TW201639871A

TW201639871A - 用以治療血管新生相關疾病和/或症狀的短合成胜肽

Info

Publication number: TW201639871A
Application number: TW105111574A
Authority: TW
Inventors: 曹友平; 何宗權
Original assignee: 台灣基督長老教會馬偕醫療財團法人馬偕紀念醫院
Priority date: 2015-04-27
Filing date: 2016-04-14
Publication date: 2016-11-16
Also published as: CA2983977C; EP3288961B8; AU2016255021A1; MY194448A; CN107614513A; JP6529606B2; AU2016255020B2; EP3288960B1; CA2983962C; KR20170137205A; KR20170138547A; NZ736652A; EP3288960A4; CN107614512B; US20180140656A1; TWI589594B; TWI589593B; EP3288961A1; KR102035407B1; SG11201708657XA

Abstract

在此揭示一種合成胜肽及含有所述胜肽的組合物，其係用以治療和或預防一血管新生相關疾病和/或症狀。本揭示內容亦揭示一種治療和或預防一血管新生相關疾病和/或症狀的方法，所述方法包含施用一組合物至有需要的個體，其中所述組合物含一治療有效量之本揭示內容的合成胜肽。

Description

用以治療血管新生相關疾病和/或症狀的短合成胜肽

本發明是有關於發現一種短合成胜肽，及其治療和/或預防血管新生相關疾病和/或症狀的用途。

血管新生(angiogenesis)是指新生血管的形成、發展及增長。一般而言，血管新生受到嚴格的調控，主要是透過誘導血管形成的因子和抑制或妨礙此一過程的因子間的微妙平衡來調控。當此一平衡狀態改變時，通常會造成病理性血管新生。血管新生誘導的或相關的病理進程，涵蓋多種疾病和/或症狀，例如，癌症、血管異常、感染、心血管疾病以及損傷。

因此，本領域亟需一種改良的醫藥品和或治療和/或預防血管新生相關疾病和/或症狀的方法。

發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

本揭示內容係有關於發展新穎化合物和/或用以治療血管新生相關疾病和/或症狀的方法。

本揭示內容的第一態樣係提供一種能用以治療血管新生相關疾病和/或症狀的短合成胜肽。所述短合成胜肽係由7個連續胺基酸殘基所組成，其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸 (alanine, A)、天冬胺酸(aspartic acid, D)、天冬醯胺酸(asparagine, N)、白胺酸(leucine, L)、苯丙胺酸(phenylalanine, F)或纈胺酸(valine, V)； X₂ 是丙胺酸(alanine, A)、異白胺酸(isoleucine, I)、白胺酸(leucine, L)或纈胺酸(valine, V)； X₃ 是苯丙胺酸(phenylalanine, F)、酪胺酸(tyrosine, Y)或色胺酸(tryptophan, W)； X₄ 是精胺酸(arginine, R)或賴胺酸(lysine, K)； X₅ 是纈胺酸(valine, V)、甲硫胺酸(methionine, M)、異白胺酸(isoleucine, I)、白胺酸(leucine, L)或麩醯胺酸(glutamine, Q)； X₆ 是精胺酸(arginine, R)、麩醯胺酸(glutamine, Q)、賴胺酸(lysine, K)或脯胺酸(proline, P)； X₇ 是絲胺酸(serine, S)或酥胺酸(threonine, T)；以及 X₂ 、X₃ 、X₄ 、X₆ 和X₇ 分別是左旋胺基酸。

依據本揭示內容部分實施方式，其中X₁ 和X₅ 至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸，且所述合成胜肽具有序列編號：2之胺基酸序列(本文以7-mer表示)。在一實施例中，X₁ 是右旋胺基酸，例如，D-天冬胺酸(本文以7-mer DD表示)。在其他實施例中，X₅ 是右旋胺基酸，例如，D-纈胺酸 (本文以7-mer DV表示)。

依據本揭示內容較佳的實施方式，所述合成胜肽具有序列編號：3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：3之胺基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：4之胺基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：10之胺基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：11之胺基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：12之胺基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：13之胺基酸序列(本文以7-merIP表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：14之胺基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他的實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：15之胺基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：16之胺基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：17之胺基酸序列(本文以7-mer V"L表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：18之胺基酸序列(本文以7-mer R2"Q表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：19之胺基酸序列(本文以7-mer D"V表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：20之胺基酸序列(本文以7-mer D"F表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：21之胺基酸序列(本文以7-mer D"L表示)。

本揭示內容的第二態樣為一種提供一醫藥品和/或一組合物，其係用以治療一血管新生相關疾病和/或症狀。所述醫藥品或組合物包含一有效量的如上所述之合成胜肽，以及一藥學可接受載體。

依據本揭示內容部分較佳的實施方式，其中X₁ 、和X₅ 至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸，且所述合成胜肽包含序列編號：2之胺基酸序列。在一實施例中，X₁ 是右旋胺基酸，例如，D-天冬胺酸(本文以7-mer DD表示)。在其他實施例中，X₅ 是右旋胺基酸，例如，D-纈胺酸(本文以7-mer DV表示)。

依據本揭示內容較佳實施方式，所述合成胜肽具有序列編號：3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：3之胺基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：4之胺基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：10之胺基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：11之胺基酸序列 (本文以7-mer KP表示)。在又另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：12之胺基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：13之胺基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：14之胺基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：15之胺基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：16之胺基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：17之胺基酸序列(本文以7-mer V"L表示)。在其他實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：18之胺基酸序列(本文以7-mer R2"Q表示)。在其他實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：19之胺基酸序列(本文以7-mer D"V表示)。在其他實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：20之胺基酸序列(本文以7-mer D"F表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：21之胺基酸序列(本文以7-mer D"L表示)。

本揭示內容的醫藥品或組合物治療的血管新生相關疾病和/或症狀係選自：癌症、眼部疾病、血管異常、感染、心血管疾病以及損傷所組成的群組中。

在某些實施方式中，本揭示內容的醫藥品或組合物可用以治療癌症，其係選自：乳癌(breast cancer)、子宮頸癌(cervical cancer)、卵巢癌(ovary cancer)、子宮內膜癌(endometrial cancer)、黑色素瘤(melanoma)、膀胱癌(bladder cancer)、肺癌(lung cancer)、胰臟癌(pancreatic cancer)、大腸癌(colon cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、淋巴系造血腫瘤(hematopoietic tumors of lymphoid lineage)、骨髓性白血病(myeloid leukemia)、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺濾泡癌 (thyroid follicular cancer)、骨髓增生不良症候群(myelodysplastic syndrome, MDS)、起源於間葉細胞的腫瘤(tumor of mesenchymal origin)、黑色素瘤(melanoma)、葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma)、畸形癌(teratcarcinoma)、神經母細胞瘤(neuroblastoma)、神經膠瘤(glioma)、神經膠母細胞瘤, (glioblastoma)、角化棘皮瘤(keratoacanthomas)、腎癌(renal cancer)、間變性大細胞淋巴瘤(analplastic large cell lymphoma)、食道鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma)、肝細胞癌(heptatocellular carcinoma)、濾泡樹突狀細胞癌(follicular dentritic cell carcinoma)、腸癌(intestinal cancer)、肌肉侵襲性癌症(muscle invasive cancer)、精囊瘤(seminal vesicle tumor)、上皮癌(epidermal carcinoma)、脾癌(spleen cancer)、膀胱癌(bladder cancer)、頭頸癌(head and neck cancer)、胃癌(stomach cancer)、骨癌(bone cancer)、腦癌(brain cancer)、視網膜癌(cancer of retina)、膽道癌(biliary cancer)、小腸癌(small bowel cancer)、唾液腺癌(salivary gland cancer)、子宮肉瘤(uterine sarcoma)、睾丸癌(cancer of testicles)、結締組織癌(cancer of connective tissue)、前列腺肥大(prostatic hypertrophy)、骨髓發育不良(myelodysplasia)、瓦登斯特隆巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia)、鼻咽癌(nasopharyngeal cancer)、神經內分泌癌(neuroendocrine cancer)、間皮瘤(mesothelioma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、卡波西肉瘤 (Kaposi’s sarcoma)、食管癌(oesophagogastric)、輸卵管癌 (fallopian tube cancer)、腹膜癌(peritoneal cancer)、漿液性乳頭狀苗勒氏癌(papillary serous mullerian cancer)、惡性腹水(malignant ascites)、胃腸道基質瘤(gastrointestinal stromal tumor, GIST)、李弗勞明症候群(Li-Fraumeni syndrome)以及希佩爾-林道症候群(Von Hippel-Lindau syndrome, VHL)所組成的群組中。

所述淋巴系造血腫瘤可以是白血病(leukemia)、急性淋巴性白血病(acute lymphocytic leukemia)、慢性淋巴性白血病(chronic lymphocytic leukemia)、B細胞淋巴瘤(B-cell lymphoma)、伯奇氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、多發性骨髓癌(multiple myeloma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)或非何杰金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma)。所述骨髓性白血病可以是急性骨髓性白血病(acute myelogenous leukemia, AML)或慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia, CML)。所述起源於間葉細胞的腫瘤是纖維肉瘤(fibrosarcomas)或橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcomas)。

在某些實施例中，所述癌症是轉移性癌症；在較佳的實施例中，所述癌症是轉移性肺癌(metastatic lung cancer)。

在其他實施例中，所述癌症是子宮肉瘤(uterine sarcoma)。

依據部分實施方式，本揭示內容的醫藥品或組合物係用以治療眼部疾病，其係選自：角膜血管新生(corneal neovascularization)、脈絡膜血管新生(choroidal neovascularization, CNV)、糖尿病性視網膜病(diabetic retinopathy)、早產兒視網膜病變(retinopathy of prematurity)、老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration, AMD)、青年性黃斑部病變(juvenile macular degeneration)、糖尿病性黃斑水腫(diabetic macular edema)、色素性視網膜炎(retinitis pigmentosa)、砂眼(trachoma)、青光眼(glaucoma)、乾眼症(dry eye syndrome)、神經眼部疾病(neuro-ophthalmic disease)、視網膜動脈阻塞(retinal artery occlusion)、眼色素層炎(uveitis)、脈絡膜炎(choroiditis)、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變(central serous chorioretinopathy, CSC)、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變(central exudative chorioretinopathy, CEC)、息肉狀脈絡膜血管病變(polypoidal chorodial vasculopathy, PCV)、血管新生性青光眼(neovascular glaucoma)、血管新生性黃斑部病變( neovascular maculopathy)和雷射後併發症(post-laser complications)所組成之群組中。

在一實施例中，所述眼部疾病是老年性黃斑部病變(AMD)。

在另一實施例中，所述眼部疾病是糖尿病性視網膜病。

依據部分實施方式，本揭示內容醫藥品或組合物可用以治療血管異常，其係選自：血管通透性(vascular permeability)異常、血漿滲漏(plasma leakage)、靜脈畸形(venous malformation, VM)、血管母細胞瘤(hemangioblastoma)、血管瘤(hemangiomas)、腦動靜脈畸形瘤(brain arteriovenous malformations, BAVM)、動脈硬化(arteriosclerosis)、栓塞(thrombosis)、脈絡膜血管新生(choroidal neovascularization , CNV)以及奧斯勒-惠勃症候群(Osler-Weber syndrome)所組成之群組中。

在一較佳的實施例中，所述血管異常是脈絡膜血管新生(CNV)，亦稱為濕式老年性黃斑部病變(wet type age-related macular degeneration, wet type age-related AMD)。

依據另一實施方式，本揭示內容醫藥品或組合物可用以治療感染，其可以是細菌感染、病毒感染、真菌感染或原蟲感染。

依據其他實施方式，本揭示內容之醫藥品或組合物可用以治療心血管疾病，其係選自：動脈粥樣硬化(atherosclerosis)、心肌血管新生(myocardial angiogenesis)、高黏稠度症候群(hyperviscosity syndromes)、靜脈阻塞(vein occlusion)、動脈阻塞(artery occlusion)、頸動脈阻塞疾病(carotid obstructive disease)、奧-韋-朗疾病(Osler-Weber-Rendu disease)、心肌炎(myocarditis)、腦血管病變(cerebrovascular accident)、二尖瓣閉鎖不全(mitral valve regurgitation)、低血壓(hypotension,)、動脈或移植後動脈粥樣硬化(arterial or post-transplantational artherosclerosis)、纖維化(fibrosis)、栓塞(thrombosis)以及血小板聚集(platelet aggregation)所組成的群組中。

依據又一實施方式，本揭示內容之醫藥品或組合物是可用以治療損傷，其可以是因意外(accident)或組織移植(tissue transplant)引起的傷口(wound)或創傷(trauma)。

本揭示內容之醫藥品或組合物施用至所述個體的方式，可經由血管傳遞(intravascular delivery)(例如，注射(injection)或灌注(infusion))、經口(oral)、腸內(enteral)、直腸(rectal)、肺(pulmonary (例如，吸入(inhalation))、經鼻(nasal)、局部施用(topical)(包含經皮(transdermal)、經頰(buccal)以及舌下(sublingual))、膀胱內(intravesical)、玻璃體內(intravitreal)、腹膜內(intraperitoneal)、陰道(vaginal)、經腦傳遞(brain delivery)(例如，腦室注射(intracerebroventricular)和顱內注射(intracerebral))、經CNS傳遞(例如，鞘內(intrathccal)、椎旁(perispinal)和椎內(intra-spinal))或腸外(parenteral)(例如，皮下(subcutaneous)、肌肉內(intramuscular)、靜脈內(intravenous)和皮內(intradermal))、黏膜給藥(transmucosal administration)或藉由移植(implant)或其他習知的給藥途徑。

本揭示內容第三態樣係有關於一種治療一患有血管新生相關疾病和/或症狀個體的方法。所述方法包含以下步驟：施用本揭示內容任一實施方式所示之醫藥品或組合物至所述個體，以改善或減緩血管新生相關疾病和/或症狀的病徵。

依據較佳的實施方式，本揭示內容之方法所治療的血管新生相關疾病和/或症狀是癌症、眼部疾病、血管異常、感染、心血管疾病或損傷。

在較佳的實施例中，本方法所治療的癌症是選自於：乳癌、子宮頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰臟癌、大腸癌、前列腺癌、淋巴系造血腫瘤、骨髓性白血病、甲狀腺癌、甲狀腺濾泡癌、骨髓增生不良症候群、起源於間葉細胞的腫瘤、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸形癌、神經母細胞瘤、神經膠瘤、神經膠母細胞瘤、角化棘皮瘤、腎癌、間變性大細胞淋巴瘤、食道鱗狀細胞癌、肝細胞癌、濾泡樹突狀細胞癌、腸癌、肌肉侵襲性癌症、精囊瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、頭頸癌、胃癌、骨癌、腦癌、視網膜癌、膽道癌、小腸癌、唾液腺癌、子宮肉瘤、睾丸癌、結締組織癌、前列腺肥大、骨髓發育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神經內分泌癌、間皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管癌、輸卵管癌、腹膜癌、漿液性乳頭狀苗勒氏癌、惡性腹水、胃腸道基質瘤、李弗勞明症候群以及希佩爾-林道症候群所組成之群組中。

所述淋巴系造血腫瘤可以是白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、B細胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多發性骨髓癌、何杰金淋巴瘤或非何杰金淋巴瘤。所述骨髓性白血病是急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病。所述起源於間葉細胞的腫瘤是纖維肉瘤或橫紋肌肉瘤。

在部分實施例中，所述癌症是轉移性癌症。在較佳的實施例中，所述癌症是轉移性肺癌。

在其他實施例中，所述癌症是子宮肉瘤。

依據部分實施方式，眼部疾病是角膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病性視網膜病、早產兒視網膜病變、老年性黃斑部病變、青年性黃斑部病變、糖尿病性黃斑水腫、色素性視網膜炎、砂眼、青光眼、乾眼症、神經眼部疾病、視網膜動脈阻塞、眼色素層炎、脈絡膜炎、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、息肉狀脈絡膜血管病變、血管新生性青光眼、血管新生性黃斑部病變或雷射後併發症。

在一實施例中，所述眼部疾病是老年性黃斑部病變(AMD)。

在其他實施例中，所述眼部疾病是糖尿病性視網膜病。

依據某些實施方式，所述血管異常是選自於：血管通透性、血漿滲漏、靜脈畸形、血管母細胞瘤、血管瘤、腦動靜脈畸形瘤、動脈硬化、栓塞、脈絡膜血管新生以及奧斯勒-惠勃症候群所組成之群組中。

在一較佳的實施方式，所述血管異常是脈絡膜血管新生(CNV)。

依據又一實施方式，所述感染是細菌感染，病毒感染，真菌感染或原蟲感染。

依據另一實施方式，所述心血管疾病是選自於：動脈粥樣硬化、心肌血管新生、高黏稠度症候群、靜脈阻塞、動脈阻塞、頸動脈阻塞疾病、奧-韋-朗疾病、心肌炎、腦血管病變、二尖瓣閉鎖不全、低血壓、動脈或移植後動脈粥樣硬化、纖維化、栓塞以及血小板聚集所組成之群組中。

依據其他實施方式，所述損傷是因意外或組織移植引起的傷口或創傷。

依據本揭示內容任一實施方式，所述個體為人類。

在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。

1. 名詞定義

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比（例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者）均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處，將數值範圍表示成由一端點至另一段點或介於二端點之間；除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點。

除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。此外，在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。

在此處「胜肽」(peptide)一詞係指胺基酸殘基所組成的聚合物。「合成胜肽」(synthetic peptide)一詞則代表此胜肽並未包含存在於自然界的完整蛋白質分子。此種胜肽之所以是「合成的」，表示其乃是由人類利用技術手段所得，譬如化學合成、重組遺傳技術或將整個抗原切段。於本說明書中，任何胺基酸殘基於一胜肽中的位置係由該胜肽的N端起算。當未具體指出胺基酸為右旋或左旋胺基酸，所述胺基酸可以是左旋胺基酸或者是右旋胺基酸，除非上下文明示所述胺基酸為特定異構物。所述「右旋胺基酸(D-amino acid)」和「左旋胺基酸(L-amino acid)」係指胺基酸的絕對構型，非為平面偏光的特定旋轉方向。本文中胺基酸的用法(usage)與相領域技術人士所使用的標準用法相同。本文中胺基酸可以1個字母或3個字母表示，例如以工業財產資訊和文件手冊內所示之ST. 25標準命名。

在此，蛋白質/胜肽胺基酸序列的些微變異皆為本發明權利範圍所涵蓋。舉例來說，變異的胺基酸序列至少保留70%、71%、72%、73%、75%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%以及99%的相似度。本發明合成胜肽可經由修飾以改變胜肽特徵且不影響其生理活性。舉例而言，某些胺基酸經改變和/或刪除後，不會影響本揭示內容所述胜肽之生理活性(即，治療血管新生相關疾病和/或症狀的功效)。具體而言，胺基酸的保守性置換是可被預期的。所述保守性置換是指胺基酸側鏈被同一類的胺基酸所取代。一般而言，編碼的胺基酸分類如下：(1)酸性胺基酸=天門冬胺酸(aspartate)、麩胺酸(glutamate)；(2)鹼性胺基酸= 賴胺酸(lysine)、精胺酸(arginine)、組胺酸(histidine)； (3)非極性胺基酸=丙胺酸(alanine)、纈胺酸(valine)、白胺酸(leucine)、異白胺酸(isoleucine)、脯胺酸(proline)、苯丙胺酸(phenylalanine)、甲硫胺酸(methionine)、色胺酸(tryptophan)；以及(4)未帶電極性胺基酸=甘胺酸(glycine)、天冬醯胺酸(asparagine)、麩醯胺、半胱胺酸(cysteine)、絲胺酸(serine)、酥胺酸(threonine)、酪胺酸(tyrosine)。在較佳的實施例中、所述胺基酸的分類為:絲胺酸(S)和酥胺酸(T)為脂肪族羥基族(aliphatic-hydroxy family)；天冬醯胺酸(N)以及麩醯胺為含醯胺族(amide-containing family)；丙胺酸(A)、纈胺酸(V)、白胺酸(L)以及異白胺酸(I)為脂肪族(aliphatic family)；以及苯丙胺酸(F)、色胺酸(W)和酪胺酸(Y)為芳香族(aromatic family)。舉例而言，可以預期的是以異白胺酸(I)或纈胺酸(V)取代白胺酸(L)、以麩胺酸(E)取代天冬胺酸(D)、以絲胺酸(S)取代酥胺酸(T)、或以一結構相似的胺基酸取代一胺基酸，此一置換不會對胺基酸分子的結合或其特性產生重大影響，特別是所述置換並未包含胺基酸的框架區域(framework site)。可藉由分析胜肽衍生物的專一性活性，確定胺基酸的修飾是否改變一功能性胜肽。所屬技術領域中具有通常知識者可製備蛋白質/胜肽的片段或類似物。較佳的片段或衍生物的氨端或羧端發生於功能區域。在一實施例中，本發明合成胜肽中的一個胺基酸殘基(例如，纈胺酸(V))被保守性置換(例如，被白胺酸(L)置換)。在其他實施例中，本發明合成胜肽中的兩個胺基酸殘基被其他適當的胺基酸保守性置換；例如，纈胺酸(V)以及精胺酸(R)分別被其他對胺基酸所取代，包含，但不限於，甲硫胺酸(M)和賴胺酸(K)、賴胺酸(K)和脯胺酸(P)、色胺酸(W)和異白胺酸(I)、異白胺酸(I)和脯胺酸(P)、天冬醯胺酸(N)和纈胺酸(V)，以及麩醯胺(G)和賴胺酸(K)。

所述「治療(treatment)」一詞係指預防性(如，預防用藥)、療癒性或緩和性的處置，藉以達到所欲的藥學和/或生理學效果；例如，延緩或抑制癌生長或改善器官(例如，腦)的缺血性損傷。上述的效果是指能夠部分或完全地治癒或預防個體出現所述疾病的症狀。所述「治療(Treatment)」包含預防、治療或減緩一哺乳類的疾病，尤其是人類。所述治療包含：(1)預防(如，預防用藥)、治療或減緩一個體的疾病或症狀，其中所述個體可能患有疾病但尚未被診斷；(2)抑制一疾病(即，降低發展出與該疾病、異常和/或病症相關之病理變化的風險)；或(3)治癒一疾病(即，減少與所述疾病相關的症狀)。

所述「施用(administered) (administering)(administration)」一詞係指將本發明之胜肽或組合物提供給個體。所述傳遞方式包含，但不限於，靜脈內、肌肉內、腹膜內、動脈內、顱內、結膜內或皮下傳遞方式。

在此處，「有效量(effective amount)」一詞係指一成分的用量足以招致所欲的反應或效果，即，能有效治療疾病。以治療乾眼症為例，一藥劑(如，化合物、合成胜肽、編碼治療胜肽的核酸)，其能用以降低、預防、延緩或治癒乾眼症的相關症狀。一藥劑的有效量不必然能夠治癒一疾病或症狀，但能延緩、阻礙或預防疾病或症狀的發生，或延緩疾病或症狀相關的病徵。所術治療有效量可分成一、二或更多劑量於單一施用劑量型式，且可於一指定期間內施用一次、二次或更多次。

所述「個體(subject)」或「患者(patient)」一詞可交互使用，且在此係指可接受本揭示內容之合成胜肽和/或方法的動物(包含，人類)。所述「哺乳類(mammal)」一詞涵蓋哺乳綱的所有成員，包含：人類、靈長類動物、家畜和農畜。舉例而言，所述家畜或農畜可以是兔子、豬、羊和牛。所述哺乳類亦可涵蓋動物園或競賽用動物、寵物，以及齧齒類(如，小鼠和大鼠)。除非另有指明，「個體」或「患者」一般包含雄性與雌性。再者，所述「個體」或「患者」包含可從本揭示內容的治療方法得到良好治療效果的動物。舉例而言，所述「個體」或「患者」包含，但不限於，人類、大鼠、小鼠、天竹鼠、豬、猴子、豬、羊、牛、馬、狗、貓、鳥和禽類。在一實例中，所述患者為人類。

在一實施例中，「藥學上可接受載體、賦形劑或安定劑」一詞，係指一適合施用於眼睛的載體、藥劑或化合物。「眼用組合物(ophthalmic composition)」一詞係指可施用於眼睛的組合物，或者可用以處理與眼睛接觸的裝置（例如，隱形眼鏡）。

在此，所述「血管新生相關疾病和/或症狀」一詞係指疾病進程或表現病徵中促進血管新生之病理學疾病和/或症狀。

2. 實施方式

本發明至少一部份係基於發現一短合成胜肽，其能用以治療和/或預防一個體血管新生相關疾病和/或症狀的發展。再者，本發明提供一用以治療和/或預防血管新生相關疾病和/或症狀方法和組合物，其中所述組合物包含新發現的合成胜肽。

2.1 本發明之合成胜肽

本揭示內容之短合成胜肽係由7個連續胺基酸殘基所組成，其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸(A)、天冬胺酸(D)、天冬醯胺酸(N)、白胺酸(L)、苯丙胺酸(F)或纈胺酸(V)； X₂ 是丙胺酸(A)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)或纈胺酸(V)； X₃ 是苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)或色胺酸(W)； X₄ 是精胺酸(R)或賴胺酸(K)； X₅ 是纈胺酸(V)、甲硫胺酸(M)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)或麩醯胺酸(Q)； X₆ 是精胺酸(R)、麩醯胺酸(Q)、賴胺酸(K)或脯胺酸(P)； X₇ 是絲胺酸(S)或酥胺酸(T)；以及 X₂ 、X₃ 、X₄ 、X₆ 和X₇ 分別為左旋胺基酸。

依據某些實施方式，本發明之合成胜肽中，其中X₁ 和X₅ 至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸，且所述合成胜肽具有序列編號：2之胺基酸序列。在一實施例中，X₁ 是右旋胺基酸，例如，D-天冬胺酸(本文以7-mer DD表示)。在其他實施例中，X₅ 是右旋胺基酸，例如，D-纈胺酸(本文以7-mer DV表示)。

依據其他較佳的實施方式，所述合成胺基酸具有序列編號：3或4之胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胺基酸具有序列編號：3之胺基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在其他實施例中，所述合成胺基酸具有序列編號：4之胺基酸序列(本文以7-mer La表示)。

依據其他較佳的實施方式，所述合成胜肽具有序列編號10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：10之胺基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：11之胺基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：12之胺基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：13之胺基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在又另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：14之胺基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：15之胺基酸序列(本文以7-mer V"QK表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：16之胺基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：17之胺基酸序列(本文以7-mer V"L表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：18之胺基酸序列(本文以7-mer R2"Q表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：19之胺基酸序列(本文以7-mer D"V表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：20之胺基酸序列(本文以7-mer D"F表示)。在又一實施例中，，所述合成胜肽具有序列編號：21之胺基酸序列(本文以7-mer D"L表示)。

依據部分實施方式，將位於序列編號：2的C-端上的絲胺酸(S)刪除後，所得到的修飾胜肽序列命名為對照胜肽(本文以DLYRVR表示，序列編號：22)，該胜肽不具有本揭示內容所述之生物活性。因此，位於C-端的絲胺酸(S)對於維持本發明合成胜肽治療和/或預防血管新生相關疾病和/或症狀活性具有重要性，此一胺基酸殘基僅能被保守性胺基酸殘基取代，但不可被刪除。

依據本揭示內容某些實施方式，其中序列編號；2包含至少一右旋胺基酸殘基，所產生的7-mer右旋類似物(analogues)(即，7-mer DD和7-mer DV)如本說明書實施例1之表1所示。在這些右旋類似物中，7-mer(序列編號：2)上的酪胺酸(Y)、精胺酸(R)，以及絲胺酸(S)必須為左旋胺基酸，否則會造成合成胜肽失去對於血管新生、發炎和/或纖維化相關疾病和/或症狀的生物活性 (即，7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DR2和7-mer DS，參見實施例1之表1)。

依據本揭示內容其他實施方式，7-mer上任一胺基酸殘基可分別被丙胺酸(A)所取代，產生7-mer類似物(即，7-mer Da和7-mer La)，如本說明書實施例1之表1所述。在這些類似物中，7-mer(序列編號：2)上的天冬胺酸(D)或白胺酸可以被丙胺酸(A)取代，且不會失去其對於血管新生、發炎和/或纖維化相關疾病和/或症狀的生物活性，但7-mer上其他胺基酸殘基被取代(即，7-mer上第3個至第7個胺基酸位置)，則會造成7-mer胺基酸失去生物活性。

依據本揭示內容又一實施方式，7-mer上至少二胺基酸殘基分別被其他胺基酸取代，產生如實施例1中表1所示之7-mer類似物(即，7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L))。以特定位置換所產生的7-mer類似物，仍保有7-mer胜肽部分活性，其中7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L)皆展現與7-mer類似的相同活性(序列編號：2)。

本發明之合成胜肽可藉由先前技術所述之任一標準胜肽合成方法所製成。在一實施方式中，本發明之合成胜肽係以一固相胜肽合成器(ABI433A胜肽合成器；Applied Biosystems Inc.；Life Technologies Corp.；Foster City, CA, USA)並依據操作手冊所合成。

另外，本發明的合成胜肽可利用重組技術製備。舉例而言，可利用重組技術將編碼本發明胜肽的核酸序列嵌入至一表現載體中，且其中所述核酸序列可與一調控序列連結，以在宿主細胞內表現本發明胜肽。接著，可將所述載體送入一合適的宿主細胞內表現本發明之胜肽。經表現的重組胜肽可以藉由硫酸銨沈澱法和管柱分劃色層分析法純化，並依據本揭示內容各實施例所示之方法進行活性測試。

上述核酸或多核苷酸可利用已知的生物降解聚合物微粒或微囊傳遞裝置傳送。另外，亦可利用常規方法以脂質體包覆核酸，以供宿主吸收所述核酸。所述多核苷酸可單獨載入或與其他組織專一性抗體共同載入至所述傳遞載體中。此外，可製備一分子接合物(molecular conjugate)，其係由質體或其他載體以靜電或共價力連結聚-L-賴胺酸。此外，本發明亦可利用已知的組織專一性轉錄調節元件(tissue-specific transcriptional regulatory elementst)，進行組織專一性標定。也可在不使用傳遞載體的情形下將「裸DNA(naked DNA)」傳遞至肌肉內、皮內或皮下的位置，以進行胞內表現(in vivo expression)。

本發明合成胜肽的N端或C端可以進行修飾。舉例而言，N端修飾包含，但不限於，N-醣基化、N-烷基化和N-乙醯化胺基酸。一終端修飾包含聚乙烯二醇化(pegylation)。在一實例中，C端修飾為一C端胺基化胺基酸。在可任選的實施方式中，一或多個胜肽鍵結可以被一非胜肽鏈所取代，個別的胺基酸基團的修飾，可藉由試劑處理，以與特定的側鏈或終端殘基反應。

於所述合成胜肽可經由化學修飾，於多個不同的部位，加入不同的官能基。官能基可以被添加至所述合成胜肽的終端。在某些實施方式中，所述官能基能改善胜肽一或多個特性的活性，例如，改善合成胜肽的穩定性、效能或選擇性；改善所述合成胜肽通過細胞膜和/或組織屏障的穿透效率；改善組織定位能力；降低毒性或清除率；以及改善抵抗細胞幫浦的排除，以及其他類似的活性。在非限制的實施例中，適當的官能基能用以傳遞胜肽黏附至細胞上。舉例來說，降低胜肽的親水性，以及增加其親脂性，這些可任選地官能基於活體內裂解較佳，例如在胞內以水解或酵素分解的方式裂解皆可。水解保護基包含酯、碳酸酯以及氨基甲酸酯保護基。胺保護基包含烷氧基以及芳氧羰基。羧酸保護基包含脂族(aliphatic)、苯基(benzylic)和芳酯(aryl esters)。在某些可任選的實施方式中，於本發明合成胜肽之天冬胺酸(D)之側鏈的羧酸基是被保護的；較佳為，藉由甲基、乙基、苯基或經取代的苯酯基。

可以保守性或非保守性置換方式，以「擬胜肽有機基團(peptidomimetic organic moiety)」取代本發明合成胜肽中任一胺基酸殘基。在可任選的較佳實例中，所述擬胜肽有機基團與取代的胺基酸於必要的部位具有類似的立體空間、電子或構型特性，且被視為保守性置換。可任選地以擬胜肽來抑制酵素造成胜肽降解或其他降解過程。在可任選和較佳的實例中，所述胜肽可藉由有機合成技術產生。在非限制的實施例中，合適的擬胜肽包含醯胺之同電子排列體(isosteres of amide bonds)、3-氨-2-丙二酮-6-羧酸(3-amino-2-propenidone-6-carboxylic acid)、羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧酸乙酯(hydroxyl-1,2,3,4-tetrahydro-isoquinoline-3-carboxylate)，以及組氨酸異喹啉羧酸(histidine isoquinolone carboxylic acid)。

可非必要地對本發明合成胜肽的任一部分進行化學修飾，例如，添加官能基。所述修飾可於合成本發明胜肽的過程中進行。在非限制的實施例中，所述修飾的類型包含，但不限於，羧甲基化(carboxymethylation)、醯化(acylation)、磷酸化(phosphorylation)、糖基化(glycosylation)或脂醯化(fatty acylation)。醚鍵可任選地用以結合絲胺酸(S)或酥胺酸(T)羥基至一糖類的羥基。醯胺鍵可任選地用以結合麩胺酸或天門冬胺酸的羧基至一糖類的胺基。縮醛或酮鍵結可任選地形成於胺基酸與碳水化合物之間。

2.2 用以治療 血管新生相關疾病和 / 或症狀的組合物

本發明合成胜肽能用以治療和/或預防一患有血管新生相關疾病和/或症狀的個體。

再者，本發明另一態樣係提供一包含本發明合成胜肽的醫藥品，其係用以治療血管新生相關疾病和/或症狀，其包含，但不限於，癌症、眼部疾病、血管異常、感染、心血管疾病和損傷。

在一實施方式中，所述醫藥品係用以治療癌症，且於治療後，腫瘤的體積、生長速率、轉移和/或上皮變間質型的轉換(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)皆降低或下降。在非限制的實施例中，含有本發明胜肽之醫藥品可用以治療的癌症包含固型腫瘤、肉瘤、血液惡性腫瘤；所述癌症包含但不限於：乳癌、子宮頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰臟癌、大腸癌、前列腺癌、淋巴系造血腫瘤(例如，白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、B細胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多發性骨髓癌、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤)、骨髓性白血病(例如，急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病)、甲狀腺癌、甲狀腺濾泡癌、骨髓增生不良症候群(MDS)、起源於間葉細胞的腫瘤(例如，纖維肉瘤以及橫紋肌肉瘤)、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸形癌、神經母細胞瘤、神經膠瘤、神經膠母細胞瘤、皮膚良性腫瘤(例如，角化棘皮瘤)、腎癌、間變性大細胞淋巴瘤、食道鱗狀細胞癌、肝細胞癌、濾泡樹突狀細胞癌、腸癌、肌肉侵襲性癌症、精囊瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、頭頸癌、胃癌、骨癌、腦癌、視網膜癌、膽道癌、小腸癌、唾液腺癌、子宮癌(例如、子宮肉瘤)、睾丸癌、結締組織癌、前列腺肥大、骨髓發育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神經內分泌癌、間皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管癌、輸卵管癌、腹膜癌、漿液性乳頭狀苗勒氏癌、惡性腹水、胃腸道基質瘤(GIST)和遺傳性癌症症候群(例如，李弗勞明症候群以及希佩爾-林道症候群(VHL))。

依據部分實施例，所述癌症是轉移性癌症。在一實施例中，所述癌症是轉移性肺癌。在另一實施例中，所述癌症是子宮肉瘤。

在其他實施例中，所述醫藥品是用以治療一眼部疾病，其包含任何與眼部相關病徵、症狀或疾病(包含眼睛的內部構造，例如，眼瞼、附屬器、結膜、鞏膜、角膜、葡萄膜、玻璃體和視網膜，以及視神經)和/或視力的症狀和病徵。在非限制的實施方式中，含本發明合成胜肽的醫藥品治療的疾病為眼部血管新生(例如，角膜血管新生或脈絡膜血管新生(CNV))、視網膜病變 (其包含糖尿病性視網膜病和早產兒視網膜病變)、老年性黃斑部病變(AMD)、青年性黃斑部病變、糖尿病性黃斑水腫、色素性視網膜炎、砂眼、青光眼、乾眼症、神經眼部疾病、視網膜動脈阻塞、眼色素層炎、脈絡膜炎、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變(CSC)、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變(CEC)、息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)、血管新生性青光眼、血管新生性黃斑部病變或雷射後併發症。

在一實施例中，所述眼部疾病是老年性黃斑部病變(AMD)。在其他實施例中，所述眼部疾病是糖尿病性視網膜病。

在又一實施方式中，本發明之醫藥品可用以治療血管異常，其包含於身體任一部位任何胎記和/或血管異常相關症狀，涵蓋外部或於內部器官上。在非限制的實施例中，含本發明合成胜肽的醫藥品可用以治療血管異常，其為血管通透性、血漿滲漏、靜脈畸形(VM)、血管母細胞瘤、血管瘤、腦動靜脈畸形瘤(BAVM)、動脈硬化、栓塞、脈絡膜血管新生(CNV)以及奧斯勒-惠勃症候群。

在一實施例中，所述血管異常是脈絡膜血管新生(CNV)。

在另又一實施方式中，本發明之醫藥品可用以治療心血管疾病，其包含任何心臟和或血管的症狀或疾病。在非限制的實施例中，含本發明胜肽的醫藥品可治療的心血管疾病為動脈粥樣硬化、心肌血管新生、高黏稠度症候群、靜脈阻塞、動脈阻塞、頸動脈阻塞疾病、奧-韋-朗疾病、心肌炎、腦血管病變、二尖瓣閉鎖不全、低血壓動脈或移植後動脈粥樣硬化、纖維化、栓塞或血小板聚集。

在又一實施方式中，含本發明醫藥品可治療的感染為細菌感染、病毒感染、真菌感染或原蟲感染。

在其他實施方式中，本發明醫藥品可用以治療損傷，例如，由意外或組織移植引起的傷口或創傷。

所屬技術領域中已知的藥學可接受載體、賦形劑或安定劑與適量的本發明之合成胜肽混合，可製成一組合物。在特定的實施方式中，所述合成胜肽係選自於上述任一胜肽，包含但不限於，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP,、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer V→L、7-mer QK、7-mer LQ、7-mer VFT及其組合。

所述醫藥品或組合物中本發明胜肽的含量隨著使用的胜肽而有所不同。所述組合物中的胜肽含量約為0.001%至10%(重量%)；例如，約0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0%。在一較佳的實施方式中，所述胜肽的含量約為0.001%至5%(重量%)；例如，約0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5.0%。

所屬技術領域中已知有多種藥學可接受載體、賦形劑或安定劑能夠適用於本發明之合成胜肽，包含但不限於，非毒性惰性固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包封劑或配方助劑。一般的藥學可接受載體可以是水、或生理食鹽水。舉例而言，藥學可接受載體包含，但不限於，糖類，例如，乳糖、葡萄糖或蔗糖；澱粉，例如，玉米澱粉；纖維素及其衍生物，例如，羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose)、乙基纖維素(ethyl cellulose)和醋酸織維素(cellulose acetate)；黃蓍膠粉末(powdered tragacanth)；麥芽(malt)；明膠(gelatin)；滑石(talc)；賦形劑，例如，可可脂(cocoa butter)和栓劑蠟(suppository waxes)；油類，例如，花生油(peanut oil)、棉籽油(cottonseed oil)、紅花油(safflower oil)、芝麻油(sesame oil)、橄欖油(olive oil)、玉米油(corn oil)和大豆油(soybean oil)；二醇類(glycols)，例如，丙二醇(propylene glycol)；酯類(esters)，例如，油酸乙酯(ethyl oleate)和月桂酸乙酯(ethyl laurate)；瓊脂(agar)；緩衝劑(buffering agents)，例如，氫氧化鎂(magnesium hydroxide)和氫氧化鋁(aluminum hydroxide)；藻酸(alginic acid)；以及其它製劑，例如，非毒性潤滑劑(toxic lubricants)、月桂基硫酸鈉 (lauryl sulfate)、硬脂酸鎂(magnesium stearate)、著色劑(coloring agent)、釋放劑(releasing agents)、調味劑(flavoring agents)、防腐劑(preservative)以及抗氧化劑(antioxidants)。

本揭示內容之醫藥品或組合物的施用途徑包括：經由血管傳遞(例如，注射或灌注)、經口、腸內、直腸、肺(例如，吸入)、經鼻、局部施用(包含經皮，經頰以及舌下)、膀胱內、玻璃體內、腹膜內、陰道、經腦傳遞(例如，腦室注射和顱內注射)、經CNS傳遞(例如，鞘內、椎旁和椎內)或腸外(例如，皮下、肌肉內、靜脈內和皮內)、黏膜給藥或藉由移植或其他習知的給藥途徑。

適用於口服的藥學組合物，可以是離散劑型，包含但不限於，丸劑、片劑、錠劑、硬式或軟式膠囊；或製成一分散粉末或顆粒；或製成一溶液或懸浮液，例如，溶液或懸浮液。舉例而言，水溶性或油性懸浮液、乳劑、糖漿、酏劑或腸內配方。所述組合物可以製成單一劑量或多劑量劑型，例如，密封瓶或安瓿，以凍乾條件並添加無菌液體載體(例如，水或食鹽水)儲存。

適用於腸外途徑施用的藥學組合物可以被製成液體或非液體無菌注射劑型，藉由混合或分散本發明合成胜肽與一無菌溶液，例如，林格氏溶液、食鹽水、1,3-丁二醇以及乙醇等。在可任選地實施例中，非揮發油、脂肪酸、合成單一或雙甘油酯皆可作為溶劑。所述組合物可藉由過濾器過濾使之無菌。

適用於局部和皮膚途徑施用的藥學組合物，可以被製成軟膏(ointments)、糊劑(pastes)、乳霜(creams)、乳液(lotions)、凝膠(gels)、貼片(patches)或噴霧劑(sprays)等劑型。眼部劑型、耳滴劑和眼滴劑皆屬於本發明涵蓋範疇。本發明的組合物可局部施用至眼部。隨著患者疾病的嚴重程度不一，本發明合成胜肽的施用劑量為約1微克/公斤體重至約50毫克/公斤體重(如，0.1-20毫克/公斤體重)。每日或每週的施用劑量為約1微克/公斤至約20毫克/公斤或更高。為達到上述任一局部施用之目的，所述局部施用量為約0.01至約100毫克/公斤體重(毫克/公斤)，每日施用一次至數次(如，每日施用4、6、8或更多次)。

藥學組合物可以製成適用於肺部施用的劑型，例如，粉塵(dusts)或氣霧(mists)，譬如可利用壓力定量(pressurized metered dose)裝置來產生氣溶膠、氣霧或粉塵。

本發明所提供的組合物可以是一套組。可以理解的是本發明所述套組係作為一產品，其包含本發明合成胜肽和/或其他治療性化合物，經包裝而形成所述組合物，以利組合物的運送、儲存和同時或連續施用。因此，本發明套組可包含一或多個含本發明之合成胜肽的安瓿，以將本發明胜肽製成單一劑量或多劑量形式。所述套組更包含一載體，用以溶解本發明所述合成胜肽；例如，水溶液介質物，即生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、葡萄糖和氯化鈉。水溶性介質，如，乙醇、聚乙二醇(polyethylene glycol)、丙基乙二醇(propylethylene glycol)。若有必要，非水溶性載體亦可適用本發明。本套組的其他物件為一包裝盒，用以包裝本發明之各組成物。適用於本發明之包裝盒的材料可以是玻璃、塑膠(聚乙烯，聚丙烯，聚碳酸酯極其類似物)、瓶子、小罐子、紙、束袋或其類似物。

本發明套組可更包含說明書，其中記載本發明各種配方的施用方式(如，同時施用、連續施用、個別施用)。因此，本發明之套組可更包含如何施用(如，同時施用、連續施用、個別施用)本發明中不同成分的說明書。所述說明書可以是紙張或為可被讀取的電子媒介物，例如，電子儲存媒體(磁碟、磁帶或其類似物)、光學媒體(CD-ROM，DVD)及其類似物。所述媒體可額外或非必要的附加網路頁面，以提供上述說明資訊。

2.3 預防和 / 或治療血管新生相關疾病和 / 或症狀的方法

如上所述，本發明所揭示的內容能有效預防和/或治療血管新生相關疾病和/或症狀。

因此，本發明係關於一種預防和/或治療血管新生相關疾病和/或症狀的方法的方法，其包含施用一包含本發明之合成胜肽的一醫藥品或組合物至一有需要的個體，其中所述合成胜肽係由7個連續胺基酸殘基所組成，其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸(A)、天冬胺酸(D)、天冬醯胺酸(N)、白胺酸(L)、苯丙胺酸(F)或纈胺酸(V)； X₂ 是丙胺酸(A)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)、或纈胺酸(V)； X₃ 是苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)或色胺酸(W)； X₄ 是精胺酸(R)或賴胺酸(K)； X₅ 是纈胺酸(V)、甲硫胺酸(M)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)或麩醯胺酸(Q)； X₆ 是精胺酸(R)、麩醯胺酸(Q)、賴胺酸(K)或脯胺酸(P)；以及 X₇ 是絲胺酸(S)或酥胺酸(T)；以及 X₂ 、X₃ 、X₄ 、X₆ 、X₇ 分別為左旋胺基酸；以及一藥學可接受載體。當施用所述醫藥品和/或組合物至個體時，能改善或減緩血管新生相關疾病和/或症狀。

在一具體的實施方式中，所述合成胜肽係選自於上述任一胜肽，包含但不限於，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)、7-mer (D"L)及其組合。

血管新生相關疾病和/或症狀，其包含，但不限於，癌症、眼部疾病、血管異常、感染、心血管疾病和損傷。

依據本發明一實施方式，本發明係有關於一種治療癌症的方法，其包含施用醫藥品或組合物至一有需要的個體。在非限制的實施例中，本方法治療的癌症為固型腫瘤、包含固型腫瘤、肉瘤、血液惡性腫瘤、包含但不限於、乳癌、子宮頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰臟癌、大腸癌、前列腺癌、淋巴系造血腫瘤(例如，白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、B細胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多發性骨髓癌、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤)、骨髓性白血病 (例如，急性骨髓性白血病 (AML)、慢性骨髓性白血病)、甲狀腺癌、甲狀腺濾泡癌、骨髓增生不良症候群 (MDS)、起源於間葉細胞的腫瘤(例如，纖維肉瘤以及橫紋肌肉瘤)、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸形癌、神經母細胞瘤、神經膠瘤、神經膠母細胞瘤、皮膚良性腫瘤(例如，角化棘皮瘤)、腎癌、間變性大細胞淋巴瘤、食道鱗狀細胞癌、肝細胞癌、濾泡樹突狀細胞癌、腸癌、肌肉侵襲性癌症、精囊瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、頭頸癌、胃癌、骨癌、腦癌、視網膜癌、膽道癌、小腸癌、唾液腺癌、子宮癌(例如、子宮肉瘤)、睾丸癌、結締組織癌、前列腺肥大、骨髓發育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神經內分泌癌、間皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管癌、輸卵管癌、腹膜癌、漿液性乳頭狀苗勒氏癌、惡性腹水、胃腸道基質瘤(GIST)和遺傳性癌症症候群(例如，李弗勞明症候群以及希佩爾-林道症候群(VHL))。在一實施例中，所述癌症是轉移性癌症，例如，轉移性肺癌。在其他實施例中，所述癌症是子宮肉瘤。

依據本發明其他實施方式，本發明之方法係有關於治療眼部疾病，其包含施用本發明之醫藥品或組合物至一有需要的個體。在非限制的實施方式中，所述眼部疾病為眼部血管新生(例如，角膜血管新生或脈絡膜血管新生(CNV))、視網膜病變(其包含糖尿病性視網膜病和早產兒視網膜病變)、老年性黃斑部病變(AMD)、青年性黃斑部病變、糖尿病性黃斑水腫、色素性視網膜炎、砂眼、青光眼、乾眼症、神經眼部疾病、視網膜動脈阻塞、眼色素層炎、脈絡膜炎、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變(CSC)、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變(CEC)、息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)、血管新生性青光眼、血管新生性黃斑部病變或雷射後併發症。

依據本發明其他實施方式，本發明之方法係用以治療血管異常，其包含施用本發明之醫藥品或組合物至一有需要的個體。在非限制的實施例中，所述血管異常為血管通透性、血漿滲漏、靜脈畸形(VM)、血管母細胞瘤、血管瘤、腦動靜脈畸形瘤(BAVM)、動脈硬化、栓塞、脈絡膜血管新生(CNV)以及奧斯勒-惠勃症候群。在一實施例中，所述血管異常是脈絡膜血管新生(CNV)。

依據本發明又一實施方式，本發明之方法係治療心血管疾病，其包含施用本發明之醫藥品或組合物至一有需要的個體。在非限制的實施例中，所述心血管疾病為動脈粥樣硬化、心肌血管新生、高黏稠度症候群、靜脈阻塞、動脈阻塞、頸動脈阻塞疾病、奧-韋-朗疾病、心肌炎、腦血管病變、二尖瓣閉鎖不全、低血壓、動脈或移植後動脈粥樣硬化、纖維化、栓塞或血小板聚集。

依據本發明再一實施方式，本發明係有關於治療感染的方法，其可以是細菌感染、病毒感染、真菌感染或原蟲感染。

依據本發明其他實施方式，本發明係有關治療損傷的方法，例如由意外或組織移植引起的傷口或創傷。所述方法包含施用本發明之醫藥品或組合物至一有需要的個體。

在可任選的實施方式中，本發明之方法更包含施用一有效量的藥劑至所述個體，其中該藥劑為治療血管新生相關疾病和/或症狀的藥劑，其係選自於：抗發炎藥劑、抗癌症藥劑、抗生素和抗淋巴管生成劑所組成的群組中。

在某些實施例中，所述抗發炎藥劑為環孢素(cyclosporine)。所述抗癌藥劑可以是烷化劑(alkylating agent)、抗微管劑(anti-microtubule agent)、拓樸脢抑制劑(topoisomerase inhibitor)或細胞抑制劑(cytotoxic agent)。所述抗生素係選自：阿米卡星(amikacin)、健他黴素(gentamycin)、卡那徽素(kanamycin)、新黴素(neomycin)、奈替米星(netilmicin)、鏈黴素(streptomycin)、妥布黴素(tobramycin)、替考拉寧(teicoplanin)、萬古黴素(vancomycin)、亞茲索黴素(azithromycin)、克拉黴素(clarithromycin)、地紅黴素(dirithromycin)、紅黴素(erythromycin)、羅紅黴素(roxithromycin)、桃黴素(troleandomycin)、阿莫西林(amoxicillin)、安比西林(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、卡本西林(carbenicillin)、氯坐西林(cloxacillin)、二氯坐西林(dicloxacillin)、氟氯西林( flucloxacillin)、美洛西林(mezlocillin)、奈夫西林(nafcillin)、盤尼西林(penicillin)、必倍西林(piperacillin)、替卡西林(ticarcillin)、枯草桿菌素(bacitracin)、柯利黴素(colistin)、多黴素B(polymyxin B)、塞普沙辛(ciprofloxacin)、依諾沙星(enoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、左旋氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、諾氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、曲伐沙星(trovafloxacin)、磺胺米隆(mafenide)、乙醯磺胺(sulfacetamide)、磺胺甲二唑(sulfamethizole)、磺胺塞拉金(sulfasalazine)、異坐磺胺(sulfisoxazole)、曲美普林 (trimethoprim)、複方新諾明(cotrimoxazole)、地美環素(demeclocycline)、去氧羥四環素(doxycycline)、米諾四環素(minocycline)、氧四環素(oxytetracycline)和四環素(tetracycline)。所組成的群組中。所述菸鹼乙醯膽鹼受體促效劑為毛果芸香鹼(pilocarpine)、阿托品(atropine)、尼古丁(nicotine)、棘蛙素(epibatidine)、洛貝林(lobeline)或吡蟲啉(imidacloprid)。所述抗淋巴管生成劑為血管內皮生長因子C(vascular endothelial growth factor C；VEGF-C)抗體、VEGF-D抗體或VEGF-3抗體。

在本發明任一實施方式中，適用治療的個體為一人類。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。

實施例

材料及方法材料

3-（4,5-二甲基吡啶-2-基）-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(簡稱MTT)購自Merck (產品目錄編號：1.11714.0001)。血管內皮生長因子(簡稱VEGF)、bFGF、TACS annexin V-FITC 套組皆購自R&D Systems (Minneapolis, MN, USA)。基質膠(matrigel)購自BD Biosciences (New Bedford, MA, USA)。HUVEC購自Cascade Biologics(Portland或USA)。 Hydron (529265)、硫糖鋁複合物 (S0652)、鏈佐黴素(streptozotocin) (STZ；S0130)、異硫氰酸螢光素-牛血清白蛋白(簡稱FITC-BSA)皆購自Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)。RPMI1640培養基、胰蛋白酶-EDTA(trypsin-EDTA)、胎牛血清(FBS)、抗生素-抗真菌劑溶液和胰蛋白酶皆購自Invitrogen (Carlsbad, CA, USA)。Medium 200、LSGS Kit、胎牛血清以及杜氏培養基(簡稱DMEM)皆購自Gibco-BRL。

所有胜肽係以GenScript (Piscataway, NJ, USA)合成，其中每一胜肽的N端及C端分別經乙醯化和胺基化修飾，以改善其穩定性，接著以質譜儀定性(純度：＞95%)。

細胞培養及處理

將HUVEC細胞以每孔1×10⁵ 個細胞的密度播於6孔盤中，並以Medium 200培養，培養基中添加低血清生長添加劑(Low Serum Growth Supplement，簡稱LSGS；添加物含1.9%的FBS、3奈克/毫升之bFGF、10微克/毫升之肝素、1微克/毫升之氫皮質酮(hydrocortisone)和10奈克/毫升的EGF)。培養皿上塗佈2%明膠。細胞(繼代：4-8)置於37°C，於潮濕且含5% CO₂ 大氣環境下培養。在進行胜肽處理時，將HUVEC細胞培養於低血清(0.5% FBS)培養基中，培養基含有10-20奈克/毫升之VEGF以及100 nM本發明合成胜肽。鼠B16-F10黑色素瘤細胞培養於DMEM培養基（含10% FBS、2mM 左旋麩醯胺、100 U盤林西林、100微克/毫升鏈黴素）置於37°C以及5% CO₂ 下培養。所使用的細胞繼代數為3-10。人類WSI纖維母細胞培養於Eagle’s Minimum essential Medium（添加10% FBS），並置於37°C，於潮濕含5% CO₂ 大氣環境下培養。

以複合培養基(RPMI1640)(添加10% (vol/vol)熱失活胎牛血清(Invitrogen)、50微克/毫升之盤尼西林、50微克/毫升之鏈黴素(streptomycin)和2 mM L-麩醯胺酸)培養多發性骨髓瘤細胞株RPMI8226，培養於37°C，5% CO₂ 大氣環境下。

MTT分析

將RPMI8226細胞培養於無血清RPMI1640培養基，培養24 小時，接著將細胞接種於48孔培養盤(3×10⁵ 細胞/孔)，以及以0.5毫升之新鮮無血清RPMI1640培養基(含25μΜ胜肽)繼續培養24小時。利用MTT分析測定細胞存活率。

簡而言之，添加50微升之MTT儲存液(5 毫克之MTT溶於1毫升之無菌PBS)至每一培養孔中。另外，添加50微升之MTT 儲存溶液至500微升之培養基中，作為陰性對照組。將培養盤置於37°C，培養4小時。分別從每個樣本中取450微升之分液至新的48孔培養盤，添加100微升之DMSO，利用移液管混合，於於37°C下，反應20分鐘，並在570 nm波長下測定吸光值。

VEGF-誘導HUVEC增殖之測定

將HUVEC細胞以每孔1×10⁵ 個細胞的密度播於塗佈明膠的6孔盤中，並以Medium 200培養，培養基中添加低血清生長添加劑(LSGS)。培養皿上塗佈2%明膠。細胞置於37°C，於5% CO₂ 大氣環境下培養24小時。

以無血清Medium 200培養基替換原培養基後進行隔夜培養。其後，以100 nM本發明合成胜肽(溶於含有0.5% FBS和10奈克/毫升VEGF的Medium 200中)處理細胞，細胞在37°C下培養24小時。接著，以胰蛋白-EDTA收集細胞，並以血球計數器計算。

內皮細胞形成毛細管樣之管狀結構的測定

在測定本發明合成胜肽對於體外血管新生的影響時，將低生長因子基質膠分注至預冷的24孔盤(每孔基質膠含量：150微升)，之後使其在37°C下進行聚合反應，反應時間45分鐘。將懸浮於低血清(0.5% FBS)培養基(含20奈克/毫升VEGF)之HUVEC細胞(每孔細胞數為4×10⁴ )接種於塗佈有基質膠的細胞盤上，其中該基質膠含本發明合成胜肽或所述對照胜肽(序列編號：22)(10 µM)，培養6小時，接著拍攝管狀結構。在此實施例中，所述影像係以Canon照相機於Zeiss倒位顯微鏡(inverted microscope)下，以放大倍率40倍拍攝，且管柱長度以影像分析軟體(Image-Pro Plus)定量分析。在此所述的對照胜肽，其序列為DLYRVR(序列編號：22)。

細胞凋亡分析

以TACS annexin V-FITC套組分析HUVEC細胞凋亡的百分率。依據製造商的使用手冊，以原位染色測定annexin V-陽性細胞的百分率。以Hoechst 33342複染測定細胞數目。從三個不同的腔室(約7200個細胞)中，隨機選取10個視野計算各該視野下的細胞核。使用Zeiss螢光顯微鏡(epifluorescence microscope)以100倍的倍率檢驗樣本並拍攝結果(10視野/樣本)。照片以Zeiss軟體記錄。

大鼠主動脈環測定

將10週齡Sprague Dawley鼠安樂死後，取下主動脈環並剝除主動脈環周圍的纖維脂肪組織。將主動脈切片為約2公釐長的環，並將其包埋於基質膠中。為了誘導血管新生，將人類重組bFGF (50 奈克/毫升)或含所述胜肽(50 µM)之bFGF添加至基質膠中。將含主動脈環的膠體(200微升)置於12孔盤內進行聚合反應(37℃，30分鐘)；接著，將其培養於1毫升之Medium 200(添加100 單位/毫升之盤林西林、100奈克/毫升之鏈黴素和2% FBS)，在定溫37°C之潮濕培養箱內培養7天，以使培養物增殖。利用倒位顯微鏡平台(Leica DMI6000B)，在明亮視野下，記錄血管出芽狀況。每一個環皆由三個獨立的觀察員，基於血管出芽程度不同，以0-4等級記錄之 (0=無出芽、4=極多出芽)。所述實驗重複進行三次。

實驗動物

所有實驗動物飼養於動物房中，且實驗過程經馬偕紀念醫院審查委員會同意。再者，所有動物實驗過程係遵循視覺及眼科學學術研究會議(ARVO)所訂定的動物實驗眼科和視覺研究相關規定。

小鼠角膜血管新生測定

簡而言之，本實驗例採用6週齡C57BL/6小鼠，以一針頭取得角膜微囊(corneal micropockets)。在每一角膜微囊中加入由蔗糖硫酸鋁(sucrose aluminum sulfate)和含200奈克VEGF之氫聚合物(有/無添加2.5微克胜肽）所組成的微粒(micropellet)。在微粒移植後7天，以裂隙燈生物顯微鏡(slit-lamp biomicroscope)拍攝眼睛。朝向缺血性角膜部位並趨向微粒向內生長的血管，為陽性反應。所述結果作為陽性角膜的總移植數。

癌化程度測定

MES-SA/Dx5細胞(0.1毫升含5×10⁶ 細胞)以皮下注射的方式植入裸鼠（母鼠）右側腹部區域 (n = 24，每隻動物接受試驗前體重約20克)。實驗過程經馬偕紀念醫院審查委員會同意。經處理前，動物中的腫瘤體積為80 mm³ 以上。腹膜內注射DMSO載體、本發明合成胜肽或對照胜肽(10毫克/公斤)至小鼠，每兩天一次。監測腫瘤進程，監測期間共10天。以卡尺測量腫瘤的尺寸，每三至五天一次，所得到的體積以下列公式計算： 1⁄2 × 長× 寬² 。

小鼠實驗性肺轉移測定

將B16-F10細胞(2×10⁵ )懸浮於100微升PBS中，並以以台盼藍(trypan blue)染色確認存活率(＞ 95%)。注射B16-F10細胞至6週齡C57BL/6小鼠(母鼠)的尾靜脈中。於B16-F10細胞注射後，再以腹膜內注射將DMSO載體、本發明合成胜肽或對照胜肽(10 毫克/公斤)注射至小鼠體內，每二天一次。每組5隻小鼠。在細胞接種的第8天，摘除小鼠肺部，在解剖顯微鏡下計算肺表面的細胞群落(colonies)。

糖尿病小鼠視網膜血管異常之測量

將新鮮配置的鏈佐黴素(streptozotocin, STZ；溶於pH 4.5的0.1 M檸檬酸緩衝液中)以單一腹膜內注射至小鼠體內(150毫克/公斤體重)，以產生糖尿病小鼠。注射後，持續提供小鼠10％蔗糖至隔夜，以預防低血糖性休克。一週後，小鼠非空腹血糖值＞ 500毫克/分升(dl)定義為糖尿病，並用以進行本試驗。腹膜內注射DMSO載體或本發明合成胜肽(10毫克/公斤；n≧3/胜肽)，每天二次。處理後24小時，在30分鐘內，腹膜內注射BSA-FITC至小鼠(100毫克/公斤)。

為了測定視網膜血管病灶（出血區域），首先，以吸入CO₂ 的方式致使小鼠安樂死，摘除小鼠眼睛，再以2%多聚甲醛(paraformaldehyde)固定2小時，將組織平封(flat-mounted)於在載玻片上，再以螢光顯微鏡觀察光學切片。視網膜之血管病灶計分方式，係於20×物鏡下觀察，記錄每一封片中所有4個視網膜象限。於中央或周邊視網膜每個象限中，取6個顯微鏡視野，且數據以病灶數/視網膜的平均數表示。

血管FITC-BSA滲漏以螢光分光光度計測定（以激發和放射波長為488 nm和535 nm建立FITC-BSA標準曲線，並以其標準化一非注射控制組視網膜）。在此分析中，於BSA-FITC 注射後，從處理或未經處理的糖尿病小鼠取出視網膜，再將視網膜個別溶於300微升的冰(ice-cold)PBS。

糖尿病大鼠視網膜中血管異常之測定

將Sprague-Dawley鼠空腹至隔夜，再單一腹膜內注射新鮮配置的STZ (65毫克/公斤體重)。施用STZ經5天後，大鼠血糖值＞ 350毫克/分升，定義其為糖尿病大鼠。以血糖監控儀測定大鼠血糖值，每兩天一次。非糖尿病對照組的動物，僅接受同量的檸檬酸緩衝液。在胜肽處理組中，糖尿病大鼠以腹膜內注射方式施用賽拉嗪(Xylazine) (10毫克/公斤)進行麻醉，再注射3微升本發明合成胜肽(10 mM)至單眼玻璃體內，以及注射等量的PBS至對側眼(每組n = 3-6)中。經胜肽處理後24小時，依據上述的步驟以BSA-FITC (100毫克/公斤體重)測定視網膜血管滲漏。

雷射誘導脈絡膜血管新生(CNV)

腹腔注射舒泰(zoletil) (6毫克/公斤)和賽拉嗪(xylazine) (3毫克/公斤)混合物至C57BL/6小鼠(母鼠)，以進行麻醉。以裂隙燈生物顯微鏡觀察視網膜組織，並將視神經頭(optic nerve head)置於顯微鏡視野正中央。以雷射二極體(病灶處直徑50微米；期間100毫秒(ms)；能量250毫瓦(mW))於雙眼視神經頭周圍進行3或4次雷射。施用雷射後所形成的氣泡為布魯克氏膜(Bruch’s membrane)的破裂。腹膜內注射DMSO載體或7-mer (10毫克/公斤; n≧10/胜肽)，每天二次，共施用10天。注射0.1毫升螢光素(100 毫克/毫升)(10% w/v)後約5分鐘，拍攝螢光眼底影像。於此期間，螢光滲漏點為相對穩定的。依據Sheets等人所揭示的方法(Molecular Vision 2010; 16:320-329)，由一位視網膜專家觀察每一CNV病灶滲漏的狀況並將其分級。簡言之，所述分為第0級、第1級、第2a級、第2b級等詞，定義如下：第0級：無高度螢光、第1級：有高度螢光且未發生滲漏、第2a級：有高度螢光且發生晚期滲漏、第2b級：明亮的高度螢光且在未處理區域外有晚期滲漏。

統計

結果以平均值±標準誤(mean ± standard error of the mean, SEM)表示。以單因子變異數分析(1-way ANOVA)進行統計分析。P ＜ 0.05為具有顯著性。

實施例 1 鑑別本發明合成胜肽之功能性殘基

在此實施例中，依據「材料與方法」所述之步驟合成7-mer胜肽(序列編號：2)。利用「丙胺酸掃瞄」、「右旋胺基酸取代」或「特定位置換」產生7-mer類似物，其中每一指定的胺基酸殘基被丙胺酸(A)、其右旋胺基酸或是特定胺基酸殘基所置換。

本實施例共合成25種胜肽，具體而言，其中7種類似物是以「丙胺酸掃瞄」所產生的，分別命名為7-mer Da、7-mer La、7-mer Ya、7-mer Ra、7-mer Va、7-mer R2a和7-mer Sa；7種類似物是以「右旋胺基酸取代」所產生的，分別命名為7-mer DD、7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DV、7-mer DR2和7-mer DS；以及其他12種類似物是利用特定位置換所產生的，分別命名為7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L)。再者，本發明亦合成一6-mer對照胜肽，其刪除7-mer胜肽上的絲胺酸(S)。本實施例合成胜肽(即，7-mer和其類似物)如表1所示。

表1 本發明合成胜肽表中以粗體表示的胺基酸代表其為右旋(D-form)胺基酸

接著，將合成胜肽進行MTT分析，其中以血管內皮因子作為刺激物，誘導細胞增殖。結果示於第1圖至第4圖。

第1圖的結果證實，VEGF(50奈克/毫升)能夠誘導RPMI8226骨髓瘤細胞增殖，且其7-mer (DLYRVRS)可抑制VEGF所誘導的細胞增殖，在其他實例中，如，7-mer Da和7-mer La皆產生類似的結果。相對地，7-MER胜肽上第3、4、5、6和7個胺基酸殘基以丙胺酸(A)取代所產生的7-mer類似物，失去其抑制活性，由此結果可以得知，該些特定胺基酸殘基的側鏈與7-mer生物活性相關。7-mer第1和2個胺基酸殘基以丙胺酸(A)取代(含丙胺酸(A)的7-mer Da和La胜肽)保留部分7-mer活性。所述結果指出7-mer胜肽第一個胺基酸殘基(以丙胺酸(A)取代天冬胺酸(D))和第二個胺基酸殘基(以丙胺酸(A)取代白胺酸(L))皆被取代的胜肽，對於其增殖抑制活性僅產生相對輕微的影響，故7-mer主鏈上第一個和第二個殘基之可置換性(main chain flexibility)使其成為7-mer主鏈上可被修飾的區域。

為了進一步研究7-mer主鏈上可被置換的胺基酸殘基，本實驗例也進行7-mer主鏈上特定位置胺基酸的取代置換，結果示於第2圖。結果顯出，透過特定位置取代置換所產生的7-mer類似物，包含7-mer QK、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L)，能保留7-mer的部分生物活性。

當以右旋胺基酸置換天然左旋胺基酸所產生的7-mer類似物，則發現置換7-mer上第2、3、4、6和7位置殘基，會導致其失去抑制活性(第3圖)。僅有當7-mer上第1個殘基(以D-天冬胺酸置換L-天冬胺酸)和第5個殘基(以D-纈胺酸置換L-纈胺酸）以右旋胺基酸置換所產生的7-mer類似物，仍可保留其抑制VEGF-誘導增殖的活性。進一步研究7-mer、7-mer DD和7-mer DV抑制VEGF-誘導細胞增值的效果，顯示該些胜肽的抑制效果具有劑量依賴性(1至25μM)(第4圖)。

綜合本實施例的結果，顯示7-mer上的第1和第2個胺基酸殘基非為抑制VEGF-誘導細胞增殖能力的關鍵，且第1和5個殘基可以是左旋胺基酸或右旋胺基酸，其他殘基(如，7-mer上第2、3、4、6和7個殘基)則必須為左旋胺基酸。

實施例 2 本發明合成胜肽抑制 VEGF- 誘導血管新生

在此實施例中，測定本發明合成胜肽對於VEGF-誘導HUVEC細胞增生及管狀結構形成的影響。結果如表2和表3；以及第5圖和第6圖所示。

表2 本發明合成胜肽對於VEGF-誘導HUVEC增生的影響本發明合成胜肽的濃度為25 μM。數據以平均值±S.E. 表示(3次實驗進行2重複)。 * p＜0.001 vs.　未處理HUVEC；** p＜0.05 vs VEGF-處理HUVEC。

表2結果顯示，VEGF能顯著增強HUVEC增殖(相較於未處理控制組，增殖倍率為1.62倍，P＜0.001)；以及，添加本發明合成胜肽(即，7-mer和/或其類似物)能抑制VEGF-誘導細胞增殖，相較之下， 7-mer DS則沒有明顯的抑制效果。

在血管新生過程中，內皮細胞會形成毛細管樣結構；因此，是否形成管狀結構成為一有效用以評估一藥劑是否具有抗血管新生效果的指標。如第5圖所示，相較於未處理的HUVEC(UT)，以VEGF處理HUVEC 6小時，可觀察到大量管狀樣網絡形成；以及當添加本發明7-mer胜肽時，能夠抑制VEGF-誘導管狀結構形成。本發明合成胜肽對於VEGF-誘導管狀結構形成的影響結果，摘要於表3。

表3 本發明合成胜肽對於VEGF-誘導管狀結構形成的影響本發明合成胜肽的濃度為25 nM。以影像分析軟體定量管狀長度的平均值。數據以平均值±S.E. 表示(4個獨立試驗)。 * p＜0.001 vs.　未處理HUVEC；** p＜0.05 vs. VEGF-處理HUVEC。

與表2所示結果相似，VEGF能顯著促進管狀結構生成；以及添加本發明合成胜肽(即，7-mer和/或其類似物)能夠抑制VEGF-誘導管狀結構形成，相較之下，任一比較胜肽7-mer DS則沒有明顯的抑制效果。

為了測定7-mer抗血管新生活性是否和細胞凋亡相關，以annexin V-結合FITC染色定量細胞凋亡。結果顯示以7-mer胜肽處理16小時，能夠增加HUVEC凋亡的百分率，其從4.2 ± 1.66 % (UT; 未處理)增加至32.4 ± 3.8 % (第6圖)。對照組則是以一6-mer胜肽(序列編號：22)，其係刪除7-mer (序列編號：2)胜肽C端上的絲胺酸(S)而成來處理細胞，此對照胜肽並不會造成細胞凋亡。

綜上所述，由抑制VEGF-誘導毛細管樣管狀結構生成以及誘導內皮細胞凋亡等數據顯示，本發明的合成胜肽具有抗血管增生的活性。再者，7-mer 胜肽序胜肽序列上的白胺酸(L)、酪胺酸(Y)、精胺酸(R)和絲胺酸(S)殘基必須保留原天然形式，否則當該些胺基酸從左旋胺基酸分別被取代為右旋胺基酸時，本發明合成胜肽將失去抗血管增生的活性。

實施例 3 本發明合成胜肽能抑制體外微血管出芽以及體內 VEGF- 誘導角膜血管新生

以體外微血管出芽試驗和體內VEGF-誘導角膜血管新生試驗，研究本發明合成胜肽的抗血管增生效果。本試驗係依據前述材料及方法所述的步驟進行，結果如第7圖和第8圖所示。

體外微血管出芽試驗結果如第7圖的照片所示。單獨施用beta-FGF(PC；陽性對照組)造成動脈環周圍微血管出芽現象顯著；而添加本發明7-mer胜肽 (50 µM)能抑制微血管出芽現象，所述7-mer胜肽包含 7-mer DD、7-mer DV、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer (V→L)和7-mer QK。此實施例的結果與實施例2所示的結果相符，包括7-mer DS在內的其他胜肽則對於大鼠主動脈環周圍的出芽現象並無影響。所述7-mer DY、7-mer DR2和7-mer DS的胜肽序列分別是本發明7-mer 胜肽(序列編號：2)的酪胺酸(Y)、絲胺酸(S)和第一精胺酸(R)分別被取代為右旋胺基酸。

體內VEGF-誘導角膜血管新生的結果，如第8圖所示。在此體內角膜分析試驗中，VEGF (200奈克)能顯著誘導C57BL/6小鼠角膜血管新生。然而，經本發明7-mer胜肽(2.5微克)處理能完全破壞 VEGF-誘導血管新生。

實施例 4 本發明合成胜肽能抑制體內子宮肉瘤生長

在此實施例中，測定本發明實施例1合成胜肽對於子宮肉瘤的影響，此已被提出與血管內皮生長因子(VEGF)的作用相關。將人類子宮肉瘤細胞(MES-SA/Dx5)植入裸鼠中，誘導腫瘤生長，當腫瘤體積到達 80 mm³ 時，再以載體或7-mer胜肽(10毫克/公斤)處理，每兩天一次，試驗期間為10天。結果如第9圖所示。

相較於接受DMSO載體處理的動物而言，經本發明7-mer 胜肽處理的動物，其腫瘤尺寸明顯縮小(7-mer組：125 ± 15.4 vs.載體組：327 ± 64.2 mm³ ；第9圖)。再者，以6-mer對照胜肽 (序列為：DLYRVR；序列編號：22)處理的動物，其腫瘤相對尺寸及各動物的體重均未改變。此實施例的結果證實，本發明7-mer 合成胜肽確實可在活體內抑制組織肉瘤的生長。

實施例 5 本發明合成胜肽能抑制體內肺癌轉移

癌轉移是癌症主要死亡原因。本實施例主要是探討本發明合成胜肽對於癌細胞轉移的效果。將B16-F10細胞注入至小鼠尾靜脈，接著以腹膜內注射合成胜肽 (7-mer或7-mer DD，10毫克/公斤)，每二天一次。完成各實驗步驟後，摘除小鼠肺部，以肉眼觀察並計數肺部細胞群落數，結果如第10圖所示。

如第10圖所示，7-mer和7-mer DD能減少肺部表面形成的細胞群落數，而經載體處理的小鼠並不具有類似的效果。其他合成胜肽(10毫克/公斤)，即7-mer DL、7-mer DR、7-mer DV、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer (VàL)和7-mer QK的結果示於表4。

表4 本發明合成胜肽對於體肺癌細胞轉移的效果數據以平均值±S.E.表示(n=5)。* p＜0.05 vs.經載體處理小鼠

結果顯示、本發明合成胜肽、包含7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer (VàL)和7-mer QK能有效抑制體內癌細胞的轉移。

實施例 6 本發明合成胜肽可預防糖尿病動物體內血液 - 視網膜屏障 (blood-retinal barrier) 的破壞

糖尿病性視網膜病的特徵為血液-視網膜屏障破壞及神經毒性。為了評估本發明合成胜肽對於糖尿病性視網膜病可能產生的有利影響，分別以腹膜內注射方式將7-mer 胜肽、DMSO載體或對照胜肽(序列編號：22)注射至STZ誘導的糖尿病小鼠體內。透過偵測BSA螢光素之滲漏，來監控視網膜血管的異常。結果如第11圖所示。

如第11圖顯微鏡影像所示，經載體或對照胜肽處理的糖尿病小鼠，其視網膜組織(retinal parenchyma)上有數個出血區域；以本發明合成胜肽處理的小鼠則能有效阻斷出血，其中相較於載體組，以本發明合成胜肽處理後動物之血管病灶數目顯著減少 (載體組：1.8±0.54 vs. 6.7±0.66；第11圖(B))。

視網膜中FITC-BSA 的滲漏量以一完整視網膜內FITC-BSA 滲漏的螢光強度進行定量分析。結果如表5所示。

表5 本發明合成胜肽對於糖尿病小鼠血液-視網膜屏障的影響數據以平均值±SEM表示(每組3隻小鼠)。 * p＜0.05 vs.經載體處理

表5的結果證實本發明合成胜肽包含7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer (VàL)和7-mer QK能夠顯著地預防FITC-BSA滲漏。

再者，糖尿病動物視網膜中的血管病灶樹目通常會增加；相較於載體組，於糖尿病動物玻璃體中注射7-mer胜肽能降低視網膜內的血管病灶數量 (載體組：18.0±1.93 vs. 7-mer：9.2±2.15；第12圖(B))。於完整的視網膜組織之FITC-BSA螢光強度測定的結果顯示，相較於經載體處理的對照動物，以本發明7-mer胜肽能降低FITC-BSA的滲漏程度(0.43±0.07倍；第12圖(C))。

綜上，本發明合成胜肽能預防糖尿病動物的視網膜血管異常。

實施例 7 本發明合成胜肽能抑制雷射誘導脈絡膜血管新生 (CNV)

濕性老年性黃斑部病變(AMD)的特徵是視網膜血管擴增。能用以治療濕性AMD 的有效策略之一，為抑制脈絡膜血管新生(CNV)的侵襲生長。在本實施例中，探討究本發明合成胜肽預防CNV侵襲生長的效果。係依據上述材料與方法所示之雷射誘導濕性AMD小鼠方式來進行本試驗。雷射處理後10天，以眼底螢光造影評估新生成的微血管及伴隨的滲漏，結果示於第13圖。此外，依據CNV 病灶等級結果，相較於經載體處理的動物而言，經7-mer 合成胜肽處理的動物，其CNV屬於嚴重等級的分布較低。於雷射後16天，此分布頻率並未改變，由此可知7-mer合成胜肽具有抑制CNV生成的能力。

此外，本研究也探討了7-mer或7-mer DD 對於雷射誘導濕性AMD大鼠模型的效果。於雷射灼燒後14天，拍攝螢光眼底影像，結果示於第14圖。

如第14圖所示，相較於PBS載體處理的動物而言，以本發明7-mer或7-mer DD處理動物能顯著減輕雷射灼燒造成的病灶。此一結果代表本發明合成胜肽能有效治療與CNV相關的血管新生。

綜上所述，本發明各實施例的結果證實本揭示內容的短合成胜肽能用以治療和/或預防血管新生相關的疾病和/或症狀。

雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

無

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖為依據本揭示內容一實施方式所示之直線圖，其繪示由丙胺酸掃瞄(alanine scanning)所產生的7-mer類似物對於VEGF-誘導RPMI8226細胞增殖的影響，共進行三次分別獨立的試驗，所得到數據以平均值±標準差(mean±S.D.)表示；第2圖為依據本揭示內容一實施方式所示之直線圖，其繪示藉由特定位置換所產生的7-mer類似物對於VEGF-誘導RPMI8226細胞增殖的影響，共進行三次分別獨立的試驗，所得到數據以平均值±標準差表示；第3圖為為依據本揭示內容一實施方式所示之直線圖，其繪示藉由右旋(D-form)胺基酸置換所產生的7-mer類似物對於VEGF-誘導RPMI8226細胞增殖的影響，共進行三次分別獨立的試驗，所得到數據以平均值±標準差表示；第4圖為依據本揭示內容一實施方式所示之7-mer、7-mer DD和7-mer DV對於VEGF-誘導RPMI8226細胞增殖之劑量依賴性的影響，共進行三次分別獨立的試驗，所得到數據以平均值±標準差表示；第5圖為依據本發明一實施方式所示之7-mer胜肽對於內皮細胞於基質膠上形成毛細管樣之管狀結構的照片；第6圖為依據本發明一實施方式所示，7-mer胜肽對於誘導人臍帶靜脈血管內皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)凋亡的影響；第7圖為依據本發明一實施方式所示之大鼠主動脈環的照片，以顯示本發明合成胜肽對於VEGF-誘導微血管出芽生長之影響；第8圖為依據本發明一實施方式所示之照片，以顯示7-mer胜肽對於VEGF-誘導角膜血管新生的影響；第9圖為依據本發明一實施方式所示，7-mer對於異種移植人類子宮肉瘤的影響；第10圖為依據本發明一實施方式所示之照片，以顯示7-mer和7-merDD胜肽對於B16-F10黑色素瘤轉移之影響；第11圖為依據本發明一實施方式所示，7-mer胜肽對於糖尿病小鼠視網膜中血管滲漏的影響，其中(A)圖為螢光染色照片，以顯示施用載體、對照胜肽或7-mer胜肽處理糖尿病小鼠視網膜的效果，圖中箭頭標示處為小鼠視網膜血管病灶處，且以FITC-BSA堆積作為出血指標；(B)圖為小鼠視網膜出血區域定量結果之直條圖；第12圖為依據本發明一實施方式所示，7-mer胜肽對於糖尿病大鼠視網膜中血管滲漏的影響，其中(A)圖為螢光染色照片，以顯示施用載體、對照胜肽或7-mer處理糖尿病視網膜的效果，圖中箭頭標示處為視網膜血管病灶處，且以FITC-BSA堆積作為出血指標；(B)圖為視網膜出血區域定量結果之直條圖；以及(C)圖為視網膜全區中，FITC-BSA堆積的定量結果；第13圖為依據本發明一實施方式所示7-mer胜肽對於視網膜雷射損傷的影響，其中(A)為眼底螢光血管造影照片，其顯示7-mer胜肽的影響；以及(B)為(A)圖定量結果的直條圖，由視網膜專家評估視網膜出血區域的量，並以不同的螢光滲漏等級表示之，第0級：無高度螢光、第1級：有高度螢光且未發生滲漏、第2a級：有高度螢光且發生晚期滲漏、第2b級：明亮的高度螢光且在未處理區域外有晚期滲漏；以及第14圖為依據本發明一實施方式所示本發明合成胜肽對於大鼠CNV病灶處的影響，其中(A)為經載體、7-mer或7-mer DD處理的照片，箭頭標示處為雷射點；以及(B)為第10A圖定量分析之直條圖。

根據慣常的作業方式，圖中各種特徵與元件並未依比例繪製，其繪製方式是為了以最佳的方式呈現與本發明相關的具體特徵與元件。此外，在不同圖式間，以相同或相似的元件符號來指稱相似的元件/部件。

＜110＞財團法人臺灣基督長老教會馬偕紀念社會事業基金會馬偕紀念醫院＜120＞用以治療血管新生相關疾病和/或症狀的短合成胜肽＜130＞ P2868-1-TW ＜160＞ 22 ＜170＞ BiSSAP 1.3 ＜210＞ 1 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 1 ＜223＞ Xaa is Ala, Asp, Asn, Leu, Phe or Val ＜220＞＜223＞ X1X2X3X4X5X6X7 ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 2 ＜223＞ Xaa is Ala, Ile, Leu or Val ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 3 ＜223＞ Xaa is Phe, Tyr or Trp ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 4 ＜223＞ Xaa is Arg or Lys ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 5 ＜223＞ Xaa is Val, Met, Ile, Leu or Gln ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 6 ＜223＞ Xaa is Arg, Gln, Lys or Pro ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 7 ＜223＞ Xaa is Ser or Thr ＜400＞ 1 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 ＜210＞ 2 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer ＜400＞ 2 Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 3 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Da ＜400＞ 3 Ala Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 4 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer La ＜400＞ 4 Asp Ala Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 5 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Ya ＜400＞ 5 Asp Leu Ala Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 6 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Ra ＜400＞ 6 Asp Leu Tyr Ala Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 7 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Va ＜400＞ 7 Asp Leu Tyr Arg Ala Arg Ser 1 5 ＜210＞ 8 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer R2a ＜400＞ 8 Asp Leu Tyr Arg Val Ala Ser 1 5 ＜210＞ 9 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Sa ＜400＞ 9 Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ala 1 5 ＜210＞ 10 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer MK ＜400＞ 10 Asp Leu Tyr Arg Met Lys Ser 1 5 ＜210＞ 11 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer KP ＜400＞ 11 Asp Leu Tyr Lys Val Pro Ser 1 5 ＜210＞ 12 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer WI ＜400＞ 12 Asp Leu Trp Arg Ile Arg Ser 1 5 ＜210＞ 13 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer IP ＜400＞ 13 Asp Ile Tyr Arg Val Pro Ser 1 5 ＜210＞ 14 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer NV ＜400＞ 14 Asn Val Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 15 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer QK ＜400＞ 15 Asp Leu Tyr Arg Gln Lys Ser 1 5 ＜210＞ 16 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer VFT ＜400＞ 16 Asp Val Phe Arg Val Arg Thr 1 5 ＜210＞ 17 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer VL ＜400＞ 17 Asp Leu Tyr Arg Leu Arg Ser 1 5 ＜210＞ 18 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer R2Q ＜400＞ 18 Asp Leu Tyr Arg Val Gln Ser 1 5 ＜210＞ 19 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer DV ＜400＞ 19 Val Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 20 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer DF ＜400＞ 20 Phe Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 21 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer DL ＜400＞ 21 Leu Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 22 ＜211＞ 6 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 6-mer ＜400＞ 22 Asp Leu Tyr Arg Val Arg 1 5

Claims

一種由7個連續胺基酸殘基所組成之合成胜肽，其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、白胺酸、苯丙胺酸或纈胺酸； X₂ 是是丙胺酸、異白胺酸、白胺酸或纈胺酸； X₃ 是苯丙胺酸、酪胺酸或色胺酸； X₄ 是精胺酸或賴胺酸； X₅ 是纈胺酸、甲硫胺酸、異白胺酸、白胺酸或麩醯胺酸； X₆ 是精胺酸、麩醯胺酸、賴胺酸或脯胺酸； X₇ 是絲胺酸或酥胺酸；以及 X2、X3、X4、X6和X7分別為左旋胺基酸。
如請求項1所述之合成胜肽，其中X₁ 和X₅ 中至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸。
如請求項2所述之合成胜肽，其中該合成胜肽具有序列編號：2之胺基酸序列。
如請求項3所述之合成胜肽，其中X₁ 是右旋胺基酸。
如請求項3所述之合成胜肽，其中X₅ 是右旋胺基酸。
如請求項1所述之合成胜肽，其中該合成胜肽具有序列編號：3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。
一種合成胜肽的用途，其係用以製造治療一血管新生相關症狀或疾病的醫藥品，其中該合成胜肽由7個連續胺基酸殘基所組成其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、白胺酸、苯丙胺酸或纈胺酸； X₂ 是是丙胺酸、異白胺酸、白胺酸或纈胺酸； X₃ 是苯丙胺酸、酪胺酸或色胺酸； X₄ 是精胺酸或賴胺酸； X₅ 是纈胺酸、甲硫胺酸、異白胺酸、白胺酸或麩醯胺酸； X₆ 是精胺酸、麩醯胺酸、賴胺酸或脯胺酸； X₇ 是絲胺酸或酥胺酸；以及 X₂ 、X₃ 、X₄ 、X₆ 和X₇ 分別為左旋胺基酸。
如請求項7所述之用途，其中X₁ 和X₅ 至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸。
如請求項7所述之用途，其中該合成胜肽具有序列編號：2之胺基酸序列。
如請求項9所述之用途，其中X₁ 是右旋胺基酸。
如請求項9所述之用途，其中X₅ 是右旋胺基酸。
如請求項7所述之用途，其中該合成胜肽具有序列編號：3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。
如請求項9所述之用途，其中該血管新生相關症狀或疾病是癌症、眼部疾病、血管異常、感染、心血管疾病或損傷。
如請求項13所述之用途、其中該眼部疾病是角膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病性視網膜病、早產兒視網膜病變、老年性黃斑部病變、青年性黃斑部病變、糖尿病性黃斑水腫、色素性視網膜炎、砂眼、青光眼、乾眼症、神經眼部疾病、視網膜動脈阻塞、眼色素層炎、脈絡膜炎、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、息肉狀脈絡膜血管病變、血管新生性青光眼、血管新生性黃斑部病變或雷射後併發症。
如請求項14所述之用途，其中該眼部疾病是老年性黃斑部病變。
如請求項14所述之用途，其中該眼部疾病是糖尿病性視網膜病。
如請求項13所述之用途，其中該癌症是選自於：乳癌、子宮頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、肺癌、胰臟癌、大腸癌、前列腺癌、淋巴系造血腫瘤、骨髓性白血病、甲狀腺癌、甲狀腺濾泡癌、骨髓增生不良症候群、起源於間葉細胞的腫瘤、黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、畸形癌、神經母細胞瘤、神經膠瘤、神經膠母細胞瘤、角化棘皮瘤、腎癌、間變性大細胞淋巴瘤、食道鱗狀細胞癌、肝細胞癌、濾泡樹突狀細胞癌、腸癌、肌肉侵襲性癌症、精囊瘤、上皮癌、脾癌、膀胱癌、頭頸癌、胃癌、骨癌、腦癌、視網膜癌、膽道癌、小腸癌、唾液腺癌、子宮肉瘤、睾丸癌、結締組織癌、前列腺肥大、骨髓發育不良、瓦登斯特隆巨球蛋白血症、鼻咽癌、神經內分泌癌、間皮瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、食管癌、輸卵管癌、腹膜癌、漿液性乳頭狀苗勒氏癌、惡性腹水、胃腸道基質瘤、李弗勞明症候群以及希佩爾-林道症候群所組成之群組中。
如請求項17所述之用途，其中該淋巴系造血腫瘤是白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、B細胞淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、多發性骨髓癌、何杰金淋巴瘤或非何杰金淋巴瘤。
如請求項17所述之用途，其中該骨髓性白血病是急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病。
如請求項17所述之用途，其中該起源於間葉細胞的腫瘤是纖維肉瘤或橫紋肌肉瘤。
如請求項17所述之用途，其中該癌症是轉移性癌症。
如請求項21所述之用途，其中該癌症是轉移性肺癌。
如請求項17所述之用途，其中該癌症是子宮肉瘤。
如請求項13所述之用途，其中該血管異常是選自：血管通透性、血漿滲漏、靜脈畸形、血管母細胞瘤、血管瘤、腦動靜脈畸形瘤、動脈硬化、栓塞、脈絡膜血管新生以及奧斯勒-惠勃症候群所組成之群組中。
如請求項24所述之用途，其中該血管異常是脈絡膜血管新生。
如請求項13所述之用途，其中該感染是細菌感染，病毒感染，真菌感染或原蟲感染。
如請求項13所述之用途，其中該心血管疾病是選自：動脈粥樣硬化、心肌血管新生、高黏稠度症候群、靜脈阻塞、動脈阻塞、頸動脈阻塞疾病、奧-韋-朗疾病、心肌炎、腦血管病變、二尖瓣閉鎖不全、低血壓、動脈或移植後動脈粥樣硬化、纖維化、栓塞以及血小板聚集所組成之群組中。