CN107614513A

CN107614513A - 用以治疗血管新生相关疾病和/或症状的短合成肽

Info

Publication number: CN107614513A
Application number: CN201680024068.0A
Authority: CN
Inventors: 曹友平; 何宗权
Original assignee: MacKay Memorial Hospital
Current assignee: MacKay Memorial Hospital
Priority date: 2015-04-27
Filing date: 2016-04-14
Publication date: 2018-01-19
Anticipated expiration: 2036-04-14
Also published as: KR20170138547A; CA2983977A1; CN107614513B; SG11201708657XA; KR102093003B1; JP6529606B2; US10463709B2; WO2016173402A1; EP3288961B1; EP3288960B1; WO2016173401A1; EP3288961B8; CA2983977C; TW201638104A; MY194448A; EP3288961A4; JP6496840B2; AU2016255021A1; JP2018515459A; AU2016255020A1

Abstract

在此公开一种合成肽及含有所述肽的组合物，其是用以治疗和或预防一血管新生相关疾病和/或症状。本发明内容亦公开一种治疗和或预防一血管新生相关疾病和/或症状的方法，所述方法包含施用一组合物至有需要的个体，其中所述组合物含一治疗有效量的本发明内容的合成肽。

Description

用以治疗血管新生相关疾病和/或症状的短合成肽

本申请案主张2015年4月27日提出申请的美国临时申请案第62/152,980号的所有优惠，该案全部内容并入本文中作为参照。

技术领域

本发明是有关于发现一种短合成肽，及其治疗和/或预防血管新生相关疾病和/或症状的用途。

背景技术

血管新生(angiogenesis)是指新生血管的形成、发展及增长。一般而言，血管新生受到严格的调控，主要是透过诱导血管形成的因子和抑制或妨碍此一过程的因子间的微妙平衡来调控。当此一平衡状态改变时，通常会造成病理性血管新生。血管新生诱导的或相关的病理进程，涵盖多种疾病和/或症状，例如，癌症、血管异常、感染、心血管疾病以及损伤。

因此，本领域亟需一种改良的医药品和或治疗和/或预防血管新生相关疾病和/或症状的方法。

发明内容

本发明内容是有关于发展新颖化合物和/或用以治疗血管新生相关疾病和/或症状的方法。

本发明内容的第一方面提供了一种能用以治疗血管新生相关疾病和/或症状的短合成肽。所述短合成肽是由7个连续氨基酸残基所组成，其序列为X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ IDNo.1)，其中，

X₁是丙氨酸(alanine,A)、天冬氨酸(aspartic acid,D)、天冬酰胺(asparagine,N)、亮氨酸(leucine,L)、苯丙氨酸(phenylalanine,F)或缬氨酸(valine,V)；

X₂是丙氨酸(alanine,A)、异亮氨酸(isoleucine,I)、亮氨酸(leucine,L)或缬氨酸(valine,V)；

X₃是苯丙氨酸(phenylalanine,F)、酪氨酸(tyrosine,Y)或色氨酸(tryptophan,W)；

X₄是精氨酸(arginine,R)或赖氨酸(lysine,K)；

X₅是缬氨酸(valine,V)、甲硫氨酸(methionine,M)、异亮氨酸(isoleucine,I)、亮氨酸(leucine,L)或谷氨酰胺(glutamine,Q)；

X₆是精氨酸(arginine,R)、谷氨酰胺(glutamine,Q)、赖氨酸(lysine,K)或脯氨酸(proline,P)；

X₇是丝氨酸(serine,S)或苏氨酸(threonine,T)；以及

X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分别是左旋氨基酸。

依据本发明内容部分实施方式，其中X₁和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸，且所述合成肽具有SEQ ID No.2的氨基酸序列(本文以7-mer表示)。在一实施例中，X₁是右旋氨基酸，例如，D-天冬氨酸(本文以7-mer DD表示)。在其他实施例中，X₅是右旋氨基酸，例如，D-缬氨酸(本文以7-mer DV表示)。

依据本发明内容较佳的实施方式，所述合成肽具有SEQ ID No.3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。在一实施例中，所述合成肽具有SEQ IDNo.3的氨基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.4的氨基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.10的氨基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.11的氨基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.12的氨基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.13的氨基酸序列(本文以7-merIP表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.14的氨基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他的实施例中，所述合成肽具有SEQID No.15的氨基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.16的氨基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.17的氨基酸序列(本文以7-mer V→L表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.18的氨基酸序列(本文以7-mer R2→Q表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.19的氨基酸序列(本文以7-mer D→V表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.20的氨基酸序列(本文以7-mer D→F表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.21的氨基酸序列(本文以7-mer D→L表示)。

本发明内容的第二方面为一种提供一医药品和/或一组合物，其是用以治疗一血管新生相关疾病和/或症状。所述医药品或组合物包含一有效量的如上所述的合成肽，以及一药学可接受载体。

依据本发明内容部分较佳的实施方式，其中X₁、和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸，且所述合成肽包含SEQ ID No.2的氨基酸序列。在一实施例中，X₁是右旋氨基酸，例如，D-天冬氨酸(本文以7-mer DD表示)。在其他实施例中，X₅是右旋氨基酸，例如，D-缬氨酸(本文以7-mer DV表示)。

依据本发明内容较佳实施方式，所述合成肽具有SEQ ID No.3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。在一实施例中，所述合成肽具有SEQ IDNo.3的氨基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.4的氨基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.10的氨基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.11的氨基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.12的氨基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.13的氨基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.14的氨基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.15的氨基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.16的氨基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.17的氨基酸序列(本文以7-mer V→L表示)。在其他实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.18的氨基酸序列(本文以7-mer R2→Q表示)。在其他实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.19的氨基酸序列(本文以7-mer D→V表示)。在其他实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.20的氨基酸序列(本文以7-mer D→F表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.21的氨基酸序列(本文以7-mer D→L表示)。

本发明内容的医药品或组合物治疗的血管新生相关疾病和/或症状是选自：癌症、眼部疾病、血管异常、感染、心血管疾病以及损伤所组成的群组中。

在某些实施方式中，本发明内容的医药品或组合物可用以治疗癌症，其是选自：乳癌(breast cancer)、宫颈癌(cervical cancer)、卵巢癌(ovary cancer)、子宫内膜癌(endometrial cancer)、黑色素瘤(melanoma)、膀胱癌(bladder cancer)、肺癌(lungcancer)、胰脏癌(pancreatic cancer)、大肠癌(colon cancer)、前列腺癌(prostatecancer)、淋巴系造血肿瘤(hematopoietic tumors of lymphoid lineage)、骨髓性白血病(myeloid leukemia)、甲状腺癌(thyroid cancer)、甲状腺滤泡癌(thyroid follicularcancer)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)、起源于间叶细胞的肿瘤(tumor of mesenchymal origin)、黑色素瘤(melanoma)、葡萄膜黑色素瘤(uvealmelanoma)、畸胎癌(teratcarcinoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、神经胶质瘤(glioma)、恶性胶质瘤(glioblastoma)、角化棘皮瘤(keratoacanthomas)、肾癌(renalcancer)、间变性大细胞淋巴瘤(analplastic large cell lymphoma)、食道鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma)、肝细胞癌(heptatocellular carcinoma)、滤泡树突状细胞癌(follicular dentritic cell carcinoma)、肠癌(intestinal cancer)、肌肉浸润性癌症(muscle invasive cancer)、精囊肿瘤(seminal vesicle tumor)、上皮癌(epidermal carcinoma)、脾癌(spleen cancer)、膀胱癌(bladder cancer)、头颈癌(headand neck cancer)、胃癌(stomach cancer)、骨癌(bone cancer)、脑癌(brain cancer)、视网膜癌(cancer of retina)、胆道癌(biliary cancer)、小肠癌(small bowel cancer)、唾液腺癌(salivary gland cancer)、子宫肉瘤(uterine sarcoma)、睾丸癌(cancer oftesticles)、结缔组织癌(cancer of connective tissue)、前列腺肥大(prostatichypertrophy)、骨髓发育不良(myelodysplasia)、瓦登斯特隆巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia)、鼻咽癌(nasopharyngeal cancer)、神经内分泌癌(neuroendocrine cancer)、间皮瘤(mesothelioma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、食管胃癌(oesophagogastric)、输卵管癌(fallopian tubecancer)、腹膜癌(peritoneal cancer)、浆液性乳头状苗勒氏癌(papillary serousmullerian cancer)、恶性腹水(malignant ascites)、胃肠道间质瘤(gastrointestinalstromal tumor,GIST)、李弗劳明综合征(Li-Fraumeni syndrome)以及希佩尔-林道综合征(Von Hippel-Lindau syndrome,VHL)所组成的群组中。

所述淋巴系造血肿瘤可以是白血病(leukemia)、急性淋巴细胞白血病(acutelymphocytic leukemia)、慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia)、B细胞淋巴瘤(B-cell lymphoma)、伯奇氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、多发性骨髓癌(multiple myeloma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)或非何杰金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma)。所述骨髓性白血病可以是急性骨髓性白血病(acute myelogenousleukemia,AML)或慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)。所述起源于间叶细胞的肿瘤是纤维肉瘤(fibrosarcomas)或横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcomas)。

在某些实施例中，所述癌症是转移性癌症；在较佳的实施例中，所述癌症是转移性肺癌(metastatic lung cancer)。

在其他实施例中，所述癌症是子宫肉瘤(uterine sarcoma)。

依据部分实施方式，本发明内容的医药品或组合物是用以治疗眼部疾病，其是选自：角膜血管新生(corneal neovascularization)、脉络膜血管新生(choroidalneovascularization,CNV)、糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy)、早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity)、老年性黄斑部病变(age-related maculardegeneration,AMD)、青年性黄斑部病变(juvenile macular degeneration)、糖尿病性黄斑水肿(diabetic macular edema)、色素性视网膜炎(retinitis pigmentosa)、沙眼(trachoma)、青光眼(glaucoma)、干眼综合征(dry eye syndrome)、神经眼部疾病(neuro-ophthalmic disease)、视网膜动脉阻塞(retinal artery occlusion)、眼色素层炎(uveitis)、脉络膜炎(choroiditis)、中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serouschorioretinopathy,CSC)、中心性渗出性脉络膜视网膜病变(central exudativechorioretinopathy,CEC)、息肉状脉络膜血管病变(polypoidal chorodialvasculopathy,PCV)、血管新生性青光眼(neovascular glaucoma)、血管新生性黄斑部病变(neovascular maculopathy)和雷射后并发症(post-laser complications)所组成的群组中。

在一实施例中，所述眼部疾病是老年性黄斑部病变(AMD)。

在另一实施例中，所述眼部疾病是糖尿病性视网膜病变。

依据部分实施方式，本发明内容的医药品或组合物可用以治疗血管异常，其是选自：血管通透性(vascular permeability)异常、血浆渗漏(plasma leakage)、静脉畸形(venous malformation,VM)、血管母细胞瘤(hemangioblastoma)、血管瘤(hemangiomas)、脑动静脉畸形(brain arteriovenous malformations,BAVM)、动脉硬化(arteriosclerosis)、血栓症(thrombosis)、脉络膜血管新生(choroidalneovascularization,CNV)以及奥斯勒-惠勃综合征(Osler-Weber syndrome)所组成的群组中。

在一较佳的实施例中，所述血管异常是脉络膜血管新生(CNV)，亦称为湿式老年性黄斑部病变(wet type age-related macular degeneration,wet type age-relatedAMD)。

依据另一实施方式，本发明内容医药品或组合物可用以治疗感染，其可以是细菌感染、病毒感染、真菌感染或原虫感染。

依据其他实施方式，本发明内容的医药品或组合物可用以治疗心血管疾病，其是选自：动脉粥样硬化(atherosclerosis)、心肌血管新生(myocardial angiogenesis)、高黏滞综合征(hyperviscosity syndromes)、静脉阻塞(vein occlusion)、动脉阻塞(arteryocclusion)、颈动脉阻塞疾病(carotid obstructive disease)、Osler-Weber-Rendu疾病(Osler-Weber-Rendu disease)、心肌炎(myocarditis)、脑血管病变(cerebrovascularaccident)、二尖瓣闭锁不全(mitral valve regurgitation)、低血压(hypotension)、动脉或移植后动脉粥样硬化(arterial or post-transplantational artherosclerosis)、纤维化(fibrosis)、血栓症(thrombosis)以及血小板聚集(platelet aggregation)所组成的群组中。

依据又一实施方式，本发明内容的医药品或组合物是可用以治疗损伤，其可以是因意外(accident)或组织移植(tissue transplant)引起的伤口(wound)或创伤(trauma)。

本发明内容的医药品或组合物施用至所述个体的方式，可经由血管传递(intravascular delivery)(例如，注射(injection)或灌注(infusion))、经口(oral)、肠内(enteral)、直肠(rectal)、肺(pulmonary(例如，吸入(inhalation))、经鼻(nasal)、局部施用(topical)(包含经皮(transdermal)、经颊(buccal)以及舌下(sublingual))、膀胱内(intravesical)、玻璃体内(intravitreal)、腹膜内(intraperitoneal)、阴道(vaginal)、经脑传递(brain delivery)(例如，脑室注射(intracerebroventricular)和颅内注射(intracerebral))、经CNS传递(例如，鞘内(intrathccal)、椎旁(perispinal)和椎内(intra-spinal))或肠外(parenteral)(例如，皮下(subcutaneous)、肌肉内(intramuscular)、静脉内(intravenous)和皮内(intradermal))、黏膜给药(transmucosaladministration)或通过移植(implant)或其他公知的给药途径。

本发明内容第三方面是有关于一种治疗一患有血管新生相关疾病和/或症状个体的方法。所述方法包含以下步骤：施用本发明内容任一实施方式所示的医药品或组合物至所述个体，以改善或减缓血管新生相关疾病和/或症状的病征。

依据较佳的实施方式，本发明内容的方法所治疗的血管新生相关疾病和/或症状是癌症、眼部疾病、血管异常、感染、心血管疾病或损伤。

在较佳的实施例中，本方法所治疗的癌症是选自于：乳癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰脏癌、大肠癌、前列腺癌、淋巴系造血肿瘤、骨髓性白血病、甲状腺癌、甲状腺滤泡癌、骨髓增生异常综合征、起源于间叶细胞的肿瘤、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸胎癌、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、角化棘皮瘤、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、食道鳞状细胞癌、肝细胞癌、滤泡树突状细胞癌、肠癌、肌肉浸润性癌症、精囊肿瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、头颈癌、胃癌、骨癌、脑癌、视网膜癌、胆道癌、小肠癌、唾液腺癌、子宫肉瘤、睾丸癌、结缔组织癌、前列腺肥大、骨髓发育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神经内分泌癌、间皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管癌、输卵管癌、腹膜癌、浆液性乳头状苗勒氏癌、恶性腹水、胃肠道基质瘤、李弗劳明综合征以及希佩尔-林道综合征所组成的群组中。

所述淋巴系造血肿瘤可以是白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴性白血病、B细胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多发性骨髓癌、何杰金淋巴瘤或非何杰金淋巴瘤。所述骨髓性白血病是急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病。所述起源于间叶细胞的肿瘤是纤维肉瘤或横纹肌肉瘤。

在部分实施例中，所述癌症是转移性癌症。在较佳的实施例中，所述癌症是转移性肺癌。

在其他实施例中，所述癌症是子宫肉瘤。

依据部分实施方式，眼部疾病是角膜血管新生、脉络膜血管新生、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、老年性黄斑部病变、青年性黄斑部病变、糖尿病性黄斑水肿、色素性视网膜炎、沙眼、青光眼、干眼综合征、神经眼部疾病、视网膜动脉阻塞、眼色素层炎、脉络膜炎、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、中心性渗出性脉络膜视网膜病变、息肉状脉络膜血管病变、血管新生性青光眼、血管新生性黄斑部病变或雷射后并发症。

在一实施例中，所述眼部疾病是老年性黄斑部病变(AMD)。

在其他实施例中，所述眼部疾病是糖尿病性视网膜病变。

依据某些实施方式，所述血管异常是选自于：血管通透性、血浆渗漏、静脉畸形、血管母细胞瘤、血管瘤、脑动静脉畸形瘤、动脉硬化、血栓症、脉络膜血管新生以及奥斯勒-惠勃综合征所组成的群组中。

在一较佳的实施方式，所述血管异常是脉络膜血管新生(CNV)。

依据又一实施方式，所述感染是细菌感染，病毒感染，真菌感染或原虫感染。

依据另一实施方式，所述心血管疾病是选自于：动脉粥样硬化、心肌血管新生、高黏滞综合征、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞疾病、Osler-Weber-Rendu疾病、心肌炎、脑血管病变、二尖瓣闭锁不全、低血压、动脉或移植后动脉粥样硬化、纤维化、血栓症以及血小板聚集所组成的群组中。

依据其他实施方式，所述损伤是因意外或组织移植引起的伤口或创伤。

依据本发明内容任一实施方式，所述个体为人类。

在参阅下文实施方式后，本发明本领域技术人员当可轻易了解本发明的基本精神及其他发明目的，以及本发明所采用的技术手段与实施方式。

附图说明

本专利或申请案内容至少包含一张彩色图示。只要缴交必要的费用即可向主管机关申请附有彩色图示的本案公开说明书复印件。参照下列附图将可更理解本发明的详细内容，所附图式的说明如下：

图1为依据本发明内容一实施方式所示的直线图，其绘示由丙氨酸扫瞄(alaninescanning)所产生的7-mer类似物对于VEGF-诱导RPMI8226细胞增殖的影响，共进行三次分别独立的试验，所得到数据以平均值±标准偏差(mean±S.D.)表示；

图2为依据本发明内容一实施方式所示的直线图，其绘示通过特定位置换所产生的7-mer类似物对于VEGF-诱导RPMI8226细胞增殖的影响，共进行三次分别独立的试验，所得到数据以平均值±标准偏差表示；

图3为为依据本发明内容一实施方式所示的直线图，其绘示通过右旋(D-form)氨基酸置换所产生的7-mer类似物对于VEGF-诱导RPMI8226细胞增殖的影响，共进行三次分别独立的试验，所得到数据以平均值±标准偏差表示；

图4为依据本发明内容一实施方式所示的7-mer、7-mer DD和7-mer DV对于VEGF-诱导RPMI8226细胞增殖的剂量依赖性的影响，共进行三次分别独立的试验，所得到数据以平均值±标准偏差表示；

图5为依据本发明一实施方式所示的7-mer肽对于内皮细胞于基质胶上形成毛细管样的管状结构的照片；

图6为依据本发明一实施方式所示，7-mer肽对于诱导人脐带静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡的影响；

图7为依据本发明一实施方式所示的大鼠主动脉环的照片，以显示本发明合成肽对于VEGF-诱导微血管出芽生长的影响；

图8为依据本发明一实施方式所示的照片，以显示7-mer肽对于VEGF-诱导角膜血管新生的影响；

图9为依据本发明一实施方式所示，7-mer对于异种移植人类子宫肉瘤的影响；

图10为依据本发明一实施方式所示的照片，以显示7-mer和7-merDD肽对于B16-F10黑色素瘤转移的影响；

图11为依据本发明一实施方式所示，7-mer肽对于糖尿病小鼠视网膜中血管渗漏的影响，其中图11(A)为荧光染色照片，以显示施用载体、对照肽或7-mer肽处理糖尿病小鼠视网膜的效果，图中箭头标示处为小鼠视网膜血管病灶处，且以FITC-BSA堆积作为出血指标；图11(B)为小鼠视网膜出血区域定量结果的柱形图；

图12为依据本发明一实施方式所示，7-mer肽对于糖尿病大鼠视网膜中血管渗漏的影响，其中图12(A)为荧光染色照片，以显示施用载体、对照肽或7-mer处理糖尿病视网膜的效果，图中箭头标示处为视网膜血管病灶处，且以FITC-BSA堆积作为出血指标；图12(B)为视网膜出血区域定量结果的柱形图；以及图12(C)为视网膜全区中，FITC-BSA堆积的定量结果；

图13为依据本发明一实施方式所示7-mer肽对于视网膜雷射损伤的影响，其中图13(A)为眼底荧光血管造影照片，其显示7-mer肽的影响；以及图13(B)为图13(A)定量结果的柱形图，由视网膜专家评估视网膜出血区域的量，并以不同的荧光渗漏等级表示，第0级：无高度荧光、第1级：有高度荧光且未发生渗漏、第2a级：有高度荧光且发生晚期渗漏、第2b级：明亮的高度荧光且在未处理区域外有晚期渗漏；以及

图14为依据本发明一实施方式所示本发明合成肽对于大鼠CNV病灶处的影响，其中图14(A)为经载体、7-mer或7-mer DD处理的照片，箭头标示处为雷射点；以及图14(B)为图14(A)定量分析的柱形图。

具体实施方式

为了使本发明内容的叙述更加详尽与完备，下文针对了本发明的实施方式与具体实施例提出了说明性的描述；但这并非实施或运用本发明具体实施例的唯一形式。实施方式中涵盖了多个具体实施例的特征以及用以建构与操作这些具体实施例的方法步骤与其顺序。然而，亦可利用其他具体实施例来达成相同或均等的功能与步骤顺序。

1.名词定义

为阅读方便，将本文中会使用到的名词定义集中在此一并说明。除非另有所指，否则本文中所用到的科学或技术性名词与相关领域具普通知识者所理解的内容相同。

在此处「肽」(peptide)一词是指氨基酸残基所组成的聚合物。「合成肽」(synthetic peptide)一词则代表此肽并未包含存在于自然界的完整蛋白质分子。此种肽之所以是「合成的」，表示其乃是由人类利用诸如化学合成、重组遗传技术或将整个抗原切断之类的技术手段所制成的。于本说明书中，任何氨基酸残基于一肽中的位置是由该肽的N端起算。当未具体指出氨基酸为右旋或左旋氨基酸，所述氨基酸可以是左旋氨基酸或者是右旋氨基酸，除非上下文明示所述氨基酸为特定异构物。所述「右旋氨基酸(D-aminoacid)」和「左旋氨基酸(L-amino acid)」是指氨基酸的绝对构型，非为平面偏光的特定旋转方向。本文中氨基酸的用法(usage)与相领域技术人士所使用的标准用法相同。本文中氨基酸可以1个字母或3个字母表示，例如以工业财产信息和文件手册内所示的ST.25标准命名。

在此，蛋白质/肽氨基酸序列的些微变异皆为本发明权利范围所涵盖。举例来说，变异的氨基酸序列至少保留70％、71％、72％、73％、75％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％以及99％的相似度。本发明合成肽可经由修饰以改变肽特征且不影响其生理活性。举例而言，某些氨基酸经改变和/或删除后，不会影响本发明内容所述肽的生理活性(即，治疗血管新生相关疾病和/或症状的功效)。具体而言，氨基酸的保守性置换是可被预期的。所述保守性置换是指氨基酸侧链被同一类的氨基酸所取代。一般而言，编码的氨基酸分类如下：(1)酸性氨基酸＝天门冬氨酸(aspartate)、谷氨酸(glutamate)；(2)碱性氨基酸＝赖氨酸(lysine)、精氨酸(arginine)、组氨酸(histidine)；(3)非极性氨基酸＝丙氨酸(alanine)、缬氨酸(valine)、亮氨酸(leucine)、异亮氨酸(isoleucine)、脯氨酸(proline)、苯丙氨酸(phenylalanine)、甲硫氨酸(methionine)、色氨酸(tryptophan)；以及(4)未带电极性氨基酸＝甘氨酸(glycine)、天冬酰胺(asparagine)、谷氨酰胺、半胱氨酸(cysteine)、丝氨酸(serine)、苏氨酸(threonine)、酪氨酸(tyrosine)。在较佳的实施例中、所述氨基酸的分类为:丝氨酸(S)和苏氨酸(T)为脂肪族羟基族(aliphatic-hydroxyfamily)；天冬酰胺(N)以及谷氨酰胺为含酰胺族(amide-containing family)；丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)以及异亮氨酸(I)为脂肪族(aliphatic family)；以及苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)和酪氨酸(Y)为芳香族(aromatic family)。举例而言，可以预期的是以异亮氨酸(I)或缬氨酸(V)取代亮氨酸(L)、以谷氨酸(E)取代天冬氨酸(D)、以丝氨酸(S)取代苏氨酸(T)、或以一结构相似的氨基酸取代一氨基酸，此一置换不会对氨基酸分子的结合或其特性产生重大影响，特别是所述置换并未包含氨基酸的框架区域(framework site)。可通过分析肽衍生物的专一性活性，确定氨基酸的修饰是否改变一功能性肽。本领域技术人员可制备蛋白质/肽的片段或类似物。较佳的片段或衍生物的氨端或羧端发生于功能区域。在一实施例中，本发明合成肽中的一个氨基酸残基(例如，缬氨酸(V))被保守性置换(例如，被亮氨酸(L)置换)。在其他实施例中，本发明合成肽中的两个氨基酸残基被其他适当的氨基酸保守性置换；例如，缬氨酸(V)以及精氨酸(R)分别被其他对氨基酸所取代，包含，但不限于，甲硫氨酸(M)和赖氨酸(K)、赖氨酸(K)和脯氨酸(P)、色氨酸(W)和异亮氨酸(I)、异亮氨酸(I)和脯氨酸(P)、天冬酰胺(N)和缬氨酸(V)，以及谷氨酰胺(G)和赖氨酸(K)。

所述「治疗(treatment)」一词是指预防性(如，预防用药)、疗愈性或缓和性的处置，藉以达到所欲的药学和/或生理学效果；例如，推迟或抑制癌生长或改善器官(例如，脑)的损伤。上述的效果是指能够部分或完全地治愈或预防个体出现所述疾病的症状。所述「治疗(Treatment)」包含预防、治疗或减缓一哺乳类的疾病，尤其是人类。所述治疗包含：(1)预防(如，预防用药)、治疗或减缓一个体的疾病或症状，其中所述个体可能患有疾病但尚未被诊断；(2)抑制一疾病(即，降低发展出与该疾病、异常和/或病症相关的病理变化的风险)；或(3)治愈一疾病(即，减少与所述疾病相关的症状)。

所述「施用(administered)(administering)(administration)」一词是指将本发明的肽或组合物提供给个体。所述传递方式包含，但不限于，静脉内、肌肉内、腹膜内、动脉内、颅内、结膜内或皮下传递方式。

在此处，「有效量(effective amount)」一词是指一成分的用量足以招致所欲的反应或效果，即，能有效治疗疾病。以治疗干眼综合征为例，一药剂(如，化合物、合成肽、编码治疗肽的核酸)，其能用以降低、预防、推迟或治愈干眼综合征的相关症状。一药剂的有效量不必然能够治愈一疾病或症状，但能推迟、阻碍或预防疾病或症状的发生，或推迟疾病或症状相关的病征。所术治疗有效量可分成一、二或更多剂量于单一施用剂量型式，且可于一指定期间内施用一次、二次或更多次。

所述「个体(subject)」或「患者(patient)」一词可交互使用，且在此是指可接受本发明内容的合成肽和/或方法的动物(包含，人类)。所述「哺乳类(mammal)」一词涵盖哺乳纲的所有成员，包含：人类、灵长类动物、家畜和农畜。举例而言，所述家畜或农畜可以是兔子、猪、羊和牛。所述哺乳类亦可涵盖动物园或竞赛用动物、宠物，以及啮齿类(如，小鼠和大鼠)。除非另有指明，「个体」或「患者」一般包含雄性与雌性。再者，所述「个体」或「患者」包含可从本发明内容的治疗方法得到良好治疗效果的动物。举例而言，所述「个体」或「患者」包含，但不限于，人类、大鼠、小鼠、天竹鼠、猪、猴子、猪、羊、牛、马、狗、猫、鸟和禽类。在一实例中，所述患者为人类。

「药学上可接受载体、赋形剂或安定剂」一词，是指一适合施用于眼睛的载体、药剂或化合物。「眼用组合物(ophthalmic composition)」一词是指可施用于眼睛的组合物，或者可用以处理与眼睛接触的装置(例如，隐形眼镜)。

在此，所述「血管新生相关疾病和/或症状」一词是指疾病进程或表现病征中促进血管新生的病理学疾病和/或症状。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，「约」通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，「约」一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本发明本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其他相似者)均经过「约」的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随申请专利范围所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。在此处，将数值范围表示成由一端点至另一段点或介于二端点之间；除非另有说明，此处所述的数值范围皆包含端点。

除非特别指明，否则本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。

2.实施方式的详细说明

本发明至少一部份是基于发现一短合成肽，其能治疗和/或预防个体的血管新生相关疾病和/或症状而发展出来的。据此，本发明提供以包含本文新发现的合成肽的组合物及方法来治疗和/或预防血管新生相关疾病和/或症状。

2.1本发明的合成肽

本发明内容的短合成肽是由7个连续氨基酸残基所组成，其序列为X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ ID No.1)，其中，

X₁是丙氨酸(A)、天冬氨酸(D)、天冬酰胺(N)、亮氨酸(L)、苯丙氨酸(F)或缬氨酸(V)；

X₂是丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)或缬氨酸(V)；

X₃是苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；

X₄是精氨酸(R)或赖氨酸(K)；

X₅是缬氨酸(V)、甲硫氨酸(M)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)或谷氨酰胺(Q)；

X₆是精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、赖氨酸(K)或脯氨酸(P)；

X₇是丝氨酸(S)或苏氨酸(T)；以及

X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分别为左旋氨基酸。

依据某些实施方式，本发明的合成肽中，其中X₁和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸，且所述合成肽具有SEQ ID No.2的氨基酸序列。在一实施例中，X₁是右旋氨基酸，例如，D-天冬氨酸(本文以7-mer DD表示)。在其他实施例中，X₅是右旋氨基酸，例如，D-缬氨酸(本文以7-mer DV表示)。

依据其他较佳的实施方式，所述合成氨基酸具有SEQ ID No.3或4的氨基酸序列。在一实施例中，所述合成氨基酸具有SEQ ID No.3的氨基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在其他实施例中，所述合成氨基酸具有SEQ ID No.4的氨基酸序列(本文以7-mer La表示)。

依据其他较佳的实施方式，所述合成肽具有序列编号10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。在一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.10的氨基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.11的氨基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.12的氨基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在又一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.13的氨基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在又另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.14的氨基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.15的氨基酸序列(本文以7-mer V→QK表示)。在另一实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.16的氨基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.17的氨基酸序列(本文以7-mer V→L表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.18的氨基酸序列(本文以7-mer R2→Q表示)。在又一实施方式中，所述合成肽具有SEQ ID No.19的氨基酸序列(本文以7-mer D→V表示)。在其他实施例中，所述合成肽具有SEQ ID No.20的氨基酸序列(本文以7-mer D→F表示)。在又一实施例中，，所述合成肽具有SEQ ID No.21的氨基酸序列(本文以7-mer D→L表示)。

依据部分实施方式，将位于SEQ ID No.2的C-端上的丝氨酸(S)删除后，所得到的修饰肽序列命名为对照肽(本文以DLYRVR表示，SEQ ID No.22)，该肽不具有本发明内容所述的生物活性。因此，位于C-端的丝氨酸(S)对于维持本发明合成肽治疗和/或预防血管新生相关疾病和/或症状活性具有重要性，此一氨基酸残基仅能被保守性氨基酸残基取代，但不可被删除。

依据本发明内容某些实施方式，其中序列编号；2包含至少一右旋氨基酸残基，所产生的7-mer右旋类似物(analogues)(即，7-mer DD和7-mer DV)如本说明书实施例1的表1所示。在这些右旋类似物中，7-mer(SEQ ID No.2)上的酪氨酸(Y)、精氨酸(R)，以及丝氨酸(S)必须为左旋氨基酸，否则会造成合成肽失去对于血管新生、发炎和/或纤维化相关疾病和/或症状的生物活性(即，7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DR2和7-mer DS，参见实施例1的表1)。

依据本发明内容其他实施方式，7-mer上任一氨基酸残基可分别被丙氨酸(A)所取代，产生7-mer类似物(即，7-mer Da和7-mer La)，如本说明书实施例1的表1所述。在这些类似物中，7-mer(SEQ ID No.2)上的天冬氨酸(D)或亮氨酸可以被丙氨酸(A)取代，且不会失去其对于血管新生、发炎和/或纤维化相关疾病和/或症状的生物活性，但7-mer上其他氨基酸残基被取代(即，7-mer上第3个至第7个氨基酸位置)，则会造成7-mer氨基酸失去生物活性。

依据本发明内容又一实施方式，7-mer上至少二氨基酸残基分别被其他氨基酸取代，产生如实施例1中表1所示的7-mer类似物(即，7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-merIP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L))。以特定位置换所产生的7-mer类似物，仍保有7-mer肽部分活性，其中7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L)皆展现与7-mer类似的相同活性(SEQ ID No.2)。

本发明的合成肽可通过现有技术所述的任一标准肽合成方法所制成。在一实施方式中，本发明的合成肽是以一固相肽合成器(ABI433A肽合成器；Applied BiosystemsInc.；Life Technologies Corp.；Foster City,CA,USA)并依据操作手册所合成。

另外，本发明的合成肽可利用重组技术制备。举例而言，可利用重组技术将编码本发明肽的核酸序列嵌入至一表达载体中，且其中所述核酸序列可与一调控序列连结，以在宿主细胞内表达本发明肽。接着，可将所述载体送入一合适的宿主细胞内表达本发明的肽。经表达的重组肽可以藉由硫酸铵沉淀法和管柱分划色层分析法纯化，并依据本发明内容各实施例所示的方法进行活性测试。

上述核酸或多核苷酸可利用已知的生物降解聚合物微粒或微囊传递装置传送。另外，亦可利用常规方法以脂质体包复核酸，以供宿主吸收所述核酸。所述多核苷酸可单独加载或与其他组织专一性抗体共同加载至所述传递载体中。此外，可制备一分子接合物(molecular conjugate)，其是由质体或其他载体以静电或共价力连结聚-L-赖氨酸。此外，本发明亦可利用已知的组织专一性转录调节组件(tissue-specific transcriptionalregulatory elementst)，进行组织专一性标定。也可在不使用传递载体的情形下将「裸DNA(naked DNA)」传递至肌肉内、皮内或皮下的位置，以进行胞内表达(in vivo expression)。

可对本发明合成肽的N端或C端进行修饰。举例而言，N端修饰包含，但不限于，N-醣基化、N-烷基化和N-乙酰化氨基酸。一终端修饰包含聚乙烯二醇化(pegylation)。在一实例中，C端修饰为一C端胺基化氨基酸。在可任选的实施方式中，一或多个肽键结可以被一非肽链所取代，个别的氨基酸基团的修饰，可通过试剂处理，以与特定的侧链或终端残基反应。

于所述合成肽可经由化学修饰，于多个不同的部位，加入不同的官能基。官能基可以被添加至所述合成肽的终端。在某些实施方式中，所述官能基能改善肽一或多个特性的活性，例如，改善合成肽的稳定性、效能或选择性；改善所述合成肽通过细胞膜和/或组织屏障的穿透效率；改善组织定位能力；降低毒性或清除率；以及改善抵抗细胞帮浦的排除，以及其他类似的活性。在非限制的实施例中，适当的官能基能用以传递肽黏附至细胞上。举例来说，降低肽的亲水性，以及增加其亲脂性，这些可任选地官能基于活体内裂解较佳，例如在胞内以水解或酵素分解的方式裂解皆可。水解保护基包含酯、碳酸酯以及氨基甲酸酯保护基。胺保护基包含烷氧基以及芳氧羰基。羧酸保护基包含脂族(aliphatic)、苯甲基(benzylic)和芳酯(aryl esters)。在某些可任选的实施方式中，于本发明合成肽的天冬氨酸(D)的侧链的羧酸基是被保护的；较佳为，通过甲基、乙基、苯基或经取代的苯酯基。

可利用保守性或非保守性置换方式，以「拟肽有机基团(peptidomimetic organicmoiety)」取代本发明合成肽中任一氨基酸残基。所述拟肽有机基团与取代的氨基酸于必要的部位较佳是，但非必要，具有类似的立体空间、电子或构型特性，且被视为保守性置换。较佳是，但非必要，可利用拟肽来抑制酵素造成肽降解或其他降解过程。所述肽较佳是，但非必要，可通过有机合成技术产生。在非限制的实施例中，合适的拟肽包含酰胺的同电子排列体(isosteres of amide bonds)、3-氨-2-丙二酮-6-羧酸(3-amino-2-propenidone-6-carboxylic acid)、羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸酯(hydroxyl-1,2,3,4-tetrahydro-isoquinoline-3-carboxylate)，以及组氨酸异喹啉羧酸(histidineisoquinolone carboxylic acid)。

可非必要地对本发明合成肽的任一部分进行化学修饰，例如，添加官能基。所述修饰可于合成本发明肽的过程中进行。在非限制的实施例中，所述修饰的类型包含，但不限于，羧甲基化(carboxymethylation)、酰化(acylation)、磷酸化(phosphorylation)、糖基化(glycosylation)或脂酰化(fatty acylation)。醚键可任选地用以结合丝氨酸(S)或苏氨酸(T)羟基至一糖类的羟基。酰胺键可任选地用以结合谷氨酸或天门冬氨酸的羧基至一糖类的胺基。缩醛或酮键结可任选地形成于氨基酸与碳水化合物之间。

2.2用以治疗血管新生相关疾病和/或症状的组合物

本发明合成肽能用以治疗和/或预防一患有血管新生相关疾病和/或症状的个体。

据此，本发明另一方面是提供一包含本发明合成肽的医药品，其是用以治疗血管新生相关疾病和/或症状，其包含，但不限于，癌症、眼部疾病、血管异常、感染、心血管疾病和损伤。

在一实施方式中，所述医药品是用以治疗癌症，且于治疗后，肿瘤的体积、生长速率、转移和/或上皮变间质型的转换(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)皆降低或下降。在非限制的实施例中，含有本发明肽的医药品可用以治疗的癌症包含固型肿瘤、肉瘤、血液恶性肿瘤；所述癌症包含但不限于：乳癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰脏癌、大肠癌、前列腺癌、淋巴系造血肿瘤(例如，白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴性白血病、B细胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多发性骨髓癌、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤)、骨髓性白血病(例如，急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病)、甲状腺癌、甲状腺滤泡癌、骨髓增生异常综合征(MDS)、起源于间叶细胞的肿瘤(例如，纤维肉瘤以及横纹肌肉瘤)、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸胎癌、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、皮肤良性肿瘤(例如，角化棘皮瘤)、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、食道鳞状细胞癌、肝细胞癌、滤泡树突状细胞癌、肠癌、肌肉浸润性癌症、精囊肿瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、头颈癌、胃癌、骨癌、脑癌、视网膜癌、胆道癌、小肠癌、唾液腺癌、子宫癌(例如、子宫肉瘤)、睾丸癌、结缔组织癌、前列腺肥大、骨髓发育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神经内分泌癌、间皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管癌、输卵管癌、腹膜癌、浆液性乳头状苗勒氏癌、恶性腹水、胃肠道基质瘤(GIST)和遗传性癌症综合征(例如，李弗劳明综合征以及希佩尔-林道综合征(VHL))。

依据某些实施例，所述癌症是转移性癌症。在一实施例中，所述癌症是转移性肺癌。在另一实施例中，所述癌症是子宫肉瘤。

在其他实施例中，所述医药品可用以治疗一眼部疾病，其包含任何与眼部相关病征、症状或疾病(包含眼睛的内部构造，例如，眼睑、附属器、结膜、巩膜、角膜、葡萄膜、玻璃体和视网膜，以及视神经)和/或视力的症状和病征。在非限制的实施方式中，可使用包含本发明合成肽的医药品治疗的疾病为眼部血管新生(例如，角膜血管新生或脉络膜血管新生(CNV))、视网膜病变(其包含糖尿病性视网膜病变和早产儿视网膜病变)、老年性黄斑部病变(AMD)、青年性黄斑部病变、糖尿病性黄斑水肿、色素性视网膜炎、沙眼、青光眼、干眼综合征、神经眼部疾病、视网膜动脉阻塞、眼色素层炎、脉络膜炎、中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)、中心性渗出性脉络膜视网膜病变(CEC)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、血管新生性青光眼、血管新生性黄斑部病变或雷射后并发症。

在一实施例中，所述眼部疾病是老年性黄斑部病变(AMD)。在其他实施例中，所述眼部疾病是糖尿病性视网膜病变。

在又一实施方式中，本发明的医药品可用以治疗血管异常，所述血管异常包含可能出现在身体任一部位(涵盖外部或内部器官)上的胎记和/或血管异常相关症状。在非限制的实施例中，含本发明合成肽的医药品可用以治疗血管异常，其为血管通透性、血浆渗漏、静脉畸形(VM)、血管母细胞瘤、血管瘤、脑动静脉畸形瘤(BAVM)、动脉硬化、血栓症、脉络膜血管新生(CNV)以及奥斯勒-惠勃综合征(Osler-Weber syndrome)。

在一实施例中，所述血管异常是脉络膜血管新生(CNV)。

在另又一实施方式中，本发明医药品可用以治疗心血管疾病，其包含任何心脏和或血管的症状或疾病。在非限制的实施例中，含本发明肽的医药品可治疗的心血管疾病为动脉粥样硬化、心肌血管新生、高黏滞综合征、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞疾病、Osler-Weber-Rendu疾病、心肌炎、脑血管病变、二尖瓣闭锁不全、低血压动脉或移植后动脉粥样硬化、纤维化、血栓症或血小板聚集。

在又一实施方式中，含本发明医药品可治疗的感染为细菌感染、病毒感染、真菌感染或原虫感染。

在其他实施方式中，本发明医药品可用以治疗损伤，例如，由意外或组织移植引起的伤口或创伤。

可透过将所属技术领域中已知的药学可接受载体、赋形剂或安定剂与适量的本发明合成肽混合来制成组合物。在特定的实施方式中，所述合成肽是选自于上述任一肽，包含但不限于，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP,、7-merWI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer V→L、7-mer QK、7-mer LQ、7-mer VFT及其组合。

本发明肽在所述医药品或组合物中的含量随着使用的肽而有所不同。所述组合物中的肽含量约为0.001％至10％(重量％)；例如，约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0％。在一较佳的实施方式中，所述肽的含量约为0.001％至5％(重量％)；例如，约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5.0％。

能够与本发明合成肽一起使用的药学可接受载体、赋形剂或安定剂，都是所属技术领域人士孰知的，其包含但不限于，非毒性惰性固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封剂或配方助剂。一般的药学可接受载体可以是水、或生理食盐水。举例而言，药学可接受载体包含，但不限于，糖类，例如，乳糖、葡萄糖或蔗糖；淀粉，例如，玉米淀粉；纤维素及其衍生物，例如，羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose)、乙基纤维素(ethyl cellulose)和醋酸纤维素(cellulose acetate)；黄芪胶粉末(powdered tragacanth)；麦芽(malt)；明胶(gelatin)；滑石(talc)；赋形剂，例如，可可脂(cocoa butter)和栓剂蜡(suppositorywaxes)；油类，例如，花生油(peanut oil)、棉籽油(cottonseed oil)、红花油(saffloweroil)、芝麻油(sesame oil)、橄榄油(olive oil)、玉米油(corn oil)和大豆油(soybeanoil)；二醇类(glycols)，例如，丙二醇(propylene glycol)；酯类(esters)，例如，油酸乙酯(ethyl oleate)和月桂酸乙酯(ethyl laurate)；琼脂(agar)；缓冲剂(bufferingagents)，例如，氢氧化镁(magnesium hydroxide)和氢氧化铝(aluminum hydroxide)；藻酸(alginic acid)；以及其它制剂，例如，非毒性润滑剂(non-toxic lubricants，例如月桂烷硫酸酯(lauryl sulfate)、硬脂酸镁(magnesium stearate)、着色剂(coloring agent)、释放剂(releasing agents)、调味剂(flavoring agents)、防腐剂(preservative)以及抗氧化剂(antioxidants)。

本发明内容的医药品或组合物的施用途径包括：经由血管传递(例如，注射或灌注)、经口、肠内、直肠、肺(例如，吸入)、经鼻、局部施用(包含经皮，经颊以及舌下)、膀胱内、玻璃体内、腹膜内、阴道、经脑传递(例如，脑室注射和颅内注射)、经CNS传递(例如，鞘内、椎旁和椎内)或肠外(例如，皮下、肌肉内、静脉内和皮内)、黏膜给药或通过移植或其他公知的给药途径。

适用于口服的药学组合物，可以是离散剂型，包含但不限于，丸剂、片剂、锭剂、硬式或软式胶囊；或制成一分散粉末或颗粒；或制成一溶液或悬浮液，例如，溶液或悬浮液。举例而言，水溶性或油性悬浮液、乳剂、糖浆、酏剂或肠内配方。所述组合物可以制成单一剂量或多剂量剂型，例如，密封瓶或安瓿，以冻干条件并添加无菌液体载体(例如，水或食盐水)储存。

适用于肠外途径施用的药学组合物可以被制成液体或非液体无菌注射剂型，通过混合或分散本发明合成肽与一无菌溶液，例如，林格氏溶液、食盐水、1,3-丁二醇以及乙醇等。在可任选地实施例中，非挥发油、脂肪酸、合成单一或双甘油酯皆可作为溶剂。所述组合物可通过过滤器过滤使之无菌。

适用于局部和皮肤途径施用的药学组合物，可以被制成软膏(ointments)、糊剂(pastes)、乳霜(creams)、乳液(lotions)、凝胶(gels)、贴片(patches)或喷雾剂(sprays)等剂型。眼部剂型、耳滴剂和眼滴剂皆属于本发明涵盖范畴。本发明的组合物可局部施用至眼部。随着患者疾病的严重程度不一，本发明合成肽的施用剂量为约1微克/公斤体重至约50毫克/公斤体重(如，0.1-20毫克/公斤体重)。每日或每周的施用剂量为约1微克/公斤至约20毫克/公斤或更高。为达到上述任一局部施用的目的，所述局部施用量为约0.01至约100毫克/公斤体重(毫克/公斤)，每日施用一次至数次(如，每日施用4、6、8或更多次)。

药学组合物可以制成适用于肺部施用的剂型，例如，粉尘(dusts)或气雾(mists)，譬如可利用压力定量(pressurized metered dose)装置来产生气溶胶、气雾或粉尘。

本发明组合物较佳是以套组形式供应。可以理解的是，本发明套组是作为一产品，其包含本发明合成肽和/或其他治疗性化合物，经包装而形成所述组合物，以利组合物的运送、储存和同时或连续施用。因此，本发明套组可包含一或多个含本发明的合成肽的安瓿，以将本发明肽制成单一剂量或多剂量形式。所述套组更包含一载体，用以溶解本发明所述合成肽；例如，水溶液介质物，即生理食盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)、葡萄糖和氯化钠。水溶性介质，如，乙醇、聚乙二醇(polyethylene glycol)、丙基乙二醇(propylethylene glycol)。若有必要，非水溶性载体亦可适用本发明。本套组的其他对象为一包装盒，用以包装本发明的各组成物。适用于本发明的包装盒的材料可以是玻璃、塑料(聚乙烯，聚丙烯，聚碳酸酯极其类似物)、瓶子、小罐子、纸、束袋或其类似物。

本发明套组可更包含说明书，其中记载本发明各种配方的施用方式(如，同时施用、连续施用、个别施用)。因此，本发明的套组可更包含如何施用(如，同时施用、连续施用、个别施用)本发明中不同成分的说明书。所述说明书可以是纸张或为可被读取的电子媒介物，例如，电子储存媒体(磁盘、磁带或其类似物)、光学媒体(CD-ROM，DVD)及其类似物。所述媒体可额外或非必要的附加网络页面，以提供上述说明信息。

2.3预防和/或治疗血管新生相关疾病和/或症状的方法

如上所述，本发明所揭示的内容能有效预防和/或治疗血管新生相关疾病和/或症状。

因此，本发明是关于一种预防和/或治疗血管新生相关疾病和/或症状的方法的方法，其包含施用一包含本发明的合成肽的一医药品或组合物至一有需要的个体，其中所述合成肽是由7个连续氨基酸残基所组成，其序列为X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ ID No.1)，其中，

X₂是丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、或缬氨酸(V)；

X₃是苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；

X₄是精氨酸(R)或赖氨酸(K)；

X₆是精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、赖氨酸(K)或脯氨酸(P)；以及

X₇是丝氨酸(S)或苏氨酸(T)；以及

X₂、X₃、X₄、X₆、X₇分别为左旋氨基酸；以及一药学可接受载体。当施用所述医药品和/或组合物至个体时，能改善或减缓血管新生相关疾病和/或症状。

在一具体实施方式中，所述合成肽是选自于上述任一肽，包含但不限于，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-merNV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)、7-mer(D→L)及其组合。

血管新生相关疾病和/或症状，其包含，但不限于，癌症、眼部疾病、血管异常、感染、心血管疾病和损伤。

依据本发明一实施方式，本发明是有关于一种治疗癌症的方法，其包含施用医药品或组合物至一有需要的个体。在非限制的实施例中，本方法治疗的癌症为固型肿瘤、包含固型肿瘤、肉瘤、血液恶性肿瘤、包含但不限于、乳癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰脏癌、大肠癌、前列腺癌、淋巴系造血肿瘤(例如，白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴性白血病、B细胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多发性骨髓癌、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤)、骨髓性白血病(例如，急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病)、甲状腺癌、甲状腺滤泡癌、骨髓增生异常综合征(MDS)、起源于间叶细胞的肿瘤(例如，纤维肉瘤以及横纹肌肉瘤)、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸胎癌、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、皮肤良性肿瘤(例如，角化棘皮瘤)、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、食道鳞状细胞癌、肝细胞癌、滤泡树突状细胞癌、肠癌、肌肉浸润性癌症、精囊肿瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、头颈癌、胃癌、骨癌、脑癌、视网膜癌、胆道癌、小肠癌、唾液腺癌、子宫癌(例如、子宫肉瘤)、睾丸癌、结缔组织癌、前列腺肥大、骨髓发育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神经内分泌癌、间皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管癌、输卵管癌、腹膜癌、浆液性乳头状苗勒氏癌、恶性腹水、胃肠道基质瘤(GIST)和遗传性癌症综合征(例如，李弗劳明综合征以及希佩尔-林道综合征(VHL))。在一实施例中，所述癌症是转移性癌症，例如，转移性肺癌。在其他实施例中，所述癌症是子宫肉瘤。

依据本发明其他实施方式，本发明是有关于治疗眼部疾病的方法，其包含施用本发明的医药品或组合物至一有需要的个体。在非限制的实施方式中，所述眼部疾病为眼部血管新生(例如，角膜血管新生或脉络膜血管新生(CNV))、视网膜病变(其包含糖尿病性视网膜病变和早产儿视网膜病变)、老年性黄斑部病变(AMD)、青年性黄斑部病变、糖尿病性黄斑水肿、色素性视网膜炎、沙眼、青光眼、干眼综合征、神经眼部疾病、视网膜动脉阻塞、眼色素层炎、脉络膜炎、中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)、中心性渗出性脉络膜视网膜病变(CEC)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、血管新生性青光眼、血管新生性黄斑部病变或雷射后并发症。

依据本发明其他实施方式，本发明是用以治疗血管异常的方法，其包含施用本发明的医药品或组合物至一有需要的个体。在非限制的实施例中，所述血管异常为血管通透性、血浆渗漏、静脉畸形(VM)、血管母细胞瘤、血管瘤、脑动静脉畸形瘤(BAVM)、动脉硬化、血栓症、脉络膜血管新生(CNV)以及奥斯勒-惠勃综合征。在一实施例中，所述血管异常是脉络膜血管新生(CNV)。

依据本发明又一实施方式，本发明是有关于治疗心血管疾病的方法，其包含施用本发明的医药品或组合物至一有需要的个体。在非限制的实施例中，所述心血管疾病为动脉粥样硬化、心肌血管新生、高黏滞综合征、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞疾病、Osler-Weber-Rendu疾病、心肌炎、脑血管病变、二尖瓣闭锁不全、低血压、动脉或移植后动脉粥样硬化、纤维化、血栓症或血小板聚集。

依据本发明再一实施方式，本发明是有关于治疗感染的方法，其可以是细菌感染、病毒感染、真菌感染或原虫感染。

依据本发明其他实施方式，本发明是有关治疗损伤的方法，例如由意外或组织移植引起的伤口或创伤。所述方法包含施用本发明的医药品或组合物至一有需要的个体。

本发明方法可更包含施用一有效量的另药剂至所述个体，其中该药剂为治疗血管新生相关疾病和/或症状的药剂，其是选自于：抗发炎药剂、抗癌症药剂、抗生素和抗淋巴管生成剂所组成的群组中。

在某些实施例中，所述抗发炎药剂为环孢霉素(cyclosporine)。所述抗癌药剂可以是烷化剂(alkylating agent)、抗微管剂(anti-microtubule agent)、拓朴异构酶抑制剂(topoisomerase inhibitor)或细胞毒性药物(cytotoxic agent)。所述抗生素是选自：阿米卡星(amikacin)、庆大霉素(gentamycin)、卡那霉素(kanamycin)、新霉素(neomycin)、奈替米星(netilmicin)、链霉素(streptomycin)、妥布霉素(tobramycin)、替考拉宁(teicoplanin)、万古霉素(vancomycin)、阿奇索霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、地红霉素(dirithromycin)、红霉素(erythromycin)、罗红霉素(roxithromycin)、醋竹桃霉素(troleandomycin)、阿莫西林(amoxicillin)、氨比西林(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、羧苄西林(carbenicillin)、氯唑西林(cloxacillin)、双氯西林(dicloxacillin)、氟氯西林(flucloxacillin)、美洛西林(mezlocillin)、奈夫西林(nafcillin)、盘尼西林(penicillin)、哌拉西林(piperacillin)、替卡西林(ticarcillin)、枯草菌素(bacitracin)、粘杆菌素(colistin)、多粘菌素B(polymyxin B)、环丙沙星(ciprofloxacin)、依诺沙星(enoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、曲伐沙星(trovafloxacin)、磺胺米隆(mafenide)、磺胺醋酰(sulfacetamide)、磺胺甲二唑(sulfamethizole)、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、磺胺异唑(sulfisoxazole)、甲氧苄啶(trimethoprim)、复方新诺明(cotrimoxazole)、地美环素(demeclocycline)、脱氧羟四环素(doxycycline)、米诺环素(minocycline)、氧四环素(oxytetracycline)和四环素(tetracycline)。所组成的群组中。所述烟碱乙酰胆碱受体激动剂为毛果芸香碱(pilocarpine)、阿托品(atropine)、尼古丁(nicotine)、地棘蛙素(epibatidine)、洛贝林(lobeline)或吡虫啉(imidacloprid)。所述抗淋巴管生成剂为血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C；VEGF-C)抗体、VEGF-D抗体或VEGF-3抗体。

在本发明任一实施方式中，适用本发明方法治疗的个体为人类。

下文提出多个实验例来说明本发明的某些方式，以利本发明本领域技术人员实作本发明，且不应将这些实验例视为对本发明范围的限制。据信公知技艺者在阅读了此处提出的说明后，可在不需过度解读的情形下，完整利用并实践本发明。此处所引用的所有公开文献，其全文皆视为本说明书的一部分。

实施例

材料及方法

材料

3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(简称MTT)购自Merck(产品目录编号：1.11714.0001)。血管内皮生长因子(简称VEGF)、bFGF、TACS annexin V-FITC套组皆购自R&D Systems(Minneapolis,MN,USA)。基质胶(matrigel)购自BD Biosciences(New Bedford,MA,USA)。HUVEC购自Cascade Biologics(Portland或USA)。Hydron(529265)、硫糖铝复合物(S0652)、链佐霉素(streptozotocin)(STZ；S0130)、异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白(简称FITC-BSA)皆购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO,USA)。RPMI1640培养基、胰蛋白酶-EDTA(trypsin-EDTA)、胎牛血清(FBS)、抗生素-抗真菌剂溶液和胰蛋白酶皆购自Invitrogen(Carlsbad,CA,USA)。Medium 200、LSGS Kit、胎牛血清以及杜氏培养基(简称DMEM)皆购自Gibco-BRL。

所有肽是以GenScript(Piscataway,NJ,USA)合成，其中每一肽的N端及C端分别经乙酰化和胺基化修饰，以改善其稳定性，接着以质谱仪定性(纯度：>95％)。

细胞培养及处理

将HUVEC细胞以每孔1×10⁵个细胞的密度播于6孔盘中，并以Medium 200培养，培养基中添加低血清生长添加剂(Low Serum Growth Supplement，简称LSGS；添加物含1.9％的FBS、3奈克/毫升的bFGF、10微克/毫升的肝素、1微克/毫升的氢化可的松(hydrocortisone)和10奈克/毫升的EGF)。培养皿上涂布2％明胶。细胞(继代：4-8)置于37℃，于潮湿且含5％CO₂大气环境下培养。在进行肽处理时，将HUVEC细胞培养于低血清(0.5％FBS)培养基中，培养基含有10-20奈克/毫升的VEGF以及100nM本发明合成肽。

鼠B16-F10黑色素瘤细胞培养于DMEM培养基(含10％FBS、2mM左旋谷氨酰胺、100U盘林西林、100微克/毫升链霉素)置于37℃以及5％CO₂下培养。所使用的细胞继代数为3-10。

人类WSI纤维母细胞培养于Eagle’s Minimum essential Medium(添加10％FBS)，并置于37℃，于潮湿含5％CO₂大气环境下培养。

以复合培养基(RPMI1640)(添加10％(vol/vol)热失活胎牛血清(Invitrogen)、50微克/毫升的盘尼西林、50微克/毫升的链霉素(streptomycin)和2mM L-谷氨酰胺)培养多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226，培养于37℃，5％CO₂大气环境下。

MTT分析

将RPMI8226细胞培养于无血清RPMI1640培养基，培养24小时，接着将细胞接种于48孔培养盘(3×10⁵细胞/孔)，以及以0.5毫升的新鲜无血清RPMI1640培养基(含25μΜ肽)继续培养24小时。利用MTT分析测定细胞存活率。

简而言之，添加50微升的MTT储存液(5毫克的MTT溶于1毫升的无菌PBS)至每一培养孔中。另外，添加50微升的MTT储存溶液至500微升的培养基中，作为阴性对照组。将培养盘置于37℃，培养4小时。分别从每个样本中取450微升的分液至新的48孔培养盘，添加100微升的DMSO，利用移液管混合，于于37℃下，反应20分钟，并在570nm波长下测定吸光值。

VEGF-诱导HUVEC增殖的测定

将HUVEC细胞以每孔1×10⁵个细胞的密度播于涂布明胶的6孔盘中，并以Medium200培养，培养基中添加低血清生长添加剂(LSGS)。培养皿上涂布2％明胶。细胞置于37℃，于5％CO₂大气环境下培养24小时。以无血清Medium 200培养基替换原培养基后进行隔夜培养。其后，以100nM本发明合成肽(溶于含有0.5％FBS和10奈克/毫升VEGF的Medium 200中)处理细胞，细胞在37℃下培养24小时。接着，以胰蛋白-EDTA收集细胞，并以血球计数器计算。

内皮细胞形成毛细管样的管状结构的测定

在测定本发明合成肽对于体外血管新生的影响时，将低生长因子基质胶分注至预冷的24孔盘(每孔基质胶含量：150微升)，之后使其在37℃下进行聚合反应，反应时间45分钟。将悬浮于低血清(0.5％FBS)培养基(含20奈克/毫升VEGF)的HUVEC细胞(每孔细胞数为4×10⁴)接种于涂布有基质胶的细胞盘上，其中该基质胶含本发明合成肽或所述对照肽(SEQID No.22)(10μM)，培养6小时，接着拍摄管状结构。在此实施例中，所述影像是以Canon照相机于Zeiss倒位显微镜(inverted microscope)下，以放大倍率40倍拍摄，且管柱长度以影像分析软件(Image-Pro Plus)定量分析。在此所述的对照肽，其序列为DLYRVR(SEQ IDNo.22)。

细胞凋亡分析

以TACS annexin V-FITC套组分析HUVEC细胞凋亡的百分率。依据制造商的使用手册，以原位染色测定annexin V-阳性细胞的百分率。以Hoechst 33342复染测定细胞数目。从三个不同的腔室(约7200个细胞)中，随机选取10个视野计算各该视野下的细胞核。使用Zeiss荧光显微镜(epifluorescence microscope)以100倍的倍率检验样本并拍摄结果(10视野/样本)。照片以Zeiss软件记录。

大鼠主动脉环测定

将10周龄Sprague Dawley鼠安乐死后，取下主动脉环并剥除主动脉环周围的纤维脂肪组织。将主动脉切片为约2公厘长的环，并将其包埋于基质胶中。为了诱导血管新生，将人类重组bFGF(50奈克/毫升)或含所述肽(50μM)的bFGF添加至基质胶中。将含主动脉环的胶体(200微升)置于12孔盘内进行聚合反应(37℃，30分钟)；接着，将其培养于1毫升的Medium 200(添加100单位/毫升的盘林西林、100奈克/毫升的链霉素和2％FBS)，在定温37℃的潮湿培养箱内培养7天，以使培养物增殖。利用倒位显微镜平台(Leica DMI6000B)，在明亮视野下，记录血管出芽状况。每一个环皆由三个独立的观察员，基于血管出芽程度不同，以0-4等级记录(0＝无出芽、4＝极多出芽)。所述实验重复进行三次。

实验动物

所有实验动物饲养于动物房中，且实验过程经马偕纪念医院审查委员会同意。再者，所有动物实验过程遵循视觉及眼科学学术研究会议(ARVO)所订定的动物实验眼科和视觉研究相关规定。

小鼠角膜血管新生测定

简而言之，本实验例采用6周龄C57BL/6小鼠，以一针头取得角膜微囊(cornealmicropockets)。在每一角膜微囊中加入由蔗糖硫酸铝(sucrose aluminum sulfate)和含200奈克VEGF的氢聚合物(有/无添加2.5微克肽)所组成的微粒(micropellet)。在微粒移植后7天，以裂隙灯生物显微镜(slit-lamp biomicroscope)拍摄眼睛。朝向缺血性角膜部位并趋向微粒向内生长的血管，为阳性反应。所述结果作为阳性角膜的总移植数。

癌化程度测定

MES-SA/Dx5细胞(0.1毫升含5×10⁶细胞)以皮下注射的方式植入裸鼠(母鼠)右侧腹部区域(n＝24，每只动物接受试验前体重约20克)。实验过程经马偕纪念医院审查委员会同意。经处理前，动物中的肿瘤体积为80mm³以上。腹膜内注射DMSO载体、本发明合成肽或对照肽(10毫克/公斤)至小鼠，每两天一次。监测肿瘤进程，监测期间共10天。以卡尺测量肿瘤的尺寸，每三至五天一次，所得到的体积以下列公式计算：1/2×长×宽²。

小鼠实验性肺转移测定

将B16-F10细胞(2×10⁵)悬浮于100微升PBS中，并以以台盼蓝(trypan blue)染色确认存活率(>95％)。注射B16-F10细胞至6周龄C57BL/6小鼠(母鼠)的尾静脉中。于B16-F10细胞注射后，再以腹膜内注射将DMSO载体、本发明合成肽或对照肽(10毫克/公斤)注射至小鼠体内，每二天一次。每组5只小鼠。在细胞接种的第8天，摘除小鼠肺部，在解剖显微镜下计算肺表面的细胞群落(colonies)。

糖尿病小鼠视网膜血管异常的测量

将新鲜配置的链脲霉素(streptozotocin,STZ；溶于pH 4.5的0.1M柠檬酸缓冲液中)以单一腹膜内注射至小鼠体内(150毫克/公斤体重)，以产生糖尿病小鼠。注射后，持续提供小鼠10％蔗糖至隔夜，以预防低血糖性休克。一周后，小鼠非空腹血糖值>500毫克/分升(dl)定义为糖尿病，并用以进行本试验。腹膜内注射DMSO载体或本发明合成肽(10毫克/公斤；n≧3/肽)，每天二次。处理后24小时，在30分钟内，腹膜内注射BSA-FITC至小鼠(100毫克/公斤)。

为了测定视网膜血管病灶(出血区域)，首先，以吸入CO₂的方式致使小鼠安乐死，摘除小鼠眼睛，再以2％多聚甲醛(paraformaldehyde)固定2小时，将组织平封(flat-mounted)于在载玻片上，再以荧光显微镜观察光学切片。视网膜的血管病灶计分方式，于20×物镜下观察，记录每一封片中所有4个视网膜象限。于中央或周边视网膜每个象限中，取6个显微镜视野，且数据以病灶数/视网膜的平均数表示。

血管FITC-BSA渗漏以荧光分光亮度计测定(以激发和放射波长为488nm和535nm建立FITC-BSA标准曲线，并以其标准化一非注射控制组视网膜)。在此分析中，于BSA-FITC注射后，从处理或未经处理的糖尿病小鼠取出视网膜，再将视网膜个别溶于300微升的冰(ice-cold)PBS。

糖尿病大鼠视网膜中血管异常的测定

将Sprague-Dawley鼠空腹至隔夜，再单一腹膜内注射新鲜配置的STZ(65毫克/公斤体重)。施用STZ经5天后，大鼠血糖值>350毫克/分升，定义其为糖尿病大鼠。以血糖监控仪测定大鼠血糖值，每两天一次。非糖尿病对照组的动物，仅接受同量的柠檬酸缓冲液。在肽处理组中，糖尿病大鼠以腹膜内注射方式施用赛拉嗪(Xylazine)(10毫克/公斤)进行麻醉，再注射3微升本发明合成肽(10mM)至单眼玻璃体内，以及注射等量的PBS至对侧眼(每组n＝3-6)中。经肽处理后24小时，依据上述的步骤以BSA-FITC(100毫克/公斤体重)测定视网膜血管渗漏。

雷射诱导脉络膜血管新生(CNV)

腹腔注射舒泰(zoletil)(6毫克/公斤)和甲苯噻嗪(xylazine)(3毫克/公斤)混合物至C57BL/6小鼠(母鼠)，以进行麻醉。以裂隙灯生物显微镜观察视网膜组织，并将视神经头(optic nerve head)置于显微镜视野正中央。以雷射二极管(病灶处直径50微米；期间100毫秒(ms)；能量250毫瓦(mW))于双眼视神经头周围进行3或4次雷射。施用雷射后所形成的气泡为布鲁克氏膜(Bruch’s membrane)的破裂。腹膜内注射DMSO载体或7-mer(10毫克/公斤；n≧10/肽)，每天二次，共施用10天。注射0.1毫升荧光素(100毫克/毫升)(10％w/v)后约5分钟，拍摄荧光眼底影像。于此期间，荧光渗漏点为相对稳定的。依据Sheets等人所揭示的方法(Molecular Vision 2010；16:320-329)，由一位视网膜专家观察每一CNV病灶渗漏的状况并将其分级。简言之，所述分为第0级、第1级、第2a级、第2b级等词，定义如下：第0级：无高度荧光、第1级：有高度荧光且未发生渗漏、第2a级：有高度荧光且发生晚期渗漏、第2b级：明亮的高度荧光且在未处理区域外有晚期渗漏。

统计

结果以平均值±标准差(mean±standard error of the mean,SEM)表示。以单因子变异数分析(1-way ANOVA)进行统计分析。P<0.05为具有显著性。

实施例1鉴别本发明合成肽的功能性残基

在此实施例中，依据「材料与方法」所述的步骤合成7-mer肽(SEQ ID No.2)。利用「丙氨酸扫瞄」、「右旋氨基酸取代」或「特定位置换」产生7-mer类似物，其中每一指定的氨基酸残基被丙氨酸(A)、其右旋氨基酸或是特定氨基酸残基所置换。

本实施例共合成25种肽，具体而言，其中7种类似物是以「丙氨酸扫瞄」所产生的，分别命名为7-mer Da、7-mer La、7-mer Ya、7-mer Ra、7-mer Va、7-mer R2a和7-mer Sa；7种类似物是以「右旋氨基酸取代」所产生的，分别命名为7-mer DD、7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DV、7-mer DR2和7-mer DS；以及其他12种类似物是利用特定位置换所产生的，分别命名为7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L)。再者，本发明亦合成一6-mer对照肽，其删除7-mer肽上的丝氨酸(S)。本实施例合成肽(即，7-mer和其类似物)如表1所示。

表1本发明合成肽

表中以粗体表示的氨基酸代表其为右旋(D-form)氨基酸

接着，将合成肽进行MTT分析，其中以血管内皮因子作为刺激物，诱导细胞增殖。结果示于图1至图4。

图1的结果证实，VEGF(50奈克/毫升)能够诱导RPMI8226骨髓瘤细胞增殖，且其7-mer(DLYRVRS)可抑制VEGF所诱导的细胞增殖，在其他实例中，如，7-mer Da和7-mer La皆产生类似的结果。相对地，7-MER肽上第3、4、5、6和7个氨基酸残基以丙氨酸(A)取代所产生的7-mer类似物，失去其抑制活性，由此结果可以得知，该些特定氨基酸残基的侧链与7-mer生物活性相关。7-mer第1和2个氨基酸残基以丙氨酸(A)取代(含丙氨酸(A)的7-mer Da和La肽)保留部分7-mer活性。所述结果指出7-mer肽第一个氨基酸残基(以丙氨酸(A)取代天冬氨酸(D))和第二个氨基酸残基(以丙氨酸(A)取代亮氨酸(L))皆被取代的肽，对于其增殖抑制活性仅产生相对轻微的影响，故7-mer主链上第一个和第二个残基的可置换性(mainchain flexibility)使其成为7-mer主链上可被修饰的区域。

为了进一步研究7-mer主链上可被置换的氨基酸残基，本实验例也进行7-mer主链上特定位置氨基酸的取代置换，结果示于图2。结果显出，透过特定位置取代置换所产生的7-mer类似物，包含7-mer QK、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-merVFT、7-mer(V→L)、7-mer(R2→Q)、7-mer(D→V)、7-mer(D→F)和7-mer(D→L)，能保留7-mer的部分生物活性。

当以右旋氨基酸置换天然左旋氨基酸所产生的7-mer类似物，则发现置换7-mer上第2、3、4、6和7位置残基，会导致其失去抑制活性(图3)。仅有当7-mer上第1个残基(以D-天冬氨酸置换L-天冬氨酸)和第5个残基(以D-缬氨酸置换L-缬氨酸)以右旋氨基酸置换所产生的7-mer类似物，仍可保留其抑制VEGF-诱导增殖的活性。进一步研究7-mer、7-mer DD和7-mer DV抑制VEGF-诱导细胞增值的效果，显示该些肽的抑制效果具有剂量依赖性(1至25μM)(图4)。

综合本实施例的结果，显示7-mer上的第1和第2个氨基酸残基非为抑制VEGF-诱导细胞增殖能力的关键，且第1和5个残基可以是左旋氨基酸或右旋氨基酸，其他残基(如，7-mer上第2、3、4、6和7个残基)则必须为左旋氨基酸。

实施例2本发明合成肽抑制VEGF-诱导血管新生

在此实施例中，测定本发明合成肽对于VEGF-诱导HUVEC细胞增生及管状结构形成的影响。结果如表2和表3；以及图5和图6所示。

表2本发明合成肽对于VEGF-诱导HUVEC增生的影响

本发明合成肽的浓度为25μM。数据以平均值±S.E.表示(3次实验进行2重复)。

*p<0.001vs.未处理HUVEC；**p<0.05vs VEGF-处理HUVEC。

表2结果显示，VEGF能显著增强HUVEC增殖(相较于未处理控制组，增殖倍率为1.62倍，P<0.001)；以及，添加本发明合成肽(即，7-mer和/或其类似物)能抑制VEGF-诱导细胞增殖，相较之下，7-mer DS则没有明显的抑制效果。

在血管新生过程中，内皮细胞会形成毛细管样结构；因此，是否形成管状结构成为一有效用以评估一药剂是否具有抗血管新生效果的指标。如图5所示，相较于未处理的HUVEC(UT)，以VEGF处理HUVEC 6小时，可观察到大量管状样网络形成；以及当添加本发明7-mer肽时，能够抑制VEGF-诱导管状结构形成。本发明合成肽对于VEGF-诱导管状结构形成的影响结果，摘要于表3。

表3本发明合成肽对于VEGF-诱导管状结构形成的影响

本发明合成肽的浓度为25nM。

以影像分析软件定量管状长度的平均值。

数据以平均值±S.E.表示(4个独立试验)。

*p<0.001vs.未处理HUVEC；**p<0.05vs.VEGF-处理HUVEC。

与表2所示结果相似，VEGF能显著促进管状结构生成；以及添加本发明合成肽(即，7-mer和/或其类似物)能够抑制VEGF-诱导管状结构形成，相较之下，任一比较肽7-mer DS则没有明显的抑制效果。

为了测定7-mer抗血管新生活性是否和细胞凋亡相关，以annexin V-结合FITC染色定量细胞凋亡。结果显示以7-mer肽处理16小时，能够增加HUVEC凋亡的百分率，其从4.2±1.66％(UT；未处理)增加至32.4±3.8％(图6)。对照组则是以一6-mer肽(SEQ IDNo.22)，其删除7-mer(SEQ ID No.2)肽C端上的丝氨酸(S)而成来处理细胞，此对照肽并不会造成细胞凋亡。

综上所述，由抑制VEGF-诱导毛细管样管状结构生成以及诱导内皮细胞凋亡等数据显示，本发明的合成肽具有抗血管增生的活性。再者，7-mer肽序肽序列上的亮氨酸(L)、酪氨酸(Y)、精氨酸(R)和丝氨酸(S)残基必须保留原天然形式，否则当该些氨基酸从左旋氨基酸分别被取代为右旋氨基酸时，本发明合成肽将失去抗血管增生的活性。

实施例3本发明合成肽能抑制体外微血管出芽以及体内VEGF-诱导角膜血管新生

以体外微血管出芽试验和体内VEGF-诱导角膜血管新生试验，研究本发明合成肽的抗血管增生效果。本试验是依据前述材料及方法所述的步骤进行，结果如图7和图8所示。

体外微血管出芽试验结果如图7的照片所示。单独施用beta-FGF(PC；阳性对照组)造成动脉环周围微血管出芽现象显著；而添加本发明7-mer肽(50μM)能抑制微血管出芽现象，所述7-mer肽包含7-mer DD、7-mer DV、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-merNV、7-mer(V→L)和7-mer QK。此实施例的结果与实施例2所示的结果相符，包括7-mer DS在内的其他肽则对于大鼠主动脉环周围的出芽现象并无影响。所述7-mer DY、7-mer DR2和7-mer DS的肽序列分别是本发明7-mer肽(SEQ ID No.2)的酪氨酸(Y)、丝氨酸(S)和第一精氨酸(R)分别被取代为右旋氨基酸。

体内VEGF-诱导角膜血管新生的结果，如图8所示。在此体内角膜分析试验中，VEGF(200奈克)能显著诱导C57BL/6小鼠角膜血管新生。然而，经本发明7-mer肽(2.5微克)处理能完全破坏VEGF-诱导血管新生。

实施例4本发明合成肽能抑制体内子宫肉瘤生长

在此实施例中，测定本发明实施例1合成肽对于子宫肉瘤的影响，此已被提出与血管内皮生长因子(VEGF)的作用相关。将人类子宫肉瘤细胞(MES-SA/Dx5)植入裸鼠中，诱导肿瘤生长，当肿瘤体积到达80mm³时，再以载体或7-mer肽(10毫克/公斤)处理，每两天一次，试验期间为10天。结果如图9所示。

相较于接受DMSO载体处理的动物而言，经本发明7-mer肽处理的动物，其肿瘤尺寸明显缩小(7-mer组：125±15.4vs.载体组：327±64.2mm³；图9)。再者，以6-mer对照肽(序列为：DLYRVR；SEQ ID No.22)处理的动物，其肿瘤相对尺寸及各动物的体重均未改变。此实施例的结果证实，本发明7-mer合成肽确实可在活体内抑制组织肉瘤的生长。

实施例5本发明合成肽能抑制体内肺癌转移

癌转移是癌症主要死亡原因。本实施例主要是探讨本发明合成肽对于癌细胞转移的效果。将B16-F10细胞注入至小鼠尾静脉，接着以腹膜内注射合成肽(7-mer或7-mer DD，10毫克/公斤)，每二天一次。完成各实验步骤后，摘除小鼠肺部，以肉眼观察并计数肺部细胞群落数，结果如图10所示。

如图10所示，7-mer和7-mer DD能减少肺部表面形成的细胞群落数，而经载体处理的小鼠并不具有类似的效果。其他合成肽(10毫克/公斤)，即7-mer DL、7-mer DR、7-merDV、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer(V→L)和7-mer QK的结果示于表4。

表4本发明合成肽对于体肺癌细胞转移的效果

处理	肺部细胞群落数	抑制率(％)
			载体	225±39.3
7-mer	72±16.0*	67.9
			7-mer DD	40±15.7*	82.3
7-mer DV	51±17.0*	77.4
			7-mer DS	245±30.4	-9.0
7-mer MK	79±26.4*	65.0
			7-mer KP	69±11.5*	69.3
7-mer WI	74±24.3*	67.3
			7-mer IP	63±9.4*	72.0
7-mer NV	55±16.5*	75.8
			7-mer(V→L)	75±30.4*	66.8
7-mer QK	82±16.3*	63.5

数据以平均值±S.E.表示(n＝5)。*p<0.05vs.经载体处理小鼠

结果显示、本发明合成肽、包含7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer(V→L)和7-mer QK能有效抑制体内癌细胞的转移。

实施例6本发明合成肽可预防糖尿病动物体内血液-视网膜屏障(blood-retinalbarrier)的破坏

糖尿病性视网膜病变的特征为血液-视网膜屏障破坏及神经毒性。为了评估本发明合成肽对于糖尿病性视网膜病变可能产生的有利影响，分别以腹膜内注射方式将7-mer肽、DMSO载体或对照肽(SEQ ID No.22)注射至STZ诱导的糖尿病小鼠体内。透过侦测BSA荧光素的渗漏，来监控视网膜血管的异常。结果如图11所示。

如图11显微镜影像所示，经载体或对照肽处理的糖尿病小鼠，其视网膜组织(retinal parenchyma)上有数个出血区域；以本发明合成肽处理的小鼠则能有效阻断出血，其中相较于载体组，以本发明合成肽处理后动物的血管病灶数目显著减少(载体组：1.8±0.54vs.6.7±0.66；图11(B))。

视网膜中FITC-BSA的渗漏量以一完整视网膜内FITC-BSA渗漏的荧光强度进行定量分析。结果如表5所示。

表5本发明合成肽对于糖尿病小鼠血液-视网膜屏障的影响

数据以平均值±SEM表示(每组3只小鼠)。

*p<0.05vs.经载体处理

表5的结果证实本发明合成肽包含7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer MK、7-merKP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer(V→L)和7-mer QK能够显著地预防FITC-BSA渗漏。

再者，糖尿病动物视网膜中的血管病灶树目通常会增加；相较于载体组，于糖尿病动物玻璃体中注射7-mer肽能降低视网膜内的血管病灶数量(载体组：18.0±1.93vs.7-mer：9.2±2.15；图12(B))。于完整的视网膜组织的FITC-BSA荧光强度测定的结果显示，相较于经载体处理的对照动物，以本发明7-mer肽能降低FITC-BSA的渗漏程度(0.43±0.07倍；图12(C))。

综上，本发明合成肽能预防糖尿病动物的视网膜血管异常。

实施例7本发明合成肽能抑制雷射诱导脉络膜血管新生(CNV)

湿性老年性黄斑部病变(AMD)的特征是视网膜血管扩增。能用以治疗湿性AMD的有效策略之一，为抑制脉络膜血管新生(CNV)的侵袭生长。在本实施例中，探讨究本发明合成肽预防CNV侵袭生长的效果。是依据上述材料与方法所示的雷射诱导湿性AMD小鼠方式来进行本试验。雷射处理后10天，以眼底荧光造影评估新生成的微血管及伴随的渗漏，结果示于图13。此外，依据CNV病灶等级结果，相较于经载体处理的动物而言，经7-mer合成肽处理的动物，其CNV属于严重等级的分布较低。于雷射后16天，此分布频率并未改变，由此可知7-mer合成肽具有抑制CNV生成的能力。

此外，本研究也探讨了7-mer或7-mer DD对于雷射诱导湿性AMD大鼠模型的效果。于雷射灼烧后14天，拍摄荧光眼底影像，结果示于图14。

如图14所示，相较于PBS载体处理的动物而言，以本发明7-mer或7-mer DD处理动物能显著减轻雷射灼烧造成的病灶。此一结果代表本发明合成肽能有效治疗与CNV相关的血管新生。

综上所述，本发明各实施例的结果证实本发明内容的短合成肽能用以治疗和/或预防血管新生相关的疾病和/或症状。

虽然上文实施方式中揭露了本发明的具体实施例，然其仅为例示，本发明本领域技术人员仍可对其进行各种更动与修饰。上述说明书、实施方式及数据已对本发明实施方式架构做了完整说明。虽然已通过某种程度的精确性或参照各实施方式来说明上述各实施方式，但本发明本领域技术人员，在不悖离本发明的原理与精神的情形下，仍可对其进行各种更动与修饰，因此本发明的保护范围当以附随申请专利范围所界定者为准。

序列表

<110> 台湾基督长老教会马偕医疗财团法人马偕纪念医院

<120> 用以治疗血管新生相关疾病和/或症状的短合成肽

<130> P2868-1-TW

<160> 22

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (1)

<223> Xaa is Ala, Asp, Asn, Leu, Phe or Val

<220>

<221> VARIANT

<222> (2)

<223> Xaa is Ala, Ile, Leu or Val

<220>

<221> VARIANT

<222> (3)

<223> Xaa is Phe, Tyr or Trp

<220>

<221> VARIANT

<222> (4)

<223> Xaa is Arg or Lys

<220>

<221> VARIANT

<222> (5)

<223> Xaa is Val, Met, Ile, Leu or Gln

<220>

<221> VARIANT

<222> (6)

<223> Xaa is Arg, Gln, Lys or Pro

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> Xaa is Ser or Thr

<220>

<221> UNSURE

<222> (1)..(1)

<223> The 'Xaa' at location 1 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (2)..(2)

<223> The 'Xaa' at location 2 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (3)..(3)

<223> The 'Xaa' at location 3 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (4)..(4)

<223> The 'Xaa' at location 4 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (5)..(5)

<223> The 'Xaa' at location 5 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (6)..(6)

<223> The 'Xaa' at location 6 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<220>

<221> UNSURE

<222> (7)..(7)

<223> The 'Xaa' at location 7 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.

<400> 1

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer

<400> 2

Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Da

<400> 3

Ala Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 4

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer La

<400> 4

Asp Ala Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Ya

<400> 5

Asp Leu Ala Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Ra

<400> 6

Asp Leu Tyr Ala Val Arg Ser

1 5

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Va

<400> 7

Asp Leu Tyr Arg Ala Arg Ser

1 5

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer R2a

<400> 8

Asp Leu Tyr Arg Val Ala Ser

1 5

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer Sa

<400> 9

Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ala

1 5

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer MK

<400> 10

Asp Leu Tyr Arg Met Lys Ser

1 5

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer KP

<400> 11

Asp Leu Tyr Lys Val Pro Ser

1 5

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer WI

<400> 12

Asp Leu Trp Arg Ile Arg Ser

1 5

<210> 13

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer IP

<400> 13

Asp Ile Tyr Arg Val Pro Ser

1 5

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer NV

<400> 14

Asn Val Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer QK

<400> 15

Asp Leu Tyr Arg Gln Lys Ser

1 5

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer VFT

<400> 16

Asp Val Phe Arg Val Arg Thr

1 5

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer VL

<400> 17

Asp Leu Tyr Arg Leu Arg Ser

1 5

<210> 18

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer R2Q

<400> 18

Asp Leu Tyr Arg Val Gln Ser

1 5

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer DV

<400> 19

Val Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 20

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer DF

<400> 20

Phe Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 21

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 7-mer DL

<400> 21

Leu Leu Tyr Arg Val Arg Ser

1 5

<210> 22

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(artificial sequence)

<220>

<221> VARIANT

<222> (7)

<223> 6-mer

<400> 22

Asp Leu Tyr Arg Val Arg

1 5

Claims

1.一种由7个连续氨基酸残基所组成的合成肽，其具有如下的序列：X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQID NO.1)，其中，

X₁是丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；

X₂是是丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸；

X₃是苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸；

X₄是精氨酸或赖氨酸；

X₅是缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或谷氨酰胺；

X₆是精氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸或脯氨酸；

X₇是丝氨酸或苏氨酸；以及

X2、X3、X4、X6和X7分别为左旋氨基酸。

2.如权利要求1所述的合成肽，其中X₁和X₅中至少一氨基酸残基为右旋氨基酸。

3.如权利要求2所述的合成肽，其中所述合成肽具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列。

4.如权利要求3所述的合成肽，其中X₁是右旋氨基酸。

5.如权利要求3所述的合成肽，其中X₅是右旋氨基酸。

6.如权利要求1所述的合成肽，其中所述合成肽具有SEQ ID NO.3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。

7.一种合成肽的用途，其可用以制造一种可治疗与血管新生相关症状或疾病的医药品，其中所述合成肽由7个连续氨基酸残基所组成并具有序列：X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ IDNO.1)，其中，

X₂是是丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸；

X₃是苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸；

X₄是精氨酸或赖氨酸；

X₅是缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或谷氨酰胺；

X₆是精氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸或脯氨酸；

X₇是丝氨酸或苏氨酸；以及

X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分别为左旋氨基酸。

8.如权利要求7所述的用途，其中X₁和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸。

9.如权利要求7所述的用途，其中所述合成肽具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列。

10.如权利要求9所述的用途，其中X₁是右旋氨基酸。

11.如权利要求9所述的用途，其中X₅是右旋氨基酸。

12.如权利要求7所述的用途，其中所述合成肽具有SEQ ID NO.3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。

13.如权利要求9所述的用途，其中所述血管新生相关症状或疾病是癌症、眼部疾病、血管异常、感染、心血管疾病或损伤。

14.如权利要求13所述的用途、其中所述眼部疾病是角膜血管新生、脉络膜血管新生、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、老年性黄斑部病变、青年性黄斑部病变、糖尿病性黄斑水肿、色素性视网膜炎、沙眼、青光眼、干眼综合征、神经眼部疾病、视网膜动脉阻塞、眼色素层炎、脉络膜炎、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、中心性渗出性脉络膜视网膜病变、息肉状脉络膜血管病变、血管新生性青光眼、血管新生性黄斑部病变或雷射后并发症。

15.如权利要求14所述的用途，其中所述眼部疾病是老年性黄斑部病变。

16.如权利要求14所述的用途，其中所述眼部疾病是糖尿病性视网膜病变。

17.如权利要求13所述的用途，其中所述癌症是选自于：乳癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰脏癌、大肠癌、前列腺癌、淋巴系造血肿瘤、骨髓性白血病、甲状腺癌、甲状腺滤泡癌、骨髓增生异常综合征、起源于间叶细胞的肿瘤、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸胎癌、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、角化棘皮瘤、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、食道鳞状细胞癌、肝细胞癌、滤泡树突状细胞癌、肠癌、肌肉浸润性癌症、精囊肿瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、头颈癌、胃癌、骨癌、脑癌、视网膜癌、胆道癌、小肠癌、唾液腺癌、子宫肉瘤、睾丸癌、结缔组织癌、前列腺肥大、骨髓发育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神经内分泌癌、间皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管胃癌、输卵管癌、腹膜癌、浆液性乳头状苗勒氏癌、恶性腹水、胃肠道间质瘤、李弗劳明综合征以及希佩尔-林道综合征所组成的群组中。

18.如权利要求17所述的用途，其中所述淋巴系造血肿瘤是白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多发性骨髓癌、何杰金淋巴瘤或非何杰金淋巴瘤。

19.如权利要求17所述的用途，其中所述骨髓性白血病是急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病。

20.如权利要求17所述的用途，其中所述起源于间叶细胞的肿瘤是纤维肉瘤或横纹肌肉瘤。

21.如权利要求17所述的用途，其中所述癌症是转移性癌症。

22.如权利要求21所述的用途，其中所述癌症是转移性肺癌。

23.如权利要求17所述的用途，其中所述癌症是子宫肉瘤。

24.如权利要求13所述的用途，其中所述血管异常是选自：血管通透性、血浆渗漏、静脉畸形、血管母细胞瘤、血管瘤、脑动静脉畸形、动脉硬化、血栓症、脉络膜血管新生以及奥斯勒-惠勃综合征所组成的群组中。

25.如权利要求24所述的用途，其中所述血管异常是脉络膜血管新生。

26.如权利要求13所述的用途，其中所述感染是细菌感染，病毒感染，真菌感染或原虫感染。

27.如权利要求13所述的用途，其中所述心血管疾病是选自：动脉粥样硬化、心肌血管新生、高黏滞综合征、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞疾病、Osler-Weber-Rendu疾病、心肌炎、脑血管病变、二尖瓣闭锁不全、低血压、动脉或移植后动脉粥样硬化、纤维化、血栓症以及血小板聚集所组成的群组中。

28.一种治疗患有与血管新生相关症状或疾病的个体的方法，包含对所述个体施用一有效量的合成肽，其中所述合成肽由7个连续氨基酸残基所组成并具有序列：X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ ID NO.1)，其中，

X₂是是丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸；

X₃是苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸；

X₄是精氨酸或赖氨酸；

X₅是缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或谷氨酰胺；

X₆是精氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸或脯氨酸；

X₇是丝氨酸或苏氨酸；以及

X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分别为左旋氨基酸。

29.如权利要求28所述的方法，其中X₁和X₅至少一氨基酸残基为右旋氨基酸。

30.如权利要求28所述的方法，其中所述合成肽具有SEQ ID NO.2的氨基酸序列。

31.如权利要求30所述的方法，其中X₁是右旋氨基酸。

32.如权利要求30所述的方法，其中X₅是右旋氨基酸。

33.如权利要求28所述的方法，其中所述合成肽具有SEQ ID NO.3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一氨基酸序列。

34.如权利要求28所述的方法，其中所述血管新生相关症状或疾病是癌症、眼部疾病、血管异常、感染、心血管疾病或损伤。

35.如权利要求34所述的方法、其中所述眼部疾病是角膜血管新生、脉络膜血管新生、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、老年性黄斑部病变、青年性黄斑部病变、糖尿病性黄斑水肿、色素性视网膜炎、沙眼、青光眼、干眼综合征、神经眼部疾病、视网膜动脉阻塞、眼色素层炎、脉络膜炎、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、中心性渗出性脉络膜视网膜病变、息肉状脉络膜血管病变、血管新生性青光眼、血管新生性黄斑部病变或雷射后并发症。

36.如权利要求34所述的方法，其中所述眼部疾病是老年性黄斑部病变。

37.如权利要求36所述的方法，其中所述眼部疾病是糖尿病性视网膜病。

38.如权利要求34所述的方法，其中所述癌症是选自于：乳癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰脏癌、大肠癌、前列腺癌、淋巴系造血肿瘤、骨髓性白血病、甲状腺癌、甲状腺滤泡癌、骨髓增生异常综合征、起源于间叶细胞的肿瘤、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸胎癌、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、角化棘皮瘤、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、食道鳞状细胞癌、肝细胞癌、滤泡树突状细胞癌、肠癌、肌肉浸润性癌症、精囊肿瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、头颈癌、胃癌、骨癌、脑癌、视网膜癌、胆道癌、小肠癌、唾液腺癌、子宫肉瘤、睾丸癌、结缔组织癌、前列腺肥大、骨髓发育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神经内分泌癌、间皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管胃癌、输卵管癌、腹膜癌、浆液性乳头状苗勒氏癌、恶性腹水、胃肠道间质瘤、李弗劳明综合征以及希佩尔-林道综合征所组成的群组中。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述淋巴系造血肿瘤是白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多发性骨髓癌、何杰金淋巴瘤或非何杰金淋巴瘤。

40.如权利要求38所述的方法，其中所述骨髓性白血病是急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病。

41.如权利要求38所述的方法，其中所述起源于间叶细胞的肿瘤是纤维肉瘤或横纹肌肉瘤。

42.如权利要求38所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。

43.如权利要求42所述的方法，其中所述癌症是转移性肺癌。

44.如权利要求38所述的方法，其中所述癌症是子宫肉瘤。

45.如权利要求34所述的方法，其中所述血管异常是选自：血管通透性、血浆渗漏、静脉畸形、血管母细胞瘤、血管瘤、脑动静脉畸形、动脉硬化、血栓症、脉络膜血管新生以及奥斯勒-惠勃综合征所组成的群组中。

46.如权利要求45所述的方法，其中所述血管异常是脉络膜血管新生。

47.如权利要求34所述的方法，其中所述感染是细菌感染，病毒感染，真菌感染或原虫感染。

48.如权利要求34所述的方法，其中所述心血管疾病是选自：动脉粥样硬化、心肌血管新生、高黏滞综合征、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞疾病、Osler-Weber-Rendu疾病、心肌炎、脑血管病变、二尖瓣闭锁不全、低血压、动脉或移植后动脉粥样硬化、纤维化、血栓症以及血小板聚集所组成的群组中。

49.如权利要求28所述的方法，其中所述个体是人类。