CN107614512B

CN107614512B - 用以治疗和/或预防自体免疫疾病和发炎疾病的短合成肽

Info

Publication number: CN107614512B
Application number: CN201680024262.9A
Authority: CN
Inventors: 曹友平; 何宗权
Original assignee: MacKay Memorial Hospital
Current assignee: MacKay Memorial Hospital
Priority date: 2015-04-27
Filing date: 2016-04-14
Publication date: 2021-01-08
Anticipated expiration: 2036-04-14
Also published as: KR20170138547A; CA2983977A1; CN107614513B; SG11201708657XA; KR102093003B1; JP6529606B2; US10463709B2; CN107614513A; WO2016173402A1; EP3288961B1; EP3288960B1; WO2016173401A1; EP3288961B8; CA2983977C; TW201638104A; MY194448A; EP3288961A4; JP6496840B2; AU2016255021A1; JP2018515459A

Abstract

在此公开一种合成肽及含有所述肽的组合物，其是用以治疗和/或预防一发炎相关症状、病征或疾病。本发明内容亦公开一种治疗和或预防一发炎相关症状、病征或疾病的方法，所述方法包含施用一组合物至有需要的个体，其中所述组合物含一治疗有效量的本发明内容的合成肽。

Description

用以治疗和/或预防自体免疫疾病和发炎疾病的短合成肽

本申请案主张2015年4月27日提出申请的美国临时申请案第62/152,980号的所有优惠，该案全部内容并入本文中作为参照。

技术领域

本发明是有关于发现一种短合成肽，及其治疗和/或预防发炎相关症状、病征或疾病的用途，例如，自体免疫疾病和发炎疾病。

背景技术

许多人类疾病都是由异常的发炎反应所引起。由异常发炎反应直接引发的疾病包含：过敏、过敏性结膜炎(allergic conjunctivitis,AC)、气喘、牛皮癣(psoriasis)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和全身性硬化症(systemic sclerosis,SSc)等。虽然目前已有药物可以治疗这些发炎疾病，但现行疗法的药效不佳或可能产生副作用。

牛皮癣

牛皮癣是一慢性皮肤疾病，其病征是皮肤发炎、角质细胞过度增殖和形成脱屑；在美国，患有此病症的人数高达总人口数的3％。牛皮癣患者中，有40％属于中度到重度病症；且约有一至三成的患者会罹患关节炎(又称牛皮癣性关节炎)，其会成骨头和关节周围的结缔组织受损。目前有多种方法可用来治疗牛皮癣，包含局部治疗、光疗和全身性治疗(如，甲氨蝶呤(methotrexate)、环孢菌素(cyclosporine)或类视色素(retinoids))。然而，这些药物通常只能抑制或缓解疾病，并无法完全治愈疾病。再者，许多治疗方式不是造成使用者容貌上不雅、或不适合长期使用，就是具有显著的毒性，会对末端器官造成严重伤害(例如，肾毒性、高血压、骨髓毒性和肝毒性)。

过敏性结膜炎(AC)

过敏性结膜炎是指结膜出现发炎症状，通常是由一或多种过敏原引起的过敏反应所致。过敏性结膜炎分为急性、中度或慢性结膜炎；这是由IgE-介导的发炎反应。此类疾病主要是由组织胺所引起，所以可通过给予抗组织胺来拮抗由组织胺所引发的过敏性反应；然而，局部施用抗组织胺或皮质类固醇仅能暂时性减解病症。因此，目前仍须能减缓过敏性结膜炎症状的较佳药物。

过敏性气喘

过敏性气喘是一呼吸道慢性发炎疾病。过敏性气喘的病征为肺嗜伊红性球增多、黏液过度分泌以及血清中过敏原特异性IgE的量增加。目前标准照护(Current standardof care,SoC)的目标是实现并维持气喘控制，且包含单独或合并施用吸入式皮质类固醇(ICS)和长效β-2促效剂(LABAs)。然而，实行SoC治疗的患者有50％以上无法有效控制气喘，此一不足也创造出显著的医疗需求。再者，重度气喘患者经常会出现皮质类固醇抗性的问题

类风湿性关节炎(RA)

类风湿性关节炎是一种全身性的自体免疫疾病，其病征为滑膜炎(synovialinflammation)和关节损伤(joint destruction)。传统上，会透过全身性地投予甲氨蝶呤、环孢菌素等药物来治疗类风湿性关节炎。此外，已知作用于Janus激酶(JAK)的小分子抑制剂—托法替尼(Tofacitinib)能够抑制多发炎细胞激素的产生，上述细胞介素是由Th1与Th17树突细胞、以及活化的B细胞所产生。托法替尼最常见的不良反应为感染、出血、肝肾疾病以及具致癌性。因此，本领域急需一种疗效更佳且副作用较少的新药，来治疗类风湿性关节炎。

全身性硬化(SSc)

全身性硬化是一种自体免疫疾病，其病征为皮肤和内部器官纤维化。在美国，此一疾病为罕见疾病。疾病发生率为每一百万成人中有240例，且每年的发生率为每一百万成人中有20例。至今，医学界能无法确认全身性硬化的致病机转。全身性硬化的特征包括发炎和自体免疫反应、内皮细胞功能障碍导致弥漫性血管病变，以及进程性纤维化(progressivefibrosis)。目前尚无有效的治疗方法能够逆转或中止进程性纤维化，故全身性硬化症患者的预后不佳。

有鉴于此，本领域亟需一种改良的医药品以及能治疗和/或预防发炎相关症状、病征或疾病的方法。

发明内容

本发明内容大致是有关于发展新颖化合物和/或用以治疗发炎相关疾病和/或症状的方法。

据此，本发明内容的第一方面是提供一种能用以治疗发炎相关疾病和/或症状的短合成肽。所述短合成肽是由7个连续氨基酸残基所组成，其序列为X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ IDNO.1)，其中，

X₁是丙氨酸(alanine,A)、天冬氨酸(aspartic acid,D)、天冬酰胺(asparagine,N)、亮氨酸(leucine,L)、苯丙氨酸(phenylalanine,F)或缬氨酸(valine,V)；

X₂是丙氨酸(alanine,A)、异亮氨酸(isoleucine,I)、亮氨酸(leucine,L)或缬氨酸(valine,V)；

X₃是苯丙氨酸(phenylalanine,F)、酪氨酸(tyrosine,Y)或色氨酸(tryptophan,W)；

X₄是精氨酸(arginine,R)或赖氨酸(lysine,K)；

X₅是缬氨酸(valine,V)、甲硫氨酸(methionine,M)、异亮氨酸(isoleucine,I)、亮氨酸(leucine,L)或谷氨酰胺(glutamine,Q)；

X₆是精氨酸(arginine,R)、谷氨酰胺(glutamine,Q)、赖氨酸(lysine,K)或脯氨酸(proline,P)；

X₇是丝氨酸(serine,S)或苏氨酸(threonine,T)；以及

X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分别是左旋氨基酸。

依据本发明内容部分实施方式，其中X₁和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸，且所述合成肽具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列(本文以7-mer表示)。在一实施例中，X₁是右旋氨基酸，例如，D-天冬氨酸(本文以7-mer DD表示)。在其他实施例中，X₅是右旋氨基酸，例如，D-缬氨酸(本文以7-mer DV表示)。

依据本发明内容较佳的实施方式，所述合成肽具有SEQ ID NO.3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。在一实施例中，所述合成肽具有SEQ IDNO.3的氨基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.10的氨基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.11的氨基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.12的氨基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.13的氨基酸序列(本文以7-merIP表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.14的氨基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他的实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.15的氨基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.16的氨基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.17的氨基酸序列(本文以7-mer V→L表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.18的氨基酸序列(本文以7-mer R2→Q表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.19的氨基酸序列(本文以7-mer D→V表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.20的氨基酸序列(本文以7-mer D→F表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.21的氨基酸序列(本文以7-mer D→L表示)。

本发明内容的第二方面为一种提供一医药品和/或一组合物，其用以治疗一发炎相关症状、病征或疾病。所述医药品或组合物包含一有效量的如上所述的合成肽，以及一药学可接受载体。

依据本发明内容部分较佳的实施方式，其中X₁、和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸，且所述合成肽包含SEQ ID NO.2的氨基酸序列。在一实施例中，X₁是右旋氨基酸，例如，D-天冬氨酸(本文以7-mer DD表示)。在其他实施例中，X₅是右旋氨基酸，例如，D-缬氨酸(本文以7-mer DV表示)。

依据本发明内容较佳实施方式，所述合成肽具有SEQ ID NO.3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。在一实施例中，所述合成肽具有SEQ IDNO.3的氨基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.10的氨基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.11的氨基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.12的氨基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.13的氨基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.14的氨基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.15的氨基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.16的氨基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.17的氨基酸序列(本文以7-mer V→L表示)。在其他实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.18的氨基酸序列(本文以7-mer R2→Q表示)。在其他实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.19的氨基酸序列(本文以7-mer D→V表示)。在其他实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.20的氨基酸序列(本文以7-mer D→F表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.21的氨基酸序列(本文以7-mer D→L表示)。

本发明用以治疗发炎相关症状、病征或疾病的医药品或组合物是选自以下所组成的群组：自体免疫疾病、红斑痤疮(acne rosacea)、消化性溃疡(peptic ulcers)、胃炎(gastritis)、痛风(gout)、痛风性关节炎(gouty arthritis)、关节炎(arthritis)、肠炎疾病(inflammatory bowel disease)、克隆氏病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、溃疡(ulcers)、慢性支气管炎(chronic bronchitis)、气喘(asthma)、过敏(allergy)、过敏性结膜炎(allergic conjunctivitis)、急性肺损伤(acutelung injury)、肺炎(pulmonary inflammation)、呼吸道高反应性(airway hyper-responsiveness)、血管炎(vasculitis)、败血性休克(septic shock)、特异反应性皮肤炎(atopic dermatitis)和湿疹(eczema)。

依据某些实施方式，本发明内容的医药品或组合物可用以治疗自体免疫疾病，其是选自以下所组成的群组：牛皮癣(psoriasis)、类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis)、全身性红斑性狼疮(systemic lupus erythematosus)、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、克隆氏病(Crohn’s disease)、移植排斥(transplantrejection)、与移植物移植排斥相关的免疫疾病(immune disorder associated withgraft transplantation rejection)、良性淋巴细胞血管炎(benign lymphocyticangiitis)、红斑狼疮(lupus erythematosus)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’sthyroiditis)、原发性黏液水肿(primary myxedema)、格雷夫氏病(Graves’s disease)、恶性贫血(pernicious anemia)、自身免疫性萎缩性胃炎(autoimmune atrophicgastritis)、艾迪生氏病(Addison’s disease)、胰岛素依赖型糖尿病(insulin dependentdiabetes mellitis)、古德帕斯丘综合征(Good pasture’s syndrome)、重症肌无力(myasthenia gravis)、天疱疮(pemphigus)、交感性眼炎(sympathetic ophthalmia)、自身免疫性葡萄膜炎(autoimmune uveitis)、自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolyticanemia)、特发性血小板减少症(idiopathic thrombocytopenia)、原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis)、慢性肝炎(chronic hepatitis)、溃疡性结肠炎(ulcerates colitis)、修格兰氏综合征(Sjogren’s syndrome)、魏格纳结节病(Wegenerssarcoidosis)、抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome)、炎性肌病(inflammatorymyopathy)、多发性动脉炎(polyarteritis)、风湿性疾病(rheumatic disease)、多发性肌炎(polymyositis)、硬皮症(scleroderma)、混合性结缔组织疾病(mixed connectivetissue disease)、发炎性风湿病(inflammatory rheumatism)、退行性风湿病(degenerative rheumatism)、关节外风湿病(extra-articular rheumatism)、胶原疾病(collagen disease)、慢性多关节炎(chronic polyarthritis)、银屑病(psoriasisarthropathica)、关节黏连性脊椎炎(ankylosing spondylitis)、幼年型类风湿性关节炎(juvenile rheumatoid arthritis)、肩周炎(periarthritis humeroscapularis)、结节性多动脉炎(panarteriitis nodosa)、进行性全身性硬皮病(progressive systemicscleroderma)、痛风性关节炎(arthritis uratica)、皮肌炎(dermatomyositis)、筋痹(muscular rheumatism)、肌炎(myositis)、肌硬化(myogelosis)、软骨钙质沉着病(chondrocalcinosis)、甲状腺炎(thyroiditis)、过敏性水肿(allergic oedema)、肉芽肿(granulomas)、阿兹海默症(Alzheimer’s disease)、帕金森氏症(Parkinson’s disease)、多发性硬化症(multiple sclerosis)和肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(amyotrophiclateral sclerosis,ALS)。

在某些实施例中，所述自体免疫疾病是牛皮癣。

在其他实施例中，所述自体免疫疾病是类风湿性关节炎。

依据某些实施方式，所述发炎相关症状、病征或疾病是气喘。

依据其他实施方式，所述发炎相关症状、病征或疾病是过敏性结膜炎。

本发明内容的医药品或组合物，可经由下列方式施用至所述个体：血管传递(intravascular delivery)(例如，注射(injection)或灌注(infusion))、经口(oral)、肠内(enteral)、直肠(rectal)、肺(pulmonary(例如，吸入(inhalation))、经鼻(nasal)、局部施用(topical)(包含经皮(transdermal)、经颊(buccal)以及舌下(sublingual))、膀胱内(intravesical)、玻璃体内(intravitreal)、腹膜内(intraperitoneal)、阴道(vaginal)、经脑传递(brain delivery)(例如，脑室注射(intracerebroventricular)和颅内注射(intracerebral))、经CNS传递(例如，鞘内(intrathccal)、椎旁(perispinal)和椎内(intra-spinal))或肠外(parenteral)(例如，皮下(subcutaneous)、肌肉内(intramuscular)、静脉内(intravenous)和皮内(intradermal))、黏膜给药(transmucosaladministration)，或通过移植(implant)或其他公知的给药途径施用。

本发明内容第三方面是有关于一种治疗患有发炎相关症状、病征或疾病个体的方法。所述方法包含以下步骤：施用本发明内容任一实施方式所示的医药品或组合物至所述个体，以改善或减缓发炎相关症状、病征或疾病。

依据较佳的实施方式，本方法所能治疗的与发炎相关症状、病征或疾病是选自以下所组成的群组：自体免疫疾病、红斑痤疮、消化性溃疡、胃炎、痛风、痛风性关节炎、关节炎、肠炎疾病、克隆氏病、溃疡性结肠炎、溃疡、慢性支气管炎、气喘、过敏、过敏性结膜炎(AC)、急性肺损伤、肺炎、呼吸道高反应性、血管炎、败血性休克、特异反应性皮肤炎和湿疹。

依据较佳的实施方方式，本方法所治疗的自体免疫疾病是选自以下所组成的群组：牛皮癣、类风湿性关节炎、全身性红斑性狼疮、溃疡性结肠炎、克隆氏病、移植排斥、与移植物移植排斥相关的免疫疾病、良性淋巴细胞血管炎、红斑狼疮、桥本氏甲状腺炎、原发性黏液水肿、格雷夫氏病、恶性贫血、自身免疫性萎缩性胃炎、艾迪生氏病、胰岛素依赖型糖尿病、古德帕斯丘综合征、重症肌无力、天疱疮、交感性眼炎、自身免疫性葡萄膜炎、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少症、原发性胆汁性肝硬化、慢性肝炎、溃疡性结肠炎、修格兰氏综合征、魏格纳结节病、抗磷脂综合征、炎性肌病、多发性动脉炎、风湿性疾病、多发性肌炎、硬皮症、混合性结缔组织疾病、发炎性风湿病、退行性风湿病、关节外风湿病、胶原疾病、慢性多关节炎、银屑病、关节黏连性脊椎炎、幼年型类风湿性关节炎、肩周炎、结节性多动脉炎、进行性全身性硬皮病、痛风性关节炎、皮肌炎、筋痹、肌炎、肌硬化、和软骨钙质沉着病、甲状腺炎、过敏性水肿、肉芽肿、阿兹海默症、帕金森氏症、多发性硬化症和肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)。

在某些实施例中，所述自体免疫疾病是牛皮癣。

在其他实施例中，所述自体免疫疾病是类风湿性关节炎。

依据较佳的实施方式，本方法更包含施用一有效量的非类固醇抗发炎剂至所述个体。在较佳的实施例中，所述抗发炎剂是一非类固醇抗发炎药物(anti-inflammatorydrug,NSAID)。

在所有的实施方式中，所述个体是人类。

在参阅下文实施方式后，本领域技术人员当可轻易了解本发明的基本精神及其他发明目的，以及本发明所采用的技术手段与实施方式。

附图说明

本专利或申请案内容至少包含一张彩色图示。只要缴交必要的费用即可向主管机关申请附有彩色图示的本案公开说明书复印件。参照下列附图将可更理解本发明的详细内容，附图说明如下：

图1为依据本发明一实施方式所示7-mer对于IMQ-诱导牛皮癣样皮肤炎的影响的照片，每一张照片皆为高功率亮视野照相机(high-powered light-field camera)所拍摄的小鼠背部皮肤影像；

图2为依据本发明一实施方式所示7-mer对于IMQ-诱导牛皮癣样表皮增生的影响，其中图2(A)为利用BrdU标记测定7-mer对于角质细胞增生的影响，以及图2(B)为柱形图，显示每只小鼠于四个高倍率视野下的BrdU阳性细胞±S.D.的平均数目；

图3为依据本发明内容一实施方式所示7-mer对于HOCl-诱导皮肤纤维化的影响，其中图3(A)是组织切片经由梅森氏染色法(Masson’s trichrome)染色的照片(放大200倍)，所述染色可突显经HOCl注射后的胶原纤维；以及图3(B)是一直线图，显示分别利用载体、HOCl和HOCl/7-mer处理的皮肤，其胶原的总含量；

图4为依据本发明内容一实施方式所示本发明合成肽对于LPS-诱导的关节炎的影响；

图5为依据本发明内容所示7-mer肽对于OVA-诱导的过敏性结膜炎(AC)的影响，其中图5(A)为建立实验用AC动物模型的流程图，图5(B)为组织染色的照片，以及图5(C)为柱形图，其显示有/无经7-mer处理的AC小鼠中，嗜伊红性球的数量，*P<0.05v.s.OVA-刺激；以及

图6为依据本发明内容一实施方式所示，7-mer肽对于过敏性气喘发生的影响，其中图6(A)是建立实验用过敏性气喘动物模型的流程图，图6(B)为分别以苏木素和伊红(H&E)，以及PAS染色的组织染色照片。

具体实施方式

为了使本发明内容的叙述更加详尽与完备，下文针对了本发明的实施方式与具体实施例提出了说明性的描述；但这并非实施或运用本发明具体实施例的唯一形式。实施方式中涵盖了多个具体实施例的特征以及用以建构与操作这些具体实施例的方法步骤与其顺序。然而，亦可利用其他具体实施例来达成相同或均等的功能与步骤顺序。

1.名词定义

为阅读方便，将本文中会使用到的名词定义集中在此一并说明。除非另有所指，否则本文中所用到的科学或技术性名词与相关领域技术人员所理解的内容相同。除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技术人员所理解与惯用的意义相同。

在此处「肽」(peptide)一词是指氨基酸残基所组成的聚合物。「合成肽」(synthetic peptide)一词则代表此肽并未包含存在于自然界的完整蛋白质分子。此种肽的所以是「合成的」，表示其乃是由人类利用譬如化学合成、重组遗传技术或将整个抗原切断的类的技术手段所制成。于本说明书中，任何氨基酸残基于一肽中的位置是由该肽的N端起算。当未具体指出氨基酸为右旋或左旋氨基酸，所述氨基酸可以是左旋氨基酸或者是右旋氨基酸，除非上下文明示所述氨基酸为特定异构物。所述「右旋氨基酸(D-amino acid)」和「左旋氨基酸(L-amino acid)」是指氨基酸的绝对构型，非为平面偏光的特定旋转方向。本文中氨基酸的用法(usage)与相领域技术人士所使用的标准用法相同。本文中氨基酸可以1个字母或3个字母表示，例如以工业财产信息和文件手册内所示的ST.25标准命名。

在此，蛋白质/肽氨基酸序列的些微变异皆为本发明权利范围所涵盖。举例来说，变异的氨基酸序列至少保留70％、71％、72％、73％、75％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％以及99％的相似度。本发明合成肽可经由修饰以改变肽特征且不影响其生理活性。举例而言，某些氨基酸经改变和/或删除后，不会影响本发明内容所述肽的生理活性(即，治疗发炎相关疾病和/或症状的功效)。具体而言，氨基酸的保守性置换是可被预期的。所述保守性置换是指氨基酸侧链被同一类的氨基酸所取代。一般而言，编码的氨基酸分类如下：(1)酸性氨基酸＝天门冬胺酸(aspartate)、麸胺酸(glutamate)；(2)碱性氨基酸＝赖氨酸(lysine)、精氨酸(arginine)、组胺酸(histidine)；(3)非极性氨基酸＝丙氨酸(alanine)、缬氨酸(valine)、亮氨酸(leucine)、异亮氨酸(isoleucine)、脯氨酸(proline)、苯丙氨酸(phenylalanine)、甲硫氨酸(methionine)、色氨酸(tryptophan)；以及(4)未带电极性氨基酸＝甘胺酸(glycine)、天冬酰胺(asparagine)、麸酰胺、半胱胺酸(cysteine)、丝氨酸(serine)、苏氨酸(threonine)、酪氨酸(tyrosine)。在较佳的实施例中、所述氨基酸的分类为:丝氨酸(S)和苏氨酸(T)为脂肪族羟基族(aliphatic-hydroxyfamily)；天冬酰胺(N)以及麸酰胺为含酰胺族(amide-containing family)；丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)以及异亮氨酸(I)为脂肪族(aliphatic family)；以及苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)和酪氨酸(Y)为芳香族(aromatic family)。举例而言，可以预期的是以异亮氨酸(I)或缬氨酸(V)取代亮氨酸(L)、以麸胺酸(E)取代天冬氨酸(D)、以丝氨酸(S)取代苏氨酸(T)、或以一结构相似的氨基酸取代一氨基酸，此一置换不会对氨基酸分子的结合或其特性产生重大影响，特别是所述置换并未包含氨基酸的框架区域(framework site)。可通过分析肽衍生物的专一性活性，确定氨基酸的修饰是否改变一功能性肽。本领域技术人员可制备蛋白质/肽的片段或类似物。较佳的片段或衍生物的氨端或羧端发生于功能区域。在一实施例中，本发明合成肽中的一个氨基酸残基(例如，缬氨酸(V))被保守性置换(例如，被亮氨酸(L)置换)。在其他实施例中，本发明合成肽中的两个氨基酸残基被其他适当的氨基酸保守性置换；例如，缬氨酸(V)以及精氨酸(R)分别被其他对氨基酸所取代，包含，但不限于，甲硫氨酸(M)和赖氨酸(K)、赖氨酸(K)和脯氨酸(P)、色氨酸(W)和异亮氨酸(I)、异亮氨酸(I)和脯氨酸(P)、天冬酰胺(N)和缬氨酸(V)，以及麸酰胺(G)和赖氨酸(K)。

所述「治疗(treatment)」一词是指预防性(如，预防用药)、疗愈性或缓和性的处置，藉以达到所欲的药学和/或生理学效果。上述的效果是指能够部分或完全地治愈或预防个体出现所述疾病的症状。所述「治疗(Treatment)」包含预防、治疗或减缓一哺乳类的疾病，尤其是人类。所述治疗包含：(1)预防(如，预防用药)、治疗或减缓一个体的疾病或症状，其中所述个体可能患有疾病但尚未被诊断；(2)抑制一疾病(即，降低发展出与该疾病、异常和/或病症相关的病理变化的风险)；或(3)治愈一疾病(即，减少与所述疾病相关的症状)。

所述「施用(administered)(administering)(administraion)」一词是指将本发明的肽或组合物提供给个体。所述传递方式包含，但不限于，静脉内、肌肉内、腹膜内、动脉内、颅内、结膜内或皮下传递方式。

「有效量(effective amount)」一词在本文是指一成分的用量足以达成欲求的反应或效果，即，能有效治疗疾病。以治疗发炎为例，一药剂(如，化合物、合成肽、编码治疗肽的核酸)，其能用以降低、预防、推迟或治愈发炎的相关症状。一药剂的有效量不必然能够治愈一疾病或症状，但能推迟、阻碍或预防疾病或症状的发生，或推迟疾病或症状相关的病征。所术治疗有效量可分成一、二或更多剂量于单一施用剂量型式，且可于一指定期间内施用一次、二次或更多次。

所述「个体(subject)」或「患者(patient)」一词可交互使用，且在此是指可接受本发明内容的合成肽和/或方法的动物(包含，人类)。所述「哺乳类(mammal)」一词涵盖哺乳纲的所有成员，包含：人类、灵长类动物、家畜和农畜。举例而言，所述家畜或农畜可以是兔子、猪、羊和牛。所述哺乳类亦可涵盖动物园或竞赛用动物、宠物，以及啮齿类(如，小鼠和大鼠)。除非另有指明，「个体」或「患者」一般包含雄性与雌性。再者，所述「个体」或「患者」包含可从本发明内容的治疗方法得到良好治疗效果的动物。举例而言，所述「个体」或「患者」包含，但不限于，人类、大鼠、小鼠、天竹鼠、猪、猴子、猪、羊、牛、马、狗、猫、鸟和禽类。在一实例中，所述患者为人类。

在一实施例中，「药学上可接受载体、赋形剂或安定剂」一词，是指一适合施用于皮肤或眼睛的载体、药剂或化合物。

在此，所述「发炎相关症状、病征或疾病」一词是指疾病进程或表现病征含发炎反应的病理学疾病和/或症状。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，「约」通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，「约」一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其他相似者)均经过「约」的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随申请专利范围所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。在此处，将数值范围表示成由一端点至另一段点或介于二端点之间；除非另有说明，此处所述的数值范围皆包含端点。

此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。

2.较佳实施方式的详细说明

本发明至少一部份是基于发现一短合成肽，其能用以治疗和/或预防一个体发炎相关疾病和/或症状的发展。再者，本发明提供一种用以治疗和/或预防发炎相关疾病和/或症状的方法和组合物，其中所述组合物包含在此新发现的合成肽。

2.1本发明的合成肽

本发明内容的短合成肽是由7个连续氨基酸残基所组成，其序列为X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ ID NO.1)，其中，

X₁是丙氨酸(A)、天冬氨酸(D)、天冬酰胺(N)、亮氨酸(L)、苯丙氨酸(F)或缬氨酸(V)；

X₂是丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)或缬氨酸(V)；

X₃是苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；

X₄是精氨酸(R)或赖氨酸(K)；

X₅是缬氨酸(V)、甲硫氨酸(M)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)或谷氨酰胺(Q)；

X₆是精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、赖氨酸(K)或脯氨酸(P)；

X₇是丝氨酸(S)或苏氨酸(T)；以及

X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分别为左旋氨基酸。

依据某些实施方式，本发明的合成肽中，其中X₁和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸，且所述合成肽具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列。在一实施例中，X₁是右旋氨基酸，例如，D-天冬氨酸(本文以7-mer DD表示)。在其他实施例中，X₅是右旋氨基酸，例如，D-缬氨酸(本文以7-mer DV表示)。

依据其他较佳的实施方式，所述合成氨基酸具有SEQ ID NO.3或4的氨基酸序列。在一实施例中，所述合成氨基酸具有SEQ ID NO.3的氨基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在其他实施例中，所述合成氨基酸具有SEQ ID NO.4的氨基酸序列(本文以7-mer La表示)。

依据其他较佳的实施方式，所述合成肽具有序列编号10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。在一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.10的氨基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.11的氨基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.12的氨基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.13的氨基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在又另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.14的氨基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.15的氨基酸序列(本文以7-mer V→QK表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.16的氨基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.17的氨基酸序列(本文以7-mer V→L表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.18的氨基酸序列(本文以7-mer R2→Q表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID NO.19的氨基酸序列(本文以7-mer D→V表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.20的氨基酸序列(本文以7-mer D→F表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID NO.21的氨基酸序列(本文以7-mer D→L表示)。

依据部分实施方式，将位于SEQ ID NO.2的C-端上的丝氨酸(S)删除后，所得到的修饰肽序列命名为对照肽(本文以DLYRVR表示，SEQ ID NO.22)，该肽不具有本发明内容所述的生物活性。因此，位于C-端的丝氨酸(S)对于维持本发明合成肽治疗和/或预防发炎相关疾病和/或症状的活性非常重要，此一氨基酸残基仅能被保守性氨基酸残基取代，但不可被删除。

依据本发明内容某些实施方式，其中序列编号；2包含至少一右旋氨基酸残基，所产生的7-mer右旋类似物(例如，7-mer DD或7-mer DV)如本说明书实施例1表1所示。在这些右旋类似物中，7-mer(SEQ ID NO.2)上的酪氨酸(Y)、精氨酸(R)，以及丝氨酸(S)必须为左旋氨基酸，否则会造成本发明合成肽失去对于治疗自体免疫和/或发炎相关疾病和/或症状的生物活性(即，7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DR2和7-mer DS，参见实施例1表1)。

依据本发明内容其他实施方式，7-mer上任一氨基酸残基可分别被丙氨酸(A)所取代，产生7-mer类似物(即，7-mer Da和7-mer La)，如本说明书实施例1表1所述。在这些类似物中，7-mer(SEQ ID NO.2)上的天冬氨酸(D)或亮氨酸可以被丙氨酸(A)取代，且不会失去其对于治疗自体免疫和/或发炎相关疾病和/或症状的生物活性，但7-mer上其他氨基酸残基被取代(即，7-mer上第3个至第7个氨基酸位置)，则会造成7-mer氨基酸失去生物活性。

依据本发明内容又一实施方式，7-mer上至少二氨基酸残基分别被其他氨基酸取代，产生如实施例1中表1所示的7-mer类似物(即，7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-merIP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L))。以特定位置换所产生的7-mer类似物，仍保有7-mer肽的部分活性，其中7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L)皆展现与7-mer类似的活性(SEQ ID NO.2)。

本发明合成肽可通过现有技术中任一标准肽合成方法来制造。在一实施方式中，本发明合成肽是依据操作手册以固相肽合成器(ABI433A肽合成器；Applied BiosystemsInc.；Life Technologies Corp.；Foster City,CA,USA)进行合成。

另外，可利用重组技术来制备本发明的合成肽。举例而言，可利用重组技术将可编码本发明肽的核酸序列嵌入至一表达载体中，且其中所述核酸序列以可操作方式与一调控序列连结，以在宿主细胞内表达本发明肽。接着，可将所述载体送入一合适的宿主细胞内表达本发明肽。经表达的重组肽可以通过硫酸铵沉淀法和管柱分划色层分析法纯化，并依据本发明内容各实施例所示方法进行活性测试。

上述核酸或多核苷酸可利用已知的生物降解聚合物微粒或微囊传递装置传送。另外，亦可利用常规方法以脂质体包复核酸，以供宿主吸收所述核酸。所述多核苷酸可单独加载或与其他组织专一性抗体共同加载至所述传递载体中。此外，可制备一分子接合物(molecular conjugate)，其是由质体或其他载体以静电或共价力连结聚-L-赖氨酸。此外，本发明亦可利用已知的组织专一性转录调节组件(tissue-specific transcriptionalregulatory elementst)，进行组织专一性标定。也可在不使用传递载体的情形下将「裸DNA(naked DNA)」传递至肌肉内、皮内或皮下的位置，以进行胞内表达(in vivo expression)。

本发明合成肽的N端或C端可以进行修饰。举例而言，N端修饰包含，但不限于，N-醣基化、N-烷基化和N-乙酰化氨基酸。一终端修饰包含聚乙烯二醇化(pegylation)。在一实例中，C端修饰为一C端胺基化氨基酸。在可任选的实施方式中，一或多个肽键结可以被一非肽链所取代，个别的氨基酸基团的修饰，可通过试剂处理，以与特定的侧链或终端残基反应。

于所述合成肽可经由化学修饰，于多个不同的部位，加入不同的官能基。官能基可以被添加至所述合成肽的终端。在某些实施方式中，所述官能基能改善肽一或多个特性的活性，例如，改善合成肽的稳定性、效能或选择性；改善所述合成肽通过细胞膜和/或组织屏障的穿透效率；改善组织定位能力；降低毒性或清除率；以及改善抵抗细胞帮浦的排除，以及其他类似的活性。在非限制的实施例中，适当的官能基能用以传递肽黏附至细胞上。举例来说，降低肽的亲水性，以及增加其亲脂性，这些可任选地官能基于活体内裂解较佳，例如在胞内以水解或酵素分解的方式裂解皆可。水解保护基包含酯、碳酸酯以及氨基甲酸酯保护基。胺保护基包含烷氧基以及芳氧羰基。羧酸保护基包含脂族(aliphatic)、苯甲基(benzylic)和芳酯(aryl esters)。在某些视需要而实施的实施方式中，于本发明合成肽的天冬氨酸(D)的侧链的羧酸基是被保护的；较佳为，通过甲基、乙基、苯基或经取代的苯酯基。

可利用保守性或非保守性置换方式，以「拟肽有机基团(peptidomimetic organicmoiety)」取代本发明合成肽中任一氨基酸残基。在需要而实施的较佳实例中，所述拟肽有机基团与取代的氨基酸于必要的部位具有类似的立体空间、电子或构型特性，且被视为保守性置换。可视需要而以拟肽来抑制酵素造成肽降解或其他降解过程。在视需要而实施的较佳实例中，所述肽可通过有机合成技术产生。在非限制的实施例中，合适的拟肽包含酰胺的同电子排列体(isosteres of amide bonds)、3-氨-2-丙二酮-6-羧酸(3-amino-2-propenidone-6-carboxylic acid)、羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸乙酯(hydroxyl-1,2,3,4-tetrahydro-isoquinoline-3-carboxylate)，以及组氨酸异喹啉羧酸(histidineisoquinolone carboxylic acid)。

可视需要而对本发明合成肽的任一部分进行化学修饰，例如，添加官能基。所述修饰可于合成本发明肽的过程中进行。在非限制的实施例中，所述修饰的类型包含，但不限于，羧甲基化(carboxymethylation)、酰化(acylation)、磷酸化(phosphorylation)、糖基化(glycosylation)或脂酰化(fatty acylation)。醚键可任选地用以结合丝氨酸(S)或苏氨酸(T)羟基至一糖类的羟基。酰胺键可任选地用以结合麸胺酸或天门冬胺酸的羧基至一糖类的胺基。缩醛或酮键结可任选地形成于氨基酸与碳水化合物之间。

2.2用以治疗发炎相关疾病和/或症状的组合物

本发明合成肽能用以治疗和/或预防一患有发炎相关症状、病征或疾病的个体。

再者，本发明另一方面是提供一包含本发明合成肽的医药品，其是用以治疗发炎相关症状、病征或疾病，其包含，但不限于，自体免疫疾病、红斑痤疮、消化性溃疡、胃炎、痛风、痛风性关节炎、关节炎、肠炎疾病、克隆氏病、溃疡性结肠炎、溃疡、慢性支气管炎、气喘、过敏、过敏性结膜炎、急性肺损伤、肺炎、呼吸道高反应性、血管炎、败血性休克、特异反应性皮肤炎和湿疹。

在某些实施方式中，含有本发明肽的医药品可用以治疗自体免疫疾病。在非限制的实施例中，含有本发明肽的医药品可用以治疗的自体免疫疾病，例如，牛皮癣、类风湿性关节炎、全身性红斑性狼疮、溃疡性结肠炎、克隆氏病、移植排斥、与移植物移植排斥相关的免疫疾病、良性淋巴细胞血管炎、红斑狼疮、桥本氏甲状腺炎、原发性黏液水肿、格雷夫氏病、恶性贫血、自身免疫性萎缩性胃炎、艾迪生氏病、胰岛素依赖型糖尿病、古德帕斯丘综合征、重症肌无力、天疱疮、交感性眼炎、自身免疫性葡萄膜炎、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少症、原发性胆汁性肝硬化、慢性肝炎、溃疡性结肠炎、修格兰氏综合征、魏格纳结节病、抗磷脂综合征、炎性肌病、多发性动脉炎、风湿性疾病、多发性肌炎、硬皮症、混合性结缔组织疾病、发炎性风湿病、退行性风湿病、关节外风湿病、胶原疾病、慢性多关节炎、银屑病、关节黏连性脊椎炎、幼年型类风湿性关节炎、肩周炎、结节性多动脉炎、进行性全身性硬皮病、痛风性关节炎、皮肌炎、筋痹、肌炎、肌硬化、和软骨钙质沉着病、甲状腺炎、过敏性水肿、肉芽肿、阿兹海默症、帕金森氏症、多发性硬化症或肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)。

在一实施例中，所述自体免疫疾病是牛皮癣。在其他实施例中，所述自体免疫疾病是类风湿性关节炎。

在其他实施方式中，含有本发明肽的医药品可用以治疗的发炎相关的症状、病征或疾病是一过敏性疾病。在非限制的实施例中，所述含有本发明肽的医药品可用以治疗的过敏性疾病是气喘、过敏和过敏性结膜炎。

在一实施例中，所述过敏性疾病是气喘。在其他实施例中，所述过敏性疾病是过敏性结膜炎。

所属技术领域中已知的药学可接受载体、赋形剂或安定剂与适量的本发明的合成肽混合，可制成一组合物。在特定的实施方式中，所述合成肽选自于上述任一肽，包含但不限于，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP,、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer V→L、7-mer QK、7-mer LQ、7-mer VFT及其组合。

所述医药品或组合物中本发明肽的含量随着使用的肽而有所不同。所述组合物中的肽含量约为0.001％至10％(重量％)；例如，约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0％。在一较佳的实施方式中，所述肽的含量约为0.001％至5％(重量％)；例如，约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5.0％。

所属技术领域中已知有多种药学可接受载体、赋形剂或安定剂能够适用于本发明的合成肽，包含但不限于，非毒性惰性固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封剂或配方助剂。一般的药学可接受载体可以是水、或生理食盐水。举例而言，药学可接受载体包含，但不限于，糖类，例如，乳糖、葡萄糖或蔗糖；淀粉，例如，玉米淀粉；纤维素及其衍生物，例如，羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose)、乙基纤维素(ethyl cellulose)和醋酸纤维素(cellulose acetate)；黄芪胶粉末(powdered tragacanth)；麦芽(malt)；明胶(gelatin)；滑石(talc)；赋形剂，例如，可可脂(cocoa butter)和栓剂蜡(suppository waxes)；油类，例如，花生油(peanut oil)、棉籽油(cottonseed oil)、红花油(safflower oil)、芝麻油(sesame oil)、橄榄油(olive oil)、玉米油(corn oil)和大豆油(soybean oil)；二醇类(glycols)，例如，丙二醇(propylene glycol)；酯类(esters)，例如，油酸乙酯(ethyloleate)和月桂酸乙酯(ethyl laurate)；琼脂(agar)；缓冲剂(buffering agents)，例如，氢氧化镁(magnesium hydroxide)和氢氧化铝(aluminum hydroxide)；藻酸(alginicacid)；以及其它制剂，例如，非毒性润滑剂(non-toxic lubricants，例如月桂烷硫酸酯(lauryl sulfate)、硬脂酸镁(magnesium stearate)、着色剂(coloring agent)、释放剂(releasing agents)、调味剂(flavoring agents)、防腐剂(preservative)以及抗氧化剂(antioxidants)。

本发明内容的医药品或组合物的施用途径包括：经由血管传递(例如，注射或灌注)、经口、肠内、直肠、肺(例如，吸入)、经鼻、局部施用(包含经皮，经颊以及舌下)、膀胱内、玻璃体内、腹膜内、阴道、经脑传递(例如，脑室注射和颅内注射)、经CNS传递(例如，鞘内、椎旁和椎内)或肠外(例如，皮下、肌肉内、静脉内和皮内)、黏膜给药或通过移植或其他公知的给药途径。

适用于口服的药学组合物，可以是离散剂型，包含但不限于，丸剂、片剂、锭剂、硬式或软式胶囊；或制成一分散粉末或颗粒；或制成一溶液或悬浮液，例如，溶液或悬浮液。举例而言，水溶性或油性悬浮液、乳剂、糖浆、酏剂或肠内配方。所述组合物可以制成单一剂量或多剂量剂型，例如，密封瓶或安瓿，以冻干条件并添加无菌液体载体(例如，水或食盐水)储存。

适用于肠外途径施用的药学组合物可以被制成液体或非液体无菌注射剂型，混合或分散本发明合成肽与一无菌溶液，例如，林格氏溶液、食盐水、1,3-丁二醇以及乙醇等。在可任选地实施例中，非挥发油、脂肪酸、合成单一或双甘油酯皆可作为溶剂。所述组合物可通过过滤器过滤使之无菌。

适用于局部和皮肤途径施用的药学组合物，可以被制成软膏(ointments)、糊剂(pastes)、乳霜(creams)、乳液(lotions)、凝胶(gels)、贴片(patches)或喷雾剂(sprays)等剂型。眼部剂型、耳滴剂和眼滴剂皆属于本发明涵盖范畴。本发明的组合物可局部施用至眼部。随着患者疾病的严重程度不一，本发明合成肽的施用剂量为约1微克/公斤体重至约50毫克/公斤体重(如，0.1-20毫克/公斤体重)。每日或每周的施用剂量为约1微克/公斤至约20毫克/公斤或更高。为达到上述任一局部施用的目的，所述局部施用量为约0.01至约100毫克/公斤体重(毫克/公斤)，每日施用一次至数次(如，每日施用4、6、8或更多次)。

药学组合物可以制成适用于肺部施用的剂型，例如，粉尘(dusts)或气雾(mists)，譬如可利用压力定量(pressurized metered dose)装置来产生气溶胶、气雾或粉尘。

本发明所提供的组合物可以是一套组。可以理解的是本发明所述套组是作为一产品，其包含本发明合成肽和/或其他治疗性化合物，经包装而形成所述组合物，以利组合物的运送、储存和同时或连续施用。因此，本发明套组可包含一或多个含本发明的合成肽的安瓿，以将本发明肽制成单一剂量或多剂量形式。所述套组更包含一载体，用以溶解本发明所述合成肽；例如，水溶液介质物，即生理食盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)、葡萄糖和氯化钠。水溶性介质，如，乙醇、聚乙二醇(polyethylene glycol)、丙基乙二醇(propylethylene glycol)。若有必要，非水溶性载体亦可适用本发明。本套组的其他对象为一包装盒，用以包装本发明的各组成物。适用于本发明的包装盒的材料可以是玻璃、塑料(聚乙烯，聚丙烯，聚碳酸酯极其类似物)、瓶子、小罐子、纸、束袋或其类似物。

本发明套组可更包含说明书，其中记载本发明各种配方的施用方式(如，同时施用、连续施用、个别施用)。因此，本发明的套组可更包含如何施用(如，同时施用、连续施用、个别施用)本发明中不同成分的说明书。所述说明书可以是纸张或为可被读取的电子媒介物，例如，电子储存媒体(磁盘、磁带或其类似物)、光学媒体(CD-ROM，DVD)及其类似物。所述媒体可额外或非必要的附加网络页面，以提供上述说明信息。

2.3预防和/或治疗发炎相关相关症状、病征或疾病的方法

如上所述，本发明所揭示的内容能有效预防和/或治疗发炎相关症状、病征或疾病。

因此，本发明是关于一种预防和/或治疗发炎相关症状、病征或疾病的方法的方法，其包含施用一包含本发明的合成肽的一医药品或组合物至一有需要的个体，其中所述合成肽是由7个连续氨基酸残基所组成，其序列为X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ ID NO.1)，其中，

X₂是丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、或缬氨酸(V)；

X₃是苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；

X₄是精氨酸(R)或赖氨酸(K)；

X₆是精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、赖氨酸(K)或脯氨酸(P)；以及

X₇是丝氨酸(S)或苏氨酸(T)；以及

X₂、X₃、X₄、X₆、X₇分别为左旋氨基酸；以及一药学可接受载体。当施用所述医药品和/或组合物至个体时，能改善或减缓发炎相关疾病和/或症状。

在一具体的实施方式中，所述合成肽是选自于上述任一肽，包含但不限于，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-merNV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)、7-mer(D→L)及其组合。

所述发炎相关的症状、病征或疾病包含，但不限于、自体免疫疾病、红斑痤疮、消化性溃疡、胃炎、痛风、痛风性关节炎、关节炎、肠炎疾病、克隆氏病、溃疡性结肠炎、溃疡、慢性支气管炎、气喘、过敏、过敏性结膜炎、急性肺损伤、肺炎、呼吸道高反应性、血管炎、败血性休克、特异反应性皮肤炎和湿疹。

在某些实施方式中，本方法治疗的发炎相关的症状、病征或疾病是自体免疫疾病。在非限制的实施例中，本方法治疗的自体免疫疾病是牛皮癣、类风湿性关节炎、全身性红斑性狼疮、溃疡性结肠炎、克隆氏病、移植排斥、与移植物移植排斥相关的免疫疾病、良性淋巴细胞血管炎、红斑狼疮、桥本氏甲状腺炎、原发性黏液水肿、格雷夫氏病、恶性贫血、自身免疫性萎缩性胃炎、艾迪生氏病、胰岛素依赖型糖尿病、古德帕斯丘综合征、重症肌无力、天疱疮、交感性眼炎、自身免疫性葡萄膜炎、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少症、原发性胆汁性肝硬化、慢性肝炎、溃疡性结肠炎、修格兰氏综合征、魏格纳结节病、抗磷脂综合征、炎性肌病、多发性动脉炎、风湿性疾病、多发性肌炎、硬皮症、混合性结缔组织疾病、发炎性风湿病、退行性风湿病、关节外风湿病、胶原疾病、慢性多关节炎、银屑病、关节黏连性脊椎炎、幼年型类风湿性关节炎、肩周炎、结节性多动脉炎、进行性全身性硬皮病、痛风性关节炎、皮肌炎、筋痹、肌炎、肌硬化、和软骨钙质沉着病、甲状腺炎、过敏性水肿、肉芽肿、阿兹海默症、帕金森氏症、多发性硬化症、or肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)。

在其他实施方式中，本方法治疗与发炎相关的症状、病征或疾病是过敏性疾病。在非限制的实施方式中，本方法所治疗的过敏性疾病是气喘、过敏和过敏性结膜炎。

在可任选的实施方式中，本发明的方法更包含施用一有效量的抗发炎剂至所述个体，其中该抗发炎剂为治疗发炎相关的症状、病征或疾病。

依据本发明内容的实施方式，所述抗发炎剂可以是类固醇(如，皮质类固醇(corticosteroid))、非类固醇抗发炎药物(non-steroidal anti-inflammatory drug,NSAID)、免疫抑制剂或肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)。

在非限制的实施例中，所述皮质类固醇包含，但不限于，普赖松(prednisone)、地塞松(dexamethasone)、氢化皮质酮(hydrocortisone)和甲基培尼皮质酮(methylprednisolone)。

所述NSAID可以选自以下所组成的群组：萘普生(naproxen)、布洛芬(ibuprofen)、酮咯酸(ketorolac)、酪洛芬(ketoprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、奥赛普芬(oxaprofen)、双氯芬酸(diclofenac)、托美汀(tolmetin)、托芬那酸(tolfenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、舒林酸(sulindac)、吲哚美辛(indomethacin)、水扬酸(salicylic acid)、乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid)、二氟尼柳(diflunisal)、洛索洛芬(loxoprofen)、吲哚洛芬(indoprofen)、吡洛芬(pirprofen)、环氯茚酸(clidanac)、苯克洛酸(fenclorac)、甲氯芬那酸(meclofenamate)、苯恶洛芬(benoxaprofen)、卡洛芬(carprofen)、三苯唑酸(isofezolac)、醋氯芬酸(aceclofenac)、芬布芬(fenbufen)、依托度酸(etodolac acid)、夫克辛酸(fleclozic acid)、氨芬酸(amfenac)、甲芬那酸(mefenamic acid)、溴芬酸(bromfenac)、夫克芬酸(flenclofenac)、阿氯芬酸(alcofenac)、奥帕诺辛(orpanoxin)、佐美酸(zomepirac)、氟芬那酸(flufenamicacid)、尼氟酸(niflumic acid)、普拉洛芬(pranoprofen)、扎托洛芬(zaltoprofen)和舒洛芬(suprofen)。在较佳的实施方式中，所述NSAID是双氯氛酸、萘普生或布洛芬，上述任一药物为最有效且为NSAID处方药物。

所述免疫抑制剂可以是糖皮质激素(glucocorticoids)、细胞抑制剂(cytostatics)(如，烷化剂(alkylating agents)或抗代谢物(antimetabolites))、抗体、作用于免疫亲和素(immunophilins)的药物(如，环孢霉素(cyclosporine)、他克莫司(Tacrolimus)、雷帕霉素(Sirolimus))、干扰素(interferons)、TNF-结合蛋白和霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)等。在非限制的实施方式中，所述烷化剂包含，但不限于，环磷酰胺(cyclophosphamides)，亚硝基脲(nitrosoureas)和铂化合物(platinum compounds)。在非限制的实施例中，所述抗代谢物包含，但不限于，甲氨蝶呤(methotrexate)、硫唑嘌呤(azathiopurine)、，硫醇嘌呤(mercaptopurine)和氟尿嘧啶(fluorouracil)。

在所有实施方式中，所述适合用以治疗的个体是人类。

下文提出多个实验例来说明本发明的某些方式，以利本领域技术人员实作本发明，且不应将这些实验例视为对本发明范围的限制。据信习知技艺者在阅读了此处提出的说明后，可在不需过度解读的情形下，完整利用并实践本发明。此处所引用的所有公开文献，其全文皆视为本说明书的一部分。

实施例

材料与方法

材料

杜氏培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium,DMEM)、胎牛血清(fetalbovine serum,FBS)、0.25％胰蛋白酶、抗生素-抗真菌剂溶液购自Invitrogen(Carlsbad,CA)。3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(简称MTT)购自Merck(产品目录编号：1.11714.0001)。二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)、次氯酸、5-溴-2'-脱氧尿苷(5-bromo-2'-deoxyuridine,BrdU)、Hoechst 33258染剂、NaClO溶液和过碘酸雪夫氏(Periodic acid-Schiff,PAS)试剂皆购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。抗-BrdU购自GeneTex(台北，台湾)。IMQ乳霜(ALDARA乳霜5％)购自DKSH(台北，台湾)。

所有肽是以GenScript(Piscataway,NJ,USA)合成，其中每一肽的N端及C端分别经乙酰化和胺基化修饰，以改善其稳定性，接着以质谱仪定性(纯度：>95％)。

细胞培养及处理

鼠巨噬细胞株(murine macrophage cell line)RAW264.7(ATCC,Rockville,MD)培养于DMEM培养基(添加10％FBS和抗生素-抗真菌剂溶液。细胞培养于37℃和5％CO₂环境中。

实验动物

所有实验动物饲养于动物房中，实验过程经马偕纪念医院审查委员会同意。再者，所有动物实验过程是遵循视觉及眼科学学术研究会议(ARVO)所订定的动物实验眼科和视觉研究相关规定。

MTT分析

将RAW264.7细胞接种于48-孔培养盘(2×10⁴细胞/孔)培养24小时，于刺激前再以无血清DMEM培养基培养24小时。于治疗组中，将细胞置于0.5毫升的无血清DMEM培养基(含25μM肽)中24小时。为了测定细胞存活率，添加50微升MTT储存溶液(5毫克MTT溶于1毫升的无菌PBS)至每一培养孔中。另外，添加50微升的MTT储存溶液至500微升的培养基中，作为阴性对照组。将培养盘置于37℃，培养4小时。分别从每个样本中取450微升的分液至新的48孔培养盘，添加100微升的DMSO，利用移液管混合，于37℃下，反应20分钟，并在570nm波长下测定吸光值。

牛皮癣样皮肤炎的小鼠模型

所有实验过程经马偕纪念医院审查委员会同意且遵循国家动物实验管理办法的相关规定。牛皮癣样皮肤炎的小鼠模型是依据van der Fits等人(J Immunol.(2009),182,5836-5845)所公开的步骤，以咪喹莫特(Imiquimod,IMQ)处理小鼠皮肤而诱发产生牛皮癣样皮肤炎。每日局部施用62.5毫克的市售IMQ乳霜至每一只BALB/c小鼠(8周龄)裸背和右耳上，连续施用6天；其中对照组小鼠(正常组)则处以对照乳霜。在治疗组中，将7-mer类似物与IMQ乳霜混合，浓度为100μM。

以BrdU标记测定角质细胞增殖。利用DMSO配置BrdU(Sigma-Aldrich)储存溶液(Sigma-Aldrich)(80mM)。将10微升的BrdU与90微升的PBS混合，并将其以腹腔注射的方式注入至每一小鼠中，经24小时后，将小鼠安乐死。将小鼠背部皮肤置于4％多聚甲醛(paraformaldehyde)中固定，并以石蜡(paraffin)包埋，再进行免疫组织化学染色。

类风湿性关节炎的大鼠模型

在此实验例中，依据Pan RY等人(J Virol.(1999)73,3410-3417)所公开的步骤，将脂多醣(lipopolysaccharide,LPS)注入至大鼠关节引发急性关节炎。简言之，将赛拉嗪(Xylazine)(10毫克/公斤)以腹腔注射的方式施用至Sprague-Dawley成鼠(公鼠)(约10周龄)(初始体重＝312±11克)中进行麻醉，接着，将大鼠随机分配至各实验组中；以单次关节内注射施用25微升的5％玻尿酸(hyaluronic acid,HA)(含LPS(2微克和10微克)或LPS+7-mer)至大鼠的右膝。将7-mer(10mM储存溶液)溶于25微升的5％HA，最终浓度为1mM。在第2天，LPS+7-mer组或LPS+7-mer类似物组的大鼠，再以单次关节内注射的方式施用7-mer至大鼠中。于第3天，将大鼠解剖，摘取膝关节，并将其固定于4％多聚甲醛(PFA)溶液中，接着，以Shandon TBD-2脱钙液(Thermo Scientific,Logan,UT)脱钙。将处理后的关节包埋在石蜡中，并以矢状切(mid-sagittally)的方式切片。利用纵向切片的方式得到的各切片(厚度：5微米)，以H&E染色。

过敏性结膜炎的小鼠模型

分别以腹腔注射的方式在第0天和第7天施用1微克的卵蛋白(OVA)和200微升的1.5％氢氧化铝(aluminum hydroxide,ALUM)至BALB/c小鼠(4至5周龄的母鼠)，使其产生过敏(即，致敏化)，接着在第15天和第18天以局部施用的方式将250微克的OVA施用至小鼠结膜囊中，共刺激二次。控制组小鼠在致敏化阶段施用OVA和ALUM，接着在刺激阶段以PBS取代OVA。于治疗组中，将7-mer与1％CMC眼滴剂混合，最终浓度为100μM。于OVA刺激(第15天)后，将小鼠随机分配至2实验组(每组n＝6)中，接着以20微升的7-mer或眼滴剂载体处理小鼠，每天两次，持续施用4天(至第18天)。于OVA最终刺激后24小时(第19天)，将小鼠安乐死并摘除小鼠眼球，将其固定于4％多聚甲醛，且以石蜡包埋。为了评估嗜伊红球浸润的程度，将含眼睑的切片(厚度5微米)去石蜡化，接着以酸性金沙(acid-giemsa)染色侦测嗜伊红性球。

过敏性气喘的小鼠模型

以腹腔注射的方式于第0天和第7天分别施用1微克的卵蛋白(OVA)和1.5％氢氧化铝至BALB/c小鼠(4至5周龄母鼠)，使其产生过敏，接着分别于第21、22和23天以鼻腔内注射250微克的OVA共刺激三次。控制组小鼠于致敏化阶段施用OVA和ALUM，接着，在刺激阶段以PBS取代OVA。在治疗组中，将7-mer类似物与1％CMC眼滴剂混合，最终浓度为100μM。在第20天和OVA刺激后(第21天)，将小鼠随机分配至二实验组中(每组n＝6)，接着注射20微升的7-mer或载体滴剂至小鼠鼻腔中，每日两次，共施用4天(至第23天)至小鼠鼻腔。于OVA最终刺激后24小时(第24天)，将小鼠安乐死并摘取其眼球，以4％多聚甲醛固定，隔夜处理，并以石蜡包埋。

全身性硬化的小鼠模型(SSc)

每日以皮下注射的方式将过氧化试剂(如，次氯酸(HOCl)施用至BALB/c小鼠体内，共持续6周，即可成功建立全身性硬化小鼠模型(Servettaz A等。J Immuno.2009；182:5855)。

将166微升的NaClO溶液(2.6％作为活性氯)添加至11.1毫升的KH₂PO₄溶液(100mM；pH 7.2)中以制备出HOCl。以分光亮度计于波长292nm下测定HOCl浓度(莫耳吸光系数350M-1公分-1)。BALB/c母鼠(6周龄)随机分配至实验组和对照组(每组n＝6)。每日取100微升的HOCl(混合7-mer载体或7-mer；最终浓度为0.2mM)，并以27号针头经皮下注射至老鼠的裸背，共持续6周。另外，以皮下注射磷酸缓冲液(PBS)的小鼠作为正常对照组。将小鼠安乐死，摘除其皮肤，以4％多聚甲醛固定至隔夜，再以石蜡包埋。将去石蜡化的皮肤切片，以制造商所述的步骤以梅森氏染色法(Masson's Trichrome)(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)进行染色。

测量总胶原蛋白量

利用约20％皮肤均质物测定可溶性胶原蛋白的含量。所述胶原蛋白可利用Sircol^TM可溶性胶原蛋白分析(Biocolor Ltd.,Newtownabbey)并依照制造商所提供的步骤进行定量。简而言之，取100微升的收集的上清液与1毫升的Sircol染剂混合30分钟，接着在室温下以转速10,000rpm，离心10分钟，以沈淀胶原蛋白-染剂复合物。去除上层液，将沈淀物溶于1毫升碱性试剂，并进行震荡混合。于波长540nm下测量相对吸光值。

统计

结果以平均值±标准差(mean±standard error of the mean,SEM)表示。以单因子变异数分析(1-way ANOVA)进行统计分析。P<0.05为具有显著性。

实施例1鉴别本发明合成肽的功能性残基

在此实施例中，依据「材料与方法」所述的步骤合成7-mer肽(SEQ ID NO.2)。利用「丙氨酸扫瞄」、「右旋氨基酸取代」或「特定位置换」产生7-mer类似物，其中每一指定的氨基酸残基被丙氨酸(A)、其右旋氨基酸或是特定氨基酸残基所置换。

本实施例共合成25种肽，具体而言，其中7种类似物是以「丙氨酸扫瞄」所产生的，分别命名为7-mer Da、7-mer La、7-mer Ya、7-mer Ra、7-mer Va、7-mer R2a和7-mer Sa；7种类似物是以「右旋氨基酸取代」所产生的，分别命名为7-mer DD、7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DV、7-mer DR2和7-mer DS；以及其他12种类似物是利用特定位置换所产生的，分别命名为7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L)。再者，本发明亦合成一6-mer对照肽，其删除7-mer肽上的丝氨酸(S)。本实施例合成肽(即，7-mer和其类似物)如表1所示。

表1本发明合成肽

表中以粗体表示的氨基酸代表其为右旋(D-form)氨基酸

利用MTT分析测定合成肽对于Raw284.7巨噬细胞存活率的影响。结果示于表2。

表2的结果证实，7-mer会降低Raw284.7细胞(55.7±4.24v.s.100±0.60，对照未处理细胞)的存活率。所述7-mer肽上第1和2个氨基酸残基以丙氨酸(A)取代所产生的7-mer类似物(即，7-mer Da和7-mer La)保留和7-mer肽相同的抑制活性。相对地，7-mer肽上第3、4、5、6和7个氨基酸残基以丙氨酸(A)取代所产生的7-mer类似物，失去其抑制活性，由此结果可以得知，该些特定氨基酸残基的侧链与7-mer生物活性相关。结果显示7-mer肽第一个氨基酸残基(以丙氨酸(A)取代天冬氨酸(D))和第二个氨基酸残基(以丙氨酸(A)取代亮氨酸(L))皆被取代的肽，对于7-mer生物活性仅会产生相对轻微的影响，故7-mer主链上第一个和第二个残基的可置换性(main chain flexibility)使其成为7-mer主链上可被修饰的区域。

表2含丙氨酸7-mer肽对于Raw264.7巨噬细胞存活率的影响

本发明合成肽的浓度为25μM。数据以平均值±S.E.表示(2次实验进行2重复)。

*p<0.05vs.未处理细胞。

天然的左旋氨基酸为代谢不稳定氨基酸，其易被肽酶裂解。因此，在此以右旋氨基酸对称物取代左旋氨基酸产生7-mer类似物。本实验例的结果发现，7-mer上第2、3、4、6和7个残基被右旋氨基酸取代，会使其失去抑制活性(表3)。仅于7-mer肽第一个氨基酸残基(以右旋天冬氨酸取代左旋天冬氨酸)和第二个氨基酸残基(以右旋缬氨酸取代左旋缬氨酸)仍可保留7-mer的抑制活性。

表3 7-mer右旋类似物对于Raw264.7巨噬细胞存活率的影响

本发明合成肽的浓度为20μM。数据以平均值±S.E.表示(2次实验进行2重复)。

*p<0.05vs.未处理细胞。

为了进一步研究7-mer主链上可被置换的氨基酸残基，本实验例也进行7-mer主链上特定位置氨基酸的取代置换，结果示于表4。结果显出，透过特定位置取代置换所产生的7-mer类似物，包含7-mer QK、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-merVFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L)，能保留7-mer的部分生物活性。

表4 7-mer类似物对于Raw264.7巨噬细胞存活率的影响

*p<0.05vs.未处理细胞。

由上述结果可以得知，7-mer上的第1和第2个氨基酸残基非为其抑制活性的关键，且第1和5个残基可以是左旋氨基酸或右旋氨基酸，其他残基(如，7-mer上第2、3、4、6和7个残基)则必须为左旋氨基酸。

实施例2本发明合成肽能减缓IMQ-诱导牛皮癣样皮肤炎

在此实施例中，测定本发明实施例1所公开的合成肽对于IMQ-诱导牛皮癣样皮肤炎的影响。为达此目的，每日局部施用IMQ乳霜至实验动物(8周龄小鼠)的裸背上，连续施用6日，以诱导牛皮癣样皮肤炎和脱屑(图1；图1左图)。局部施用含IMQ和7-mer肽(100μM)乳霜的小鼠，其皮肤炎和脱屑的症状显著的减少(图1；图1中图)。此外，以氯倍他松(0.02％；极有效的合成皮质类固醇)作为参考化合物，其同样地能减缓脱屑形成(图1；图1右图)。然而，不同于7-mer肽，氯倍他松会造成试验动物整个背部皮肤萎缩。

牛皮癣是由角质细胞异常增殖所造成的疾病，因此，依据「材料和方法」所述的步骤测定本发明合成肽对于角质细胞增殖的影响。结果示于图2。

图2中的照片图2(A)显示，在IMQ治疗后，有大量的BrdU嵌入至组织中，其为细胞大量增殖的指标。相对地，经过7-mer处理的皮肤，无论是经由局部施用或是腹腔注射方式，其皮肤组织中BrdU-阳性的角质细胞量显著的减少(图2(B))。

综合以上，本实施例的结果确认7-mer肽能够减缓牛皮癣样皮肤炎。

实施例3本发明合成肽能够减缓HOCl-诱导皮肤纤维化

全身性硬化(SSc)是一结缔组织疾病，其病征为皮肤和内脏纤维化、微血管损伤，以及自体免疫反应。HOCl-诱导的小鼠全身性硬化是一模仿人类主要病征的鼠类动物模型，特别是皮肤纤维母细胞的活化与增生率。在此实施例中，依据材料与方法所公开的步骤，利用HOCl-诱导小鼠SSc动物模型，来测定本发明合成肽对于皮肤纤维化的影响。结果示于图3。

如图3(A)的照片所示，相较于经PBS处理的小鼠，SSc小鼠(即，注射HOCl/载体的小鼠)真皮层中胶原蛋白基质异常致密，且胶原纤维更为紧密堆积。再者，相较于未处理的SSc小鼠(即，HOCl/经载体处理的小鼠)，以7-mer处理过的SSc小鼠，其真皮胶原蛋白的量显著的减少，此一结果和未经处理的正常对照组小鼠的量相似。

本实验例还测量了每毫克正常皮肤或直接暴露于HOCl的皮肤中，酸性和胃蛋白酶可溶性胶原蛋白含量，这些测量结果亦可支持图3(A)所示的实验结果。SSc小鼠的皮肤组织中出现大量的胶原蛋白(胶原蛋白(微克)/皮肤(毫克))，其中经7-mer肽治疗后的小鼠其胶原蛋白量显著地减少(图3(B)，经HOCl处理的SSc小鼠为169.9±7.75，经7-mer处理的SSC小鼠为99.0±5.43)。

实施例4本发明合成肽可预防脂多醣(LPS)诱导的关节炎

类风湿性关节炎(RA)是一慢性发炎疾病，其病征为滑膜发炎导致关节软骨受损，最终造成关节功能损坏。在此实施例中，关节炎动物模型的建立是将25微升含LPS(2或10微克)的2％玻尿酸玻尿酸(载体)注射至Sprague-Dawley大鼠的膝盖中；其中实验组的实验动物是注射LPS和7-mer(1mM)。于注射后3天，取下滑膜组织，经固定和H&E染色，进行组织分析。结果示于图4。

如图4的照片显示，控制组的动物(即，2％HA载体)未发生白血球浸润，此为一发炎反应的指标。相反地，于LPS注射后3天后所拍摄的照片显示，滑膜中发生滑膜细胞增殖堆积和白血球浸润的现象，此为膝盖发生发炎反应的明确指标；若施用LPS和7-mer肽，能够显著的缓解发炎反应。

综合以上结果可以得知，本发明的合成肽能够预防动物关节炎的发生。

实施例5本发明合成肽可预防过敏性结膜炎(AC)的发展

过敏性结膜炎(AC)的病征是结膜嗜伊红性球浸润。在此实施例中，本实验例测定了本发明合成肽对于AC动物模型中，OVA过敏反应的影响，本实验例依据「材料与方法」所述的步骤进行，结果示于图5(A)。

依据组织染色分析的结果(图5(B))可以得知，经OVA全身性和局部刺激后，小鼠结膜发生大量嗜伊红性球浸润的现象。然而，经7-mer处理的小鼠，其结膜中嗜伊红性球浸润的现象显著的降低(图5(C))。所述结果显示7-mer能够抑制OVA诱导过敏性动物模型中的嗜伊红性球浸润。

实施例6本发明合成肽可预防过敏性气喘发展

在此实验例中，利用已充分了解特性的过敏性呼吸道鼠动物模型来测定本发明合成肽对于过敏性气喘的影响，其中以卵蛋白作为抗原。依据「材料和方法」所公开的步骤建立实验用鼠气喘动物模型，结果示于图6(A)。

利用H&E染色进行组织学分析，结果显示经OVA刺激的小鼠，其支气管周围和血管周围间隙发生白血球浸润的现象(图6(B)，H&E染色)。浸润的发炎细胞主要是巨噬细胞和嗜伊红性球。然而，相较于OVA刺激的小鼠，经7-mer处理的小鼠中，发炎细胞浸润的现象显著的减少。此外，杯状细胞增生造成过多的黏液产生是呼吸道阻塞和重建的特征。相较于OVA刺激的小鼠，经7-mer处理的小鼠，其黏液显著的减少(图6(B)，PAS染色)。

本实验例的结果显示，7-mer能够抑制OVA-诱导过敏性肺炎发生。

虽然上文实施方式中揭露了本发明的具体实施例，然其并非用以限定本发明，本领域技术人员，在不悖离本发明原理与精神的情形下，当可对其进行各种更动与修饰，因此本发明的保护范围当以附随申请专利范围所界定者为准。

序列表

<110> 台湾基督长老教会马偕医疗财团法人马偕纪念医院

<120> 用以治疗和/或预防自体免疫疾病和发炎疾病的短合成胜

<130> P2868-2-TW

<160> 22

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)

<223> Xaa is Ala, Asp, Asn, Leu, Phe or Val

<220>

<221> VARIANT

<222> (2)

<223> Xaa is Ala, Ile, Leu or Val

<220>

<221> VARIANT

<222> (3)

<223> Xaa is Phe, Tyr or Trp

<220>

<221> VARIANT

<222> (4)

<223> Xaa is Arg or Lys

<220>

<221> VARIANT

<222> (5)

<223> Xaa is Val, Met, Ile, Leu or Gln

<220>

<221> VARIANT

<222> (6)

<223> Xaa is Arg, Gln, Lys or Pro

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> Xaa is Ser or Thr

<220>

<221> UNSURE

<222> (1)..(1)

<223> The 'Xaa' at location 1 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (2)..(2)

<223> The 'Xaa' at location 2 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (3)..(3)

<223> The 'Xaa' at location 3 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (4)..(4)

<223> The 'Xaa' at location 4 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (5)..(5)

<223> The 'Xaa' at location 5 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (6)..(6)

<223> The 'Xaa' at location 6 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (7)..(7)

<223> The 'Xaa' at location 7 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<400> 1

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer

<400> 2

Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Da

<400> 3

Ala Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 4

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer La

<400> 4

Asp Ala Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Ya

<400> 5

Asp Leu Ala Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Ra

<400> 6

Asp Leu Tyr Ala Val Arg Ser

1 5

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Va

<400> 7

Asp Leu Tyr Arg Ala Arg Ser

1 5

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer R2a

<400> 8

Asp Leu Tyr Arg Val Ala Ser

1 5

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Sa

<400> 9

Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ala

1 5

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer MK

<400> 10

Asp Leu Tyr Arg Met Lys Ser

1 5

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer KP

<400> 11

Asp Leu Tyr Lys Val Pro Ser

1 5

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer WI

<400> 12

Asp Leu Trp Arg Ile Arg Ser

1 5

<210> 13

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer IP

<400> 13

Asp Ile Tyr Arg Val Pro Ser

1 5

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer NV

<400> 14

Asn Val Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer QK

<400> 15

Asp Leu Tyr Arg Gln Lys Ser

1 5

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer VFT

<400> 16

Asp Val Phe Arg Val Arg Thr

1 5

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer VL

<400> 17

Asp Leu Tyr Arg Leu Arg Ser

1 5

<210> 18

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer R2Q

<400> 18

Asp Leu Tyr Arg Val Gln Ser

1 5

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer DV

<400> 19

Val Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 20

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer DF

<400> 20

Phe Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 21

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer DL

<400> 21

Leu Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 22

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 6-mer

<400> 22

Asp Leu Tyr Arg Val Arg

1 5

Claims

1.一种合成肽的用途，其是用以制造治疗一种与发炎相关症状、病征或疾病的医药品，其中所述合成肽由7个连续氨基酸残基所组成其序列为X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ ID NO.1)，其中，

X₁是丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；

X₂是丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸；

X₃是苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸；

X₄是精氨酸或赖氨酸；

X₅是缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或谷氨酰胺；

X₆是精氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸或脯氨酸；

X₇是丝氨酸或苏氨酸；

X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分别为左旋氨基酸；

所述合成肽如SEQ ID NO.2、3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21所示；以及

所述与发炎相关的症状、病症或疾病是牛皮癣、类风湿性关节炎、气喘、和过敏性结膜炎。

2.如权利要求1所述的用途，其中X₁和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸。

3.如权利要求2所述的用途，其中X₁是右旋氨基酸。

4.如权利要求2所述的用途，其中X₅是右旋氨基酸。