DE3880231T2

DE3880231T2 - Pyrazinoxid-Verbindung aus NF-1616-904, diese enthaltende Arzneimittelzubereitung und Verfahren zu ihrer Herstellung.

Info

Publication number: DE3880231T2
Application number: DE88112999T
Authority: DE
Inventors: Taketoshi Izawa; Tomoyuki Kawaguchi; Yoshimasa Nakano; Michiharu Sugawara; Setsuyoshi Uetsuki; Akira Wada
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1987-08-11
Filing date: 1988-08-10
Publication date: 1993-10-07
Anticipated expiration: 2008-08-11
Also published as: US5021419A; JPH01131177A; DK446388D0; KR960005150B1; EP0303250A2; JPH0557273B2; ES2054748T3; KR890003734A; DK170617B1; MX9202936A; EP0303250A3; EP0303250B1; CN1028655C; CN1032031A; DK446388A; DE3880231D1

Description

Die folgende Erfindung bezieht sich auf eine Pyrazinoxidverbindung, (NF-1616-904) mit der Formel
Insbesondere betrifft die Erfindung die neue Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904, ein Verfahren zur Herstellung der Verbindung und eine pharmazeutische Zusammensetzung, die die Verbindung als aktiven Bestandteil enthält.
Die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung ist eine neue Verbindung, die nicht im Stand der Technik bekannt ist.
EP-A-0 181 152 offenbart Piperazinverbindungen der Formel:
welche ein Piperazinderivat einer gesättigten heterozyklischen Verbindung ist.
Im Unterschied hierzu offenbart die vorliegende Erfindung eine Pyrazinoxidverbindung der Formel:
welche ein Pyrazinderivat einer ungesättigten heterozyklischen Verbindung ist und sich deutlich von dem Piperazinderivat der gesättigten heterozyklischen Verbindung, die in der zuvor genannten Entgegenhaltung offenbart ist, unterscheidet.
Diese Entgegenhaltung offenbart, daß die Piperazinverbindung sich als PAF (Thrombozytenaktivierungsfaktor)-antagonist eignet, wohingegen die erfindungsgemäße Pyrazinoxidverbindung pharmakologische Aktivitäten zur Vorbeugung und Behandlung von Krankheiten, die durch Peroxidreste (O&sub2;-) erzeugt werden, und Nephritis besitzt. Derartige Aktivitäten konnten nicht aufgrund der pharmakologischen Aktivität (PAF Antagonisten), die in der Entgegenhaltung erwähnt ist, vorhergesehen werden.
Chemical Abstracts, Band 95, (1981), 7743g offenbart zyklische Peptide der Formel:
welche Piperazinderivate einer gesättigten heterozyklischen Verbindung sind.
Im Unterschied hierzu offenbart die vorliegende Erfindung die zuvor beschriebene Pyrazinoxidverbindung, welche ein Pyrazinderivat einer ungesättigten heterozyklischen Verbindung ist, und die sich somit deutlich von dem in der Entgegenhaltung offenbarten Piperazinderivat unterscheidet.
Die Entgegenhaltung offenbart keine pharmakologischen Aktivitäten des Piperazinderivates, wohingegen die Pyrazinoxidverbindung gemäß der vorliegenden Erfindung pharmakologische Aktivitäten zur Vorbeugung und Behandlung von Krankheiten, die durch Peroxidgruppen (O&sub2;-) erzeugt werden, und Nephritis besitzt. Derartige Aktivitäten konnten nicht aufgrund der Offenbarung der zuvor genannten Entgegenhaltung angenommen werden.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine neue Pyrazinoxidverbindung zur Verfügung zu stellen. Diese Aufgabe wird durch zur Verfügungstellung einer Pyrazinoxidverbindung (NF-1616-904) mit der Formel
gelöst.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, ein Verfahren zum Herstellen der Pyrazinoxidverbindung zur Verfügung zu stellen.
Diese Aufgabe wird durch ein Verfahren zum Herstellen einer Pyrazinoxidverbindung gemäß Anspruch 1 gelöst, wobei eine Zwischenverbindung (mit dem in Figur 1 dargestellten ¹H-NMR Spektrum), die aus einem Kulturmedium des Mikroorganismus Thielavia minor (OFR-1561) (FERM BP-1908) abgetrennt ist, hydrolysiert wird.
Weitere Aufgaben der vorliegenden Erfindung betreffen die zur Verfügungstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die die Pyrazinoxidverbindung NF- 1616-904 als aktiven Bestandteil enthält, und die Verwendung der Pyrazinoxidverbindung.
Diese Aufgaben werden durch die Ansprüche 3 und 4 gelöst.
Figur 1 zeigt eine ¹H-NMR Spektrumdarstellung der neuen Zwischenverbindung NF-1616-902 gemäß der vorliegenden Erfindung;
Figur 2 zeigt eine ¹³C-NMK Spektrumdarstellung der gleichen Zwischenverbindung; und
Figur 3 zeigt eine IR-Absorptionsspektrumdarstellung der gleichen Zwischenverbindung.
Die zuvor beschriebenen Aufgaben der vorliegenden Erfindung können durch die neue Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 mit der nachfolgenden Formel (1)
gelöst werden.
Als Ergebnis einer von den Erfindern durchgeführten umfangreichen Untersuchung wurde festgestellt, daß eine neue Substanz mit den spezifischen biologischen Aktivitäten hergestellt werden kann, indem ein Mikroorganismus, welcher aus einer Bodenprobe aus Iriomote-jima, Okinawa-ken, Japan isoliert war, kultiviert wird. Anschließend ist die vorliegende Erfindung erfolgreich fertiggestellt worden, indem als Ergebnis gefunden wurde, daß die neue Pyrazinoxidverbindung NE-1616-904 hergestellt werden kann, indem die zuvor beschriebene neue Substanz als Zwischenverbindung hydrolysiert wird.
Die Herstellung der als Zwischenverbindungen zu verwendenden neuen Substanz und die Herstellung der neuen Pyrazinoxidverbindung NE-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung werden nachfolgend detailliert erklärt.
Die bei der Herstellung der gewünschten Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung zu verwendende Zwischenverbindung kann durch Kultivieren eines Mikroorganismus hergestellt werden.
Was das spezifische Beispiel für den Stamm des für die Herstellung der Zwischenverbindung zu verwendenden Mikroorganismuses anbelangt so kann ein Stamm, der zur Gattung Thielavia gehört, welcher aus einer Bodenprobe aus Iriomote-jima, Okinawa-ken, Japan, isoliert war, verwendet werden. Der Stamm wurde als Thielavia minor OFR-1561 bezeichnet und wurde an dem Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology unter der Hinterlegungsnummer FERM BP-1908 hinterlegt.
Mycologische Eigenschaften des Stammes werden im nachfolgenden erläutert.

a) Morphologie:

Die Cleistothecien sind gemäß mikroskopischen Beobachtungen kugelförmig oder fast kugelförmig, haben einen Durchmesser von 40 bis 100 um Größe, haben eine dunkelbraune Farbe, sind ohne Halsstück mit glatter Oberfläche. Die Peridien sind semitransparent. Die Sporenschläuche (Asci) sind 8-sporig und sind breit birnenförmig oder ovoidisch und haben sowehl eine Größe von 20-25 x 11-15 um wie auch eine verschwindend kleine. Die Askosporen sind ellipsoidisch, haben eine Größe von 8-11 x 6-8 um, sind zuerst farblos, werden anschließend dunkeloliv oder olivbraun. Beide Seiten der glatten Oberfläche laufen leicht in einer Spitze aus, und es wird eine einzelne apikale Keimpore gebildet. Konidien werden nicht beobachtet.

b) Wachstumszustände bei verschiedenen Agarkulturmedien:

Visuelle Beobachtungen von riesigen Kolonien, die auf verschiedenen Agarkulturmedien durch Impfen mit dem Stamm bei 37 ºC zehn Tage lang gezüchtet wurden.

i) Malzextract-Agarkulturmedium

Gut gewachsen. Weiße, baumwollförmige Hyphen werden in angehäufter Form gezüchtet. Es werden Sporenschlauchfrüchte im Übermaß gebildet. Die Rückseiten der Kolonien sind weiß oder haben eine dunkelgrüne Farbe.

ii) Kartoffel-Glucose-Agarkulturmedium

Gut gewachsen. Weiße, baumwollförmige Hyphen sind groß. Es werden Sporenschlauchfrüchte in geringerer Anzahl gebildet. Die Rückseiten der Kolonien haben eine dunkelgrüne Farbe.

iii) Sabouraud's Agarkulturmedium

Gut gewachsen. Es werden nur weiße, baumwollartige Hyphen beobachtet. Es wird keine Bildung von Sporenschlauchfrüchten beobachtet. Die Rückseiten der Kolonien haben eine leicht gelbe Farbe.

iv) YpSs-Agarkulturmedium

Gut gewachsen. Es sind weiße Hyphen dünn auf der Oberfläche verteilt. Sporenschlauchfrüchte von grauer oder schwarzer Farbe sind im Übermaß auf der Oberfläche der Kolonien vorhanden. Die Rückseiten der Kolonien sind farblos.

c) physiologische Eigenschaften

Züchtungstemperatur : 18 bis 43 ºC
Züchtungs-pH-Bereich: pH 3 bis 10
optimale Wachstumstemperatur : 25 bis 39 ºC
optimaler Wachstums-pH-Bereich: pH 5 bis 8
Dieser Stamm wurde auf der Grundlage der zuvor beschriebenen mycologischen Eigenschaften und der in dem Artikel "The Genus Thielavia" von David Malloch und R.F. Cain, in Mycologia, Band 65, (1973), Seiten 1055-1077 und in dem Artikel "Les Thielavia des sols arides: especes nouvelles et analyse generique" von Jean Mouchacca, in Bulletin Trimestriel Societé Mycologique France, Band 89, (1973), Seiten 295-311 beschriebenen Methoden als Stamm bestimmt, der zu Thielavia minor gehört, da die Oberfläche der Peritheciums glatt ist, die Askosporen eine Größe von 8-11 x 6-8 um aufweisen, mit einer einzigen apikalen Keimpore, und weil er auch keine Kondien bildet. Schließlich wurde der Stamm als Thielavia minor OFR- 1561 (FERM BP-1908) bezeichnet.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird die zur Herstellung der gewünschten neuen Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 zu verwendende Zwischenverbindung hergestellt, indem der zuvor beschriebene Stamm Thielavia minor OFR-1561 oder irgendwelche Mutanten davon, die zu der Gattung Thielavia gehören, die sich dazu eignen, die zuvor genannte Zwischenverbindung herzustellen, in einem geeigneten Kulturmedium kultiviert werden. Das Kultivieren der zuvor beschriebenen Mikroorganismen kann mittels konventioneller Verfahren zum Kultivieren gebräuchlicher Mikroorganismen durchgeführt werden, und im allgemeinen können die Verfahren vorzugsweise unter aeroben Bedingungen durchgeführt werden, beispielsweise in Flüssigkultur, Schüttelkultur, gerührter Kultur und dergleichen.
Was die zum Kultivieren der Mikroorganismen verwendbaren Kulturmedien anbelangt, so können jedwede Kulturmedien verwendet werden, die die Nährstoffquellen enthalten, die sich für die zuvor genannten Mikroorganismen, die zur Gattung Thielavia gehören, eignen, somit können verschiedene synthetische Kulturmedien, halbsynthetische Kulturmedien, natürliche Kulturmedien und dergleichen verwendet werden. Was die Kohlenstoffquellen bei der Formulierung der Kulturmedien anbelangt, so können Glucose, Sucrose, Fructose, Glycerin, Dextrin, Stärke, Melassen, Maisquellwasser und organische Säuren einzeln oder in ihrer Kombination verwendet werden. Was die Stickstoffquellen bei der Formulierung der Kulturmedien anbelangt, so können organische Stickstoffquellen wie beispielsweise Pharmamedia-Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Sojabohnenpulver, Casein, Aminosäuren, Harnstoff und dergleichen und anorganische Stickstoffquellen wie beispielsweise Natriumnitrat, Ammoniumsulfat und dergleichen einzeln oder in ihrer Kombination verwendet werden. Falls erforderlich, können Natriumsalze, Kaliumsalze, Magnesiumsalze, Phosphate und andere Schwermetallsalze zu den Kulturmedien gegeben werden. Darüber hinaus kann für den Fall, daß das Kulturmedium in einem gewissen Maße schäumt, anschließend irgendein bekanntes Anti-Schaummittel zu dem Kulturmedium hinzugefügt werden. Jedoch sollte die Hinzugabe des Anti-Schaummittels nicht irgendeinen entgegengesetzten Effekt auf die Herstellung der gewünschten Zwischenverbindung haben.
Der pH-Wert des Kulturmediums kann vorzugsweise im Hinblick auf einen optimalen pH-Bereich des zu verwendenden Mikroorganismus kontrolliert werden, im allgemeinen wird der pH-Wert dahingehend kontrolliert, daß er etwa einem natürlichen Bereich entspricht. Die Wachstumsternperatur kann auf etwa eine Temperatur eingestellt werden, die gut für das Wachsen des Mikroorganismus ist, im allgemeinen wird die Temperatur auf etwa 20-40 ºC gehalten, vorzugsweise kann sie auf etwa 30 ºC gehalten werden. Die Kultivierungszeit beträgt im Falle einer Flüssigkultur im allgemeinen etwa 1 bis 5 Tage.
Die gewünschte Zwischenverbindung wird gemäß der zuvor beschriebenen Kultur hergestellt und in der Kulturbrühe angesammelt. Selbstverständlich können die zuvor genannten verschiedenen Kulturbedingungen in geeigneter Weise in Abhängigkeit von der Art und den Eigenschaften des zu verwendenden Mikroorganismuses geändert werden, wie auch die externen Bedingungen geändert werden können. Somit können optimale Kultivierungsbedingungen ausgewählt und in Abhängigkeit von den Bereichen dieser Faktoren kontrolliert werden.
Wenn die gewünschte, in dem Kulturmedium hergestellte Zwischenverbindung in maximaler Menge angesammelt ist, kann die gewünschte Zwischenverbindung mittels Verfahren, die im allgemeinen zum Erhalten der Fermentationsprodukte verwendet werden, abgetrennt werden, beispielsweise mittels des Aussalzungsverfahrens wie beispielsweise Fällungsverfahren mit Ammoniumsulfat, mittels des Dialyseverfahrens, Extraktionsverfahrens, verschiedener Gel-Chromatographieverfahren, Ionenaustausch-Chromatographie, Adsorptions- Chromatographie und dergleichen, wobei dieses einzeln oder in Kombination in optimaler Reihenfolge durchgeführt wird.
Weil die mittels des zuvor beschriebenen Aktivierungsverfahrens hergestellte gewünschte Zwischenverbindung meistens in der Kulturbrühe (Filtrat) enthalten ist, wird das Myzel des festen Teils in der Kulturbrühe zuerst mittels Filtration oder Zentrifugationstrennung abgetrennt, anschließend wird das auf diese Weise erhaltene Filtrat mit extrahiert, und die organische Schicht des Extraktes, die die gewünschte Zwischenverbindung enthält, wird konzentriert, als nächstes kann die konzentrierte Flüssigkeit mittels Chromatographie wie beispielsweise Kieselgelchromatographie, Sephadex LH-20-(hergestellt von Pharmacia Fine Chemicals, Inc.) Säulen-Chromatographie und dergleichen gereinigt werden. Die Details des Reinigungsverfahrens sind in dem später aufgeführten Beispiel 1 dargestellt.
Die auf diese Weise erhaltene Zwischenverbindung wird durch ihre pyhsico-chemikalischen Eigenschaften, wie in dem später angegebenen Beispiel 1 dargestellt, bestimmt. Die Erfinder haben diese Zwischenverbindung NF-1616-902 genannt. Diese Zwischenverbindung NF- 1616-902 eignet sich zum Herstellen der gewünschten Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung, und die Zwischenverbindung NF-1616-902 besitzt auch, wie in dem später beschriebenen pharmakologischen Test 1 dargestellt, per se einige spezifische biologische und pharmakologische Aktivitäten, welche zur Verringerung der Toleranzgrenze von Krebszellen gegenüber verschiedenen Anti-Tumoragenzien verwendet werden können, indem die Zwischenverbindung in Kombination mit den Anti-Tumoragenzien verwendet wird. Somit ist die Zwischenverbindung NF-1616-902 ein für die Therapie von Krebs ziemlich geeignetes Mittel.
Die gewünschte Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung wird hergestellt, indem die zuvor beschriebene Zwischenverbindung NF- 1616-902 (mit dem in Figur 1 dargestellten ¹H-NMR ähnlich zu denjenigen sind, die bei der üblichen Hydrolyse in Anwesenheit eines Alkali verwendet werden.
Nach Beendigung der Hydrolyse kann die gewünschte Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 leicht mittels üblicher Trennungs- und Reinigungsverfahren, wie beispielsweise Lösungsmittelextraktionsverfahren, Säulen-Chromatographieverfahren, Umkristallisationsverfahren und dergleichen abgetrennt werden. Präzise ausgedrückt heißt das in bezug auf die Abtrennungsmittel, daß die hydrolysierte Mischung beispielsweise mit Ethylacetat extrahiert wird, anschließend der Extrakt säulenchromatographiert wird, wobei beispielsweise eine Sephadex LH-20-Säule verwendet wird, und die erhaltenene Fraktion aus Methanol umkristallisiert wird, wobei die gewünschte Pyrazinoxidverbindung NF- 1616-904 vorteilhafterweise erhalten wird.
Die auf diese Weise erhaltene Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung besitzt eine Inhibitorwirkung gegenüber Peroxidgruppen (O&sub2;-) die aus Makrophagenzellen des Meerschweinchens durch Stimulation freigegeben werden, und besitzt auch eine Anti-Albuminurieaktivität bei Masugi-Nephritis. Somit eignet sich die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 als Mittel zum Vorbeugen und Behandeln verschiedener Krankheiten, die durch die zuvor genannten Peroxidgruppen hervorgerufen werden, beispielsweise Autoimmunkrankheiten wie Arthritis rheumatica, Arteriosklerose, ischämische Herzkrankheit, vorübergehender zerebraler ischämatischer Anfall, Leberinsuffizienz, Niereninsuffizienz und dergleichen, wie auch als Mittel zum Vorbeugen und Behandeln von Nephritis in verschiedenen klinischen Bereichen.
Bei Verwendung der gewünschten Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 oder der Zwischenverbindung NF-1616-902 als aktiven Bestandteil in pharmazeutischen Zusammensetzungen kann jede dieser Verbindungen in jedweder Form von üblichen pharmazeutischen Zusammensetzungen, welche unter Verwendung üblicher pharmazeutisch geeigneter Träger hergestellt werden können, verwendet werden. Beispiele derartiger pharmazeutisch geeigneter Träger werden in Abhängigkeit von der gewünschten Form pharmazeutischer Zusammensetzungen gewählt, umfassen Verdünnungsmittel und Exipientien wie beispielsweise Füllstoffe, Verdünnungsmittel, Bindemittel, Benetzungsmittel, Auflösemittel, oberflächenaktive Mittel und Schmiermittel. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können von irgendeiner gewünschten Einheitsform in Abhängigkeit von dem Therapiezweck gewählt werden, einschließlich Tabletten, Pillen, Pulver, Flüssigkeiten, Suspensionen, Emulsionen, Granulate, Kapseln, Suppositorien, Injektionsherstellungen (beispielsweise Lösungen und Suspensionen), Salben und dergleichen.
Zum Zwecke der Tablettenherstellung aus Zusammensetzungen können Träger, welche in diesem Bereich verbreitet verwendet werden, beispielsweise Exipientien wie Lactose, Sucrose, Nartiumchlorid, Glucose, Harnstoff, Stärke, Calciumcarbonat, Kaolin, krystalline Zellulose und Kieselsäure; Bindemittel wie beispielsweise Wasser, Ethanol, Propanol, einfacher Sirup, Glucoselösungen, Stärkelösungen, Gelantinelösungen, Carboxylmethylzellulose, Schellack, Methylzellulose, Kaliumphosphat und Polyvinylpyrrolidon; Auflösemittel wie beispielsweise getrocknete Stärke, Natriumalginat, Agar-Agarpulver, Blatttang-Pulver, Natriumhydrogencarbonat, Calciumcarbonat, Ester von Polyoxyethylensorbitan- Fettsäuren, Natriumlaurylsulfat, Monoglycerid von Stearinsäure, Stärke und Lactose;
Auflösungsinhibitoren wie beispielsweise Sucrose, Stearin, Kokosnußbutter, und hydrierte Öle;
Absorptionsbeschleuniger wie beispielsweise quaternäre Ammoniumbasen und Natriumlaurylsulfonat;
Benetzungsmittel wie beispielsweise Glycerin und Stärke; Adsorptionsmittel wie beispielsweise Stärke, Lactose, Kaolin, Bentonit und kolloidale Kieselsäure;
und Schmiermittel wie beispielsweise gereinigter Talk, Stearinsäuresalze, Borsäurepulver und Polyethylenglykole verwendet werden. Falls erforderlich können die Tabletten zusätzlich mit üblichen Überzugsmaterialien überzogen werden, um sie in die Form überzogener Tabletten zu bringen, beispielsweise Tabletten, die mit Zucker überzogen sind, mit Gelantinefilm überzogene Tabletten, mit darmlöslichen Überzugsschichten versehene Tabletten, mit Filmen überzogene Tabletten oder mit Doppelschichten versehene Tabletten und mit Mehrfachschichten versehene Tabletten.
Zum Zwecke der Tablettenherstellung in Pillenform können Träger, welche bekannt und weit verbreitet in diesem Bereich verwendet werden, auch verwendet werden, beispielsweise sind Exipientien wie Glucose, Lactose, Stärke, Kokosnußbutter, hydrierte Pflanzenöle, Kaolin und Talk, Bindemittel wie gepulvertes Gummiarabikum, gepulverter Tragant Gelantine und Ethanol, Auflösungsmittel wie beispielsweise Riementang und Agar-Agar mit inbegriffen.
Zum Zwecke der Herstellung in Suppositorienform können Träger, die bekannt und in diesem Bereich umfangreich verwendet werden, auch verwendet werden, beispielsweise sind Polyethylenglykole, Kokosnußbutter, höhere Alkohole, Ester höherer Alkohole, Gelantine und halbsynthetisierte Glyceride mit inbegriffen.
Zum Zwecke der Herstellung in Kapselform wird der aktive Bestandteil mit den zuvor genannten Trägern mittels üblicher Verfahren gemischt, und die Mischung wird in Hart-Gelantinekapseln oder in Weichkapseln gefüllt.
Zum Zwecke der Herstellung in Injektionszubereitungen werden die Lösungen oder Suspensionen des aktiven Bestandteils sterilisiert und sind vorzugsweise isotonisch gegenüber dem Blut. Bei der Herstellung von Injektionszubereitungen in Form von Lösungen, Emulsionen und Suspensionen kann jedwedes Verdünnungsmittel, welches üblicherweise in diesem Bereich verwendet wird, auch verwendet werden, beispielsweise sind Wasser, Ethylalkohol, Polyethylenglykole, Propylenglykol, ethoxylierter Isostearylalkohol, polyoxylierter Isostearylalkohol und Polyoxyethylensorbitan-Fettsäureester mit inbegriffen. In diesen Fällen kann eine entsprechende Menge Nartiumchlorid, Glucose oder Glycerin zu den gewünschten Zubereitungen gegeben werden, um diese isotonisch zu machen. Darüber hinaus können übliche Auflösungsmittel, Puffer, Analgetika und andere Mittel hinzugefügt werden, ebenso können, falls erforderlich, auch Färbemittel, Konservierungsmittel, Parfums, Aromastoffe, Süßstoffe und andere Medizinen zu den gewünschten Zubereitungen gefügt werden.
Zum Zwecke der Herstellung in Pastenform,als Creme und Gelzubereitungen können Verdünnungsmittel wie beispielsweise Weißöl, Paraffin, Glycerin, Cellulosederivate, Polyethylenglykole, Silikone, Bentonit und dergleichen verwendet werden.
Die Menge des in den zuvor beschriebenen pharmazeutischen Zusammensetzungen enthaltenen aktiven Bestandteils ist nicht präzise begrenzt und kann aus einem breiten Bereich ausgewählt werden, im allgemeinen können 1 - 70 Gew.% aktiver Bestandteil in der Gesamtzusammensetzung enthalten sein.
Die Verfahren zum Verabreichen der pharmazeutischen Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung sind nicht ausdrücklich begrenzt, und die Zusammensetzung kann in verschiedenen Formen von Zubereitungen in Abhängigkeit von dem Alter, dem Unterschied des Geschlechts, der Art der Symptome und anderen Bedingungen des Patienten ohne Einschränkung verwendet werden. Beispielsweise werden Tabletten, Pillen, Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Granulat und Kapseln oral verabreicht; Injektionszubereitungen werden einzeln oder in Kombination mit üblichen injizierbaren Transfusionen wie beispielsweise Glucoselösungen, Aminosäurelösungen und anderen intravenös verabreicht; und erforderlichenfalls werden die Injektionszubereitungen einzeln intramuskulär, intracutan, subcutan oder intraperitoneal verabreicht. Die Suppositorien werden im Rectum verabreicht.
Die Dosierung der zuvor beschriebenen pharmazeutischen Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung kann in geeigneter Weise in Abhängigkeit von dem Verabreichungsverfahren, dem Alter des Patienten, dem Unterschied des Geschlechts und anderen Bedingungen wie auch dem Grad der Symptome gewählt werden, und im allgemeinen werden 0,5 - 30 mg/kg Körpergewicht pro Tag aktiver Bestandteil verabreicht, und eine derartige pharmazeutische Zusammensetzung wird aufgeteilt in Portionen 1 bis 4 mal am Tag verabreicht.
Die vorliegende Erfindung wird veranschaulicht, in dem Beispiele für die Herstellungen der Zwischenverbindung NF-1616-902 und der gewünschten Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 und pharmakologische Tests für jede dieser Verbindungen dargestellt werden. Jedoch ist die vorliegende Erfindung nicht nur auf diese Beispiele beschränkt.

BEISPIEL 1

Herstellung der Zwischenverbindung NF-1616-902

1. Kultivieren von Thielavia minor OFR-1561 (FERM BP- 1908):

100 ml eines Kulturmediums, welches aus 30 g/l Stärke, 5 g/l Glucose, 5 g/l Sojabohnenpulver, 1 g/l Hefeextrakt, 1 g/l Polypepton, 3 g/l CaCO&sub3; und 5 g/l MgSO&sub4; bestand, wurden in einen Erlenmeyerkolben mit 500 ml Kapazität gefüllt.
Die Menge einer Pt-Schlaufe voll Myzel des Thielavia minor OFR-1561 (FERM BP-1908) -Stammes, welcher im Fermantation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, auf einer Schrägagarkultur aufbewahrt ist, wurde in das zuvor beschriebene Kulturmedium geimpft und 96 bis 120 Stunden bei 28 ºC einer Schüttel- oder Rotationskultivierung ausgesetzt.
Das zuvor beschriebene Myzel des Thielavia minor OFR-1561 (FEKM BP-1908) Stammes wurde kultiviert und auf einer Schrägagarkultur (pH 6,5), die 4 % Maltose, 1 % Polypepton und 2 % Agar enthielt, eine Woche bei einer niedrigeren Temperatur als 30 ºC gelagert.

2. Reinigung der Zwischenverbindung NF-1616-902

Nach Beendigung der zuvor beschriebenen Kultivierung von Thielavia minor OFR-1561 (FERM BP-1908) wurden 100 ml Filtrat aus der Kulturbrühe mittels Filtration gewonnen.
Das zuvor beschriebene Filtrat wurde mit Ethylacetat extrahiert, und die Ethylacetatschicht wurde konzentriert, anschließend wurde das auf diese Weise erhaltene Konzentrat mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Elutionsmittel: Chloroform: Ethylacetat = 2 : 1), wobei eine aktive Fraktion erhalten wurde. Die aktive Fraktion wurde mittels einer Sephadex LH- 20 Säule (hergestellt von Pharmacia Fine Chemicals, Inc.) behandelt, dann wurden die mit einem Elutionsmittel (Chloroform : Methanol = 1 : 1) eluierten Fraktionen gesammelt und unter Erhalt der gewünschten Zwischenverbindung NF-1616-902 konzentriert.

3. Identifizerung der gewünschten Zwischenverbindung

Die auf diese Weise erhaltene Zwischenverbindung NF-1616-902 hat die folgenden physico-chemischen Eigenschaften:

1. Rf-Wert von TLC (Dünnschichtchromatograpie):

Bei Verwendung eines gemischten Lösungsmittels (Benzol: Ethylacetat: Methanol = 3 : 1 : 0,2) als Entwickler betrug der Rf-Wert auf der TLC- Platte (hergestellt von Merck & Co., Inc.) 0,40.

2. Farbänderung nach Mischung mit 50 %-iger H&sub2;SO&sub4;:

Änderung zu gelber Farbe. 3. Löslichkeiten in verschiedenen Lösungsmitteln: Lösungsmittel Löslichkeit Ethylacetat Hexan Dimethylsulfoxid Chloroform (leicht löslich) (unlöslich) Benzol Methanol Wasser (kaum löslich) (leicht löslich) (unlöslich)

4. Schmelzpunkt:

Nicht in Kristallform, somit lag die Substanz in unbestimmter Form vor, besaß keinen klaren Schmelzpunkt, sie schmilzt bei einer Temperatur von 191 bis 194 ºC.

5. Massenspektrum (EI):

M&spplus; = 327

6. FAB (schneller Atombeschuß)-Massenspektrum:

[M + 1]&spplus;= 653
[M + Na]&spplus;= 675

7. UV-Absorptionsspekrum (Ethanol):

λmax (E 1%1 cm) = 352 (233, &epsi; = 15160)
= 287 (256, &epsi; = 16680)
= 235 (Schulter)
= 232 (791, &epsi; = 51550)

8. Optische Drehüng:

[a] 26D = 775 (c = 1, CHCl&sub3;)

9. Kernresonanzspektrum(¹H-NMR):

Bestimmt in DMSO-D&sub6; bei 400 MHz. Die Ergebnisse sind in der beigefügten Figur 1 dargestellt.
= 7,36 (d, J=7,6, 2H)
7,12 (s, 2H)
7,05 (t, J=7,6, 2H)
6,67 (t, J=7,6, 2H)
6,65 (d, J=7,6, 2H)
6,03 (s, 2H)
3,86 (d, J=17,6, 2H)
3,72 (s, 6H)
3,47 (d, J-17,6, 2H)
2,61 (dd, J=12,7 und 7,1, 2H)
2,53 (dd, J=12,7 und 7,1, 2H)
2,05 (m, 2H)
0,84 (d, J=7,1, 12H)

10. Kernresonanzspektrum (¹³C-NMR):

Bestimmt in CD&sub3;OD bei 50 MHz, die Ergebnisse des 13C-NMR sind in der beigefügten Figur 2 dargestellt. Die meisten der Peaks in dem Spektrum sind folgende:
=156,5, 150,0, 144,0, 142,6, 131,6, 131,3, 128,8, 126,3, 120,8, 111,4, 85,4, 62,1, 60,0, 37,0, 34,5, 27,1, 23,0

11. Infrarotabsorptionsspektrum (IR):

Das IR-Absorptionsspektrum unter Verwendung des KBr-Verfahrens ist in der beigefügten Figur 3 dargestellt, in der die Hauptabsorptionsbanden folgende sind.
3352, 2950, 2852, 1680, 1610, 1480, 1425, 1371, 1330, 1315, 1255, 1240, 1182, 1092, 1018, 750 cm&supmin;¹

PHARMAKOLOGISCHER TEST 1

Wirkung der Abnahme der Toleranzgrenze gegenüber Vincristin in P388/VCR-Zellen

Dieser Test wurde mittels Verfahren, die ähnlich zu denjenigen sind, die in dem Artikel von T. Tsuruo, et al in Cancer Research, Band 44, (1984), Seiten 5095- 5099 beschrieben sind, durchgeführt.
Zuerst wurden P388/VCR-Zellen in der Konzentration 5 x 10&sup4; Zellen/ml in einem Kulturmedium aus RPMI-1640 + 10 % fötalem Kalbsserum (FCS) + 10 um 2- Mercaptoethanol suspendiert. Als nächstes wurde eine Lösung, die durch Lösen der Zwischenverbindung NF- 1616-902 in Dimethylsulfoxid (DMSO) hergestellt war, zur Verfügung gestellt, dann wurde eine vorbestimmte Menge dieser Lösung zu der zuvor beschriebenen Suspension aus P388/VCR-Zellen gegeben.
Auf ähnliche Weise wurde Vincristin zu der zuvor beschriebenen Zellsuspension gegeben, wobei serienartig zweifache Verdünnungen hergestellt wurden, und jede der Zellsuspensionen wurde in einem Inkubator, in dem 5 % CO&sub2; + 95 % Luft eingefüllt waren, 48 Stunden inkubiert. Die Überlebensraten der Zellen wurden bestimmt, und es wurden die Konzentrationen der Verbindung NF-1616-902 zur Verringerung der Toleranzgrenze der Zellen gegen Vincristin erhalten.
Die Ergebnisse des Tests sind in der nachfolgenden Tabelle 1 dargestellt. Tabelle 1 Konzentiation der Verbindung NF-1616-902 (um/ml) Cytotoxische Konzentration von Vincristin (ng/ml) Kontrollgruppe Testgruppe
Wie aus den in Tabelle 1 dargestellten Daten ersichtlich ist, besitzt die Zwischenverbindung NF- 1616-902 die Wirkung, daß die Toleranzgrenze von Krebszellen gegenüber Vincristin herabgesetzt wird, wenn sie zusammen mit Vincristin verwendet wird. Im allgemeinen ist die Erreichung der Toleranzgrenze von Krebszellen gegenüber einem Antitumor-Mittel eines der wichtigsten Probleme bei der Durchführung von Krebstherapien. Wie in dem zuvor Beschriebenen dargestellt, ist die Zwischenverbindung NF-1616-902 gemäß der vorliegenden Erfindung ein geeignetes Mittel zur Durchführung von Krebstherapien, weil bei Verwendung der Zwischenverbindung NF-1616-902 zusammen mit einem Antitumor-Mittel (in diesem Fall Vincristin) eine Verringerung der Toleranzgrenze der Krebszellen gegenüber dem Antitumor-Agens erwartet werden kann. Zusätzlich zu dem zuvor Beschriebenen wird bestätigt, daß die Wirkung der Zwischenverbindung NF-1616-902 nicht nur auf die gemeinsame Verwendung mit Vincristin begrenzt ist, sondern daß die Zwischenverbindung auch wirksam ist, wenn sie zusammen mit anderen Antitumor-Mitteln, beispielsweise Daunomycin, Vinblastin, Mitomycin, Bleomycin und dergleichen verwendet wird.

BEISPIEL 2

Herstellung der gewünschten Pyrazinoxidverbindung NF- 1616-904 gemäß der vorliegenden Verbindung
Die im Beispiel 1 erhaltene Zwischenverbindung NF- 1616-902 wurde in Methanol gelöst, und 2N-NaOH-Lösung wurde in dem Verhältnis 2 : 1 (Volumen pro Volumen) hinzugefügt, anschließend ließ man die Mischung 48 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Dann wurde diese Mischung mit 6N-HCl neutralisiert und mit Ethylacetat extrahiert, der Extrakt wurde unter Verwendung einer Sephadex LH-20 Säule einer Säulenchromatographie ausgesetzt und mit einem Lösungsmittel aus Chloroform : Methanol (2:1) unter Erhalt der gewünschten Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 eluiert, anschließend wurde aus Methanol umkristallisiert. Die auf diese Weise erhaltene Pyrazinoxidverbindung NF- 1616-904 wurde einer Röntgenstrukturanalyse unterworfen. Es wurden die nachfolgenden kristallographischen Daten erhalten.
Kristallographische Daten für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub1;N&sub3;O&sub3; triklinisch, Raumgruppe
P1, a = 10,804 (4),
b = 12,7986 (5),
c = 13,564 (6) , Å
α = 86,07 (3)
β = 107,00 (3)
γ = 106,93 (3)
z = 4
Als Ergebnis der mittels des direkten Verfahrens des MULTAN-Programms durchgeführten Strukturanalyse wurde die chemische Strukturformel der Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904, wie in der zuvor angegebenen Formel (1) dargestellt, bestätigt.
Die physico-chemischen Eigenschaften der gewünschten Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 sind folgende:

1. Aussehen:

Gelbe Kristalle (aus Methanol umkristallisiert)
2. Schmelzpunkt: 223,5 - 225,5 ºC
3. Massenspektrum (EI): M&spplus; = 327, 311, 310, 268, 193

4. UV-Absorptionsspektrum (Ethanol):

λmax (E 1%1cm) = 354 (233, &epsi; = 7370)
287 (Schulter)
279 (326, &epsi; = 10320)
273 (Schulter)
220 (1558, &epsi; = 49390)

5. Kernresonanzspektrum (¹H-NMR):

Bestimmt in DMSO-d&sub6; bei 250 MHz.
Die Ergebnisse des ¹H-NMR sind folgende:
= 11,96 (bs, 1H)
10,97 (s, 1H)
7,59 (d, J = 7,8, 1H)
7,36 (d, J = 7,9, 1 H)
7,27 (d, J = 2,1, 1H)
7,08 (dt, J = 1,3 und 7,8, 1H)
6,99 (dt, J = 1,3 und 7,8, 1H)
3,93 (s, 2H)
3,78 (s, 3H)
2,62 (d, J = 7,2, 2H)
2,11 (m, 1H)
0,86 (d, J = 6,7, 6H)

6. Kernresonanzspektrum (¹³C-NMR):

Bestimmt in CDCl&sub3;-CD&sub3;OD bei 62 MHz).
Die Ergebnisse des ¹³C-NMR sind folgende:
= 157,82, 143,88, 142,24, 137,20, 131,06, 127,21, 124,27, 122,42, 119,60, 118,72, 112,09, 109,36, 62,08, 33,99, 26,53, 24,60, 23,04

7. Infrarotabsorptionsspektrum (IR):

Es wurden die nachfolgenden Absorptionsbande als Ergebnisse des IR-Absorptionsspektrums unter Verwendung des KBr-Verfahrens beobachtet.
3250, 2950, 2910, 1620, 1450, 1409, 1370, 1330, 1241, 1090, 990, 735 cm&supmin;¹

PHARMAKOLOGISCHER TEST-2

Inhibitorwirkung der Pyrazinoxidverbindung NF-1616- 904 gegenüber Peroxidgruppen-(O&sub2;&supmin;) Freigabe aus den peritonealen Macrophagenzellen des Meerschweinchens durch Stimulation:
Mineralöl wurde einem Meerschweinchen intraperitoneal verabreicht, dann wurden 96 Stunden nach der Verabreichung peritoneale Macrophagenzellen erhalten.
Peroxidgruppen (O&sub2;&supmin;) wurden mittels Reduktion von Cytochrom C gemäß der in einem Artikel von T. Matsumoto et al. in Biochemical and Biophysical Research Communications, Band 88, Nr. 3, (1979), Seiten 974-979 beschriebenen Verfahren bestimmt.
Somit wurden peritoneale Macrophagenzellen bis zur Endkonzentration von 2 x 10&sup6; Zellen/ml in 1 ml 80 uM- Cytochrom C Lösung hinzugefügt, anschließend wurde die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 unter Erhalt der Testgruppenprobe dazugegeben. Andererseits wurde Wasser anstelle der Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 unter Erhalt der Kontrollgruppenprobe hinzugefügt. Beide Proben, sowohl die Testgruppenprobe wie auch die Kontrollgruppenprobe wurden bei 37 ºC eine Minute einer reinen Inkubation ausgesetzt.
Was das Stimulierungsmittel zur Freigabe von Peroxidgruppen (O&sub2;&supmin;) anbelangt, so wurde Formylmethionylleucylphenylalanin (FMLP) bis zur Endkonzentration von 10&supmin;&sup7; M in die zuvor beschriebene Testgruppenprobe und Kontrollgruppenprobe gegeben. Anschließend wurden beide Proben eine Minute einer zusätzlichen Reaktion ausgesetzt.
Es wurde der Unterschied der bei 550 nm (OD&sub5;&sub5;&sub0;) gemessenen Absorbtionswerte beider Proben, sowohl der Testgruppenprobe wie auch der Kontrollgruppenprobe bestimmt, und es wurde die 50 %-ige Inhibitorkonzentration (IC&sub5;&sub0;) erhalten, indem das Verhältnis der OD&sub5;&sub0; der Testgruppenprobe zu der der Kontrollgruppenprobe bestimmt wurde. Der erhaltene IC&sub5;&sub0; Wert betrug 1,2 x 10&supmin;&sup5; g/ml.

PHARMAKOLOGISCHER TEST-3

Anti-Albuminurieaktivität der Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 bei Masugi-Nephritis

Rattennierengift (im nachfolgenden als "NT" bezeichnet) wurde folgendermaßen hergestellt. Der Nierencortex einer Ratte wurde mit einer gleichen Menge physiologischen Kochsalzlösung homogenisiert, anschließend wurde das auf diese Weise erhaltene Homogenisat mit Freund's vollständigem Adjuvans (hergestellt von Dico Laboratories, Inc., Detroit, Michigan, USA) im Verhältnis 1 : 1 gemischt. Dann wurden 2 ml dieser Mischung subcutan einem Kaninchen (Körpergewicht: 3,1 kg) verabreicht, wodurch das Kaninchen immunisiert wurde. 1,5 Monate nach der Immunisierung wurde Blut aus dem Herzen des Kaninchens entnommen, und Serum wurde daraus erhalten. Das auf diese Weise erhaltene Serum wurde 30 Minuten bei 56 ºC inaktiviert und durch Aussalzen mit einer wäßrigen, mit 40 %-igem Ammoniumsulfat gesättigten Lösung fraktioniert. Durch Sammeln der Immunglobulin-γ-Globulin (IgG) Fraktion wurde das gewünschte NT erhalten.
Dieser Test wurde unter Verwendung männlicher Ratten des Wisterstammes mit 150 bis 160 g Körpergewicht durchgeführt. Die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung wurde gleichzeitig mit NT oral und unter Zwang verabreicht. Zusätzlich wurde 1 ml NT intravenös in die Schwanzvene der Ratte gegeben. Andererseits wurde anstelle der Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 physiologische Kochsalzlösung anderen Ratten, die die Kontrollgruppen bildeten, verabreicht.
Die Gesamtmenge des während 24 Stunden nach Verabreichung von NT im Urin ausgeschiedenen Urin- Proteins wurde mittels des Trübungsverfahrens unter Verwendung von Sulfosalicylsäure und Rinderserumalbumin (BSA) als Vergleichssubstanz mittels der in einem Artikel F. Kingsbury, et al in J. Lab. Clin. Med., Band 11, (1926), Seiten 981-989, beschriebenen Verfahren bestimmt.
Das Verhältnis der Inibierung der Albuminurie (%) in der Testgruppe wurde unter Bezugnahme auf den in der Kontrollgruppe gemessenen Wert bestimmt. Die Testergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 2 dargestellt, in der jedes der Testdaten als Durchschnittswert ± S.E der in jedem der Test- und Kontrollgruppen verwendeten sechs Ratten dargestellt wurde. Tabelle 2 Dosierung der Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 (mg/kg) Albuminurie (mg/Tag) Verhältnis der Inhibitierung Albuminurie % Kontrollgruppe (6 Ratten) Testgruppe (6 Ratten)
Wie aus den im pharmakologischen Test-2 und -3 erhaltenen Daten ersichtlich ist, besitzt die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 deutlich eine Inhibitorwirkung gegenüber Peroxidgruppen wie auch Anti-Albuminurieaktivität bei Nephritis. Somit eignet sich die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung als Mittel zum Vorbeugen und Behandeln nicht nur von Nephritis sondern auch von verschiedenen Krankheiten, die durch Peroxidgruppen hervorgerufen werden, beispielsweise Autoimmunkrankheiten wie Arthritis rheumatica, Arteriosklerose, ischämische Herzkrankheit, vorübergehender zerebraler ischämatischer Anfall, Leberinsuffizienz, Niereninsuffizienz und dergleichen.

Beispiel für eine pharmazeutische Zubereitung:

Es wurde eine pharmazeutische Zusammensetzung, die die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 als aktiven Bestandteil enthält, mit der folgenden Formulierung hergestellt.
Pyrazinoxidverbindung von NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung 150,0 g
Zitronensäure 1,0 g
Lactose 33,5 g
Diacalciumphosphat 70,0 g
Pluronic F-68 30,0 g (Warenzeichen für eine Serie von Polyoxyalkylenderivaten von Propylenglykol, hergestellt von BASF-Wyandott Corp., N.J., USA)
Natriumlaurylsulfat 15,0 g
Polyvinylpyrrolidon 15,0 g
Carbowax 1500 4,5 g (Warenzeichen für eine Serie von Polyethylenglykolen, hergestellt von Union Carbide Corp., N.Y., USA)
Carbowax 6000 45,0 g
Maisstärke 30,0 g
getrocknetes Natriumlaurylsulfat 3,0 g
getrocknetes Magnesiumstearat 3,0 g
Ethanol quantaum satis
Die Pyrazinoxidverbindung NF-1616-904 gemäß der vorliegenden Erfindung, Zitronensäure, Lactose, Dicalciumphosphat, Pluronic F-68 und Natriumlaurylsulfat wurden gründlich unter Erhalt einer Mischung zusammengemischt. Die auf diese Weise erhaltene Mischung wurde durch ein Sieb der Nummer 60 gesiebt, anschließend wurde das gesiebte Pulver der Mischung mit einer Ethanollösung, die Polyvinylpyrrolidon, Carbowax 1500 und Carbowax 6000 enthielt, naß granuliert. Das Pulver der Mischung wurde in eine pastenförmige Masse durch Hinzufügen einer entsprechenden Menge Ethanol, falls erforderlich, geformt. Zu dieser Masse wurde Maisstärke hinzugefügt, und es wurde unter Verformung der Masse in Granulat mit einheitlicher Teilchengröße gut geknetet. Das auf diese Weise erhaltene Granulat wurde durch ein Sieb der Nr. 10 gesiebt, anschließend wurde das gesiebte Granulat auf ein Tablett gelegt und 12 bis 14 Stunden in einem Ofen bei 100 ºC getrocknet. Das getrocknete Granulat wurde durch ein Sieb der Nr. 16 gesiebt, und getrocknetes Natiumlaurylsulfat und getrocknetes Magnesiumstearat wurden hinzugegeben, anschließend wurde die gesamte Mischung gut gemischt und in die gewünschte Form unter Verwendung einer Tablettierungsmaschine komprimiert, wobei die für die Kernteile der über zogenen Tabletten zu verwendenden Tabletten erhalten wurden. Die Kernteile wurden mit einem Lack behandelt, und zusätzlich wurden die behandelten Oberflächen mit Talk zum Schutz der Oberflächen vor Adsorption von Feuchtigkeit Überzogen. Die behandelten Oberflächen der Kernteile wurden zusätzlich mit einer primären Überzugsschicht überzogen und weiterhin mit einem Lack überzogen, wodurch eine ausreichende Anzahl von schichten für die Herstellung überzogener Tabletten für orale Verabreichung erhalten wurde. Um die überzogenen Kernteile der Tabletten in eine vollständig kugelförmige Form zu bringen und um die behandelten Oberflächen glatt zu machen, wurden die überzogenen Tabletten zusätzlich mit primären Überzugsschichten und glättenden Überzugsschichten überzogen. Die überzogenen Tabletten wurden mit Farbe überzogen, bis die gewünschte Farbe der Oberfläche erhalten wurde. Nach Trocknen der überzogenen Tabletten wurden deren Oberflächen poliert, wodurch sie mit einheitlichem Glanz versehen wurden.

Claims

1. Pyrazinoxidverbindung (NF-1616-904) mit der Formel (1)

2. Verfahren zum Herstellen einer Pyrazinoxidverbindung gemäß Anspruch 1 durch Hydrolysieren der Zwischenverbindung mit dem in Fig. 1 dargestellten ¹H-NMR Spektrum, welche aus einem Kulturmedium des Mikroorganismus Thielavia minor (OFR-1616-904) FERM BP-1908 abgetrennt ist.

3. Pharmazeutische Zusammensetzung, welche als aktiven Bestandteil eine Pyrazinoxidverbindung (NF-1616-904) gemäß Anspruch 1 enthält.

4. Verwendung der Verbindung nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Pharmazeutikums zum Vorbeugen und Behandeln von Krankheiten, die durch Peroxidgruppen erzeugt werden, oder von Nephritis.