処置、
・頭蓋内外傷（９０７．０）の遅延兆候影響の治療および処置、
・照射によって誘導された遅延兆候脳障害（９０９．２）、手術および他の医学的介入の後の合併症（９０９．３）の処置および予防、
のための薬剤として利用できる。
【０１０１】
本発明の他の実施形態において、向神経性薬剤の毒性効果を抑制し、脳修復工程を刺激し、脳保護活性を示している薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを、以下の
・治療的薬剤、医学的および生物学的化合物で毒された後の脳障害の治療（９６０〜９７９）、
・非医学的由来の薬剤での脳障害の治療（９８０〜９８９）、
・薬物（９０９．０）および非医学的基質（９０９．１）で毒すことによって誘導された遅延兆候脳障害の治療および予防、
を含む毒した後の脳損傷（９６０〜９９９）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１０２】
本発明の他の実施形態において、ｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を伴って脳修復工程を刺激する薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・小児脳変性疾患（３３０）の治療および予防、
・アルツハイマー病（３３１．０）、ピック病（３３１．１）、老年性脳変性（３３１．２）および水頭症（３３１．３〜３３１．４）の治療および予防、
・パーキンソン病（３３２）および他の錐体外路系疾患（３３３）（脳幹神経節の変性疾患（３３３．０）、本態性振せん（３３３．１）、ミオクローヌス（３３３．２）、器官由来チック（３３３．３）、ハンティングトン（遺伝）舞踏病（３３３．４）、および他の型の舞踏病、ねじれ失調症（３３３．６〜３３３．８）の治療および予防、
・脊髄−小脳疾患（フレドリック運動失調（３３４．０）、遺伝痙性対麻痺（３３４．１）および他の疾患での小脳運動失調（３３４．４））の治療および予防、
を含む大脳変性疾患（３３０〜３３７）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１０３】
本発明の他の実施形態において、脳修復工程を刺激する、ｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を持つ薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・アルツハイマー病（３３１．０）、ヤコブ−クロイツフェルト病（０４６．０）、およびピック病（３３１．１）の併発を含む老年痴呆（２９０．１）の治療および予防、
・非併発老年痴呆（２９０．１）の治療および予防、
・うつジノせん妄を伴う老年痴呆（２９０．２）の治療および予防、
・せん妄を伴う老年痴呆（２９０．３）の治療および予防、
・アテローム性動脈硬化症痴呆（２９０．４）の治療および予防、
を含む痴呆および前痴呆器官精神病疾患（２９０）の治療および予防のための薬物として使用される。
【０１０４】
本発明の他の実施形態において、脳修復工程を刺激する、ｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を持つ薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・非アルコール性コルサコフ精神病（２９４．０）の治療および予防、
・種々の疾患の場合の痴呆（２９４．１）（ＨＩＶ感染患者での痴呆（ＨＩＶ−脳障害）、脳リピドーシス（３３０．１）、てんかん（３４５．０〜３４５．９）、梅毒（０４９．１）、肝レンズ核変性症（２７５．１）、ハンティングトン（遺伝）舞踏病（３３３．４）、多発性硬化症（３４０）および結節性動脈周囲炎（４４６．０））の治療および予防、
・ＡＩＤＳ脳傷害（０４２．９）を含む慢性非分化器質性脳傷害（２９４．９）の症状の治療および予防、
を含む、健忘症疾患（２９４．０）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１０５】
本発明の他の実施形態において、脳保護活性を伴う脳修復工程を刺激する薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、多発性硬化症（３４０）および他の脱髄性大脳疾患の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１０６】
本発明の他の実施形態において、大脳修復工程を刺激する、ｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を伴う薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、精神遅滞（３１７〜３１９）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１０７】
本発明の他の実施形態において、脳修復工程および運動活性を刺激する薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・片麻痺（３４２）の治療および予防、
・乳児脳性麻痺（３４３）の治療および予防、
・他の麻痺性症候群（３４４）（四肢麻痺（３４４．０）、対麻痺（３４４．１）、上肢の両麻痺（３４４．２）、下肢の単麻痺（３４４．３〜３４４．４））の治療および予防、
を含む麻痺性疾患（３４２〜３４４）の治療および処置のための薬剤として使用される。
【０１０８】
本発明の他の実施形態において、脳保護活性を伴う、脳修復工程を刺激する薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、ダウン症候群を含むクロモソーム異常（７５８）の場合の脳障害の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１０９】
本発明の他の実施形態において、脳保護活性を伴う脳修復工程を刺激する薬物としてののＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・ＡＩＤＳ患者でのクリプトコックス髄膜炎を含む細菌性髄膜炎（３２０）の場合の脳障害の治療および予防、
・非細菌性髄膜炎（３２１）の場合の脳障害の治療および予防、
・不正確な起源の髄膜炎（３２２）の場合の脳障害の治療および予防、
・ＡＩＤＳ患者での脳トキソプラソマ症を含む、脳炎、脊髄炎および脳脊髄炎（３２３）の場合の脳障害の治療および予防、
・頭蓋内膿瘍（３２４）の場合の脳障害の治療および予防、
・頭蓋内静脈洞の静脈炎および血栓性静脈炎（３２５）の場合の脳障害の治療および予防、
・頭蓋内膿瘍または化膿性感染（３２６）の後の後遺症の治療および予防、
を含む炎症性脳疾患（３２０〜３２６）の場合の脳障害の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１０】
本発明の他の実施形態において、脳保護およびｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を伴う脳修復工程を刺激する薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・くも膜下出血（４３０）の場合の脳障害の治療および予防、
・脳出血（４３１）の場合の脳障害の治療および予防、
・頸動脈の閉塞および狭窄（４３３）の場合の脳障害の治療および予防、
・大脳動脈の閉塞（４３４）の場合の脳障害の治療および予防、
・一時的脳虚血（４３５）の場合の脳障害の治療および予防、
・他の脳血管障害（急性脳血管障害（４３６）、脳アテローム性動脈硬化症（４３７．０）および他の一般的な脳血管障害（４３７．１）、高血圧エンセファロパシー（４３７．２）、脳動脈瘤（４３７．３）、脳動脈炎（４７２．４）および頭蓋内静脈洞の非化膿性血栓症（４３７．６））の場合の脳障害の治療および予防、
を含む脳血管疾患（４３０〜４３８）の場合の脳障害の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１１】
本発明の他の実施形態において、脳修復工程を刺激し、脳保護およびｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を持つ薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・禁断症状群の振せんせん妄（２９１．１）の治療および予防、
・アルコール性健忘症（２９１．１）および他のアルコール性痴呆疾患（２９１．２）の治療および予防、
・病的アルコール性中毒（２９１．３）の治療および予防、
・アルコール性パラノイアおよび妄想型のアルコール性精神病（２９１．５）の治療および予防、
を含むアルコール性精神病（２９１）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１２】
本発明の他の実施形態において、脳修復工程を刺激し、脳保護およびｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を持つ薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、アルコール中毒（３０３）の場合の脳障害の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１３】
本発明の他の実施形態において、向神経性剤の毒性効果を抑制し、脳保護およびｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を持つ薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・薬物禁断症状群（２９２．０）の治療および予防、
・薬物誘導妄想および／または幻覚性神経痛疾患（２９２．１）の治療および予防、
・医薬品での病的中毒（２９２．２）の治療および予防、
・他の薬物誘導精神疾患（２９２．８）（せん妄（２９２．８１）、痴呆（２９２．８２）、健忘症候群（２９２．８３）および器質性感情症候群（２９２．８４））の治療および予防、を含む薬物誘導精神病（２９２）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１４】
本発明の他の実施形態において、向神経性剤の毒性効果を抑制し、脳保護活性を持つ薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・オピオイド剤に対する嗜癖（３０４．１）の治療および予防、
・バルビツレート、鎮痛剤、およびトランキライザに対する嗜癖（３０４．１）の治療および予防、
・コカイン嗜癖（３０４．２）の治療および予防、
・大麻誘導体に対する嗜癖（３０４．３）の治療および予防、
・アンフェタミンおよび精神刺激薬に対する嗜癖（３０４．４）の治療および予防、
・幻覚誘発剤に対する嗜癖（３０４．５）の治療および予防、
・薬物嗜癖なしの薬物乱用（３０５）（アルコール（３０５．０）、タバコ（３０５．１）、大麻（３０５．２）、幻覚剤（３０５．３）、オピオイド（３０５．５）、コカイン（３０５．６）、精神刺激薬（３０５．７）、抗うつ剤（３０５．８）の乱用）による脳障害の治療および予防、
を含む薬物嗜癖（３０４）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１５】
本発明の他の実施形態において、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・精神性生理学的障害（３０６）の治療および予防、
・他の精神性症状および症候群（３０６）（構音障害および言語障害（３０７．０）、精神性食欲不振（３０７．１）、チック（３０７．２）、ステレオタイプ運動の繰り返し（３０７．３）、非器質性睡眠障害（３０７．４）、精神性食事障害（３０７．５）、遺尿症（３０７．７）、精神疼痛（３０７．８））の治療および予防、
・急性ストレス応答（３０８）の治療および予防、
・心理学的傾向（３０９）によって誘導された応答の治療および予防、
を含む精神性症状および症候群（３０６〜３０９）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１６】
本発明の他の実施形態において、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・分裂病疾病（２９５）の治療および予防、
・情動精神病（２９６）の治療および予防、
・妄想状態（２９７）の治療および予防、
・他の非器質性精神病（２９８）（うつ（２９８．１）および激越性うつ病（２９８．２）の精神病、反応性錯乱（２９８．２）、急性妄想応答（２９８．３）、精神性妄想精神病（２９８．４）およびＡＩＤＳ患者での脳障害によって誘導された精神病（０４２．９）を含む非分裂精神病（２９８．９））の治療および予防、
・幼児自閉症（２９９．１）および崩壊精神病（２９９．２）を含む幼児精神病（２９９）の治療および予防、
を含む非器質性精神病（２９５〜２９９）の治療および予防のための薬剤として使用される。
【０１１７】
本発明の他の実施形態において、大脳修復工程を刺激し、脳保護およびｎｏｏｔｒｏｐｉｃ活性を持つ薬物としてのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・脳嚢腫（３４８．０）の場合の脳障害の治療および予防、
・低酸素脳傷害（３４８．１）の治療および予防、
・頭蓋内高血圧（３４８．２）の場合の脳障害の治療および予防、
・エンセファロパシー（３４８．３）の場合の脳障害の治療および予防、
を含む他の脳疾患（３４８）の場合の脳障害の治療および予防のための薬物として使用される。
【０１１８】
本発明の他の実施形態において、大脳修復工程および運動活性を刺激し、脳保護およびｎｏｏｔｒｏｐｉｃ効果を持つ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドは、以下の、
・認識障害、記憶および注意障害（例えば、健忘疾患、精神遅滞、非器質性精神病などの場合）の治療および予防、
・失語症および失行症（例えば、健忘疾患、精神遅滞、クロモソーム異常による大脳障害の場合）の治療および予防、
・感情障害（例えば、精神遅滞、脱髄性大脳疾患などの場合）の治療および予防、
・生理病理学的症候群（例えば伝統的な器質性精神病性状態、薬物誘導精神病、薬物嗜癖などの場合）の治療および予防、
・無力うつ症状（例えば、非器質性精神病、クロモソーム異常による大脳障害などの場合）の治療および予防、
・せん妄症候群（例えば、薬物誘導精神病および薬物嗜癖、非基質性精神病などの場合）の治療および予防、
・睡眠疾患（例えば、大脳腫瘍、伝統的な器質性精神病状態などの場合の）治療および予防
・大脳−限局性症候群（限局性病的症状）（例えば、手術または他の医学的介入の合併症、脱髄性大脳疾患などの場合）の治療および予防、
・運動疾患（例えば大脳腫瘍、毒化による大脳障害などの場合）の症状の治療および予防、
を含む種々の大脳疾患の場合の症状および症候群の予防および治療のための薬剤として使用される。
【０１１９】
テトラペプチド、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタルニル−Ｌ−アスパラギル−Ｌ−プロリン（Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏ）の臨床適用は、大脳ニューロンの障害または欠失によって引き起こされたか、またはそれらに関連する疾患および疾病での前記薬剤の効果における、実験的データを追認した。
【０１２０】
提案されたテトラペプチドにおける臨床試験の以下に列記した例は、その製薬特性を示しており、本発明を実行する可能性を支持している。
【０１２１】
例１０
頭蓋脳障害合併症の場合の、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
試験を、頭蓋脳障害の遠隔合併症の３５人の患者で実施した。彼らを３つの群に分類した。対照群（１０人の患者−標準処置）、試験下群（１５人の患者−標準処置＋１μｇのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチド、１０日間毎日腹膜内）および比較群（１０人の患者−標準の処置＋セレブロリシン）。患者における被った頭蓋脳障害の遠隔性が１〜１０年間で構成される。外傷後処理の代償不全がすべての患者で起こり、流体力学的疾患、神経循環失調、大脳焦点および生理病理学的症候群にて顕著であった。
【０１２２】
患者の注意におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドでの処理の効果を治、療の前後の検定試験データによって査定した。調査した印の数の有意な増加および間違えの数の減少が見られ、このことは、注意の増強、およびテトラペプチド活性によって促進された注意の復元力の増加を示していた。
【０１２３】
テトラペプチドで処置した患者において、治療の前後での検定試験における変化の解析において、他の群の患者と比べて、よりよい結果が得られた。このことは、タスク実行の中間時点での「順応」期間、およびタスクの終わりによる曲線の穏やかな減衰における、等期間中、観察された兆候の数（reviewed symbol）における鋭い変化がない場合に明らかになる。このことは、本薬剤での処置の後の注意のより大きな安定性を示していた。
［表５］検定試験性能の指標におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
【表５】

【０１２４】
＊−従来の処置の結果と比較して、Ｐ＜０．０５
大脳生態電活性におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの影響を査定するために、可視ＥＥＧ（脳波）を、処置の前後でのα−指標の型および計算におけるその分布にて実施した。ＥＥＧ試験は、疾患の最も顕著な兆候を示している異なる群の患者で選択的に実施した。
【０１２５】
処置の前に、ＥＥＧの患者病理学的型（ＩＩＩ、ＩＶおよびＶ）が、すべての群で明らかになった。第ＩＩＩ型ＥＥＧは、低振幅速度（３０〜３５μＶ以上ではない）と並んで、いわゆる「非優性」曲線の存在、不規則またはまたはα−活性がないことによっても、特徴づけられた。第ＩＶ型ＥＥＧは、極度に協調されたリズム調和と不鮮明な帯差異によって特徴づけられた、第ＶｇたＥＥＧは、不規則なゆっくりした活性（３５μＶを超える増幅）、鋭い波および発作波を示した。
【０１２６】
大脳生態電活性における最もはっきりとした変化は、主に、αリズム帯差のよりはっきりとした調節および回復、刺激性工程の発現の減少、いくつかの場合、発作波の消滅によってＥＥＧにて明らかであった、テトラペプチドによって処置した患者で現れた。
【０１２７】
処置は、研究した患者でのα指数における有意な増加効果を持っていることがわかった。しかしながら、異なる治療方法での患者におけるα指数の変化の程度は、異なった。α指数変化は、他の群のパラメータと比較して、本テトラペプチドで処理した患者で有意に高かった。
［表６］患者でのα指数ＥＥＧ変化におけるＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
【表６】

【０１２８】
＊−健康ボランティアでの指数と比較して、Ｐ＜０．０５
＊−処置前の指数と比較して、Ｐ＜０．０５
得られたデータは、すべての研究群での、α指数の有意な増加を示しており、同時に、テトラペプチドで処置した患者で前記指数がより多量に増加していることを示唆している。
【０１２９】
テトラペプチドでの処置の前後の患者の状態の主観的指数の比較により、記憶と精神敏捷性改善、頭痛の強度および期間の減少、情緒平静が、この場合の７１％で、夜間休息の後に活性化および回復する可能性があることが示された。
【０１３０】
従って、以下は、外傷後工程代償不全の期間の頭蓋障害の最終ｓｅｑｕａｌａｅの患者での、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチド投与後の治療的効果である。脳の認識機構の改善、記憶および注意、大脳生態電活性の回復。
【０１３１】
例１１
血管性痴呆の治療でのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの効果
長期間、高血圧疾患および大脳血管のアテローム性動脈硬化症を患っている、年齢６９から７６歳の１２人の患者（７人の男性および５人の女性）を研究に登録した。そのうち３人が、医療歴で卒中をおこしていた。治療の前に同様の患者で得られた初期データを対照として使用した。Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドを３０日間毎日１回、３μｇの単一用量で筋肉内に注射した。
【０１３２】
結果を、治療の前に得たデータと比較して、治療の後に査定した。実験結果に基づくと、患者の状態の変化は、以下の段階変化で定義される。改善（相当、平均的または小）、悪化、変化なし。
【０１３３】
知的記憶欠陥の前治療実験兆候がすべての患者で見られた。記憶障害、知的悪化、失語症、失行症、および失書症疾患。９人の患者で、時間および場所の見当識障害の兆候が見られた。患者の情緒状態は不安定であり、無関心、多幸感、無頓着および怒り傾向を明らかに示した。心理学的試験は、記憶の顕著な障害および、効率的な知的活性能力、失語症が存在することを示した。
【０１３４】
臨床状態は４〜５日目で改善した。いくつかの活動に関する活性および意図の改善が見られ、患者はベッドにいることが少なくなり、患者の情緒不安定性は減少した。５〜７日目に、患者の睡眠は平常化し、実行時の疲労が減少し、患者は環境によりよく順応した。失語症、失行症、失書症の兆候は減衰した。さらに、患者の、先の経験の再生、および現在の事象に対する記憶が改善した。情緒状態は、患者の先の情緒背景に依存して変化した。うつの患者は、一般緊張の増加およびよりよい身体状態を伴って、気分の改善が見られ、無欲患者はより活発になった。情緒不安定性および被刺激性増加の場合、患者の情緒状態は、治療の経過の中でより安定した。
【０１３５】
神経心理学、心理生理学的実験により、テトラペプチドの活性下、短期記憶、焦点合わせの改善、記憶情報量の増加が見られたことが示された。さらに、ミスの数の減少を伴って、算術計算の時間の短縮を示した。治療の後、患者は有意な注意期間の増加を示し、また選別での複雑な感覚運動反応が改善した。
従って、低薬物用量での適用処置の最中、患者の７４．８％が病理学的症状の逆行進展を示したので、血管性痴呆の患者でのＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの予備臨床試験によって、本調製物の有意な治療的効果が示された。
【０１３６】
示されたデータは、血管性痴呆の患者での認識障害、記憶および注意疾患、失語症、失行症および情緒障害の場合のＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドの高い有効性を示している。
【参照文献】

【０１３７】
【図面の簡単な説明】
【図１】種々の濃度でのセレブロリシンまたは本発明のテトラペプチドをニワトリ胚の大脳皮質外植片の培養培地に加えて培養したときのの、培養３日の時点での結果を示すグラフである。
【図２】図２は、神経幹に適用した刺激の強度−期間曲線における本発明のテトラペプチドの効果を示すグラフである。
【図３】本発明のテトラペプチドの導入がマウスのアセチルコリン筋肉収縮率を減少させる効果を示すグラフである。

Claims

一般式Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−ＰｒｏであらわされるテトラペプチドＬ−アラニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリン。
ニューロンの機能的活性刺激剤としての、一般式Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−ＰｒｏであらわされるテトラペプチドＬ−アラニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリン。
活性塩基および薬学的に許容可能なキャリアを含有する、ニューロンの機能的活性を刺激する薬理学的薬剤であって、活性塩基として有効量のＬ−Ａｌａ−ＬＧｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする薬剤。
請求項３に記載の薬剤であって、アミノ基の塩を含有することを特徴とする薬剤。
請求項４に記載の薬剤であって、前記アミノ基の塩は、酢酸塩、塩酸塩または蓚酸塩であることを特徴とする薬剤。
請求項３に記載の薬剤であって、カルボキシル基の塩を含有することを特徴とする薬剤。
請求項６に記載の薬剤であって、前記カルボキシル基の塩が、ナトリウム塩、カルシウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、または有機陽イオンもしくは無機陽イオンの塩であることを特徴とする薬剤。
請求項７に記載の薬剤であって、前記有機陽イオンもしくは無機陽イオンの塩が、アンモニウム塩またはトリエチルアンモニウム塩であることを特徴とする薬剤。
請求項３に記載の薬剤であって、非経腸的投与が意図されることを特徴とする薬剤。
請求項３に記載の薬剤であって、鼻腔内投与が意図されることを特徴とする薬剤。
請求項３に記載の薬剤であって、経口投与が意図されることを特徴とする薬剤。
Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏテトラペプチド、またはアミノ基のその塩、またはカルボキシル基のその塩の使用であって、ニューロンの機能的活性の刺激を必要とする疾患および病理学的状態を治療する薬剤の製造のための使用。
請求項１２に記載の使用であって、前記アミノ基の塩が酢酸塩、塩酸塩、または蓚酸塩であることを特徴とする使用。
請求項１２に記載の使用であって、前記カルボキシル基の塩がナトリウム塩、カルシウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、または有機陽イオンもしくは無機陽イオンの塩であることを特徴とする使用。
請求項１４に記載の薬剤であって、前記有機陽イオンもしくは無機陽イオンの塩が、アンモニウム塩またはトリエチルアンモニウム塩であることを特徴とする使用。
請求項１２〜１５の何れか１項に記載の使用であって、前記薬剤が非経腸的、鼻腔内、または経口での投与のための医薬として調製され、また０．０１〜１００μｇ／体重ｋｇの用量で適用されるときに有効である使用。