DE3687369T2 - Tripeptidverbindungen mit hypotensiver wirksamkeit. - Google Patents

Tripeptidverbindungen mit hypotensiver wirksamkeit.

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Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft neue Tripeptide mit hypotensiver Wirksamkeit, die zur Behandlung von hypertensiven Zuständen verwendbar sind.
  • Aus der technischen und der Patentliteratur sind Peptide mit einer beachtlichen hypotensiven Wirksamkeit bei Tieren und Menschen bekannt.
  • Die Europäische Patentanmeldung, Veröffentlichungsnummer 0148133 von Polyfarma offenbart eine Tripeptidklasse mit hypotensiver Wirkung, dadurch gekennzeichnet, daß die N-endständige α-Aminosäure Pyroglutaminsäure (Glp) und die C-endständige α-Aminosäure L-Tryptophan (Trp) ist, während die zweite Aminosäure aus natürlich vorkommenden ausgewählt ist. Um neue pharmakologisch wirksame Tripeptidverbindungen zu erhalten, modifizierten wir die Aminosäuresequenz des bekannten Tripeptids durch gleichzeitigen oder getrennten Ersatz von L-Pyroglutaminsäure mit L-Prolin oder L-Prolin, das eine Substituentengruppe an der Aminogruppe trägt, und L-Tryptophan mit L-Phenylalanin oder L-Tyrosin.
  • Damit wurden Tripeptide synthetisiert, bei denen die N-endständige α-Aminosäure L-Prolin (Pro), ein L-Prolin (Pro.R), das eine Substituentengruppe an der Aminogruppe trägt oder eine Pyroglutaminsäure (Glp) ist und die C-endständige α-Aminosäure L-Phenylalanin (Phe), L-Tyrosin (Tyr) oder L-Tryptophan (Trp) ist, mit der Einschränkung, daß wenn die endständige α-Aminosäure Glp ist, die C-endständige α-Aminosäure von L-Tryptophan verschieden ist und wenn die C-endständige α-Aminosäure L-Tryptophan ist, die N-endständige von Glp verschieden ist.
  • Die so synthetisierten Verbindungen wurden zur Bestätigung der Beziehung zwischen der Aminosäurestruktur des Tripeptids und der Anwesenheit der biologischen Wirksamkeit analysiert. Die Erfindung stellt daher
  • ein Tripeptid der allgemeinen Formel:
  • A-B-C-OZ (I)
  • bereit, in der:
  • A einen Rest der L-Pyroglutaminsäure, unsubstituiertes L-Prolin oder L-Prolin darstellt, das an der Aminogruppe einen Substituent der Formel:
  • trägt, worin R&sub1; eine geradkettige Acylgruppe mit bis zu 9 Kohlenstoffatomen, eine Benzyloxycarbonylgruppe oder eine Alkoxycarbonylgruppe bedeutet;
  • B einen Rest einer α-Aminosäure, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus L-Glycin, L-Alanin, L-Phenylalanin, L-Valin, L-Leucin, L-iso-Leucin, L-Lysin, I-Serin, L-Threonin, L-Asparagin, L-Glutamin, L-Arginin und L-Tyrosin ist;
  • C einen Rest einer Aminosäure, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus L-Tryptophan, L-Phenylalanin und L-Tyrosin bedeutet und
  • Z ein Wasserstoffatom oder eine geradkettige Alkylgruppe mit bis zu 9 Kohlenstoffatomen darstellt, mit der Maßgabe, daß wenn A ein Rest der L-Pyroglutaminsäure ist, C kein Rest von L-Tryptophan ist, daß wenn A ein vorstehend definiertes substituiertes L-Prolin und B L-Phenylalanin ist, C nicht L-Phenylalanin bedeutet und daß wenn A ein unsubstituiertes L-Prolin oder ein wie vorstehend substituiertes L-Prolin bedeutet und B L-Glycin ist, C weder L-Phenylalanin noch L-Tyrosin darstellt.
  • Die erfindungsgemäßen Tripeptide (I) werden nach bekannten Verfahren festphasensynthetisiert unter Verwendung einer Polymermatrix, die in dem Reaktionsmedium unlöslich ist und quillt und an die die einzelnen Aminosäuren gemäß der gewünschten Sequenz gebunden werden.
  • Das so hergestellte Tripeptid wird dann durch Behandlung mit einem geeigneten Reaktanten vom Harz abgetrennt.
  • Insbesondere ist das zur Synthese der erfindungsgemäßen Tripeptide verwendete Polymer aus kleinen Kügelchen eines Polyamidharzes aufgebaut, das in geeigneter Weise mit Resten von substituiertem Benzylalkohol funktionalisiert ist, gemäß dem Verfahren von R. Arshady et al. [J. Chem. Soc. Perkin I 529 (1981)].
  • Das Harz wird dann durch Behandlung mit 1,2-Diaminoethan aktiviert und mit Fluorenylmethoxycarbonylnorleucin (Fmoc-NLeu)&sub2;O umgesetzt; Fmoc durch Behandlung mit Piperidin in Dimethylformamid entfernt und schließlich wird mit 2,4,5-Trichlorphenyl-p-hydroxymethylphenoxyacetat acyliert.
  • Die geeignet geschützten Aminosäuren werden zu symmetrischen Anhydriden aktiviert, bevor sie an das so modifizierte Harz gebunden werden.
  • Speziell wird die Synthese durch Umsetzung der geschützten Aminosäure mit N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid in Methylenchlorid bei einer Temperatur von 20º-25ºC in einer Zeit von etwa zehn Minuten durchgeführt. Am Ende wird der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff aus dem Reaktionsgemisch abfiltriert, das organische Lösungsmittel abgedampft und das gebildete symmetrische Anhydrid abgetrennt.
  • Die für den Zweck geeigneten Schutzgruppen werden aus dafür bekannten ausgewählt. Insbesondere wird für die α-Aminogruppe als Schutzgruppe Fluorenylmethoxycarbonyl ausgewählt, während für die möglicherweise in der Seitenkette vorliegenden Gruppen, solche auf tert.-Butyl-Basis ausgewählt werden; so tert. Butylester für die Carboxyfunktionen, tert. Butoxycarbonyl für die Aminfunktionen und tert. Butylether für die Hydroxyfunktionen.
  • Der erste Aminosäurerest, der zu einem symmetrischen Anhydrid aktiviert wird, wird unter Bildung einer Esterbindung mit dem substituierten Benzylrest an das Harz gebunden.
  • Der Rest des substituierten Benzylalkohols wird derart ausgesucht, daß bei der Behandlung mit Trifluoressigsäure am Ende der Synthese die Abtrennung des Peptids von dem Harz in hohen Ausbeuten erhalten wird.
  • Es ist jedoch bekannt, daß Aminosäurereste mit einer aromatischen Funktion vom phenolischen oder indolischen Typ während der acidolytischen Entfernung mit Trifluoressigsäure einem elektrophilen Angriff am aromatischen Ring durch das erzeugte benzylische Carbokation an der verzweigten Kette unterliegen. Eine solche Reaktion ruft unvermeidlich ein Absinken der Ausbeute während des Peptidabtrennungsschritts vom Harz hervor. Es wurde somit gefunden, daß die Überwindung dieses Nachteils durch Verwendung von Ethandithiol gemischt mit Trifluoressigsäure in einem Volumenverhältnis von 1:9 zwischen den zwei Verbindungen möglich ist, während der Endstufe der Abtrennung des Harzes vom Peptid, das Reste mit aromatischen Seitenketten in C-endständiger Stellung enthält. Am Schluß der Entfernungsreaktion wird das Harz vom Reaktionsgemisch abfiltriert und die peptidhaltige Lösung wird gefriergetrocknet, wobei ein flockiger farbloser Rückstand erhalten wird.
  • Das gewünschte Peptid wird dann aus dem Rückstand in Ausbeuten von 53-78 % durch präparative Umkehrphasenhochdruckflüssigchromatographie unter Verwendung von Lichroprep RP-18 20-40um (Merck) als Festphase und einem wässerigen Gemisch von CH&sub3;CN und Trifluoressigsäure als Eluent gewonnen.
  • Die Identität der Tripeptide wird durch kernmagnetische Protonenresonanzspektroskopieanalyse (¹H-NMR) bestätigt. Die Reinheit der synthetisierten Verbindungen wird durch hochdruckflüssigchromatographische Umkehrphasenanalyse (RP-HPLC) unter Verwendung eines Perkin Elmer Chromatographen mit einer Hibar®)-Säule von 250·4mm mit einer Lichrosorb - Füllung RP-18 10 um (Merck) und als mobile Phase ein (A) Gemisch aus 90 % CH&sub3;CN und 0,1 % Trifluoressigsäure (TFA) in Wasser und ein (B) Gemisch von 10 % CH&sub3;CN und 0,1 % TFA in Wasser geprüft.
  • Eine Elution mit einem linearen Gradienten von 20 % von A zu 65 % A über 25 Minuten wurde verwendet. Die Reinheit der synthetisierten Tripeptide wird des weiteren durch Dünnschichtchromatographie (TLC) an Silicagel unter Verwendung der folgenden Eluantensysteme geprüft: n-Butanol: Essigsäure:Wasser (4:1:1) (BWA) und Chloroform:Methanol: Essigsäure (85:10:5) (CMA).
  • Die hypotensive Wirkung der Tripeptide der vorliegenden Erfindung wurde am arteriellen Druck normotensiver männlicher Ratten des C.D.-Stammes, erhältlich von der Charles River Co., mit einem Gewicht von 200-300 g, untersucht.
  • Die Ratten wurden mit Ethylurethan betäubt (1,75 g/kg über den intraperitonealen Weg) und nach trachealer Kanülierung wurde die rechte Kopfschlagader isoliert und über eine Kanüle mit einem Hewlett-Packard-Druckwandler Modell 1280 verbunden.
  • Von der isolierten linken Kopfschlagader wurde der arterielle Fluß mit Hilfe eines Biotronex® elektromagnetischen Durchflußmeßgeräts (Flowmeter) Modell BL 610 aufgezeichnet.
  • Mit einem Hewlett-Packard Modell 8824-C Polygraph wurde die Druckänderung gegen die Zeit (dp/dt), das Elektrokardiogramm (EKG) und die Schläge pro Minute (BPM) aufgezeichnet. Die so geprüften Verbindungen rufen eine allmähliche bis langanhaltende hypotensive Wirkung hervor, die bei einer Dosis von 0,2 mg/kg eine Differenz für den diastolischen arteriellen Druck von 30 mmHg zu 35 mmHg und von 30 mmHg zu 40 mmHg für den systolischen arteriellen Druck erreicht.
  • Es wurde weiterhin gefunden, daß die tägliche Dosis pro kg Körpergewicht, bezogen auf die reine Verbindung, vorzugsweise wie nachstehend ist:
  • 2 bis 10 mg intravenös;
  • 10 bis 50 mg intramuskulär;
  • und 100 bis 300 mg oral.
  • Die vorliegende Erfindung wird durch die nachstehenden Beispiele genauer erläutert, wobei diese lediglich erläuternden und keinen einschränkenden Charakter besitzen.
    • Beispiel 1 Synthese von L-Pyroglutamyl-L-asparaginyl-L-phenylalanin (Glp-Asn-Phe-OH)
  • 1 g Polymerer Träger, bestehend aus kleinen Kügelchen Polydimethylamid-co-acryloylsarcosinmethylester, vernetzt mit N,N'-Ethylenbisacrylamid wird durch Behandlung mit 1,2- Diaminoethan aktiviert.
  • Das so aktivierte Harz wird mit 1,8 mMol N-Fluorenylmethoxycarbonylnorleucinanhydrid (Fmoc Nle)&sub2;O umgesetzt und dann nach Entfernung von Fmoc durch Behandlung mit 20 % Piperidin in Dimethylformamid (DMF), mit 1,8 mMol 2,4,5-Trichlorphenyl-p-hydroxymethylphenoxyacetat acyliert.
  • Das so modifizierte Harz enthält schließlich 0,525 mMol Norleucin (Nle) pro Gramm Harz.
  • 1,39 g (1,8 mMol) symmetrisches Anhydrid von N-Fluorenylmethoxycarbonyl-L-phenylalanin (FmocPhe)&sub2;O, gelöst in 16 ml Dimethylformamid, werden für 30 Minuten mit dem modifizierten Harz in Gegenwart von 0,2 ml (1,8 mMol) N-Methylmorpholin und 0,022 g (0,18 mMol) 4-Dimethylaminopyridin behandelt.
  • Die folgenden Aminosäuren werden sequentiell als p-Nitrophenolester von L-N-Fluorenylmethoxycarbonylasparagin (Fmoc-Asn-ONP), 0,855 g (1,8 mMol) und Pentachlorphenolester von L-Pyroglutaminsäure (Glp-OPCP), 0,703 g (1,8 mMol) an das modifizierte Harz angefügt, gefolgt vom Verfahren 2, dargestellt in Tabelle I.
  • Die Synthese des gesamten Tripeptids wird in einem Reaktionsgefäß von einem Beckman® Modell 990B Syntheseautomaten durchgeführt.
  • Die symmetrischen Anhydride von geschützten Aminosäuren werden vorher während des Verlaufs der Acylierung gebildet.
  • 3,6 mMol der geschützten Aminosäure werden mit 1,8 mMol N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid in CH&sub2;Cl&sub2; für 10 Minuten bei Raumtemperatur (20º-25ºC) umgesetzt.
  • Am Ende der Reaktion wird der gebildete Dicyclohexylharnstoff abfiltriert, CH&sub2;Cl&sub2; unter Vakuum abgedampft und das symmetrische Anhydrid in 16 ml DMF gelöst.
  • Bei jeder Acylierung wird die Vollständigkeit der Bildung der Amidbindung durch Umsetzung einer Harzprobe mit Ninhydrin gemäß dem Verfahren von E. Kaiser [Anal. Biochem. 34, 595 (1970)] bestätigt.
  • Die Analysen der Aminosäuren werden an Proben ausgeführt, die bei 110ºC für 18 Stunden mit HCl bei konstanter Siedetemperatur in Gegenwart von Phenol in verschlossenen Ampullen unter Vakuum hydrolysiert wurden.
  • Nach Zugabe der dritten Aminosäure wird das Harz mit Ethylether (100 ml) gewaschen, getrocknet und dann in 50 ml eines Trifluoressigsäure/Ethandithiol-Gemisches (90/10, Vol./Vol.) für 3 Stunden suspendiert.
  • Am Ende dieses Zeitraums wird das Harz aus dem Reaktionsgemisch abfiltriert, mit 50 ml 2 N Essigsäure gewaschen und die das Tripeptid enthaltende Lösung anschließend gefriergetrocknet.
  • Der so erhaltene flockige und farblose Rückstand wird unter Verwendung eines präparativen Miniprep-Chromatographen von Jobin-Yvon Co. chromatographiert, mit einer festen Phase, bestehend aus 35 g Lichroprep RP-18 20-40 um (Merck) unter Verwendung eines Gemisches aus 15 % CH&sub3;CN und 0,1 % Trifluoressigsäure in Wasser als Eluant.
  • Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt, im Vakuum eingeengt und gefriergetrocknet.
  • 110 mg des erhaltenen Tripeptids Glp-Asn-Phe-OH (Ausbeute 53 %, berechnet als Menge des im Harz vorliegenden Norleucins), werden erhalten.
  • Bei den TLC- und HPLC-Analysen zeigt das Produkt keine Verunreinigungsspuren und das ¹H-NMR-Spektrum bestätigt dessen Molekülstruktur.
  • TLC (CMA) Rf: 0,18
  • (BWA) Rf: 0,27
  • HPLC tr: 2,41 Minuten
  • NMR: δ 1,8-2,25 (4H, CH&sub2; Glp), 3,0 (m. 2H, CH&sub2; Phe), 4,05 (m. 1H, CH Glp), 4,25-4,70 (2H, CH Phe, CH Asn), 6,85-7,15 (2H, NH&sub2;-Asn), 7,25 (s. 5H, O), 7,75 (s. 1H, NH Glp), 7,85-8,20 (2H, NH-Phe, NH-Asn).
  • Lösungsmittel: Deuterodimethylsulfoxid
    • Beispiel 2 Synthese von Pyroglutamyl-Leucyl-Phenylalanin (Glp-Leu-Phe-OH)
  • Die Synthese wird wie im vorangehenden Beispiel 1 begonnen und ein modifiziertes Harz mit einem Gehalt von 0,7 mMol Norleucin pro Gramm Harz wird erhalten.
  • Die erste Aminosäure (Phe) und die dritte Aminosäure (Glp) werden durch Nachvollziehen der in Beispiel 1 angeführten Verfahren eingeführt, während die zweite Aminosäure (Leucin) als dessen Nu-Fluorenylmethoxycarbonylderivat unter Verwendung des Verfahrens 1 von Tabelle I eingefügt wird.
  • Am Ende der Synthese wird das Produkt durch präparative Umkehrphasenchromatographie unter Verwendung von 23 % CH&sub3;CN und 0,1 % Trifluoressigsäure in Wasser als Eluant isoliert.
  • 215 mg des Tripeptids Glp-Leu-Phe-OH (78 %) werden erhalten.
  • Das Produkt zeigt keinerlei Verunreinigungsspuren bei den TLC- und HPLC-Analysen und das ¹H-NMR-Spektrum bestätigt dessen Molekülstruktur.
  • TLC (CMA) Rf: 0,22
  • (BWA) Rf: 0,41
  • HPLC tr: 6,43 Minuten
  • NMR: & -0,82 (q. 6H, CH&sub3; Leu), 1,20-2,30 (7H, CH&sub2; Leu, CH Leu, CH&sub2; Glp), 3,0 (m 2H, CH&sub2; Phe), 4,07 (m. 1H, CH Glp), 4,20-4,55 (2H, CH Phe, CH Leu), 7,22 (s. 5H, ), 7,75 (s. 1H, NH Glp), 7,83-8,20 (2H, -NH Phe, NH Leu).
  • Lösungsmittel: Deuterodimethylsulfoxid
    • Beispiel 3 Synthese von Prolyl-Leucyl-Tryptophan (Pro-Leu-Trp-OH)
  • 0,5 g des bis zu dem Benzylrest funktionalisierten Harzes, wie in Beispiel 1 berichtet, wird verwendet. Der Titer bei Norleucin: 0,7 mMol/g des Harzes.
  • Die Esterbindung zwischen L-Tryptophan und dem Harz wird durch Behandlung des modifizierten Harzes mit 0,767 g (0,9 mMol) des symmetrischen Anhydrids von Nu-Fluorenylmethoxycarbonyl-L-tryptophan (FmocTrp)&sub2;O für 30 Minuten, gelöst in 8 ml Dimethylformamid in Gegenwart von 0,1 ml (0,9 mMol) N-Methylmorpholin und (0,09 mMol) L-Dimethylaminopyridin bewerkstelligt.
  • Leucin wird als sein Nu-Fluorenyl-methoxycarbonylderivat gemäß Verfahren 1 von Tabelle I kondensiert.
  • Pyroglutaminsäure wird an das Harz als dessen Pentachlorphenylester unter Verwendung des Verfahrens 2 aus Tabelle I angelagert.
  • Das Peptid wird gemäß dem in Beispiel 1 berichteten Verfahren entfernt und wird durch präparative Chromatographie unter Verwendung von 27 % CH&sub3;CN und 0,1 % Trifluoressigsäure in Wasser als Eluant isoliert.
  • 95 mg des Peptids (Ausbeute 65 %) werden erhalten. Das Produkt zeigt keinerlei Verunreinigungsspuren bei chromatographischen Analysen (TLC und HPLC) und das ¹H-NMR-Spektrum bestätigt dessen Molekülstruktur.
  • TLC (CMA) Rf: 0,1
  • (BWA) Rf: 0,5
  • HPLC tr: 8 Minuten
  • NMR: δ -0,88 (q. 6H, CH&sub3; Leu), 1,20-2,18 (7H, CH&sub2; Leu, CH&sub2; Pro, CH Leu), 3,0-3,60 (4H, CH&sub2; Trp, CH&sub2;-Pro), 3,85-4,55 (3H, CH Pro, CH Leu, CH Trp), 6,95-7,55 (5H, Ringprotonen), 7,90-8,10 (2H, NH Leu, NH Trp), 10,80 (s. 1H, NH-Ring).
  • Lösungsmittel: Deuterodimethylsulfoxid
    • Beispiel 4 Synthese von Pyroglutamyl-Glycyl-Phenylalanin (Glp-Gly-Phe-OH)
  • Das Peptid wird unter Verwendung von 0,5 g des Harzes und unter Verwendung der Derivate der Aminosäuren: Nu-Fluorenyl-methoxycarbonylphenylalanin (Fmoc-Phe), gemäß dem Verfahren 1 angelagert, Nu-Fluorenylmethoxycarbonylglycin (Fmoc-Gly) (Verfahren 1), Pyroglutaminsäurepentachlorphenolester (Verfahren 2) synthetisiert.
  • Nach den Anlagerungsschritten wird das Peptid vom Harz abgetrennt und durch präparative Umkehrphasenchromatographie unter Verwendung von 20 % CH&sub3;CN und 0,1 % TFA in Wasser als Eluantenphase isoliert.
  • 85 mg des flockigen farblosen Produkts wird erhalten (Ausbeute: 71 %). Das Produkt zeigt keinerlei Verunreinigungsspuren bei chromatographischen TLC- und HPLC-Analysen und das ¹H-NMR-Spektrum bestätigt dessen Molekülstruktur.
  • TLC (CMA) Rf: 0,15
  • (BWA) Rf: 0,41
  • HPLC tr: 2,6 Minuten
  • NMR: δ -1,80-2,28 (4H, CH&sub2; Glp), 3,0 (m. 2H, CH&sub2; Phe), 3,72 (m. CH&sub2; Gly), 4,07 (m. 1H, CH Glp), 4,45 (m. 1H, CH Phe), 7,25 (s. 5H, ), 7,78 (s. 1H, NH Gly), 7,95-8,30 (2H, NH-Gly, NH-Phe).
  • Lösungsmittel: Deuterodimethylsulfoxid
    • Beispiel 5 Synthese von Pyroglutamyl-Leucyl-Tyrosin (Glp-Leu-Tyr-OH)
  • Das Peptid wird unter Verwendung von 0,5 g hoch beladenen Harzes, das bis zum Benzylrest funktionalisiert ist, synthetisiert.
  • Als Aminosäurederivate werden verwendet: Nα-Fluorenyl-methoxycarbonyl-Otert.butyl-tyrosin (FmocTyr(But)OH) (Verfahren 1, Tabelle I), FmocLeu (Verfahren 1, Tabelle I) und GlpOPCP (Verfahren 2, Tabelle I).
  • Nach den Peptidanlagerungsschritten wird das Peptid vom Harz abgetrennt und durch präparative Umkehrphasenchromatographie unter Verwendung von 11 % CH&sub3;CN und 0,1 % TFA in Wasser als Eluantenphase isoliert.
  • 111 mg des flockigen farblosen Produkts werden erhalten (Ausbeute: 67 %).
  • Das Produkt zeigt keinerlei Verunreinigungen bei chromatographischen TLC- und HPLC-Analysen und das ¹H-NMR- Spektrum bestätigt dessen Molekülstruktur.
  • TLC (CMA) Rf: 0,25
  • (BWA) Rf: 0,34
  • HPLC tr: 3,02 Minuten
  • NMR: δ -0,85 (q. 6H, CH&sub3; Leu), 1,18-2,23 (7H, CH&sub2;-Leu, CH&sub2; Glp), 2,90 (m. 2H, CH&sub2; Tyr), 4,0 (m. 1H, CH Glp), 4,18-4,26 (2H, CH Leu, CH Tyr), 6,50-7,10 (4H, ), 7,75 (s. 1H, NH Glp), 7,80-8,10 (2H, NH Leu, NH Tyr), 2,10 (1. breit, 1H, OH Tyr).
  • Lösungsmittel: Deuterodimethylsulfoxid Tabelle I Verfahren, die bei der Synthese in der festen Phase verwendet wurden Verfahren 5mal Waschen mit DMF 2 Behandlungen mit Piperidin bei 20% in DMF 10mal Waschen mit DMF Acylierung über symmetrisches Anhydrid 5mal Waschen mit DMF Acylierung mit Dicylohexylcarbodiimid und N-Hydroxybenzotriazol

Claims (8)

1. Tripeptid der allgemeinen Formel:
A-B-C-OZ (I)
worin:
A einen Rest der L-Pyroglutaminsäure, unsubstituiertes L-Prolin oder L-Prolin darstellt, das an der Aminogruppe einen Substituenten der Formel:
trägt, in der R&sub1; eine geradkettige Acylgruppe mit bis zu 9 Kohlenstoffatomen, eine Benzyloxycarbonylgruppe oder eine Alkoxycarbonylgruppe bedeutet;
B einen Rest einer α-Aminosäure, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus L-Glycin, L-Alanin, L-Phenylalanin, L-Valin, L-Leucin, L-iso-Leucin, L-Lysin, L-Serin, L-Threonin, L-Asparagin, L-Glutamin, L-Arginin und L-Tyrosin bedeutet;
C einen Rest einer Aminosäure, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus L-Tryptophan, L-Phenylalanin und L-Tyrosin bedeutet und
Z ein Wasserstoffatom oder eine geradkettige Alkylgruppe mit bis zu 9 Kohlenstoffatomen darstellt, mit der Maßgabe, daß wenn A ein Rest der L-Pyroglutaminsäure ist, C kein Rest von L-Tryptophan ist, daß wenn A ein wie vorstehend definiert substituiertes L-Prolin und B L-Phenylalanin ist, C kein L-Phenylalanin bedeutet und daß wenn A ein unsubstituiertes L-Prolin oder ein wie vorstehend substituiertes L-Prolin bedeutet und B L-Glycin ist, C weder L-Phenylalanin noch L-Tyrosin darstellt.
2. Tripeptid nach Anspruch 1: nämlich L-Pyroglutamyl- L-Asparaginyl-L-Phenylalanin.
3. Tripeptid nach Anspruch 1: nämlich Pyroglutamyl- Leucyl-Phenylalanin.
4. Tripeptid nach Anspruch 1: nämlich Prolyl-Leucyl- Tryptophan.
5. Tripeptid nach Anspruch 1: nämlich Pyroglutamyl- Glycyl-Phenylalanin.
6. Tripeptid nach Anspruch 1: nämlich Pyroglutamyl- Leucyl-Tyrosin.
7. Verfahren zur Herstellung eines Tripeptids nach Anspruch 1 durch Festphasensynthese, dadurch gekennzeichnet, daß:
(a) ein Polyamidharz verwendet wird, das mit Resten eines substituierten Benzylalkohols funktionalisiert ist;
(b) die Aminosäuren zu ihren symmetrischen Anhydriden aktiviert werden;
(c) die aktivierten Aminosäuren zu den Benzylalkoholresten durch eine Esterbindung gemäß der gewünschten Sequenz gebunden werden;
(d) das so erhaltene Tripeptid vom Harz durch ein 9:1 (Volumen/Volumen)-Gemisch aus Trifluoressigsäure und Ethandithiol abgetrennt wird und
(e) das abgetrennte Tripeptid extrahiert und gereinigt wird.
8. Pharmazeutisch hypotensives Mittel, bestehend aus einer therapeutisch wirksamen Menge eines Tripeptids nach Anspruch 1 und einem pharmazeutischen Träger.
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