KR102532557B1 - Dsg2 유래 펩타이드 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 EMT 및/또는 혈관형성 모방의 저해 및 혈관신생 관련 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 Dsg2-유래 펩타이드를 제공한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물, 및 EMT 및/또는 혈관형성 모방의 저해 및 혈관신생 관련 질환의 치료 및/또는 예방에서의 본 발명의 펩타이드를 이용하는 방법을 제공한다.

Description

DSG2 유래 펩타이드
본 발명은 혈관형성 모방 (vasculogenic mimicry) 및 혈관신생 관련 질환을 저해하기 위한 펩타이드를 제공한다. 보다 상세하게는, 본 발명은 Dsg2 유래 펩타이드 및 혈관형성 모방 및 혈관신생 의존적인 질환 또는 혈관신생 관련 질환을 저해, 예방 또는 치료하기 위한 이의 용도를 제공한다.
데스모좀 (desmosome)은 상피, 심근 및 기타 조직들 간의 기본적인 세포-세포 접착 정션 (cell-cell adhesion junction) 타입 중 하나이다. 이러한 데스모좀은 데스모좀 카드헤린, 데스모콜린 (Dsc) 및 데스모글레인 (Dsg)로 지칭되는 막관통 당단백질을 함유한다. 그 각각은 조직-특이적인 발현 패턴을 보이는 구분되는 3가지 이상의 유전자 이소형으로서 만들어진다.
Dsg2는 도처에서 데스모좀을 형성하는 모든 조직들에서 발현된다. Dsg2의 세포외 도메인은 각각 약 110개의 아미노산 길이를 가진 4개의 카드헤린 반복 도메인 (EC1-4)을 포함한다. 세포외 반복 도메인 EC1은, 세포-세포 접착을 제공하는, 세포 접착 인지 (CAR) 부위를 가지고 있다. 그래서, Dsg2는 막관통 세포 부착 분자로 동정되었다. 또한, 최근 연구에 따르면, Dsg2는 세포-세포 접착 분자에 불과한 것은 아니다. Dsg2는 혈관형생, 세포자살의 신호전달을 자극하는데 참여하며, MMP의 기질이다.
Dsg2는 EMT를 조절하는데 중요한 역할을 한다. 다음과 같은 사항이 확인되었다: (1) 간세포 성장인자/산란 인자 (HGF/SF)를 이용한 EMT 촉발에서, Dsg2를 제외한 대부분의 데스모좀 접착 구성성분들이 하향 조절되는 것으로, 보인다. (2) Dsg2로 형질감염된 상피 세포는 간엽-유사 형태를 나타내고, HGF/SF 처리시 보다 우수한 이동 및 침입 능력을 나타낸다. (3) Dsg2의 EC2 도메인에 대한 항체는 HGF/SF-유발성 EMT를 시험관내에서 현저하게 차단한다. 또한, 발명자들은, Dsg2의 EC2 도메인에 대한 항체가 MCF7 인간 유방암 세포, LNCaP 인간 전립선암 세포 및 KM12 인간 대장암 세포 등의 암 세포의 침입을 저해함을 확인하였다. 임의의 특정 이론으로 결부시키고자 하는 것은 아니지만, Dsg2가 EMT를 촉진하도록 세포에서 기능할 수 있음을 제안한다. US 20040229811에는 포유류에서 dsc- 및/또는 dsg-발현 세포의 접착 저해에 의한 암 치료 방법이 교시되어 있다. WO 99/57149에는, Dsg2의 EC2 도메인으로부터 유래된 세포 접착 인지 (CAR) 부위가 암 치료 및/또는 전이 저해를 위한 조절 물질로서 사용될 수 있는 것으로, 제시되어 있다. US 20120276082에는 Dsg2의 EC2 도메인의 기능을 조절하는 Dsg2의 길항제가 개시되어 있다.
Dsg2가 기저 세포 암종 (BCC), 편평 세포암 (SCC), 위암, 흑색종, 전이성 전립선암 및 방광암을 포함하는 수종의 상피-유래 악성에서 높은 수준으로 발현되는, 암과 같은 인간 질환에 Dsg2가 관여하는 것으로, 시사된 바 있다.
본 발명은 혈관형성 모방성을 가진 EMT를 저해하고, 혈관신생-관련 질환을 치료 및/또는 예방하는, Dsg2-유래 펩타이드의 개발을 토대로 한다. 본 발명의 펩타이드는 Dsg2의 500-604번 위치의 아미노산 잔기 (IEPVQTICHDA EYVNVTAEDL DGHPNSGPFS FSVIDKPPGMAEKWKIARQESTSVLLQQSEKKLGRSEIQFLISDNQGFSCPEKQVLTLTVCECLHGSGCREAQH (서열번호 136))로부터 유래될 수 있으며, 이는 추가로 변형될 수 있다.
본 발명은 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 합성 펩타이드, 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 제공한다:
식 (I): MX1EX2WX3IX4R (서열번호 1)
상기 식에서,
X1은 A, T 또는 S이고;
X2는 K, R 또는 H이고;
X3는 K, R, N, H 또는 Q이고; 및
X4는 A, V, I, G, L 또는 P이다.
일부 구현예에서, 식 (I)에서, X1은 A 또는 T이고; X2는 K 또는 R이고; X3는 K, R 또는 N이고; X4는 A, V 또는 I이다. 일부 추가적인 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 서열번호 2 내지 서열번호 37 중 임의의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 변이체 펩타이드는 서열번호 1의 서열과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%의 아미노산 서열 동일성을 가진다. 일부 구현예에서, 본 발명의 변이체 펩타이드는 하나 이상의 치환, 결손 또는 삽입을 가진다. 추가적인 구현예에서, 본 발명의 변이체 펩타이드는 보존적인 변화 (conservative change)를 가진다.
일부 구현예에서, 본 발명의 변이체 펩타이드는 서열번호 45 내지 서열번호 63으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 변형된 펩타이드는, 비-제한적으로, 하나 이상의 비-천연 또는 변형된 아미노산, 사이클릭 펩타이드 및 합성 폴리아미노산 폴리머 (예, 본 발명의 펩타이드의 N-, C- 또는 N- 및 C-말단에 연결된, 폴리라이신 (polyK), 폴리 L-아스파르트산 (polyD), 폴리-L-아르기닌 (polyR), 폴리 L-글루탐산 (polyE))를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 변형된 펩타이드는 서열번호 64 내지 서열번호 67 및 서열번호 68 내지 서열번호 125로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 본 발명은 서열번호 126 내지 서열번호 135로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 합성 펩타이드 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 제공한다. 일 구현예에서, 변형된 펩타이드는 SEQ132: VSTSEQRAIKWKEAM (서열번호 136)의 아미노산 서열을 포함하는, SEQ6의 리버스 서열 (reverse sequence)이다.
또한, 본 발명은 본 발명의 펩타이드, 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 포함하는, 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 개체에게 본 발명의 펩타이드 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 EMT 및/또는 혈관형성 모방을 저해하고, 혈관신생 의존형 또는 혈관신생 관련 질환의 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은, 개체에서 EMT 및/또는 혈관형성 모방의 저해 및 혈관신생 의존형 또는 혈관신생 관련 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어, 본 발명의 펩타이드 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드의 용도를 제공한다.
도 1 (A) 및 (B)는 본 발명의 펩타이드의 EMT 분석 결과를 도시한 것이다. (A), Dsg2 세포외 도메인 aa500-604 (SEQ1)으로부터 유래된 SEQ2-SEQ11의 서열-기반의 도식적인 설계 다이아그램. (B), HGF (간세포 성장인자) 유발성 EMT (상피-간엽 이행)가 합성 펩타이드 SEQ5, SEQ6, SEQ8 및 SEQ10에 의해 저해되었다.
도 2 (A) 및 (B)는 EMT 분석에서 SEQ6 펩타이드의 결손 실험을 도시한 것이다. (A), SEQ6의 결손 합성 펩타이드 SEQ12-SEQ31을 도식적으로 나타낸 다이아그램. 펩타이드 SEQ12-SEQ31의 서열. (B), HGF (간세포 성장인자) 유발성 EMT (상피-간엽 이행)가 합성 펩타이드 SEQ12-SEQ31에 의해 저해되었다. 또한, SEQ15 및 SEQ17도 SEQ6와 마찬가지로 우수한 저해력을 나타낸다.
도 3 (A) 및 (B)는 U87 세포의 혈관 형성을 차단하는 능력에 대한 SEQ17 트립토판 잔기 (W, Dsg2 아미노산 위치 544)의 기여를 확인하기 위한 U87 세포를 이용한 혈관형성 모방 실험을 나타낸 것이다. SEQ32-SEQ38은 혈관형성 모방을 차단할 수 있다. (A), 교모세포종 (GBM)는 매우 공격적이며, 기본적으로 불치성이다. 이의 악성은 왕성한 미세혈관 증식이 특징적이다. 최근 증거에 따르면, 종양 세포가 내피 세포 혈관신생과 무관한 대안적인 미세혈관 순환 (microvascular circulation)인 채혈 혈관형성 모방 (VM)을 유발하는 능력을 나타내는 것으로, 확인된 바 있다. 교모세포종 세포주 (U-87)를 이용해, 혈관형성 모방 실험에서 SEQ17 트립토판 잔기 (W, Dsg2 아미노산 위치 544)의 마트리겔 촉발성 혈관 구조 차단에 의한 기여를 확인한다. 혈관으로 가득 찬 PBS 대조군과 비교해, 펩타이드 SEQ17 및 SEQ32-SEQ38은 U-87 혈관 네트워크 형성을 차단하는데 강력한 효과를 나타낸다. (B), 각 처리 군에서 랜덤 선택한 필드를 사용해 혈관을 계수하여 정량한다 (혈관의 평균 수 ± SD).
도 4 (A) - (C)는 본 발명의 펩타이드의 HUVEC 혈관 형성 분석 결과를 나타낸 것이다. (A), 마트리겔에서 배양한 HUVEC 세포에서, 합성 펩타이드 SEQ17, SEQ78 및 SEQ97이 혈관신생을 저해하는 것으로 확인된다. (B), MR9 및 MR9 유래의 펩타이드 3종 (MR9; MR9 DF: 비-천연 아미노산 펩타이드, 아미노산 잔기 9개는 D 형태임; CMR9C: 사이클릭 펩타이드, N 및 C 말단 시스테인의 고리화; CMR9C DF: 비-천연 아미노산을 함유한 사이클릭 펩타이드)을 HUVEC 세포의 마트리겔-유도성 혈관구조에 처리한다. 이들 펩타이드는 40% - 80%의 잠재적인 혈관 구조 분해력을 나타낼 수 있다. (C), SEQ6의 리버스 서열인 SEQ132 펩타이드는 HUVEC 혈관 형성 분석에서 HUVEC 혈관 구조를 저해하는데 강력한 효과를 나타낸다. (D), MR9D6 및 MR9D6로부터 유래된 펩타이드 2종 (MR9D6; MR9D6 DF: 비-천연 아미노산 펩타이드, 아미노산 잔기 15개는 D 형태임; CMR9D6C DF: 사이클릭 펩타이드, N 및 C 말단 시스테인의 고리화, 아미노산 모두 비-천연 D-형태임)을 HUVEC 세포의 마트리겔-유도성 혈관 구조에 처리한다. PBS에 용해된 펩타이드는, PBS-처리 대조군과 비교해, 혈관 구조의 체적 95%를 파괴하는데 매우 효과적인 능력을 나타낼 수 있다.
도 5 (A) 및 (B)는 동물 모델 실험 (랫 맥락막 신혈관형성 모델)을 나타낸 것이다. (A), PBS-처리 대조군, Eylea (200 ㎍/5 ㎕) 및 SEQ97 (500 ㎍/5 ㎕)의 플루오레세인 혈관 촬영 사진. (B), Eylea 및 SEQ97은 랫의 눈에서 맥락막 신혈관형성을 현저하게 저해한다.
후술한 상세한 설명에서, 다수의 용어들이 사용되며, 하기한 정의는 청구 내용을 쉽게 이해하기 위해 제공된다. 본원에서 명확하게 정의되지 않은 용어들은 명백하고 일반적인 의미로 사용된다.
달리 언급되지 않은 한, 부정 관사 (a 또는 an)는 "하나 이상"을 의미한다.
본원 전체에서, 용어 "약"은 기본적인 에러 편차를 포함하는 것으로 사용된다.
본원에서, 본 발명의 내용에 대해 사용되는 "합성 펩타이드"라는 표현은 공지된 아미노산 화학 반응에 의해 또는 전술한 바와 같이 생물학적 물질의 단리 및 정제에 의해 제조되는 펩타이드를 지칭한다.
본원에서, 용어 "천연 (naturally-occurring)"은 대상을 자연에서 발견할 수 있다는 것을 의미한다. 예를 들어, 소스에 존재하는 단백질은 자연에 있는 소스에서 단리될 수 있다.
본원에서, 용어 "투여한다", "투여하는" 또는 "투여하기 위해"는, 생체내 투여 뿐만 아니라 생체외 조직으로의 직접 투여 등의, 약제의 제공 또는 공급을 의미한다.
용어 "아미노산 잔기" 또는 "아미노산" 또는 "잔기"는 상호 호환적으로 사용되며, 비-제한적인 예로, 천연 아미노산 및 천연 아미노산과 비슷한 방식으로 기능할 수 있는 천연 아미노산의 공지된 유사체를 포함하여, 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드에 통합되는 아미노산을 지칭한다. 본원에서 아미노산을 지칭하는 이들 약어들은 통례적으로 사용되는 약어이다: A=Ala=알라닌; R=Arg=아르기닌; N=Asn=아스파라긴; D=Asp=아스파르트산; C=Cys=시스테인; Q=Gln=글루타민; E=Glu=글루탐산; G=Gly=글리신; H=His=히스티딘; I=Ile=이소루신; L=Leu=루신; K=Lys=라이신; M=Met=메티오닌; F=Phe=페닐알라닌; P=Pro=프롤린; S=Ser=세린; T=Thr=트레오닌; W=Trp=트립토판; Y=Tyr=티로신; V=Val=발린. 아미노산은 L- 또는 D-아미노산일 수 있다. 아미노산은, 펩타이드의 반감기를 늘이거나 또는 펩타이드의 효능을 높이거나, 또는 펩타이드의 생체이용성을 높이기 위해 변형된, 합성 아미노산으로 치환될 수 있다. 서로에 대해 보존적인 치환인 아미노산 그룹은 다음과 같다.
알라닌 (A), 세린 (S), 트레오닌 (T);
아스파르트산 (D), 글루탐산 (E);
아스파라긴 (N), 글루타민 (Q);
아르기닌 (R), 라이신 (K);
이소루신 (I), 루신 (L), 메티오닌 (M), 발린 (V); 및
페닐알라닌 (F), 티로신 (Y), 트립토판 (W).
본원에서, 용어 "펩타이드"는 2 이상의 아미노산이 서로 화학적으로 연결된 분자를 지칭한다. 펩타이드는 폴리펩타이드, 단백질 또는 펩타이드모방체를 지칭할 수 있다. 본 발명의 펩타이드는, 특별한 특성을 부여하기 위해, D-아미노산, D-아미노산과 L-아미노산의 조합, 및 다양한 "디자이너" 아미노산 (예, beta-메틸 아미노산, C-alpha-메틸 아미노산, 및 N-alpha-메틸 아미노산 등)을 포함할 수 있다. 합성 아미노산은 라이신의 경우 오르니틴이고, 루신 또는 이소루신의 경우 노르루신이다. 또한, 펩타이드는 새로운 특성을 가진 펩타이드를 제조하기 위해, 에스테르 결합과 같은 펩티드모방 결합을 가질 수 있다.
본원에서, 용어 "사이클릭 펩타이드 모방체" 또는 "사이클릭 폴리펩타이드 모방체"는, 루프, 브릿지를 형성하는 모이어티 및/또는 내부 연결 등의 하나 이상의 사이클릭 특징을 구조의 일부로서 가진, 펩타이드 모방체를 지칭한다.
본원에서, 용어 "약제학적으로 허용가능한"은, 화합물 및 조성물이, 합리적인 효과/위험 비율에 상응하여 독성, 자극 및/또는 알레르기 반응과 같은 과도하게 부적절한 부작용없이, 인간 및/또는 동물에 투여하는데 적합하다는 것을 의미한다.
본원에서, 용어 "개체" 및 "환자"는 상호 호환적으로 사용되며, 온혈 동물, 특히 포유류를 지칭하는 것으로 이해될 것이다. 이 용어의 범위 및 의미에 부합되는 동물에 대한 비-제한적인 예로는 기니아피그, 개, 고양이, 랫, 마우스, 말, 염소, 소, 양, 동물원 동물, 인간을 제외한 영장류 및 인간 등이 있다.
본원에서, 용어 "유효량"은 본 발명의 컨셉에 따라 사용할 경우 합리적인 효과/위험 비율에 상응하여 과도한 유해한 부작용 (예, 독성, 자극 및 알레르기 반응) 없이, 검출가능한 치료학적 효과를 발취하기에 충분한 펩타이드 화합물의 양을 의미한다.
본원에서, 용어 "치료학적 유효량"은 포유류 또는 기타 개체에게 질환을 치료하기 위해 투여하였을 때 질환에 대한 치료를 달성하기에 충분한 대상 Dsg2 펩타이드의 양을 의미한다.
본원에서, 용어 "치료", "치료하는" 등은 포유류, 특히 인간에서 모든 질환에 대한 처치를 포괄하며, (a) 질환의 소인을 가질 수 있지만 아직 발병한 것으로 진단되지 않은 개체에서 질병의 발병 예방; (b) 질환의 저해, 즉 이의 진행 중지; 및 (c) 질환 완화, 즉 질환의 경감 유발을 포함한다.
일 측면에서, 본 발명은 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 합성 펩타이드, 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 제공한다.
식 (I): MX1EX2WX3IX4R (서열번호 1)
상기 식에서,
X1은 A, T 또는 S이고;
X2는 K, R 또는 H이고;
X3는 K, R, N, H 또는 Q이고; 및
X4는 A, V, I, G, L 또는 P이다.
일부 구현예에서, 식 (I)에서, X1은 A 또는 T이고; X2는 K 또는 R이고; X3는 K, R 또는 N이고; X4는 A, V 또는 I이다. 일부 추가적인 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다:
SEQ17 MAEKWKIAR (서열번호 2)
SEQ39 MAEKWKI V R (서열번호 3)
SEQ40 MAEKWKI I R (서열번호 4)
SEQ41 MAEKWRIAR (서열번호 5)
SEQ42 MAEKW R I V R (서열번호 6)
SEQ43 MAEKWRIIR (서열번호 7)
SEQ44 MAEKWNIAR (서열번호 8)
SEQ45 MAEKW N I V R (서열번호 9)
SEQ46 MAEKWNIIR (서열번호 10)
SEQ47 MAERWKIAR (서열번호 11)
SEQ48 MAE R WKI V R (서열번호 12)
SEQ49 MAERWKIIR (서열번호 13)
SEQ50 MAERWRIAR (서열번호 14)
SEQ51 MAERWRIVR (서열번호 15)
SEQ52 MAERWRIIR (서열번호 16)
SEQ53 MAERWNIAR (서열번호 17)
SEQ54 MAERWNIVR (서열번호 18)
SEQ55 MAERWNIIR (서열번호 19)
SEQ56 MTEKWKIAR (서열번호 20)
SEQ57 MTEKWKIVR (서열번호 21)
SEQ58 M T EKWKI I R (서열번호 22)
SEQ59 MTEKWRIAR (서열번호 23)
SEQ60 MTEKWRIVR (서열번호 24)
SEQ61 MTEKWRIIR (서열번호 25)
SEQ62 MTEKWNIAR (서열번호 26)
SEQ63 MTEKWNIVR (서열번호 27)
SEQ64 MTEKWNIIR (서열번호 28)
SEQ65 MTERWKIAR (서열번호 29)
SEQ66 MTERWKIVR (서열번호 30)
SEQ67 MTERWKIIR (서열번호 31)
SEQ68 MTERWRIAR (서열번호 32)
SEQ69 MTERWRIVR (서열번호 33)
SEQ70 MTERWRIIR (서열번호 34)
SEQ71 MTERWNIAR (서열번호 35)
SEQ72 MTERWNIVR (서열번호 36)
SEQ73 MTERWNIIR (서열번호 37)
일부 구현예에서, 변이체 펩타이드는, 아미노산 잔기들 중 임의의 잔기가 펩타이드의 대응되는 잔기로 바뀔 수 있지만, EMT, 혈관형성 모방 또는 혈관신생-관련 질환에서 저해 활성을 유지하는 펩타이드를 여전히 코딩할 수 있다. 일 구현예에서, 펩타이드의 변이체는 서열번호 1의 서열과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%의 아미노산 서열 동일성을 가진다.
"아미노산 서열 동일성 (%)"는 2종의 서열을 정렬하였을 때, 기준 (모) 폴리펩타이드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 아미노산 잔기의 %로서 정의된다. 아미노산 동일성 %를 결정하기 위해, 서열을 정렬하고, 필요한 경우, 최대 서열 동일성 %를 달성하기 위해 갭을 도입한다. 동일성 %를 결정하기 위한 아미노산 서열 정렬 방법은 당해 기술 분야의 당업자들에게 잘 알려져 있다. BLAST, BLAST2, ALIGN2 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어 등의 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용해 펩타이드 서열들을 정렬시킨다. 당해 기술 분야의 당업자는, 비교 중인 서열의 전장에서 최상의 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여, 정렬을 결정하기 위한 적절한 파라미터를 정할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 변이체는, 서열내 특정 위치의 잔기가 다른 아미노산으로 치환되고, 모 펩타이드/폴리펩타이드의 2개의 잔기 사이에 추가적인 잔기 또는 잔기들의 삽입 가능성 뿐만 아니라 모 서열에서 하나 이상의 잔기의 결손 가능성 또는 모 서열에 하나 이상의 잔기의 부가 가능성을 추가로 포함하는, 변이체를 포함한다. 임의의 아미노산 치환, 삽입 또는 결손은 본 발명에 포함된다. 특정 경우에, 치환은 본원에 기술된 바와 같은 보존적인 치환이다.
보존적인 치환은 일반적으로 제조되는 단백질의 구조 및 기능에 거의 변화를 유발하지 않는다. 예를 들어, 본 발명의 펩타이드는 하나 이상의 다음과 같은 보존적인 아미노산 치환을 포함한다: 알라닌, 발린, 루신 및 이소루신과 같은 지방족 아미노산의, 다른 지방족 아미노산으로의 치환; 세린의 트레오닌으로의 치환; 트레오닌의 세린으로의 치환; 아스파르트산 및 글루탐산 등의 산성 잔기의 다른 산성 잔기로의 치환; 아스파라긴 및 글루타민 등의 아미드 기를 가진 잔기의 아미드 기를 가진 다른 잔기로의 치환; 라이신 및 아르기닌 등의 염기성 잔기의 다른 염기성 잔기로의 치환; 및 페닐알라닌 및 티로신 등의 방향족 잔기의 다른 방향족 잔기로의 치환.
일부 추가적인 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 변이체 (아미노산 치환)는 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
SEQ32 AAEKWKIAR (서열번호 38)
SEQ33 MAAKWKIAR (서열번호 39)
SEQ34 MAEAWKIAR (서열번호 40)
SEQ35 MAEKAKIAR (서열번호 41)
SEQ36 MAEKWAIAR (서열번호 42)
SEQ37 MAEKWKAAR (서열번호 43)
SEQ38 MAEKWKIAA (서열번호 44)
일부 추가적인 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 변이체 (아미노산 결손)는 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다:
SEQ12 MAEKWKIARQESTS (서열번호 45);
SEQ13 MAEKWKIARQEST (서열번호 46);
SEQ14 MAEKWKIARQES (서열번호 47);
SEQ15 MAEKWKIARQE (서열번호 48);
SEQ16 MAEKWKIARQ (서열번호 49);
SEQ18 MAEKWKIA (서열번호 50);
SEQ19 MAEKWKI (서열번호 51);
SEQ20 AEKWKIARQESTSV (서열번호 52);
SEQ21 EKWKIARQESTSV (서열번호 53);
SEQ22 KWKIARQESTSV (서열번호 54);
SEQ23 WKIARQESTSV (서열번호 55);
SEQ24 KIARQESTSV (서열번호 56);
SEQ25 IARQESTSV (서열번호 57);
SEQ26 ARQESTSV (서열번호 58);
SEQ27 RQESTSV (서열번호 59);
SEQ28 AEKWKIARQESTS (서열번호 60);
SEQ29 EKWKIARQEST (서열번호 61);
SEQ30 KWKIARQES (서열번호 62); 및
SEQ31 WKIARQE (서열번호 63).
일부 구현예에서, 본 발명의 변형된 펩타이드는 변형을 위해 하나 이상의 비-천연 아미노산을 포함할 수 있다. "비-천연 아미노산 잔기"는, 폴리펩타이드 체인에서 인접한 아미노산 잔기(들)과 공유적으로 결합될 수 있는, 천연 아미노산 잔기 이외의, 잔기를 의미한다. 비-천연 아미노산으로는, 비-제한적으로, 호모-라이신, 호모-아르기닌, 호모-세린, 아제틴카르복시산, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, beta-알라닌, 아미노프로피온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로익산, 2-아미노헵타노익산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피넬산, 터셔리-부틸글리신, 2,4-다이아미노이소부티르산, 데스모신, 2,2'-다이아미노피멜산, 2,3-다이아미노프로피온산, N-에틸글리신, N-에틸아스파라긴, 호모프롤린, 하이드록시라이신, allo-하이드록시라이신, 3-하이드록시프롤린, 4-하이드록시프롤린, 이소데스모신, allo-이소루신, N-메틸알라닌, N-메틸글리신, N-메틸이소루신, N-메틸펜틸글리신, N-메틸발린, 나프트알라닌, 노르발린, 노르루신, 오르니틴, 시트룰린, 펜틸글리신, 피페콜릭산 (pipecolic acid) 및 티오프롤린 등이 있다. 변형된 아미노산은, 이의 N-말단 아미노기 또는 이의 측쇄 기에서 가역적으로 또는 비-가역적으로 화학적으로 차단되거나 또는 변형된, 천연 및 비-천연 아미노산, 예를 들어, N-메틸화된 D 및 L 아미노산, 다른 관능기로 화학적으로 변형된 측쇄 관능기를 포함한다. 예를 들어, 변형된 아미노산은 메티오닌 설폭사이드; 메티오닌 설폰; 아스파르트산-(beta-메틸 에스테르), 아스파르트산의 변형된 아미노산; N-에틸글리신, 글리신의 변형된 아미노산; 또는 알라닌 카르복사미드 및 알라닌의 변형된 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 변형된 펩타이드는 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다:
MR9 DF: MAEKWKIAR (서열번호 64);
CMR9C DF: CMAEKWKIARC (서열번호 65);
MR9D6 DF: MAEKWKIARDDDDDD (서열번호 66); 및
CMR9D6C DF: CMAEKWKIARDDDDDDC (서열번호 67).
일 구현예에서, 변형된 펩타이드는 사이클릭 형태이다. 변형은 아미노산의 가교를 기반으로 사이클릭 구조를 형성한다. 단백질에서 사이클릭 영역은, 입체구조 유연성 (conformational flexibility)과 회전 자유도를 낮추는 뻣뻣한 도메인을 포함하여, 타겟 단백질에 대해 매우 높은 친화성 결합을 유도한다. 폴피펩타이드를 고리화하기 위한 많은 방법들을 당해 기술 분야의 당업자들이 이용할 수 있으며, 본원에 원용에 의해 포함된다. 전형적으로, 폴리펩타이드의 카르복시 또는 아미노 말단 및/또는 특정 아미노산 측쇄의 화학 반응성을 이용해 폴리펩타이드의 2 부위를 가교하여 사이클릭 분자를 제조한다. 한가지 방법으로, 시스테인 잔기 2개의 티올 기들을 다이브로모크실렌과 반응시켜 가교한다.
일부 구현예에서, 사이클 형태의 본 발명의 변형된 펩타이드는 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다:
CMR9C DF: CMAEKWKIARC (서열번호 65); 및
CMR9D6C DF: CMAEKWKIARDDDDDDC (서열번호 67).
다른 예시적인 방법에서, 측쇄 아미노 기와 말단 아미노 기는 다이숙신이미딜 글루타레이트와 가교된다. 다른 방법에서, 고리화는 폴리펩타이드 상의 2 부위 간에 티오에테르 연결 기를 만들어 달성된다. 한가지 방법은 폴리펩타이드의 N-말단에 N-클로로아세틸 변형된 아미노산을 삽입한 다음 내부 시스테인 잔기의 티올 측쇄와 자발적으로 반응시키는 공정으로 이루어진다. 효소적인 방법은, 란티바이오틱 신테타제 (lantibiotic synthetase)에 의해 (1) 시스테인과 (2) 데하이드로알라닌 또는 데하이드로부티린 기 간에 티오에테르 브릿징 기 형성을 촉매하는 반응을, 토대로 한다. 또한, 일반적으로 번역시 통합되는 셀레늄 함유 아미노산 측쇄의 산화에 의해, 데하이드로 관능기가 화학적으로 만들어질 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 변형된 펩타이드는 본 발명의 펩타이드의 N-말단, C-말단 또는 N-말단과 C-말단에 연결된 합성 폴리아미노산 폴리머 (예, 폴리라이신 (polyK), 폴리 L-아스파르트산 (polyD), 폴리-L-아르기닌 (polyR), 폴리 L-글루탐산 (polyE) 또는 폴리글루타민 (PolyQ))를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-아르기닌 (R) 또는 폴리-아스파르트산 (D)을 첨가하여 SEQ17에 변형을 가함으로써, 다수의 합성 펩타이드 SEQ74 - SEQ131을 제조한다. 추가적인 구현예에서, 합성 폴리아미노산은 폴리아미노산 1 내지 12개, 바람직하게는 3 내지 8개를 포함한다. 일부 구현예에서, 합성 폴리아미노산은 1 내지 12개의 K 잔기, 1 내지 12개의 D 잔기, 1 내지 12개의 R 잔기, 1 내지 12개의 Q 잔기 또는 1 내지 12개의 E 잔기, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 합성 폴리아미노산은 3 내지 7개의 R 잔기 또는 3 내지 7개의 D 잔기, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 펩타이드는, 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는, 합성 폴리아미노산 폴리머를 가진 본 발명의 펩타이드이다:
SEQ74 RRRMAEKWKIAR (서열번호 68)
SEQ75 RRRRMAEKWKIAR (서열번호 69)
SEQ76 RRRRRMAEKWKIAR (서열번호 70)
SEQ77 RRRRRRMAEKWKIAR (서열번호 71)
SEQ78 RRRRRRR MAEKWKIAR (서열번호 72)
SEQ79 MAEKWKIARDDD (서열번호 73)
SEQ80 RRRMAEKWKIARDDD (서열번호 74)
SEQ81 RRRRMAEKWKIARDDD (서열번호 75)
SEQ82 RRRRRMAEKWKIARDDD (서열번호 76)
SEQ83 RRRRRRMAEKWKIARDDD (서열번호 77)
SEQ84 RRRRRRRMAEKWKIARDDD (서열번호 78)
SEQ85 MAEKWKIARDDDD (서열번호 79)
SEQ86 RRRMAEKWKIARDDDD (서열번호 80)
SEQ87 RRRRMAEKWKIARDDDD (서열번호 81)
SEQ88 RRRRRMAEKWKIARDDDD (서열번호 82)
SEQ89 RRRRRRMAEKWKIARDDDD (서열번호 83)
SEQ90 RRRRRRRMAEKWKIARDDDD (서열번호 84)
SEQ91 MAEKWKIARDDDDD (서열번호 85)
SEQ92 RRRMAEKWKIARDDDDD (서열번호 86)
SEQ93 RRRRMAEKWKIARDDDDD (서열번호 87)
SEQ94 RRRRRMAEKWKIARDDDDD (서열번호 88)
SEQ95 RRRRRRMAEKWKIARDDDDD (서열번호 89)
SEQ96 RRRRRRRMAEKWKIARDDDDD (서열번호 90)
SEQ97 MAEKWKIAR DDDDDD (서열번호 91)
SEQ98 RRRMAEKWKIARDDDDDD (서열번호 92)
SEQ99 RRRRMAEKWKIARDDDDDD (서열번호 93)
SEQ100 RRRRRMAEKWKIARDDDDDD (서열번호 94)
SEQ101 RRRRRRMAEKWKIARDDDDDD (서열번호 95)
SEQ102 RRRRRRRMAEKWKIARDDDDDD (서열번호 96)
SEQ103 DDDMAEKWKIAR (서열번호 97)
SEQ104 DDDDMAEKWKIAR (서열번호 98)
SEQ105 DDDDDMAEKWKIAR (서열번호 99)
SEQ106 DDDDDDMAEKWKIAR (서열번호 100)
SEQ107 MAEKWKIARRRR (서열번호 101)
SEQ108 DDDMAEKWKIARRRR (서열번호 102)
SEQ109 DDDDMAEKWKIARRRR (서열번호 103)
SEQ110 DDDDDMAEKWKIARRRR (서열번호 104)
SEQ111 DDDDDDMAEKWKIARRRR (서열번호 105)
SEQ112 MAEKWKIARRRRR (서열번호 106)
SEQ113 DDDMAEKWKIARRRRR (서열번호 107)
SEQ114 DDDDMAEKWKIARRRRR (서열번호 108)
SEQ115 DDDDDMAEKWKIARRRRR (서열번호 109)
SEQ116 DDDDDDMAEKWKIARRRRR (서열번호 110)
SEQ117 MAEKWKIARRRRRR (서열번호 111)
SEQ118 DDDMAEKWKIARRRRRR (서열번호 112)
SEQ119 DDDDMAEKWKIARRRRRR (서열번호 113)
SEQ120 DDDDDMAEKWKIARRRRRR (서열번호 114)
SEQ121 DDDDDDMAEKWKIARRRRRR (서열번호 115)
SEQ122 MAEKWKIARRRRRRR (서열번호 116)
SEQ123 DDDMAEKWKIARRRRRRR (서열번호 117)
SEQ124 DDDDMAEKWKIARRRRRRR (서열번호 118)
SEQ125 DDDDDMAEKWKIARRRRRRR (서열번호 119)
SEQ126 DDDDDDMAEKWKIARRRRRRR (서열번호 120)
SEQ127 MAEKWKIARRRRRRRR (서열번호 121)
SEQ128 DDDMAEKWKIARRRRRRRR (서열번호 122)
SEQ129 DDDDMAEKWKIARRRRRRRR (서열번호 123)
SEQ130 DDDDDMAEKWKIARRRRRRRR (서열번호 124)
SEQ131 DDDDDDMAEKWKIARRRRRRRR (서열번호 125)
다른 측면에서, 본 발명은 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 합성 펩타이드, 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 제공한다:
SEQ2 IEPVQTICHDAEYVN (서열번호 126);
SEQ3 AEYVNVTAEDLDGHP (서열번호 127);
SEQ4 LDGHPNSGPFSFSVI (서열번호 128);
SEQ5 SFSVIDKPPGMAEKW (서열번호 129);
SEQ6 MAEKWKIARQESTSV (서열번호 130);
SEQ7 ESTSVLLQQSEKKLG (서열번호 131);
SEQ8 EKKLGRSEIQFLISD (서열번호 132);
SEQ9 FLISDNQGFSCPEKQ (서열번호 133);
SEQ10 CPEKQVLTLTVCECL (서열번호 134); 및
SEQ11 VCECLHGSGCREAQH (서열번호 135).
일 구현예에서, 변형된 펩타이드는, SEQ132의 아미노산 서열: VSTSEQRAIKWKEAM (서열번호 136)을 포함하는, SEQ6의 리버스 서열이다.
변이체 펩타이드 SEQ2 - SEQ11은, 본원에 기술된 아미노산 서열 동일성과, 본원에 기술된 아미노산 치환, 부가 또는 결손을 가진, 펩타이드를 포함한다. 변형된 펩타이드는 비-천연 아미노산 변형, 사이클릭 변형 및 합성 폴리아미노산 폴리머 변형을 가진 펩타이드를 포함한다.
본 발명의 펩타이드는 Dsg2의 500-604번 위치의 아미노산 잔기 (IEPVQTICHDA EYVNVTAEDL DGHPNSGPFS FSVIDKPPGM AEKWKIARQESTSVLLQQSEKKLGRSEIQFLISDNQGFSCPEKQVLTLTVCECLHGSGCREAQH (서열번호 137))로부터 유래될 수 있으며, 이는 추가적으로 변형될 수 있다. 본원의 펩타이드는 또한 재조합 DNA 기술을 이용한 화학적 합성 또는 제조에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 펩타이드는, 당해 기술 분야에 공지된 바와 같이, 아지드, 산 클로라이드, 산 무수물, 화합물 산 무수물, DCC, 활성화된 에스테르, 우드워드 시약 K, 카르보닐이미다졸, 탈산 (deoxidixation), DCC/HONB, BOP 시약 등을 이용한 방법에 의해 수득될 수 있다. 또한, 이는 자동 펩타이드 합성기를 이용한 화학 합성을 통해 제조될 수 있다.
이러한 화학 반응 후, 펩타이드를 공지된 정제 방법으로 분리 및 정제할 수 있다. 이러한 정제 방법의 예는 용매 추출, 증류, 컬럼 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피, 재결정화 등의 조합을 포함할 수 있다.
또한, 숙주 세포 (예, E. coli)에서 재조합 발현 시스템을 이용해 특정 효소 절단부, 예를 들어 엔테로키나제를 가진 융합 단백질로서 본 발명의 펩타이드를 방현시킬 수 있다. 그런 후, 세포를 파괴 및 원심분리하며, 수득되는 용액에는 펩타이드가 포함된다. 펩타이드를 특이적인 친화성 컬럼, 예를 들어, Ni2+ 또는 글루타티온 컬럼에 로딩하여 용출시킬 수 있다. 용출 후, 정제된 펩타이드에 대해 특이적인 효소적 절단 반응을 수행한다. 제조된 혼합물로부터 HPLC 또는 이온 교환 크로마토그래피에 의해 펩타이드를 정제한다. 통상적인 분석적인 화학 방법, 분자 생물학 및 세포 생물학 기법들을 수반하는 방법들이 다수의 공개적으로 알려진 참조문헌들에 상세히 기술되어 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은, 본 발명의 펩타이드 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하며, EMT 및 혈관형성 모방을 저해하고, 혈관신생 의존형 또는 혈관신생 관련 질환을 치료 및/또는 예방할 수 있는, 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 펩타이드는, 바람직하게는, 약학적 조성물 등의 조성물 형태로, 담체와 같은 다른 구성성분과 조합된다. 조성물은, 혈관신생-관련 질환을 의학적으로 치료 또는 예방하는 방법으로 투여하는 경우에, 유용하다. 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수여자에게 무독성이다. 이들 물질은 고체, 반-고체 또는 액체일 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 로젠제 (lozenge), 사셰제, 카셰제, 엘릭서제, 현탁제, 유제, 용액제 또는 시럽제 형태일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 EMT 및 혈관형성 모방을 저해하고, 혈관신생 의존형 또는 혈관신생 관련 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 즉, 본 발명은 개체에서 EMT 및/또는 혈관형성 모방을 저해하고, 혈관신생 의존형 또는 혈관신생 관련 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 약제의 제조에 있어, 본 발명의 펩타이드 또는 이의 변이체 펩타이드 또는 변형된 펩타이드의 용도를 제공한다.
혈관신생은 명세서 전체에서 혈관의 발생을 달성하거나 또는 유기체에서 조직의 혈관분포 (vascularity)를 높이는, 생물학적 과정을 의미한다. 지속적인 통제되지 않은 혈관신생은, 복수의 질환 상태, 종양 전이 및 내피 세포의 비정상적인 증식에서 발생하며, 이러한 병태에서 관찰되는 병리학적 손상을 뒷받침한다. 통제되지 않은 혈관신생으로 인해 발생되는 다양한 병리학적 상태들은 혈관신생 의존형 또는 혈관신생 관련 질환으로 분류된다. 혈관신생 과정을 제어하고자 하는 치료가 이들 질환의 퇴치 또는 경감을 유도할 수 있다.
본 발명에 의해 치료, 개선 또는 예방되는 질환 또는 장애로는 다음과 같은 병태를 포함한다: 황반 변성, 노화성 황반 변성, 신생물증, 내부 악성 종양 (internal malignancies), 예를 들어 눈 또는 안구 암, 직장암, 대장암, 자궁경부암, 전립선암, 유방암 및 방광암, 양성 및 악성 종양, 예를 들어, 다양한 암, 예로, 항문암, 구강암, 위암, 직장암, 간암, 췌장암, 폐암, 자궁경부암, 자궁체암, 난소암, 전립선암, 고환암, 신장암, 구강암/인두암, 식도암, 후두암, 신장암, 뇌암 (예, 신경교종), 두경부암, 인후암, 피부 흑색종, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 유잉 육종, 카포시 육종, 기저세포암 및 편평 세포암, 소 세포성 폐암, 융모암, 횡문근육종, 혈관육종, 혈관내피종, 윌름스 종양, 신경모세포종, 림프종, 신경섬유종증, 결절성 경화증 (이들 증상들은 각각 피부의 양성 종양을 야기한), 혈관종, 림프관신생, 횡문근육종, 망막모세포종, 골육종, 청신경종양, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 혈액계 종양 (blood-born tumor), 예를 들어, 백혈병, 백혈구 세포의 무제한적인 증식이 발생하며 통상적으로 빈혈, 혈액 응고 손상 및 림프절, 간 및 비장의 비대화를 동반하는, 골수에서의 다양한 모든 형태의 급성 또는 만성 신생물 질환, 건선, 여드름, 주사, 사마귀, 습진, 신경섬유종증, 스터지-베버 증후군, 피부의 정맥 궤양, 결절성 경화증, 만성 염증성 질환, 관절염, 루푸스, 경피증, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식편 거부 반응, 신혈관 녹내장 및 후수정체 섬유증식증, 유행성 각결막염, 비타민 A 결핍증, 접촉 렌즈 과도착용 증후군 (contact lens overwear), 아토피성 각막염 (atopic keratitis), 상윤부 각막염 (superior limbic keratitis), 익상편 건성 각막염 (pterygium keratitis sicca), 쇼그렌 증후군, 주사성 여드름 (acne rosacea), 플릭텐결막염 (phylectenulosis), 매독 (syphilis), 결핵균 감염 (Mycobacteria infections), 지질 변성 (lipid degeneration), 화학적 화상 (chemical bums), 세균성 궤양 (bacterial ulcers), 진균성 궤양 (fungal ulcers), 단순포진 감염 (Herpes simplex infection), 대상포진 감염 (Herpes zoster infection), 원충 감염 (protozoan infection), 무렌 궤양 (Mooren ulcer), 테리엔 변연부 변성 (Terrien's marginal degeneration), 변연부 각질용해증 (mariginal keratolysis), 외상, 류마티스 관절염, 전신 루푸스, 다발성 동맥염, 베게너 유육종증 (Wegener's sarcoidosis), 공막염, 스티븐스 존슨병 (Steven-Johnson disease), 유천포창, 방사상 각막절개 (radial keratotomy), 각막 이식편 거부 반응, 당뇨병성 망막증, 황반 부종, 황반 변성, 겸상 세포 빈혈, 사르코이드 (sarcoid), 탄력섬유성 위황색종 (pseudoxanthoma elasticum), 파제트병, 정맥 폐쇄, 동맥 폐쇄, 경동맥 폐쇄 질환, 만성 포도막염/유리체염, 라임병, 전신성 홍반성 낭창, 베일병 (Bales' disease), 베체트병, 망막염 또는 맥락막염을 유발하는 감염증, 추정의 눈의 히스토플라스마증 (presumed ocular histoplasmosis), 베스트병 (Best's disease), 근시, 시신경 유두소와 (optic pits), 스타가르트병 (Stargardt's disease), 평면부염 (pars planitis), 만성 망막 박리, 고점도 증후군, 톡소플라스마증, 외상, 레이저 시술 후 합병증 (post-laser complication), 피부홍조 (발목의 신혈관형성), 당뇨병성이거나 또는 아닌 모든 형태의 증식성 유리체망막병증 등의 섬유혈관 또는 섬유성 조직의 비정상적인 증식으로 인해 유발되는 질환, 신혈관 질환 (neovascular disease), 파누스 (pannus), 당뇨병성 황반 부종, 혈관성 망막병증, 망막 변성, 망막의 염증성 질환, 증식성 유리체망막병증, 피부홍조 (발목의 신혈관형성)와 관련된 질환, 모든 형태의 증식성 유리체망막병증 등의 섬유혈관 또는 섬유성 조직의 비정상적인 증식으로 인해 유발되는 질환, 크론병 및 궤양성 대장염, 사르코이드증, 골관절염, 염증성 장 질환, 피부 병변 (skin lesion), 오슬러-웨버-랑뒤 질환 (Osler-Weber-Rendu disease) 또는 유전성 출혈성 모세혈관확장증, 골관절염, 사르코이드증, 피부 병변, 후천성 면역 결핍 증후군, 및 소장 폐쇄.
일부 구현예에서, 혈관신생 의존형 또는 혈관신생 관련 질환은 신생물증 (악성 종양 또는 암 포함), 황반 변성 (노화성 황반 변성 포함), 신혈관성 질환, 혈관성 망막병증 또는 망막 변성이다.
본 발명의 혈관신생 저해 펩타이드는, 특히 자궁경부암, 항문암, 구강암, 위 암, 대장암, 방광암, 직장암, 간암, 췌장암, 폐암, 유방암, 자궁경부암, 자궁체암, 난소암, 전립선암, 고환암, 신장암, 뇌암 (예, 신경교종), 두경부암, 눈 또는 안구의 암, 인후암, 흑색종, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 유잉 육종, 카포시 육종, 기저세포암 및 편평 세포암, 소 세포성 폐암, 융모암, 횡문근육종, 혈관육종, 혈관내피종, 윌름스 종양, 신경모세포종, 구강/인두, 식도, 후두, 신장 및 림프종과 같은 다양한 암 등의, 양성 및 악성 종양을 치료, 완화 또는 예방하기 위해, 사용된다. 또한, 특히 신경섬유종증, 결절성 경화증 (이 증상은 각각 피부의 양성 종양을 유발함), 혈관종 및 림프관신생과 같은 병태들은 본 발명에 따른 화합물로 효과적으로 치료할 수 있다.
혈관신생은 고형 종양 형성 및 전이에 중요하다.
횡문근육종, 망막모세포종, 유잉 육종, 신경모세포종 및 골육종과 같은 수종의 고형 종양과 관련하여 혈관신생 인자들이 발견되었다. 종양은 영양 제공 및 세포 폐기물 제거를 위해 혈액 공급 없이는 증식할 수 없다. 혈관신생이 중요한 종양으로는 고형 종양, 및 양성 종양, 예를 들어 청신경종양, 신경섬유종, 트라코마 및 화농성 육아종 등이 있다. 혈관신생을 예방하면 이들 종양의 증식이 정지되고, 종양의 존재로 인한 동물에서 발생되는 손상을 중단시킬 수 있다.
혈관신생은, 통상적으로 빈혈, 혈액 응고 손상 및 림프절, 간 및 비장의 비대증을 동반한, 백혈구의 무제한적인 증식이 발생하는, 골수의 임의의 다양한 급성 또는 만성 신생물 질환인, 백혈병과 같은 혈액계 종양과 관련 있음에 유념하여야 한다. 혈관신생은 백혈병-유사 종양을 야기하는 골수에서 비정상적인 기능에 작용하는 것으로 간주된다.
혈관신생은 종양 전이 2단계에 중요하다. 혈관신생 자극이 중요한 제1 단계는 종양의 혈관 형성에 중요하며, 종양 세포가 혈류에 들어가 신체 전역으로 순환가능하게 한다. 종양 세포가 원발성 부위를 떠나, 이차적인 전이 부위에 정착한 이후에는, 새로운 종양이 증식하여 확장되기 전에 혈관신생이 선행되어야 한다. 따라서, 혈관신생을 예방 또는 제어하면, 잠재적으로 원발성 부위에서 신생물의 증식을 포함하여 종양의 전이를 예방할 수 있다.
어린이에서 가장 빈번한 혈관신생 질환 중 하나는 혈관종이다. 대부분의 사례에서, 종양은 양성이며, 개입 없이도 퇴화된다. 더 심각한 사례에서는, 종양이 큰 해면상의 침윤성 형태로 진행되어, 임상적인 합병증을 발생시킨다. 혈관종의 전신 형태인 혈관종증 (hemangiomatoses)은 사망율이 매우 높다. 현재 사용되는 치료제로는 치료할 수 없는 테라피-내성 혈관종도 있다.
혈관신생 질환, 혈관신생 장애 및 혈관신생 피부 장애는 본 명세서 전체에서 조직에서 신혈관형성의 증가로서 발생하는 장애, 일반적으로 피부 장애 또는 관련 장애를 기술하는 것으로 사용된다. 일차적인 또는 이차적인 특징으로서, 신혈관형성 증가가 특징인 모든 피부 장애는 본 발명에서 혈관신생 피부 장애로 간주되며, 본 발명에 따른 화합물로 치료가능하다.
또한, 본 발명은, 본 발명의 화합물 하나 이상을 치료학적 유효량으로 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 건선, 여드름, 주사, 사마귀, 습진, 혈관종, 림프관신생, 신경섬유종증, 스터지-베버 증후군, 피부의 정맥 궤양, 결절성 경화증, 만성 염증성 질환 및 관절염과 같은 혈관신생 피부 장애 뿐만 아니라 관절염, 루푸스 및 경피증과 같은 만성 염증성 질환 등의 염증을 치료, 완화 또는 예방하는 방법을 제공한다.
신혈관형성과 관련된 질환으로는 시신경 원판 신혈관형성, 홍채 신혈관형성, 망막 신혈관형성, 맥락막 신혈관형성, 각막 신혈관형성 및 유리체강내 신혈관형성 등이 있다.
혈관신생에 의해 매개되는 질환의 일 예는 눈의 신혈관형성 질환이다. 이 질환은 망막 또는 각막과 같은 눈의 구조에 새로운 혈관의 침입을 특징으로 한다. 이는 실명의 가장 일반적인 요인이며, 약 20종의 질환들과 관련있다. 노화성 황반 변성의 경우, 관련된 시각적인 문제들은 망막 색소 상피 아래 섬유혈관 조직이 증식되는 브루크 막 내 결함을 통한 맥락막모세혈관의 내증식에 의해 유발된다.
만성 염증 및 관절염과 관련된 질환은 본 발명의 펩타이드, 조성물 및 방법에 의해 치료, 개선 또는 예방할 수 있다. 만성 염증 증상을 가진 질환으로는 크론병 및 궤양성 대장염과 같은 염증성 장 질환, 건선, 사르코이드증, 류마티스 관절염, 골관절염, 루푸스 및 경피증 등이 있다. 혈관신생은, 이들 만성 염증성 질환에서 공통적인, 핵심 요소이다. 만성 염증은 염증성 세포의 유입을 유지하기 위한 모세관 분지 (capillary sprout)의 계속적인 형성에 의존한다. 염증성 세포의 유입 및 존재는 육아종을 발생시키며, 따라서 만성 염증성 상태를 유지시킨다.
인간 또는 기타 포유류 숙주에 단일 용량 (single dose) 또는 분할된 용량 (divided dose)으로 투여되는 본 발명의 펩타이드의 1일 총 용량 (total daily dose)은 예를 들어 체중 1 kg 에 대해 1일 약 0.0001 내지 약 750 mg/kg의 함량일 수 있으며, 보다 일반적으로는, 체중 1 kg 당 약 1 내지 약 300 mg/kg일 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은, 본 발명의 펩타이드가 1회 주입 당 약 0.1 mg 내지 약 50 mg, 더 바람직하게는 1회 주입 당 약 0.3 내지 약 40 mg, 가장 바람직하게는 1회 주입 당 약 0.5 mg 내지 약 30 mg, 약 1 mg 내지 약 30 mg, 약 3 mg 내지 약 30 mg, 약 5 mg 내지 약 30 mg, 약 8 mg 내지 약 30 mg, 약 10 mg 내지 약 30 mg, 약 15 mg 내지 약 30 mg, 약 20 mg 내지 약 30 mg, 약 0.5 mg 내지 약 25 mg, 약 0.5 mg 내지 약 20 mg, 약 0.5 mg 내지 약 15 mg, 약 0.5 mg 내지 약 10 mg, 약 0.5 mg 내지 약 5 mg 또는 약 0.5 mg 내지 약 3 mg의 용량으로 제공되도록, 주입에 의해 눈에 투여된다. 또한, 약학적 조성물은, 약 10 내지 약 600 mg/ml, 더 바람직하게는 약 20 내지 약 500 mg/ml, 가장 바람직하게는 약 30 내지 약 400 mg/ml, 약 30 내지 약 350 mg/ml, 약 30 내지 약 300 mg/ml, 약 30 내지 약 250 mg/ml, 약 30 내지 약 200 mg/ml, 약 30 내지 약 150 mg/ml, 약 30 내지 약 100 mg/ml, 약 30 내지 약 50 mg/ml, 약 50 내지 약 400 mg/ml, 약 100 내지 약 400 mg/ml, 약 150 내지 약 400 mg/ml, 약 200 내지 약 400 mg/ml, 약 250 내지 약 400 mg/ml, 약 300 내지 약 400 mg/ml 또는 약 350 내지 약 400 mg/ml의 농도로 본 발명의 펩타이드가 포함된 점안제의 1 방울 (single drop)이 눈에 적용되도록, 점안제에 의해 눈에 투여된다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료학적 유효량의 투여는 바람직한 결과를 달성하기 위해 필요한 시간 동안 투여량으로서 효과적인 양으로 정의된다. 예를 들어, 펩타이드의 치료학적으로 활성인 양은 개체의 질환 상태, 나이, 성별 및 체중과, 개체에서 바람직한 반응을 유발하기 위한 물질의 능력과 같은 인자들에 따라 달라질 수 있다. 투약 용법 (dosage regime)은 최적의 치료 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 매일 다회 분할 투여로 투여되거나, 또는 치료학적 상태의 긴급성에 따라 비례적으로 용량을 줄일 수 있다.
약학적 조성물은 필요한 개체에게 임의의 편리한 또는 적합한 경로, 예를 들어, 비경구 (예, 동맥내, 정맥내, 근육내, 피하), 국소 (진피, 경피, 피하 등), 경구, 코, 점막 (설하 등) 또는 강내 경로에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 조성물은 용액, 현탁제, 유제 및 고형 형태 등의 다양한 형태로 제형화될 수 있으며, 전형적으로, 선택된 투여 경로에 적합하도록, 예를 들어 비경구 투여에 적합한 주사가능한 제형, 캡슐제, 정제, 캐플릿제, 경구 섭취용 엘릭서제로서, 흡입 (예, 비강내 흡입 또는 경구 흡입)에 투여하기 적합한 에어로졸 형태로, 또는 국소 투여에 적합한 연고, 크림, 겔 또는 로션 형태로 제형화된다.
예를 들어, 비경구 주입을 위한 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 멸균 (sterile) 수성 또는 비-수성 용액, 분산제, 현탁제 또는 유제, 뿐만 아니라 사용 직전에 멸균 주사 용액 또는 분산액으로 재구성하기 위한 멸균 산제를 포함한다. 적합한 수성 및 비-수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예로는 물, 에탄올, 폴리올 (예, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 카르복시메틸셀룰로스 및 이들의 적절한 혼합물, 식물성 오일 (예, 올리브 오일), 및 에틸 올리에이트와 같은 주사가능한 유기 에스테르 등이 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅 물질을 사용하거나, 분산제의 경우 필수 입자 크기를 유지시키거나, 계면활성제를 사용함으로써, 유지시킬 수 있다. 이러한 조성물은 또한 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산화제와 같은 보강제를 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 펩타이드와 함께 사용하는데 적합한 경구 투약 형태 또는 단위 용량 (unit dose)은 펩타이드의 혼합물과, 비-약물 성분 또는 부형제, 뿐만 아니라 성분으로서 또는 패킹 (packaging)으로서 간주될 수 있는 그외 재사용이 불가한 물질을 포함할 수 있다. 경구 조성물은 액체, 고체 및 반고체 투약 형태들 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드의 유효량을 포함하는 경구 투약 형태가 제공되며, 이러한 투약 형태는 환, 정제, 캡슐제, 겔, 페이스트 (paste), 드링크 및 시럽 중 하나 이상을 포함한다. 일부 경우, 개체의 소장 내에서 펩타이드 다이머의 지연 방출을 달성하도록 설계 및 구성된, 경구 투약 형태가 제공된다.
예를 들어, 국소 투여는 폐 및 눈의 표면 등의 피부 또는 점막에의 투여를 포함한다. 흡입 및 비강내 투여 조성물 등의 국소 폐 투여용 조성물은 수성 및 비-수성 제형 형태의 용액제 및 현탁제를 포함할 수 있으며, 가압 또는 비-가압될 수 있는 건조 분말로서 제조될 수 있다. 비-가압식 분말 조성물 (non-pressurized powder composition)의 경우, 미분화된 형태의 활성 성분은, 소정의 크기를 가진 입자, 예를 들어, 직경의 크기가 최대 100 ㎛인 입자를 포함하는 더 큰 크기의 약제학적으로 허용가능한 불활성 담체와의 혼합물 형태로 사용될 수 있다. 적합한 불활성 담체로는 락토스와 같은 당 (sugar)이 있다.
또 다른 국소 투여 형태는 눈 투여 형태이다. 본 발명의 화합물은, 화합물이 각막 및 눈의 내부 영역, 예를 들어, 전방 (anterior chamber), 후방 (posterior chamber), 유리체, 안방수, 유리액, 각막, 홍채/모양체 (ciliary), 수정체, 맥락막/망막 및 공막을 침투할 수 있는 충분한 시간 동안 화합물이 눈 표면과 접촉된 채 유지되도록, 약제학적으로 허용가능한 눈 비히클 (ophthalmic vehicle) 중에 전달된다. 약제학적으로 허용가능한 눈 비히클은, 예를 들어, 연고, 식물성 오일 또는 캡슐화 물질일 수 있다. 다른 예로, 본 발명의 화합물은 유리액 및 안방수에 직접 주입될 수도 있다.
또한, 본 발명의 펩타이드는 리포좀의 형태로 투여될 수 있다. 당해 기술 분야에 공지된 바와 같이, 리포좀은 일반적으로 인지질 또는 그외 액체 물질로부터 유래된다. 리포좀은 수성 매질 내에 분산된 단층 또는 다층의 수화된 액체 결정 (mono- or multi-lamellar hydrated liquid crystal)에 의해 형성된다. 리포좀을 형성할 수 있는 모든 무독성의 생리학적으로 허용가능하며 대사가능한 지질이 사용될 수 있다. 리포좀 형태의 조성물은, 본 발명의 화합물 외에도, 안정화제, 보존제, 부형제 등을 포함할 수 있다. 바람직한 지질은 천연 및 합성 형태의 인지질 및 포스파티딜 콜린 (레시틴)이다. 리포좀을 형성하는 방법은 당해 기술 분야에 공지되어 있다.
본 명세서에서 모든 기존 간행물 (또는 이로부터 유래된 정보)에 대한 언급 또는 공지된 모든 사항에 대한 언급은, 기존 간행물 (또는 이로부터 유래된 정보) 또는 공지된 내용이 본원과 관련된 분야에서 일반 상식의 일부를 형성한다는 인지, 용인 또는 어떠한 제시가 아니며, 그렇게 받아들여서도 안된다.
이하, 본 발명은 후술할 구체적인 실시예를 들어 설명될 것이나, 실시예는 본 발명의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예
실시예 1 본 발명의 펩타이드에 대한 EMT 분석
MDCK 세포 (세포 800개/웰)를 96웰 플레이트에 접종하여, 37℃ 및 5% CO2 하에 10% 컨플루언스로 배양하였다. 그런 후, 세포 산란 인자 HGF (R&D system, 2.5 ng/ml)를 배양 배지에 첨가하여 EMT를 촉발시키고, 테스트 펩타이드를 첨가하여 (SEQ2 - SEQ31), EMT를 차단하였다. 핵 간 거리를 측정하기 위해, 업라이트 현미경을 사용해 x50 배율로 랜덤으로 사진을 촬영하였다. 핵 간 거리는 하나의 핵의 중심에서 이웃한/인전한 핵의 중심까지로 측정하였다. 2개의 핵 간 거리를 ImageJ 소프트웨어를 사용해 측정하였다.
도 1 (A)에 나타낸 바와 같이, Dsg2의 500 - 602번 위치의 아미노산 잔기로부터 펩타이드 SEQ1 - SEQ11의 단편을 제조한다. 또한, EMT 분석을 수행하여, 이들 펩타이드 단편들의 EMT-저해력을 입증하였다. 도 1 (B)에 나타낸 바와 같이, SEG6는 EMT를 저해하는데 유익한 효과를 나타낸다. 즉, 펩타이드 결손 실험을 SEQ6에 대해 수행하였다. SEQ6의 서열 중 일부를 제거하여, 합성 펩타이드 SEQ12 - SEQ31을 수득하였다. 합성 펩타이드 SEQ12 - SEQ31의 서열 및 이의 EMT 저해 효과를 도 2에 도시한다.
실시예 2 본 발명의 펩타이드에 대한 혈관형성 모방 실험
인간 교모세포종 세포 (U-87)를 마트리겔-코팅된 웰 (세포 6x103개/웰, 96-웰 플레이트)에 접종하였다. 테스트 펩타이드 (SEQ17, SEQ32-SEQ38 또는 PBS 대조군)를 각 웰에 첨가하여, 수일간 배양하였다. 혈관을 정량하기 위해, 각각의 웰을 3개의 필드에서 랜덤으로 사진 촬영하고, 혈관의 수를 통계 분석을 위해 계수하였다.
도 2에 나타낸 바와 같이, SEQ17은 EMT를 저해하는데 유익한 효과를 나타낸다. SEQ17에 대한 알라닌 스크리닝을 수행하였다. 합성 펩타이드 SEQ17에 대한 알라닌 치환으로, 합성 펩타이드 서열 SEQ32-SEQ38을 수득하였다. 교모세포종 (GBM)은 매우 공격적이며, 기본적으로 불치성이다. 이의 악성은 왕성한 미세혈관 증식을 특징으로 한다. 최근 증거에서, 종양 세포는 내피 세포 혈관신생과 독립적인 대안적인 미세혈관 순환인 채혈 혈관형성 모방 (VM)을 유발하는 능력이 있는 것으로 확인되었다. 교모세포종 세포주 (U-87)를 사용해, 혈관형성 모방 실험에서 마트리겔에 의해 촉발된 혈관 구조를 차단하는데 있어 SEQ17 트립토판 잔기 (W, Dsg2 아미노산 위치 544)의 기여를 확인하였다. 혈관으로 가득 찬 PBS 대조군과 비교해, 펩타이드 SEQ17 및 SEQ32-SEQ38은 U-87 혈관 네트워크 형성을 차단하는데 강한 효과를 나타낸다 (도 3 (A)). 각 처리 군에서 랜덤으로 선택한 필드 3개를 사용해, 혈관을 계수하여 정량한다 (도 3 (B)). (평균 혈관 수 ± SD).
실시예 3 본 발명의 펩타이드에 대한 HUVEC 혈관 형성 분석 (혈관신생 분석)
밤새 고갈시킨 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)를 수집하고, 내피 세포 배양 배지로 세포 1.5 x 104개/웰 (96웰 플레이트)로 조절한 다음 마트리겔 코팅된 웰에 세포를 접종하였다. 여러가지 펩타이드 및 이의 변형된 형태, 즉 이의 D-형태의 비-천연 아미노산 및/또는 N- 및 C-말단 시스테인 첨가에 의한 고리화; 또한, SEQ132는 펩타이드 백본 SEQ6의 리버스 서열이다 (레트로 변형): (SEQ17, SEQ78, SEQ97, MR9 DF, CMR9C, CMR9C DF, MR9D6 DF, CMR9D6C DF 및 SEQ132) 또는 대조군 PBS를 각 웰에 첨가하여 4시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 각 웰을 업라이트 현미경을 통해 x40 배율로 사진 촬영하였다. ImageJ 소프트웨어를 사용해 전체 혈관 길이를 정량하였다. 마트리겔 상에 배양된 HUVEC 세포는 합성 펩타이드가 혈관신생을 저해할 수 있음을 나타내었으며, 그 결과는 도 4 (A) - (D)에 도시한다.
실시예 4 레이저-유발성 맥락막 신혈관형성 랫 모델
케타민 하이드로클로라이드/크실라진 하이드로클로라이드 (7:1, v/v) 혼합물을 대퇴근에 1 mL/kg로 근육내 주사하여 동물을 완전히 마취시켰다. Mydrin®-P 눈 용액 (Santen Pharmaceutical Co., Ltd.)을 눈에 주입하여, 동공을 확장시켰다. Slit Lamp SL-130 (Carl Zeiss Meditec AG) 및 멀티컬러 레이저 포토코어굴레이터 MC-300 (NIDEK Co., Ltd.)를 사용해 각 동물의 우측 눈에 레이저 (파장: 532 nm)를 조사하였다. 그런 후, 펩타이드 투여 제형을 우측 눈의 유리체에 마이크로시린지 (MS-N10, Ito Corporation)와 33G 바늘 (Ito Corporation)을 사용해 주입하였다. 레이저 조사 후 14일에, 4% FITC-덱스트란 용액을 꼬리 정맥을 통해 동물 당 1 mL 부피로 투여하였다. 그런 후, 마취제를 과다 투여하여 안락사시켰다. 안구를 취하여, 12-24시간 동안 4% 파라포름알데하이드-포스페이트 완충제에 고정시켰다. 입체 현미경 (EZ-4, Leica Microsystems) 검경 하에 맥락막 플랫 마운트 (choroidal flat mount)를 준비하였다. 랫의 눈 맥락막 플랫 마운트를 공초점 현미경 (NIKON ECLIPSE TE2000-U)으로 사진 촬영하기 위해 준비하였다. 소프트웨어 ImageJ (National Institutes of Health (NIH), USA)를 사용해, 고 형광 강도를 나타내는 레이저-유발성 신혈관형성 부위의 면적 (단위: 픽셀)을 측정한다.
랫의 눈에 532 nm 파장의 레이저를 조사하고, 펩타이드 (SEQ97), Eylea 또는 PBS를 유리체내에 처리하였다. 14일 후, 4% FITC-덱스트란 용액을 정맥내로 주사하여, 플루오레세인 혈관 조영술을 통한 망막 영역내 유체 누출을 확인하였다. 도 5 (A)에 PBS-처리 대조군, Eylea (200 ㎍/5 ㎕) 및 SEQ97 (500 ㎍/5 ㎕)의 플루오레세인 혈관조영 사진을 도시한다. 14일간 처리 (PBS, Eylea 또는 SEQ97) 후, 맥락막 신혈관형성 부위에 대해 사진을 촬영하고, ImageJ 소프트웨어로 정량 분석하였다. (n=10) Eylea 및 SEQ97 둘다 랫 눈의 맥락막에서 신혈관형성을 현저하게 저해하였다 (도 5 (B)). (통계 분석을 StatLight #4를 이용하였다).
SEQUENCE LISTING <110> ASCLEPIUMM TAIWAN CO., LTD <120> DSG2-DERIVED PEPTIDES <130> A91566/CN28256 <150> US 62/346,383 <151> 2016-06-06 <160> 137 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is A, T or S <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is K, R or H <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is K, R, N, H or Q <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is A, V, I, G, L or P <400> 1 Met Xaa Glu Xaa Trp Xaa Ile Xaa Arg 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 2 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 3 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Val Arg 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 4 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ile Arg 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> 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artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 106 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 <210> 107 <211> 16 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 107 Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 <210> 108 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 108 Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg <210> 109 <211> 18 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 109 Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg <210> 110 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 110 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg <210> 111 <211> 14 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 111 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 <210> 112 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 112 Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg <210> 113 <211> 18 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 113 Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg <210> 114 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 114 Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg <210> 115 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 115 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg Arg 20 <210> 116 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 116 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 <210> 117 <211> 18 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 117 Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg <210> 118 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 118 Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg <210> 119 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 119 Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg Arg 20 <210> 120 <211> 21 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 120 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg Arg Arg 20 <210> 121 <211> 16 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 121 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 <210> 122 <211> 19 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 122 Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg <210> 123 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 123 Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg Arg 20 <210> 124 <211> 21 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 124 Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg Arg Arg 20 <210> 125 <211> 22 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 125 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg Arg Arg Arg 20 <210> 126 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 126 Ile Glu Pro Val Gln Thr Ile Cys His Asp Ala Glu Tyr Val Asn 1 5 10 15 <210> 127 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 127 Ala Glu Tyr Val Asn Val Thr Ala Glu Asp Leu Asp Gly His Pro 1 5 10 15 <210> 128 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 128 Leu Asp Gly His Pro Asn Ser Gly Pro Phe Ser Phe Ser Val Ile 1 5 10 15 <210> 129 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 129 Ser Phe Ser Val Ile Asp Lys Pro Pro Gly Met Ala Glu Lys Trp 1 5 10 15 <210> 130 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 130 Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala Arg Gln Glu Ser Thr Ser Val 1 5 10 15 <210> 131 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 131 Glu Ser Thr Ser Val Leu Leu Gln Gln Ser Glu Lys Lys Leu Gly 1 5 10 15 <210> 132 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 132 Glu Lys Lys Leu Gly Arg Ser Glu Ile Gln Phe Leu Ile Ser Asp 1 5 10 15 <210> 133 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 133 Phe Leu Ile Ser Asp Asn Gln Gly Phe Ser Cys Pro Glu Lys Gln 1 5 10 15 <210> 134 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 134 Cys Pro Glu Lys Gln Val Leu Thr Leu Thr Val Cys Glu Cys Leu 1 5 10 15 <210> 135 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 135 Val Cys Glu Cys Leu His Gly Ser Gly Cys Arg Glu Ala Gln His 1 5 10 15 <210> 136 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 136 Val Ser Thr Ser Glu Gln Arg Ala Ile Lys Trp Lys Glu Ala Met 1 5 10 15 <210> 137 <211> 105 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 137 Ile Glu Pro Val Gln Thr Ile Cys His Asp Ala Glu Tyr Val Asn Val 1 5 10 15 Thr Ala Glu Asp Leu Asp Gly His Pro Asn Ser Gly Pro Phe Ser Phe 20 25 30 Ser Val Ile Asp Lys Pro Pro Gly Met Ala Glu Lys Trp Lys Ile Ala 35 40 45 Arg Gln Glu Ser Thr Ser Val Leu Leu Gln Gln Ser Glu Lys Lys Leu 50 55 60 Gly Arg Ser Glu Ile Gln Phe Leu Ile Ser Asp Asn Gln Gly Phe Ser 65 70 75 80 Cys Pro Glu Lys Gln Val Leu Thr Leu Thr Val Cys Glu Cys Leu His 85 90 95 Gly Ser Gly Cys Arg Glu Ala Gln His 100 105

Claims (31)

  1. MAEKWKIAR(서열번호 2)의 아미노산 서열로 이루어진, 펩타이드.
  2. 삭제
  3. 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진, 펩타이드:
    SEQ13 MAEKWKIARQEST (서열번호 46);
    SEQ14 MAEKWKIARQES (서열번호 47);
    SEQ15 MAEKWKIARQE (서열번호 48); 및
    SEQ16 MAEKWKIARQ (서열번호 49)
  4. 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진, 펩타이드:
    MR9 DF: MAEKWKIAR (서열번호 64)(9개의 아미노산 잔기는 D 형태임);
    CMR9C DF: CMAEKWKIARC (서열번호 65);
    MR9D6 DF: MAEKWKIARDDDDDD (서열번호 66); 및
    CMR9D6C DF: CMAEKWKIARDDDDDDC (서열번호 67).
  5. 하기 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진, 펩타이드:
    SEQ78 RRRRRRRMAEKWKIAR (서열번호 72); 및
    SEQ97 MAEKWKIARDDDDDD (서열번호 91).
  6. 삭제
  7. 제1항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드
    를 포함하는, 개체에서 혈관신생 의존성 질환 또는 혈관신생 관련 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약학적 조성물로서,
    상기 혈관신생 의존성 질환 또는 혈관신생 관련 질환은 신생물증(neoplasia), 혈관성 망막병증, 혈관종, 림프관신생, 신경섬유종증, 스터지-베버 증후군, 시신경 원판 신혈관형성(optic disc neovascularization), 홍채 신혈관형성, 망막 신혈관형성, 맥락막 신혈관형성, 각막 신혈관형성, 또는 유리체강내 신혈관형성인,
    약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    비경구, 국소 또는 경구 투여용인, 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 국소 투여는 눈으로의 투여인, 약학적 조성물.
  10. 삭제
  11. 제7항에 있어서,
    상기 신생물증이 악성 종양 또는 암인, 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 악성 종양 또는 암이 교모세포종, 자궁경부암, 항문암, 구강암, 위암, 대장암, 방광암, 직장암, 간암, 췌장암, 폐암, 유방암, 자궁경부암, 자궁체암, 난소암, 전립선암, 고환암, 신장암, 뇌암, 두경부암, 안구암 또는 눈암, 인후암, 흑색종, 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 유잉 육종, 카포시 육종, 기저세포암 및 편평 세포암, 소 세포성 폐암, 융모암, 횡문근육종, 혈관육종, 혈관내피종, 윌름스 종양, 신경모세포종, 구강/인두 암, 식도암, 후두암, 신장암 및 림프종인, 약학적 조성물.
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
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  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
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