RU2786127C2 - Композиции и способы для подавления ангиогенеза - Google Patents
Композиции и способы для подавления ангиогенеза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2786127C2 RU2786127C2 RU2018101141A RU2018101141A RU2786127C2 RU 2786127 C2 RU2786127 C2 RU 2786127C2 RU 2018101141 A RU2018101141 A RU 2018101141A RU 2018101141 A RU2018101141 A RU 2018101141A RU 2786127 C2 RU2786127 C2 RU 2786127C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rgcys
- peptide
- acid
- oic acid
- rgd
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 230000001629 suppression Effects 0.000 title abstract description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 123
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 51
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 31
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 21
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 14
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 10
- -1 glycine-arginine-glycine-cysteine Chemical compound 0.000 claims description 8
- 206010064930 Age-related macular degeneration Diseases 0.000 claims description 5
- 210000000554 Iris Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010055665 Corneal neovascularisation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000208 Wet Macular Degeneration Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000159 corneal neovascularization Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061255 Ischaemia Diseases 0.000 claims 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 claims 1
- 201000003142 neovascular glaucoma Diseases 0.000 claims 1
- 201000002154 pterygium Diseases 0.000 claims 1
- 201000007737 retinal degeneration Diseases 0.000 claims 1
- 230000004258 retinal degeneration Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 65
- 210000001508 Eye Anatomy 0.000 description 58
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 51
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 51
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 42
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 38
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 38
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 37
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 34
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 31
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 30
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 24
- 210000002744 Extracellular Matrix Anatomy 0.000 description 22
- 210000001525 Retina Anatomy 0.000 description 22
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 21
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 19
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 208000000318 Vitreous Detachment Diseases 0.000 description 18
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 18
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 17
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 16
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 16
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 15
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 15
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 15
- 230000037320 fibronectin Effects 0.000 description 15
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 15
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 15
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 14
- 238000009540 indirect ophthalmoscopy Methods 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 13
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 12
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 11
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 11
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N (2S)-2-[[2-[[(2S)-2-azaniumyl-5-(diaminomethylideneazaniumyl)pentanoyl]amino]acetyl]amino]butanedioate Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 10
- 102100009661 VTN Human genes 0.000 description 10
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 10
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N Fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 9
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 8
- 200000000019 wound Diseases 0.000 description 8
- 229930002945 all-trans-retinaldehyde Natural products 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000002207 retinal Effects 0.000 description 7
- 235000020945 retinal Nutrition 0.000 description 7
- 239000011604 retinal Substances 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N Cysteic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CS(O)(=O)=O XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 description 6
- 210000003583 Retinal Pigment Epithelium Anatomy 0.000 description 6
- 206010048955 Retinal toxicity Diseases 0.000 description 6
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 6
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 6
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 6
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 6
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 6
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 6
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 6
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 6
- 229940002612 prodrugs Drugs 0.000 description 6
- 231100000385 retinal toxicity Toxicity 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 6
- 210000004240 Ciliary Body Anatomy 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000002780 Macular Degeneration Diseases 0.000 description 5
- 206010027476 Metastasis Diseases 0.000 description 5
- 210000001210 Retinal Vessels Anatomy 0.000 description 5
- 210000004127 Vitreous Body Anatomy 0.000 description 5
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 5
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 108010045325 cyclic arginine-glycine-aspartic acid peptide Proteins 0.000 description 5
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 5
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 5
- 230000001976 improved Effects 0.000 description 5
- 239000007925 intracardiac injection Substances 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 5
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 5
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 5
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- WRLGYAWRGXKSKG-UHFFFAOYSA-M phenobarbital sodium Chemical compound [Na+].C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC([O-])=NC1=O WRLGYAWRGXKSKG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 5
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 5
- MAKUBRYLFHZREJ-JWBQXVCJSA-M sodium;(2S,3S,4R,5R,6R)-3-[(2S,3R,5S,6R)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C([O-])=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O MAKUBRYLFHZREJ-JWBQXVCJSA-M 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 5
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 4
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N Boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940052299 Calcium Chloride Dihydrate Drugs 0.000 description 4
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 4
- 210000002889 Endothelial Cells Anatomy 0.000 description 4
- 206010051058 Macular hole Diseases 0.000 description 4
- 229940050906 Magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 4
- 210000004379 Membranes Anatomy 0.000 description 4
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 208000002367 Retinal Perforations Diseases 0.000 description 4
- 206010038848 Retinal detachment Diseases 0.000 description 4
- 102100019017 VWF Human genes 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000001054 cortical Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 4
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 201000007914 proliferative diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 4
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 4
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 4
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 4
- 230000000699 topical Effects 0.000 description 4
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 4
- 229960001134 von Willebrand factor Drugs 0.000 description 4
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CQOQDQWUFQDJMK-SSTWWWIQSA-N 2-Methoxyestradiol Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H](O)CC[C@H]3[C@@H]1CCC1=C2C=C(OC)C(O)=C1 CQOQDQWUFQDJMK-SSTWWWIQSA-N 0.000 description 3
- 210000002159 Anterior Chamber Anatomy 0.000 description 3
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Belustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004204 Blood Vessels Anatomy 0.000 description 3
- 101700078950 CD44 Proteins 0.000 description 3
- 102100003735 CD44 Human genes 0.000 description 3
- 208000005590 Choroidal Neovascularization Diseases 0.000 description 3
- 206010060823 Choroidal neovascularisation Diseases 0.000 description 3
- 210000000795 Conjunctiva Anatomy 0.000 description 3
- 210000004087 Cornea Anatomy 0.000 description 3
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 3
- 210000000416 Exudates and Transudates Anatomy 0.000 description 3
- 210000000744 Eyelids Anatomy 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010018987 Haemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 229940088597 Hormone Drugs 0.000 description 3
- 229960004184 Ketamine Hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 3
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 3
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Nitrumon Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003733 Phenylephrine Hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 210000001747 Pupil Anatomy 0.000 description 3
- 206010038867 Retinal haemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 210000003786 Sclera Anatomy 0.000 description 3
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N Xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001600 Xylazine Drugs 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding Effects 0.000 description 3
- 231100000319 bleeding Toxicity 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000002860 competitive Effects 0.000 description 3
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 3
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L disodium;2-[2-[carboxylatomethyl(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000003511 endothelial Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002592 gangliocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 125000000267 glycino group Chemical group [H]N([*])C([H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- VCMGMSHEPQENPE-UHFFFAOYSA-N ketamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].C=1C=CC=C(Cl)C=1C1([NH2+]C)CCCCC1=O VCMGMSHEPQENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000011068 load Methods 0.000 description 3
- 239000002609 media Substances 0.000 description 3
- 230000001394 metastastic Effects 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N methylene dichloride Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 3
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 3
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 238000002577 ophthalmoscopy Methods 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- OCYSGIYOVXAGKQ-FVGYRXGTSA-N phenylephrine hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CNC[C@H](O)C1=CC=CC(O)=C1 OCYSGIYOVXAGKQ-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000003439 radiotherapeutic Effects 0.000 description 3
- 108010004034 stable plasma protein solution Proteins 0.000 description 3
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-Ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940120638 Avastin Drugs 0.000 description 2
- 229960000190 Bacillus Calmette–Guérin vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000037177 Biodistribution Effects 0.000 description 2
- WNRZHQBJSXRYJK-UHFFFAOYSA-N Carboxyamidotriazole Chemical compound NC1=C(C(=O)N)N=NN1CC(C=C1Cl)=CC(Cl)=C1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 WNRZHQBJSXRYJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N Celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 229940012952 Fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 229940019698 Fibrinogen containing hemostatics Drugs 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 229940022353 Herceptin Drugs 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N Ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001101 Ifosfamide Drugs 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N Intaxel Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 2
- 229940117681 Interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 241000446313 Lamella Species 0.000 description 2
- 206010025421 Macule Diseases 0.000 description 2
- 206010061289 Metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- 206010030348 Open angle glaucoma Diseases 0.000 description 2
- 229960001592 Paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- 229940067631 Phospholipids Drugs 0.000 description 2
- VIAFLMPQBHAMLI-UHFFFAOYSA-N PyBOP Chemical compound F[P-](F)(F)(F)(F)F.C1CCCN1[P+](N1CCCC1)(N1CCCC1)ON1C2=CC=CC=C2N=N1 VIAFLMPQBHAMLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N Rofecoxib Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1C1=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)OC1 RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001585 Trabecular Meshwork Anatomy 0.000 description 2
- 210000003606 Umbilical Veins Anatomy 0.000 description 2
- 102100015249 VEGFA Human genes 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 210000003462 Veins Anatomy 0.000 description 2
- 229960003048 Vinblastine Drugs 0.000 description 2
- HOFQVRTUGATRFI-XQKSVPLYSA-N Vinblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 HOFQVRTUGATRFI-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 2
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 2
- 229960004528 Vincristine Drugs 0.000 description 2
- 206010057435 Vitreous adhesions Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000012042 active reagent Substances 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000000181 anti-adherence Effects 0.000 description 2
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 201000007917 background diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 2
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 201000004569 blindness Diseases 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 2
- 229960000590 celecoxib Drugs 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cells Anatomy 0.000 description 2
- 229940020899 hematological Enzymes Drugs 0.000 description 2
- 230000003284 homeostatic Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 2
- 229960002247 lomustine Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 2
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylbenzene Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003278 mimic Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative Effects 0.000 description 2
- 230000001012 protector Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000371 rofecoxib Drugs 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229930003347 taxol Natural products 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 108060008245 thrombospondin family Proteins 0.000 description 2
- 102000002938 thrombospondin family Human genes 0.000 description 2
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- ZROHGHOFXNOHSO-BNTLRKBRSA-L (1R,2R)-cyclohexane-1,2-diamine;oxalate;platinum(2+) Chemical compound [H][N]([C@@H]1CCCC[C@H]1[N]1([H])[H])([H])[Pt]11OC(=O)C(=O)O1 ZROHGHOFXNOHSO-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- NBRQRXRBIHVLGI-OWXODZSWSA-N (4aS,5aR,12aR)-1,10,11,12a-tetrahydroxy-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4H-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1C2=CC=CC(O)=C2C(O)=C(C2=O)[C@@H]1C[C@@H]1[C@@]2(O)C(O)=C(C(=O)N)C(=O)C1 NBRQRXRBIHVLGI-OWXODZSWSA-N 0.000 description 1
- OMJKFYKNWZZKTK-POHAHGRESA-N (5Z)-5-(dimethylaminohydrazinylidene)imidazole-4-carboxamide Chemical compound CN(C)N\N=C1/N=CN=C1C(N)=O OMJKFYKNWZZKTK-POHAHGRESA-N 0.000 description 1
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 1,4-Butanediol, dimethanesulfonate Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFQCQIGMURIECL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(diethylamino)ethyl]-2',6'-dimethylspiro[isoquinoline-4,4'-oxane]-1,3-dione;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.O=C1N(CCN(CC)CC)C(=O)C2=CC=CC=C2C21CC(C)OC(C)C2 OFQCQIGMURIECL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVXBOLULGPECHP-WAYWQWQTSA-N 2-methoxy-5-[(Z)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethenyl]phenol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1\C=C/C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 HVXBOLULGPECHP-WAYWQWQTSA-N 0.000 description 1
- GINFBXXYGUODAT-UHFFFAOYSA-N 3-methoxy-4-methyl-5-oxo-N-[2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl-1,2,4-triazole-1-carboxamide Chemical compound O=C1N(C)C(OC)=NN1C(=O)NS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1OC(F)(F)F GINFBXXYGUODAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 5-flurouricil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NICPJLVQTQFOIN-AWEZNQCLSA-N 9H-fluoren-9-ylmethyl (2S)-2-formylpyrrolidine-1-carboxylate Chemical compound O=C[C@@H]1CCCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 NICPJLVQTQFOIN-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N ADRIAMYCIN Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 1
- 229940100198 ALKYLATING AGENTS Drugs 0.000 description 1
- 229940100197 ANTIMETABOLITES Drugs 0.000 description 1
- 229960004676 ANTITHROMBOTIC AGENTS Drugs 0.000 description 1
- 229960003272 ASPARAGINASE Drugs 0.000 description 1
- XJKJWTWGDGIQRH-BFIDDRIFSA-N Alginic acid Chemical compound O1[C@@H](C(O)=O)[C@@H](OC)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H]1O XJKJWTWGDGIQRH-BFIDDRIFSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N Anastrozole Chemical compound N#CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C#N)C)=CC(CN2N=CN=C2)=C1 YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000068 Angiostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 description 1
- 108090000644 Angiozyme Proteins 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N Aromasine Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=C)C2=C1 BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N 0.000 description 1
- 229940046844 Aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 1
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 1
- 229960005261 Aspartic Acid Drugs 0.000 description 1
- 108010005144 Bevacizumab Proteins 0.000 description 1
- 229960001561 Bleomycin Drugs 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 102100016705 COL18A1 Human genes 0.000 description 1
- 229960004562 Carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940047495 Celebrex Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N Chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004630 Chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- AMLYAMJWYAIXIA-VWNVYAMZSA-N Cilengitide Chemical compound N1C(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H]1CC1=CC=CC=C1 AMLYAMJWYAIXIA-VWNVYAMZSA-N 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 240000002268 Citrus limon Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229960004397 Cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000684 Cytarabine Drugs 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytosar Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 210000004292 Cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N DAUNOMYCIN Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229940039227 DIAGNOSTIC AGENTS Drugs 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 229960000975 Daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N Diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049959 Discoidins Proteins 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N Docetaxel Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 229960004679 Doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229960001904 EPIRUBICIN Drugs 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N EPIRUBICIN Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 1
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 1
- 210000003989 Endothelium, Vascular Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 1
- 229960005420 Etoposide Drugs 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N Etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- YSXSVEFKIDDGJW-UHFFFAOYSA-N F[P-](F)(F)(F)(F)F.C1CCCN1[P+](N1C(CCC1)N1C2=CC=CC=C2N=N1)(O)N1CCCC1 Chemical compound F[P-](F)(F)(F)(F)F.C1CCCN1[P+](N1C(CCC1)N1C2=CC=CC=C2N=N1)(O)N1CCCC1 YSXSVEFKIDDGJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N Formestane Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1O OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N Gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 229940099552 Hyaluronan Drugs 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N Hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010074224 Hyaluronoglucosaminidase Proteins 0.000 description 1
- 229960000908 Idarubicin Drugs 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin hydrochloride Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 1
- 108009000123 Integrin-mediated Cell Adhesion Proteins 0.000 description 1
- 229950000038 Interferon alfa Drugs 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N Irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 208000010038 Ischemic Optic Neuropathy Diseases 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102100009732 LYVE1 Human genes 0.000 description 1
- 101700048557 LYVE1 Proteins 0.000 description 1
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N Letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 Leukocytes Anatomy 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 229940076783 Lucentis Drugs 0.000 description 1
- 210000001165 Lymph Nodes Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 description 1
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N Melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229960004857 Mitomycin Drugs 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AAFYOVPTFNNVDN-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N-phenacylnitrous amide Chemical compound O=NN(C)CC(=O)C1=CC=CC=C1 AAFYOVPTFNNVDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002850 Nasal Mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004126 Nerve Fibers Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 Neutrophils Anatomy 0.000 description 1
- OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N Nitrosourea Chemical compound NC(=O)N=NO OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001331 Nose Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 Nucleus Anatomy 0.000 description 1
- MSHZHSPISPJWHW-UHFFFAOYSA-N O-(chloroacetylcarbamoyl)fumagillol Chemical compound O1C(CC=C(C)C)C1(C)C1C(OC)C(OC(=O)NC(=O)CCl)CCC21CO2 MSHZHSPISPJWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940074730 OPHTHAMOLOGIC DIAGNOSTIC AGENTS Drugs 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 210000003733 Optic Disk Anatomy 0.000 description 1
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 1
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 1
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 210000003695 Paranasal Sinuses Anatomy 0.000 description 1
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 210000003800 Pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 1
- 210000004011 Plasma Cells Anatomy 0.000 description 1
- 229940012957 Plasmin Drugs 0.000 description 1
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N Procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 210000003324 RBC Anatomy 0.000 description 1
- 208000004644 Retinal Vein Occlusion Diseases 0.000 description 1
- 206010038886 Retinal oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010039580 Scar Diseases 0.000 description 1
- 229940005550 Sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- UIRKNQLZZXALBI-MSVGPLKSSA-N Squalamine Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](NCCCNCCCCN)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CC[C@H](C(C)C)OS(O)(=O)=O)[C@@]2(C)CC1 UIRKNQLZZXALBI-MSVGPLKSSA-N 0.000 description 1
- 229950001248 Squalamine Drugs 0.000 description 1
- 239000004826 Synthetic adhesive Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N TFA trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001603 Tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 1
- 229940063683 Taxotere Drugs 0.000 description 1
- 229960003433 Thalidomide Drugs 0.000 description 1
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N Thalidomide Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N ThioTEPA Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005454 Thioguanine Drugs 0.000 description 1
- 229960001196 Thiotepa Drugs 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N Topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 101700072561 VM2T Proteins 0.000 description 1
- 241000863480 Vinca Species 0.000 description 1
- 229940087652 Vioxx Drugs 0.000 description 1
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 1
- 206010047654 Vitreous floaters Diseases 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- YCPOZVAOBBQLRI-PHDIDXHHSA-N [(2R,3R)-2,3-dihydroxy-4-methylsulfonyloxybutyl] methanesulfonate Chemical compound CS(=O)(=O)OC[C@@H](O)[C@H](O)COS(C)(=O)=O YCPOZVAOBBQLRI-PHDIDXHHSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloids Natural products 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 229960002932 anastrozole Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000002257 antimetastatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- DVQHYTBCTGYNNN-UHFFFAOYSA-N azane;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum Chemical compound N.N.[Pt].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 DVQHYTBCTGYNNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 101800001224 disintegrin family Proteins 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 229960000255 exemestane Drugs 0.000 description 1
- 230000004373 eye development Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 229960004421 formestane Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 239000003652 hormone inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940027318 hydroxyurea Drugs 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 200000000018 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 108060004057 integrin beta chain family Proteins 0.000 description 1
- 102000017776 integrin beta chain family Human genes 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 description 1
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- 200000000023 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005649 metathesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000006654 negative regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 210000001127 pigmented epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000896 plasminic Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 230000003334 potential Effects 0.000 description 1
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylaxis Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 201000011056 retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011195 retinal edema Diseases 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 231100000279 safety data Toxicity 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000036573 scar formation Effects 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- MSXHSNHNTORCAW-UHFFFAOYSA-M sodium 3,4,5,6-tetrahydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].OC1OC(C([O-])=O)C(O)C(O)C1O MSXHSNHNTORCAW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940037001 sodium edetate Drugs 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 108010071614 streptocin Proteins 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 238000011099 tissue engineering Methods 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- LXZZYRPGZAFOLE-UHFFFAOYSA-L transplatin Chemical compound [H][N]([H])([H])[Pt](Cl)(Cl)[N]([H])([H])[H] LXZZYRPGZAFOLE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic Effects 0.000 description 1
- 229960003181 treosulfan Drugs 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 1
- 230000000989 vascularization Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к композиции, пригодной для подавления ангиогенеза у субъекта, являющегося человеком или животным, содержащей пептид, содержащий аминокислотную последовательность глицин-аргинин-глицин-цистеиновая(кислота)-треонин-пролин. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 табл., 6 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка претендует на приоритет в соответствии с § 119(e) раздела 35 Свода федеральных законов США по предварительной заявке на патент США No. 61/259,748, озаглавленной как "Композиции и способы ингибирования клеточной адгезии к RGD связывающим сайтам", поданной 10 ноября 2009, полное содержание которой включено сюда посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение в целом относится к области химии и медицины и более конкретно к композициям веществ и способам, пригодных для ингибирования клеточной адгезии Arg-Gly-Asp ("RGD" трипептид) связывающими сайтами, и относится к лечению заболеваний, таких как воспаление, заживления ран, предотвращения образования рубцов, тромбоза, метастазирования рака и опухолей, пролиферативной или непролиферативной диабетической ретинопатии, разжижения стекловидного тела, индукции задней отслойки стекловидного тела (PVD), патогенеза витреоретинальных заболеваний, таких как плавающие помутнения, идиопатический разрыв макулы, макулярный тракционный синдром, возрастной макулярная дегенерация, влажная макулярная дегенерация, хориоидальная неоваскуляризация, витреоретинальная операция, окклюзия вен, неоваскуляризация роговицы, ишемия зрительного нерва, рубеоз радужки, и к предотвращению образования рубцов при хирургии глаукомы.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Последовательность RGD трипептида присутствует в составе многих белков и играет важную роль в клеточной адгезии. Примеры белков, в которых присутствует последовательность RGD трипептида, включают коллаген, фибронектин, витронектин, фактор Виллебранда (ФВ), некоторые дизинтегрины и некоторые дискоидины.
Интегрины представляют собой гетеродимерные рецепторы на поверхности клеток и опосредуют адгезию между клетками и внеклеточным матриксом (ВКМ) путем связывания их с лигандами, имеющими доступную для связывания последовательность RGD. Нормальное интегрин-RGD связывание, как предполагается, играет важную роль в экспрессии генов, участвующих в росте клеток, миграции и выживании. Нарушения регулирования такого роста клеток, миграции и выживания может привести к ряду болезненных состояний, включая тромбоз, воспаление и рак. Таким образом, RGD пептиды изучались как потенциальные мимитики белков клеточной адгезии, а также рассматривалась их способность связываться с интегринами для их использования терапевтических целей, таких как ингибирование апоптоза, ангиогенеза, опухолей, для использования их мультимерных форм как внутренних агентов лучевой терапии, а также визуализирующих рак агентов и как лекарственное противораковое средство.
В глазах интегрины влияют целый ряд процессов, в том числе развитие глаза, миграция клеток, заживление и некоторые патологические процессы. Интегрины также могут модулировать воспаление и тромбоз в тканях глаза. При введении интравитреально пептид RGD, как сообщается, может быть причиной задней отслойки стекловидного тела в моделях на животных и, таким образом, может быть полезен в лечении некоторых заболеваний сетчатки и/или в облегчении в удалении стекловидного тела в ходе витрэктомии. [См. Olivera, L.B. и др., RGD Peptide-Assisted Vitrectomy to Facilitate Induction of a Posterior Vitreous Detachment: a New Principe in Pharmacological Vitreolysis; Current Eye Research (8): 333-40 (25 декабря 2002)].
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение обеспечивает новые соединения, содержащие RGCys-вую кислоту (например, R-G-NH-CH(CH2-SO3H)COOH или Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH) и ее производные (в том числе фармацевтически приемлемые соли, гидраты, стереоизомеры, мультимеры, циклические формы, линейные формы, конъюгаты с лекарственными средствами, про лекарства и их производные).
Настоящее изобретение также относится к композициям и способам ингибирования клеточной адгезии к RGD сайтам связывания или предоставления других диагностических или терапевтических агентов против RGD сайтов связывания у субъекта (человека или животного) путем введения субъекту эффективного количества композиции, содержащей пептид RGCys-овой кислоты или его производное (в том числе фармацевтически приемлемые соли, гидраты, стереоизомеры, мультимеры, циклические формы, линейные формы, конъюгаты с лекарственными средствами, про лекарства и их производные). Конкретные примеры пептида RGCys-овой кислоты по настоящему изобретению включают линейную форму Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH (в частности, упомянутые здесь, как Соединение 1) и циклическую форму Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH) (в частности, упомянутые здесь, как Соединение 2).
Общие формулы производных RGCys-овой кислоты по настоящему изобретению включают, но не ограничиваясь этим, соединения, соответствующие Общим формулам I-VII, представленным ниже:
Общая формула I:
где X выбран из: Н, C1-С6 алкила, Ph или SO3H, a Y=ОН или NH2.
Общая формула II:
где X выбран из: Н, C1-С6 алкила, Ph или SO3H.
Общая формула III:
где X выбран из: Н, C1-С6 алкила, Ph или SO3H, и где Z выбран из: Н или SO3H.
Общая формула IV:
где X выбран из: Н, C1-С6 алкила, Ph или SO3H; Y выбран из: ОН или NH2.
Общая формула V:
где X выбран из: Н, C1-С6 алкила, Ph или SO3H.
Общая формула VI:
где X выбран из: Н, C1-С6 алкила, Ph или SO3H.
Общая формула VII:
где X и X1 выбраны из циклического или линейного - Phe-Val-Ala, -Phe-Leu-Ala, -Phe-Val-Gly, -Phe-Leu-Gly, -Phe-Pro-Gly, -Phe-Pro-Ala, -Phe-Val или любой соли любой комбинации D-изомера или L-изомера Arg, Gly, Cys, Phe, Val, Ala, Leu, Pro, Thr.
Примеры циклических форм Общей формулы VII включают, но не обязательно ограничиваются этим:
где X' выбран из: Н, C1-С6 алкила, Ph или SO3H, a Z выбран из Н или Me; Y выбран из ОН, NH2.
Сульфокислоты являются более сильными кислотами, чем соответствующие карбоновые кислоты. Высокая полярность группы сульфокислоты приводит к усилению межмолекулярных связей. Например, RG-Цистеиновая кислота, которая имеет более поляризованную О-Н связь, может образовывать более сильные водородные связи, чем RG-Аспарагиновая кислота (RGD пептид), который имеет относительно менее поляризованную О-Н связь, с амидными группами белков в интегриновом сайте связывания и/или сильнее взаимодействует с ионами металлов в составе интегринового сайта связывания.
Как описано более подробно в данном описании, был синтезирован и испытан на животных один конкретный пример Общей формулы VII, Глицинил-Аргинил-Глицинил-Цистеиновая кислота-Треонил-Пролин-СООН (GRG Цистеиновая кислота TP; далее именуется как Соединение 1). Было обнаружено, что он является эффективным в стимулировании отслоение задней поверхности стекловидного тела от поверхности сетчатки (PVD) путем ингибирования взаимодействий интегрин - внеклеточный матрикс (ВКМ). Как описано также более подробно в данном описании, Соединение 1 было протестировано в модели заживления раны с использованием эндотелиальных клеток пупочной вены человека (HUVEC), и было показано, что оно ингибирует клеточную адгезию на 74% в течение 12 часов по сравнению с ингибированием на 40% циклическим RGD-пептидом. Эти исследования показывают и подтверждают, что Глицинил-Аргинил-Глицинил-Цистеиновая кислота-Треонил-Пролин-СООН может связываться с интегрином даже сильнее, чем RGD пептид.
Пептид RGCys-овой кислоты, который может существовать как в L-форме, так и в D-форме, является конкурентным ингибитором интегрин-ВКМ взаимодействий. Последовательности пептида RGCys-овой кислоты могут быть представлены протеаза-устойчивыми производными, циклическими производными или производными пролекарств, либо могут быть связаны с системами доставки лекарства или моноклональных антител.
Композиции по настоящему изобретению пригодны для ингибирования ангиогенеза и могут быть использованы для лечения воспаления, заживления ран, тромбоза, раковых метастаз и опухолей. Дальнейшее полезное применение может быть найдено в офтальмологии, включая пролиферативную или непролиферативную диабетическую ретинопатию, разжижение стекловидного тела, индукцию отслоения задней поверхности стекловидного тела (PVD), патогенез витреоретинальных заболеваний, таких как идиопатический макулярный разрыв, витреомакулярная тракция, возрастная дегенерация желтого пятна, влажная дегенерация макулы, хориоидальная неоваскуляризация, витреоретинальная хирургия, окклюзия вен и профилактика образования рубцов при хирургии глаукомы. Кроме того, мультимерные и/или радиоактивно-меченные композиции по настоящему изобретению пригодны в качестве диагностических/визуализирующих агентов для обнаружения опухолей и в качестве радиотерапевтических препаратов для лечения опухолей, а также в качестве направленных переносчиков противораковых лекарств, благодаря их свойствам нацеливания на опухоль.
Биоматериалы, соединенные с пептидом RGCys-овая кислота, также могут обеспечить синтетическое адгезивное микроокружение для увеличения времени жизни и роста клеток и для инжениринга живых тканей при их использовании в тканевой инженерии и в регенеративной медицине. Благодаря своему свойству связывать интегриновые рецепторы адгезии, пептиды RGCys-овая кислота могут обеспечить адгезионный сигнал при связывании их с биоматериалом или подложкой. Материалы на основе RGCys-овой кислоты опосредуют клеточную адгезию, распространение и миграцию клеток. Кроме того, интегрин-опосредованная клеточная адгезия способствует пролиферации и выживанию клеток и играет ключевую роль в сборке и организации многоклеточных структур и тканей.
Препараты для лечения макулярной дегенерации, как Луцентис и Авастин, основаны на ингибировании VEGF, который в противном случае вызывает рост новых сосудов, ангиогенез, и, следовательно, способствует отеку макулы. Было известно, что небольшой пептид RGD может индуцировать апоптоз посредством ингибирования взаимодействия с внеклеточным матриксом благодаря конкурентному связыванию, как показано Бруксом и соавт. в Патенте США №6,500,924.
RGD пептид-связывающий и распознающий мотив можно найти в белках внеклеточного матрикса и интегринах, которые связывают внутриклеточный цитоскелет клеток с ВКМ путем распознавания RGD эпитопов адгезии. См., например, Foos, R.Y., Invest. Opthalmol. Vis. Sci. (1972) 11, 801-808. Клетки, не связанные с ВКМ, как правило, подвергаются апоптозу.
В общем, взаимодействие между фибробластами и гликопротеиновыми компонентами внеклеточного матрикса вызывает формирование рубца, опосредованное, прежде всего, взаимодействием RGD-содержащей аминокислотной последовательности с интегринами клеточной поверхности. Также известно, что RGD последовательность участвуют во взаимодействиях клетка - ВКМ при воспалительных и гомеостатических реакциях (см. Hershkoviz С.М. и соавт., Invest. Opthalmol. Vis. Sci. (1994), 35, 2585-2591), a интегрины играют важную роль в миграции клеток при заживлении ран или патологических процессах и модуляции воспаления и тромбоза. Таким образом, эффективные антагонисты интегрина, такие как RGD пептиды, могут быть очень полезны в качестве фармакологических агентов, в частности противовоспалительных, антиметастатических или анти-тромботических агентов (см. Elner S.G., Elner V.M., IOVS (1996) 37:696-701). В литературе также сообщается, что CD44 рецептор гиалуроновой кислоты опосредует взаимодействий клетка-клетка и клетка-матрикс благодаря своей аффинности для гиалуроновой кислоты, а также, возможно, благодаря своей аффинности для других лигандов, таких как остеопонтин, коллаген и матриксные металлопротеазы (ММП).
Адгезия к гиалуронану играет важную роль в миграции клеток, росте опухоли и ее прогрессировании, он участвует в активации лимфоцитов, рециркуляции и хоминге, а также в кроветворении. Измененная экспрессия или дисфункция вызывает многочисленные патогенные проявления (см., например, Jiang D., Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. (2007) 23: 435-461; и Knudson, W. и др., Matrix Bio. (2002), 21: 15-23).
Недавно было показано, что взаимодействие CD44 и клеточных матриксных компонентов (например, НА) играет важную роль в развитии различных воспалительных заболеваниях, и нарушение взаимодействий гиалуронан-CD44 может привести к улучшению хориоидальной неоваскуляризации (см. Hiroshi Mochimaru и др., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2009) 50: 4410-4415).
Эти сведения показывают, что молекулы адгезии, такие как RGD пептид или CD44, в межклеточных взаимодействиях и взаимодействиях клетка-ЕСМ играют важную роль в развитии многих патогенных заболеваний, и ингибирование таких взаимодействий может стать новой терапевтической целью в лечении этих заболеваний.
Для синтетических пептидов также было показано связывание их с интегринами и факторами роста. Для циклических пентапептидов, содержащих RGD последовательность, было установлено ингибирование связывания витронектина с ανβ3 интегрином (см. Michael A. Dechantsreiter и др., J. Med. Chem. (1999) 42: 3033-3040), и обоих витронектина и фибронектина с ανβ3 и ανIIbβ3 интегринами (см. Roland Haubner и соавт., J. Am. Chem. Soc., (1996) 118:7461-7472). Было показано, что такое ингибирование может найти применение в лечении многочисленных несвязанных между собой заболеваний. В исследованиях на хомяках показано, что эти циклические пентапептиды задерживают рост и метатезирование опухоли по сравнению с контрольными животными (см. М.А. Buerkle и др., British J. Cancer (2002) 86:788-795). Для таких пентапептидов также показано уменьшение связывания серповидных красных кровяных клеток с эндотелием сосудов и улучшение гемодинамического поведения (см. Eileen М. Finnegan и др., J. Am. Physiol. Heart Circ. Physiol. (2007) 293: H1038-H1045). Другой циклический пептид, содержащий RGD последовательность, проявил сильное связывание с α4β1 интегрином, известным как играющий важную роль в связывании лейкоцитов при воспалительных и иммунных реакциях (см. Pina М. Cardarelli и соавт., J. Biol. Chem. (1994) 269:18668-18673). Синтетические сульфатированные тетрапептиды проявили сильное связывание с VEGF (см. Maynard, J.A. Hubbell, Acta Biomaterialia (2005) 1: 451-459).
Кроме того, важным и полезным приложением является то, что димерный RGD пептид, конъюгированный с лекарственным средством, показан как пригодный для интегрин-нацеленной доставки лекарств в опухоль (см. Chen и соавт., J. Med. Chem., (2005) 48 (4): 1098-1106).
В другом не менее важном и полезном приложении мультимерные радиомеченные RGD пептиды показаны как пригодные в качестве диагностических/визуализирующих агентов для выявления опухолей и в качестве агентов для лучевой терапии конкретных опухолевых мишеней и лечения их путем воздействия на интегрин ανβ3 (см. Zi-Bo Li и др., J. Nucl. Medicine (2007) 48: 1162-1171).
В офтальмологии образование рубцов при заживлении ран фибробластами является одной из основных проблем, в частности, глаукомы. Это связано с взаимодействиями между фибробластами и гликопротеиновыми компонентами ВКМ. Распознавание ВКМ гликопротеинов происходит через интегрины на поверхности клетки, которые являются специфичными для эпитопов адгезии, таких как последовательность Arg-Gly-Asp (или RGD). RGD последовательность, которая присутствует в составе некоторых белков плазмы крови, в том числе фибронектина (FN) и витронектина (VN), участвует во взаимодействиях клетка - ВКМ, которые возникают при воспалительных и гомеостатических реакциях. Ингибирование взаимодействия между фибробластами и гликопротеинами ВКМ уменьшает образование рубцов (см. Rami Hershkoviz др., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1994) 35: 2585-2591).
Фибриллы коллагена в задней коре стекловидного тела связаны с витреоретинальной поверхностью, в частности, на внутренней пограничной мембране поверхности сетчатки (см. Sebag J., Eye (1992), 6: 541-552). В связи с присоединением к стекловидному телу, диску зрительного нерва, вдоль основных сосудов сетчатки и с лицевой стороны, весь задний полюс играет важную роль в патогенезе витреоретинальных заболеваний, таких как идиопатический макулярный разрыв, витреомакулярный тракционный синдром, пролиферативная диабетическая ретинопатия и т.д. (Akiba J.Quiroz М.А. и соавт., Ophthalmol. (1990) 97, 1619-1655).
Ингибирование ангиогенеза, как было ранее показано, может повлиять на диабетическую ретинопатию и макулярную дегенерацию, которые являются результатом разрастания кровеносных сосудов глаза. При этих заболеваниях сосуды нарушают нормальную структуру глаза или блокируют доступ света к задней части глаза. Новые кровеносные сосуды являются первичной патологией, а прекращение роста кровеносных сосудов может предотвратить слепоту. Таким образом, ангиоингибирование может обеспечить не только лечение этих заболеваний, но и вылечить их полностью. Кроме того, было предположено, что отделение стекловидного тела от сетчатки может облегчить макулярную тракцию, что снижает риск образования макулярного разрыва. Соответственно, ингибирование на задней поверхности стекловидного тела фибронектина и ламинина, связывающих интегрины на витреоретинальной поверхности, может предотвратить образование новых сосудов сетчатки глаза при диабетической ретинопатии и окклюзии вен сетчатки (см. Akiba J. Quiroz MA, Ophthalmol. (1990) 97, 1619-1655; Kelly N.E. и др., Arch. Ophthalmol. (1991) 109, 654-659, и Kado M. и др., J. Am. Ophthalmol. (1988) 105: 20-24)
В последние годы хирургические процедуры стекловидного тела значительно улучшились с целью уменьшить витреоретинальную тракцию и уменьшить отек сетчатки. Несмотря на непрерывное совершенствование хирургической техники и приборов, по-прежнему остается трудоемким атравматическое удаление коры стекловидного тела у ряда пациентов, особенно у больных диабетической ретинопатией и педиатрических пациентов, из-за осложнений, таких как разрывы или отслойка сетчатки и повреждение нервных волокон сетчатки (см. Sebag J., Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. (1987) 225: 89-93; и Han D.P. и др., Arch. Ophthalmol. (1998) 106: 998-1000) и т.д. Таким образом, является весьма желательным менее травматичный подход селективного отделения поверхности стекловидного тела без повреждения сетчатки. В последние годы в литературе указывались различные фармакологические агенты для отделения витреоретинальной поверхности (см. Trese М.Т., Eye (2002) 16: 365-368; Gandorfer А. и др., J. Am. Ophthalmol. (2002) 133: 156-159, и Hesse L. и др., Eye Res. (2000) 70: 31-39). Фармакологический витреолизис с использованием ферментов, таких как гиалуронидаза (см. патент США №6,863,886 Karageozian и др.) и аутологичный плазмин (Sakuma Т. и др., Nippon Ganka Gakkai Zassi (2003) 107: 709-718) ранее был изучен для облечения расщепления внеклеточного матрикса и провоцирования отделения задней поверхности стекловидного тела. Тем не менее, неспецифические разрушения прилегающих тканей ферментами затрудняют их терапевтическое применение. В последние годы новый подход с использованием неферментативных фармакологических агентов, таких как мочевина (см. Nickerson С. и др., J. Biomechanics (2008) 41: 1840-1846, и Macromol. Symp. (2005): 183-189) и пептид RGD (см. Leonardo В. и др., Curr. Eye Res. (2002) 25: 333-340), был исследован, принимая во внимание влияние на разделение витреоретинальной поверхности. Было показано, что синтетический аналог пептида RGD конкурирует за RGD мотив в белках ВКМ, нарушая интегрин - ВКМ взаимодействия и ослабляя их in vitro (Williams J.A., Pathol. Bio. (1992) 40: 813-821; Gehlsen K.P. и др., J. Cell Biol. (1988) 106: 925-930; Pierschbacher M.D. и др., J. Biol. Chem., (1987) 262: 17294-17298, и Zhon L.L. и др., IOVS (1996) 37: 104-113) и in vivo. Таким образом, интравитреальные инъекции раствора RGD пептидов приводят к высвобождению RGD-эпитопов из нерастворимых белков ВКМ на поверхности сетчатки, а следовательно облегчая неферментативную PVD в моделях на кроликах. Очевидно, что эти результаты показывают, что витреоретинальная поверхность включает в себя интегриновое соединение с RGD мотивом ВКМ, а также адгезию коллагена коры стекловидного тела на внутренней пограничной ламеле (ВПЛ). RGD пептиды и их производные способствуют миграции эпителиальных клеток в ране (см. P.M. Merz и др., J. Burn Care Res. (1996) 17: 199-206), а также поддерживают свою биологическую активность при введении в составе синтетических биоматериалов, таких как гидрогели (см. MP Lutolf и др., Proc. Nat. Acad. Sci. (2003) 100: 5413-5418, а также MP Lutolf и др., Nature Biotechnol. (2003) 21: 513-518), других полимерных матриц (см. Horng-Ban Lin и др., J. Biomed. Materials Res. (2004) 28: 329-342), так поверхностных пленок на твердых субстратах (D.M. Ferris и др., Biomaterials (1999) 20: 2323-2331). RGD пептиды также способствуют повышению адгезии эпителиальных или эндотелиальных клеток сосудистых протезов (см. K. Walluscheck и др., Eur. J. Vascular and Endovascular Surgery (1996) 12: 321-330) и других искусственных органов (см. Jeschke, Brigette, Biomaterials (2002) 23: 3455-3463), покрытых этой пептидной последовательностью, и было показано, что они обеспечивают поддержание возобновления роста нервов (см. М. Rafiuddin Ahmed и др., Brain Res. (2003) 993:208-6). Биологически активная поверхность протеза может содержать синтетические волокна смолы или полимеры.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг. 1 показано влияние трех пептидов, а именно циклического RGD-пептида, пептида RGCys-овая кислота (Соединение 1) и RGE пептида, на кинетику заживление ран;
На фиг. 2 показана ВЭЖХ хроматограмма пептида RGCys-овая кислота (Соединение 1);
На фиг. 3 показаны масс-хроматограммы Electrospray пептид RGCys-овая кислота (Соединение 1);
На фиг. 4 показаны ВЭЖХ хроматограммы циклического пептида RGCys-овая кислота (Соединение 2) и
На фиг. 5 показаны масс-хроматограммы Electrospray циклического пептида RGCys-овая кислота (Соединение 2).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новым соединениям, в том числе соединениям Общих формул I по VII, указанным выше. Конкретные примеры включают линейные формы Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH (например, упомянутые здесь, как Соединение 1) и циклическую форму Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH (например, упомянутые здесь как Соединение 2), а также их производные, в том числе фармацевтически приемлемые соли, гидраты, стереоизомеры, мультимеры, циклические формы, линейные формы, многомерные формы, конъюгаты с лекарственным средством, пролекарства и их производные.
ПРИМЕРЫ
Синтез Соединений 1 и 2
Может быть проведен традиционный твердофазный синтез пептидов (SPPS, см. R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. (1963) 85(14):2149-2154), известней специалистам в данной области техники. SPPS является предпочтительным методом синтеза благодаря высокой производительности. В общем, первый этап твердофазного пептидного синтеза заключается в сборке пептидной цепи с протекторными производными аминокислот на полимерной подложке. На втором этапе этой технологии проводят отщепление пептида от подложки с одновременным расщеплением всех боковых протекторных групп, получая незрелый свободный пептид. Общий принцип SPPS заключается в повторяющихся циклах связывания-депротекции. Свободный N-концевой амин пептида, прикрепленного к твердофазной подложке, соединяется с отдельной N-протекторной аминокислотной единицей. Эта единица затем подвергается депротекции, открывая новый N-концевой амин, к которому далее может быть присоединена аминокислота. См. "Asymmetric Synthesis", Von G.M. Coppola и H.F. Schuster; John Wiley & Sons, Нью-Йорк 1987, где описаны стратегии синтеза, протекции и депротекции, а также "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", Peter G.M. Wuts и Theodora W. Greene, (2-е издание) J. Wiley & Sons, 1991, где описаны стратегии протекции и депротекции.
Из двух основных используемых форм твердофазного синтеза пептидов - Fmoc (9-флуоренилметилоксикарбонил; щелочная лабильная альфа-амино-протекторная группа) и t-Boc (трет-бутилоксикарбонил; кислотная лабильная протекторная группа), предпочтительнее в синтезе пептидов по настоящему изобретению использование Fmoc. Для каждого отдельного способа применяются различные смолы и стадии протекции боковых аминокислот и последовательные стадии расщепления/депротекции. После отщепления от подложки пептиды, как правило, очищают с помощью обратно-фазовой ВЭЖХ с использованием колонок, таких как С-18, С-8 и С-4.
Пример твердофазного синтеза пептидов
Ниже приведен план этапов синтеза пептидов на Wang смоле в качестве твердого носителя, используя щелочную лабильную 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc) протекторную группу.
Fmoc депротекция
Вводят 0,08 ммоль Fmoc-Pro-Wang смолы в колонку, оснащенную пластиковой крышкой. Промывают смолу дважды порциями DMF (диметилформамидом) по 3 мл в течение 1 минуты для каждой. Затем добавляют около 3 мл 20% пиперидина в DMF, в результате чего происходит снятие Fmoc в течение 15 минут. В течение этого времени круговыми движениями мягко перемешивают или взбалтывают колонку для обеспечения полного смешивания. После завершения реакции (около 15 мин.) содержимое сливают, а смолу снова смывают DMF (4×3 мл).
Присоединение амидной связи
Желаемую Fmoc-защищенную аминокислоту, Fmoc-Thr-TBU (3 экв. по отношению к смоле нагрузка указывается поставщиком) и DIEA (6 экв.) в DCM (0,5 М по отношению к аминокислоте) затем добавляют к смоле. Смесь охлаждают до -20°С в течение 20 минут. Далее, к реакционной среде добавляют бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфониум гексафторфосфат (РуВОР), пептид, другие реагенты, используемые в твердофазном синтезе пептидов (3 экв.). После встряхивания при - 20°С в течение 8 часов реакционную смесь сливают, и смолы промывают DCM (3х).
После Fmoc депротекции с использованием 20% пипердина в DMF (15 мин.) и промывкой DMF (3 раза) протектируется Fmoc следующая аминокислота (3 экв., по отношению к используемой смоле), РуВор (также, как указано выше).
Отщепление
Для получения пептида в форме свободной кислоты эфирная связь расщепляется с использованием сильно-кислотной среды, например, TFA (трифторуксусная кислота). Смолу обрабатывают 2-3 мл раствора трифторуксусной кислоты и воды 95:5. Осторожно перемешивают смолу в течение 25 минут. Затем сливают колонку и тщательно собирают фильтрат в коллекторный стеклянный сосуд.
Синтез Соединения 1 (GRG Цистеиновая кислота TP):
Этап 1. Загрузка смолы: о-хлоротритил смола с пролином, используемым в качестве стартового материала.
Этап 2. Сборка пептида: для сборки пептида используется Fmoc синтез. Протекторные аминокислоты активированы РуВОР, а концевые группы Fmoc удалены с помощью 20% пиперидина в DMF. Следующие протекторные аминокислоты используются в порядке, в котором они представлены ниже:
a. Fmoc-Thr-TBU (Fmoc треонин-t-бутиловый эфир)
b. Fmoc-Цистеиновая кислота-Pfp (Fmoc-Цистеиновая кислота - пентафторфениловый эфир)
c. Fmoc-Gly (Fmoc глицин)
d. Fmoc-Arg-Pbf (Nα-Fmoc-Nω-(2,2,4,6,7пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил)-L-аргинин)
e. Fmoc-Gly (Fmoc-глицин)
Этап 3. Отщепление пептида от смолы: полученный пептид отщепляется от твердой подложки, а протекторные группы удалятся раствором 85,5% TFA, 5% раствором фенола, 2% воды, 5% тиоанизола, и 2,5% этандитиола.
Этап 4. Очистка: для очистки полученного пептида RGCys-овая кислота используется высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).
Количество Соединения 1, приготовленного, как описано выше, было проанализировано с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, обеспечивая >98% область/область по чистоте [ВЭЖХ условия: Буфер А: 0,1% трифторуксусная кислота (TFA) в воде; Буфер В: 0,1% TFA в ацетонитриле; Подвижная фаза (ПФ) А: 97% буфера А и 3% буфера В, Подвижная фаза В: 79% буфера А и 21% буфера В; Подвижная фаза С: 50% буфера А и 50% буфера В, градиент см. ниже Таблицу 1; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: Water Symmetry® С18, 5μ, 4,6×250 мм, температура колонки: 30°С; детектор: УФ@ 220 нм; объем введенного образца: 20,0 мкл; подготовка образца: 20 мкл образца, разведенного в 1,0 мл Подвижной фазы А [около 0,5 мг/мл)]. Соответствующее хроматограммы ВЭЖХ показаны на фиг. 2. Кроме того, молекулярная масса очищенного Соединения 1, полученного путем последовательного добавления соответствующих аминокислот для синтеза пептидной последовательности, была определена с помощью электроспрей масс-спектрометрии и составила 638,3 а.е.м. (теоретическая масса: 637,7 а.е.м.), подтверждая идентичность Соединению 1. Электроспрей масс-спектрограммы Соединения 1 показана на фиг. 3.
Синтез Соединения 2 (Цикло-RGCys-овая кислота fN(CH3)V):
Этап 1. Загрузка смолы: о-хлоротритил смола используется в качестве исходного материала. Fmoc-N-метил-L-Val присоединяется к смоле.
Этап 2. Сборка пептида: Fmoc синтез используется для сборки пептида. Протекторные аминокислоты активированы РуВОР, а концевые группы Fmoc удалены с помощью 20% пиперидина в DMF. Следующие протекторные аминокислоты используются в порядке, в котором они представлены ниже:
a. Fmoc-Phe (Fmoc-фенилаланин)
b. Fmoc-цистеиновая кислотно-Pfp (Fmoc-цистеиновая кислота - пентафторфениловый эфир)
c. Fmoc-Gly (Fmoc-глицин)
d. Fmoc-Arg-Pbf (Nα-Fmoc-Nω-(2,2,4,6,7пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил)-L-аргинин)
Этап 3. Отщепление пептида из смолы: пептид отщепляется от твердой поддержки с помощью уксусной кислоты /TFA/DCM (1:3:3)
Этап 4. Циклизация и депротекция для получения желаемого циклического пептида: циклизация через in situ активацию с использованием дифенилфосфорилазида и бикарбоната натрия при сильном разбавлении. Боковые цепи депротектируются с использованием 85,5% TFA, 5% раствор фенола, 2% воды, 5% тиоанизола, 2,5% этандитиола.
Этап 5. Очистка: для очистки используется ВЭЖХ.
Количество Соединения 2, приготовленного так, как описано выше, было проанализировано с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии как >99% область/область по чистоте (ВЭЖХ условия: Подвижная фаза А: 0,1% трифторуксусная кислота в воде, В: 0,1% TFA в (80% ацетонитрил плюс 20% воды); градиент от 26% до 36% в течение 20 минут; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка Phenomenex С18(2) 4,6×150 мм, 5μ, 100 А, детектор УФ@ 220 нм; объем введенного образца: 100,0 мкл). Соответствующее хроматограммы ВЭЖХ показаны на фиг. 4. Кроме того, молекулярная масса очищенного Соединения 2, полученного путем последовательного добавления соответствующих аминокислот для синтеза пептидной последовательности, была определена с помощью электроспрей масс-спектрометрии и составила 625,3 а.е.м. (теоретическая масса: 625,77 а.е.м.), подтверждая идентичность Соединению 2. Электроспрей масс-спектрограмма Соединения 2 показана на фиг. 5.
Способы ингибирования клеточной адгезии
Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования клеточной адгезии к RGD сайтам связывания у субъекта, являющегося человеком или животным, путем введения субъекту эффективного количества RGCys-овой кислоты (например, линейной формы R-G-NH-CH(CH2-SO3H)COOH или циклической формы RG-NH-СН(СН2-SO3H)СООН) или их производных (в том числе фармацевтически приемлемых солей, гидратов, стереоизомеров, мультимеров, циклических форм, линейных форм, конъюгатов с лекарственными средствами, про лекарств и их производных).
Заявитель обнаружил, что синтетические пептиды RGCys-овой кислоты по настоящему изобретению вызывают апоптоз путем конкурентного ингибирования прикрепления клетки к компонентам ВКМ. Таким образом, представленные синтетические пептиды RGCys-овой кислоты и их производные могут быть использованы в качестве действующих антагонистов интегрина как лечебное средство против ангиогенеза, воспаления, раковых метастаз, тромбоза, профилактики и лечения рубцов, а также фармакологических агентов витреолизиса. Кроме того, важным аспектом настоящего изобретения является то, что предусмотрена улучшенная направленность на α, β интегрины с применением мультимерных и радиомеченных пептидов RGCys-овой кислоты для использования в качестве радиотерапевтических средств для обнаружения опухолей (диагностические или визуализирующие агенты) и их лечения. Еще одним важным аспектом является улучшенные функции конъюгатов пептидов RGCys-овой кислоты и мультимерных конъюгатов пептидов RGCys-овой кислоты в качестве переносчиков лекарственных средств, например, как переносчиков противораковых лекарств для эффективной нацеленности на опухоль.
Как описано в здесь, сульфокислоты в составе пептидов RGCys-овой кислоты являются более сильными кислотами, чем соответствующие карбоновые кислоты в RGD-пептидах. Такая высокая полярность группы сульфокислоты приводит к усилению межмолекулярных связей. Например, RGCys-овая кислота, которая имеет более поляризованную О-Н связь, может образовывать более сильные водородные связи, чем RG-Аспарагиновая кислота, которая обладает относительно менее поляризованной О-Н связью, с амидными группами и/или с аминокислотами боковых цепей белка в интегриновом сайте связывания и/или имеет более сильные взаимодействия с ионами металлов в интегриновом сайте связывания. Таким образом, новые пептиды RGCys-овой кислоты и их производные по настоящему изобретению представляют улучшенные соединения и композиции по сравнению с соответствующими пептидами RGCys-овой кислоты в распознавании и связывании интегриновым рецептором.
Кроме того, у больных сахарным диабетом с хронической гипергликемией, связанной с повышенным IOP, открытая угловая глаукома, в частности, как сообщается, связана с накоплением фибронектина в трабекулярной сетчатой ткани, избыток фибронектина, как полагают, препятствуют оттоку жидкости (см. Oshitari, Т, и соавт., Am. J. Ophthalmol. (2007) 143:363-365). Вовлечение фибронектина в взаимодействия клетка-ВКМ в трабекулярной сети указывает на начальную стадию открытой угловой глаукомы (см. Mark С. Filla и др., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2002) 43:151-161; и Cheryl R. Hann и др., Ophthalmic Res. (2001) 33: 314-324). Также сообщалось, что эндотелиальные клетки канала Шлемма взаимодействуют с внеклеточным матриксом, оказывая влияние на облегчение оттока (см. Cindy K. Bahler и др., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2004) 45: 2246-2254). В связи с ингибированием оттока жидкости при наличии избыточных компонентов внеклеточного матрикса, таких как фибронектин, применение пептидов RGCys-овой кислоты и ее производных может быть пригодным для лечения повышенного IOP у больных сахарным диабетом.
Предпочтительный пептид RGCys-овой кислоты может быть слитым полипептидом, циклическим или линейным полипептидом, производным полипептида, в том числе производным пептида RGCys-овой кислоты или ассоциированным или связанным с системами доставки лекарственных препаратов или других лекарствами, таких как, например, противораковые препараты, мультимерный пептид RGCys-овой кислоты, моноклональное антитело, содержащее последовательность RGCys-овой кислоты, которое иммунореактивно к сайту связывания интегрина, или его функциональный фрагмент.
Полипептиды, содержащие RGCys-овую кислоту, могут иметь последовательности, соответствующие аминокислотной последовательности природного адгезионного сайта связывания интегрина, таких, как присутствующие в фибриногене, фибронектине, витронектине, факторе Виллебранда, ламинине, тромбоспондине и другим им подобным лигандам.
Настоящая пептидная последовательность состоит из трех аминокислот, имея терминальные гуанидино-, сульфоновую и карбоксильную группы и их производных, связанных и/или ассоциированных с системами доставки лекарств, в том числе пептидных фрагментов, гликопротеинов и полимерных групп, таких как ПЭГ, плуроник и других полимерных групп, а также липосом и наночастиц. Фармацевтические композиции, содержащие их, для лечения различных патологических расстройств включают инъекции, гели, суспензии, мази, твердые и жидкие лекарственные формы.
Интегриновые рецепторы, связанные с мотивом клеточной адгезии, такие как фибронектин, витронектин, ламинин, фибриноген, тромбоспондин и фактор Виллебранда, представляют собой целевой эпитоп пептида RGCys-овой кислоты и ее производных. Трипептид, RGCys-овая кислота, была обнаружен как узнаваемая минимальная аминокислотная последовательность связывающих доменов клетки. Эта последовательность может также участвовать в иммунных функциях, несвязанных с интегринами. Таким образом, было обнаружено, что синтетическая последовательность RGCys-овой кислоты имитирует RGD связывающий домен клетки, а также то, что замена на α-углерод аспарагиновой кислоты дает более сильное сродство к целевому интегрину. Сульфокислоты в пептидах RGCys-овой кислоты являются более сильными кислотами, чем соответствующие карбоновые кислоты в RGD-пептидах. Такая повышенная полярность группы сульфокислоты приводит к усилению межмолекулярных связей. Например, RGCys-овая кислота, которая имеет более поляризованную О-Н связь, может образовывать более сильные водородные связи, чем RG-Аспарагиновая кислота, которая обладает относительно менее поляризованной О-Н связью, с амидными группами и/или аминокислотами боковых цепей в интегриновом сайте связывания и/или сильнее взаимодействует с ионами металлов в составе интегринового сайта связывания.
Наиболее общими формулами последовательностей RGCys-овой кислоты по настоящему изобретению являются следующие:
Формула А:
где Х=-CH(R1)-S(=O)2-Y;
-CH(R1)-SH;
-CH(R1)-OZ;
-CH(R1)S(=O)Y;
-CH(R1)-O-S(=O)2-OX1 и
-CH(R1)-O-P(=O)2-OX1;
где Y=OX1, NH2; X1=-H, C1-С6 линейный алкил, фенил;
R1=H, C1-С6 линейный алкил, фенил или SO3H;
Z=Н, SO3H.
Формула В:
где X=-CH(R1)-S(=O)2-Y;
-CH(R1)-SH;
-CH(R1)-OZ;
-CH(R1)S(=O)Y;
-CH(R1)-O-S(=O)2-OX1 и
-CH(R1)-O-P(=O)2-OX1;
где Y=OX1, NH2; X1=-H, C1-С6 линейный алкил, фенил;
R1=H, C1-С6 линейный алкил, фенил или SO3H;
Z=Н, SO3H и
А2 выбран из: -Phe-Val-Ala, -Phe-Leu-Ala, -Phe-Val-Gly, -Phe-Leu-Gly, -Phe-Pro-Gly, -Phe-Pro-Ala, -Phe-Val или их соли или N-алкилированного производного. Также может быть использована любая комбинация D-формы или L-формы Arg, Gly, Cys, Phe, Val, Ala, Leu, Pro, Thr, также как и циклические формы, представленные ниже.
Примеры циклических форм включают:
Формула С:
где X' выбран из: Н, C1-C6 алкила, Ph, SO3H; Y=ОН, NH2 и Z=Н, СН3.
Циклические формы также включают пента- и гепта- пептиды, такие как, например, конкретное соединение Общей формулы С, а именно, Соединение 2 (Цикло-RGCys-овая кислота fN(CH3)V), представленная ниже:
Формула А охватывает Общие формулы I-VI, описанные здесь. Формула В включает Общую формулу VII, описанную здесь.
Формула D:
где X=-CH(R1)-S(=O)2-Y;
-CH(R1)-SH;
-CH(R1)-OZ;
CH(R1)S(=O)Y;
-CH(R1)-O-S(=O)2-OX1 и
-CH(R1)-O-P(=O)2-OX1;
где Y=OX1, NH2; X1=-H, C1-С6 линейный алкил, фенил;
R1=H, C1-С6 линейный алкил, фенил или SO3H
Z=Н, SO3H и
A1 и А2 выбраны из: -Phe-Val-Ala, -Phe-Leu-Ala, -Phe-Val-Gly, -Phe- Leu-Gly, -Phe-Pro-Gly, -Phe-Pro-Ala, -Phe-Val или их соли или N-алкилированного производного. Также может быть использована любая комбинация D-формы или L-формы Arg, Gly, Cys, Phe, Val, Ala, Leu, Pro, Thr, также как и циклические формы, представленные ниже.
Замещенные последовательности RGCys-овой кислоты включают аналоги циклической RGCys-овой кислоты.
RGCys-овая кислота и ее производные могут применяться подкожно, дерматологически, офтальмологически и системно, с использованием системы доставки лекарств или любых фармацевтически приемлемых форм дозирования инъекций, либо твердых препаратов или мазей.
Соединения по настоящему изобретению могут быть введены любым способом, который подходит для обеспечения предполагаемого терапевтического эффекта, включая, но не ограничиваясь этим: пероральный, ректальный, внутривенный, внутриартериальный, внутрикожный, подкожный, внутримышечный, интратекальный, подъязычный, щечной, интраназальный, чресслизистый, трансдермальный, местный, внутриглазной, интравитреальный, другие энтеральные, другие парентеральные и/или другой(-ие) возможный(-ые) путь(-и) введения.
Соединения по настоящему изобретению могут быть введены в любой дозе, которая обеспечивает предполагаемый терапевтический эффект, избегая неблагоприятных или токсических эффектов. Обычная доза, при которой могут быть введены соединения по настоящему изобретению, для человека находятся в диапазоне примерно от 1 нг/кг до 1,0 г/кг.
Там, где это возможно и целесообразно, соединения по настоящему изобретению необязательно могут быть подготовлены в форме липосом или наночастиц (например, нанокапсул). Формирование и использование липосом, в общем, известно специалистам в данной области. Липосомы образуются из фосфолипидов, диспергированных в водной среде так, что они самопроизвольно образуют многослойные концентрические двухслойные везикулы, иногда называемые многослойными везикулами (MLV). MLV, как правило, имеют диаметр от 25 нм до 4 мкм. При использовании ультразвука MLV формируют небольшие однослойные везикулы (SUV) примерно от 200 до 500 ангстрем в диаметре, ядра которых содержат водный раствор. В общем, при распылении в водной среде фосфолипиды могут образовывать различные структуры, помимо липосом, в зависимости от молярного соотношения липидов к воде. При низком молярном соотношении липидов к воде образуют липосомы. Физические характеристики липосом зависит от рН, тоничности и наличия или отсутствия двухвалентных катионов. Липосомы могут взаимодействовать с клетками с помощью различных механизмов, в том числе 1) эндоцитоза (например, фагоцитоз липосом клетками, такими как макрофаги и нейтрофилы), адсорбции на поверхности клетки, 2) взаимодействие с компонентами клеточной поверхности, 3) слияние с плазматической клеточной мембраной путем включения липосом в липидный бислой в мембране или 4) передача липосомальных липидов клеточной или субклеточной мембране, или наоборот. Возможны вариации липосомальных препаратов в зависимости от того, каков механизм(ы) взаимодействия липосом с клетками в придаточных пазухах носа, слизистой оболочки носа, и т.д.
Нанокапсула представляет собой наночастицу, которая состоит из корпуса и пространства, в котором могут быть размещены желаемые вещества. Методы формирования нанокапсул известны в уровне техники. Можно получить полимерные нанокапсулы конкретных размеров и форм. Они могут быть изготовлены как монодисперсные частицы, которые имеют определенные физические и химические свойства и, таким образом, могут быть адаптированы для облегчения высвобождения терапевтических или диагностических веществ в ответ на конкретные бимолекулярные целевые механизмы, такие как рН, количество жидкости слизистой или других условий в придаточных носовых пазухах или в другой области уха, носа или горла, где они высвобождаются. Нанокапсулы могут быть использованы в настоящем изобретении, как «умные лекарственные средства», которые имеют специфические химические рецепторы или сайты связывания, которые будут связываться со специфическими клетками-мишенями (например, раковыми клетками или клетками, связанных с воспалительными условиями).
Ниже приведены не ограничивающие примеры лекарственных средств для фармацевтических препаратов, содержащие соединения по настоящему изобретению. Также включены примеры по безопасности и/или эффективности, показанные при использовании примерного RGC пептида или производные в ингибировании клеточной адгезии. Используемые здесь термины "RGCys-овый пептид", "RGC пептид", "RGCys-пептид" и "соединения по настоящему изобретению" должны восприниматься как синонимы композиций, содержащих последовательности RGCys-овой кислоты и их производных, в том числе, но не ограничиваясь, тех, которые определены Общими формулами I-VII и Соединениями 1 и 3-5, как описано здесь.
Пример 1
Фармацевтические композиции
Ниже приведены примеры фармацевтических препаратов I-Х, которые содержат пептиды RGCys-овой кислоты по настоящему изобретению, такие как любой из тех, которые определены Общими формулами I-VII, или любое Соединение 1-5, как описано здесь.
Препарат I
Пептид RGCys-овой кислоты (RGCys-пептид) | от 0,0001 мг до 10 г |
NaCl | от 0,01 мг до 0,9 г |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат II
Пептид RGCys-овой кислоты (RGCys-пептид) | от 0,0001 мг до 10 г |
ЭДТА | от 0,001 мг до 100 мг |
NaCl | от 0,01 мг до 0,9 г |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат III
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
ЭДТА | от 0,001 мг до 100 мг |
NaCl | от 0,01 мг до 0,9 г |
Лимонная кислота | от 0,0001 мг до 500 мг |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат IV
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
NaCl | от 0,01 мг до 0,9 г |
Фосфатный буфер | до рН=3,0-9,0 |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат V
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
ЭДТА | от 0,001 мг до 100 мг |
NaCl | от 0,01 мг до 0,9 г |
Фосфатный буфер | до рН=3,0-9,0 |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат VI
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
NaCl | от 0,01 мг до 0,9 г |
Боратный буфер | до рН=3,0-9,0 |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат VII
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
Натриевая соль гиалуроновой кислоты | от 0,01 до 10% |
Борная кислота | от 0,01 до 1,0% |
Полиэтиленгликоль (ПЭГ 8000) | от 0,01 до 10% |
Хлорид натрия | от 0,10 до 0,9% |
Хлорид калия | от 0,01 до 0,20% |
Хлорид кальция дигидрат | от 0,001 до 0,05% |
Хлорид магния гексагидрат | от 0,01 до 0,20% |
Консервант
рН | 4,0-8,0 |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат VIII
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
Натриевая соль гиалуроновой кислоты | от 0,01 до 10% |
Карбоксиметил целлюлоза | от 0,01 до 10% |
Борная кислота | от 0,01 до 1,0% |
Полиэтиленгликоль (ПЭГ 8000) | от 0,01 до 10% |
Хлорид натрия | от 0,10 до 0,9% |
Хлорид калия | от 0,01 до 0,20% |
Хлорид кальция дигидрат | от 0,001 до 0,05% |
Хлорид магния гексагидрат | от 0,01 до 0,20% |
Консервант
рН | 4,0-8,0 |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат IX
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
Натриевая соль гиалуроновой кислоты | от 0,01 до 10% |
Альгинат натрия | от 0,01 до 10% |
Борная кислота | от 0,01 до 1,0% |
Полиэтиленгликоль (ПЭГ 8000) | от 0,01 до 10% |
Хлорид натрия | от 0,10 до 0,9% |
Хлорид калия | от 0,01 до 0,20% |
Хлорид кальция дигидрат | от 0,001 до 0,05% |
Хлорид магния гексагидрат | от 0,01 до 0,20% |
Консервант
рН | 3,0-8,0 |
Вода | QS до 100,0 мл |
Препарат X
Пептид RGCys-овой кислоты | от 0,0001 мг до 10 г |
Натриевая соль гиалуроновой кислоты | от 0,01 до 10% |
Альгиновая кислота | от 0,01 до 10% |
Борная кислота | от 0,01 до 1,0% |
Полиэтиленгликоль (ПЭГ 8000) | от 0,01 до 10% |
Хлорид натрия | от 0,10 до 0,9% |
Хлорид калия | от 0,01 до 0,20% |
Хлорид кальция дигидрат | от 0,001 до 0,05% |
Хлорид магния гексагидрат | от 0,01 до 0,20% |
Консервант
рН | 3,0-8,0 |
Вода | QS до 100,0 мл |
Пример 2:
Сравнение PVD-индуцированных эффектов RGD пептидов и Глицил-Аргинил-Глицил-Цистеиновая кислота-Треонил-Пролин-СООН (GRG Цистеиновая кислота TP; Соединение 1) на кроликах
В этом примере эффекты PVD-индицирования RGD пептидами и Глицил-Аргинил-Глицил-Цистеиновая кислота-Треонил-Пролин-СООН (пептид RGCys-овой кислоты; GRG Cys-овая кислота TP; Соединение 1) сравнивались на кроликах. Протокол этого исследования был следующим:
Протокол:
Модель-животное
a) 20 самцов и самок кроликов
b) весом примерно 1,5-2,5 кг
c) разделены на 2 группы
i) 10 кроликам интравитреально вводили 2,5% RGD раствор с рН=6,5
a) в 10 правых глаз вводили 2,5% RGD раствор
b) в 5 левых глаз использовались как BSS контроль
c) в 5 левых глаз вводили 2,5% RGD + 0,02% ЭДТА с рН=6,5
ii) 10 кроликам интравитреально вводили 2,5% раствор пептида RGCys-овой кислоты с рН=6,5
a) в 10 правых глаз вводили 2,5% раствор пептида RGCys-овой кислоты с рН=6,5
b) в 10 левых глаз вводили 2,5% раствор пептида RGCys-овой кислоты + 0,02% ЭДТА с рН=6,5
Активные реагенты
d) Натрия ЭДТА - 99,0-100,5% от Spectrum Chemical Corp.
e) RGCys-овая кислота - cGMP от поставщика (чистота >98%).
f) RGD - cGMP от поставщика (чистота >98%).
g) BSS раствор
Как растворы RGCys-овая кислота, RGD, RGCys-овая кислота + натрия ЭДТА, RGD + натрия ЭДТА, так и BSS раствор вводили в полость стекловидного тела за 24 часа до препарирования. Кролики (10 мг/кг массы тела) подвергались анестезии с помощью внутримышечной инъекции 2,0 мл 1:1 ксилазина (100 мг/мл) и кетамина гидрохлорида (100 мг/мл). Зрачки расширялись с помощью местного введения циклопенталата гидрохлорида 1% и фенилэфрина гидрохлорида 10%.
Все животные были первоначально осмотрены с помощью биомикроскопии с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопии для того, чтобы исключить всех животных, у которых уже имеются витреоретинальные нарушения. Интравитреальные инъекций 0,10 см3 вводились на 2 мм сзади от края роговицы в верхнем носовом квадранте с использованием 30-мерной иглы и 1,0 см3 шприца. Были приняты меры по избежанию повреждения линзы или сетчатки.
Двадцать четыре часа после инъекции и непосредственно перед началом механической витрэктомии было проведено ультразвуковое В-сканирование с целью определения состояния задней поверхности стекловидного тела, а также степени разжижения стекловидного тела. Двухпортовую витрэктомию pars plana проводили с использованием инфузионного волоконно-оптического световода и ножа для стекловидного тела, соединенного с витреотомом. Через 30 секунд коровой витрэктомии нож для стекловидного тела направляется на перипапиллярную поверхность сетчатки, где с использованием низкочастотных аспираций (<30 мм Гц) проводят разделение задней коровой поверхности стекловидного тела от поверхности сетчатки в 4 квадрантах. Были пересажены склеротомы и проведено послеоперационное ультразвуковое В-сканирование с целью определения наличия и степени любого присутствующего PVD в каждом секторе. Животных усыпляли с помощью внутрисердечной инъекции натрия фенобарбитала, а глаза были немедленно инокулированы.
Классификация по разжижению стекловидного тела и PVD для оценки степени PVD проведена на основе послеоперационного ультразвукового В-сканирования:
Степень 0. а) отслоение задней поверхности стекловидного тела не наблюдается.
б) разжижение стекловидного тела
Степень 1. а) стекловидное тело отслаивается в 2 или менее квадрантах.
б) разжижение стекловидного тела
Степень 2. а) стекловидное тело отслаивается в 3 или более квадрантах, но с сохранением фокального соединения вдоль медуллярных лучей
б) разжижение стекловидного тела
Степень 3. а) стекловидное тело полностью отслаивается от поверхности сетчатки
б) разжижение стекловидного тела
Все глаза прорезались острой бритвой в верхнем полюсе, прилегающем к гладкой части ресничного тела, непосредственно после инокулирования для обеспечения быстрого проникновения фиксатором. Были приняты меры по избежанию повреждения прилегающих сетчатки и хрусталика. Глаза были погружены в 2% параформальдегид плюс 2,5% глутаральдегид в течение как минимум 24 часов при температуре 4 градуса Цельсия. Один задний сегмент был удален, дегидратирован в метаноле и высушен в углекислом газе до критической точки, покрыт напылением золота и отснят с помощью сканирующего электронного микроскопа.
Результаты:
Инъекция: 2,5% RGCys-овая кислота
Группа 1. Исходно все животные не имели PVD в обоих глазах
Инъекция: 2,5% RGD
Группа 2. Исходно все животные не имели PVD в обоих глазах
Инъекция: 2,5% RGCys-овая кислота + 0,02% Na ЭДТА
Группа 3. Исходно все животные не имели PVD в обоих глазах
Инъекция: 2,5% RGD + 0,02% Na ЭДТА
Группа 4. Исходно все животные не имели PVD в обоих глазах
Результаты кинетического анализа в Примере 4 настоящего исследования показывают, что RGD и RGCys-овая кислота (GRG цистеиновая кислота TP; Соединение 1) имеют аналогичные свойства, а инъекции 2,5% RGCys-овой кислоты интравитреально вызывает полное отделение стекловидного тела от сетчатки в течение 24 часов, и добавление к стекловидному телу RGD и RGCys-овой кислоты у кроликов полностью в разжижает его.
В целом, активность RGCys-овой кислоты эквивалентна или чуть лучше, чем RGD при стимулировании полного PVD у кроликов и разжижении стекловидного тела. Возможно, это связано с его сильной конкурирующей связывающей способностью к сайтам связывания интегрина при его взаимодействии с внеклеточным матриксом, чем RGD. Как описано в данной работе, сульфокислоты являются более сильными кислотами, чем соответствующие карбоновые кислоты. Такая высокая полярность группы сульфокислоты приводит к усилению межмолекулярных связей. Например, RGCys-овая кислота, которая имеет более поляризованные О-Н связи, может образовывать более сильные водородные связи, чем RG-Аспарагиновой кислоты, которая обладает относительно менее поляризованными О-Н связями, с амидными группами и/или аминокислотами боковых цепей в интегриновом сайте связывания и/или сильнее взаимодействует с ионами металлов в составе интегринового сайта связывания. Результаты также показывают, что при введении соединения с 0,02% натрия эдетатом, активность ни RGD, ни RGCys-овой кислоты не изменяется.
Результаты также показывают, что нет никаких побочных эффектов при интравитреальном введении соединений RGCys-овой кислоты Соединения 1 или RGD соединения.
Пример 3:
Исследование безопасности множественных инъекций пептида RGCys-овой кислоты Соединения 1 (GRG Цистеиновой кислота TP) в глаз кролика
В этом примере в глаза 5 самцов и 4 самок Ново-Зеландских кроликов весом примерно 1,5-2,5 кг вводили множественные инъекции пептида RGCys-овой кислоты Соединения 1, и глаза были протестированы так, как описано в следующих параграфах. Протокол исследования был следующим:
А) Исходное состояние: В начале исследования правые и левые глаза всех 9 кроликов были обследованы путем биомикроскопии с помощью щелевой лампы и офтальмоскопии для подтверждения того, что животные исходно не имеют витреоретинальных нарушений. Кроме того, проводились ультразвуковое β-сканирование, а также ERG сканирование на левых и правых глазах всех 9 животных для получения базовых значений.
Б) Экспериментальное лечение: затем все 9 кроликов получили интравитреальные инъекции либо раствора RGCys-овой кислоты, либо физиологического раствора (контроль). Растворы для лечения были подготовлены следующим образом:
Раствор RGCys-овой кислоты: 2,5 мг/100 мкл раствора RGCys-овой кислоты Соединения 1, содержащего 0,02 мг динатрия ЭДТА + 0,80 мг хлорида натрия и USP стерильной воды для инъекций с рН 6,5.
Физиологический раствор (контроль): USP изотонический стерильный физиологический раствор, имеющий скорректированный рН 6,5.
Режим дозирования был следующим:
1) В правый глаз каждого из 9 кроликов вводили интравитреально 100 2,5 мг/100 мкл раствора RGCys-овой кислоты (общая введенная доза Соединения 1=2,5 мг).
2) В левый глаз каждого из 9 кроликов вводили интравитреально 100 мкл физиологического раствора (контроль).
3) На следующий день после начальных интравитреальных инъекций правые и левые глаза всех 9 кроликов были осмотрены путем биомикроскопии с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопии для оценки побочных эффектов инъекции.
4) На 7-й день после 1ой инъекции правые и левые глаза всех 9 кроликов вновь осматривали путем биомикроскопии с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопии для оценки побочных эффектов инъекции. Кроме того, проводилось ERG сканирование правых и левых глаз всех животных для определения изменений по отношению к исходному состоянию.
5) У группы из 3 кроликов под номерами 901, 904 и 909, выбранных случайным образом, проводилась механическая витрэктомия на правых и левых глазах этих трех выбранных животных для определения состояния задней поверхности стекловидного тела.
6) Три случайно выбранных животных под номерами 901, 904 и 909 были подвергнуты эвтаназии с помощью внутрисердечной инъекции натрия фенобарбитала, и немедленно извлекали глаза. Все глаза подвергались прорезанию острой бритвой верхнем полюсе, прилегающем к гладкой части ресничного тела, непосредственно после извлечения для обеспечения быстрого проникновения фиксатором. Были приняты меры по избежанию повреждения прилегающих сетчатки и хрусталика. Глаза были погружены в 2% параформальдегида плюс 2,5% глютаральдегида в течение как минимум 24 часов при температуре 4 градуса Цельсия. Один задний сегмент был удален, обезвожен в метаноле и высушен в углекислом газе до критической точки, покрыт напылением из золота и отснят с помощью сканирующего электронного микроскопа. Другие образцы были подвергнуты гистопатологическому анализу.
Остальным 6 кроликам под номерами 902, 903, 905, 906, 907 и 908 ввели вторую инъекцию через 7 дней после первой инъекции.
1) В правый глаз каждого из 6 оставшихся кроликов вновь вводили интравитреально 100 2,5 мг/100 мкл раствора RGCys-овой кислоты (общая введенная вторая доза Соединения 1=2,5 мг).
2) В левый глаз каждого из 6 оставшихся кроликов вновь вводили интравитреально 100 мкл физиологического раствора (контроль).
3) На следующий день после 2ой интравитреальной инъекции правые и левые глаза всех 6 оставшихся кроликов были вновь осмотрены путем биомикроскопии с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопии для оценки побочных эффектов инъекции.
4) На 7-й день после 2ой инъекции извлеченные правые и левые глаза всех 6 кроликов были осмотрены путем биомикроскопии с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопия для оценки наличие побочных эффектов от инъекций. Кроме того, было проведено ERG сканирование левых и правых глаз всех животных для определения наличия изменений относительно исходного состояния.
5) Три кролика под номерами 902, 903 и 907, выбранных случайным образом из оставшихся 6 животных, подвергались витрэктомии на правых и левых глазах для определения состояния задней поверхности стекловидного тела.
6) Три случайно выбранных животных под номерами 902, 903, и 907 затем были умерщвлены с помощью внутрисердечной инъекции натрия фенобарбитала, и были немедленно извлечены глаза. Все глаза прорезались острой бритвой в верхнем полюсе, прилегающем к гладкой части ресничного тела, непосредственно после извлечения для обеспечения быстрого проникновения фиксатором. Были приняты меры по избежанию повреждения прилегающих сетчатки и хрусталика. Глаза погружались в раствор 2% параформальдегида плюс 2,5% глутаральдегида в течение как минимум 24 часов при температуре 4 градуса Цельсия. Один задний сегмент был удален, обезвожен в метаноле и высушен в углекислом газе до критической точки, покрыт напылением из золота и сфотографирован с помощью сканирующего электронного микроскопа. Другие образцы были подвергнуты гистопатологической экспертизе.
Оставшейся группе из 3 кроликов под номерами 905, 906, и 908 была затем введена третья инъекция, через 14 дней после первой инъекции, а именно:
1) в правый глаз каждого из 3 оставшихся кроликов был вновь введен интравитреально 100 2,5 мг/100 мкл раствора RGCys-овой кислоты (общая введенная доза 2,5 мг Соединения 1).
2) в левый глаз каждого из 3 оставшихся кроликов было вновь введено интравитреально 100 мкл физиологического раствора (контроль).
3) На следующий день после 3ей интравитреальной инъекции правые и левые глаза всех 6 оставшихся кроликов были осмотрены путем биомикроскопии с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопии для проверки наличия побочных эффектов от инъекции.
4) На 7-й день после 3ей инъекции правые и левые глаза всех 3 оставшихся кроликов были осмотрены путем биомикроскопия с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопии для проверки наличия побочных эффектов от инъекции. Кроме того, было проведено ERG сканирование левых и правых глаз всех животных для проверки наличия изменения по сравнению с исходным состоянием.
5) Проводилась механическая витрэктомии на правых и левых глазах 3 оставшихся животных (под номерами 905, 906 и 908) для определения состояния задней поверхности стекловидного тела.
6) Три оставшихся животных (под номерами 905, 906 и 908) были подвергнуты эвтаназии с помощью внутрисердечной инъекции натрия фенобарбитала, и были немедленно извлечены глаза. Все глаза прорезались острой бритвой в верхнем полюсе, прилегающем к гладкой части ресничного тела, непосредственно после извлечения для обеспечения быстрого проникновения фиксатором. Были приняты меры по избежанию повреждения прилегающих сетчатки и хрусталика. Глаза погружались в раствор 2% параформальдегида плюс 2,5% глутаральдегида в течение как минимум 24 часов при температуре 4 градуса Цельсия. Один задний сегмент был удален, обезвожен в метаноле и высушен в углекислом газе до критической точки, покрыт напылением из золота и отснят с помощью сканирующего электронного микроскопа. Другие образцы были подвергнуты гистопатологической экспертизе.
3) Активные реагенты
Активные химические реагенты, используемые в этом исследовании, были следующими:
а. Динатрия ЭДТА - 99,0-100,5% от Spectrum Chemical Corp.
б. пептид RGCys-овая кислота (Соединение 1)
в. USP стерильный изотонический физиологический раствор.
4) Исследуемые препараты
а) RGC Раствор: 2,5 мг/100 мкл раствора RGCys-овой кислоты, содержащий 0,02 мг динатрия ЭДТА + 0,80 мг хлорида натрия и USP стерильной воды для инъекций, доведенный до рН 6,5. Стерильный фильтр 0,22 μ в пробирке 2,0 мл.
б) Физиологический раствор (контроль): USP изотонический стерильный физиологический раствор, доведенный до рН 6,5. Профильтрованный через стерильный фильтр 0,22μ фильтр в стерильную пробирку.
5) Анестезия для инъекций препарата.
а. Внутримышечные инъекции 2,0 мл 1:1 ксилазина (100 мг/мл) и кетамина гидрохлорид (100 мг/мл).
б. Зрачки расширялись с помощью местного применения циклопентотал гидрохлорида 1% и фенилэфрина гидрохлорида 10%.
6) Подготовка интравинтральных инъекций:
Стерильный флакон с раствором RGCys-овой кислоты, содержащим 2,5 мг/100 мкл и изотонический стерильный физиологический раствор, доведенный до рН 6,5. Перед введением исследователь удостоверяется в том, что в шприце на 1,0 см3 содержится 0,10 см3 (100 микролитров) раствора.
7) Процедура инъекций:
До тех пор пока интравитреальные инъекции не приведут к такому уровню расстройства зрения, при котором нарушается нормальная повседневная активность кроликов, влияние инъекции считается недействительным, согласно решению по животным руководства Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии.
И раствор RGCys-овой кислоты, и стерильные физиологические растворы вводили в полость стекловидного тела после завершения начального обследования кроликов путем биомикроскопии с использованием щелевой лампы, офтальмоскопии и ERG. Кролики (10 мг/кг массы тела) были анестезированы внутримышечной инъекцией 2,0 мл 1:1 раствора ксилазина (100 мг/мл) и кетамина гидрохлорида (100 мг/мл). Зрачки были расширены местным введением циклопентотала гидрохлорида 1% и фенилэфрина гидрохлорида 10%.
Все животные были изначально осмотрены путем биомикроскопии с использованием щелевой лампы и непрямой офтальмоскопии для того, чтобы исключить тех животные, у которых уже имеются витреоретинальные нарушения. Интравитреальные инъекций 0,10 см3 вводились на 2 мм сзади от края роговицы в верхнем носовом квадранте с использованием 30-мерной иглы и 1,0 см3 шприца. Были приняты меры по избежанию повреждения линзы или сетчатки.
Через семь дней после инъекции на животных осуществляли механическую витрэктомию. Двухпортовую витрэктомию pars plana проводили с использованием инфузионного волоконно-оптического световода и ножа для стекловидного тела, соединенного с витреотомом. Через 30 секунд коровой витрэктомии нож для стекловидного тела направляется на перипапиллярную поверхность сетчатки, где с использованием низкочастотных аспираций (<30 мм Гц) проводят разделение задней коровой поверхности стекловидного тела от поверхности сетчатки в 4 квадрантах. Животных усыпляли с помощью внутрисердечной инъекции натрия фенобарбитала, и немедленно извлекали глаза.
Все глаза прорезались острой бритвой в верхнем полюсе, прилегающем к гладкой части ресничного тела, непосредственно после извлечения для обеспечения быстрого проникновения фиксатором. Были приняты меры по избежанию повреждения прилегающих сетчатки и хрусталика. Глаза погружались в раствор 2% параформальдегида плюс 2,5% глутаральдегида в течение как минимум 24 часов при температуре 4 градуса Цельсия. Один задний сегмент был удален, обезвожен в метаноле и высушен в углекислом газе до критической точки, покрыт напылением из золота и отснят сканирующим электронным микроскопом.
Анализ результатов
Данные о безопасности препаратов между глазами, обработанными раствором RGCys-овая кислота и стерильным физиологическим раствором, анализировали с помощью следующих методов:
i) биомикроскопии с использованием щелевой лампы;
ii) офтальмоскопии;
iii) ERG;
iv) гистопатологии и
v) электронной микроскопии.
Безопасность профиля:
Первое интравитреальное введение 100 мкл 2,5% раствора RGCys-овая кислота группе из девяти кроликов под номерами 901, 902, 903, 904, 905, 906, 907, 908, 909 не вызвало никаких значительных проявлений токсичности на протяжении всего времени. Не было никаких существенных различий в побочных эффектах между группами, получавшими 2,5% раствор RGCys-овая кислота и изотонический физиологический раствор. Отсутствие токсичности было определено при клиническом обследовании, непрямой офтальмоскопии и ультразвуковом β-сканировании, а также механической витрэктомии.
Биомикроскопия с использованием щелевой лампы была проведена так, как описано в литературе, на веках, конъюнктиве и склере, роговице, эндотелиальных изменениях, переднее-камерной реакции, радужной оболочки, хрусталике и капсуле, а также передней поверхности стекловидного тела для обнаружения признаков воспаления, и показала почти полное отсутствие воспалительных реакции при интравитреальных инъекциях 100 мкл 2,5% раствора RGCys-овая кислота и изотонического физиологического раствора. Для всех изученных значений и во всех исследуемых группах не наблюдалось никаких признаков существенной токсичности, индуцированной тестируемым образцом.
На протяжении всего исследования также проводилась клиническая оценка заднего сегмента для того, чтобы удостоверится в отсутствии существенных проявлений токсичности для сетчатки. Непрямая офтальмоскопия, а также микроскопия щелевой лампой для оценки дна были проведены в каждый момент времени исследования, уделяя особое внимание проявлению любых признаков токсичности для сетчатки. Задний сегмент оценивался на любые изменения в плотности стекловидного тела, на разжижение стекловидного тела, прикрепления стекловидного тела и возможность кровотечения. Сетчатку оценивали на предмет токсичности для ретинального пигментного эпителия, сосудов сетчатки с возможностью кровоизлияния в сетчатку глаза, экссудаты, разрывов или отслоения сетчатки. Изменения в ретинальном пигментном эпителии относительно исходного состояния не наблюдались, для всех исследуемых значений и во всех исследуемых группах не было зафиксировано никаких признаков значительных изменений задних сегментов, индуцированных тестируемым образцом. Важно отметить, что ERG сканирование, которое было проведено на девяти животных до интравитреальных инъекций, а также ERG сканирование, которое было проведено на всех животных на 1 день и 7 день после инъекции, не показало никаких признаков существенных изменений или токсичности, индуцированных тестируемым образцом.
Второе интравитреальное введение 100 мкл 2,5% раствора RGCys-овая кислота группе из шести кроликов под номерами 902, 903, 905, 906, 907, 908 не повлияло на появление токсичности за все время исследования. Не выявлено никаких существенных различий в побочных эффектах между группами, получавшими 2,5% раствор RGCys-овая кислота и изотонический физиологический раствор. Отсутствие токсичности определялось при клиническом обследовании, непрямой офтальмоскопии и ультразвуковом β-сканирование, а также механической витрэктомии.
Биомикроскопия с использованием щелевой лампы была проведена так, как описано в литературе, и была сфокусирована на веках, конъюнктиве и склере, роговице, эндотелиальных изменениях, переднее-камерной реакции, радужной оболочки, хрусталике и капсуле, а также передней поверхности стекловидного тела для обнаружения признаков воспаления, и показала почти полное отсутствие воспалительных реакции при интравитреальных инъекциях 100 мкл 2,5% раствора RGCys-овая кислота и изотонического физиологического раствора. Для всех изученных значений и во всех исследуемых группах не наблюдалось никаких признаков существенной токсичности, индуцированной тестируемым образцом.
На протяжении всего исследования также проводилась клиническая оценка заднего сегмента для того, чтобы удостоверится, что нет никаких существенных проявлений токсичности для сетчатки. Непрямая офтальмоскопия, а также микроскопия щелевой лампой для оценки дна были проведены в каждый момент времени исследования, уделяя особое внимание проявлению любых признаков токсичности для сетчатки. Задний сегмент оценивался на изменения в плотности стекловидного тела, разжижение стекловидного тела, соединение стекловидного тела и возможность кровотечения. Сетчатку оценивали на предмет токсичности для ретинального пигментного эпителия, сосудов сетчатки с возможностью кровоизлияния в сетчатку глаза, экссудаты, разрывов или отслоения сетчатки. Изменения в ретинальном пигментном эпителии относительно исходного состояния за 7 дней до повторного лечения не наблюдались, для всех исследуемых значений и во всех исследуемых группах не было зафиксировано никаких признаков значительных изменений задних сегментов, индуцированных тестируемым образцом. Важно отметить, что ERG сканирование, которое было проведено на шести животных во второй раз после интравитреальных инъекций, а также ERG сканирование, которое было проведено на всех животных на 8 день и 14 день после инъекции, не показало никаких признаков существенных изменений или токсичности, индуцированных тестируемым образцом.
Третье интравитреальное введение 100 мкл 2,5% раствора RGCys-овая кислота группе из трех кроликов под номерами 905, 906, 908 не повлияло на появление токсичности за все время исследования. Не выявлено никаких существенных различий в побочных эффектах между группами, получавшими 2,5% раствор RGCys-овая кислота и изотонический физиологический раствор. Отсутствие токсичности определялось при клиническом обследовании, непрямой офтальмоскопии и ультразвуковом β-сканирование, а также механической витрэктомии.
Биомикроскопия с использованием щелевой лампы была проведена так, как описано в литературе, и была сфокусирована на веках, конъюнктиве и склере, роговице, эндотелиальных изменениях, переднее-камерной реакции, радужной оболочки, хрусталике и капсуле, а также передней поверхности стекловидного тела для обнаружения признаков воспаления, и показала почти полное отсутствие воспалительных реакции при интравитреальных инъекциях 100 мкл 2,5% раствора RGCys-овая кислота и изотонического физиологического раствора. Для всех изученных значений и во всех исследуемых группах не наблюдалось никаких признаков существенной токсичности, индуцированной тестируемым образцом.
На протяжении всего исследования также проводилась клиническая оценка заднего сегмента для того, чтобы удостоверится в отсутствии существенных проявлений токсичности для сетчатки. Непрямая офтальмоскопия, а также микроскопия щелевой лампой для оценки дна проводились в каждый момент времени исследования, уделяя особое внимание проявлению любых признаков токсичности для сетчатки. Задний сегмент оценивался на любые изменения в плотности стекловидного тела, разжижение стекловидного тела, соединение стекловидного тела и возможность кровотечения. Сетчатку оценивали на предмет токсичности для ретинального пигментного эпителия, сосудов сетчатки с возможностью кровоизлияния в сетчатку глаза, экссудаты, разрывов или отслоения сетчатки. Изменения в ретинальном пигментном эпителии относительно исходного состояния за 14 дней до третьего лечения не наблюдались, для всех исследуемых значений и во всех исследуемых группах не было зафиксировано никаких признаков значительных изменений задних сегментов, индуцированных тестируемым образцом. Важно отметить, что ERG сканирование, которое было проведено на шести животных в третий раз после интравитреальных инъекций, а также ERG сканирование, которое было проведено на всех животных на 15 день и 21 день после инъекции, не показало никаких признаков существенных изменений или токсичности, индуцированные тестируемым образцом.
Пример 4
Противо-адгезионные свойства пептидов RGCys-овая кислота: кинетические исследования заживления ран с помощью Соединения 1 (GRG Цистеиновая кислота TP), циклического RGD и RGE
В этом примере в модели заживления ран было продемонстрировано, что пептиды RGCys-овая кислота обладают противовоспалительными адгезионными свойствами и, следовательно, могут предотвратить развитие многих патологических витреоретинальных заболеваний и подавлять метастазы меланомы и раковых клеток толстой кишки у человека.
Для тестирования анти-адгезионных свойств пептидов RGCys-овая кислота in vitro был проведен ранозаживляющим анализ с использованием эндотелиальных клеток пупочной вены человека (HUVEC). HUVEC были посеяны и выращены до образования плотного монослоя на поверхности, покрытой фибронектином. Раны (царапины) были сделаны путем протаскивания кончика пипетки по монослою HUVEC. Затем клетки инкубировали в свежей питательной среде, содержащей пептид RGCys-овая кислота (Соединение 1, 10 мМ), а области ран сфотографированы в пяти различных областях в различные моменты времени (0, 4, 8, 12, 16, 20, 24 часов) для определения кинетики закрытия раны. Уровень закрытия раны был количественно определен по отношению к первоначальной площади раны, которые вновь занимались HUVEC путем клеточной адгезии, миграции и пролиферации.
В контрольных исследованиях вместо RGCys-овая кислота (Соединение 1) были использованы следующие пептиды: циклический RGD-пептид (1 мМ, положительный контроль) и RGE пептид (1 мМ, отрицательный контроль).
Влияние пептидов на кинетику заживления ран представлено на фиг. 1.
Результаты приведены в процентах от первоначальной площади. Уровни погрешностей соответствуют стандартному отклонению размера раны в 2-6 независимых испытаний.
Результаты кинетики HUVEC закрытия раны показывают, что пептид RGCys-овая кислота ингибирует заживление ран HUVEC на 70% после 24 часов, в то время как циклический RGD (пептид на основе RGD, N-метилированный циклический RGDf-N(Me)V; Циленгитид) ингибирует заживление ран HUVEC на 45% после 24 часов. Они оба сравнивались с отрицательным контролем пептида RGE, который препятствует заживлению ран HUVEC 0% через 24 часа. Эффекты RGCys-овой кислоты (Соединение 1) количественно сопоставимы с активностью пептидов на основе RGD, общепризнанного ингибитора интегрин-связывающей активности. Кроме того, пептид RGCys-овая кислота проявляет сходные свойства с активностью пептида на основе RGD, не вызывая апоптоз клеток HUVEC.
Как описано в данной работе, сильной адгезией между стекловидным телом и сетчаткой можно объяснить возможное развитие многих патологических витреоретинальной заболеваний, таких как витреомакулярный тракционный синдром, пролиферативная диабетическая ретинопатия, макулярный разрыв, возрастная макулярная дегенерация и плавающие тельца. Таким образом, весьма желателен атравматической неинвазивный подход по достижению задней поверхности стекловидного тела, помимо механического отделения стекловидного тела от внутренней поверхности сетчатки (см. Tezel, Т.Н. и др., Retina (1998) 18:7-15; и Verstraeten, Т.С. и др., Arch. Ophthalmol. (1993) 111: 849-854).
Как описано в настоящем документе, считается, что компоненты ВКМ, в частности коллагеновые фибриллы кортикального слоя стекловидного тела прикрепляются к внутренней поверхности сетчатки за счет интегриновых сайтов связывания (см. Foos, R.Y., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1972) 11: 801-808) во внутренней пограничной ламелле (ВПЛ). Известно также, что основные адгезивные гликопротеины ВПЛ в глазах, такие как фибронектин и ламилин, крепко связаны с интегринами (см. Cutis, Т.М. и др., Am. J. Physiol. (1995) 269: L248-L260; Elner, S.C. и др., IOVS (1996) 37:696-701; и Horman, S.M. и др., Am. J. Physiol. (1995) 269. L248-L260) через последовательности RGD (Arg-Gly-Asp), a некоторые интегрины связывают RGD мотив, присутствующий у белков ВКМ. Кроме того, известно, что фибронектин связывается с некоторыми другими интегринами помимо ανβ3, в то время как витронектин является ανβ3-специфичным.
Основное соединение интегринов с ВКМ включает последовательность Arg-Gly-Asp (RGD), где последовательность RGD связывается в небольшой расщелине, расположенной между α- и β-субъединицами на вершине интегрина (см. Xiong и др., Science (2002) 296: 151-155). Такая связь позволяет модулировать различные сигнальные пути клетки, в том числе клеточную адгезию, миграцию, дифференциацию, ангиогенез и заживление ран (см. Ruoslahti Е., и др., Science (1987) 238.. 491-497; и J. Clin. Invest. (1991) 87: 1-5).
Поскольку внеклеточный матрикс стекловидного тела, в частности фибриллы коллагена, соединены через интегриновые сайты связывания с клеточной сетчаткой, интравитреальные инъекции пептидов RGCys-овая кислота (олигопептидов) могут работать как RGD мотив внеклеточного матрикса стекловидного тела и клеточной сетчатки путем конкурентного связывания с теми же интегриновыми рецепторными сайтами.
Некоторые исследователи (см. Ruoslahti, Е. и др., Science (987) 238: 491-497; Hynes, R.A., и др., Cell (1992) 68: 303-322, и Humphries, M.J., J. Cell Sci. (1990) 97: 585-592) показали, что многие интегрины (ανβ3, α5β1, α11β3 и др.) могут ингибироваться небольшими пептидами, которые обладают последовательностями RGD мотива. Также хорошо описано, что ανβ3 и α5β1 интегрины, также как и витронектин и фибронектин, проявляют чрезмерную активность в опухолях, таких как клетки меланомы человека (см. Nip, J., J. Clin. Invest., (1992) 90: 1406-1413), клетки рака молочной железы человека (см. Rong, L. и др., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2009) 50: 5988-5996), а пигментированные эпителиальные клетки сетчатки человека (Peter С. Brooks и др., J. Clin. Invest., (1995) 96: 1815-1822). Таким образом, было продемонстрировано, что существует хорошая корреляция между метастатическими потенциалами клеток меланомы человека и адгезией клеток меланомы к витронектину лимфатических узлов через ανβ3 интегриновый рецептор, а также показано, что адгезия ингибируется RGD-содержащими пептидами (Nip, J., J. Clin. Invest., (1992) 90: 1406-1413). Это показывает, что RGD пептиды могут быть важными анти-ангиогенестическими агентами.
Кроме того, на линии раковых клеток толстой кишки человека было продемонстрировано, что в случае увеличения клеточной адгезии, увеличивается метастатическая активность (Lehmann, М., Cancer Res. (1994), 54. 2102-2107). Поэтому агенты, препятствующие адгезии клеток, эффективно подавляют рак толстой кишки и меланомы с метастазами.
На основании результатов исследования заживления ран, где было показано, что RGCys-овая кислота ингибирует адгезию клеток, и экстраполяции метастатического потенциала RGCys-овой кислоты в моделях меланомы и рака толстой кишки, можно сделать вывод, что пептиды RGCys-овая кислота и их производные могут эффективно подавлять опухоль метастазы, например, меланомы и рака толстой кишки.
Пример 5
Использование пептидов RGCys-овая кислота для направлености или доставки агентов к опухоли
В этом примере рассмотрен конъюгат (димерный пептид RGCys-овая кислота)-Паклитаксел (Соединение 3), показанный ниже. Эта композиция является пригодной в качестве противоопухолевого агента. Димерный пептид RGCys-овая кислота селективно связывается с интегриновыми рецепторами, экспрессия которых повышена в некоторых раковых клетках, и является полезным для лечения некоторых метастазирующих типов рака, таких как, например, метастазирующий рак молочной железы, путем ингибирования клеточной адгезии.
Соединение 3:
Синтез и механизмы действия, биораспределения и опухолевой селективности соответствующих RGD аналогов Соединения 3 описаны Chen, X. и др.;. Synthesis and Biological Evaluation of Dimeric RGD Peptede-Paclitaxel Conjugate as a Model for Integrin-Targeted Drug Delivery; J. Med. Chem., (2005) 48 (4): 1098-1106).
Хотя Соединение 3 содержит определенный противоопухолевый агент, Паклитаксел, связанный с димерным пептидом RGCys-овая кислота, должно быть понятно, что это воплощение настоящего изобретения включает в себя все мономерные или многомерные формы пептидов RGCys-овая кислота, связанных с любым возможным диагностическим или терапевтическим агентом, который может быть использован для диагностики, визуализации или лечения опухоли или других интегрин-содержащих тканей или структур. Примеры противоопухолевых веществ, которые могут быть конъюгированы с мономерными или мультимерными пептидами RGCys-овая кислота в соответствии с настоящим изобретением могут включать противоопухолевые агенты (например, химиотерапевтические препараты, модификаторы биологической реакции, ингибиторы васкуляризации, блокаторы рецепторов гормонов, криотерапевтические агенты или другие вещества, которые разрушают или подавляют неоплазию или опухоль), такие как, алкилирующие агенты или другие вещества, которые напрямую уничтожают раковые клетки через разрушение их ДНК (например, циклофосфамид, изофосфамид), нитрозомочевина или другие вещества, которые уничтожают раковые клетки путем ингибирования изменений, необходимых для изменений, необходимых для репарации ДНК в клетках (например, кармустин (BCNU) и ломустин (CCNU)), антиметаболиты и другие вещества, которые блокируют рост раковых клеток, влияя на определенные функции клетки, как правило, синтез ДНК (например, 6-меркаптопурин и 5-фторурацил (5FU), противоопухолевые антибиотики и другие соединения, которые действуют путем связывания или интеркаляции в ДНК и предупреждения синтеза РНК (например, доксорубицин, даунорубицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С и блеомицин), растительные (например, Vinca) алкалоидов и другие противоопухолевые препараты, полученные из растений (например, винкристин и винбластин), стероидные гормоны, ингибиторы гормонов, антагонисты рецепторов гормонов и другие вещества, которые влияют на рост гормоночувствительных типов рака (например, тамоксифен, герцептин, ингибиторы ароматазы, такие как аминоглутетамид и форместан, триазол ингибиторы, такие как летрозол и анастразол, стероидные ингибиторы, такие как экземестан), анти-ангиогенные белки, малые молекулы, агенты генной терапии и/или другие вещества, которые подавляют ангиогенез и васкуляризацию опухолей (например, мет-1, мет-2, талидомид), бевацизумаб (Авастин), скваламин, эндостатин, ангиостатин, Ангиозим, АЕ-941 (Неовастат), СС-5013 (Ревимид), Medi-522 (Витаксин), 2-метоксиэстрадиол (2МЕ2, Панзем), карбоксиамидотриазол (CAI), пролекарство комбретастатина А4 (СА4Р), SU 6668, SU 11248, BMS-275291, COL-3, EMD 121974, IMC-1C11, IM862, TNP-470, целекоксиб (Целебрекс), рофекоксиб (Vioxx), интерферон альфа, интерлейкин-12 (IL-12) или соединения, указанных в Science Vol. 289, стр. 1197-1201 (17 августа 2000), который включен в настоящее описание посредством ссылки, модификаторы биологических реакций (например, интерферон, бацилла Кальметта-Герена (БЦЖ), моноклональные антитела, интерлюкин 2, гранулоциты колониестимулирующий фактор (GCSF) и т.д., PGDF рецепторы, герцептин, аспарагиназа, бусулфан, карбоплатин, цисплатин, кармустин, хлорамбуцил, цитарабин, дакарбазина, этопозид, флукарбазон, флуорорацил, гемцитабин, гидроксимочевина, ифосфамид, иринотекан, ломустин, мелфалан, меркаптопурин, метотрексат, тиогуанин, тиотепа, томудекс, топотекан, треосульфан, винбластин, винкристин, митоазитрон, оксалиплатин, прокарбазин, стрептоцин, таксол, таксотер, аналоги, представители одного и того же класса и производные этих соединений, а также других противоопухолевые агенты, не перечисленные здесь.
Пример 6
64CU-меченные мультимерные пептиды RGCys-овая кислота для визуализации интегрин-экспрессирующих опухолей
В этом примере показано, что 64CU-меченные тетрамерные и октамерные пептиды RGCys-овая кислота по настоящему изобретению (Соединений 4 и 5, соответственно) могут использоваться в качестве радиотерапевтических агентов для визуализации и диагностики (например, радиомечения опухоли для PET сканирования), а также для направленности или доставки терапевтических агентов в опухоли или других клетки, которые экспрессируют интегрины, такие как опухоли, экспрессирующие ανβ3 интегрины.
Соединение 4:
Соединение 5:
Синтез и механизмы действия, биораспределения, селективности для опухоли и РЕТ-связанное использование соответствующих RGD аналогов Соединений 4 и 5 было описано Li, Z. и соавт., 64CU-Labeled Tetrameric and Octameric RGD Peptides for small animal PET of Tumor ανβ3 Integrin Expression; J. Nucl. Med. 48 (7), стр. 1162-1171 (2007).
Как используется здесь, любая ссылка на лечение заболевания или расстройства не должна толковаться как включающая предупреждение или профилактику заболевания или расстройства до того, как оно появилось или было обнаружено, а также лечение заболевания или расстройства после того, как оно появилось или было обнаружено.
Следует отметить, что изобретение было описано здесь со ссылкой на некоторые конкретные примеры и варианты воплощения, но могут быть сделаны различные добавления, удаления, изменения и модификации раскрытых примеров и вариантов, не отходя от предполагаемой сущности и объема изобретения. Например, любой элемент или признаки одного из вариантов воплощения или примера могут быть включены или могут быть использованы с другим вариантом или примером, если не предусмотрено иное, в случае если это сделает воплощение или пример непригодным для использования по назначению. Кроме того, если последовательность способа или процесса была описана и перечислена в определенном порядке, порядок соответствующих этапов может быть изменен, если не указано иное или если это не нарушит реализацию назначения способа или процесса. Все приемлемые добавления, удаления, изменения и дополнения должны быть рассмотрены как аналоги описанных примеров и вариантов и должны быть включены в объем притязаний по следующей формуле. Все публикации и патентные документы, упомянутые в настоящем документе, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме для всех целей в той же степени, как если бы каждый из них был описан здесь индивидуально.
Claims (9)
1. Композиция, пригодная для подавления ангиогенеза у субъекта, являющегося человеком или животным, содержащая пептид, содержащий аминокислотную последовательность глицин-аргинин-глицин-цистеиновая(кислота)-треонин-пролин.
2. Композиция по п. 1, в которой пептид состоит из глицинил-аргинил-глицинил-цистеиновая(кислота)-треонил-пролин-COOH.
3. Композиция по п. 1, в которой пептид имеет структурную формулу:
Соединение 1.
4. Применение композиции по любому из пп. 1-3 для лечения или предупреждения ангиогенеза у субъекта, являющегося человеком или животным, путем введения субъекту эффективного количества композиции.
5. Применение по п. 4, где ангиогенез обусловлен связанным с ангиогенезом глазным заболеванием или расстройством, выбранным из группы, состоящей из: неоваскуляризации трансплантата роговицы, неоваскулярной глаукомы, диабетической ретинопатии, птеригия, дегенерации сетчатки, влажной макулярной дегенерации, неоваскуляризации роговицы, ишемии зрительного нерва и рубеоза радужки.
6. Применение по п. 5, где композиция вводится путем интравитреальной инъекции.
7. Применение по п. 5, где композиция вводится путем множественных интравитреальных инъекций.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US25974809P | 2009-11-10 | 2009-11-10 | |
US61/259,748 | 2009-11-10 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012118503A Division RU2642625C2 (ru) | 2009-11-10 | 2010-11-10 | Композиции и способы ингибирования клеточной адгезии или направленности диагностических или терапевтических агентов к rgd связывающим сайтам |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2018101141A RU2018101141A (ru) | 2019-02-20 |
RU2018101141A3 RU2018101141A3 (ru) | 2021-10-12 |
RU2786127C2 true RU2786127C2 (ru) | 2022-12-19 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU96100341A (ru) * | 1996-01-05 | 1998-05-10 | В.С. Гуревич | Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами |
US6087330A (en) * | 1994-06-29 | 2000-07-11 | Texas Biotechnology Corporation | Process to inhibit binding of the integrin α4 β1 to VCAM-1 or fibronectin and cyclic peptides therefor |
US6331285B1 (en) * | 1996-06-05 | 2001-12-18 | Palatin Technologies, Inc. | Structurally determined cyclic metallo-constructs and applications |
US20030059422A1 (en) * | 1995-06-07 | 2003-03-27 | Shubh D. Sharma | Tuftsin metallopeptide analogs and uses thereof |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6087330A (en) * | 1994-06-29 | 2000-07-11 | Texas Biotechnology Corporation | Process to inhibit binding of the integrin α4 β1 to VCAM-1 or fibronectin and cyclic peptides therefor |
US20030059422A1 (en) * | 1995-06-07 | 2003-03-27 | Shubh D. Sharma | Tuftsin metallopeptide analogs and uses thereof |
RU96100341A (ru) * | 1996-01-05 | 1998-05-10 | В.С. Гуревич | Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами |
US6331285B1 (en) * | 1996-06-05 | 2001-12-18 | Palatin Technologies, Inc. | Structurally determined cyclic metallo-constructs and applications |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
LIJIE MEN ET AL., "Further studies on the fragmentation of protonated ions of peptides containing aspartic acid, glutamic acid, cysteine sulfinic acid, and cysteine sulfonic acid", RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY, 2005, vol. 19, no. 1, pages 23 - 30. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11666625B2 (en) | Pharmaceutical compositions and preparations for administration to the eye | |
JP6383031B2 (ja) | R−g−システイン酸ペプチドを含む医薬組成物 | |
RU2786127C2 (ru) | Композиции и способы для подавления ангиогенеза |