DE3811083A1 - Immunoassay - Google Patents
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Description
Diese Erfindung bezieht sich auf ein Immunoassay, insbe
sondere ein Immunoassay bei dem die Antigensubstanz, die
elektrisch neutral ist oder nur eine geringe elektrische
Ladung trägt, mit einer elektrischen Ladung versehen wird
damit sie in den Zustand versetzt wird unter Elektrophorese
zu wandern, oder bei dem die Antigensubstanz die bereits
eine elektrische Ladung trägt, zum Zwecke der Verbesserung
ihrer Wanderungsfähigkeit noch zusätzlich elektrisch geladen
wird, wodurch diese Substanz in vorteilhafter Weise quanti
tativ bestimmt werden kann.
Ein typisches Beispiel für eine praktisch durchgeführte
Methode ist der Radioimmunoassay. Der Radioimmunoassay macht
jedoch problematische Arbeitsvorgänge erforderlich. Aus
diesem Grunde wurde unter Ausnutzung der Elektrophorese ein
hochempfindlicher Immunoassay entwickelt. Eine diesbezüg
liche Methode ist in der US-PS 46 28 035 beschrieben. Bei
diesem Elektrophorese-Immunoassay wird ein Reaktionsträger
zwischen der Anode und der Kathode eines Elektrophoresege
rätes plaziert, wobei zuvor an den Reaktionsträger ein
Antikörper, der spezifisch mit der zu bestimmenden Substanz
reagiert, gebunden worden ist. Durch elektrophoretische
Wanderung wird die zu bestimmende Substanz an den Reaktions
träger herangeführt und einer Antigen-Antikörper-Reaktion
unterworfen, wobei der Antikörper spezifisch mit der zu
bestimmenden Substanz im Träger reagiert. Gemäß dieser
Methode werden bei der quantitativen Bestimmung einer
Substanz in der Probe kontaminierende Materialien in der
Probe, die Meßfehler verursachen, lediglich durch Elektro
phorese durch den Reaktionsträger hindurch geführt, wodurch
eine Zurückhaltung im Träger und eine hierdurch bedingte
Beeinträchtigung der Antikörper-Reaktion im Träger vermieden
werden. Deshalb ist die Meßgenauigkeit hoch, und weil die zu
bestimmende Substanz durch Elektrophorese im Reaktionsträger
konzentriert wird, können selbst Spurenbestandteile von Blut
mit hoher Empfindlichkeit bestimmt werden.
Um jedoch eine Substanz nach der oben beschriebenen Methode
bestimmen zu können ist es wesentlich, daß die zu bestim
mende Substanz durch elektrophoretische Wanderung beim
Reaktionsträger ankommt. Bei Substanzen mit einer elektri
schen Ladung, wie Proteinkomponenten, kann der Elektro
phorese-Immunoassay erfolgreich eingesetzt werden. Auf
Substanzen ohne elektrische Ladung läßt sich die Elektro
phorese jedoch nicht anwenden. Aus diesem Grunde ist die
beschriebene Methode für die quantitative Bestimmung von
Substanzen, die elektrisch neutral sind oder keine oder nur
eine geringe elektrische Ladung tragen, wie Haptene oder
Steroidhormone, nicht in Erwägung gezogen worden. Ein
weiterer Nachteil besteht darin, daß bei einer zu bestimmen
den Substanz, die zwar eine elektrische Ladung besitzt,
jedoch in einer Probe in einer sehr niedrigen Konzentration
vorliegt, diese Substanz keine guten Wanderungseigenschaften
aufweist und aus diesem Grund nicht mit hoher Empfindlich
keit bestimmt werden kann.
Eine Aufgabe der Erfindung besteht somit darin, einen
Immunoassay bereitzustellen, bei dem mit hoher Genauigkeit
und hoher Empfindlichkeit mittels Elektrophorese ein Antigen
bestimmt werden kann, das elektrisch neutral ist oder keine
oder nur eine geringe elektrische Ladung trägt.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht darin, eine
Methode bereitzustellen, bei der zur Verbesserung der
Wanderungseigenschaft das zu bestimmende Antigen, das eine
elektrische Ladung trägt, mit einer höheren elektrischen
Ladung versehen wird, wodurch das Antigen mit hoher Empfind
lichkeit und hoher Genauigkeit quantitativ bestimmt werden
kann.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung
eines Immunoassay-Kits zur Durchführung der oben erwähnten
Methoden.
Der Immunoassay der Erfindung beinhaltet die Reaktion eines
Antigens, das bestimmt werden soll, mit einer definierten
Menge eines Antikörpers, der spezifisch mit diesem Antigen
reagiert, mit dem Zweck dieses Antigen mit einer elektri
schen Ladung zu versehen oder dieses Antigen mit einer
höheren elektrischen Ladung zu versehen; die Wanderung der
Reaktionsprodukte durch Elektrophorese zu einem Reaktions
träger zwischen Anode und Kathode in einer Elektrophorese
vorrichtung; das direkte oder indirekte Fixieren des Anti
körpers der nicht mit dem zu bestimmenden Antigen reagiert
hat oder des Antikörpers der mit dem zu bestimmenden Antigen
reagiert hat, auf dem Reaktionsträger; die direkte oder
indirekte Bestimmung der Menge des nicht umgesetzten Anti
körpers oder umgesetzten Antikörpers durch Markierung und
damit quantitative Bestimmung des Antigens, das in der Probe
bestimmt werden soll.
Als elekrisch neutral werden hierbei solche Stoffe ange
sehen, die sich im Elektrophoresefeld elektrisch neutral
verhalten.
Zur Bestimmung eines Antigens mit dem Immunoassay der
Erfindung werden vorzugsweise die vier folgenden Varianten
angewandt.
Die erste Immunoassay-Variante beinhaltet die Reaktion des
zu bestimmenden Antigens mit einer definierten Menge eines
markierten Antikörpers, der spezifisch reaktiv ist für das
zu bestimmende Antigen; das vorherige Aufbringen des glei
chen Antigens, wie das zu bestimmende Antigen auf den
Reaktionsträger; die elektrophoretische Wanderung der
Reaktionsprodukte in Richtung des Reaktionsträgers; die
Durchwanderung des Reaktionsproduktes aus dem zu bestimmen
den Antigen und dem damit reagierten markierten Antikörper
durch den Reaktionsträger; die Bindung des nicht umgesetzten
markierten Antikörpers an das gleiche Antigen wie das an den
Reaktionsträger gebundene Antigen, das bestimmt werden soll,
um nicht umgesetzten markierten Antikörper auf dem Reak
tionsträger zu halten; die Bestimmung der Menge des nicht
umgesetzten markierten Antikörpers durch Markierungsmessung;
und hierdurch quantitative Bestimmung des in der Probe
enthaltenen Antigens.
Eine zweite Immunoassay-Variante beinhaltet die Reaktion des
zu bestimmenden Antigens und einer definierten Menge eines
Kombinationsproduktes aus dem gleichen Antigen wie das zu
bestimmende und einer geladenen Substanz mit einer definier
ten Menge eines markierten Antikörpers, der spezifisch mit
dem zu bestimmenden Antigen reagiert; das vorherige Aufbrin
gen eines Antikörpers der spezifisch mit der geladenen
Substanz reagiert, auf den Reaktionsträger; die elektro
phoretische Wanderung der Reaktionsprodukte in Richtung des
Reaktionsträgers; die Durchwanderung des Reaktionsproduktes
aus dem zu bestimmenden Antigen und dem hiermit reagierten
markierten Antikörper durch den Reaktionsträger; die Bindung
des Reaktionsproduktes aus dem markierten Antikörper und dem
Kombinationsprodukt aus dem gleichen Antigen wie es bestimmt
werden soll und der geladenen Substanz an den Antikörper,
der die spezifische Reaktivität für die geladene Substanz
besitzt, die an den Reaktionsträger aufgebracht worden ist,
um den markierten Antikörper auf dem Reaktionsträger zu
halten; Bestimmung der Menge an markiertem Antikörper, der
auf dem Reaktionsträger gehalten wird, durch Markierungs
messung; wodurch das zu bestimmende Antigen in der Probe
quantitativ erfaßt wird.
Eine dritte Immunoassay-Variante besteht in der Reaktion des
Antigens, das bestimmt werden soll, und einer definierten
Menge eines Kombinationsprodukts aus demselben Antigen wie
es zu bestimmen ist und einer markierten geladenen Substanz
mit einer definierten Menge eines ersten Antikörpers, der
spezifisch mit dem zu bestimmenden Antigen reagiert; dem
vorherigen Aufbringen bzw. Binden eines zweiten Antikörpers,
der spezifisch mit dem ersten Antikörper reagiert, auf bzw.
an den Reaktionsträger; der elektrophoretischen Wanderung
der Reaktionsprodukte zum Reaktionsträger; der Bindung des
Reaktionsprodukts aus dem zu bestimmenden Antigen und dem
ersten Antikörper, der damit reagiert hat, und des Reak
tionsprodukts aus dem Kombinationsprodukt desselben Antigens
wie das zu bestimmende und der markierten geladenen Substanz
und dem ersten Antikörper, der mit diesem Kombinationspro
dukt reagiert hat, an den zweiten Antikörper, der an den
Reaktionsträger gebunden ist, um sie auf dem Reaktionsträger
zu halten; der Bestimmung der Menge des ersten Antikörpers
aus der Reaktion mit dem Kombinationsprodukt aus demselben
Antigen wie das zu bestimmende und der markierten Substanz
unter den auf dem Träger gehaltenen Reaktionsprodukten durch
Markierungsmessung; und hierdurch quantitative Erfassung des
in der Probe zu bestimmenden Antigens.
Eine vierte Immunoassay-Variante umfaßt die Reaktion des zu
bestimmenden Antigens und einer definierten Menge des
markierten gleichen Antigens wie das zu bestimmende mit
einer definierten Menge eines ersten Antikörpers, der
spezifisch mit dem zu bestimmenden Antigen reagiert; das
vorherige Aufbringen eines zweiten Antikörpers, der spezi
fisch mit dem ersten Antikörper reagiert, auf den Reaktions
träger; die elektrophoretische Wanderung der anderen Reak
tionsprodukte als das nicht umgesetzte markierte Antigen zum
Reaktionsträger; die Bindung des Reaktionsprodukts aus dem
zu bestimmenden Antigen und dem ersten Antikörper, der
hiermit reagiert hat, und des Reaktionsprodukts aus dem
markierten Antigen und dem damit reagierten ersten Antikör
per, an den zweiten Antikörper der an den Reaktionsträger
gebunden ist, um die Reaktionsprodukte auf dem Reaktions
träger zu halten; die Bestimmung der Menge des ersten
Antikörpers, der mit dem markierten Antigen reagiert hat,
unter den anderen Reaktionsprodukten, die auf dem Reaktions
träger gehalten werden, durch Markierungsmessung; und damit
quantitative Bestimmung des Antigens aus der Probe.
Neben diesen drei Varianten kann noch eine vierte Variante
angewandt werden, in der die verschiedenen nicht markierten
Substanzen im anfänglichen Stadium der Reaktion eingesetzt
werden, wobei dann nach der Elektrophorese ein markierter
Antikörper an den auf dem Reaktionsträger gehaltenen bzw.
fixierten Antikörper gebunden wird, und nachfolgend die
quantitative Bestimmung durch Markierungsmessung durchge
führt wird. Im Detail beinhaltet diese Variante den Einsatz
des zu bestimmenden Antigens zusammen mit einem damit
spezifisch reaktiven Antikörper oder zusammen mit diesem
Antikörper und einem Kombinationsprodukt aus dem gleichen
Antigen wie das zu bestimmende und einer geladenen Substanz;
Reaktion in der Anfangsphase in gleicher Weise wie in den
oben beschriebenen ersten, zweiten und dritten Variante,
ohne daß jedoch ein markierter Antikörper oder die markierte
geladene Substanz benutzt wird; elektrophoretische Wanderung
der Reaktionsprodukte zum Reaktionsträger; Kombination des
Antikörpers oder der geladenen Substanz, die auf dem Reak
tionsträger gehalten werden, mit einem markierten Antikör
per, der spezifisch reaktiv hiermit ist; und Bestimmung der
Menge des so kombinierten markierten Antikörpers durch
Markierungsmessung, wobei damit das zu bestimmende Antigen
in der Probe quantitativ bestimmt wird.
Gemäß der vorliegenden Erfindung ist für die erste Variante
oder ihre Modifikationen ein Immunoassay-Kit vorgesehen mit
- - einem nicht markierten oder markierten Antikörper mit spezifischer Reaktivität gegenüber dem zu bestimmenden Antigen; und
- - einem Reaktionsträger zur Elektrophorese, der das gleiche Antigen wie das zu bestimmende gebunden ent hält.
Nachfolgend ist die Erfindung anhand der Zeichnungen be
schrieben. Es zeigen
Fig. 1 eine schematische Darstellung des
Immunoassays der Erfindung
Fig. 2 eine Thyroxin (T 4)-Eichkurve gemäß der
ersten Immunosassay-Variante der Erfindung
Fig. 3 eine Cortisol (Hydrocortison)-Eichkurve gemäß der
zweiten Immunoassay-Variante der Erfindung
Fig. 4 eine T 4-Eichkurve gemäß der dritten
Immunosassay-Variante der Erfindung
Fig. 5 eine Cortisol-Eichkurve gemäß der vierten
Immunoassay-Variante der Erfindung
Fig. 6 eine T 4-Eichkurve gemäß der modifizierten ersten
Immunoassay-Variante der Erfindung, und
Fig. 7 AFP-Eichkurven gemäß der ersten
Immunoassay-Variante der Erfindung und einer
konventionellen Methode.
Der Immunoassay der Erfindung beinhaltet die Reaktion eines
zu bestimmenden Antigens, das elektrisch neutral ist oder
keine oder nur eine geringe elektrische Ladung trägt, mit
einer definierten Menge eines Antikörpers um dem Antigen
eine elektrische Ladung zu verleihen; oder die Reaktion
eines zu bestimmenden Antigens, das ursprünglich eine
elektrische Ladung trägt, mit einer definierten Menge
Antikörper um dem Antigen eine höhere elektrische Ladung zu
verleihen; die Wanderung der Reaktionsprodukte zum Reak
tionsträger; das Zurückhalten des nicht umgesetzten Antikör
pers oder des umgesetzten Antikörpers auf dem Reaktions
träger; und die Bestimmung der Menge des in einer Probe zu
bestimmenden Antigens basierend auf der Menge des nicht
umgesetzten Antikörpers oder des umgesetzten Antikörpers auf
dem Reaktionsträger.
Die oben beschriebenen Varianten 1 bis 4 werden im folgenden
unter Bezug auf die schematische Darstellung von Fig. 1
erläutert.
Die erste Variante ist in Fig. 1 (1) gezeigt. Hierbei wird
z. B. ein in einer Probe zu bestimmendes Antigen A, das
elektrisch neutral ist oder keine oder nur eine geringe
elektrische Ladung trägt, mit einem markierten Antikörper
BL, der spezifisch mit dem Antigen A reagiert, zur Reaktion
gebracht. In der Reaktionslösung verbleiben ein Antigen-
Antikörper-Reaktionsprodukt A-BL und der nicht umgesetzte
Antikörper BL. Das das Antigen A an den elektrisch geladenen
Antikörper BL gebunden ist, ist es damit mit einer elektrischen
Ladung versehen worden, die es ihm ermöglicht,
elektrophoresisch zu wandern. Bei der Elektrophorese wandert
das Antigen-Antikörper-Reaktionsprodukt A-BL durch einen
Reaktionsträger T, während der nicht umgesetzte (überschüssige)
Antikörper BL an das zuvor auf den Reaktionsträger
T aufgebrachte Antigen A gebunden wird, so daß der
überschüssige Antikörper BL hierauf festgehalten wird.
Daraufhin wird die Menge des markierten Antikörpers BL auf
dem Reaktionsträger gemessen. Aus diesem Grunde kann das
Antigen A quantitativ dadurch bestimmt werden, daß die Menge
des überschüssigen Antikörpers von der bekannten definierten
Menge des markierten Antikörpers BL vor der Reaktion sub
trahiert wird. Alternativ dazu kann mit Hilfe einer Eich
kurve das Antigen A sofort aus dem Markierungswert für das
Antigen A in der Probe bestimmt werden, wenn zuvor eine
Eichkurve aufgestellt wurde, in der der Markierungswert
gegen die Menge an Antigen aufgetragen wird.
Die zweite Variante wird in Fig. 1 (2) gezeigt. Ein in einer
Probe zu bestimmendes Antigen A, eine definierte Menge eines
Kombinationsprodukts aus demselben Antigen wie es zu
bestimmen ist, und einer geladenen Substanz werden mit einer
definierten Menge eines markierten Antikörpers BL, der
spezifisch mit dem Antigen A reagiert, umgesetzt. In diesem
Fall gehen das Antigen A und das Kombinationsprodukt AC eine
Konkurrenzreaktion mit dem Antikörper BL ein, wobei jede
resultierenden Antigen-Antikörper-Reaktionsprodukte A-BL und
AC-BL eine elektrische Ladung tragen und Elektrophorese-Wanderungsfähigkeit
besitzen. Ein Antikörper BC′, der spezifisch
mit der geladenen Substanz C reagiert, wird vorher auf
dem Reaktionsträger T aufgebracht bzw. fixiert. Obwohl in
Fig. 1 (2) die geladene Substanz C mit (- -) gekennzeichnet
ist, und der Antikörper BC′ mit (+ +), ist dies lediglich
als Beispiel zu sehen und konträre elektronische Ladungsverhältnisse
sind als ebenso möglich anzusehen. Werden nun die
Reaktionsprodukte einer Elektrophorese unterzogen, so
wandert das Antigen-Antikörper-Reaktionsprodukt A-BL durch
den Reaktionsträger T, das Reaktionsprodukt AC-BL und das
überschüssige Kombinationsprodukt AC werden jedoch durch den
Antikörper BC′, der an den Reaktionsträger T gebunden ist,
zurückgehalten. Die Menge des markierten Antikörpers im
Reaktionsprodukt AC-BL, die auf dem Reaktionsträger zurückgehalten
wird, wird durch Markierungsmessung bestimmt. Das
überschüssige Kombinationsprodukt AC ist nicht markiert und
zeigt deshalb keine Aktivität bei der Markierungsmessung.
Auf diese Weise kann das in der Probe zu bestimmende Antigen
A durch Messung des Markierungswertes des markierten Antikörpers
im Reaktionsprodukt AC-BL quantitativ erfaßt werden.
Beispiele für geladene Substanzen, wie in der zweiten
Variante verwendet, sind Proteine, wie Albumin, einschließ
lich Rinderserum-Albumin, Kaninchenserum-Albumin und Human
serum-Albumin, Globuline, einschließlich α-, β- oder
Γ-Globulin, und Lipide, wie Dicetylphosphorsäure. Die
geladene Substanz kann mit dem Antigen auf konventionelle
Weise unter Verwendung eines Vernetzungsmittels, wie
Glutaraldehyd, verknüpft werden. Der Antikörper kann an den
Reaktionsträger zum Beispiel mittels Acrolein (US-PS 46 28 035)
gebunden werden.
Die dritte Variante ist in Fig. 1 (3) gezeigt. Ein in der
Probe zu bestimmendes Antigen A, eine definierte Menge eines
Kombinationsproduktes ACL aus demselben Antigen wie das zu
bestimmende, und eine markierte geladene Substanz, werden
mit einer definierten Menge eines ersten Antikörpers B₁ mit
Reaktionsspezifität für das Antigen A zur Reaktion gebracht.
In diesem Fall gehen das Antigen A und das Kombinationsprodukt
ACL mit dem Antikörper B₁ eine Konkurrenzreaktion ein
und bilden Antigen-Antikörper-Reaktionsprodukte A-B₁ und
ACL-B₁, die in der Elektrophorese wandern können. Ein
zweiter Antikörper B₂, der spezifisch mit dem ersten Antikörper
B₁ reagiert, ist zuvor auf dem Reaktionsträger T
fixiert worden. Wenn nun die Reaktionsprodukte einer Elektrophorese
unterzogen werden, werden das Antigen-Antikörper-
Reaktionsprodukt A-B₁ und das Reaktionsprodukt ACL-B₁ durch
den zweiten Antikörper B₂, der auf dem Reaktionsträger T
fixiert ist, zurückgehalten, das unumgesetzte Kombinationsprodukt
ACL wandert jedoch durch den Reaktionsträger T. Die
Menge des Reaktionsproduktes ACL-B₁, das auf dem Reaktionsträger
T zurückgehalten wird, wird durch die Markierungsmessung
bestimmt. Auf diese Weise kann das zu bestimmende Antigen A
quantitativ bestimmt werden, basierend auf dem Markierungswert
des Reaktionsproduktes ACL-B₁.
Für die dritte Variante kommen als geladene Substanzen die
vorgenannten Substanzen in Frage. Die geladenen Substanzen
können mittels konventioneller Methoden markiert werden.
Die vierte Variante ist in Fig. 1 (4) gezeigt. Ein in der
Probe zu bestimmendes Antigen A und eine definierte Menge
des markierten gleichen Antigens wie das zu bestimmende
werden mit einer definierten Menge eines ersten Antikörpers
B 1 zur Reaktion gebracht, der spezifisch mit dem Antigen A
reagiert. In diesem Fall gehen das Antigen A und das
markierte Antigen AL eine Konkurrenzreaktion um den ersten
Antikörper B₁ ein und ergeben Antigen-Antikörper-Reaktionsprodukte
A-B₁ und AL-B₁, die unter Elektrophorese wandern
können. Ein zweiter Antikörper B₂ mit spezifischer Reaktion
zum ersten Antikörper B₁ wird zuvor auf einem Reaktionsträger
T fixiert. Wenn die Reaktionsprodukte einer Elektrophorese
unterzogen werden, werden das Antigen-Antikörper-
Reaktionsprodukt A-B₁ und das Reaktionsprodukt AL-B₁ auf dem
Reaktionsträger T aufgrund des dort vorhandenen zweiten
Antikörpers B₂ zurückgehalten. Für den Fall jedoch, daß das
markierte Antigen AL z. B. ein Hapten ist, z. B. ein Steroidhormon,
ist das nicht umgesetzte markierte Antigen AL elektrisch
neutral und kann aus diesem Grunde nicht wandern. Die
Menge des Reaktionsproduktes AL-B₁, das auf dem Reaktionsträger
T zurückgehalten wird, wird durch die Markierungsmessung
bestimmt. Auf diese Weise kann das zu bestimmende Antigen A
quantitativ bestimmt werden, basierend auf dem Markierungswert
des Reaktionsproduktes AL-B₁.
Man kann aber auch zur Bestimmung eines Antigens in einer
Probe eine Methode anwenden, in der gleichen Weise, wie in
einer der oben erwähnten Variante, jedoch mit dem Unter
schied, daß keine markierte Substanz für die Reaktion des
Antigens und eines Antikörpers vor der Durchführung der
Elektrophorese verwendet wird. In diesem Fall kann das
betreffende Antigen dadurch quantitativ bestimmt werden, daß
das Antigen mit dem nicht markierten Antikörper zur Reaktion
gebracht wird, die Reaktionsprodukte durch elektrophore
tische Wanderung an den Reaktionsträger herangebracht werden
und daß dann weiter die Reaktionsprodukte oder die nicht
reagierten nicht markierten Antikörper, die auf dem Reak
tionsträger zurückgehalten werden, mit einem markierte
Antikörper korrespondierend zu der markierten Substanz, so
wie in den vorgenannten Methoden benützt, zur Reaktion
gebracht werden. Eine Modifikation der ersten Variante des
Immunoassays sieht z. B. wie folgt aus. Ein in einer Probe
zu bestimmendes Antigen A wird mit einem für dieses Antigen
spezifischen, nicht markierten Antikörper BL (ein erster
Antikörper) zur Reaktion gebracht; man läßt die Reaktionsprodukte
in der gleichen Weise wie oben beschriebenen,
wandern. Das aus der oben erwähnten Reaktion resultierende
Antigen-Antikörper-Reaktionsprodukt A-BL wandert durch einen
Reaktionsträger. Der nicht umgesetzte erste Antikörper BL
jedoch reagiert mit dem zuvor auf dem Reaktionsträger
fixierten Antigen und wird im Reaktionsträger festgehalten.
Dann wird ein markierter Antikörper (ein zweiter Antikörper)
mit Reaktionsspezifität für den ersten Antikörper BL hinzuge
fügt. Durch Messung der Markierungsmenge des Reaktionspro
duktes aus dem ersten Antikörper, der auf dem Träger
zurückgehalten wird, und dem zweiten Antikörper, der damit
reagiert hat, kann das zu bestimmende Antigen quantitativ
erfaßt werden. Der nicht reagierte markierte zweite
Antikörper wandert durch den Reaktionsträger.
Auf ähnliche Weise kann die zweite Immunoassay-Variante wie
folgt modifiziert werden. Ein in einer Probe zu bestimmendes
Antigen A und ein Kombinationsprodukt AC werden mit einem
nicht markierten Antikörper BL (ein erster Antikörper) zur
Reaktion gebracht; die Reaktionsprodukte werden in der
gleichen Weise wie nach Variante 2 durch Elektrophorese zur
Wanderung gebracht. Daraufhin wird der Antikörper BL im
Reaktionsprodukt AC-BL, der wegen des Antikörpers BC′ auf
dem Träger zurückgehalten wird, mit einem markierten Antikörper
(ein zweiter Antikörper), der spezifisch mit dem
Antikörper BL reagiert, zur Reaktion gebracht; durch Messung
der Markierungsmenge des zweiten reagierten Antikörpers kann
das in der Probe zu bestimmende Antigen quantitativ erfaßt
werden.
In ähnlicher Weise kann eine Modifikation der dritten
Immunoassay-Variante unter Verwendung einer nicht markierten
geladenen Substanz und eines markierten Antikörpers, der
hiermit spezifisch reagiert, durchgeführt werden.
Wie oben beschrieben, wird erfindungsgemäß ein in einer
Probe zu bestimmendes Antigen, das elektrisch neutral ist
oder keine oder nur eine geringe elektrische Ladung trägt,
durch Reaktion dieses Antigens mit einem Antikörper mit
spezifischer Reaktivität für dieses Antigen befähigt,
elektrophoresisch zu wandern; danach wird der Immunoassay
unter Elektrophorese ausgeführt. Aus diesem Grunde kann das
zu bestimmende Antigen mit hoher Empfindlichkeit und hoher
Genauigkeit quantitativ bestimmt werden. Bevorzugte Bei
spiele für zu bestimmende Antigene sind Steroidhormone, wie
Thyroxin, Triiodothronin, Cortisol (Hydrocortison), Östro
gen, Progesteron und Testosteron; Herzmittel, wie Digoxin
und Digitalis; Antileptica, wie Phenobarbital und Amobarbi
tal; sowie Vitamine, wie Vitamin D 3.
Obwohl in den oben beschriebenen Immunoassay-Varianten eine
Markierungssubstanz, die am Reaktionsträger fixiert ist,
gemessen wird, ist es aber auch möglich, das zu bestimmende
Antigen quantitativ zu bestimmen, dergestalt, daß eine
Markierungssubstanz in den Reaktionsprodukten, die durch den
Reaktionsträger hindurch gewandert sind, gemessen wird.
Wie oben beschrieben, wird der Immunoassay an dem zu bestim
menden Antigen, das elektrisch neutral ist oder keine oder
nur eine geringe elektrische Ladung trägt, ausgeführt;
selbstverständlich kann der Immunoassay aber auch mit
geladenen Antigenen ausgeführt werden. Insbesondere kann ein
Immunoassay mit einem geladenen Antigen geringer Konzentra
tion gemäß der vorliegenden Erfindung vorteilhaft ausgeführt
werden, da im Falle der vorliegenden Erfindung das geladene
Antigen durch Antigen-Antikörper-Reaktion weitere Ladung
erhält und damit die Wanderungseigenschaften verbessert
werden. Beispiele für bevorzugte zu bestimmende Antigene
sind Proteinantigene, wie α-Fetoprotein und Schilddrüsen
stimulierende Hormone. Insbesondere kann das Protein-Antigen
vorzugsweise nach der ersten Variante oder ihrer Modifika
tion gemäß der vorliegenden Erfindung quantitativ bestimmt
werden.
Um die erste Immunoassay-Variante oder ihre Modifikation wie
oben erläutert auszuführen wird vorzugsweise ein Immunoassay-
Kit eingesetzt, das besteht aus
- - einem nicht markierten oder markierten Antikörper mit spezifischer Reaktivität für das zu bestimmende Antigen und
- - einem Reaktionsträger für die Elektrophorese, an den dasselbe Antigen wie das zu bestimmende fixiert ist.
Beispiele für geeignete Reaktionsträger sind Polyacrylamid
gelmembranen oder Celluloseacetatmembranen. Zusätzlich kann
das Kit eine geeignete Pufferlösung etc. enthalten.
Die Beispiele erläutern die Erfindung.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird ein in einer Probe zu
bestimmendes Antigen, das elektrisch neutral ist oder nur
eine geringe oder keine elektrische Ladung trägt, mit einem
markierten und für dieses Antigen spezifischen Antikörper
zur Reaktion gebracht. Als Antigen lassen sich z. B. Hap
tene, wie Triiodothyronin (T 3) oder Thyroxin (T 4) bestimmen.
Als Markierungssubstanz kommen z. B. in Frage fluoreszieren
de Substanzen, wie Fluoresceinisothiocyanat (FITC) und
Tetramethylrohdaminisothiocyanat; phosphorescierende Sub
stanzen, wie Luminol; Enzyme, wie alkalische Phospatase,
Peroxidase und Glucosidase. Hinsichtlich der Markierungssub
stanzen bestehen jedoch keine besonderen Beschränkungen. Die
Markierungssubstanzen können an das Antigen oder den Anti
körper nach bekannten Methoden gebunden werden (Advances S.
Immunochemistry 6 (1969)43). Ein Reaktionsträger ist zwi
schen Anode und Kathode einer Elektrophoresevorrichtung
vorgesehen, wobei z. B. bei der ersten Immunoassay-Variante
auf diesem Träger das gleiche Antigen wie das zu bestimmende
zuvor fixiert wird. Ein Antigen oder ein Antikörper kann
unter Verwendung eines Proteins, wie Rinderserum-Albumin,
auf dem Reaktionsträger fixiert werden. Als Reaktionsträger
können alle üblichen Materialien eingesetzt werden, z. B.
Polyacrylamidgel- und Celluloseacetatmembranen.
Entsprechend der Variante 1 wird das in der Probe zu bestim
mende Antigen mit einer definierten Menge des markierten
Antikörpers umgesetzt, wobei das Reaktionsprodukt aus dem zu
bestimmenden Antigen und dem markierten Antikörper eine
elektrische Ladung trägt und aus diesem Grunde unter Elek
trophorese wanderungsfähig ist. Die Menge des zu bestimmen
den Antigens wird grob geschätzt und der markierte Antikör
per wird in einem geringen Überschuß in Abhängigkeit von der
geschätzten Menge des Antigens eingesetzt. Dann werden die
Reaktionsprodukte elektrophoretisch an den Reaktionsträger
herangebracht. In diesem Falle wandert das Reaktionsprodukt
aus dem zu bestimmenden Antigen und dem markierten Antikör
per durch den Reaktionsträger ohne mit dem zuvor auf dem
Reaktionsträger fixierten Antigen (welches das gleiche ist
wie das zu bestimmende) zu reagieren. Der nicht umgesetzte
markierte Antikörper reagiert jedoch mit dem auf dem Reak
tionsträger fixierten Antigen und wird auf diese Weise im
Reaktionsträger zurückgehalten. Nach der Elektrophorese wird
die Menge des markierten Antikörpers, der auf dem Reaktions
träger zurückgehalten wird, durch Markierungsmessung be
stimmt. Durch die Differenz der Mengen des markierten
Antikörpers vor der Reaktion der Menge des unumgesetzten
markierten Antikörpers, der auf dem Reaktionsträger zurück
gehalten wird, wird die Menge des in der Probe zu bestimmen
den Antigens mit hoher Empfindlichkeit und mit hoher Ge
nauigkeit quantitativ bestimmt werden.
Eine detaillierte Erklärung wird im folgenden gegeben am
Beispiel der quantitativen Bestimmung eines Haptens T 4 als
Bestimmungsantigen. Ein Kombinationsprodukt aus T 4 und
Albumin wurde hergestellt als vorbereitender Schritt um das
T 4 an die Reaktionsmembran, die als Reaktionsträger dient,
zu binden. Dazu wurden 200 g Rinderserum-Albumin (BSA) in
500 µl eines 0,1 molaren Phosphatpuffers (pH 6,8) gelöst.
Des weiteren wurden 2 mg T 4-freier Säure (Hersteller: Sigma
Chemical Co.) in 4 ml Dimethylformamid gelöst, und von der
resultierenden Lösung eine Menge, die 50 µg T 4 entspricht,
(100 µl) der BSA-Lösung hinzugefügt. Zu der resultierenden
Lösung wurden 10 µl einer 1,5%igen Lösung, hergestellt
durch Verdünnung von 0,3 ml einer 25%igen Glutaraldehyd
lösung mit Phosphatpuffer, hinzugefügt. Danach wurde das
resultierende Gemisch 2,5 Stunden bei 25°C stehen gelassen.
Daraufhin wurde das Gemisch einer Sephadex G-100-Säule
aufgegeben und das T 4-BSA-Kombinationsprodukt mit Hilfe
eines Phosphatpuffers getrennt.
Das T 4-BSA-Kombinationsprodukt wurde auf einer Polyacryl
amidgelmembran als Reaktionsträger nach folgendem Verfahren
immobilisiert. Zu 0,5 ml der T 4-BSA-Kombinationsproduktfrak
tion, wie nach obigen Verfahren erhalten, wurde eine 0,25
%ige wäßrige Lösung von Acrolein hinzugefügt; die resul
tierende Lösung wurde unter Eiskühlung 30 Minuten stehen
gelassen. Diese Lösung wurde dann ausreichend gegen einen
0,1 molaren Phosphatpuffer vom pH 7,4 und einem 1/15 molaren
Anteil von NaCl (nachfolgend als PBS bezeichnet) dialysiert.
Im Folgeschritt wurden zur dialysierten Lösung 1,5 ml einer
0,32 g/ml Acrylamid enthaltenden Lösung, 1,5 ml einer 0,016
g/ml enthaltenden Lösung von N,N′-Methylenbisacrylamid, 1,25
ml einer 46 µl/ml enthaltenden wäßrigen Lösung von
N,N,N′,N′-Tetramethylethylendiamin und 5,75 ml einer 1,25
mg/ml enthaltenden Ammoniumpersulfatlösung hinzugefügt und
im folgenden ausreichend gerührt. Das resultierende Gemisch
wurde anschließend in ein Gelmembran-bildendes Werkzeug aus
Glas gegossen und stehen gelassen, wobei sich unter
Gelierung die Membran bildete. Eine kreisförmige Membran mit
einem Durchmesser von 9 mm wurde aus der gebildeten Membran
ausgeschnitten und als Reaktionsträger benützt.
Als Elektrolyt für die Elektrolyse wurde ein Trisglycin
puffer benutzt.
Die Messung wurde wie folgt ausgeführt. Eine T 4-Standard
probe bekannter Menge wurde in einem leichten Überschuß mit
einem kommerziell erhältlichen Fluorescein markierten
Anti-T 4-Antikörper (FITC-markiert) zur Reaktion gebracht.
Nach der Reaktion wurde die Lösung in den Reaktionsträger in
einer Elektrophoresevorrichtung gegeben um die Elektro
phorese bei einer Spannung von 250 Volt für 30 Minuten
durchgeführt. Danach wurde der Reaktionsträger herausge
nommen mit PBS gewaschen, und die Fluoreszenzintensität des
nicht reagierten FITC-markierten Anti-T 4-Antikörpers wie er
auf dem Reaktionsträger zurückgehalten wurde, gemessen. Für
die Messung betrug die Anregungswellenlänge 485 nm und die
Fluoreszenzmessungswellenlänge 520 nm.
Die Fluoreszenzintensität wurde an verschiedenen Proben, die
T 4 in verschiedenen Konzentrationen enthielten, gemessen.
Eine T 4-Eichkurve, wie sie auf Basis dieser Art Messungen
erhalten wurde, ist in Fig. 2 gezeigt. Wie ersichtlich, wird
in der Reaktionslösung bei geringen T 4-Konzentrationen in
der Probe nur eine geringe Menge des Reaktionsprodukts aus
dem T 4 in der Probe und dem markierten Anti-T 4-Antikörper
gebildet; eine große Menge des nicht umgesetzten Anti-T 4-
Antikörpers wird jedoch an das T 4-BSA-Kombinationsprodukt
gebunden, das auf dem Reaktionsträger immobilisiert vor
liegt, so daß die Fluoreszenzintensität höher wird, die
durch Markierungsmessung für den gebundenen markierten
Anti-T 4-Antikörper bestimmt wird. Mit wachsender T 4-Konzen
tration wird die Menge des nicht umgesetzten markierten
Anti-T 4-Antikörpers abnehmen und damit auch die Menge des an
den Reaktionsträger gebundenen nicht umgesetzten Antikör
pers, was zu einer niedrigen Fluoreszenzintensität führt.
Auf diese Weise ist erfindungsgemäß die T 4-Konzentration mit
hoher Genauigkeit mit der Fluoreszenzintensität korreliert,
und beim Vorliegen einer Eichkurve für die T 4-Konzentration
kann die T 4-Konzentration direkt durch Messung der Fluores
zenzintensität bestimmt werden.
Als ein in der Probe zu bestimmendes Antigen wurde Cortisol
verwendet. Ein Kombinationsprodukt aus Cortisol und Rinder
serum-Albumin (BSA) und ein Reaktionsträger mit einem daran
gebundenen Anti-BSA-Antikörper wurden in gleicher Weise wie
in Beispiel 1 hergestellt.
Eine Probe mit Cortisol und dem Cortisol-BSA-Kombinations
produkt wurde mit einer bekannten Menge eines mit alkali
scher Phosphatase markierten Anti-Cortisol-Antikörpers
umgesetzt. 100 µl Reaktionslösung wurden in einem Elektro
phoresegerät in den Reaktionsträger gegeben und anschließend
30 Minuten einer Elektrophorese bei 250 Volt unterzogen.
Danach wurde der Reaktionsträger herausgenommen und mit PBS
gewaschen. Daraufhin wurde der Reaktionsträger 30 Minuten in
eine Lösung aus Substrat für alkalische Phosphatase in
Puffer getaucht, und das auf dem Reaktionsträger
zurückgehaltene Reaktionsprodukt aus dem Cortisol-BSA-Kom
binationsprodukt und dem markierten Anti-Cortisol-Antikörper
wurde durch Zugabe eines Färbemittels angefärbt. Die Menge
des auf dem Reaktionsträger befindlichen Reaktionsproduktes
wurde durch Messung der Absorption bei einer Wellenlänge von
500 nm bestimmt.
Die Absorption wurde bei verschiedenen Proben mit Cortisol
bei verschiedenen Konzentrationen gemessen. Auf der Basis
dieser Meßergebnisse wurde eine Eichkurve erhalten wie sie
in Fig. 3 gezeigt ist. Wie im Fall der T 4-Konzentration des
Beispiels 1 korreliert auch hier die Cortisol-Konzentration
mit hoher Genauigkeit mit der Absorption, woraus sich
deutlich ergibt, daß das Cortisol mit hoher Empfindlichkeit
und hoher Genauigkeit quantitativ bestimmt werden kann.
Als ein in einer Probe zu bestimmendes Antigen wurde T 4
benutzt. Zuvor wurde das Kombinationsprodukt aus T 4 und BSA
in gleicher Weise wie im Beispiel 1 beschrieben hergestellt
und mit FITC mittels einer bekannten Methode markiert. Ein
Antikörper (ein zweiter Antikörper) gegen den Anti-T 4-Anti
körper wurde auf dem Reaktionsträger fixiert.
Die T 4 enthaltende Probe und das mit FITC markierte T 4-BSA-
Kombinationsprodukt wurden mit dem Anti-T 4-Antikörper zur
Reaktion gebracht. In einem Elektrophoresegerät wurden 100
µl der Reaktionslösung in den Reaktionsträger gegeben und 30
Minuten einer Elektrophorese bei 250 Volt unterzogen.
Nachfolgend wurde der Reaktionsträger herausgenommen, mit
PBS gewaschen und anschließend die Fluoreszenzintensität des
am Reaktionsträger festgehaltenen Reaktionsprodukts aus dem
mit FITC markierten T 4-BSA-Kombinationsprodukt und dem
Anti-T 4-Antikörper gemessen. Die Anregungswellenlänge betrug
485 nm und die Fluoreszenzwellenlänge 520 nm. Auf der Basis
dieses Ergebnisses wurde eine Eichkurve erhalten, die in
Fig. 4 gezeigt ist. Die T 4-Konzentration korreliert mit der
Fluoreszenzintensität, wobei deutlich wird, daß T 4 mit hoher
Empfindlichkeit und hoher Genauigkeit quantitativ bestimmt
werden kann.
Als in einer Probe zu bestimmendes Antigen wurde Cortisol
benutzt. Ein Cortisol-alkalische Phosphatase-Kombinations
produkt wurde auf folgende Weise hergestellt. Nach dem
Zentrifugieren von 50 µl einer Suspension von alkalischer
Phosphatase in 2,6 molarem Ammoniumsulfat wird der Nieder
schlag in 300 µl Wasser gelöst. Nachdem man die erhaltene
Lösung mit 10 mg 1-Cyclohexyl-3-(2-morpholinyl-4-ethyl)-car
bodiimidomethyl-p-toluol-sulfonat und 200 µl einer Lösung
aus Cortisol-21-Hemisuccinat in Dimethylformamid versetzt
hat, wird die Reaktion 16 Stunden bei Raumtemperatur durch
geführt. Die so erhaltene Emulsion wird einer Sephadex
G-100-Säule aufgegeben und mit 10 ml eines Phosphatpuffers
eluiert. Die alkalische Phosphataseaktivität des Eluates
wurde gemessen, die zwei Fraktionen mit der höchsten Aktivi
tät wurden vermischt und dann auf ein Volumen von 10 ml mit
0,05 molarem Phosphatpuffer (pH 8,0) verdünnt. Die erhaltene
Verdünnung wurde als alkalische Phosphatase-markiertes
Cortisol benutzt.
Die Cortisol und alkalische Phosphatase-markiertes Cortisol
enthaltende Probe wurde mit Anti-Cortisol-Antikörper zur
Reaktion gebracht. In einer Elektrophoresevorrichtung wurden
100 µl der so erhaltenen Reakationslösung in den Reaktions
träger gegeben und 30 Minuten einer Elektrophorese bei 250
Volt unterworfen. Es wurde ein Reaktionsträger verwendet,
der einen Antikörper (ein zweiter Antikörper) gegen Anti-
Cortisol-Antikörper gebunden enthielt. Nach der Elektro
phorese wurde der Reaktionsträger herausgenommen und mit PBS
gewaschen. Daraufhin wurde der Reaktionsträger 15 Minuten in
eine Lösung eines Substrats für alkalische Phosphatase
getaucht, und durch Messung der Absorption bei 500 nm wurde
die Menge des auf dem Reaktionsträger zurückgehaltenen
Reaktionsprodukts aus dem alkalische Phosphatase-markierten
Cortisol und Anti-Cortisol-Antikörper bestimmt. Auf der
Basis der Meßergebnisse wurde eine Eichkurve erhalten, die
in Fig. 5 gezeigt ist. Die Cortisol-Konzentration korreliert
mit der Absorption, wobei deutlich wird, daß Cortisol mit
hoher Empfindlichkeit und hoher Genauigkeit bestimmt werden
kann.
Als in der Probe zu bestimmendes Antigen wurde T 4 benutzt.
Die Probe mit T 4 wurde mit einem Anti-T 4-Antikörper zur
Reaktion gebracht. Das T 4 war zuvor auf einem Reaktions
träger aufgebracht worden. In einer Elektrophoresevorrich
tung wurde die Reaktionslösung in den Reaktionsträger
gegeben und dann 30 Minuten einer Elektrophorese bei einer
angelegten Spannung von 250 Volt unterzogen. Anschließend
wurde ein FITC-markierter Antikörper (ein zweiter Antikör
per) zum Anti-T 4-Antikörper 15 Minuten der Elektrophorese
bei 250 Volt unterzogen. Der Reaktionsträger wurde herausge
nommen und mit PBS gewaschen. Anschließend erfolgte die
Messung der Menge an FITC-markiertem zweiten Antikörper
umgesetzt mit dem Anti-T 4-Antikörper umgesetzt mit T 4,
gebunden an den Reaktionsträger. Bei der Messung betrug die
Anregungswellenlänge 485 nm und die Fluoreszenzwellenlänge
520 nm. Die Eichkurve, wie sie auf der Basis der Meßergeb
nisse erhalten wurde, ist in Fig. 6 wiedergegeben. Die
Fluoreszenzintensität korreliert mit der T 4-Konzentration,
wobei deutlich wird, daß die T 4-Konzentration mit hoher
Empfindlichkeit und hoher Genauigkeit quantitativ bestimmt
werden kann.
Als ein in einer Probe zu bestimmendes Antigen wurde
α-Fetoprotein (AFP), das eine elektrische Ladung trägt,
benutzt. AFP wurde zuvor auf einem Reaktionsträger fixiert.
Die AFP enthaltende Probe wurde mit einem FITC-markierten
Anti-AFP-Körper zur Reaktion gebracht. Nachfolgend wurden in
einem Elektrophoresegerät 200 µl der Reaktionslösung auf den
Reaktionsträger gegeben und 30 Minuten einer Elektrophorese
bei 250 Volt angelegter Spannung unterworfen. Anschließend
wurde der Träger herausgenommen und mit PBS gewaschen. Die
Menge des vom Reaktionsträger zurückgehaltenen
FITC-markierten Anti-AFP-Antikörpers wurde mit einer
Anregungswellenlänge von 485 nm und einer Fluoreszenzwellen
länge von 520 nm bestimmt.
Die auf Basis dieser Meßergebnisse erhaltene Eichkurve ist
in Fig. 7 gezeigt. Eine Eichkurve, die mit einer konven
tionellen Methode erhalten wurde, ist ebenfalls in Fig. 7
gezeigt. Die konventionelle Methode ist im folgenden be
schrieben. Ein Anti-AFP-Antikörper wurde zuvor auf einem
Reaktionsträger fixiert. Eine AFP enthaltende Probe wurde
der Elektrophorese unterzogen, gefolgt von der Elektro
phorese eines FITC-markierten Anti-AFP-Antikörpers. Durch
Messung der Markierungsmenge des auf dem Reaktionsträger
zurückgehaltenen FITC-markierten Anti-AFP-Antikörpers gemäß
der sogenannten Sandwich-Methode wurde die AFP-Konzentration
bestimmt.
Wie aus Fig. 7 ersichtlich ist, kann AFP erfindunggemäß
selbst bei kleinen Konzentrationen mit hoher Empfindlichkeit
und hoher Genauigkeit quantitativ bestimmt werden.
Gemäß dem Immunoassay der Erfindung wird einem zu bestimmen
den Antigen, das elektrisch neutral ist oder keine oder nur
eine geringe elektrische Ladung trägt, durch Reaktion mit
einem Antikörper eine elektrische Ladung verliehen. Aus
diesem Grunde kann ein solches Antigen mittels Immunoassay
unter Anwendung der Elektrophorese quantitativ bestimmt
werden, wobei eine hohe Empfindlichkeit selbst bei sehr
geringen Konzentrationen gegeben ist. Zusätzlich ist die
quantitative Bestimmung mit hoher Genauigkeit und Zuver
lässigkeit möglich. Das Verfahren der Erfindung ist insbe
sondere für die genaue Bestimmung von Steroidhormonen
geeignet.
Des weiteren kann erfindunggemäß ein Protein-Antigen, das
ursprünglich eine elektrische Ladung trägt, ebenso mit hoher
Genauigkeit und hoher Empfindlichkeit quantitativ bestimmt
werden.
Claims (19)
1. Immunoassay,
gekennzeichnet durch
- - Reaktion eines zu bestimmenden Antigens mit einer definierten Menge eines Antikörpers mit spezifi scher Reaktivität für das zu bestimmende Antigen unter Erhalt eines Antigens mit einer elektrischen Ladung oder einer höheren elektrischen Ladung;
- - Wanderung der Reaktionsprodukte durch Elektro phorese zu einem Reaktionsträger, der sich in einem Elektrophoresefeld zwischen Anode und Kathode befindet;
- - direkte oder indirekte Zurückhaltung des Antikör pers, der mit dem zu bestimmenden Antigen nicht reagiert hat, oder des Antikörpers der mit dem zu bestimmenden Antigen reagiert hat, auf dem Reakti onsträger;
- - direkte oder indirekte Bestimmung der Menge des nicht reagierten oder reagierten Antikörpers durch Markierungsmessung und damit quantitative Bestim mung des in der Probe enthaltenen Antigens.
2. Immunoassay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß das zu bestimmende Antigen elektrisch neutral ist
oder nur eine geringe oder keine elektrische Ladung
trägt.
3. Immunoassay nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß das zu bestimmende Antigen ein Steroidhormon, ein
Herzmittel, ein Antileptikum ist oder ein Vitamin ist.
4. Immunoassay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß das zu bestimmende Antigen ein Protein-Antigen ist.
5. Immunoassay nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch
- - Reaktion des zu bestimmenden Antigens mit einer definierten Menge eines markierten Antikörpers mit spezifischer Reaktivität für das zu bestimmende Antigen;
- - vorherige Bindung des gleichen Antigens wie das zu bestimmende an den Reaktionsträger;
- - Wanderung der Reaktionsprodukte durch Elektrolyse zum Reaktionsträger;
- - Wanderung des Reaktionsprodukts aus dem zu bestim menden Antigen und dem damit reagierten markierten Antikörper durch den Reaktionsträger;
- - Bindung des nicht reagierten markierten Antikör pers an das gleiche Antigen wie das zu bestimmen de, gebunden an den Reaktionsträger, um den nicht reagierten markierten Antikörper auf dem Reakti onsträger zu halten;
- - Bestimmung der Menge des nicht reagierten markier ten Antikörpers durch Markierungsmessung; und damit
- - quantitative Bestimmung des in der Probe befind lichen Antigens.
6. Immunoassay nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch
- - Reaktion des zu bestimmenden Antigens mit einer definierten Menge eines nicht markierten Antikör pers mit spezifischer Reaktivität für das zu bestimmende Antigen;
- - vorherige Fixierung des gleichen Antigens wie das zu bestimmende auf dem Reaktionsträger;
- - Wanderung der Reaktionsprodukte durch Elektropho rese zum Reaktionsträger;
- - Wanderung des Reaktionsprodukts aus dem zu bestim menden Antigen und dem damit reagierten nicht markierten Antikörper durch den Reaktionsträger;
- - Bindung des nicht reagierten nicht markierten Antikörpers an das gleiche Antigen wie das zu bestimmende, welches auf dem Reaktionsträger fixiert ist, um den nicht umgesetzten nicht markierten Antikörper auf dem Reaktionsträger zu halten;
- - Reaktion des nicht umgesetzten nicht markierten Antikörpers, welcher auf dem Reaktionsträger gehalten wird, mit einem markierten Antikörper mit spezifischer Reaktivität für den nicht markierten Antikörper;
- - Bestimmung der Menge des reagierten markierten Antikörpers durch Markierungsmessung; und
- - dadurch quantitative Bestimmung des in der Probe enthaltenen Antigens.
7. Immunoassay nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekenn
zeichnet, daß das zu bestimmende Antigen elektrisch
neutral ist oder keine oder nur eine geringe elektri
sche Ladung trägt oder ein Protein-Antigen ist.
8. Immunoassay nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch
- - Reaktion des zu bestimmenden Antigens und einer definierten Menge eines Kombinationsproduktes aus dem gleichen Antigen wie das zu bestimmende und einer geladenen Substanz mit einer definierten Menge eines markierten Antikörpers mit spezifi scher Reaktivität für das zu bestimmende Antigen;
- - vorherige Bindung eines Antikörpers mit spezifi scher Reaktivität für die geladene Substanz an den Reaktionsträger;
- - Wanderung der Reaktionsprodukte durch Elektropho rese zum Reaktionsträger;
- - Wanderung des Reaktionsproduktes aus dem zu bestimmenden Antigen und dem hiermit reagierten marktierten Antikörper durch den Reaktionsträger;
- - Bindung des markierten Antikörpers, umgesetzt mit dem Kombinationsprodukt aus dem gleichen Antigen wie das zu bestimmende und der geladenen Substanz sowie des nicht reagierten Kombinationsproduktes an den Antikörper mit spezifischer Reaktivität für die geladene Substanz, der auf dem Reaktionsträger gebunden worden ist, um den markierten Antikörper auf dem Reaktionsträger zu halten;
- - Bestimmung der Menge des markierten Antikörpers, der auf dem Reaktionsträger zurückgehalten wird, durch Markierungsmessung; und damit
- - quantitative Bestimmung des in der Probe enthal tenen Antigens.
9. Immunoassay nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch
- - Reaktion des zu bestimmenden Antigens, einer definierten Menge eines Kombinationsprodukts aus dem gleichen Antigen wie das zu bestimmende und einer geladenen Substanz mit einer definierten Menge eines nicht markierten Antikörpers mit spezifischer Reaktivität für das zu bestimmende Antigen;
- - vorherige Bindung eines Antikörpers mit spezi fischer Reaktivität für die geladene Substanz an den Reaktionsträger;
- - Wanderung der Reaktionsprodukte durch Elektropho rese zum Reaktionsträger;
- - Wanderung des Reaktionsprodukts aus dem zu bestim menden Antigen und dem damit reagierten nicht markierten Antikörper durch den Reaktionsträger;
- - Bindung des nicht markierten Antikörpers, welcher mit dem Kombinationsprodukt aus den gleichen Antigenen wie das zu bestimmende und der geladenen Substanz reagiert hat, an den Antikörper mit spezifischer Reaktivität für die geladene Sub stanz, der auf dem Reaktionsträger fixiert worden ist, um den reagierten nicht markierten Antikörper auf dem Reaktionsträger zu halten;
- - Reaktion des reagierten nicht markierten Anti körpers, welcher auf dem Reaktionsträger zurückge halten wird, mit einem markierten Antikörper mit spezifischer Reaktivität für den nicht markierten Antikörper;
- - Bestimmung der Menge des reagierten markierten Antikörpers durch Markierungsmessung; und damit
- - quantitative Bestimmung des in der Probe enthal tenen Antigens.
10. Immunoassay nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch
- - Reaktion des zu bestimmenden Antigens und einer definierten Menge eines Kombinationsproduktes aus dem gleichen Antigen wie das zu bestimmende und einer markierten geladenen Substanz mit einer definierten Menge eines ersten Antikörpers mit spezifischer Reaktivität für das zu bestimmende Antigen;
- - vorherige Bindung eines zweiten Antikörpers mit spezifischer Reaktivität für den ersten Antikörper an den Reaktionsträger;
- - Wanderung der Reaktionsprodukte durch Elektropho rese zum Reaktionsträger;
- - Wanderung des Kombinationsprodukts, das nicht mit dem ersten Antikörper reagiert hat, durch den Reaktionsträger;
- - Bindung des Reaktionsprodukts aus dem zu bestim menden Antigen und dem ersten damit reagierten Antikörper und des Reaktionsprodukts aus dem Kombinationsprodukt des gleichen Antigens wie das zu bestimmende und der markierten geladenen Substanz und dem ersten Antikörper, welcher mit diesem Kombinationsprodukt reagiert hat an den zweiten Antikörper, welcher auf dem Reaktionsträ ger fixiert ist, um diese auf dem Reaktionsträger zurückzuhalten;
- - Bestimmung der Menge des ersten Antikörpers, welcher mit dem Kombinationsprodukt aus dem gleichen Antigen wie das zu bestimmende und der markierten Substanz, neben den anderen Reaktions produkten, welche auf dem Träger gehalten werden, durch Markierungsmessung; und damit
- - quantitative Bestimmung des in der Probe enthal tenen Antigens.
11. Immunoassay nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch
- - Reaktion des zu bestimmenden Antigens und einer definierten Menge eines Kombinationsprodukts aus dem gleichen Antigen wie das zu bestimmende und einer nicht markierten elektrisch geladenen Substanz mit einer definierten Menge eines ersten Antikörpers mit spezifischer Reaktivität für das zu bestimmende Antigen;
- - vorheriges Aufbringen eines zweiten Antikörpers, der spezifisch mit dem ersten Antikörper reagiert, auf den Reaktionsträger;
- - Wanderung der Reaktionsprodukte unter dem Einfluß der Elektrophorese zum Reaktionsträger;
- - Wanderung des nicht mit dem ersten Antikörper reagierten Kombinationsprodukts durch den Reak tionsträger;
- - Bindung des Reaktionsprodukts des zu bestimmenden Antigens und des hiermit reagierten ersten Anti körpers, und des Reaktionsprodukts aus dem Kombi nationsprodukt des gleichen Antigens wie das zu bestimmende und der nicht markierten geladenen Substanz und des mit diesem Kombinationsprodukt reagierten ersten Antikörpers an den zweiten Antikörper, der an den Reaktionsträger gebunden ist, um sie auf dem Reaktionsträger zu halten;
- - Umsetzung der nicht markierten geladenen Substanz, die auf dem Reaktionsträger gehalten wird, mit einem markierten Antikörper, der spezifisch mit der nicht markierten geladenen Substanz reagiert;
- - Bestimmung der Menge des umgesetzten markierten Antikörpers durch Markierungsmessung; und damit
- - quantitative Bestimmung des in der Probe enthal tenen Antigens.
12. Immunoassay nach einem der Ansprüche 8 bis 11, dadurch
gekennzeichnet, daß das zu bestimmende Antigen elek
trisch neutral ist oder keine oder nur eine geringe
Ladung trägt.
13. Immunoassay nach einem der Ansprüche 8 bis 11, dadurch
gekennzeichnet, daß die geladene Substanz ein Protein
oder ein Lipid ist.
14. Immunoassay nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet,
daß das Protein ein Rinderserum-Albumin, Kaninchen
serum-Albumin, Humanserum-Albumin oder Globulin ist.
15. Immunoassay nach Anspruch 13, dadurch gezeichnet, daß
das Lipid Dicetylphosphorsäure ist.
16. Immunoassay nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch
- - Reaktion des zu bestimmenden Antigens und einer definierten Menge des markierten gleichen Antigens wie das zu bestimmende mit einer definierten Menge eines ersten Antikörpers mit spezifischer Reakti vität für das zu bestimmende Antigen;
- - vorherige Fixierung eines zweiten Antikörpers mit spezifischer Reaktivität für den ersten Antikörper an den Reaktionsträger;
- - Wanderung der anderen Reaktionsprodukte als das nicht umgesetzte markierte Antigen durch Elektro phorese zum Reaktionsträger;
- - Bindung des Reaktionsprodukts aus dem zu be stimmenden Antigen und dem damit reagierten ersten Antikörper, und des Reaktionsprodukts aus dem markierten Antigen und dem damit reagierten ersten Antikörper an den zweiten Antikörper, um diese auf dem Reaktionsträger zu halten;
- - Bestimmung der Menge des mit dem markierten Antigen reagierten ersten Antikörpers neben anderen Reaktionsprodukten, die auf dem Reaktions träger zurückgehalten werden, durch Markierungs messung; und damit
- - quantitative Bestimmung des in der Probe enthal tenen Antigens.
17. Immunoassay nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet,
daß das zu bestimmende Antigen elektrisch neutral ist
oder keine oder nur eine geringe elektrische Ladung
trägt.
18. Immunoassay-Kit zur Durchführung des Verfahrens nach
Anspruch 5 oder 6, gekennzeichnet durch
- - einen nicht markierten oder markierten Antikörper mit spezifischer Reaktivität für ein zu bestim mendes Antigen und
- - einen Reaktionsträger für die Elektrophorese mit einem daran gebundenen gleichen Antigen wie das zu bestimmende Antigen.
19. Immunoassay-Kit nach Anspruch 18, dadurch gekennzeich
net, daß der Reaktionsträger eine Polyacrylamidgelmem
bran oder eine Celluloseacetatmembran ist.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62080038A JP2564540B2 (ja) | 1987-04-01 | 1987-04-01 | 免疫分析方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3811083A1 true DE3811083A1 (de) | 1988-10-20 |
DE3811083C2 DE3811083C2 (de) | 1993-02-18 |
Family
ID=13707078
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE3811083A Granted DE3811083A1 (de) | 1987-04-01 | 1988-03-31 | Immunoassay |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5055415A (de) |
JP (1) | JP2564540B2 (de) |
DE (1) | DE3811083A1 (de) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994029726A1 (en) * | 1993-06-04 | 1994-12-22 | Business Inception B.V. | Immunoelectrophoresis method |
WO2021211904A1 (en) * | 2020-04-15 | 2021-10-21 | Hemex Health, Inc. | Using electrophoresis for disease detection based on controlled molecular charge |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5137609A (en) * | 1992-01-31 | 1992-08-11 | Biometric Imaging Inc. | Differential separation assay |
US5221454A (en) * | 1992-01-31 | 1993-06-22 | Biometric Imaging Inc. | Differential separation assay |
US5843680A (en) * | 1992-01-31 | 1998-12-01 | Biometric Imaging, Inc. | Differential separation assay methods and test kits |
EP0867511A1 (de) * | 1992-03-10 | 1998-09-30 | La Jolla Cancer Research Foundation | Rekombinierte alkalische Phosphatase aus Kälberdarm |
US5958202A (en) * | 1992-09-14 | 1999-09-28 | Perseptive Biosystems, Inc. | Capillary electrophoresis enzyme immunoassay |
WO1994009185A1 (en) * | 1992-10-14 | 1994-04-28 | Labintelligence, Inc. | Electrophoretic quantitation of specific binding complexes |
US5348633A (en) * | 1993-01-22 | 1994-09-20 | Northeastern University | Method for quantitating trace amounts of an analyte in a sample by affinity capillary electrophoresis |
US5939160A (en) * | 1997-02-25 | 1999-08-17 | Sealand Technology, Inc. | Low odor permeable hose |
US7214300B2 (en) * | 2001-06-04 | 2007-05-08 | Epocal Inc. | Integrated electrokinetic devices and methods of manufacture |
FR2862134B1 (fr) * | 2003-11-12 | 2007-07-27 | Sebia Sa | Analyse et typage de proteines monoclonales par electrophorese capillaire et immunodeplacement |
EP2225394A1 (de) * | 2007-09-10 | 2010-09-08 | Lyzer Diagnostics, Inc. | Verfahren, zusammensetzungen und vorrichtung für schneller kompetitiver homogener test |
US8507218B2 (en) * | 2008-02-08 | 2013-08-13 | The Regents Of The University Of California | Detection of degradative enzymes in bodily fluids |
US20220011236A1 (en) * | 2020-07-10 | 2022-01-13 | Thomas G. Mason | Colliding and reacting molecules and colloids electrophoretically |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2406959C3 (de) * | 1974-02-14 | 1979-02-08 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Anordnung und Verfahren zur Bestimmung von Antigenen |
EP0186799A1 (de) * | 1984-12-15 | 1986-07-09 | BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft | Flächenförmiges diagnostisches Mittel |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3654090A (en) * | 1968-09-24 | 1972-04-04 | Organon | Method for the determination of antigens and antibodies |
US3966897A (en) * | 1973-04-02 | 1976-06-29 | Marine Colloids, Inc. | Medium for use in bioassay and method of using same |
US4048298A (en) * | 1975-02-25 | 1977-09-13 | Rohm And Haas Company | Solid phase double-antibody radioimmunoassay procedure |
US4287300A (en) * | 1979-07-26 | 1981-09-01 | Syva Company | Charge effects in enzyme immunoassays |
JPS6057257A (ja) * | 1983-09-09 | 1985-04-03 | Hitachi Ltd | イムノアツセイ法 |
-
1987
- 1987-04-01 JP JP62080038A patent/JP2564540B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-03-31 DE DE3811083A patent/DE3811083A1/de active Granted
- 1988-04-01 US US07/177,347 patent/US5055415A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2406959C3 (de) * | 1974-02-14 | 1979-02-08 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Anordnung und Verfahren zur Bestimmung von Antigenen |
EP0186799A1 (de) * | 1984-12-15 | 1986-07-09 | BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft | Flächenförmiges diagnostisches Mittel |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Chemiker-Zeitung, 103. Jg., 1979, Nr. 2, S. 53-68 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994029726A1 (en) * | 1993-06-04 | 1994-12-22 | Business Inception B.V. | Immunoelectrophoresis method |
NL9300965A (nl) * | 1993-06-04 | 1995-01-02 | Proteios B V | Werkwijze voor het bij een proefobject detecteren van de aanwezigheid van ten minste een hapteen, een macromolecuul, een pathogeen of immuunreactie opwekkend deel daarvan, alsmede een dergelijke werkwijze voor het detecteren van een eventuele immuunreactie. |
WO2021211904A1 (en) * | 2020-04-15 | 2021-10-21 | Hemex Health, Inc. | Using electrophoresis for disease detection based on controlled molecular charge |
US11255815B2 (en) | 2020-04-15 | 2022-02-22 | Hemex Health, Inc. | Using electrophoresis for disease detection based on controlled molecular charge |
US11971384B2 (en) | 2020-04-15 | 2024-04-30 | Hemex Health, Inc. | Using electrophoresis for disease detection based on controlled molecular charge |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3811083C2 (de) | 1993-02-18 |
JPS63246671A (ja) | 1988-10-13 |
JP2564540B2 (ja) | 1996-12-18 |
US5055415A (en) | 1991-10-08 |
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