DE4127790A1

DE4127790A1 - Verwendung von oligopeptiden mit 2 bis 5 peptidbindungen fuer kosmetische zwecke und einige neue oligopeptid-metallkomplexe

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Publication number: DE4127790A1
Application number: DE19914127790
Authority: DE
Inventors: Des Erfinders Auf Nennung Verzicht
Original assignee: WANK ANNA 1000 BERLIN DE
Current assignee: WANK ANNA 1000 BERLIN DE
Priority date: 1991-08-22
Filing date: 1991-08-22
Publication date: 1993-02-25

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung bestimmter Oligopeptide, deren Salze, insbesondere deren Halogenide, und deren Metall komplexe für kosmetische Formulierungen, die allgemein der kos metischen Hautbehandlung wie Hautpflege, Hautkonditionierung, zum Beispiel unter Verbesserung des Feuchtigkeitshaltevermögens, und zur sonstigen, vorwiegend nicht-medizinischen Verbesserung des Hautzustandes dienen. Die Erfindung bezieht sich außerdem auf einige neue Oligopeptid-Metallkomplexe, die bei den vor stehend genannten Anwendungen eine besondere Wirksamkeit entfalten.

Diese Oligopeptid-Aktivatoren sind als Additive in ansonsten bekannten kosmetischen Formulierungen wie Cremes, Salben, Pudern, Gelen, Lotionen, Wässern, Ölen, Sprays und dergleichen, selbst in sehr geringen Mengen, von außerordentlich hoher Wirksamkeit, indem durch ihre Anwesenheit die Wirkung bzw. die Wirkungsrich tung des Kosmetikums merklich verbessert werden kann. Die erfin dungsgemäß verwendeten Oligopeptid-Aktivatoren sind peptidartig in der Natur als Sequenz von Proteinen gebunden, die in den Kolla genen, Bindegeweben, Elastinen, Keratinen, Fibronektinen und in anderen Stützproteinen vorkommen; zum Sequenzaufbau siehe R. Fleischmayer, B.R.Olsen, K. Kühn in Structure, Molecular Biology and Pathology of Collagen, Annals of the New York Academy of Science, Band 580, 1990.

Kollagene sind weitverbreitet auftretende Skleroproteine, die je nach Herkunft einen unterschiedlichen Aufbau zeigen. Bis heute kennt man die Typen I bis XI, wobei als Kollagene der Haut insbesondere die Typen I und III nachgewiesen worden sind. Kollagene sind aufgrund ihrer günstigen Eigenschaften häufig verwendete Bestandteile von Mitteln zur Hautbehandlung. Aufgrund seines hohen Wasserbindungsvermögens beeinflußt das Kollagen die Feuchtigkeitsregulierung der Haut positiv, es führt außerdem zur Glättung der Haut, stimuliert das Fibroblastenwachstum und die Wundheilung. Zahlreiche Kosmetika sind bekannt, die Kolla gen in nativer Form (siehe DE-OS 20 64 604) oder auch in ge zielt abgewandelter Form (siehe DE-OS 39 37 076) enthalten. Der Strukturaufbau des Kollagens ist durch die Aminosäure Gly cin bestimmt, die in der Region der Helices in jeder dritten Position steht und maßgeblich für die spezielle, eng gewundene Kollagenhelix verantwortlich ist. Auch die Aminosäuren Prolin und Hydroxyprolin sind in relativ hohen Anteilen enthalten. Bei der Hydrolyse des Kollagens (enzymatisch oder in Gegenwart von Säuren) entstehen die Kollagen-Abbauprodukte Gelatine und Glutin. Die als Abbauprodukte aufzufassenden Peptide des Kolla gens sind insbesondere bei Verknüpfung nur weniger Aminosäuren (bis zu den Dekapeptiden) ziemlich instabil, so daß es höchst zweifelhaft ist, ob Kollagenhydrolysate überhaupt nachweisbare Mengen an bestimmten Oligopeptiden wie Tri-, Tetra-, Penta- und Hexapeptiden aufweisen.

Im Zuge der vorliegenden Erfindung ist jedoch gefunden worden, daß gerade derartige Oligopeptide in kosmetischen Formulie rungen für deren spezifische Eigenschaften verantwortlich sind.

Soweit bekannt, hat man bisher noch nicht versucht, das Wirkungs profil und Wirkungsspektrum von kosmetischen Formulierungen da durch zu beeinflussen und zu verbessern, daß bestimmte Nieder peptid-Verbindungen mit Molekulargewichten unter 1000 und vor zugsweise unter 500 als Wirkstoffadditive zur Hautbehandlung, Hautkonditionierung und Hautverbesserung verwendet wurden.

Es ist bekannt, daß einige Tripeptide in der Neurobiochemie, im Stoffwechsel und als Releasing-Hormone sehr spezifische Wir kungen entfalten. Genannt seien hier Thyroliberin, das sich aus Pyroglutaminsäure, Histidin und Prolinamid zusammensetzt, und Glutathion, γ-L-Glutamyl-Lcystein-glycin. In FEB Letters 238 (1988), S. 343-346, wird berichtet, daß die Kollagensynthese in Fibroblasten-Kulturen durch einen Tripeptid-Kupfer-Komplex des Glycidyl-L-histidyl-L-lysins stimuliert wird und eine physio logische Rolle bei der Wundheilung spielt. Das Tripeptid ist aus Humanplasma isoliert worden. Während das Tripeptid GHK auf medizinischem Sektor für eine Reihe von Anwendungen vorgeschlagen worden ist, war seine Verwendung im kosmetischen Bereich bisher nicht bekannt.

Der Sequenzaufbau unterschiedlicher Proteine und insbesondere derjenige von Stützproteinen zeigt trotz mannigfacher Unterschiede einzelne reguläre Eigentümlichkeiten, die uU bedeutsam sein können für den Eigenschaftszuschnitt dieser Proteine. So findet sich die oben erwähnte Tripeptidsequenz GHK nur in insgesamt acht Human proteinen, allerdings von Proteinen mit herausragender Bedeutung, u. a. sind dies die Humankollagen α2(I)-Kette, die Fibrin-α-Kette, der Blutgerinnungsfaktor XI und Interleukin 4 (siehe R. Fleisch mayer, B.R.Olsen, K. Kühn in Structure , Molecular Biology and Patho logy of Collagen, Annals of the New York Academy of Science, Bd. 580 (1990)).

Der vorliegenden Erfindung liegt als Aufgabe zu Grunde, eine ge zielte Wirkungsverbesserung in kosmetischen Formulierungen mit einem an Naturstoffproteinen orientierten niedermolekularen Addi tiv zu erreichen, bei dessen Einsatz auf mannigfache Begleit- und Belastungskomponenten aus dem originären Naturstoff verzichtet werden kann. Dabei wurde der Zugang zu einer Formulierung ange strebt, in der das Wirkstoffadditiv für die Dauer der Aufbewah rung und Anwendung stabil bleibt und nicht durch Abbau der Mole külstruktur in seinem Wirkungsprofil eingeschränkt bzw. ganz in hibiert wird.

Überraschenderweise wurde gefunden, daß bestimmte Oligopeptide der im Anspruch 1 definierten Formeln
A - x - I oder A - x - I - Y
worin A, X, I und Y wie in Anspruch 1 definiert sind, mit Amino säurebausteinen aus der Gruppe:
Glycin, Hydroxyprolin, Prolin, Arginin, Lysin,
Hydroxylysin und Histidin,
in kosmetischen Formulierungen ausgezeichnete Wirkstoffadditive sind, wenn die Verknüpfung der Aminosäurebausteine dem Triplett- Aufbauprinzip im nativen Kollagen, Elastin, Keratin, Fibronektin bzw. Bindegewebe folgt. Eine besonders günstige Triplett-Struktur aus der definitionsgemäßen Gruppe findet sich nicht nur in den vorgenannten Stützproteinen, sondern auch im Interleukin 4.

Bei den erfindungsgemäßen Tripletten, die insgesamt 3 bis 6 Aminosäure-Bausteine enthalten können, ist eine der Aminosäuren A, X, I bzw. A, X, I, Y das Glycin (G), wobei G mittel- oder endständig verknüpft sein kann. Bevorzugt enthält das verwendete Oligopeptid neben Glycin (G) auch Prolin (P) und/oder Hydroxy prolin. Dabei dürfte den Aminosäuren Pro und Hyp im Oligopeptid- Verbund möglicherweise zusätzlich die spezifische Funktion einer Schleuse oder Penetrationsschiene zukommen, die für die Haut-Tie fenwirkung der erfindungsgemäß zugänglich werdenden Präparate mitverantwortlich ist.

Diese Tiefenwirkung würde auch die vorteilhafte Kombinierbarkeit und Effektivität der bezeichenten Oligopeptide mit lokal, topisch oder subkutan applizierbaren pharmazeutischen Wirksubstanzen (z. B. bekannter Herkunft und Konfektionierung) erklären.

In den kosmetischen Formulierungen wird das Oligopeptid im all gemeinen in Mengen von mindestens 0,5·10^-5 ppm verwendet. Mengen bis zu 0,5 bis 0,75 Gramm - hier jeweils bezogen auf 100 g Gewicht der Endformulierung - sind anwendbar. Bevorzugt werden etwa 5 bis 5000 ppm und insbesondere 25 bis 2500 ppm. Zur Metallkomplexbildung befähigte Oligopeptide, beispielsweise solche mit Einheiten des Histidins oder Hydroxyprolins, sind günstig als Metall-Peptid-Komplex einsetzbar. Diese Metallchelat-Verbin dungen sind meistens 2:1-Komplexe, 1:1-Komplexe oder 1:2-Komplexe, bei den höheren Oligopeptiden wie Penta- und Hexapeptiden kann der 2:1-Wert zugunsten des Metallanteils überschritten werden. Das bevorzugte Verhältnis in der Gesamtbilanz aus unterschied lichen Komplexen und freien Oligopeptiden liegt im Bereich von etwa 0,4:1 bis 6:1, ausgedrückt als Peptid-Molekulargewicht/ Metallatomgewicht. Das Mol/Atomgewichtsverhältnis kann größer als 2,0 und kleiner als 0,5 sein; Werte von 2,0 bis 0,5 sind jedoch bevorzugt.

Es hat sich gezeigt, daß die Metall-Peptid-Komplexe nicht in jedem Fall isoliert werden müssen. Sie können auch in-situ bzw. innerhalb eines allgemeinen Kompoundierungsansatzes vorgegeben werden. So können auch Kombinationen der Oligopeptide mit geeig neten Metallsalzlösungen wie z. B. Manganacetat, Magnesiumorotat, Kupfersuccinat und dergl. in stöchiometrischen oder auch in nicht stöchiometrischen Verhältnissen Verwendung finden.

Als besonders geeignete Metallionen werden bevorzugt: Mangan, Magnesium, Kupfer, Eisen, Nickel, Zink, Germanium, Molybdän und Kobalt. Beispiele für einige spezielle 1:1-Komplexe sind:

[Gly-L-arg-L-hyp]Co · x H₂O
[Gly-L-his-L-lys]Mg · x H₂O
[Gly-L-his-L-arg]Cu · x H₂O
[L-Hyl-gly-L-lys]Mn · x H₂O
[Gly-L-his-L-lys]Cu · 6 H₂O
[Gly-L-his-L-lys]Zn · x H₂O
[Gly-L-his-L-arg]Cu · x H₂O
[Gly-L-pro-L-arg-gly-L-pro-L-hyp]MgZn · x H₂O

Der Hydratanteil x schwankt meistens zwischen 1 H₂O und 6 H₂O. Die isolierten Metallkomplexsalze sind teilweise gutkristallisierende Verbindungen. Ihre allgemeine Herstellung wird nachfolgend beschrieben.

Erfindungsgemäß sind die Komplexverbindungen mit Germanium als besonders interessant erkannt worden, z. B.

[Gly-L-his-L-lys]Ge · x H₂O und/oder
[Gly-L-pro-L-arg-gly-L-pro-L-hyp]GeZn · x H₂O

In einer besonders geeigneten und deshalb bevorzugten Gruppe von Oligopeptiden sind eine oder mehrere basische Aminosäuren peptidartig verknüpft; diese Oligopeptide können auch als Salze mit anorganischen Säuren wie HCl oder Phosphorsäure oder mit organischen Säuren, wie z. B. Citronensäure, Ascorbinsäure, Bernsteinsäure, kompoundiert werden, wovon die Succinate, Oro tate, Citrate, Adipate, Phosphate, Gluconate und die Halogenide wie Bromide und Chloride bevorzugt sind. Sowohl vollständige Salzbildung als auch partielle Salzbildung ist möglich. Prolin und Hydroxyprolin sind gleichfalls als salzbildende Aminosäure bestandteile günstig.

Für die Wirkungsaktivität der Oligopeptide in üblichen kosmeti schen Formulierungen könnte eine aus dem medizinischen Sektor bekannte steuernde bzw. aktivierende Funktion maßgeblich sein, ohne daß hier eine Festlegung auf eine bestimmte Theorie beab sichtigt ist.

Überraschenderweise hat auch das Molekulargewicht des Oligopep tids eine erhebliche Bedeutung, was für den hier in Betracht kommenden Anwendungsbereich der Kosmetik wiederum auf einen spezifischen Penetrationszuschnitt schließen läßt. Tripeptid- Sequenzen der allgemeinen Formel des Anspruchs 1 und insbesondere solche mit Molekulargewichten von etwa 350 bis 480 und bevor zugt solche mit einem Molekulargewicht im engeren Bereich von etwa 370 bis 450 sind besonders wirksam. Das Molekulargewicht versteht sich jeweils ohne Metall, aber einschließlich des Anions im Falle einer Salzbildung.

Beispiele für erfindungsgemäß geeignete Tripeptide sind Gly-pro hyp, Gly-arg-hyp, Gly-pro-lys, Gly-his-his, Gly-lys-arg, Gly- pro-arg, Arg-gly-his, Arg-gly-pro, Gly-pro-pro, Gly-gly-lys, Arg-gly-arg, Gly-lys-hyp, Lys-gly-pro, Arg-gly-pro, Gly-his-lys, Gly-his-arg, Gly-arg-hyp, Hyl-gly-lys, Gly-his-arg, Hyp-gly-pro.

Beispiele für Tetrapeptide, Pentapeptide und Hexapeptide werden im folgenden genannt:
Tetrapeptide: Gly-pro-lys-gly, Gly-his-lys-gly, Hyp-gly-his-lys, Gly-his-his-gly, Gly-pro-hyp-gly, Hyl-gly-his-arg, Gly-his-arg -gly, Gly-arg-hyp-gly, Arg-gly-his-lys, Hyl-gly-pro-lys;
Pentapeptide: Hyp-gly-his-lys-gly, Hyp-gly-lys-hyp-gly, Gly-pro -lys-gly-pro;
Hexapeptide: Gly-pro-arg-gly-pro-hyp, Gly-his-hyp-gly-lys-pro, Gly-lys-pro-gly-arg-hyp, Gly-pro-hyp-gly-pro-pro, Gly-his-arg -gly-his-lys.

Von den vorgenannten Oligopeptiden sind insbesondere die Arg,His und/ oder Lys bzw. Hyl enthaltenden Verbindungen bevorzugt, speziell wenn sie als Metallion-Ligand fungieren.

Eine Reihe der Oligopeptide sind im Handel erhältlich. Sie können aber auch durch Methoden der enzymatischen Hydrolyse bzw. Hydro lyse in Gegenwart von H⁺-Ionen erhalten werden. Eine geeignete Methode zur Anreicherung der Oligopeptid-Sequenzen in einem Aus gangsprotein oder Ausgangspeptid besteht in der gentechnisch induzierten Insertion bestimmter Aminosäuren in einem Naturstoff, der dann entsprechend hydrolysiert wird.

Die kosmetischen Formulierungen der Erfindung werden in an sich bekannter Weise unter Zusatz der Oligopeptide kompoundiert. Be sonders günstige Formulierungen ergeben sich, wenn das Tripeptid zusammen mit freien Aminosäuren und/oder Gelatinepeptonen ver wendet wird.

Eine spezielle Anwendbarkeit besteht darin, daß die Oligopeptide zusammen mit einer gärungssteigernde Zellpräparation auf Pflan zenbasis aus partiell dehydratisierten und nicht mehr vermehrungs fähigen Pflanzenzellen kombiniert werden, die den anaeroben Glucose abbau um mindestens 50% steigert und vorzugsweise ein Salz mit einem Kation von einem Ionenradius von höchstens 1,33 A enthält. Der Salzgehalt dieser Zellpräparation beträgt am besten etwa 0,2 bis 4,5 Gew.-%, wobei ein Salzgemisch mit Kationen aus der Gruppe: Na, Mg und Mn und hierbei ein Verhältnis von Mg/Na von etwa 0,05:1 bis 0,2:1 und ein Verhältnis für Mn/Mg von etwa 1:25 bis 1:10 recht günstig ist.

Als weitere Zusätze zu dieser Oligopeptid/Pflanzenzell-Kombi nation kommen Monosaccharide, Disaccharide, mehrwertige Alkohole und deren Oxidationsprodukte (Aldehyde, Säuren) und deren Ge mische in Betracht. Geeignete Pflanzenzellmaterialien sind Samen-, Keim- und Fruchtzellen sowie Zellen von Pilzen und Algen, ins besondere von Saccharomytaceae. Diese Pflanzenzell-Additive für die erfindungsgemäßen Oligopeptide, deren Salze und/oder deren Metallkomplexe werden zweckmäßigerweise so hergestellt, daß die vermehrungsfähigen Ausgangs-Pflanzenzellen mit ihrem vollstän digen intrazellulären Wassergehalt mit mindestens einem Salz aus den vorgenannten Gruppen versetzt, das Gemisch weitgehend homoge nisiert und einer Wärmeeinwirkung unterzogen wird, wodurch Intra zellularwasser aus den Zellen bis zu einem Gehalt von etwa 10 bis 75%, bezogen auf 100% Ausgangswassergehalt, extrahiert wird.

Wenn die erfindungsgemäß verwendeten Oligopeptide oder Oligo peptidfraktionen aus Naturstoffen wie den erwähnten Stützproteinen hergestellt werden, wird beispielsweise ein Ausgangskollagen (z. B. Kalbshautkollagen, lösliches natives Kollagen, Kollagen Typ I oder III, Atelokollagen, Gelatine, Gelatinepeptone) in ge eigneter Weise in Lösung gebracht, gegebenenfalls derivatisiert durch Behandeln mit einer Chemikalie wie H₂O₂, und dann in 0,1- bis 1%iger wäßriger Phase in Gegenwart von Salzsäure hydrolysiert. Die üblichen Methoden der Dialyse, Aussalzung und präparativen Chromatographie ermöglichen die Isolierung einzelner Oligopeptide oder Oligopeptidgruppen.

Die Tri-, Tetra-, Penta- und Hexapeptide können auch nach den üblichen Methoden der Peptidsynthese (z. B. nach Merrifield) her gestellt werden, insbesondere dann, wenn struktureinheitliche Verbindungen und deren Metallkomplexe angestrebt werden.

Die Herstellung der Oligopeptid-Metall-Komplexe nutzt die große Affinität von basischen Aminosäuren (wie Histidin, Lysin, aber auch Prolin und Hydroxyprolin) für komplexbildende Metallionen. So wird der Gly-his-lys-Kupfer-Komplex wie bei L. Pickart, St. Lovejoy in "Biological Activity of Human Plasma Copper-Binding Growth Factor Glycyl-L-histidyl-L-lysin", Methods in Enzymology, Bd. 147, S. 314 ff., beschrieben, gewonnen. Allgemein werden auf molarer oder äquivalenter Basis das Oligopeptid und das Metallacetat oder Metallsuccinat zusammengegeben und neutrali siert. Der Metallkomplex wird in wäßriger Lösung säulenchroma tographisch gereinigt und über spektrometrische Verfolgung des Eluats isoliert. Der reine Metallkomplex ist meistens erhält lich in kristalliner Form, wenn das Oligopeptid in der wäßrigen Metallacetatlösung gelöst und dann Ethanol zugesetzt wird, wo nach sich meistens gut kristallisierbare Feststoffe abscheiden.

Überraschenderweise sind die hier verwendeten Oligopeptide haut aktive Komponenten für kosmetische Formulierungen, wie die im folgenden beschriebene Bestimmung der Hautrauhigkeit einer Tri peptidhaltigen Formulierung nach der Padberg-Methode zeigt: Eingesetzt wurden Wasser/Öl-Emulsionen, denen (1) das Tripeptid Gly-L-his-L-lys und (2) Gly-L-his-L-lys/Gly-L-lys-L-hyp/Gly-L- his-L-his als Oligopeptid zugesetzt wurde. Zum Vergleich diente ein Plazebo ohne Tripeptid-Zusatz.

Für den Test wurden 10 Probandinnen im Alter von 40 bis 66 Jahren herangezogen. Die Versuchspersonen stellten sich frei willig für diesen Test zur Verfügung. Sie wurden angewiesen, drei Tage vor Beginn des Tests und während der gesamten Testdauer keine anderen Kosmetika auf den Testarealen (der Unterarme) zu verwenden. Bei jeder Probandin wurden sechs Testfelder auf beiden Unterarm-Innenseiten (also drei je Arm) markiert. Die Areale waren so zugewiesen, daß die Produkte gleich häufig bei den zehn Pro bandinnen auf die sechs Testfelder verteilt waren (gleichförmige Permutation). Neben den fünf Emulsionen wurde ein Leerfeld mit geprüft. Nachdem die Leerwerte aller Areale nach beiden Methoden bestimmt waren, wendeten die Probandinnen die Produkte selbst zu Hause in einem Zeitraum von 14 Tagen morgens und abends an. Danach wurde 4 Stunden nach der letzten Anwendung erneut mit der Bild analyse und nach Padberg geprüft.

Padbergmethode

Im Padberg-Test wird die Rauhigkeit einer Haut anhand derjenigen Menge Methylenblau bewertet, die in Abhängigkeit von den Haut konditionen von der Haut absorbiert wird. Studien mit "subjek tiv rauher Haut" bzw. mit "durch Tenside geschädigter Haut" er gaben, daß die absorbierte Methylenblau-Menge der Hautrauhigkeit proportional ist. Gute Haut bzw. gut gepflegte Haut absorbiert demgegenüber nur eine geringe Menge Methylenblau.

Zur Durchführung des Padberg-Tests werden folgende Schritte an gewendet:

(1) Markierung der Testfelder
(2) Vorbehandlung der Testfelder mit einer 1%igen Lösung eines nichtionischen Tensids in Wasser
(3) Nachwaschen mit Leitungswasser von 35°C
(4) Abtupfen der Testfelder
(5) Danach 30minütiges Einklimatisieren der Probanden bei 22°C und 60% relativer Luftfeuchte
(6) Auftragen von 20 µl Farblösung (die Farblösung besteht aus 0,5%igem Methylenblau (20%)) und 80% einer 1%igen Lösung eines nichtionischen Tensids.
(7) Antrocknenlassen der Farbe für 30 s.
(8) Entfernen des Farbüberschusses mit 2 ml einer 0,25%igen nichtionischen Tensidlösung
(9) Extraktion mit 2 × 2 ml einer Mischung aus:
     2,0% Natriumlaurylsulfat
    48,0% Wasser
    50,0% Isopropylalkohol
jeweils nach 60 s.
(10) Messen des Eluats im Spektralphotometer bei 660 nm gegen Luft
(11) Ergebnis = Extinktion Haut (Ausgangswert)
(12) Es erfolgte nun die Ausgabe der Produkte mit der Anweisung, diese 14 Tage lang morgens und abends auf den vorgesehenen markierten Stellen aufzutragen. Zuvor wurde sichergestellt, daß 3 Tage vor Beginn der Prüfung und während der gesamten Prüfdauer keine anderen kosmetischen Produkte auf den Testarealen angewendet wurden.
(13) Wiederholung der Schritte (1) bis (9) am 15. Tag. Die letzte Anwendung vor dem Test erfolgte 4 Stunden zuvor.
Ergebnis = Extinktion nach der Anwendung

Diskussion der Padbergmethode

Die Padbergmethode liefert Daten über die Adsorption von Methylen blau auf der Haut. Je nach Hautzustand stehen dem Farbstoff mehr oder weniger Bindungsstellen auf der Haut zur Verfügung. Jahre lange Erfahrungen haben immer wieder bestätigt, daß subjektiv "rauhe" Haut oder beispielsweise durch Detergenzien geschädig te Haut mehr Bindungsstellen für Methylenblau aufweist, und zwar in Abhängigkeit vom Schädigungsgrad. Umgekehrt zeigt eine mit Cremes verbesserte Haut eine Abnahme der Bindungsstellen, und zwar proportional zur Anwendungsdauer. Die Differenzierung bei verschiedenen Produkten ist sehr gut und verläßlich; auch hier wird stets eine Korrelierung mit der subjektiven Begutachtung erzielt. Bezüglich weiterer Einzelheiten siehe Journal of the Society of Cosmetic Chemists, Bd. 20 (1969), S. 719-728.

Ergebnisse des Padberg-Tests

Die Photometer-Werte, ausgedrückt in Prozent des Wertes bei be handelter Haut und bezogen auf den Ausgangszustand, sind in der folgenden Tabelle I zusammengefaßt. In der Tabelle sind auch die errechneten Mittelwerte angegeben.

Die Ergebnisse zeigen, daß mit den Testemulsionen eine Glättung der Haut erzielbar ist.

Tabelle I

Rauhigkeitstest nach der Padbergmethode mit Wasser/Öl-Emulsionen, mit und ohne Zusatz von Tripeptiden (Anwendungsdauer 14 Tage)

Da die erfindungsgemäß verwendeten Oligopeptide nicht allzu beständig sind, erweist es sich als zweckmäßig und vorteilhaft, sie in den kosmetischen Formulierungen in verkapselter Form vor zulegen, so daß sie erst bei Applikation, z. B. durch Einreiben, freigesetzt werden. Das Prinzip der Verkapselung von Komponen ten ist aus der Technik bekannt. Die Kapseln sind meistens Mikro kapseln und innerhalb der Matrix einer kosmetischen Grundlage wie einer Salbengrundlage fein dispergiert. Bei der Mikroverkapselung wird das Oligopeptid, der Oligopeptid-Metallkomplex bzw. das Oligopeptid-Salz durch Umhüllung mit filmbildenden Polymeren um geben, die sich durch Koazervierung oder Grenzflächenpolymerisa tion oder durch einen anderen kapselbildenden Vorgang auf dem ein zuhüllenden Material niederschlagen und eine feste Hülle bilden. Hierdurch wird nicht nur die Stabilität des Oligopeptid-Additivs gewährleistet, sondern auch generell die Kompoundierung bei Her stellung der kosmetischen Formulierung ganz erheblich vereinfacht. Zum Stand der Technik siehe Sliwka, Angew. Chemie 87 (1975), S. 556-567.

Bei der Verkapselung durch Komplexkoazervation nimmt man bevor zugt eine Gelatinelösung, vermischt sie mit einer Gummi-arabicum- Lösung und stellt den pH-Wert der verdünnten Lösung langsam auf etwa 4,5 ein. Gelatine ist ein amphoteres Polymer mit einem iso elektrischen Punkt bei pH 8. Mit dem Ansäuern der Lösung lädt sich das Polymer positiv auf, so daß es zur Wechselwirkung mit dem stets negativ geladenen Gummi-arabicum kommt. Man arbeitet zunächst bei Temperaturen über 38°C, um eine Gelierung der Gelatine zu vermeiden. In der Praxis geht man beim Mikroverkapseln von Oligopeptiden folgendermaßen vor: In einem Rührkessel legt man die auf 45°C erwärmte Lösung des gelierbaren hydrophilen Polymers Gela tine vor, gibt eine ausreichende Menge Ethanol zu und emulgiert dann das Oligopeptid, den Oligopeptid-Metallkomplex bzw. das Oligopeptid-Metallkomplex-Gemisch bis zur gewünschten Teilchengröße (z. B. 37 µm). Anschließend gibt man die Gummi-arabicum-Lösung hin zu. Die Koazervation tritt unter ständigem Rühren ein. Beim Ab kühlen des Ansatzes von 45°C auf 10°C geliert das um die Kernphase abgeschiedene Gelatine/Gummi arabicum-Komplexkoazervat. Man ver setzt mit Glutaraldehyd und härtet durch langsame Zugabe von NaOH, bis der pH-Wert von 8,5 bis 9,0 erreicht ist, durch.

Die Erfindung wird im folgenden anhand von mehreren nichtbeschrän kenden Beispielen erläutert. Die in diesen Beispielen verwendeten Komponenten sind indes besonders bevorzugte Ausgestaltungen der Erfindung.

Beispiel 1

Nach folgender Vorschrift wurde eine Lanolin enthaltende Handcreme formuliert, in der als Oligopeptid-Aktivstoff das Magnesiumsalz des Gly-L-his-L-lys (1:1-Salzkomplex) inkorporiert wurde. Die End zusammensetzung der Cremeformulierung war folgende:

Lösliches Lanolinderivat
1,0 Gew.-%
Acetylierte Lanolinalkohole	5,0 Gew.-%
flüssiger Multisterol-Extrakt	5,0 Gew.-%
Vaseline	5,0 Gew.-%
Polyvinylalkohol-Gel	0,75 Gew.-%
10%iges NaOH	2,25 Gew.-%
Gly-L-his-L-lys, 1 : 1-Magnesiumkomplex	0,5 Gew.-%
ethoxylierte Fettamine	3,75 Gew.-%
Parfümöl	0,3 Gew.-%
Wasser, bidest.	ad 100 Gew.-%

Zur Herstellung dieser Handcreme wurden die Fettphasen-Bestandteile und Vaseline auf ca. 75°C erwärmt. Gleichzeitig wurde das PVA-Gel in heißem Wasser von ca. 80°C dispergiert und allmählich gelöst. Zur letzteren Dispersion wurde das ethoxylierte Fettamin (mit ca. 25 EO-Einheiten) und ggf. noch ein Emulgator gegeben, wonach die vorher angesetzte erwärmte Fettphase darin emulgiert wurde. Nach 5 Minuten Rühren bei der Mischungstemperatur wurde auf 60°C abge kühlt, dann mit der 10%igen Natronlauge versetzt und weiter bis auf unter 40°C gekühlt. Unter langsamem Rühren wurden dann Gly- L-his-L-lys und Magnesiumgluconatsowie das Parfüm zugesetzt. Der Ansatz wurde gut homogenisiert. Die Handcreme war stabil konfek tioniert und zeigte eine verbesserte Hautkonditionierung, verglichen mit einem Ansatz ohne Oligopeptid-Zusatz.

Ähnliche Resultate ergaben sich auch dann, wenn statt des Magnesium gluconat sein Mangansalz (insbesondere Mangansuccinat oder Manganorotat) verwendet wurde.

Beispiel 2

Aus der folgenden Zusammensetzung wurde ein Baby-Shampoo hergestellt:

Sulfobernsteinsäure-halbester, Natriumsalz, verdünnt (Steinapol SBFA 30 und Steinapol SBZ)\|700 g
Alkylethersulfat	10 g
Gly-L-his-L-lys (verkapselt mit Gelatine/Gummi arabicum)	5 g
Oberflächenfett	10 g
Wasser	275 g
Parfümöl	1,5 g
Manganorotat	1,0 g.

Der pH-Wert der Mischung wurde auf einen Endwert von 6,5 eingestellt.

Beispiel 3

Eine Creme-Grundlage wurde wie folgt kompoundiert:

Vaseline
40 Gew.-%
Cetanol	18 Gew.-%
Sorbitansesquioleat	5 Gew.-%
Polyoxyethylenlaurylether	0,5 Gew.-%
p-Hydroxyalkylbenzoat	0,2 Gew.-%
Gemisch aus Gly-L-his-L-lys und Gly-L-his-L-arg und Gly-L-his-L-arg-gly-L-his-L-lys (Molverhältnis 1 : 2 : 1)	0,4 Gew.-%
Wasser	ad 100,00 Gew.-%

Beispiel 4

Um die Wirkung des folgenden Oligopeptid-Gemisches zu prüfen, wurde eine Öl-Wasser-Emulsion hergestellt aus

Glycerinmonostearat\|130 g
Cetiol (ungesättigte Fettsäureester aus Walrat)	110 g
Mandelöl	90 g
Glycerin	50 g
Wasser	500 g
Testlösung	100 g

Die Testlösung enthielt ca. 5 g eines Oligopeptid-Gemisches, bestehend aus Gly-L-his-L-lys, Gly-L-his-L-lys-gly und Gly- L-pro-L-pro (auf Molbasis 10 : 1 : 10) in Wasser.

Der Einfluß der Emulsion auf die Hauttemperatur wurde an 30 Probantinnen im Alter von 40 bis 60 Jahren mit trockener Haut getestet. Die Ergebnisse sind nachfolgend tabelliert.

Tabelle II

Ohne Oligopeptid-Zusatz konnte keine merkliche Stabilisierung der Hauttemperatur festgestellt werden.

Beispiel 5

Aus folgender Zusammensetzung wurde eine wirksam pflegende Hautlotion hergestellt.

Tripeptid (L-Lys-gly-L-pro)\|0,5 g
p-Hydroxybenzoesäurealkylester	0,15 g
Ethanol	20 g
Wasser	ad 100 g

Diese Hautlotion enthielt keinerlei Penetrationsmittel, da die Penetrationsförderung bereits durch das Oligopeptid bewirkt wurde.

Beispiel 6

Eine Creme-Grundlage wurde wie folgt kompoundiert:

Claims

1. Verwendung eines Oligopeptids mit 2 bis 5 Aminosäure verknüpfungen der allgemeinen Formeln
A-X-I und A-X-I-Y
worin A, X und 1 für gleiche oder verschiedene Amino säurereste der nachstehend definierten Gruppe stehen und Y die Bedeutung von A, X, I; von A-X, X-I, A-I, X-A, I-X, I-A oder von A-X-I oder I-X-A hat,
als Additiv für die Herstellung von kosmetischen Formu lierungen zur Hautpflege, Hautkonditionierung und Haut zustandsverbesserung,
wobei A,X und 1 Aminosäurereste der Gruppe:
Glycin (Gly), Hydroxyprolin (Hyp), Prolin (Pro), Arginin (Arg), Lysin (Lys), Hydroxylysin (Hyl) und Histidin (His)
sind, die in hochmolekularer proteingebundener Form als Sequenz in natürlichen Kollagen-, Elastin-, Keratin-, Fibronektin- und/oder Bindegewebsproteinen vorkommen.

2. Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei mindestens zwei unter schiedliche Oligopeptide der vorstehenden Formeln kom poundiert sind.

3. Verwendung gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei die Tripeptid- Sequenz A-X-I ein mittleres Molekulargewicht im Bereich von etwa 350 bis 480 aufweist.

4. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Tripeptid-Sequenz ein mittleres Molekulargewicht im Bereich von etwa 370 bis 450 aufweist.

5. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei der basische Anteil der Aminosäuren als HCl-Salz vorliegt.

6. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die Oligopeptide zumindest teilweise in Metallkomplexen ge bunden sind.

7. Verwendung nach Anspruch 6, wobei der Metallkomplex als Metall(ion) ein Metall aus der Gruppe:
Mn, Mg, Cu, Fe, Ni, Zn, Ge, Mo und Co
aufweist.

8. Verwendung nach Anspruch 6 oder 7, wobei das Metall-Amino säure(AS)-Verhältnis durch eine Relation im Bereich von etwa 0,4:1 bis 1,6:1 und bevorzugt von etwa 0,8:1 bis 1,2:1, ausgedrückt als Atom- bzw. Molverhältnis von Metall(ion)/ Tripeptid-Sequenz, eingestellt ist.

9. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei das Oligo peptid in verkapselter Form inkorporiert ist.

10. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei das Oligo peptid in einer Konzentration von mindestens 10 ppm angewen det wird.

11. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 10, wobei die Konzentration des Oligopeptids innerhalb eines Bereichs von etwa 20 ppm bis 7,5·10⁴ ppm und insbesondere von 25 ppm bis 2,5·10⁴ ppm der kosmetischen Endformulierung eingestellt ist.

12. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, wobei das Oligopeptid zusammen mit monomeren Aminosäuren kompoun diert ist.

13. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, wobei das Oligopeptid zusammen mit Gelatinepeptonen oder mit anderen Peptonen oder Gemischen derselben kompoundiert ist.

14. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 13, wobei das Oligopeptid mindestens teilweise von Glycyl-L-histidyl- L-lysin, einem Metallkomplex desselben und/oder einem Salz desselben gestellt wird.

15. Glycyl-L-histidyl-L-lysin-Magnesium-Komplex.

16. Glycyl-L-histidyl-L-lysin-Mangan-Komplex.

17. Glycyl-L-histidyl-L-lysin-Zink-Komplex.

18. Glycyl-L-histidyl-L-lysin-Germanium-Komplex.

19. Komplexverbindung nach einem der Ansprüche 15 bis 18, mit einem Tripeptid-Metall-Verhältnis von etwa 0,4:1 bis 61:1 und bevorzugt von etwa 0,8:1 bis 1,2:1.

20. Tetrapeptid der allgemeinen Formel
M-O-S
oder ein Salz desselben mit einer nichttoxischen Säure worin M für die Dipeptidsequenz Gly-L-his, L-Hyp-gly oder L-Arg-gly steht, O einer der Aminosäurebausteine: L-Lys, L-His, L-Arg, L-Pro ist und S einer der Aminosäurereste Gly oder L-Lys ist, mit der Maßgabe, daß zwischen zwei Resten Gly mindestens zwei Nicht-Gly-Reste gebunden sind.

21. Tetrapeptid nach Anspruch 20 in Form eines Metallkomplexes mit Mg, Mn, Cu, Zn, Ge, Ni, Fe, Mo oder Co in einem Ver hältnis von etwa 0,4:1 bis 6:1 und vorzugsweise von etwa 0,8:1 bis 1,2:1 -ausgedrückt als Tripeptidsequenz-Metall- Molverhältnis.

22. Pentapeptid der Formeln
L-Hyp-gly-L-lys-L-hyp-gly
L-Hyp-gly-L-his-L-lys-gly
Gly-L-pro-L-lys-gly-L-pro
Salze derselben mit einer nichttoxischen Säure und Metall komplexe derselben mit Metallen aus der Gruppe: Mg, Mn, Cu, Zn, Ge, Ni, Fe, Mo und Co, entsprechend einem Tripeptid sequenz-Metall-Molverhältnis von etwa 0,8:1 bis 1,2:1.

23. Hexapeptid der Formeln
Gly-L-pro-L-arg-gly-L-pro-L-hyp
Gly-L-his-L-hyp-gly-L-lys-L-pro
Gly-L-lys-L-progly-L-arg-L-hyp
Gly-L-pro-L-hypgly-L-pro-L-prof
Gly-L-his-L-arg-gly-L-his-L-lys
Salze derselben mit einer nichttoxischen Säure und Metall komplexe derselben mit Metallen aus der Gruppe: Mg, Mn, Cu, Zn, Ge, Ni, Fe, Mo und Co, entsprechend einem Tripeptid sequenz/Metall-Molverhältnis von etwa 0,8: 1 bis 1,2:1.

24. Oligopeptid der Ansprüche 21 bis 23, wobei das Anion der Salze aus der Gruppe: Bernsteinsäure, Adipinsäure, Orotsäure, Citronensäure, Gluconsäure und Phosphorsäure, ausgewählt ist.