DE4439783A1 - Fluoreszente Verbindung geeignet zur Verwendung bei der Detektion von Sacchariden - Google Patents

Fluoreszente Verbindung geeignet zur Verwendung bei der Detektion von Sacchariden

Info

Publication number
DE4439783A1
DE4439783A1 DE4439783A DE4439783A DE4439783A1 DE 4439783 A1 DE4439783 A1 DE 4439783A1 DE 4439783 A DE4439783 A DE 4439783A DE 4439783 A DE4439783 A DE 4439783A DE 4439783 A1 DE4439783 A1 DE 4439783A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
compound
fluorescence
fluorescent compound
glucose
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE4439783A
Other languages
English (en)
Other versions
DE4439783C2 (de
Inventor
Tony James
Saman Sandanayake
Seiji Shinkai
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Japan Science and Technology Agency
Original Assignee
Research Development Corp of Japan
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Research Development Corp of Japan filed Critical Research Development Corp of Japan
Publication of DE4439783A1 publication Critical patent/DE4439783A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE4439783C2 publication Critical patent/DE4439783C2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/80—Fluorescent dyes, e.g. rhodamine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Description

Die Erfindung bezieht sich auf eine neue fluoreszente Verbindung und insbesondere auf eine fluoreszente Ver­ bindung, die geeignet ist zur Verwendung bei der Detek­ tion von Sacchariden oder Zucker, wie beispielsweise Glukose und ferner auf die Detektion von Sacchariden mit einer solchen Fluoreszenzverbindung.
Stand der Technik. Saccharide oder Zucker sind organische Verbindungen, die für lebende Organismen unerläßlich sind, und die eine wichtige Rolle spielen bei der Infor­ mationsübertragung, bei dem Energiemetabolismus und bei Strukturbildung in solchen Organismen. Beispielsweise ist Glucose, insbesondere D-Glucose eine entscheidende Energiequelle für verschiedene Zellen beim Aufbau ver­ schiedener Organe. Glucose wird in der Leber als Glykogen gespeichert und nach Bedarf für den Energieverbrauch in Körperflüssigkeiten freigegeben. Die Herstellung und der Verbrauch der Glucose sind in Körperflüssigkeiten eines normalen und gesunden Menschen wohl ausgeglichen, wobei die Glucosekonzentration in den Flüssigkeiten oder Fluids konstant gehalten wird. Auf diese Weise gestattet die Detektion oder Feststellung von Glucose im Blut oder im Urin wertvolle Information für die Diagnose von Krankheiten, wie beispielsweise Diabetes und einer Adrenalin­ suffizient.
Ein Glucosesensor unter Verwendung eines Enzyms ist die am besten bekannte praktische Maßnahme zur Detektierung von Sacchariden. Dieses Verfahren umfaßt die Zerlegung der Glucose mit dem Enzym (Glucoseoxydate) und die Mes­ sung der Menge an Wasserstoffperoxid, welches durch die Zerlegung erzeugt wird, und zwar durch geeignete Mittel (wie beispielsweise eine Elektrode). Obwohl dieses Ver­ fahren ein etabliertes Verfahren ist, wird das aus einem lebenden Körper kommende Enzym seine Qualität irreversi­ bel mit der Zeit verändern und kann nicht für die wie­ derholte Verwendung "recycled" werden. Die Probe kann nicht für andere Meßzwecke verwendet werden, da die Glucose bereits zerlegt ist. Zudem richtet sich der konventionelle Sensor nur auf die Detektion von Zucker in einer "in vitro"-Probe, d. h. eine aus dem lebenden Kör­ per entnommene Probe. Wenn es möglich wäre, Saccharide an Stellen innerhalb des lebenden Körpers zu detektieren, so könnte man vielmehr Information erhalten, die außeror­ dentlich brauchbar wäre bei der Diagnose und der Behand­ lung von Krankheiten und der Entwicklung von Arzneimit­ teln. Der derzeitige Saccharidsensor ist jedoch weit weg von der Erfüllung solcher Erwartungen.
Zusammenfassung der Erfindung. Die vorliegende Erfindung sieht eine neue fluoreszente Verbindung vor, die unter verschiedenen möglichen Verwendungen besonders geeignet ist, wie die Verwendung bei der Detektion von Sacchari­ den. Somit wird erfindungsgemäß eine Verbindung vorgese­ hen, die in der Lage ist, Fluoreszenz zu emittieren, und zwar durch Kombination mit Sacchariden; die Verbindung hat eine Molekularstruktur, die folgendes aufweist: ein Fluorophor, mindestens eine Phenylboronsäure-Gruppierung und mindestens ein aminlieferndes Stickstoffatom, wobei das Stickstoffatom in der Nähe der Phenylboronsäure- Gruppierung angeordnet ist, um so intermolekular mit der Boronsäure in Wechselwirkung zu treten.
Eine typische Verbindung, die innerhalb einer derartigen Struktur liegt, kann erfindungsgemäß ausgedrückt werden durch die folgende allgemeine Formel (1):
In der obigen Formel (1) repräsentiert F ein Fluorophor. Beispiele von Fluorphoren sind eine Anzahl von Atomgrup­ pen oder funktionalen Gruppen, die -Elektronensysteme enthalten. Bevorzugte Fluorophore umfassen die folgenden: Naphtyl, Anthryl, Pyrenyl und Phenanthryl, die ausge­ drückt werden können durch die folgenden Strukturformeln (2), (3), (4) und (5):
Die fluorophorbildenden Atom- oder Funktionsgruppen können substituierte sein, so lange die Substituenten oder der Substituent in nicht nachteiliger Weise die Fluororeszenz beeinflußt. Beispielsweise ist die Sub­ stitution mit einer oder mehreren Sulfonsäuregruppen bevorzugt, insbesondere dann, wenn die Verbindung in einem wäßrigen Strömungsmittel oder einem wäßrigem Fluid aufgelöst werden soll für die Detektion von Sacchariden, die darin enthalten sind, da dies der Verbindung die Eigenschaft der Wasserlöslichkeit erteilt. Das am meisten bevorzugte Fluorophor wird durch Anthryl exemplifiziert.
In der Formel (1) bezeichnet R kombiniert mit dem Stick­ stoffatom, eine niedrigere aliphatische oder aromatische Funktionsgruppe. Im allgemeinen ist R eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, d. h. Methyl, Ethyl, Pro­ pyl oder Butyl oder eine Phenylgruppe.
In der Formel (1) ist in gleich 0, 1 oder 2. Somit ist das Stickstoffatom in der Verbindung der vorliegenden Erfin­ dung in der Nähe der Boronsäuregruppierung angeordnet und das Stickstoffatom ist durch die Methylengruppe oder Ethylengruppe oder direkt kombiniert an der Ortho-Posi­ tion der Phenylboronsäure. Vorzugsweise ist m gleich 1 und somit ist der Stickstoff mit der Phenylgruppe durch eine Methylengruppe kombiniert.
In der Formel (1) ist n also 0, 1 oder 2, wobei n + m eine ganze Zahl von 2 oder 3 ist. Somit ist das Stickstoffatom und die Boronsäure nicht so weit weg von dem Fluorophor positioniert. Vorzugsweise ist n gleich 1.
Die die Phenylboronsäure bildende Phenylgruppe kann durch einen geeigneten Substituenten oder durch geeignete Sub­ stituenten substituiert sein, so lange nur diese Substi­ tution die Fluoreszenz nicht nachteilig beeinflußt. Bei­ spiele von Substituenten sind Methyl-, Ethyl-, Pro­ pyl-, Butyl-, Phenyl-, Methoxy-, Ethoxy-, Butoxy- und Phenoxygruppen.
Die durch die Formel (1) ausgedrückte erfindungsgemäße Verbindung enthält ein Fluorophor in seiner Molekularstruktur, aber emittiert keine Fluoreszenz bei Abwesenheit von Sacchariden. Das Verständnis geht dahin, daß dies daran liegt, weil die Fluoreszenz des Fluorophors unter­ drückt wird durch das nicht-geteilte Elektronenpaar des Stickstoffatoms: das Elektron des Stickstoff besitzt den niedrigsten angeregten Singulett Energiezustand des Fluorophors, um so die Fluoreszenz zu unterdrücken. Die erfindungsgemäße Verbindung emittiert jedoch Fluoreszenz mit einer hohen Intensität bei der Bindung mit Sacchari­ den. Dieses Phänomen kann wie folgt erläutert werden: Das Vorhandensein von Sacchariden erzeugt eine Verbindung zwischen dem Stickstoffatom (N) und dem Boratom (B) zur Bildung eines starken Komplexes aus dem Saccharid mit der Phenylboronsäureverbindung der Erfindung, wobei das elektronendeffiziente oder arme Boratom eine Bindung mit dem elektronenreichen Stickstoff hat. Somit wird das nicht-geteilte Elektronenpaar des Stickstoffatoms ver­ wendet für die Bindung mit dem Boratom und trägt nicht bei zu dem Fluoreszenz unterdrückenden Elektrogentrans­ ferprozeß, wodurch die intrinsische Fluoreszenz der Verbindung ausgedrückt wird.
Eine typische Verbindung, die im Bereich der Formel (1) der Erfindung fällt, ist die folgende Verbindung mit der Formel (6), wobei F (das Fluorophor) Anthryl ist, R ist Methyl und jeder der Werte n und m ist 1:
Diese Verbindung zeigt eine Fluoreszenzemission einer stark erhöhten Intensität in der Anwesenheit von Mono­ sacchariden, wie beispielsweise D- Glucose und D-Fruc­ tose. Auf diese Weise ist die Verbindung geeignet zur Verwendung bei der Detektion von Monosacchariden im all­ gemeinen oder selbst einem speziellen Monosaccharid. Bei der Detektion eines speziellen Monosaccharids aus einer Probe, die viele Monosaccharide enthalten kann, wird die Probe im allgemeinen einer Vorbehandlung (beispielsweise einer Chromatographie) unterworfen, und zwar für die Trennung der Monosaccharide gefolgt von der Detektion mit der fluoreszenten Verbindung der vorliegenden Erfindung.
Die Detektion mit der fluoreszenten Verbindung der vor­ liegenden Erfindung wird ausgeführt durch Zugabe der Verbindung zu der Probe und durch ein photoskopisches Verfahren, wobei die erhöhte Intensität der Fluoreszenz bestimmt wird, und zwar infolge der Verbindung mit dem Saccharid. Alternativ kann die Detektion mit der erfin­ dungsgemäßen fluoreszenten Verbindung durchgeführt werden durch ein chromatographisches Verfahren, wo die erfin­ dungsgemäße Verbindung auf einem Tragmaterial getragen wird, durch welches die saccharidenthaltende Probe ge­ leitet wird zum Zwecke der Detektion, basierend auf der erhöhten Fluoreszenzintensität infolge des Komplexes der Verbindung und des Saccharids.
Gemäß dem erfindungsgemäßen Konzept kann auch eine Ver­ bindung vorgesehen sein, die in selektiver Weise sich mit einem speziellen Saccharid verbindet, wodurch eine stark erhöhte Fluoreszenz vorgesehen wird. Insbesondere sieht die vorliegende Erfindung eine Fluoreszenzverbindung vor, die die folgende allgemeine Formel (7) besitzt:
In der oben angegebenen Formel bezeichnen n und m jeweils 0, 1 oder 2, wobei n + m 2 oder 3 ist. F repräsentiert ein Fluorophor und R repräsentiert eine niedrigere aliphati­ sche oder aromatische Funktionsgruppe.
Die Verbindung der Formel (7) ist gekennzeichnet durch ihre selektive Bindung mit Glucose, was eine starke Fluoreszenz zur Folge hat. Die Verbindung ist daher zur Verwendung bei der Detektion von Glucose geeignet.
In der Formel (7) bezeichnen n und m jeweils eine ganze Zahl, wobei n+m 2 oder 3 sind. Jede der Größen n und m kann 0 sein; somit bezeichnen n und m jeweils 0, 1, 2 oder 3. Vorzugsweise ist n + m 2, wobei jeder der Werte n und m 0, 1 oder 2 ist, wobei beide Werte n und m am be­ vorzugtesten 1 sind. Eine derartige spezifische Länge der Methylen(CH2)-Gruppe oder Gruppierung der erfindungsge­ mäßen Verbindung, ausgedrückt durch die Formel (7), sieht eine Molekularstruktur vor, die geeignet ist, um Glucose zu binden, und zwar durch zwei Boronsäuregruppen oder -gruppierungen der Verbindung.
In der Formel (7) werden die Fluorophore exemplifiziert durch eine Zahl der Atomgruppen oder funktionellen Grup­ pen, die n-Elektronensysteme enthalten. Als bevorzugte Fluorophore sind mitumfaßt die folgenden: Naphthyl, Anthryl, Pyrenyl und Phenanthryl, die ausgedrückt werden können durch die oben genannten Strukturformel (2) bzw. (3) bzw. (4) bzw. (5).
Die fluorophorbildenden Atom- oder Funktionsgruppen können substituierte Gruppen sein, so lange die Substi­ tuenten oder der Substituent nicht in nachteiliger Weise die Fluoreszenz beeinflussen oder beeinflußt. Beispiels­ weise ist die Substitution mit Sulfonsäuregruppen oder eine Sulfonsäuregruppe bevorzugt, da dies der Verbindung Wasserlöslichkeit gibt. Das am meisten bevorzugte Fluor­ phor ist durch Anthryl exemplifiziert.
In der Formel (7) bezeichnet R kombiniert mit dem Stick­ stoffatom eine niedrige aliphatische oder aromatische Funktionsgruppe. Im allgemeinen ist R eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlentoffatomen, d. h. Methyl, Ethyl, Propyl oder Butyl oder eine Phenylgruppe.
Bevorzugte Verbindungen der Erfindung fallen in dem Be­ reich der Formel (7) und sind exemplifiziert durch die folgenden Verbindungen (8), (9), (10) und (11), von denen die Verbindung (8) besonders bevorzugt ist.
Überraschenderweise emittieren die erfindungsgemäßen Verbindungen typifiziert durch die Verbindung (8) eine starke Fluoreszenz insbesondere in Anwesenheit von Glu­ cose in einer wäßrigen Lösung mit einer Konzentration entsprechend derjenigen, wie sie in den menschlichen Körperfluids (50-250 mg/l oder 0,0005 M-0,001 M) gefunden wird, und zwar mit einem pH-Wert, der der Neutralität oder nahe Neutralität entspricht. Eine derartige starke Fluoreszenzintensität ändert sich selbst dann nicht in Koexistenz mit anderen Sacchariden, wie beispielsweise Galactose oder Fructose.
Die Emission der starken Fluoreszenz durch die Verbindung (7) der Erfindung in Anwesenheit von Glucose kann wie folgt erläutert werden: Die zwei Boronsäuregruppierungen, wie sie in der Struktur der Formel (7) angeordnet sind, sind geeignet zur kovalenten Bindung mit den vier Hydro­ xylgruppen (OH-Gruppen) an den 1, 2, 4 und 6 Positionen der Glucose, wodurch ein stabiler 1 : 1-Komplex der Ver­ bindung mit Glucose gebildet wird, indem das Unterdrücken (quenching) durch das Stickoffatom in sicherer Weise verhindert wird.
Im Gegensatz dazu können andere Saccharide, wie bei­ spielsweise Fructose, möglicherweise eine Bindung ein­ gehen nur mit einer der zwei Boronsäuregruppierungen, in welchem alle nur eine sehr schwache Fluoreszenz beobach­ tet wird. In der Tat kann keine wesentliche Fluoreszenz beobachtet werden durch Saccharide wie Fructose oder Ga­ lactose, in ihren Konzentrationen wie sie in menschlichen Körperfluids auftreten.
Somit kann die erfindungsgemäße Verbindung typifiziert durch die Formel (8) eine starke Fluoreszenz, insbeson­ dere mit Glucose emittieren, und zwar infolge der spe­ ziellen Anordnung des Fluorophors, der zwei Boronsäure­ gruppierungen und des Stickstoffatoms und daher ist die Verbindung geeignet zur Verwendung bei der Detektion von Glucose. Wenn die Detektion mit einer Lösung durchgeführt wird, kann die Bindung zwischen Glucose und der Fluores­ zenzverbindung leicht gespalten werden durch Änderung des pH-Werts der Lösung durch eine geeignete Säure, wodurch die Glucose wiederhergestellt wird.
Im allgemeinen kann die erfindungsgemäße Verbindung her­ gestellt werden dadurch, daß man einer Phenylboronsäure, bei der die Ortho-Position alkylhalogenisiert ist, ge­ stattet mit einem Reagens zu reagieren, welches aus Al­ kylaminomethylgruppen oder einer Alkylaminomethylgruppe steht, und zwar verbunden mit einem Fluorophor, und zwar ferner in Anwesenheit einer Base und mit einem geeigneten Lösungsmittel.
Durch die Anwendung der vorliegenden Erfindung können Saccharide, wie beispielsweise Glucose, mit sehr stabiler synthetischer Verbindung detektiert werden, und zwar im Gegensatz zu dem konventionellen enzymatischen Verfahren, bei dem ziemlich instabile Enzyme für die Detektion von Glucose verwendet werden müssen. Darüber hinaus kann bei der Durchführung des Sacchariddetektionsverfahrens mit der erfindungsgemäßen Erfindung eine Probe in Takt ge­ messen werden, d. h. ohne daß sie durch das enzymatische Verfahren zerlegt werden müßte, und daher kann die Probe einer weiteren Messung oder Behandlung unterzogen werden.
Die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindung macht es möglich, ein Saccharid oder Saccharide durch spektrosko­ pische Mittel zu detektieren, und zwar ohne Zerlegung der Saccharide. Die Technologie hat somit gute Aussichten bei der Entwicklung in ein Verfahren, bei dem die Detek­ tion in situ erfolgen kann, und zwar im Hinblick auf eine spezielle Region eines Organs im Körper. Beispielsweise kann durch Verwendung einer optischen Faser, deren Spitze mit einer Verbindung der vorliegenden Erfindung überzogen ist, die Information hinsichtlich Saccharid innerhalb des Körpers kontinuierlich überwacht werden, um so zweckmäßige klinische Daten vorzusehen.
Weitere Vorteile, Ziele und Einzelheiten der Erfindung ergeben sich aus der Bescheibung von Ausführungsbei­ spielen anhand der Zeichnung, in der Zeichnung zeigt:
Fig. 1 ein Schema, welches die Synthese einer erfin­ dungsgemäßen Fluoreszenzverbindung veran­ schaulicht;
Fig. 2 die Fluoreszenzintensitäten der erfindungsgemäßen Verbindung in Anwesenheit von Monosacchariden;
Fig. 3 ein Schema, welches die Synthese einer weiteren Fluoreszenzverbindung der Erfindung darstellt;
Fig. 4 die Fluoreszenzintensitäten der erfindungsgemäßen Verbindung in Anwesenheit vorn Glucose und anderen Monosacchariden.
Es sei bemerkt, daß in den hier angegebenen chemischen Strukturformeln wie üblich die Kohlenstoffatome und die Stickstoffatome in dem Methyl- oder Methylengruppen weg­ gelassen wurden.
Die Erfindung sei nunmehr zur Erleichterung des Ver­ ständnisses anhand der folgenden Beispiele erläutert.
Beispiel 1
Die Fluoreszenzverbindung der Formel (6) wird entspre­ chend dem synthetischen Routen gemäß Fig. 1 hergestellt.
Als erstes wird die Phenylboronsäure, wie folgt herge­ stellt: Orthobromtoluol wird mit Magnesium (1,1-Äqui­ valente in Diethylether bei 25°C zur Reaktion gebracht. Das Grignrad-Reagens wird tropfenweise einer Lösung aus Trimethylborat (10 Äquivalente) in Diethylether bei -78°C zugegeben. Die Mischung wird weitere 2 Stunden gerührt und sodann gestattet, daß sie sich auf Raumtemperatur erwärmt und sie wird für weitere 2 Stunden gerührt. Der Diethylether wird durch reduziertem Druck entfernt und der Feststoff wird aus Wasser rekristallisiert. Das Bo­ ronsäureprodukt wird in einem Vakuumofen über Nacht ge­ trocknet.
Das Boronsäureanhydrid wird mit NBS (N-Bromsuccinimid) (1,1 Äquivalente) und katalytischem AIBN (Azoisobutyl­ nitril), in Tetrachlorkohlenstoff als Lösungsmittel ge­ mischt. Die Mischung wird rückgeführt oder "refluxed", und zwar unter der Bestrahlung einer 200-Watt-Lampe für 2 Stunden. Die Lösung wird, wenn sie heiß ist, gefiltert und das Lösungsmittel wird entfernt, um das gewünschte Bromethylboronsäureanhydrid zu ergeben.
Das Brommethylboronsäureanhydrid wird mit 9-Methylamino­ methylanthracen (2,1 Äquivalente) in Chloroform gemischt und 2 Stunden lang rückgeleitet oder "refluxed". Wenn die Mischung kalt ist, wird sie gefiltert und das Lösungs­ mittel wird entfernt. Der Feststoff wird dann mit Di­ ethylether gewaschen und aus Ethylacetat rekristalli­ siert, um das gewünschte Produkt zu ergeben.
Analyse des Produkts: PMR (CDCL3); chemische Verschiebung (ppm): 2,2 (3H, s), 3,9 (2H, s); 4,5 (2H, s), 7,4 (4H, m), 8,0 (4H, m), 8,4 (1H, s).
MS (SIMS negativ): Masse plus Glykol minus 2 Wasser und 1 Proton 410.
Beispiel 2
Die Verbindung der Formel (6) wird wie in Beispiel 1 her­ gestellt und hinsichtlich Fluoreszenz gemessen, um die Anwendbarkeit der Verbindung auf die Sacchariddetektion auszuwerten.
Eine wäßrige Lösung der Verbindung (1,2 × 10-5 M) wurde hergestellt, und zwar enthielt sie Natriumchlorid (0,05 M). Der Lösung wurde ein Saccharid (D-Glucose oder D-Fructose) in einer Konzentration von 0,05 M zugegeben, um das Gesamtvolumen der resultierenden Mischung von 100 ml zu erhalten. Die Messungen wurden ausgeführt unter Veränderung des pH-Wertes von annähernd 12 durch die schrittweise Zugabe von HCl. Die aus der Lösung entnom­ mene Probe wird der Messung des Fluoreszenzspektrums ausgesetzt, nachdem der pH-Wert stabilisiert wurde und wurde sodann der Lösung zurückgeführt, und zwar gefolgt von der Zugabe von HCl zur Einstellung des pH-Werts für die weitere Messung. Die Fluoreszensspektren wurden auf einem Hitachi-Fluorophotospektrometer F-4500 gemessen, indem UV für die Anregung verwendet wird. Die Ergebnisse sind in Fig. 2 gezeigt.
Wie man aus Fig. 2 ersieht, hat die Verbindung (6) eine sehr niedrige Fluoreszenzintensität über den pH-Wertbe­ reich von ungefähr 3 bis zu den höheren pH's, was nahe­ liegt, daß die Fluoreszenz infolge von Anthracen unter­ drückt wird. In Anwesenheit von Sacchariden wird jedoch die Fluoreszenz stark erhöht, und zwar über einen breiten pH-Wertbereich von 4 bis 10. Es ist daher zu ersehen, daß die Verbindung (6) für die Detektion von Sacchariden durch Fluoreszenz verwendet werden kann.
Beispiel 3
Die Fluoreszenzverbindung der Formel (8) wird hergestellt nach den Synthesewegen gemäß Fig. 3.
Die Orthomethylboronsäure wird bromiert mit NBS, und zwar in Tetrachlorkohlenstoff mit AIBN als Initiator unter Rückflußbedingungen und Beleuchtung über 3 Stunden hinweg (Ausbeute 60%) (i). Die sich ergebende Orthobromme­ thylboronsäure wird sodann zur Reaktion gebracht mit 2,2- Diemethyl-1,3-propandiol in Toluol mit azeotropischer Entfernung von Wasser über Nacht (Dean Stark) (quanti­ tative Ausbeute) (ii).
Die geschützte oder erhaltene Orthobrommethylboronsäure wird sodann mit Anthryldiamin und Kaliumcarbonat in THF unter Rückflußbedingungen über Nacht zur Reaktion ge­ bracht (Ausbeute 5% isoliert) (iii). Die schützende Gruppe wird entfernt, und zwar in 33,3% MeOH/H2O mit einem pH-Wert 7,7 und Raumtemperatur (iv).
Analyse des Produkts (geschützte Diboronsäure): PMR (CDCL3, 300 MHz), chemische Verschiebung (ppm) 8,4 (m, aromatisch, 16H), 4,4 (s, CH2 (anthrylisch), 4H) 3,3, (s CH2 benzylisch) 4H), 3,6 (s,CH2 (schützende Gruppe), 8H), 2,2 (s, CH3N, 6H), 0,9 (s, CH3 (schützende Gruppe), 12H).
MS (SIMS; NPOE) Masse plus 668.
Beispiel 4
Die Verbindung der Formel (8), wie sie in Beispiel 3 hergestellt wurde, wird hinsichtlich Fluoreszenz gemes­ sen, und die Anwendbarkeit der Verbindung zur Glucose­ detektion auszuwerten.
Die Diboronsäureverbindung (8) wird in einer gepufferten (pH 7,77, 0,01 M KCl, 0,000262 M KH2PO3 wäßrigen Methanol­ säurelösung (33% Methanol Wasser) aufgelöst. Portionen oder Teile von Sacchariden wurden in 100 ml der Lösung zugegeben und die Fluoreszenzspektra wurden auf einem Hitachi F-4500 Fluorospektrophotometer gemessen, und zwar zusammen mit einem Hewlett Packard VETRA 286/12 Computer. UV (370 nm) wurde zur Anregung verwendet.
Die Ergebnisse sind in Fig. 4 gezeigt, wobei die Abszisse die logarithmische Molarkonzentration des Saccharids und die Ordinate die relative Fluoreszenzintensität angibt. Wie man aus der Figur erkennt, emittiert die Verbindung (8) der vorliegenden Erfindung eine starke Fluoreszenz insbesondere bei Anwesenheit von Glucose selbst in einer relativ geringen Konzentration. Es sei besonders darauf hingewiesen, daß die Fluoreszenzintensität linear mit der Saccharidkonzentration ansteigt, und zwar im Bereich von 0,0005 M bis 0,001 M entsprechend der Glucosekonzentration, die normalerweise in menschlichen Körperfluids gemessen wird. Dieser Trend gilt nicht nur im Falle des Vorhan­ denseins von Glucose allein, sondern auch im Falle des Vorhandenseins von Glucose gleichzeitig mit anderen Sacchariden, wie beispielsweise Galactose oder Fructose.
Im Gegensatz dazu entwickelt die Verbindung (8) nahezu keine Fluoreszenz bei Anwesenheit von Ethylenglykol als Kontrollmittel. Bezüglich Galactose oder Fructose zeigt die Verbindung keine substantielle Fluoreszenz selbst bei der maximal möglichen Konzentration eines solchen Sac­ charids in den Körperfluids (0,0001 M), sondern entwickelt die Fluoreszenz nur dann, wenn die Konzentration dieser Saccharide höher ist um eine oder zwei Größenordnungen. Es ist daher verständlich, daß die Verbindung (8) der vorliegenden Erfindung bei der Detektion von Glucose verwendet werden kann, da sie starke Fluoreszenz, insbe­ sondere in Anwesenheit von Glucose emittiert.
Zusammenfassend sieht die Erfindung folgendes vor:
Eine Fluoreszenzverbindung mit einer Molekularstruktur, die ein Fluorophor aufweist, mindestens eine Phenylbo­ ronsäuregruppierung und mindestens ein aminvorsehendes Stickstoffatom, wobei das Stickstoffatom in der Nähe der Phenylboronsäuregruppierung angeordnet ist, um so in Wechselwirkung zu treten in intermolekularer Hinsicht mit der Boronsäure. Die Verbindung emittiert Fluoreszenz mit einer hohen Intensität bei der Bindung mit Sacchariden oder einem Saccharid und die Verbindung ist daher geeig­ net zur Verwendung bei der Detektion eines oder mehrerer Saccharide.

Claims (7)

1. Eine Fluoreszenzverbindung mit einer Molekularstruk­ tur, die ein Fluorophor aufweist, mindestens eine Phenylboronsäuregruppierung und mindestens ein aminvorsehendes Stickstoffatom, wobei das Stick­ stoffatom in der Nähe der Phenylboronsäuregrup­ pierung angeordnet ist, um so intermolekular mit der Boronsäure in Wechselwirkung zu treten.
2. Eine Fluoreszenzverbindung mit der folgenden all­ gemeinen Formel:
wobei F ein Fluorophor repräsentiert, R ausgewählt ist aus der Gruppe, die aus niedrigen aliphatischen und aromatischen Funktionsgruppen besteht, und n und m jeweils 0, 1 oder 2 ist, wobei n+m 2 oder 3 ist.
3. Eine Fluoreszenzverbindung nach Anspruch 2, wobei F ausgewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Naphthyl, Anthryl, Pyrenyl und Phenanthryl.
4. Eine Fluoreszenzverbindung der folgenden Formel:
5. Eine Fluoreszenzverbindung der folgenden allgemeinen Formel:
wobei F ein Fluorophor repräsentiert, R ausgewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus niedrigen aliphati­ schen und aromatischen Funktionsgruppen und n und m jeweils 0, 1 oder 2 sind und n+m 2 oder 3 sind.
6. Eine Fluoreszenzverbindung nach Anspruch 5, wobei F aus der Gruppe ausgewählt ist, die besteht aus Naphthyl, Anthryl, Pyrinyl und Phenantryl.
7. Eine Fluoreszenzverbindung mit der folgenden Formel:
DE4439783A 1993-11-07 1994-11-07 Fluoreszente Verbindung Expired - Fee Related DE4439783C2 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP30238593 1993-11-07
JP14706194 1994-06-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE4439783A1 true DE4439783A1 (de) 1998-05-07
DE4439783C2 DE4439783C2 (de) 2002-08-08

Family

ID=26477728

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE4439783A Expired - Fee Related DE4439783C2 (de) 1993-11-07 1994-11-07 Fluoreszente Verbindung

Country Status (3)

Country Link
US (1) US5503770A (de)
DE (1) DE4439783C2 (de)
GB (1) GB2284809B (de)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6387672B1 (en) 2000-12-04 2002-05-14 Beckman Coulter, Inc. Photo-induced electron transfer fluorescent sensor molecules
US7358094B2 (en) 2003-05-01 2008-04-15 Bell Michael L Sensor system for saccharides

Families Citing this family (89)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2799837B2 (ja) * 1995-03-03 1998-09-21 科学技術振興事業団 ビナフチル基を有するボロン酸化合物
US6011984A (en) * 1995-11-22 2000-01-04 Minimed Inc. Detection of biological molecules using chemical amplification and optical sensors
US6002954A (en) * 1995-11-22 1999-12-14 The Regents Of The University Of California Detection of biological molecules using boronate-based chemical amplification and optical sensors
US6766183B2 (en) 1995-11-22 2004-07-20 Medtronic Minimed, Inc. Long wave fluorophore sensor compounds and other fluorescent sensor compounds in polymers
US6026127A (en) * 1995-12-28 2000-02-15 National Semiconductor Corporation Autozero technique for a phase locked loop system
US6544193B2 (en) * 1996-09-04 2003-04-08 Marcio Marc Abreu Noninvasive measurement of chemical substances
US6120460A (en) * 1996-09-04 2000-09-19 Abreu; Marcio Marc Method and apparatus for signal acquisition, processing and transmission for evaluation of bodily functions
AU5446098A (en) 1996-11-21 1998-06-10 Lawrence Livermore National Laboratory Detection of biological molecules using boronate-based chemical amplification and optical sensors
CA2322858C (en) * 1998-03-11 2009-06-02 Sensors For Medicine And Science, Inc. Detection of analytes by fluorescent lanthanide chelates
US6558320B1 (en) * 2000-01-20 2003-05-06 Medtronic Minimed, Inc. Handheld personal data assistant (PDA) with a medical device and method of using the same
AU2189400A (en) 1998-12-18 2000-07-03 Minimed, Inc. Insertion sets with micro-piercing members for use with medical devices and methods of using the same
AU2858100A (en) * 1999-01-22 2000-08-07 University Of Maryland At Baltimore Glucose sensing using metal-ligand complexes
GB9919129D0 (en) * 1999-08-13 1999-10-13 Avecia Ltd Detection of polyhydroxyl compounds
EP1206213B1 (de) * 1999-08-26 2005-01-26 Novartis AG Augenanalytfühler
US6366793B1 (en) * 1999-09-10 2002-04-02 Beckman Coulter, Inc. Minimally invasive methods for measuring analtes in vivo
US6682938B1 (en) 1999-09-15 2004-01-27 The Regents Of The University Of California Glucose sensing molecules having selected fluorescent properties
US6673625B2 (en) 1999-09-15 2004-01-06 The Regents Of The University Of California Saccharide sensing molecules having enhanced fluorescent properties
EP1214596A1 (de) * 1999-09-15 2002-06-19 The Regents Of The University Of California Für glukose sensitive moleküle mit ausgesuchten fluoreszenseigenschaften
WO2001074968A2 (en) * 2000-04-04 2001-10-11 The Regents Of The University Of California Saccharide sensing molecules having enhanced fluorescent properties
US20020043651A1 (en) * 2000-04-04 2002-04-18 Darrow Christopher B. Fluorescent lifetime assays for non-invasive quantification of analytes such as glucose
EP1557422B1 (de) * 2000-08-04 2013-12-25 Senseonics, Incorporated Nachweis von Analyten in wässrigen Medien
GB0023439D0 (en) * 2000-09-25 2000-11-08 Avecia Ltd Detection of fluoride
US6664407B2 (en) * 2000-12-04 2003-12-16 Beckman Coulter, Inc. Electrochemical saccharide sensor
US6627177B2 (en) * 2000-12-05 2003-09-30 The Regents Of The University Of California Polyhydroxyl-substituted organic molecule sensing optical in vivo method utilizing a boronic acid adduct and the device thereof
US6653141B2 (en) 2000-12-05 2003-11-25 The Regents Of The University Of California Polyhydroxyl-substituted organic molecule sensing method and device
US7470420B2 (en) 2000-12-05 2008-12-30 The Regents Of The University Of California Optical determination of glucose utilizing boronic acid adducts
DE10063983A1 (de) * 2000-12-14 2002-07-04 Iom Innovative Optische Mestec Verfahren und Vorrichtung zum Nachweis von Zuckerkonzentrationen
US6800451B2 (en) * 2001-01-05 2004-10-05 Sensors For Medicine And Science, Inc. Detection of glucose in solutions also containing an alpha-hydroxy acid or a beta-diketone
US20020119581A1 (en) * 2001-01-05 2002-08-29 Daniloff George Y. Detection of analytes
AU2002251944A1 (en) 2001-02-15 2002-09-04 Medtronic Minimed, Inc. Polymers functionalized with fluorescent boronate motifs
US7045361B2 (en) 2001-09-12 2006-05-16 Medtronic Minimed, Inc. Analyte sensing via acridine-based boronate biosensors
US20030092008A1 (en) * 2001-11-14 2003-05-15 Bell Michael L. Method and apparatus for multiplex flow cytometry analysis of diverse mixed analytes from bodily fluid samples
US7500949B2 (en) 2002-03-01 2009-03-10 Medtronic Minimed, Inc. Multilumen catheter
CN100549009C (zh) * 2002-03-14 2009-10-14 医药及科学传感器公司 从含有α-羟基酸或β-二酮的溶液中检测葡萄糖的组合物及方法
US8328420B2 (en) 2003-04-22 2012-12-11 Marcio Marc Abreu Apparatus and method for measuring biologic parameters
US9848815B2 (en) 2002-04-22 2017-12-26 Geelux Holdings, Ltd. Apparatus and method for measuring biologic parameters
US8849379B2 (en) * 2002-04-22 2014-09-30 Geelux Holdings, Ltd. Apparatus and method for measuring biologic parameters
IL164685A0 (en) 2002-04-22 2005-12-18 Marcio Marc Aurelio Martins Ab Apparatus and method for measuring biologic parameters
AU2003249636A1 (en) * 2002-05-14 2003-11-11 North Carolina State University Fluorescent sensor compounds for detecting saccharides
US20040087842A1 (en) * 2002-05-30 2004-05-06 Lakowicz Joseph R. Fluorescent probes for saccharrides
ITFI20030056A1 (it) * 2003-03-05 2004-09-06 Univ Firenze Nuovi agenti coloranti
US7297548B2 (en) * 2003-03-28 2007-11-20 Terumo Kabushiki Kaisha Solid-phase saccharide sensing compounds
WO2005029033A2 (en) * 2003-09-17 2005-03-31 University Of Maryland Biotechnology Institute Cyanide sensing compounds and uses thereof
US7368085B2 (en) * 2003-12-04 2008-05-06 Honeywell International Inc. Analyte detector
US8029765B2 (en) 2003-12-24 2011-10-04 Masimo Laboratories, Inc. SMMR (small molecule metabolite reporters) for use as in vivo glucose biosensors
US10227063B2 (en) 2004-02-26 2019-03-12 Geelux Holdings, Ltd. Method and apparatus for biological evaluation
US7450980B2 (en) * 2004-03-31 2008-11-11 Terumo Kabushiki Kaisha Intracorporeal substance measuring assembly
US7713745B2 (en) * 2004-04-13 2010-05-11 Sensors For Medicine And Science, Inc. Non-covalent immobilization of indicator molecules
DE602005000858T2 (de) * 2004-07-23 2008-01-17 Terumo K.K. Saccharid-messender fluoreszierender Monomer, Saccharid-messende fluoreszierende Sensor-Substanz und implantierbarer, Saccharid-messender Sensor
EP1653138A1 (de) * 2004-10-28 2006-05-03 Esser-Werke KG Förderrohr für den Feststofftransport
EP2161575A3 (de) * 2004-10-29 2010-03-31 The University of Akron Analyse von Glukose-Produkten mit Hilfe von Pyridinylboronsäure
JP4558448B2 (ja) * 2004-11-01 2010-10-06 テルモ株式会社 光導波路およびこの光導波路を用いた蛍光センサ
US7629174B2 (en) * 2005-08-26 2009-12-08 Honeywell International Inc. Analyte detector
BRPI0617782A2 (pt) 2005-10-24 2011-08-09 Marcio Marc Abreu aparelho e método para medir parámetros biológicos
ATE514755T1 (de) * 2006-07-25 2011-07-15 Glumetrics Inc Fluoreszenzfarbstoffe zur verwendung bei der glukoseerfassung
US7851225B2 (en) 2006-11-30 2010-12-14 Sensors For Medicine And Science, Inc. Oxidation resistant indicator molecules
US7751863B2 (en) 2007-02-06 2010-07-06 Glumetrics, Inc. Optical determination of ph and glucose
US7829341B2 (en) 2007-07-11 2010-11-09 Glumetrics, Inc. Polyviologen boronic acid quenchers for use in analyte sensors
EP2120680A2 (de) 2007-02-06 2009-11-25 Glumetrics, Inc. Optische systeme und verfahren zur ratiometrischen messung der blutzuckerkonzentration
JP5517919B2 (ja) * 2007-05-10 2014-06-11 グルメトリクス、 インク． 即時血管内グルコース測定のための平衡非消費蛍光センサー
EP2150814A2 (de) * 2007-05-10 2010-02-10 Glumetrics, Inc. Vorrichtung und verfahren zur kalibrierung von analytsensoren
EP2181160B1 (de) 2007-08-06 2016-05-11 Medtronic Minimed, Inc. POLYMERISIERBARE HPTS-MONO-cysMA-LEUCHTFARBSTOFFE FÜR ANALYTSENSOREN
US20090247984A1 (en) * 2007-10-24 2009-10-01 Masimo Laboratories, Inc. Use of microneedles for small molecule metabolite reporter delivery
WO2009067626A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Glumetrics, Inc. Use of an equilibrium intravascular sensor to achieve tight glycemic control
WO2009129186A2 (en) * 2008-04-17 2009-10-22 Glumetrics, Inc. Sensor for percutaneous intravascular deployment without an indwelling cannula
JP2013506503A (ja) 2009-09-30 2013-02-28 グルメトリクス， インコーポレイテッド 抗血栓性コーティングを備えたセンサー
US8467843B2 (en) 2009-11-04 2013-06-18 Glumetrics, Inc. Optical sensor configuration for ratiometric correction of blood glucose measurement
WO2011075710A1 (en) * 2009-12-17 2011-06-23 Glumetrics, Inc. Identification of aberrant measurements of in vivo glucose concentration using temperature
EP2534470B1 (de) 2010-02-08 2016-08-10 Medtronic Minimed, Inc. Antioxydant-schutz eines chemischen sensors
WO2011113020A1 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 Glumetrics, Inc. Measurement devices and methods for measuring analyte concentration incorporating temperature and ph correction
WO2012043177A1 (ja) 2010-09-30 2012-04-05 テルモ株式会社 蛍光ハイドロゲルおよびその製造方法、ならびにそれを用いた糖類測定用センサー
CN102762254B (zh) 2011-02-18 2015-09-23 麦德托尼克公司 模块化医疗设备编程器
US8352034B2 (en) 2011-02-18 2013-01-08 Medtronic, Inc. Medical device programmer with adjustable kickstand
US9051598B2 (en) 2011-05-02 2015-06-09 The Hong Kong University Of Science And Technology Specific detection of D-glucose by a tetraphenylethene-base fluorescent sensor
GB201113435D0 (en) 2011-08-03 2011-09-21 Glysure Ltd Sensor calibration
WO2013012687A2 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Glumetrics, Inc. Combinations of fluorphores and pyridinium boronic acid quenchers for use in analyte sensors
EP2760432B1 (de) 2011-09-27 2019-03-20 Medtronic Minimed, Inc. Verfahren zur funktionalisierung einer porösen membran als abdeckung eines optischen sensors zur ermöglichung der kopplung eines antithrombotikums
US9017622B2 (en) 2012-04-10 2015-04-28 Lightship Medical Limited Calibrator for a sensor
US20130344619A1 (en) 2012-06-21 2013-12-26 Lightship Medical Limited Glucose sensor
WO2014003075A1 (ja) 2012-06-26 2014-01-03 京セラ株式会社 センサ、検出方法、検出システム、及び、検出装置
US10017525B2 (en) 2012-07-16 2018-07-10 Yeda Research And Development Co. Ltd. Multi-sensor array compound and methods of use thereof
US8834401B2 (en) 2012-11-26 2014-09-16 Becton, Dickinson And Company Glucose management and dialysis method and apparatus
EP3055659A4 (de) 2013-10-11 2017-12-06 Marcio Marc Abreu Verfahren und vorrichtung für biologische evaluierung
EP3091895A4 (de) 2014-01-10 2017-08-23 Marcio Marc Abreu Vorrichtung zur messung der infrarotausgabe eines abreu-gehirntemperaturtunnels
US10251776B2 (en) 2014-01-10 2019-04-09 Geelux Holding, Ltd. Devices configured to monitor biological parameters, and to provide treatment, at an Abreu brain thermal tunnel
US10238847B2 (en) 2014-01-22 2019-03-26 Geelux Holdings, Ltd. Devices and methods for transdermal drug delivery
GB201403470D0 (en) * 2014-02-27 2014-04-16 Univ Bath Method
CA2978777A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Marcio Marc Abreu Devices, apparatuses, systems, and methods for measuring temperature of an abtt terminus
CN113637472B (zh) * 2021-08-04 2022-07-15 南开大学 具有良好生物相容性的脂质体葡萄糖荧光探针及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4659817A (en) * 1981-05-01 1987-04-21 The Children's Medical Center Corporation Reporter compounds containing boron
US4830786A (en) * 1986-02-27 1989-05-16 Syntex (U.S.A.) Inc. Squaraine dyes
DE3720736A1 (de) * 1987-06-23 1989-01-05 Erwin Dr Schleicher Verfahren, reagenzien und ausruestung zur einfachen bestimmung von nicht-enzymatisch glykosylierten proteinen in koerperfluessigkeiten

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6387672B1 (en) 2000-12-04 2002-05-14 Beckman Coulter, Inc. Photo-induced electron transfer fluorescent sensor molecules
US6740257B2 (en) 2000-12-04 2004-05-25 Beckman Coulter, Inc. Photo-induced electron transfer fluorescent sensor molecules
US7358094B2 (en) 2003-05-01 2008-04-15 Bell Michael L Sensor system for saccharides

Also Published As

Publication number Publication date
DE4439783C2 (de) 2002-08-08
GB9422327D0 (en) 1994-12-21
US5503770A (en) 1996-04-02
GB2284809B (en) 1998-04-29
GB2284809A (en) 1995-06-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE4439783C2 (de) Fluoreszente Verbindung
DE60018300T2 (de) 8-(anilino)-1-naphthalinsulfonatanaloge und ihre verwendung in analytendetektions-tests
DE69635822T2 (de) Beobachtung von verbindungen mittels elektrochemilumineszenz
DE3853825T2 (de) Ionophore als reagenz zur bestimmung von ionen.
DE69633212T2 (de) Elektroerzeugte chemilumineszierende markierungsmittel zur analyse und/oder zur referenzbildung
EP0887353B1 (de) Lumineszenzindikator
DE69520347T2 (de) Borsäure-Verbindungen mit einer Binaphthyl-Gruppe
DE2618419C2 (de) Heterogenes spezifisches Bindungsverfahren zur Bestimmung eines Liganden in einem flüssigen Medium
DE3851265T2 (de) Hydrolysierbare Verbindungen, die elektronübertragende Mittel freigeben und ihre analytische Verwendung.
DE2833612B2 (de) Mittel und Verfahren zur Bestimmung von Wasserstoffperoxyd
EP0423632B1 (de) Hydrolase-Substrate
DE69506394T2 (de) Verfahren zum kalibrieren chemischer tests
EP0098562B1 (de) Verfahren zur Bestimmung von direktem und Gesamt-Bilirubin sowie hierfür geeignetes Reagens
JP2883824B2 (ja) ボロン酸基を有する発蛍光性化合物
DE19639169A1 (de) Redoxaktive Verbindungen und deren Anwendung
DE69223851T2 (de) Nitro- oder Nitroso-substituierte polyhalogenierte Phenolsulfonphtaleine
CN107383078B (zh) 苯基硼酸酯化合物及包含该化合物的过氧化苯甲酰检测试剂盒
DE2858733C2 (de)
EP0156347A2 (de) Glycoside von Resorufin-Derivaten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Bestimmung der Aktivität von Glycosidasen
DE2305775A1 (de) Neue analytische verbindungen und deren verwendung
DE1959410B2 (de) Indikator zur bestimmung der reduzierten pyridincoenzyme
EP0248312A1 (de) 4,6-Dinitrobenzthiazolon-hydrazone (2)
DE3104078C2 (de) Verfahren zur Bestimmung des pH-Wertes im Innern einer Zelle; 1,4-Dibutyryloxy-2,3-dicyanobenzol; 1,4-Di(-tert-butyloxycarbonyl-l-alanyloxy)-2-3-dicyanobenzol
DE3443415C2 (de)
DE68917387T2 (de) Dioxetane zur verwendung bei immuntests.

Legal Events

Date Code Title Description
8110 Request for examination paragraph 44
D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
R119 Application deemed withdrawn, or ip right lapsed, due to non-payment of renewal fee

Effective date: 20120601