CH671517A5

CH671517A5 -

Info

Publication number: CH671517A5
Application number: CH5138/84A
Authority: CH
Inventors: Ralph J Stolle; Lee R Beck
Original assignee: Stolle Res & Dev
Priority date: 1983-10-27
Filing date: 1984-10-26
Publication date: 1989-09-15
Also published as: SE8405351L; HK1006004A1; DE3439345A1; SE466532B; EP0380032A1; EP0143345A3; SE8405351D0; EP0380032B1; DE3439345C2; EP0143345A2; ATE100325T1; US4636384A; NL8403248A; ATE64530T1; EP0143345B1; DE3448494C2

Description

BESCHREIBUNG

Die vorhegende Erfindung betrifft eine hyperimmune Milch. Das normale Blutgefäss von Säugern, insbesondere Menschen, schliesst alle für den Bluttransport und die Zirkulation vorgesehenen Organe wie das Herz und die Arterien ein. Zwei Hauptkrankheiten beeinflussen das Gefässsystem in Säugern: Arteriosklerose und Altern. Die Arteriosklerose, ein generischer Ausdruck für das Verdicken und Verhärten der Arterienwand, ist für den Hauptanteil von Todesfallen in den Vereinigten Staaten und den westlichen Gesellschaften verantwortlich. Es gibt verschiedene Typen von Arteriosklerose wie Atherosklerose, fokale Verkalkung und Arteriolo-Sklerose. Die mit Arteriosklerosis (der verschiedenen Typen) und Altern verbundenen Veränderungen überlappen sich teilweise, siehe beispielsweise Harrison's «Principles of Internal Medicine», 9th Edition, pp. 156—1166.

Die normale Arterienwand besteht aus drei ziemlich gut definierten Schichten: die Intima, die Media und die Adven-titia. Die Intima ist eine Schicht von Endothel-Zellen, die die Gefässlichtung aller Arterien säumen. Die Endothel-Zellen sind mittels einer Serie von Verbindungskomplexen miteinander verbunden und auch mit einem darunter liegenden Netzwerk von losem Gewebe, dem Grundstreifen (Lamina). Die säumenden Endothel-Zellen bilden eine Barriere, die den Eintritt von Substanzen vom Blut in die Arterienwand steuert. Die Media besteht aus glatten Muskelzellen, die entweder in einfachen oder mehreren Schichten bestehen. Die äus-serste Schicht der Arterie ist die Adventitia, welche durch den äusseren elastischen Streifen begrenzt ist. Diese äusserste Schicht besteht aus einer lose verwebten Mischung von dik-ken Bündeln von Kollagen, elastischen Fibern verschiedener Grösse und einer Mischung von glatten Muskelzellen und Fibroblasten.

Die Erhaltung des Endothel-Zellen-Überzuges ist kritisch. Der Endothel-Zellen-Umsatz verläuft mit einer niedrigen Rate, doch kann diese sich in fokalen Bereichen durch die Veränderung vom Fliessverhalten entlang der Gefäss-wand beschleunigen. Intakte Endothel-Zellen bewirken die Verhinderung von Gerinnungen durch die Erzeugung von Prostacyclin, welches die Plättchenfunktion verhindert, wodurch der ungestörte Blutfluss verstärkt wird. Falls der Überzug jedoch beschädigt ist, befestigen sich Plättchen daran, teilweise infolge von Erzeugung von verschiedenen Klassen von Prostaglandinen, die Thromboxane, und bilden ein Gerinnsel. Die Fähigkeit der Arterienwand, die Integrität ihres Endothels zu erhalten, die Zusammenballung von Plättchen zu verhindern und die Ernährung ihres Mittelteiles sicher zu stellen, können die entscheidenden Determinanten des arteriosklerotischen Prozesses sein.

Die hauptsächliche Änderung, die mit dem normalen Altern in der Arterienwand vor sich geht, ist eine langsame symmetrische Erhöhung der Dicke der Intima. Dies ergibt sich aus einer Anhäufung kleiner Muskelzellen. In der nichtkranken Arterienwand erhöht sich der Fettkörpergehalt, hauptsächlich Cholesterolester und Phospholipid, ebenfalls progressiv mit dem Alter. Während es scheint, dass die hauptsächliche Menge des Phospholipids in der normalen Arterienwand von einer In-situ-Synthese stammt, scheint es, dass der Cholesterolester, der mit dem Altern anfällt als Plasma entsteht, da dieses hauptsächlich Linolsäure, das hauptsächlichste Plasma-Cholesterolester der Fettsäure, enthält. Beim normalen Altern der Arterie häufen sich glatte Muskelzellen und Verbindungsgewebe in der Intima, was zu einer progressiven Verdickung der Schicht, verbunden mit progressiver Anhäufung von Fettsäure und zu einer graduellen Erhöhung der Steifheit der Gefässe führt. Die dickeren Arterien können erweitert, verlängert und porös werden und Schlagadergeschwüre können sich in Bereichen einer hereingreifenden, degenerierenden, arteriosklerotischen Schwiele bilden.

Die überwiegende Ursache von Todesfällen in den Vereinigten Staaten ist sowohl über als unter dem Alter von 65 Jahren Atherosklerose, die atheromatöse Form der Arteriosklerose. Die Schädigungen sind im allgemeinen als Fettstreifen, faserige Schwielen und komplizierte Schädigungen klassifiziert. Die Fettstreifen sind durch eine Anhäufung von mit Fettkörpern gefüllten glatten Muskelzellen und fasrigem Gewebe in Fokalbereichen der Intima gekennzeichnet und werden unterscheidungskräftig durch fettlösliche Farbstoffe gefärbt. Die Fettsubstanz ist hauptsächlich Cholesterol-Oleat. Die fasrigen Schwielen (fibrous plaques) sind erhabene Bereiche der Intimaverdickung und weisen die charakteristischen Schäden fortschreitender Arteriosklerose auf. Sie erscheinen in der Bauchaorta, Kranzarterien und karoti-den Arterien in der dritten Dekade und wachsen progressiv mit dem Alter. Komplizierte Schädigungen sind verkalkte, fasrige Schwielen, die verschiedene Grade von Nekrose, Thrombose und Geschwür enthalten.

Eine Anzahl Faktoren, «Risikofaktoren», wurden in Personen identifiziert, die Atherosklerose entwickeln. Das Risikofaktorkonzept läuft darauf hinaus, dass eine Person mit mindestens einem Risikofaktor wahrscheinlicher ein klinisches, atherosklerotisches Ereignis bildet und dieses früher

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als eine Person mit keinem Risikofaktoren. Ferner beschleunigt die Anwesenheit von verschiedenen Risikofaktoren die Atherosklerose. Unter den reversibeln oder teilweise reversi-beln Risikofaktoren befinden sich Hyperlipidemia (Hyper-cholesterolemia und/oder Hypertriglyceridemia), Hypergly-cemia und Diabetes, niedrige Pegel von Lipoproteinen von hoher Dichte, Bluthochdruck, Obesität und Zigarettenrauchen.

Wie in Harrison's, supra (S. 1166) beschrieben ist, wurde, obwohl das Auftreten der klinischen Konsequenzen von Atherosklerose vermindert werden kann, kein überzeugender Fall von Regression oder Unterbrechung des Fortschritts von Atherosklerose durch Beseitigung oder Umkehrung irgendeines einzelnen oder einer Gruppe von Risikofaktoren in Menschen bis jetzt bewiesen. Der Trend zu weniger rauchen, niedrigerem Cholesterol- und Fettverbrauch und zu Verminderung von Übergewicht und Übungsprogrammen war behilflich. Eher Vorbeugung als Behandlung ist jedoch das Ziel von Gesundheitsbehörden. Ein effektives Programm für die Prophylaxe wurde bis jetzt nicht aufgestellt, obwohl genügend bekannt ist, wie bei der Identifizierung und beim hohen Risiko zu beraten sei und Massnahmen zur Verminderung des Risikos zu entwickeln sind.

Unter den oben erwähnten Risikofaktoren, die besonders gut für die therapeutische Behandlung geeignet sind, befindet sich Hyperlipämie. Obwohl die Kontrolle der Faktoren wie Obesität und Zigarettenverbrauch zu einem grossen Teil vom Willen und Neigung der einzelnen Person abhängt, würde, falls ein vernünftiges Verfahren zur Verminderung von beispielsweise Serumcholesterol, Fettkörper niedriger Dichte (LDL) und Triglycerid-Blutstrom-Pegel bereitgestellt würde, dieses brauchbar sein für die Behandlung eines breiten Spektrums von Personen.

Infolge der weitgefächerten Verteilung von Blutgefäss-krankheiten wie Arteriosklerosekrankheiten und das natürlich auftretende Altern des Gefässsystems und dessen begleitenden Problemen besteht ein Bedürfnis für ein effektives Verfahren, um sowohl diesen Krankheiten vorzubeugen als auch sie möglicherweise zu behandeln.

Falls ein natürliches Nahrungsmittel, beispielsweise Milch, mit anti-arteriosklerotischen und -Alterungswirkun-gen erhältlich wäre, würde es leicht verabreichbar und sofort verfügbar sowie eine sichere therapeutische Verbindung sein.

Ein anderes Hauptsystem von Säugern, insbesondere Menschen, welches durch die progressive Degenerierung von Organzellen, die dieses System konstituieren gekennzeichnet ist, ist das Lungensystem und insbesondere die Lunge und die damit verbundenen Bronchien und Lungenbläschen. Wie die Arteriosklerose und das Blutgefäss-Altern, sind gewisse Lungenkrankheiten inklusive ein allgemeines Zusammenbrechen des Lungensystems, Kurzatmigkeit und eine Verringerung des Wirkungsgrades der Atmung verbunden mit und bedingt durch Umweltreizstoffe und Verschmutzungen wie solche, die im Zigarettenrauch enthalten sind.

Es ist bekannt, dass verlängertes Rauchen die Anhäufung von Kohlenstoffablagerungen und anderen Substanzen auf und in den Lungen verursacht, die die Atmungsfunktion der angrenzenden Bereiche zerstören. Auf ähnliche Weise erhöhen das Rauchen und/oder die Anwesenheit von solchen Ablagerungen wesentlich die Anzahl von Neutrophilen und Lymphozyten, die in Säugerlungen vorhanden sind, wobei beide Typen von Zellen Substanzen erzeugen, die schädlich für das Lungengewebe sind.

Bezüglich Arteriosklerose wurde eine gewisse Eindämmung oder Linderung der mit Rauchen verbundenen Störungen durch Verminderung der Häufigkeit des Rauchens in den meisten Altersgruppen festgestellt. In gewissen Segmenten der Bevölkerung jedoch, insbesondere bei Jugendlichen und jungen Frauen, hat das Rauchen zugenommen, welches die Häufigkeit von Störungen, die mit Rauchen verbunden sind sowohl bei der jetzigen Bevölkerung als, was besonders wichtig ist, auch bei der zukünftigen Bevölkerung erhöht.

Wie bei den cardiovaskulären Krankheiten kann eine auf die Vermeidung von Verunreinigungen, wie das Rauchen, beruhende Behandlung unterschiedliche Erfolge aufweisen, die von der Einzelperson abhängen. Falls jedoch ein Verfahren zur Verminderung der Menge der Belagssubstanzen gefunden werden könnte, wie die Stimulierung der Lungenma-krofresszellenaktivität, könnte eine Behandlung, die für die meisten Personen erfolgreich sein könnte, entwickelt werden.

Wie bei der Arteriosklerose und den Blutgefässkrankhei-ten im allgemeinen, könnte, falls ein natürliches Nahrungsmittel, wie Milch zum Beispiel, mit einer heilenden Wirkung auf die Lungen, die Rauch und damit verbundenen Störungen ausgesetzt sind, erhalten werden könnte, dies eine gut zu verabreichende und sofort verfügbare sowie sichere therapeutische Verbindung sein.

Es ist vorbekannt, Milch mit verschiedenen therapeutischen Wirkungen zu erzeugen. Beck zum Beispiel hat einen Milch enthaltenden Antikörper zu Streptokokkus mutans offenbart, der Zahnkaries verhindernde Wirkungen aufweist (Beck, US-PS 4 324 782). Die Milch wurde durch Immunisieren einer Kuh mit S. mutans-Antigen in zwei Phasen erhalten. Beck hat ebenfalls eine Milch mit antiarthritischen Eigenschaften beschrieben (US-Anmeldung Nr. 875 140 vom 6. Februar 1978) und hat ferner eine Milch beschrieben und patentiert, die antiinflammatorische Eigenschaften aufweist (US-PS 4 284 623). Heimbach, US-PS 3 128 230 hat eine Milch beschrieben, die Globuline der a, ß, y-Kompo-nenten enthält, die durch Inokulieren einer Kuh mit antigenetischen Mischungen erhalten wurde. Petersen, US-PS 3 336 198 und CA-PS 578 849; Holm, US-Anmeldung Nr. 628 987 und Tunnak et al GB-PS 1 211 876 haben ebenfalls Antikörper enthaltende Milch beschrieben.

Keine dieser oben erwähnten Referenzen haben jedoch Milch mit antiarteriosklerotischer oder antialternde Gefäss-eigenschaften oder schonende Wirkungen auf Lungen, die Rauch ausgesetzt sind, beschrieben.

Es ist daher ein Ziel der vorliegenden Erfindung, eine Milch sowie Milchbestandteile enthaltende Nahrungsmittel bereitzustellen, die heilende Eigenschaften gegenüber Störungen des Blutgefäss- und Lungensystems aufweist. Ein weiteres Ziel der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Herstellung solcher Milch anzugeben. Die erfindungsgemässe Milch, die eine hyperimmune Milch ist, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ein Nahrungsmittel, das die hyperimmune Milch enthält, sind in den unabhängigen Ansprüchen 1, 6 und 11 definiert.

Die Erfindung wird im folgenden anhand von Ausführungsbeispielen näher beschrieben.

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein natürliches Nahrungsmittel (Milch), welches nützliche Eigenschaften gegenüber Blutgefäss- und Lungensystemen aufweist und auf ein Verfahren zur Herstellung desselben. Die Milch der vorliegenden Erfindung kann, da sie ein natürliches Erzeugnis ist, verwendet werden, um Blutgefässstörungen zu behandeln, die mit irgendwelchen Krankheiten oder Verwundungen verbunden sind sowie Lungenstörungen, die mit dem Rauchen verbunden sind sowie bei natürlichen Bedingungen wie Blutgefässaltern in Tieren und Menschen ohne Furcht vor Nebeneffekten.

Beispiele von Blutgefässstörungen, die mit der erfin-dungsgemässen Milch behandelt werden können, schliessen Alterungsstörungen wie Verminderung der Steifheit der Ge-fässe und eine Verminderung der Vorkommnisse, worin dik-ke Arterien vergrössert und verlängert werden sowie eine

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Verminderung von Schlagadergeschwulsten, die in Bereichen von sich festsetzenden arteriosklerotischen Schwielen entstehen. Andere alterungsbedingte vaskuläre Schäden, die mit der erfindungsgemässen Milch verhindert oder geheilt werden können, sind die Erhöhung der Dicke der Arterieninti-ma, die Umkehr der stufenweisen Anhäufung von glatten Muskelzellen sowie eine Verminderung in der Anhäufung des Fettkörpergehalts in der Arterienwand.

Unter den anormalen (nicht-altersbedingten) Störungen des vaskulären Systems, welche verhütbar oder umkehrbar mit Milch behandelbar sind, befindet sich Arteriosklerose, die sowohl die atheromatöse als auch die nicht-atheromatöse Form einschliesst. Unter den nicht-atheromatösen Formen der Arteriosklerose, die mit der erfindungsgemässen Milch behandelbar sind, befindet sich die fokale Verkalkung (auch Monkeberg's Sklerose genannt), die in den unteren Extremitäten, oberen Extremitäten und der arteriellen Versorgung des Genitaltrakts in beiden Geschlechtern verbreitet ist. Eine andere Störung ist die fokale Verkalkung, die die Degenerierung von glatten Muskelzellen gefolgt durch Kalkablagerung bewirkt. Eine andere nicht-atheromatöse Form der Arteriosklerose ist Arteriolosklerose, die Hyalin und allgemeine Wechsel nach sich zieht, die sowohl die Intima als auch die Media von kleinen Arterien und Arteriolen angreift, insbesondere in der Milz, Bauchspeicheldrüse, Nebennieren und Nieren.

Es ist hervorzuheben, dass die Milch der vorliegenden Erfindung für die Behandlung von Atherosklerose verwendet werden kann. Dies schliesst sowohl die Verhinderung als auch die Regression der Bildung von Fettstreifen, fasrigen Schwielen und komplizierten Verletzungen, wie vorgehend beschrieben, ein. Obwohl es wahrscheinlich ist, dass die irreversiblen Risikofaktoren für die Atherosklerose, wie das männliche Geschlecht oder genetische Merkmale (beispielsweise positive Familiengeschichte von frühreifer Atherosklerose) nicht durch die erfindungsgemässe Milch umgekehrt werden kann, können es die sogenannten reversiblen Faktoren werden.

Auf diese Weise ist die erfindungsgemässe Milch hilfreich bei der Verminderung der Anhäufung von Fettkörpern und Verhinderung oder Umkehrung der Hypercholesterolämie oder Hypertriglyceridämie. Verschiedene Formen der Atherosklerose können behandelt werden.

Überdies kann die erfindungsgemässe Milch benutzt werden, um schädliche Wirkungen des Rauchens auf das Lungengewebe rückgängig zu machen oder mindestens dieses und benachbartes Gewebe von den schädlichen Wirkungen und Störungen, die mit dem Rauchen verbunden sind, auszusparen, eingeschlossen eine Verminderung der Anzahl von Makrofresszellen und eine Verminderung ihrer Aktivität oder Phagocytose, Erhöhung der Anzahl der Neutrophilen und Lymphozyten im Lungengewebe und die schädliche Sekretion davon und eine Erhöhung der Dicke der Blut-Luftbarriere und möglicherweise damit verbundene Kurzatmigkeit.

Im Verfahren dieser Erfindung umfasst die Bezeichnung Horntier (bovid) alle Milch produzierende Mitglieder des Genus Bos, vorzugsweise Kühe.

Die Erfindung beruht auf der Entdeckung, dass, falls ein Horntier mittels periodischer Zusatzverabreichungen (booster administrations) eines Antigens oder einer Mischung von Antigenen in einen spezifischen Zustand der Immunisierung gebracht wird, dieses Tier Milch produzieren wird, das sehr nützliche Eigenschaften für die Behandlung von vaskulären Störungen aufweist. Die nützlichen Milcheigenschaften werden nicht durch alle Horntiere erzeugt, die immunisiert werden. Die Herbeiführung von immuner Sensibilisierung alleine ist ungenügend, um die Eigenschaften in der Milch erscheinen zu lassen, welches dadurch gezeigt werden kann, dass die normale Kuhmilch nicht diese Eigenschaften enthält, obwohl die Kühe während der normalen Immunisierung gegen Kuh-Krankheiten gegenüber verschiedenen Antigenen sensibilisiert worden sind.

Ausserdem sind diese Eigenschaften nicht immer in der Milch von Tieren anwesend, die mittels Zusatzinjektionen in einem immunen Zustand gehalten werden. Es ist nur in einem spezifischen hyperimmunen Zustand, dass die Milch die gewünschte Wirkung entfaltet. Dieser spezielle Zustand wird nur dadurch erreicht, dass periodisch Zusätze mit genügend hohen Dosen von Antigenen oder Mischungen von Antigenen verabreicht werden. Der bevorzugte Dosisbereich sollte gleich oder grösser sein als 50% der Dosis die notwendig ist, eine primäre Sensibilisierung des Tieres zu erzeugen. Demzufolge gibt es eine Zusatzdosisschwelle, unter welcher die Eigenschaften in der Milch nicht erzeugt werden, selbst wenn sich die Kuh in einem normalerweise immunen Zustand befindet. Um den hyperimmunen Zustand zu erreichen ist es notwendig, die Milch nach einer ersten Serie von Zusatzverabreichungen zu untersuchen. Falls die Milch nicht die gewünschten Eigenschaften aufweist, muss eine zweite Serie von Zusätzen mit höherer Dosis verabreicht werden. Dieses Verfahren wird wiederholt, bis die Eigenschaften in der Milch erscheinen.

Zusammenfassend enthält das Verfahren folgende Schritte:

1. Antigenauswahl.

2. Sensibilisierung des Horntiers durch primäre Immunisierung.

3. Untersuchung des Serums des Tieres, um die Sensibili-sierungsüberführung zu bestätigen.

4. Verabreichung von Zusätzen in angemessener Dosis, um einen hyperimmunen Zustand zu erreichen und aufrecht zu erhalten.

5. Untersuchung der antialterungs- und antiarteriosklerotischen Eigenschaften der Milch.

6. Gewinnung der Milch vom Tier während dem hyperimmunen Zustand.

Schritt 1

Irgendwelche Antigene oder Verbindungen von Antigenen können verwendet werden. Die Antigene können bakteriell, viral, zellulär oder irgend andere Substanzen, auf die das Tier anspricht, sein. Der kritische Punkt in Schritt 1 ist, dass das Antigen fähig sein muss, einen Zustand der immunen Sensibilisierung im Tier hervorzurufen. Das Antigen kann durch irgendein Verfahren verabreicht werden, welches Sensibilisierung verursacht. Vorzugsweise werden polyvalente Antigene, wie Bakterien, verwendet.

Schritt 2

Das bevorzugte Verfahren der Immunisierung ist durch intramuskuläre Injektion. Jedoch können auch andere Verfahren, wie die intravenöse Injektion, intraperitoneale Injektion, orale Verabreichung, rektale Suppositorien, usw. verwendet werden, vorausgesetzt, dass die Dosis genügend gross ist, um Sensibilisierung herbeizuführen. Die Dosis ist normalerweise 1 x 106 Zellen bis 1 x IO20 Zellen, vorzugsweise 108 Zellen bis IO10 Zellen, insbesondere 2 x 108 Zellen.

Schritt 3

dient der Bestimmung, ob die Kuh durch das Antigen sensibilisiert worden ist oder nicht. Es existieren eine Anzahl dem Fachmann bekannte Verfahren, um die Sensibilisierung zu untersuchen (Methods in Immunology and Immuno Chemi-stry, William, C. A„ Chase, W.M. Academic Press, N.Y., London (vols 1 — 5) (1977)). Beispiele davon beinhalten

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Hautsensibilisierungsuntersuchungen, Serumuntersuchungen für die Anwesenheit von Antikörpern zu den stimulierenden Antigenen und Untersuchungen, um die Fähigkeit der immunen Zellen des Gastes auf die Antigene zu antworten zu bestimmen. Das Testverfahren hängt in grossem Masse von der Natur des benutzten Antigens ab. Das bevorzugte Verfahren ist die Anwendung eines polyvalenten Impfstoffes, bestehend aus vielfach bakteriellen Arten als Antigen und die Suche nach der Anwesenheit von zusammenklebenden Antikörpern im Serum der Kuh vor und nach dem Zu-sammenstoss mit dem Impfstoff. Das Erscheinen von Milchantikörpern nach der Immunisierung mit dem Impfstoff ist ein Hinweis für die Sensibilisierung, und bei diesem Punkt ist es möglich, auf Schritt 4 überzugehen. Die minimale Anti-gendosis, die nötig ist, um die Sensibilisierung einzuleiten, hängt vom benutzten Antigentyp ab.

Schritt 4

beinhaltet die Überführung und Aufrechterhaltung des hyperimmunen Zustandes. Sobald erkannt wird, dass das Tier sensibilisiert ist, wird der hyperimmune Zustand durch wiederholte Zusatzverabreichung einer angemessenen Dosis bei bestimmten Zeitintervallen erzeugt. Die Zeitspanne zwischen den Verabreichungen hängt von der Natur des Antigens ab. Ein Zwei-Wochen-Zusatz-Intervall ist optimal für polyvalente bakterielle Antigene. Überdies dürfen die Zusatzverabreichungen nicht einen Zustand von Immuntoleranz erzeugen. Dies würde bewirken, dass das Tier vom hyperimmunen Zustand in einen Zustand der Immuntoleranz zum Antigen übergeht, wodurch das Tier keine Milch mit den nützlichen Eigenschaften mehr produzieren wird.

Es ist beispielsweise auch möglich, eine Kombination von verschiedenen Immunisierungsverfahren, beispielsweise intramuskuläre Injektion für primäre Immunisierung und intravenöse Injektion für Zusatzinjektionen, usw., zu verwenden. Viele verschiedene Kombinationen von Immunisierungsverfahren können durch den Fachmann ebenfalls bezüglich (1) Sensibilisieren und (2) Induzieren des hyperimmunen Zustands angewendet werden.

Schritt 5

ist vorgesehen, um die Heileigenschaften der Milch gegenüber Blutgefäss- und/oder Lungenstörungen zu untersuchen. Eine Vielfalt von Forschungstechniken können angewandt werden, um die Wirkungen der hyperimmunen Milch auf das Gefass- und Lungensystem von, Menschen und Tieren zu untersuchen. Vorzugsweise kann Gewebe von Kaninchen oder Ratten als Testgewebe benutzt werden. Diese Tests beinhalten in allen Fällen das Füttern von Kaninchen oder Ratten mit einer Diät, die hyperimmune Milch enthält sowie eine Kontrolle mit Tieren mit Diät mit normaler Milch.

Nach einer vorbestimmten Dauer wird das Blutgefäss oder Lungensystem dieser Tiere durch eine der folgenden Techniken untersucht: Rasterelektronenmikroskopie der endocar-dialen Oberfläche des Herzes oder Lungenbronchien und Lungenbläschen auf der Suche nach Endothelschäden oder der Anwesenheit von Trümmern; Durchsichtelektronenmikroskopie von Blutgefässen zum Nachweis von Fettkörpertröpfchen, Endotheldegeneration, Fettkörperanwesenheit in Schaumzellen oder die Tendenz von Fibrin oder Plättchen, an die Lumenoberfläche von Endothelzellen zu kleben, d.h., die Anzeige von Fettkörpern mit öllöslichen Farbstoffen, wie Öl Rot oder Sudan Schwarz in Schnitten von gefrorenem Gewebe, oder der Anwesenheit von Enzymen, insbesondere Cytochromoxidase oder von Lungengewebe für den Nachweis von Phagocytose sowie eine histologische Untersuchung von Lungengewebe bezüglich Neutrophil- und Leukozyteninfiltration.

Schritt 6

beinhaltet das Gewinnen und die Verarbeitung der Milch. Die Milch kann durch herkömmliche Methoden gewonnen werden, doch ist eine spezielle Verarbeitung nötig, um die nützlichen Eigenschaften der Milch zu schützen, die hitzeempfindlich sind. Demnach ist eine Niedertemperatur-pasteurisation bevorzugt. Die Pasteurisierungstemperatur sollte nicht 71 °C für 15 Sekunden übersteigen. Nach dem Pasteurisieren wird das Fett durch Standardverfahren entfernt und die Milch wird spritzgetrocknet. Herkömmliche Spritztrockenverfahren werden verwendet, mit der Ausnahme, dass die Milch bei niedriger Temperatur unter Vakuum konzentriert wird, um nicht die nützlichen Eigenschaften zu zerstören, siehe Kosikowski, F., «Cheese and Fermented Milk Products,» 2d Ed, 1977). Das Endprodukt ist ein Milchpulver mit nützlichen Eigenschaften.

Flüssige Milch kann genau so gut wie konzentrierte Milchprodukte verwendet werden oder eine Milchfraktion, die die biologischen aktiven Faktoren oder Faktoren, wie die Saure Molke Fraktion (acid whey fraction).

Die Erfindung beruht zum Teil auf der Entdeckung, dass die Milch von einem hyperimmunen Tier nützliche Eigenschaften für das cardiovaskuläre System aufweist. Beispielsweise wurde entdeckt, dass in Herzen von weiblichen Kaninchen, die eine kontinuierliche Diät von hyperimmuner Milch erhielten, die Endothelzellen des Herzes gegen extensive Endothelschäden verschiedenen Ausmasses geschützt waren im Gegensatz zu Kaninchen, die mit normaler Milch gefüttert wurden. In den letzteren Kaninchen waren Krater oder Löcher gegenwärtig, wo eine oder mehrere Zellen degeneriert und gelöst war, während in den mit hyperimmuner Milch gefütterten Kaninchen diese nicht vorhanden war. Durchsichtelektronenmikroskopische Aufnahmen beider Arten von Kaninchen zeigten grosse Unterschiede in den Blutgefässen. Signifikante pathologische Merkmale von Blutgefässen in Kontrollherzen umfassten grosse Fettkörpertröpfchen, en-dothele Degenerierung, vielfache kleine Fettkörpervacuolen, einfache oder vielfache grosse, das Zytoplasma von Endothelzellen füllende, Fettkörpertröpfchen, mit Fettkörpern latente Schaumzellen und eine starke Tendenz von Fibrin-plättchen, an die luminale Oberfläche von Endothelzellen zu kleben. Alle diese zitierten Störungen begleiten die Pathogenese der Atherosklerose. Diese Störungen wurden nicht in Blutgefässen von repräsentativen Bereichen von Kaninchenpopulationen gefunden, die kontinuierlich eine Diät von hyperimmuner Milch erhielten. Histologische Schnitte von Herzen von den mit hyperimmuner Milch gefütterten und von den mit Kontrollmilch gefütterten Kaninchen zeigten, dass Fettkörper in der Lumina von einigen Blutkörpern der Kontrollherzen vorhanden waren, und dass Herzmuskelfasern der Kontrollherzen mit Fettkörpern gefüllt waren. Kranzarterienblutgefässe von mit hyperimmuner Milch gefütterten Kaninchen wiesen keine atherosklerotische Fettkörperbeläge auf, die in den Kontrollgefässen gefunden wurden.

Diese Ergebnisse zeigen schlüssig, dass hyperimmune Milch die Pathogenese der Arteriosklerose und das Altern des Herzes verlangsamen und/oder zurückdrängen.

Die gleichen Tests von Kaninchenpopulationen sowie klinische Versuche mit Menschen ergaben schlüssig, dass Diät mit hyperimmuner Milch gemäss dieser Erfindung eine Verminderung der Serumcholesterolpegel sowie eine bezeichnende Verminderung der Triglyceridpegel und der Fettkörperpegel niedriger Dichte ergibt, wobei all diese Schlüsselrisikofaktoren, mit cardiovaskulären Krankheiten verbunden sind.

Die Erfindung beruht auch zum Teil darauf erkannt zu haben, dass die Milch von einem hyperimmunen Tier nützli-

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che Eigenschaften gegenüber dem Lungensystem, das Rauch ausgesetzt ist, aufweist, insbesondere eine mässigende Wirkung auf das Lungengewebe davon. Es wurde zum Beispiel entdeckt, dass in den Lungen von Ratten, die eine kontinuierliche Diät von hyperimmuner Milch erhielten und Zigarettenrauch ausgesetzt waren, die Anzahl von Neutrophilen und Lymphozyten, die die Lungen beim Rauchen infiltrieren, wesentlich vermindert war im Vergleich zu Kontrollgruppen. Ausserdem ist die Oberfläche der Alveolen «reiner» bei mit hyperimmuner Milch gefütterten und Rauch ausgesetzten Ratten als nur Rauch ausgesetzten Ratten oder Rauch ausgesetzten und normale Milch erhaltenden Ratten. Die hyperimmune Milch scheint die Aktivität der Staubzellen oder Lungenmakrofresszellen zu erhöhen. Die Staubzellen in den Bronchiolen und Alveolen von mit hyperimmuner Milchdiät gefütterten und Rauch ausgesetzten Ratten waren aktiver in der Phagozytose von mit Rauch verbundenen Trümmern in Lungen als bei Ratten, die nur Rauch ausgesetzt waren oder Rauch ausgesetzt waren und eine nicht hyperimmune Milchdiät erhielten. Es wurde auch gefunden, dass die Blut-Luftbarriere in Rauch ausgesetzten und mit hyperimmuner Milch gefütterten Ratten dünner war als in Rauch ausgesetzten oder Rauch ausgesetzten und normale oder kontrollierte Milch erhaltenden Ratten. Zusätzlich zum cardiovaskulären Gewebe wurden vom gleichen Tier 16 andere Gewebe, die eine oder mehrere Komponenten jedes Hauptorgansystems repräsentieren untersucht. Hyperimmune Milch hat keine gegenteilige Wirkung auf irgendeines dieser Gewebe. Die erfindungsgemässe Milch kann in irgendeiner Menge, die den Rückgang der vaskulären Störungen oder mit Rauch verbundenen Lungenstörungen in Warm-blütlern bewirkt oder aufrecht erhält, vorgesehen werden. Tägliche Mengen von 1 Milliliter bis 10 Liter, bezogen auf flüssige Milch, kann genommen werden, in Abhängigkeit von den spezifischen Umständen der Störung und vom Empfänger. Die gleiche Menge kann verwendet werden, falls das Mittel als vorsorgliches Mittel verwendet wird.

In einer bevorzugten Art wird die Milch periodisch, beispielsweise täglich, in Dosierungen von ungefähr 40 Gramm über einen verlängerten Zeitraum, wie mindestens 15—30 Tagen oder mehr oder bis zu einigen Jahren verabreicht. Es ist auch möglich, die Behandlungsdauer durch Erhöhung der täglichen Dosis zu verkürzen. Ausserdem kann eine Streuung von kleineren Dosierungen über den ganzen Tag wirkungsvoller sein als eine einzige Dosis, die einmal am Tag genommen wird.

Die fettfreie Milch kann zu irgendeinem Nahrungsmittel hinzugefügt werden, solange dieses Nahrungsmittel nicht bei einer Temperatur behandelt wird, die zu hoch ist und die nützlichen Eigenschaften des Produkts vernichten würden. Eine Temperatur, die unter 150 °C liegt, ist vorzuziehen. Beispielsweise können Puddings oder Joghurts mit hyperimmuner Milch zubereitet werden.

Ausserdem wurde gefunden, dass die Molke-Fraktion den oder die Wirkstoffe enthält, die für die beobachteten und weiter oben beschriebenen nützlichen Eigenschaften verantwortlich sind. Diese Saure-Molke-Fraktion kann auch Sirups, Eiscrèmemischungen, Süssigkeiten, Getränken, Tiernahrung und dergleichen beigefügt werden (siehe Kosi-kowski, Supra, S. 446). Ein Fachmann, der weiss, dass die Molke-Fraktion die wichtigen Faktoren enthält, kann klar erkennen, dass weitere Trennungen und Abscheidungen gemacht werden können, um wirkungsvollere Fraktionen zu erhalten. Ausserdem kann für die Verminderung der Störungen die mit Rauchen verbunden sind, die Milch den zum Rauchen bestimmten Substanzen beigefügt werden, beispielsweise durch Besprühen des Tabaks mit einer Aerosolform der Milch.

Die Erfindung wird nun im einzelnen anhand von Beispielen beschrieben werden.

Herstellung von Milch Beispiel 1:

Fünf Holstein Kühe wurden gegen Escherichia Coli (American Type Culture Stamm Nr. 13 076) immunisiert. Die primäre Immunisierung wurde durch intramuskuläre Injektion einer Vakzine, welche in physiologischer Kochsalzlösung suspendierte, durch Hitze getötete E. coli-Zellen enthielt, durchgeführt. Die Zellkonzentration betrug 4 x 108 /ml. In vier aufeinanderfolgenden Wochen wurde wöchentlich einmal eine Dosis von 5 ml (20 x 108 Zellen) i.m. injiziert. Die während der fünften Woche gesammelte Milch wurde auf die Anwesenheit von Antikörpern gegen E. coli getestet. Die Gegenwart von Antikörpern gegen E. coli wurde unter Verwendung eines Mikro-Agglutinations-Verfahrens bestimmt. Dieses Verfahren beinhaltet die Reaktion von verschiedenen Verdünnungen der Molke mit einer feststehenden Konzentration von in einem Puffer suspendierten E. coli-Zellen. Die Anwesenheit von Antikörpern in der Milch bewirkte eine Agglutination der Bakterienzellen. Die Verdünnung der Milch wurde in einer Serie durchgeführt; dadurch kommt einmal der Punkt, wo die Konzentration der Antikörper zu klein ist, um noch eine Agglutination hervorzurufen. Die maximale Verdünnung, bei welcher noch eine Agglutination bewirkt wird, ist der Antikörper-Titer. Die Anwesenheit einer hohen Antikörperkonzentration in der Milch ist ein Anzeichen dafür, dass der Immunisierungs-prozess das Immunsystem der Kuh gegen das Antigen sensibilisiert hat. Die Tabelle 1 vergleicht die Antikörper-Titer gegen E. coli der fünf Kühe vor und nach der primären Immunisierung.

Tabelle 1

Milch Antikörper Titer bei 5 Kühen vor und nach Immunisierung gegen E.coli

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In jedem Fall war nach der Immunisierung ein signifikanter Anstieg des Milch-Titers gegen E. coli bemerkbar. Daraus wurde gefolgert, dass die Immunisierung eine Sensibilisierung der Kühe gegen E. coli bewirkte. Nachdem man so einen sensitiven Zustand induziert hatte, wurden den Kühen alle 14 Tage verstärkte Injektionen der gleichen Antigen-dosis verabreicht, um so einen hyperimmunen Zustand zu erreichen und aufrechtzuerhalten; während dieser Zeit wurde die Milch täglich gesammelt und verarbeitet, um entrahmte, pulverisierte Milch zu gewinnen.

Die durch die oben hervorgehobene Methode induzierte, entrahmte und pulverisierte Milch wurde unter Verwendung einer Anzahl von Tests (siehe unten) bezüglich der nützlichen Eigenschaften geprüft.

Beispiel 2:

Das gleiche Experiment wie unter Beispiel 1 beschrieben wurde durchgeführt mit der Ausnahme, dass eine polyvalente Vakzine verwendet wurde, welche als ausgewähltes Antigen die in der untenstehenden Tabelle 2 aufgeführten Bakterienstämme enthielt. Die verschiedenen Bakterienstämme wurden durch Mischen der gleichen Gewichtsmengen von

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gefriergetrockneten Bakterienzellen vereinigt, und um die gleiche Konzentration wie in Beispiel 1 zu erhalten, wurde die Mischung mit physiologischer Kochsalzlösung verdünnt. Die Testresultate der durch Verwendung dieser ausgewählten Antigene hergestellten Milch waren positiv (unten).

Tabelle 2 Bakterielle Antigene

Organismus

ATTC No.

Staphylococcus aureus

11,631

Staphylococcus epidermidis

155

Streptococcus pyogenes, A. Typ 1

8,671

Streptococcus pyogenes, A. Typ 3

10,389

Streptococcus pyogenes, A. Typ 5

12,347

Streptococcus pyogenes, A. Typ 8

12,389

Streptococcus pyogenes, A. Typ 12

11,434

Streptococcus pyogenes, A. Typ 14

12,972

Streptococcus pyogenes, A. Typ 18

12,357

Streptococcus pyogenes, A. Typ 22

10,403

Aerobacter aerogenes

884

Escherichia coli

26

Salmonella enteritidis

13,076

Pseudomonas aeruginosa

7,700

Klebsiella pneumoniae

9,590

Salmonella typhimurium

13,311

Haemophilus influenzae

9,333

Streptococcus viridans

6,249

Proteus vulgaris

13,315

Shigella dysenteriae

11,835

Streptococcus, Gruppe B Diplococcus pneumoniae Streptococcus mutans Corynebacterium, Acne, Type 1 und 2

* American Type Culture Collection 12301 Parklawn Drive Rockville, Maryland 20852

An dieser Stelle sollte erwähnt werden, dass die in diesem Beispiel hergestellte Milch identisch ist zu derjenigen, welche gemäss der am 6. Februar 1978 durch Beck eingereichten, noch hängigen US-Patentanmeldung S.N. 875 140 und gemäss U.S. Patent 4 284 623 hergestellt wurde. In der Patentanmeldung wird offenbart, dass die Milch des vorliegenden Beispiels auch hohe anti-arthritische, und im Patent wird offenbart, dass die Milch entzündungshemmende Eigenschaften hat.

Beispiel 3:

Ein Stamm von Streptococcus mutans wurde in Übereinstimmung mit bekannten Techniken gezüchtet. Kulturen von S. mutans AHT (serologisch a), BHT (Gruppe b), 10 449 (Gruppe c) und 6715 (Gruppe d) wurden in dialysier-tem Tryptosemedium gezüchtet. Die Zellen wurden durch Zentrifugation bei 400 x G gesammelt und fünfmal mit 0.1 m phosphatgepufferter Kochsalzlösung, pH 7.0, gewaschen. Die Zellen wurden durch Erhitzen während 30 Min. auf 60 CC inaktiviert und erneut zu einer endgültigen Konzentration von 5 x 108 Zellen/ml an S. mutans AHT, BHT, 10 449 und 6715 suspendiert. Dieses Präparat wurde zur Immunisierung von zwei Kühen verwendet. Jede Kuh wurde bei zwei verschiedenen Gelegenheiten mit frischem Antigen aller vier Gruppen von S. mutans (Gruppe a, b, c, d) immunisiert. Eine Kuh wurde dann in Übereinstimmung mit der in dieser Erfindung eingeführten Technik immunisiert, um ein Milchprodukt zu erzeugen. Während der Immunisierung wurden der Kuh Blutproben entnommen, bis der Serum-Antikörper-Titer seinen höchsten Wert erreicht hat; dann wurde die Milch gesammelt. Die Milch selber wurde dann, erneut in Übereinstimmung mit der eingeführten Technik, s getrocknet und pulverisiert, um so Milchpulver mit den nützlichen Effekten zu erhalten.

Es sollte erwähnt werden, dass die in diesem Beispiel hergestellte Milch identisch ist zu der von Beck in B.P.

1 505 513 offenbarten kariesverhütenden Milch.

10

Beispiel 4:

Die in der untenstehenden Tabelle 3 aufgeführte polyvalente Vakzine wurde wie in Beispiel 2 zur Immunisierung einer Kuh verwendet, um eine hyperimmune Milch mit kar-15 diovaskulären und pulmonären Effekten zu erhalten.

Tabelle 3

20

Bacteria

ATTC No.

1.

Pseudomonas aeruginosa

14212

2.

Pseudomonas maltophiia

17666

3.

Streptococcus equisimili

9542

4.

Streptococcus dysgalactiae

27957

25

5.

Streptococcus uberis

27958

6.

Streptococcus bovis

15351

7.

Streptococcus bovis

27960

8.

Pasteurella multocida

9659

9.

Pasteurella multocida

6533

30

10.

Pasteurella haemolytica

14003

11.

Pasteurella multocida

15743

12.

Moraxella bovis

10900

13.

Actinobacillus lignieresi

13372

14.

Corynebacterium renale

10848

35

15.

Fusobacterium necrophorum

25286

16.

Bacillus cereus

25621

17.

Salmonella dublin

15480

18.

Salmonella heidleberg

8326

19.

Salmonella paratyphi

11511

40

20.

Yersinia enterocolitica

9610

Biologische Untersuchungen A. Kardiovaskuläre Effekte

45 Material und Methoden

1. Tiere

Neun junge erwachsene weibliche weisse Neuseeland Kaninchen wurden für diese Untersuchung verwendet. Die Kaninchen waren im Vivarium des College of Medicine an der so Universität von Alabama in Mobile untergebracht. Der Raum, in welchem die Kaninchen gehalten wurden, wurde bei 22 °C gehalten bei einem hell/dunkel Rhythmus von 12 Stunden. Pro Käfig war nur ein Kaninchen untergebracht. Die Kaninchen wurden mit der unten aufgeführten speziel-55 len Diät gefüttert und während der zweiten und dritten Woche nach Abbruch der Diät getötet.

2. Diät

Die Kaninchen wurden in zwei Gruppen geteilt. Beide so Gruppen erhielten eine ausgewogene Laborernährung ad libitum. Die Kontrolle in Gruppe I (N = 4) erhielt in Leitungswasser gelöste Jerrell's magere Trockenmilch (15 g Trockenmilch/500 ml Wasser). Die zu untersuchenden Kaninchen der Gruppe II (N = 5) erhielten entweder die in Bei-65 spiel 1, 2, 3 oder 4 erhaltene hyperimmune Trockenmilch, welche zur gleichen Konzentration in Leitungswasser gelöst wurde. Die Wasser/Milch-Mischung wurde täglich gewechselt. Die frische Milch wurde in sterilisierte Glas- oder Pia-

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8

stikflaschen gefüllt. Die Kaninchen erhielten ausser dem Wasser, welches zum Lösen der Trockenmilch verwendet wurde, keine andere Flüssigkeit.

3. Untersuchungsmethode Nachdem die Kaninchen während dreier Monate die gelöste magere Trockenmilch (Gruppe I), resp. die hyperimmune Milch (Gruppe II) getrunken hatten, wurden sie gewogen und durch Injektion von Natriumpentabarbital in die Ohrvene anästhesiert. Das Körpergewicht eines jeden Kaninchens zur Zeit des Todes wurde verglichen mit demjenigen des ersten Diättages. Es wurde kein signifikanter Unterschied zu den Kontrolltieren festgestellt. Herz und die grossen Gefässe an der Herzbasis wurden entfernt und für verschiedene Untersuchungen präpariert. Mit einer Codierung der Präparate wurde sichergestellt, dass der Untersuchende zwischen Kontrolle und Experiment unterscheiden konnte.

Resultate und Bemerkungen 1. Raster-Elektronen-Mikroskopie Für REM wurde die innere (endokardiale) Oberfläche der Herzes bei verschiedenen Vergrösserungen (10 — 40 000 x ) abgetastet. Gebiete von speziellem Interesse (min. 5 zufallig ausgewählte Bereiche pro Herz) wurden geprüft und photografiert.

Im Unterschied zu den in Untersuchung stehenden Herzen zeigten diejenigen der Kontrolle Schäden des Endothels in unterschiedlichem Ausmass. Dort wo eine oder mehrere Zellen degeneriert oder losgelöst waren, waren Krater oder Löcher vorhanden. Kleinere Löcher waren in mehreren Zellen vorhanden. In einigen Beispielen war eine mit Blutzellen und Plättchen vermischte fibrinähnliche Substanz in und um die Krater. Solche Orte wurden als Etappe in der Bildung von atheromalen Thromben erklärt.

Der offensichtliche Verlust von Endothelzellen in den Herzen der Kontrolle führt zum Kontakt des Blutes in den Herzkammern mit dem endokardialen Bindegewebe und somit zur Thrombenbildung. REM zeigte, dass hyperimmune Milch beim Kaninchen die Endothelzellen schützt und das Entstehen von Thromben verhindert.

2. T ransmissions-Elektronen-Mikroskopie TEM zeigte grössere Unterschiede zwischen den Blutgefässen der Kontroll- und der in Prüfung stehenden Herzen. Signifikante pathologische Merkmale der Blutgefässe der Kontrolle: (1) grosse Fetttröpfchen, welche in einigen Fällen das Gefässlumen verschlossen; (2) Degenerierung des Endothels; (3) multiple kleine Fettvakuolen in den Endothelzellen; (4) einfache oder multiple grosse Fetttröpfchen, welche das Zytoplasma der Endothelzellen beinahe füllten; (5) aufgeschäumte mit Fett beladene Zellen; (6) starke Tendenz des Haftens von Fibrin und Plättchen an der inneren Oberfläche von Endothelzellen.

Alle obenerwähnten Unregelmässigkeiten sind Begleiterscheinungen im Krankheitsbild der Atherosklerose. Es ist bekannt, dass besonders die Koronar-, die Zerebral-, sowie die renalen Arterien für Atherosklerose empfänglich sind. Es sind eher focale Schwierigkeiten der Blutgefässe als Schwierigkeiten über die ganze Länge derselben. Bei den Kaninchen, welche immune Milch getrunken hatten, wurde dieses krankhafte Erscheinungsbild in den Blutgefässen der bestimmten Herzregionen nicht gefunden.

3. Histologie

Herzteile aller Kontrollkaninchen wurden aufgeteilt; 1 Teil wurde in Paraffin und 1 Teil in Plastik gelagert. Teile der Plastikprobe auf eine Dicke von 1 Mikrometer geschnitten und mit Toluidinblau oder Paragon gefärbt zeigten zwei

Unterschiede zwischen den Kontrollherzen und denjenigen des Experimentes: (1) im Lumen einiger Blutgefässe der Kontrolle war Fett vorhanden und (2) einige kardiale Muskelfasern der Kontrolle waren mit Fett gefüllt. Die Herzen von Kaninchen, welche immune Milch getrunken hatten, zeigten dieses Erscheinungsbild nicht.

4. Darstellung von Fetten Fette wurden durch zwei Standardmethoden, Oil Red O und Sudan Black B, lokalisiert. Beide Methoden zeigen selektiv Fette in Teilen von gefrorenem Gewebe an.

Beide Methoden zeigten Fettablagerungen in der tunica intima und der tunica media der Blutgefässe der Kontrollherzen. Diese beiden tunicas der Aorta der Kontrolle waren schwerwiegend mit Fett infiltriert. Die tunicas intimas der Blutgefässe der Kontrollkaninchen enthielten Verdickungen in Verbindung mit Fett, was für die Atherosklerose typisch ist. Bei Koronargefässen von Kaninchen, welche unter hyperimmuner Milch gestanden hatten, fehlten diese athero-skleralen Ablagerungen.

5. Enzyme

Die folgenden Enzymaktivitäten wurden in gefrorenen Sektionen von Herzen der Kontrolle und des Experimentes bestimmt und untersucht: (1) saure Phosphatase, (2) basische Phosphatase, (3) Isocitronensäure Dehydrogenase, (4) Bernsteinsäure Dehydrogenase, und (5) Zytochrom Oxidase. Die Aktivität der sauren Phosphatase wurde auch biochemisch bestimmt.

Von den Enzymen, bei welchen die Aktivität bestimmt wurde, zeigte nur die Zytochrom Oxidase (ein Enzym, das mit der Alterung in Verbindung steht) eine signifikant erhöhte Aktivität bei den Kontrollen im Vergleich zu den Versuchsherzen. Es ist bemerkenswert, dass die Kontrollherzen stellenweise kardiale Muskelfasern von 1 mm Durchmesser enthielten, welche intensiv gefärbt waren. Solche Orte waren offensichtlich reich an Mitochondrien und könnten gealterte Stellen repräsentieren.

6. Blutspiegel Eine Analyse des Serum-Cholesterin-Spiegels bei den Kaninchen dieser Untersuchungen zeigten eine markante Abnahme desselben. Die Kontrolltiere, welche eine Diät ohne hyperimmuner Milch erhielten, zeigten einen durchschnittlichen Serum-Cholesterin-Spiegel von 4,450 mg/dl. Im Gegensatz dazu zeigten die Kaninchen, welche eine Diät mit hyperimmuner Milch erhielten, einen durchschnittlichen Serum-Cholesterin-Spiegel von weniger als der Hälfte der obigen Zahl, nämlich 2,167 mg/dl. Man glaubt, dass dies der Mechanismus ist, wodurch die oben zur Diskussion gestandenen physiologischen Verbesserungen bewirkt wurden.

7. Klinische Untersuchungen Klinische Studien wurden jetzt bei drei Personen begonnen, um den Wert der hyperimmunen Milch dieser Erfindung in Bezug auf eine Reduktion des Plasma-Fettgehaltes zu bestimmen. Obwohl die Untersuchungen noch nicht beendet sind, zeigen sie deutlich den Wert der hyperimmunen Milch-Diät bezüglich der Reduktion des Lipidwertes. Obwohl aus ersichtlichen Gründen keine Kontrollen durchgeführt wurden, reduzierten sich die anfänglichen Lipidwerte bei allen drei Personen deutlich. Die exakten Lipidwerte sind in Tabelle 4 wiedergegeben.

B. Pulmonaere Effekte Untersuchungen von pulmonären Effekten wurden in ähnlicher Weise wie oben mit Bezug auf die kardiovaskulären Effekte an Ratten durchgeführt, um die Wirkung einer

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Diät mit hyperimmuner Milch an Zigarettenrauch ausgesetzten Säugetieren zu bestimmen. Die Ernährung und Untersuchungsmethoden waren ähnlich der oben mit Bezug auf die kardiovaskulären Effekte beschriebenen, mit der Ausnahme, dass die Tierspezies weibliche Albino-Ratten von Charles Rivers, CD Stamm, waren. Im Ganzen waren 68 Ratten in den Studien involviert.

Tabelle 4 menschliche Plasma-Lipid-Werte

TRIG CHOL LDL

Objekt 1F

Anfang

88

170

107

6 WiM

61

140

83

Objekt 2F

Anfang

71

173

114

6 WiM

69

156

97

12 WiM

87

150

88

Objekt 3M

Anfang

679

269

-

6 WiM

190

264

181

12 WiM

210

265

178

Werte = mg/dl

Resultate und Bemerkungen Durch histologische Untersuchungen wurde bestimmt, dass die Lungen der nicht dem Zigarettenrauch ausgesetzten Kontrollen, sowie diejenigen der unter hyperimmuner Milch-Diät stehenden und dem Zigarettenrauch ausgesetzten Ratten viel weniger Neutrophile enthielten als die Lungen der dem Zigarettenrauch ausgesetzten, sowie der dem Zigarettenrauch ausgesetzten und unter normaler oder Kon-troll-Milch-Diät stehenden Ratten. Die Zahl der Lymphozyten in den Lungen der Kontrollen war ebenfalls geringer, und noch stärker reduziert war sie im bronchial lymphoiden

Gewebe (BALT) der Lungen von Ratten, welche unter hyperimmuner Milch-Diät standen und dem Zigarettenrauch ausgesetzt waren.

Raster-Elektronen-Mikroskopie zeigte, dass die Alveo-len-Oberfläche von Ratten, welche unter hyperimmuner Diät standen und dem Zigarettenrauch ausgesetzt waren.

viel sauberer war als diejenige von Ratten, welche dem Zigarettenrauch ausgesetzt, sowie diejenige von solchen, welche dem Zigarettenrauch ausgesetzt waren und unter normaler oder Kontroll-Milch-Diät standen. Die Diät mit hyperimmuner Milch schien die Aktivität der Staubzellen, oder Lun-genmakrophagen zu erhöhen. Die Staubzellen in den Bronchien, Bronchiolen und Alveolen von Rattenlungen phago-zytierten viel stärker in den Fällen, in welchen die dem Zigarettenrauch ausgesetzten Ratten mit hyperimmuner Milch gefüttert wurden, als unter den anderen Versuchsbedingungen. Von den dem Zigarettenrauch ausgesetzten Rattenlungen zeigten nur diejenigen auf der Oberfläche der Alveolar-zellen vom Typ 1 in den Regionen des Gasaustausches und auf den Epithelzellen der Luftwege durchwegs Staubzellen, welche hyperimmune Milch erhielten. Die Pseudopodia der Staubzellen verschlangen Produkte der Epithelzellen und anderen gegenwärtigen Unrat. Somit blieb diese physiologische Fähigkeit der Atmungsorgane bei Ratten mit hyperimmuner Milch-Diät selbst in Gegenwart übermässiger Sekretion und des im Zusammenhang mit dem Zigarettenrauch stehenden Abfalls erhalten.

Man beobachtete, dass die Blut-Luft-Schranke in der Lunge bei Zigarettenrauch ausgesetzten Ratten, mit oder ohne normaler oder Kontroll-Milch Fütterung, dicker war, als bei solchen mit hyperimmuner Milch-Diät gefütterten Ratten. Man vermutet, dass dieses Phänomen in engem Zusammenhang mit der beim Rauchen oft beobachteten Kurzatmigkeit steht.

Nachdem diese Erfindung nun allgemein beschrieben wurde, wird es einem auf diesem Gebiet Arbeitenden offenkundig sein, dass diesbezüglich viele Änderungen und Modifikationen gemacht werden können, ohne die Idee oder deren Umfang zu tangieren.

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S

Claims

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PATENTANSPRÜCHE

1. Hyperimmune Milch von Horntieren zur Behandlung von cardiovaskulären Krankheiten und von mit Umweltfaktoren verbundenen Lungenkrankheiten.
2. Hyperimmune Milch nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie in Pulverform vorliegt.
3. Hyperimmune Milch nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie in flüssiger Form vorliegt.
4. Hyperimmune Milch nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie in konzentrierter Form vorliegt.
5. Hyperimmune Milch nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie zwecks Einbringen in eine tabakraucherzeugende Substanz in Aerosolform vorüegt.
6. Verfahren zur Herstellung hyperimmuner Milch nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch folgende Schritte:

Sensibilisierung eines Horntiers mit Antigenen oder einer Mischung von Antigenen,

Verabreichung dieser Antigene in Zusatzinjektionen mit Dosen, die ausreichen, einen hyperimmunen Zustand in diesem Tier zu erzeugen und aufrechtzuerhalten, und

Gewinnung der hyperimmunen Milch von diesem Tier.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Herstellung ferner folgende Schritte enthält:

Pasteurisieren der gewonnenen Milch und

Entfernen des Fettes von der Milch.
8. Verfahren nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass das Tier durch Verabreichung von Antigenen oder einer Mischung von Antigenen mittels Zusatzinjektionen im hyperimmunen Zustand gehalten wird.
9. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Antigene oder die Mischung der Antigene in einer Dosis von IO6 bis IO20 Zellen verabreicht werden.
10. Verfahren nach einem der Ansprüche 6 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass das Horntier eine Kuh ist.
11. Milchbestandteile enthaltendes Nahrungsmittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an hyperimmuner Milch nach Anspruch 1.
12. Nahrungsmittel nach Anspruch 11, dadurch gekenn- . zeichnet, dass es Joghurt ist.