DE3448494C2

DE3448494C2 -

Info

Publication number: DE3448494C2
Application number: DE3448494A
Authority: DE
Inventors: Ralph J. Oregonia Ohio Us Stolle; Lee R. Dr. Birmingham Ala. Us Beck
Original assignee: Stolle Research & Development Corp Cincinnatti Ohio Us
Current assignee: Stolle Milk Biologics Inc
Priority date: 1983-10-27
Filing date: 1984-10-26
Publication date: 1993-09-23
Anticipated expiration: 2004-10-27
Also published as: DE3439345A1; NL8403248A; ATE64530T1; EP0143345A3; SE8405351D0; DE3439345C2; EP0143345A2; EP0380032B1; CH671517A5; EP0380032A1; ATE100325T1; EP0143345B1; HK1006004A1; SE466532B; SE8405351L; US4636384A

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung hyperimmuner Milch zur Behandlung von Erkrankungen des Pulmonalsystems wie z. B. von mit dem Rauchen zusammenhängenden Erkrankungen der Lunge.

Ein überaus wichtiges Organsystem von Säugern, insbesondere des Menschen, das gekennzeichnet ist durch die progressive Degeneration von Zellen der dieses Organsystem bildenden Organe, ist das Pulmonalsystem, und insbesondere die Lunge und die dazugehörigen Bronchien und Alveolen. Ähnlich wie die Arte riosklerose und die Gefäßalterung hängen auch bestimmte Lungen erkrankungen, einschließlich eines allgemeinen Zusammenbruchs des Pulmonalsystems, Kurzatmigkeit und die Verminderung der Atmungseffizienz mit Reizstoffen und Verunreinigungen in der Umwelt, wie sie auch im Zigarettenrauch enthalten sind, zusammen und sind durch sie verursacht.

Rauchen über längere Zeit führt bekanntlich zur Akku mulierung von Ablagerungen von Kohlenstoff und anderen Substanzen auf und in der Lunge, wodurch die respira torische Funktion des betroffenen Bereichs zerstört wird. In ähnlicher Weise führen Rauchen und/oder die Anwesenheit dieser Ablagerungen zu einem starken An stieg der Zahl der Neutrophilen und Lymphozyten in den Säugerlungen. Beide Zelltypen erzeugen Substanzen, die für das Lungengewebe schädlich sind.

Was die Arteriosklerose betrifft, so ist durch eine Verminderung der Häufigkeit des Rauchens bei den mei sten Altersgruppen eine gewisse Eindämmung bzw. Abschwä chung der mit dem Rauchen zusammenhängenden Erkrankun gen erzielt worden. Bei manchen Teilen der Bevölkerung, insbesondere bei Heranwachsenden und Jugendlichen hat das Rauchen stark zugenommen, wodurch sich die Häufig keit der Fälle von mit dem Rauchen zusammenhängenden Erkrankungen sowohl bei der derzeitigen Bevölkerung als auch insbesondere in absehbarer Zukunft vervielfachen wird.

Was die Herz- und Gefäßerkrankungen betrifft, so zei tigt die auf der Vermeidung der Verunreinigungen - wie z. B. durch das Rauchen bedingt - beruhende Behandlung je nach Individuum wechselnden Erfolg. Könnte nun ein Verfahren zur Verminderung der Menge an abgelagerter Substanz, wie z. B. ein Verfahren zur Stimulierung der Makrophagenaktivität in den Lungen gefunden werden, so könnte man auf diese Weise ein für die meisten Men schen günstiges Behandlungsverfahren entwickeln.

Gelänge es, ein natürliches Nahrungsmittel wie z. B. Milch zu entwickeln, das auf die dem Rauch ausgesetzte Lunge und die damit zusammenhängenden Erkrankungen eine schonende bzw. lindernde Wirkung ausübt, so hätte man damit eine leicht anwendbare, leicht zugängliche und sichere therapeutische Zusammensetzung zur Bekämpfung von Gefäßerkrankungen.

Aus dem Stand der Technik ist bekannt, Milch zu produ zieren, die eine Reihe von therapeutischen Wirkungen aufweist. So z. B. beschreibt Beck eine Milch, die einen Antikörper gegenüber Streptococcus mutans enthält und Karies inhibierende Wirkung aufweist (Beck, US-PS 43 24 782). Diese Milch erhält man durch Immunisierung einer Kuh mit S. mutans-Antigen in zwei Stufen, wonach man daraus die therapeutische Milch gewinnt. Beck be schreibt ferner eine Milch mit antiarthritischen Eigen schaften. Ferner beschreibt er eine antiinflam matorische Eigenschaften aufweisende Milch (US-PS 42 84 623). Heinbach hat in der US-PS 31 28 230 eine Milch beschrieben, die α-, β- und γ-Gluboline enthält, erhalten durch Beimpfung einer Kuh mit Antigengemischen. Antikörper enthaltende Milchsorten wurden auch von Peter sen (US-PS 33 76 198 und CA-PS 5 87 849), Holm, US-PA (veröffentlicht) Serien-Nr. 6 28 987 und Tunnak et al. (GB-PS 12 11 876) beschrieben.

In keiner der erwähnten Druckschriften wird jedoch eine Milch geoffenbart oder angenommen, die eine auf die dem Rauch ausgesetzte Lunge schonende Wirkung aufweist.

Eine Aufgabe der Erfindung ist somit die Bereitstellung einer Milch mit im Hinblick auf Erkrankungen des Pulmonal systems günstigen Eigenschaften.

Diese Aufgabe wird wie aus den nachstehenden Ansprüchen ersichtlich gelöst.

Eine umfassendere Vorstellung von der Erfindung und von vielen der von ihr zu erwartenden Vorteile ergibt sich aus der nachfolgenden detaillierten Beschreibung im Zusammenhang mit den nachfolgend aufgeführten Zeichnungen:

Fig. 1 zeigt eine rasterelektronenmikroskopische (REM) Aufnahme der Alveolenwandung der Lunge einer Ratte, die während 3 Monaten Zigarettenrauch ausgesetzt wurde (Ver größerung 5750fach);

A. Kontrolle; An der Alveolenwandung ist ein Fremd körper (siehe Pfeil) zu sehen, außerdem ist die Wandung gerissen, wobei ein Erythrozyt zutage tritt.
B. Hyperimmune Milch: Der Makrophage (dust cell) im Mittelpunkt des Mikrophotos phagozytiert den Fremd körper, wodurch die Alveolenwandung von den Teil chen befreit wird, die mit dem Rauch in den unteren Atmungsweg gelangt sind.

Fig. 2 zeigt eine TEM-Aufnahme einer Ratte, die 3 Mo nate lang Zigarettenrauch ausgesetzt war und hyperimmu ne Milch erhalten hatte (Vergrößerung 5500fach). Die Pseudopodien (P) des Lungenmakrophagen (DC) haben im Anfangsstadium der Phagozytose den im Alveolarlumen befindlichen Fremdkörper umgeben (siehe Pfeil).

Fig. 3 zeigt eine TEM-Aufnahme eines Makrophagen auf einer Alveolarzelle vom Typ 1 in der Lunge einer Ratte, die 3 Monate lang Zigarettenrauch ausgesetzt war und hyperimmune Milch erhielt (Vergrößerung 1200fach). Der Makrophage enthält phagozytiertes Material und ist gerade im Begriff, einen Fremdkörper (siehe Pfeil) im Alveolarlumen aufzunehmen. Die Kapillarlumina in den Alveolenwandungen werden von Erythrozyten eingenommen.

Die Erfindung betrifft ein natürliches Nahrungsmittel (Milch), das auf das Pulmonalsystem von Säugern günstigen Einfluß hat, sowie ein Verfahren zur Herstellung der Milch. Da die erfindungsgemäße Milch ein natürliches Pro dukt ist, kann sie zur Behandlung von mit dem Rauchen oder einer natürlichen Bedingung wie Gefäßalterung zusam menhängenden Lungenerkrankungen ohne die Gefahr von Neben wirkungen verwendet werden.

Die erfindungsgemäße Milch kann zur Rückbildung einiger schädlicher Wirkungen des Rauchens auf das Lungengewebe verwendet werden oder zumindest zum Schutz des Lungenge webes und verwandter Gewebe vor schädlichen Einwirkungen und mit dem Rauch zusammenhängenden Erkrankungen, ein schließlich der Verminderung der Zahl der Makrophagen und der Verminderung ihrer Aktivität, d. h. ihres Phagozytose vermögens, der Zunahme der Zahl an Neutrophilen und Lympho zyten im Lungengewebe und der schädlichen Sekrete des Lun gengewebes, der Zunahme der Stärke der Blut/Luft-Barriere und der damit möglicherweise verbundenen Kurzatmigkeit.

Der für das Verfahren für die Milchgewinnung in Frage kom mende Vertreter der Bovidae ist ein Milch produzierender Vertreter der Gattung Bos, insbesondere Kühe.

Die Erfindung beruht mit auf der Feststellung, daß ein Ver treter der Bovidae, durch periodische Verabreichung eines Boosters aus einem Antigen oder einem Antigengemisch in einen spezifischen Immunisierungszustand gebracht, Milch mit von für die Behandlung von Gefäßerkrankungen sehr günstigen Eigenschaften produziert. Die günstigen Milchei genschaften zeigen allerdings nicht alle immunisierten Bovidae. Die Verleihung der Immunsensibilität allein reicht noch nicht aus, um die gewünschten Eigenschaften der Milch hervorzurufen, was die Tatsache zeigt, daß norma le Kuhmilch diese Eigenschaften nicht aufweist, selbst wenn die Kuh gegen verschiedene Antigene während der norma len Immunisierung gegen Erkrankungen sensibilisiert worden ist.

Außerdem zeigt aus mit Boosterinjektionen im Immunzustand gehaltenen Boviden gewonnene Milch nicht immer diese Eigen schaften. Nur in einem spezifischen hyperimmunen Zustand zeigt die Milch die gewünschten Wirkungen. Dieser spezielle Zustand wird nur durch periodische Verabreichung von Boostern mit ausreichend hohen Dosen an Antigenen oder Antigengemi schen erzielt. Der bevorzugte Dosisbereich beträgt dabei 50% oder mehr als die Dosis ausmacht, die für die Verleihung der primären Sensibilisierung des Vertreters der Bovidae er forderlich ist. Es liegt somit eine Schwelle für die Booster dosierung vor, unterhalb der die Eigenschaften in der Milch nicht erzeugt werden, selbst wenn sich die Kuh in einem Zu stand befindet, den man normalerweise als Immunzustand be zeichnet. Zur Erzielung des hyperimmunen Zustandes ist es wichtig, die Bovidenmilch nach einer ersten Reihe von Booster verabreichungen zu testen. Hat die Milch nicht die gewünsch ten Eigenschaften, ist eine zweite Serie von Boostern in hoher Dosierung zu verabreichen. Dieser Vorgang wird solange wiederholt, bis die Milch die gewünschten Eigenschaften zeigt.

Das gesamte Verfahren umfaßt somit folgende Stufen:

1. Auswahl des Antigens.
2. Sensibilisierung des Vertreters der Bovidae durch primäre Immunisierung.
3. Test des Bovidenserums zum Nachweis der eingetretenen Sensibilität.
4. Verabreichung von Boostern in geeigneter Dosierung zur Ver leihung und Aufrechterhaltung eines hyperimmunen Zustands.
5. Test auf Antialterungs- und antiarteriosklerotische Eigenschaften der Milch.
6. Gewinnung der Milch aus dem Vertreter der Bovidae während des hyperimmunen Zustands.

Stufe 1

Es können beliebige Antigene oder Antigengemische ver wendet werden. Die Antigene können Substanzen bakteriel ler, viraler, cellulärer oder anderer Herkunft sein, auf die das Immunsystem eines Vertreters der Bovidae an spricht. Der kritische Punkt an Stufe 1 ist, daß das Antigen die Fähigkeit haben muß, bei der Kuh den Zustand einer Immunsensibilität auszulösen. Das Antigen kann nach einem beliebigen, Sensibilisierung hervorrufenden Verfahren verabreicht werden. Vorzugsweise werden poly valente Antigene wie Bakterien verwendet.

Stufe 2

Das bevorzugte Verfahren der Immunisierung ist die intra muskuläre Injektion. Es kommen jedoch auch andere Ver fahren wie intravenöse Injektion, intraperitoneale In jektion, orale Verabreichung, Rektalsuppositorien und andere in Frage, unter der Bedingung, daß die Dosis für die Induzierung der Sensibilität ausreicht. Die Dosis beträgt gewöhnlich 1×10⁶ Zellen bis 1×10²⁰ Zellen, vorzugsweise 10⁸ Zellen bis 10¹⁰ Zellen, insbesondere 2×10⁸ Zellen.

In Stufe 3 wird festgestellt, ob bei der Kuh eine Sen sibilisierung gegenüber dem Antigen eingetreten ist oder nicht. Aus dem Stand der Technik der Immunologie ist eine Reihe von Testverfahren zur Feststellung der Sensibilität bekannt (Methods in Immunology and ImmunoChemistry, Wil liam, C. A., Chase, W. M. Academic Press, N. Y., London (Bd. 1-5) (1977)). Beispiele für derartige Tests sind Haut sensibilitätstests, Serumtests auf die Anwesenheit von Antikörpern als Reaktion auf die stimulierenden Anti gene und Tests zur Bewertung der Fähigkeit von Immun zellen, aus dem Wirt auf das Antigen zu reagieren. Der zu verwendende Testtyp hängt weitgehend von der Art des verwendeten Antigens ab. Das bevorzugte Verfahren be steht in der Verwendung eines polyvalenten Impfstoffes, bestehend aus einer Vielzahl von Bakterienarten als Anti gen und im Test auf Anwesenheit agglutinierender Anti körper im Serum der Kuh vor und nach dem Immunitätstest. Das Auftreten von Antikörpern in der Milch nach der Immunisierung mit dem Impfstoff ist ein Indiz für die Sensibilität, wonach dann zu Stufe 4 übergegangen wer den kann. Die für die Induzierung der Sensibilität er forderliche Minimaldosis an Antigen hängt vom verwen deten Antigentyp ab.

Stufe 4 umfaßt die Induzierung und Aufrechterhaltung des hyperimmunen Zustands. Ist der Vertreter der Bovidae einmal sensibilisiert, dann wird dieser Zustand durch wiederholte Boosterverabreichung bei geeigneter Dosie rung in bestimmten Zeitabständen induziert. Diese hän gen von der Art des Antigens ab. Für polyvalente bak terielle Antigene ist ein Zweiwochenintervall für die Boosterverabreichung am geeignetsten. Außerdem dürfen die Boosterverabreichungen nicht einen Zustand der Im muntoleranz hervorrufen. Dies bewirkt beim Tier einen Übergang aus einem hyperimmunen Zustand in einen Zu stand der Immuntoleranz gegenüber dem Antigen, wodurch das Tier dann aufhört, Milch mit den günstigen Eigen schaften zu produzieren.

Außerdem ist z. B. auch eine Kombination aus den ver schiedenen Immunisierungsverfahren möglich wie z. B. intramuskuläre Injektion für die primäre Immunisierung mit intravenöser Injektion für Boosterinjektionen usw. Zur Sensibilisierung und Induzierung des hyperimmunen Zustands kann sich der Fachmann verschiedenster Kombina tionen von Immunisierungsverfahren bedienen.

Stufe 5 dient zur Überprüfung der für die Behandlung von Lungenerkrankungen erforderlichen Eigenschaften der Milch. Zur Überprüfung der Wirkungen der hyperimmunen Milch auf das Pulmonalsy stem von Tieren kann eine ganze Reihe von Untersuchungs techniken eingesetzt werden. Vorzugsweise kann als Test gewebe Kaninchen- oder Rattengewebe verwendet werden. Diese Tests umfassen in allen Fällen die Fütterung eines Kaninchens oder einer Ratte mit einer Diät, die hyperimmune Milch enthält, während eine Kontrollgruppe von Kaninchen mit einer Diät mit normaler Milch gefüt tert wird. Nach einem vorher festgelegten Zeitabschnitt werden die Tiere getötet, wonach Pulmo nalsystem mit einer der folgenden Techniken untersucht werden kann: Rasterelektronenmikroskopie der Endokar dialoberfläche der Bronchien der Lunge und der Lungenalveolen zur Feststellung von Endothel schäden bzw. der Anwesenheit von Fremdkörpern; Transmis sionselektronenmikroskopie der Gefäße zur Feststellung von Lipidtröpfchen, Endotheldegeneration, Anwesenheit von Lipid in Schaumzellen oder der Tendenz von Fibrin- oder Blutplättchen, der Lumenoberfläche von Endothel zellen anzuhaften; histologische Analysen an Herzen zur Feststellung von Lipiden, z. B. zum Nachweis von Lipiden mit öllöslichen Farbstoffen wie Oil Red oder Sudan schwarz an Schnitten aus gefrorenem Gewebe oder der An wesenheit von Enzymen, insbesondere von Zytochromoxyda se oder des Lungengewebes auf Phagozytose; histologi sche Untersuchung des Lungengewebes auf Infiltration von Neutrophilen und Leukozyten.

Stufe 6 umfaßt die Gewinnung und Verarbeitung der Milch. Die Milch kann nach den üblichen Methoden gewonnen wer den, zum Schutz ihrer günstigen Eigenschaften ist je doch eine spezielle Behandlung erforderlich. Die günsti gen Eigenschaften der Milch sind hitzeempfindlich. Daher ist die Pasteurisierung vorzugsweise bei niederen Tem peraturen durchzuführen. Die Pasteurisierungstemperatur sollte 71°C während 15 Sekunden nicht übersteigen. Nach der Pasteurisierung wird das Fett nach den üblichen Verfahren entfernt, wonach die Milch sprühgetrocknet wird. Man bedient sich dabei der üblichen Sprühtrock nungsverfahren, nur daß die Milch unter Vakuum bei nied riger Temperatur konzentriert wird, um ihre günstigen Eigenschaften nicht zu zerstören (siehe z. B. Kosikowski, F., "Cheese and Fermented Milk Products", ^2ndEd., 1977). Das Endprodukt ist ein Milchpulver, das günstige Eigen schaften aufweist.

Außerdem kann auch flüssige Milch verwendet werden, wie auch konzentrierte Milchprodukte oder eine Fraktion der Milch, welche den biologisch aktiven Faktor oder die biologisch aktiven Faktoren wie die saure Molkefraktion enthält.

Die Erfindung beruht auf der Feststellung, daß die aus hyperimmunen Boviden gewonnene Milch einen günstigen Einfluß auf das Pulmonalsystem von Tieren aus übt, die Rauch ausgesetzt sind und insbesondere deren Lungengewebe schützt. So z. B. wurde gefunden, daß in Lungen von Ratten, die mit konstanter Hyperimmunmilch diät ernährt wurden und Zigarettenrauch ausgesetzt wa ren die Zahl der Neutrophilen und Lymphozyten, die durch die Raucheinwirkung in die Lungen eingedrungen waren, verglichen mit Kontrollgruppen erheblich herabgesetzt ist. Außerdem ist die Alveolenoberfläche bei Ratten, die hyperimmune Milch erhielten und Rauch ausgesetzt waren "reiner" als bei Ratten, die nur Rauch ausgesetzt waren oder Rauch + Kontrolle, d. h. normale Milch.

Die hyperimmune Milch scheint die Aktivität der Lungen makrophagen zu steigern. Die Makrophagen in den Bron chiolen und Alveolen von mit hyperimmuner Milch gefüt terten Ratten waren aktiver in der Phagozytose von vom Rauch herrührenden Fremdkörpern in der Lunge von Rat ten, die Rauch ausgesetzt waren, als bei Ratten, die lediglich Rauch oder Rauch + Diät aus nicht-hyperimmu ner Milch ausgesetzt waren. Außerdem war die Blut/Luft- Barriere bei Ratten, die Rauch ausgesetzt waren und mit einer Hyperimmunmilchdiät gefüttert worden waren, klei ner als bei Ratten, die lediglich Rauch ausgesetzt wa ren oder Rauch + normaler Milchdiät.

Neben dem kardiovaskulären Gewebe wurden noch 16 andere Gewebe, die jeweils eine oder mehrere Komponenten je des größeren Organsystems darstellten und von densel ben Tieren stammten, untersucht. Die hyperimmune Milch zeigte dabei keine negative Wirkung auf eines dieser Gewebe.

Die erfindungsgemäße Milch kann in einer beliebigen Menge bereitgestellt werden, wie sie für mit dem Rauchen zusam menhängenden Lungenerkrankungen an Warmblütern erforder lich ist. Je nach den besonderen Umständen der Erkrankung und der Säugerart können täglich Mengen von 1 ml bis 10 l, bezogen auf flüssige Milch, bereitgestellt werden. Diesel ben Mengen können auch an gesunden Individuen zu prophylak tischen Zwecken verwendet werden.

In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird die Milch periodisch, z. B. täglich in Dosierungen von ca. 40 g, über längere Zeit wie z. B. während 15 bis 30 Tagen und darüber bis zu mehreren Jahren verabreicht. Es ver steht sich von selbst, daß die Behandlungsdauer durch Steigerung der Tagesdosen verkürzt werden kann. Außerdem können kleinere Dosen, über den Tag verteilt, wirksamer sein als eine einzige Dosis einmal pro Tag.

Die vom Fett befreite Milch kann in jedes beliebige Nahrungsmittel eingearbeitet werden, solange dieses nicht bei einer Temperatur behandelt wird, die zu hoch ist und die gefäßtherapeutischen Eigenschaften des Produktes inaktivieren würde. Bevorzugt ist eine Temperatur von unter 150°C. Zum Beispiel können Pud dings oder Yoghurt mit hyperimmuner Milch zubereitet werden.

Ferner wurde gefunden, daß die Molkefraktion den bzw. die für die festgestellten und oben beschriebenen gün stigen Eigenschaften verantwortlichen Stoff(e) enthält. Diese saure Molkefraktion kann ferner Sirupen, Eismi schungen, Konfekt, Getränken, Futtermitteln oder ähnli chem zugesetzt werden (siehe Kosikowski, ibidem, S. 446). Für den Durchschnittsfachmann, der weiß, daß die Molke fraktion wichtige Faktoren enthält, ist einsichtig, daß zur Gewinnung wirksamer Fraktionen eine weitere Auftren nung durchgeführt werden kann.

Zur Linderung von mit dem Rauchen zusammenhängenden Er krankungen kann ferner die Milch in die zu rauchende Substanz eingearbeitet werden, wie z. B. durch Besprühen des Tabaks mit einer Aerosolform der Milch.

A. Herstellungsbeispiele für die Milchaufbereitung Beispiel 1

Fünf Holstein-Kühe wurden gegen Escherichia coli (Ame rican Type Culture Strain No. 13076) immunisiert. Die primäre Immunisation erfolgte durch intramuskuläre In jektion eines in physiologischer Kochsalzlösung suspen dierte, durch Hitze abgetötete Zellen von E. coli ent haltenden Impfstoffs. Die Konzentration der Bakterien zellen betrug 4×10⁸/cm³. Eine Dosis von 5 cm³ (20× 10⁸) Zellen wurde intramuskulär einmal wöchentlich wäh rend 4 aufeinanderfolgenden Wochen injiziert. Die wäh rend der 5. Woche gewonnene Milch wurde auf die Anwe senheit von Antikörpern gegen E. coli getestet. Die An wesenheit von Antikörpern gegen E. coli wurde noch einem Mikroagglutinationsverfahren ermittelt. Dieses besteht darin, daß man verschiedene Verdünnungen der Milchmolke mit einer festgelegten Konzentration an in einem Puffer suspendierten Zellen von E. coli reagie ren läßt. Die Anwesenheit von Antikörpern in der Milch verursacht die Agglutination der Bakterienzellen. Von der Milch wird eine Verdünnungsreihe hergestellt, wo bei schließlich eine Verdünnung erzielt wird, bei der die Antikörperkonzentration so gering ist, daß sie keine Agglutinationsreaktion mehr hervorruft. Die maximale Verdünnung, die Agglutination auslöst, ist der Antikör pertiter. Die Anwesenheit einer hohen Antikörperkon zentration in der Milch ist ein Indiz dafür, daß die Immunisierung eine Sensibilisierung des Immunsystems gegenüber dem Antikörper auslöst. In Tabelle 1 wird der Antikörpertiter gegenüber E. coli bei 5 Kühen vor und nach der primären Immunisierung verglichen.

Tabelle 1

Milchantikörpertiter bei 5 Kühen vor und nach der Immunisierung gegen E. coli

In jedem Falle war nach der Immunisierung ein starker Anstieg des Milchtiters gegen E. coli zu verzeichnen. Daraus wurde geschlossen, daß die Immunisierung eine Sensibilisierung der Kuh gegen E. coli ausgelöst hat. Nach der Sensibilisierung wurden den Kühen alle 14 Tage Boosterinjektionen derselben Antigendosis verabreicht, wodurch ein hyperimmuner Zustand erreicht wurde, der während der gesamten Zeitdauer, während der die Milch täglich gewonnen und zur Gewinnung von Magermilchpulver behandelt wurde, aufrechterhalten wurde.

Das nach dem oben beschriebenen Verfahren erhaltene Magermilchpulver wurde mit einer Reihe von unten ange führten Tests auf seine günstigen Eigenschaften hin getestet.

Beispiel 2

Analog Beispiel 1 wurde ein identischer Versuch durch geführt, nur daß als ausgewähltes Antigen ein polyva lenter Impfstoff verwendet wurde, der die in Tabelle 2 angeführten Bakterienstämme enthielt. Diese wurden durch Mischen von gleichen Gewichtsanteilen von lyo philisierten Bakterienzellen miteinander vereinigt, wonach das erhaltene Gemisch in physiologischer Koch salzlösung zur Erzielung einer mit Beispiel 1 identi schen Konzentration verdünnt wurde. Der Ergebnisse der Tests an der mit diesen ausgewählten Antigenen herge stellten Milch waren, wie unten ausgeführt, positiv.

Bakterienantigene
Mikroorganismus
ATTC Nr.
Staphylococcus aureus
11 631
Staphylococcus epidermidis	155
Streptococcus pyogenes, A. Typ 1	8 671
Streptococcus pyogenes, A. Typ 3	10 389
Streptococcus pyogenes, A. Typ 5	12 347
Streptococcus pyogenes, A. Typ 8	12 389
Streptococcus pyogenes, A. Typ 12	11 434
Streptococcus pyogenes, A. Typ 14	12 972
Streptococcus pyogenes, A. Typ 18	12 357
Streptococcus pyogenes, A. Typ 22	10 403
Aerobacter aerogenes	884
Escherichia coli	26
Salmonella enteritidis	13 076
Pseudomonas aeruginosa	7 700
Klebsiella pneumoniae	9 590
Salmonella typhimurium	13 311
Haemophilus influenza	9 333
Streptococcus viridans	6 249
Proteus vulgaris	13 315
Shigella dysenteriae	11 835
Streptococcus, Gruppe B @	Diplococcus pneumoniae @	Streptococcus mutans @	Corynebacterium, Acne, Typ 1 und 2

* American Type Culture Collection;
12 301 Parklawn Drive,
Rockville, Maryland 20 852

Es muß festgestellt werden, daß die in diesem Beispiel hergestellte Milch identisch ist mit einer bevorzugten Ausführungsform der US-PS 42 84 623. Die dort geoffen barte Milch hat antiinflammatorische Eigenschaften.

Beispiel 3

Ein Stamm von Streptococcus mutans wurde mit bekannten Techniken gezüchtet. Kulturen von S. mutans AHT (sero logische Gruppe a), BHT (Gruppe b), 10 449 (Gruppe c) und 6715 (Gruppe d) wurden in dialysiertem Tryptose medium gezüchtet. Danach wurden die Zellen durch Zentri fugieren bei 4000×G abgeerntet und fünfmal mit 0,1 M mit Phosphat gepufferter physiologischer Kochsalzlösung bei pH 7,0 gewaschen. Dann wurden die Zellen durch Er wärmen bei 60° während 30 Minuten inaktiviert und er neut suspendiert bis zu einer Endkonzentration von S. mutans AHT, BHT, 10 449 und 6715 bei 5×10⁸ Zellen/ml. Dieses Präparat wurde dann zur Immunisierung von 2 Kü hen verwendet. Jede Kuh wurde bei zwei verschiedenen Gelegenheiten mit frischem Antigen aus allen 4 Gruppen von S. mutans (Gruppe a, b, c und d) immunisiert. Da nach wurde eine Kuh zur Bildung eines Milchproduktes mit bekannten Techniken gemäß dieser Erfindung immuni siert. Nach der Immunisierung wurden von dieser Kuh Blutproben entnommen, bis der Serumantikörpertiter sei nen höchsten Wert erreichte, wonach dann die Milch ge wonnen wurde. Die Milch selbst wurde dann getrocknet und pulverisiert, wiederum mit bekannten Techniken, wodurch man ein Milchpulver mit nützlichen Eigenschaf ten erhielt.

Es muß festgestellt werden, daß die nach diesem Beispiel hergestellte Milch identisch ist mit der in der B-PS 15 05 513 von Beck geoffenbarten Karies inhibierenden Milch.

Beispiel 4

Zur Immunisierung einer Kuh und Erzielung einer hyper immunen Milch mit kardiovaskulärer oder pulmonaler Wir kung wurde der in Tabelle 3 angegebene polyvalente Impf stoff entsprechend Beispiel 2 verwendet.

Bakterien
ATTC Nr.
1. Pseudomonas aeruginosa
14 212
2. Pseudomonas maltophiia	17 666
3. Streptococcus equisimili	9 542
4. Streptococcus dysgalactiae	27 957
5. Streptococcus uberis	27 958
6. Streptococcus bovis	15 351
7. Streptococcus bovis	27 960
8. Pasteurella multocida	9 659
9. Pasteurella multocida	6 533
10. Pasteurella haemolytica	14 003
11. Pasteurella multocida	15 743
12. Moraxella bovis	10 900
13. Actinobacillus lignieresi	13 372
14. Corynebacterium renale	10 848
15. Fusobacterium necrophorum	25 286
16. Bacillus cereus	25 621
17. Salmonella dublin	15 480
18. Salmonella heidleberg	8 326
19. Salmonella paratyphi	11 511
20. Yersinia enterocolitica	9 610

B. Biologische Untersuchungen Pulmonale Wirkungen

Es wurden Untersuchungen zur pulmonalen Wirkung an Ratten zur Feststellung des Einflusses einer Hyperimmunmilchdiät auf Zigarettenrauch ausgesetzte Säuger durchgeführt. Als Versuchstiere wurden weibliche Albinoratten des Charles Rivers CD-Stammes eingesetzt. Insgesamt wurden für die Untersuchungen 68 Ratten verwendet.

Tabelle 1

Plasmalipidwerte für den Menschen

Ergebnisse und Diskussion

Die histologischen Untersuchungen haben ergeben, daß die dem Rauch nicht ausgesetzten Lungen der Kontroll ratten und die Lungen der mit Hyperimmunmilch gefüt terten und dem Rauch ausgesetzten Ratten weit weniger Neutrophile enthielten als die Lungen Rauch ausgesetz ter Ratten bzw. von solchen Ratten, die sowohl Rauch ausgesetzt waren als auch mit normaler bzw. Kontroll milch gefüttert worden waren. Auch war die Zahl der Lymphozyten in den Lungen der Kontrolltiere geringer und noch weiter herabgesetzt in dem mit den Bronchien verbundenen Lymphgewebe [Bronchial-associated lymphoid tissue (=BALT)] in den Lungen von Ratten, die mit Hyper immunmilch gefüttert worden waren und dem Rauch ausge setzt waren.

Die REM-Aufnahmen der Oberfläche der Alveolen von Rauch ausgesetzten und mit Hyperimmunmilch gefütterten Ratten war erheblich sauberer als die von Ratten, die lediglich Rauch ausgesetzt waren oder sowohl Rauch aus gesetzt als auch mit Normal- oder Kontrollmilch gefüt tert worden waren. Die Hyperimmunmilchdiät scheint die Aktivität der Lungenmakrophagen (DC) zu steigern. Die Lungenmakrophagen waren in den Bronchien, Bronchiolen und Alveolen in den Lungen von Rauch ausgesetzten und mit Hyperimmunmilch gefütterten Ratten hinsichtlich der Phagozytose weit aktiver als nach den übrigen Versuchs bedingungen. Unter den Rauch ausgesetzten Ratten zeig ten nur die mit Hyperimmunmilch gefütterten auf der Oberfläche der Alveolarzellen vom Typ 1 in den Gasaus tauschpassagen und auf den Epithelzellen der luftführen den Gänge ständig Lungenmakrophagen. Die Pseudopodien der Lungenmakrophagen (DC) phagozytierten die Produkte der Epithelzellen und andere vorhandene Zelltrümmer bzw. Fremdkörper. Die physiologische Aktivität der luftfüh renden und respiratorischen Anteile der Lunge konnten bei mit Hyperimmunmilch gefütterten Ratten selbst bei starker Sekretion und Anwesenheit von mit dem Zigaretten rauch zusammenhängenden Fremdkörpern aufrechterhalten werden.

Die Blut/Luft-Barriere war in Lungen von Ratten, die lediglich Rauch ausgesetzt waren oder außerdem noch mit Normal- oder Kontrollmilch gefüttert worden waren, stär ker als bei Rauch ausgesetzten und mit Hyperimmunmilch gefütterten Ratten. Die stärkere Blut/Luft-Barriere steht vermutlich in engem Zusammenhang mit der in Ver bindung mit dem Zigarettenrauchen häufig beobachteten Kurzatmigkeit.

Claims

1. Verwendung von hyperimmuner Milch oder daraus herge stellter Produkte, die von einer Kuh erhalten worden ist, die durch Verabreichung von Boosterinjektionen aus einem Antigen oder einem Gemisch von Antigenen im hyperimmunen Zustand gehalten wird, zur Behandlung von Erkrankungen des Pulmonalsystems bei Tier und Mensch.

2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekenn zeichnet, daß die Umweltfaktoren durch Ver brennung von Tabak entstandener Rauch sind.