DE3937076A1 - Kollagene, verfahren zu ihrer herstellung und kosmetische mittel - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft Kollagene, deren Methioninreste zumindest teilweise sulfoxidiert sind, Verfahren zu ihrer Herstellung und kosmetische Mittel.

Kollagen spielt im Bindegewebe von Säugetieren eine sehr wichtige Rolle. Es macht 25-30% des Gesamtproteins des Körpers aus. Besonders findet man es in Haut, Sehnen, Bändern, Knorpel, Blutgefäßen, Sehnen und Knochen.

Untersuchungen haben gezeigt, daß Kollagen keine einheitliche Verbindung darstellt. Mindestens zwölf unterschiedliche Typen sind bis heute charakterisiert worden. Die diversen Kollagentypen, die verschiedene Eigenschaften haben und denen auch unterschiedliche biologische Funktionen im Organismus zukommen, werden insbesondere charakterisiert durch Aminosäureanalyse, Aminosäuresequenz, Disulfidbrücken zwischen den Ketten, Länge der Tripelhelix, Verhalten im elektrischen Feld. Durch Immunlokalisation mit monoklonalen Antikörpern konnte ihre Verteilung in verschiedenen Geweben untersucht werden. So wurden in der Haut vor allem Kollagen Typ I und Typ III nachgewiesen. Diese beiden Kollagentypen haben eine sehr ähnliche Aminosäurezusammensetzung.

Wegen seiner Aminosäurezusammensetzung nimmt Kollagen eine besondere Stellung unter den Proteinen ein. Es ist besonders reich an Glycin. Daneben enthält es als einziges Protein die Aminosäure Hydroxyprolin. Der Schwefelgehalt ist relativ gering, da z. B. Kollagen Typ I kein Cystein enthält und Methionin die einzige schwefelhaltige Aminosäure ist.

Die Kollagenmoleküle werden als Prokollagen in den Fibroblasten synthetisiert und in den interzellulären Raum abgegeben. Dort wird es unter Abspaltung der Prokollagenpeptide in Kollagen umgewandelt. Durch Cross-linking zwischen verschiedenen Kollagenmolekülen entsteht schließlich unlösliches Kollagen, wie es vor allem im älteren Bindegewebe gefunden wird. Kollagen besteht in der Regel aus drei Polypeptidketten (Molekulargewicht etwa 100 000 je Kette), die einzeln gesehen eine linksgängige Schraube formen und miteinander zu einer rechtsgängigen Tripelhelix gewungen sind. Die beiden Enden des Moleküls bestehen aus nichthelikalen Telopeptiden. Diese Telopeptide spielen bei dem natürlichen Cross-linking der Kollagenmoleküle eine wichtige Rolle. Enzymatisch (z. B. durch Pepsin oder Trypsin) können sie leicht abgespalten werden. Biochemie, Biologie, Biosynthese und Metabolismus der Kollagene sind in vielen wissenschaftlichen Arbeiten und Übersichtsartikeln beschrieben (siehe Anh. 1; auf die darin aufgeführten Publikationen wird hiermit Bezug genommen).

Kollagen besitzt eine Vielzahl positiver Eigenschaften. Wegen seines hohen Wasserbindungsvermögens spielt es bei der Feuchtigkeitsregulierung der Haut eine wichtige Rolle. Außerdem wirkt es glättend und reizlindernd. Es stimuliert das Wachstum der Fibroblasten und beschleunigt die Wundheilung. Daneben besitzt es auch hämostatische Eigenschaften.

Wegen seiner positiven Eigenschaften und seiner sehr guten Verträglichkeit wird Kollagen heute in der Medizin bei einer Vielzahl von Indikationen eingesetzt (z. B. Nahtmaterial, Implantatmaterial, Wundabdeckung, Blutstillung).

Für kosmetische Zwecke kann Kollagen aus verschiedenen Kollagenquellen extrahiert werden. Hauptsächlich wird es aus jungen bzw. embryonalem tierischem Bindegewebe gewonnen. Vorzugsweise verwendet man Kalbshaut, deren Kollagen sich physiologisch kaum vom menschlichen Kollagen unterscheidet. Aus Kalbshaut gewonnenes Kollagen besteht zu mindestens 90% aus Kollagen Typ I, daneben enthält es geringe Menge an Kollagen Typ III. Es wird entweder unverändert als natives lösliches Kollagen, enzymatisch verändert als Atelokollagen oder Kollagenhydrolysat bzw. chemisch verändert als Desamidokollagen, Kollagenmethylester, succiniliertes oder quanidiertes Kollagen eingesetzt.

Die Verfahren zur Extraktion und zur enzymatischen und chemischen Modifikation sind bekannt und in einer Vielzahl von Publikationen und Patenten beschrieben. Wichtig dabei ist, eine Denaturierung der helikalen Kollagenstruktur zu verhindern. Außerdem sollte unter möglichst sterilen Bedingungen gearabeitet werden, (siehe Anhang 2; auf die darin aufgeführten Publikationen wird hiermit Bezug genommen).

Die DE-AS 20 64 604 sowie die entsprechende US-PS 39 91 184 beschreiben Hauptpflegemittel, die natives lösliches Kollagen mit unveränderter, weitgehend unvernetzter Kollagenstruktur enthalten. Das native lösliche Kollagen wird aus junger oder embryonaler Tierhaut durch Extraktion in schwach saurem wäßrigem Medium bei niedrigen Temperaturen gewonnen. Das Molekulargewicht des auf diese Weise erhaltenen Kollagens beträgt 5000 bis 50 000.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, kosmetische Wirkstoffe auf Kollagenbasis bereitzustellen, die in ihrer Wirkungsweise definiert sind und keine unerwünschten Nebenwirkungen zeigen. Ferner soll ihre Herstellung einfach und wirtschaftlich durchführbar sein.

Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß Kollagene mit sulfoxidierten Methioninresten vorteilhafte kosmetische Eigenschaften besitzen.

Gegenstand der Erfindung sind daher Kollagene, die dadurch gekennzeichnet sind, daß zumindest ein Teil der im Kollagen enthaltenen Methioninreste als Methioninsulfoxid vorliegt. Im übrigen sind die erfindungsgemäßen Kollagenderivate im Vergleich zu den jeweiligen als Ausgangsmaterial verwendeten Kollagenen unverändert. Die erfindungsgemäßen Kollagenderivate sind aufgrund der bereits oxidierten Schwefelatome praktisch nicht mehr sauerstoffempfindlich. Außerdem sind sie im Vergleich zu nicht-derivatisierten Kollagenen besser wasserlöslich, insbesondere in sauren, wäßrigen Medien, so daß man die erfindungsgemäßen Kollagenderivate in höherer Konzentration in Anwendungsprodukte einarbeiten kann.

Die erfindungsgemäßen Kollagenderivate sind ausgezeichnet hautverträglich, es wurden keine allergischen Reaktionen festgestellt. Auf Haut und Haar bilden sie eine Schutzschicht.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Kollagenderivate kann ausgehend von allen üblichen Kollagen-Quellen erfolgen. Vorzugsweise verwendet man Kalbshaut, deren Kollagen sich physiologisch kaum vom menschlichen Kollagen unterscheidet, natives lösliches Kollagen, Kollagen, das zu mindestens 90% aus Kollagen Typ I besteht, Kollagen Typ I oder III, Atelokollagen oder Desamidokollagen. Man kann auch Zwischenprodukte aus der kollagenverarbeitenden Industrie einsetzen.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Kollagene erfolgt, indem man kollagenhaltiges Material (z. B. Kalbshaut oder Zwischenprodukte aus der kollagenverarbeitenden Industrie) in Gegenwart eines Oxidationsmittels auf Kollagen aufarbeitet. Wenn die Herstellung eines derivatisierten Kollagens erwünscht ist, erfolgt gleichzeitig die Derivatisierung. Dementsprechend erfolgt bei der Herstellung von Atelokollagen aus Kalbshaut der enzymatische Abbau mit Proteasen, z. B. Trypsin oder Pepsin, in Gegenwart des Oxidationsmittels, so daß man sulfoxidiertes Atelokollagen erhält. In gleicher Weise erfolgt bei der Herstellung von Desamidokollagen die Desamidierung in Gegenwart des Oxidationsmittels, so daß man sulfoxidiertes Desamidokollagen erhält.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Kollagene kann auch ausgehend von isoliertem Kollagen oder isoliertem, derivatisiertem Kollagen erfolgen, indem man dieses mit einem geeigneten Oxidationsmittel behandelt.

Geeignete Oxidationsmittel sind solche, die eine Sulfoxidierung der Schwefelatome der in Kollagen enthaltenen Methioninreste herbeiführen, ohne das Kollagen im übrigen zu verändern. Beispiele sind Wasserstoffperoxid oder Alkalimetallperoxide, wie Natriumperoxid oder Natriumperborat. Das Oxidationsmittel verwendet man in einer Menge von 1,5-2,0 Äquivalenten pro Äquivalent Methionin. Falls erforderlich, wird überschüssiges Oxidationsmittel am Ende der Umsetzung in üblicher Weise durch Zugabe eines Reduktionsmittels zerstört bzw. durch Fällung des Kollagens mit NaCl und wieder Lösen mit Citratpuffer entfernt.

Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise in saurem Medium, insbesondere bei pH 2 is 5, am besten bei pH 3 bis 4. Zweckmäßigerweise gibt man einen Puffer, beispielsweise einen Citratpuffer zu, um den pH in dem gewünschten Bereich zu halten.

Die Reaktionstemperatur liegt vorzugsweise im Bereich von 0 bis 20°C, insbesondere 10 bis 20°C und besonders bevorzugt 15-17°C. Man läßt das Oxidationsmittel im allgemeinen mindestens einen Tag auf das Kollagen einwirken, in der Regel 2 bis 6 Tage, vorzugsweise 3 bis 4 Tage.

Vorzugsweise wird das kollagenhaltige Material mit dem Oxidationsmittel vorbehandelt, z. B. durch Besprühen oder Eintauchen in eine Lösung des Oxidationsmittels. Man verwendet bevorzugt 0,05-0,5 Äquivalente Oxidationsmittel/kg kollagenhaltiges Material (ca. 30% Kollagengehalt) in 0,05 bis 0,5gew.-%iger wäßriger Lösung. Vorzugsweise erfolgt die Vorbehandlung 1 bis 10 Stunden, insbesondere 2 bis 5 Stunden. Vorzugsweise arbeitet man bei einer Temperatur im Bereich von 20-50°C, insbesondere 30-50°C, oder man besprüht das kollagenhaltige Material in tiefgefrorenem Zustand mit dem Oxidationsmittel und läßt auftauen.

Unter den genannten milden Bedingungen erfolgt die Sulfoxidlösung der Methioninreste im Kollagen, ohne daß dabei das entsprechende Sulfon gebildet wird. Die Ausbeute liegt bei 91 bis 96%, bezogen auf eingesetztes Kollagen. Die Sulfoxidierung ist reversibel, beispielsweise lassen sich die erfindungsgemäßen Derivate durch Umsetzung mit Mercaptoethanol wieder in die Ausgangsmaterialien überführen.

Kollagene enthalten im allgemeinen 5 bis 6 Methioninreste auf 1000 Aminosäuren. Davon sind bei den erfindungsgemäßen Kollagenen 2 bis 5, vorzugsweise 2 bis 3 Methioninreste sulfoxidiert (siehe die unten angegebene Tabelle).

Die erfindungsgemäßen Kollagene haben ein Molekulargewicht von etwa 270 000 bis etwa 300 000 (bestimmt mittels SDS- Polyacrylamidgelelektrophorese unter den von U. K. Laemmli, Nature 227, 680-685 (1970) angegebenen Bedingungen).

Zur weiteren Charakterisierung und Reinheitsbestimmung der Kollagene können die üblichen biochemischen und physikalisch-chemischen Methoden angewandt werden, z. B. HPCL, SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese, Aminosäureanalyse, Stickstoffanalyse, Peptide mapping techniques, Cyanbromidspaltung, optische Rotationsdispersion. Eine besondere Möglichkeit für die Gehaltsbestimmung ist die Bestimmung des Gehalts des charakteristischen Aminosäure Hydroxypyrolin. Ihr Anteil an Kollagen aus der Haut beträgt 14% (Nimni, M. E., (2986), Nato Asi, Ser. E. 116, 365-383).

Beim erfindungsgemäßen Verfahren fallen die Produkte in wäßriger Lösung an. Diese Lösung kann als solche, gegebenenfalls nach Einengen, zu kosmetischen Mitteln verarbeitet werden. Die Lösungen fallen aufgrund der Verwendung des Oxidationsmittels praktisch steril an, so daß auf den Einsatz von Konservierungsmitteln gegebenenfalls verzichtet werden kann.

Aus den erwähnten Lösungen können die erfindungsgemäßen Kollagenderivate in üblicher Weise gewonnen werden, beispielsweise durch Sprühtrocknen, Lyophilisierung etc. Die auf diese Weise erhaltenen festen Produkte können ebenfalls zu kosmetischen Mitteln verarbeitet werden.

Bei einem besonders bevorzugten Verfahren geht man von der Haut geschlachteter Kälber aus. Die Häute kommen vorzugsweise tiefgefroren und desinfiziert, z. B. mit Choramin T, zur Anwendung.

Die Häute werden dann in aufgetautem oder bevorzugt in tiefgefrorenem Zustand in Stücke geschnitten. Während des Zerkleinerns oder anschließend werden die Häute mit dem erfindungsgemäß zur Anwendung kommenden Oxidationsmittel unter den oben angegebenen Bedingungen vorbehandelt.

Die vorbehandelten Hautstücke werden dann in einem Fleischwolf zu einem Hautbrei zerkleinert. Der Hautbrei wird dann mit dem Oxidationsmittel gemäß den oben angegebenen Bedingungen behandelt. Vorzugsweise wird der Hautbrei unter Rühren bei 15 bis 17°C mit Citratpuffer extrahiert. Besonders bevorzugt ist es dabei, die Konzentration des Oxidationsmittels, insbesondere Wasserstoffperoxid, während der Extraktionsstufe konstant zu halten, beispielsweise auf einem Wert von 80 bis 120 ppm, insbesondere 90 bis 110 ppm.

Der Hautbrei wird dann über Filterbeutel aus doppelt gekrumpftem Baumwollfiltergewebe abfiltriert. Gewünschtenfalls wird überschüssiges Oxidationsmittel in üblicher Weise zerstört. Das auf diese Weise erhaltene Produkt hat ein Molekulargewicht von ca. 295 000 und das in Fig. 1 gezeigte Gel-Elektrophorese-Chromatogramm. Die Aminosäureanalyse dieses Produktes ist aus der unten angegebenen Tabelle ersichtlich.

Gegenstand der Erfindung sind auch kosmetische Mittel, welche die erfindungsgemäßen Kollagenderivate enthalten. Bei dem kosmetischen Mitteln handelt es sich insbesondere um Pflegemittel, die als Creme, Maske, Packung, Lotion, Gel, Milch etc. vorliegen können. Für diesen Zweck werden die erfindungsgemäßen Kollagenderivate in übliche kosmetische Grundlagen und Hilfsstoffe eingearbeitet.

Geeignete Grundlage sind beispielsweise Öle, wie Vaselinöl, Avocadoöl, Paraffinöl und dergleichen. Brauchbare Hilfsstoffe sind beispielsweise Emulgatoren, wie Mischungen von Ölen und/oder Fettalkoholen oder polyethoxylierten Alkoholen, Seifen und dergleichen; Verdickungsmittel, wie Natriumalginat, Gummi-arabikum, Xanthangummi, Cellulosederivate und dergleichen; Treibmittel zur Formulierung von Aerosolen, wie Kohlendioxid und Stickstoff; Lösungsmittel, wie Alkohole und dergleichen.

Die erfindungsgemäßen Mittel könnenn auch in der Kosmetik üblicherweise eingesetzte Bestandteile enthalten. Dazu zählen beispielsweise Parfüms, Farbstoffe, Konservierungsmittel, Antioxidantien, Sequestriermittel, weichmachende Mittel, Emulgatoren und dergleichen.

Die erfindungsgemäßen Mittel können auch kosmetisch aktive Additive enthalten. Dazu zählen beispielsweise Feuchthaltemittel, Carotinoide, Stabilisierungsmittel, Feuchtigkeitsregulatoren, pH-Regulatoren, UV-A- und UV-B-Filter und dergleichen.

Die erfindungsgemäßen Mittel enthalten in der Regel etwa 0,01 bis 5%, vorzugsweise etwa 0,1 bis 2 Gew.-% Kollagenderivat, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.

Die nachfolgenden Beispiele sollen die Herstellung der erfindungsgemäßen Wirkstoffe erläutern.

Beispiel 1

a) 250 g tiefgefrorene Kalbshäute (Masken; mit Chloramin T desinfiziert) werden in tiefgefrorenem Zustand grob zerkleinert und gleichzeitig mit einer Lösung von 2500 ml Wasserstoffperoxid (30%ig) in 500 l Wasser besprüht. Man läßt die Stücke dann auftauen (ca. 2 bis 3 Stunden). Man läßt das Wasser, das sich angesammelt hat, ab und wäscht die Stücke gegebenenfalls noch einmal mit 500 l Wasser. Nach Ablassen des Wassers werden die Hautstücke durch einen Fleischwolf gegeben.

In einem 400 l-Gefäß werden 100 l 0,128 m Citratpuffer pH 3,6 bei 15 bis 17°C und 400 ml Wasserstoffperoxid (30%ig) vorgelegt. Dann werden 50 kg durchgedrehtes (zerkleinertes) Gewebe zugegeben. Nach 30 Min. Rühren bei 15 bis 17°C wird die Konzentration an Wasserstoffperoxid gemessen. Durch weitere Zugabe wird die Wasserstoffperoxid- Konzentration bei ca. 100 ppm gehalten. Mittels dieses Verfahrens erhält man Lösungen, die 0,4 bis 0,8% gelöstes Kollagen (entsprechend 600 g bis 1200 g pro Ansatz) enthalten. Die Konstanz der Wasserstoffperoxidkonzentration (hier 100 ppm entsprechend 40 ml/150 l Ansatz) ist von entscheidender Bedeutung, damit in Lösung gehendes Kollagen, das noch nicht in der heterogenen Phase reagiert hat, zum Kollagen mit sulfoxidiertem Methionin umgesetzt werden kann. Ferner stellt diese Wasserstoffperoxidkonzentration ein optimales bakteriostatisches Medium dar. Die Suspension wird 3 Tage bei 15 bis 17°C gerührt, anschließend mit 100 l Puffer verdünnt und 24 h gerührt.

Durch Separieren bei 10 000 U/min wird eine Lösung von nativem löslichen Kollagen erhalten, die leicht opaleszierend ist und mit anderen Extrakten gepoolt wird, so daß die Lösung 0,225% lösliches Kollagen (300 µg Hydroxiprolin/ ml) enthält. Durch bekannte Verfahren wird überschüssiges Wasserstoffperoxid zersetzt.

Alternativ wird zur Entfernung von Wasserstoffperoxid das Zentrifugat mit Kochsalz versetzt, bis die Kochsalzkonzentration 6 Gew.-% beträgt, die ausgefallenen Fibrillen werden durch Zentrifugation abgetrennt und schließlich in 0,128 molarem Citratpuffer in Lösung gebracht.

Die Konservierung erfolgt mit üblichen Konservierungsmitteln, z. B. Phenonip (Gemisch von p-Hydroxybenzoesäureestern mit Phenoxyethanol).

Das Molekulargewicht des sulfoxidierten Kollagens ist etwa 295 000 (bestimmt mittels SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese).

Das Produkt ist dadurch charakterisiert, daß bei der Aminosäureanalyse im Elutionsdiagramm vor der Asparaginsäure Methioninsulfoxid austritt und später entsprechend weniger Methionin nachzuweisen ist.

Für die Aminosäureanalyse wird ein Aliquot der Lösung abgenommen und mit Kochsalz versetzt, bis die Lösung 6gew.-%ig an Kochsalz ist. Das ausgefallene Kollagen wird abzentrifugiert, dreimal gegen 0,1 m Essigsäure dialysiert und gefriergetrocknet.

Zur Aminosäureanalyse werden 5 mg gefriergetrocknetes Kollagen in 10 ml 6 N HCl unter Stickstoff 2 Stunden bei 110° ± 1° hydrolysiert. Die überschüssige Salzsäure wird im Vakuum abgezogen und der Rückstand im Elutionspuffer aufgenommen, und mittels Ionenaustauschchromatographie werden die Aminosäuren bestimmt.

Tabelle 1

Aminosäurezusammensetzung (Reste/1000 Aminosäuren)

b) Natives lösliches Kollagen läßt sich unter den oben angegebenen Reaktionsbedingungen in ein entsprechendes Kollagen mit sulfoxidiertem Methionin umwandeln (1000 g natives lösliches Kollagen in 100 l 0,128 M Citratpuffer vom pH 3,6 und 400 ml Wasserstoffperoxid; Temperatur und Aufarbeitungsbedingungen wie im Beispiel 1 angegeben).

Beispiel 2

a) Die Hautrückstände aus Beispiel 1 oder auch frische zerkleinerte Haut kann man, wie in Beispiel 1 beschrieben, in Gegenwart von Wasserstoffperoxid enzymatisch mit Trypsin oder Pepsin (Lit. siehe Anhang 2) zu Atelokollagen mit sulfoxidiertem Methionin umsetzen. Aminosäurezusammensetzung siehe Tabelle 1; Molekulargewicht des Produktes: ∼270 000 (SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese)

b) Auf ähnliche Weise und unter den in Beispiel 1b) genannten Reaktionsbedingungen läßt sich reines Atelokollagen in Atelokollagen mit sulfoxidiertem Methionin umwandeln.

Beispiel 3

a) Die Hautrückstände aus Beispiel 1 oder auch frische zerkleinerte Haut kann man, wie in Beispiel 1 beschrieben, in Gegenwart von Wasserstoffperoxid mit Alkali oder Säuren (Lit. siehe Anhang 2) zu Desamidokollagen mit sulfoxidiertem Methionin umgesetzt werden. Aminosäurezusammensetzung siehe Tabelle 1; Molekulargewicht des Produktes: ∼295 000 (SDS- Polyacrylamid-Gelelektrophorese).

b) Auf ähnliche Weise und unter den in Beispiel 1b) genannten Reaktionsbedingungen läßt sich reines Desamidokollagen in Desamidokollagen mit sulfoxidiertem Methionin umwandeln.

Fig. 1 zeigt die SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophoresechromatogramme für die gemäß den Beispielen 1 bis 3 erhaltenen Produkte. Die Gelelektrophorese wurde an 7%igem Gel unter den von U. K. Laemmel in Nature, 227, 680 bis 685 (1870) angegebenen Bedingungen durchgeführt. Unter diesen Bedingungen erfolgt eine teilweise Aufspaltung der Tripelhelix der Kollagene, so daß das Chromatogramm die γ-Ketten mit einem Molekulargewicht von etwa 300 KD, die β-Ketten mit einem Molekulargewicht von etwa 200 KD und die α-Ketten mit einem Molekulargewicht von etwa 100 KD zeigt. Proteolytische Abbauprodukte sind nicht nachweisbar.

In den folgenden Beispielen können die Kollagenderivate der Beispiele 1 bis 3 in Form der erhaltenen Lösung oder als Feststoff eingesetzt werden.

Beispiel 4
Hautcreme
Kollagenderivat|0,1 g
Polyethylencetylether	1,5 g
Cetylalkohol	2 g
Vaselineöl	6 g
Avocadoöl	4 g
Lanolin	4 g
Parfüm, soviel wie erforderlich @	steriles Wasser ad	100 g

Beispiel 5
Körpermilch
Kollagenderivat|1 g
Paraffinöl	5 g
Vaselineöl	7 g
Konservierungsmittel	0,15 g
Triethanolaminstearat	5 g
Stearinsäure	3 g
steriles Wasser ad	100 g

Beispiel 6
Hautlotion
Kollagenderivat|0,5 g
Konservierungsmittel	0,15 g
Polyvinylpyrrolidon	3 g
Ethanol	20 g
steriles Wasser ad	100 g

Beispiel 7
Hautgel
Kollagenderivat|0,5 g
Konservierungsmittel	0,15 g
Ethanol	40 g
Propylenglykol	42 g
Acrylsäurepolymerisat (Carbopol 940 der Fa. Goodrich Chemical Co.)	1 g
steriles Wasser ad	100 g

Anhang 1:

Berg, A.; (1984) Einsatz von Proteinen in Kosmetika; Parfümerie und Kosmetik 65 (7) 391-401 (1984).
Hein, R., Nehrlich, A., Müller, P., Krieg, T.; (1985) Angeborene Erkrankungen des Kollagens. Klinische Heterogenität und molekulare Defekte; Internist 26 420-428 (1985).
Krieg, T., Hein, R., Hatamochi, H., Aumailley, M.; (1988); Molecular and clinical aspects of connective tissue; Eur. J. Clin. Invest. 18 (2) 105-123 (1988).
Lindner, H.; (1984); Kollagen in der Kosmetik; Parfümerie und Kosmetik 65 (6) 340-346 (1984).
Mayne, B.; Preparation and applications of monoclonal antibodies to different collagen types; Clin. Biochem. 21 (2) 111-115 (1988).
Mayne, R.; Burgeson, R. E. (Eds.); (1987); Biology of extracellular matrix: Structure and function of collagen types; Academic Press (1987).
Nimni, M. E.; (1986); Collagen: Structure, function and biomaterial properties; NATO ASI, Ser. E 116 365-383 (1986).
Parkany, M.; (1984); Polymers natural origin as biomaterials. 2. Collagen and gelatin; In: Macromol. Biomater.; G. W. Hastings, P. Ducheyne (Eds.); CRC, Boca Raton, Florida; 111-117 (1984).
Piez, K. A.; (1985); Collagen; Encyl. Polym. Sci. Eng. 3 699-727 (1985).
Prockop, D. J., Kivirikko, K. I.; (1984); Heritable diseases of collagen; New Engl. J. Med. 311 (6) 376-386 (1984).

Anhang 2

Light, N. D.; (1985); Collagen in skin: Preaparation and analysis; In: Methods in skin research; D. Skerrow, C. J. Skerrow (Eds.); John Wiley and Sons Ltd. 559-586 (1985).
Patentschrift DE 20 64 604, 26 16 939.
European Patent Application 00 52 288, 00 83 868, 01 24 659, 01 32 979, 02 14 035, 02 24 453, 02 33 770, 02 84 789.
United States Patent 44 04 033, 45 82 640, 46 87 518.

Claims (12)

1. Kollagene, dadurch gekennzeichnet, daß zumindest ein Teil der im Kollagen enthaltenen Methioninreste als Methioninsulfoxid vorliegt.

2. Kollagene nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie auf Kollagen basieren, das ausgewählt ist unter nativen löslichem Kollagen, Atelokollagen, Desamidokollagen und einem Kollagen, das zu mindestens 90% aus Kollagen Typ I besteht.

3. Kollagene nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß 2 bis 5, insbesondere 2 oder 3 Methioninreste pro 1000 Kollagenaminosäuren sulfoxidiert sind.

4. Verfahren zur Herstellung der Kollagene nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man kollagenhaltiges Material in Anwesenheit eines geeigneten Oxidationsmittels auf Kollagen oder derivatisiertes Kollagen aufarbeitet oder isoliertes Kollagen oder isoliertes, derivatisiertes Kollagen mit einem geeigneten Oxidationsmittel behandelt.

5. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als Oxidationsmittel Wasserstoffperoxid oder ein Alkalimetallperoxid verwendet.

6. Verfahren nach Anspruch 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß man das Oxidationsmittel in einer Menge von 1,5-2,0 Äquivalenten, insbesondere 1,6 bis 1,9 Äquivalenten pro Methionin-Äquivalent verwendet.

7. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß man Kalbshaut, natives lösliches Kollagen, Atelokollagen oder Desamidokollagen als Ausgangsmaterial verwendet.

8. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß man in saurem Medium, insbesondere bei einem pH-Wert im Bereich von 2 bis 5, insbesondere 3 bis 4 arbeitet.

9. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man bei einer Temperatur im Bereich von 0 bis 20°C, insbesondere 10 bis 20°C arbeitet.

10. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß man das kollagenhaltige Material mit dem Oxidationsmittel vorbehandelt.

11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß man das kollagenhaltige Material vor der Vorbehandlung in tiefgefrorenem Zustand zerkleinert.

12. Kosmetische Mittel, enthaltend wenigstens ein Kollagen nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder ein Kollagen, das nach einem der Ansprüche 4 bis 11 erhältlich ist.