JPH07507798A - 寿命延長のための高度免疫乳の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 寿命延長のための高度免疫乳の使用 本願は、１９９２年６月１６日出願ノ米国特許出１１ｉｉ第０７／８９９．５１ ９号の一部継続出願であり、その全内容を本明細書の記載に取り込ませる。

発明の分野 本発明は、生理学的老化を抑制し、寿命を延長し、動物の生理学的老化の開始を 阻害し、生理学的または年齢的に老いた動物における生理学的機能能力を回復さ せるための高度免疫乳の使用に関する。

発明の背景 老化は、環境的ストレスに対する器官の適応能力または克服能力の減少により特 徴づけられる。個体の老化は正常な免疫細胞機能の減少により明らかであり（マ キノダン（Ｍａｋｉｎｏｄａｎ）ら、アドバンス・イミュノロ（Ａｄｖ、　Ｉｍ ｍｕｎｏｌ、　）第２９巻＝２８７−３３０頁（１９８０年）、ウェイト（ｆａ ｄｅ）ら、アドバンシズ・インーイミュノロジー第３６巻・１４３〜１８８頁（ １９８４年））、その減少は異種リンパ細胞数の他の変化のレベルの低下による （ボッチ、ブイ（Ｂｏｃｃｉ、　Ｖ、　）　、バイオローレビュ（Ｂｉｏｌ、Ｒ ｅｖ、）第５６巻＝６８頁（１９８１年））といういくつかの証拠がある。生化 学的には、老化に伴う免疫系の劣化は、胸腺リンパ質量の減少（ヒロカワ（Ｈｉ ｒｏｋａ冒ａ）ら、クリニカル・イミュノロジー・アンド・イミュノバソロジー （ＣＩｉｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　＆　Ｉｍ＋ｎｕｎｏｐａｔｈｏ１．　）第２ ４巻＋２５１〜２６２頁（１９８２年））、有糸分裂誘発性または同種異系抗原 的刺激に対する牌臓細胞の増殖応答の低下（チャンドラ、アール・ケイ（Ｃｈａ ｎｄｒａ、　Ｒ，Ｋ、　）イミュノロジー（Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）第６７巻＋１ ４１〜１４７頁（１９８９年）；アドラ−（Ａｄｌｅｒ）ら、ジャーナル・オン ・イングランド（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）第１０７巻＝１３５７〜１３６２ 頁（１９７１年））および抗−ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣで免疫化した後の牌臓中 のＳＲＢＣ抗体）の発生頻度の減少（プライス（Ｐｒｉｃｅ）ら、ジャーナル・ オン・イミュノロジー第１０８巻　４１３〜４１７頁（１９７２年））により測 定される。この老化の効果は免疫学的老化といわれる。老化に関連した上記免疫 学的機能の変化は、対象を、自己免疫疾患、腫瘍および生命を脅かす伝染病をは じめとする種々の医学的症状にかかりやす（する（ウェイトら、アドバンシズ・ イン・イミュノロジー（Ａｄｖ、　ｒｍｍｕｎｏｌ、　）第３６巻＋１４３〜１ ８８頁（１９８４年）：ボソチ、ブイ、バイオローレビュ（Ｂｉｏｌ、Ｒｅｖ、 ）第５６巻：６８頁（１９８１年））。

上記老化に関連した免疫学的変化の予防または回復に関する処置として、食事療 法（チャンドラ、アール・ケイ、イミュノロジー第７７巻：１４１〜１４７頁（ １９８９年）、クポ（Ｋｕｂｏ）ら、ジャーナル・オン・ニュートリジョン（Ｊ 、　Ｎｕｔｒ、　）第１１４巻：１８８４−１８９９頁（１９８４年）ニガプリ ニルセン（Ｇａｂｒｉｅｌｓｅｎ）ら、ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）第２６４ 巻＋４３９−４４０頁（１９７６年））および細胞移植（ヒロカワら、クリニカ ル・イミュノロジー・アンド・イミュノパソロジー第２４巻：２５１〜２６２頁 （１９８２年）；プライスら、ジャーナル・オン・イミュノロジー第１０８巻　 ４１３〜４１７頁（１９７２年））が提案されている。しかしながら、さらなる 研究により、食事療法のみが、老化に関連した生命を脅かす危険性を僅かに減少 させたことが示唆された（チャンドラ、アール・ケイ、イミュノロジー第６７巻 ・１４１〜１４７頁（１９８９年））。

動物においては、腸に関連したリンパ様組織（ＧＡＬＴ）は、腸内細菌の全身へ の侵入に対する重要な防御である（ウェイトら、アドバンシズ・イン・イミュノ ロジー第３６巻：１４３〜１８８頁（１９８４年））。ＧＡＬＴは、上皮内リン パ球（ＩＥＬ）および固有層リンパ球を含む非組織化リンパ様成分、および腸間 膜リンパ節（ＭＬＮ）およびバイエル板（Ｐｅｙｅｒ’　ｓ　ｐａｔｃｈｓ）の ごとき組織化リンパ様成分からなる。老化した個体における腸内微生物叢の転座 および／または老化した個体における免疫学的老化に対する防御におけるこれら の細胞の必要性については明らかでない。胃腸消化管からの固有の腸内細菌の転 座は、健康な成熟動物には起こらないが、（ｉ）腸内皮の透過性が変化している 場合、（ｉｆ）異常に高レベルの腸内細菌数が存在する場合、および（ｉｉｉ） 動物の免疫系が損傷を受けている場合の動物において起こる（パーグ、ロドニー ・ディー（Ｂｅｒｇ。

Ｒｏｄｎｅｙ　Ｄ、　）　、　ｒヒユーマン・アンド・インテステイナル・マイ クロフローラ・イン・ヘルス・アンド・デインーズ（Ｈｕｍａｎ　＆　Ｉｎｔｅ ｓｔｉｎａｌ　Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ　ｉｎ　Ｈｅａｌｔｈａｎｄ　Ｄｉｓｅａ ｓｅ）　Ｊ第１５巻・３８〜３４６頁（１９８３年））。

現在、腸内細菌の侵入に対する防御について２つの知られているが問題のある方 法が存在する。第１の方法は、腸内の病原性細菌数を除去または減少させること を包含する。マストロマリオ（Ｍａｓｔｒｏｍａｒｉｏ）らは、抗生物質投与が 、細菌の侵入を有意に防御すると報告している（マストロマリオら、ラジエーシ ョン・リサーチ（Ｒａｄｉａｔ、　Ｒｅｓ、　）第６８巻：３２９〜３３８頁（ １９７６年））。しかしながら、抗生物質投与もまた、抗生物質耐性病原菌によ るコロニー形成に対する宿主感受性を高める。ついで、このコロニー形成は、老 人固有の感染症を引き起こす。さらに、バーブは、「見境もな（抗生物質を経口 投与すると腸内細菌のエコロジーを破壊し、細菌の転座を促進し、患者の日和見 感染の危険性を増加させる」と報告している（バーグ、ロドニー・ディー、「ヒ ユーマン・インテステイナル・マイクロフローラ・イン・ヘルス・アンド・ディ シーズ」第１５巻＝３４２頁（１９８３年））。腸内細菌の侵入から個体を防御 、すなわち固有の感染から防御するための第２の方法は、細菌感染に対する宿主 の防御機構を特異的または非特異的に増大させることである。有効なマクロファ ーシアクチベータ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ）がマウスにお ける腸内大腸菌の転座速度を低下させることが報告されている（ヨシカイ（Ｙｏ ｓｈｉｋａｉ）ら、マイクロバイオ口・イミュノＤ　（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）第２７巻＋２７３−２８２頁（１９８３年））。牛乳免疫 グロブリンも、エンテロトキシン大腸菌またはロタウィルス感染の予防に有効で あると報告されている（タケット（Ｔａｃｋｅｔ）ら、ニュー・イングランド・ ジャーナル・オン・メディンン（Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　）第３１ ８巻：１２４０〜１２４３頁（１９８８年）；ヒルパート（Ｈｉｌｐｅｒｔ）ら 、ジャーナル・オン・インファクシャス・ディシーズ（Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　 Ｄｉｓ、　）第１５６巻：１５８〜１６６頁（１９８７年））。

発明の概要 本発明は、腸内細菌をはじめとする細菌の抗原で高度に免疫された乳産生動物由 来の高度免疫乳の使用に関する。

本発明は、動物における生理学的老化を抑制し、寿命を延長し、生理学的老化の 開始を遅延し、生理学的または年齢的に老化した動物における生理学的機能能力 を回復させるに十分量の本発明高度免疫孔の投与に指向される。

さらに本発明は、老化した、または免疫を損傷した動物において観察される免疫 学的機能低下を防止し、免疫損傷あるいは老化した動物の胃腸消化管からの固有 腸内細菌の転座を治癒もしくは予防するに十分量の本発明高度免疫孔の投与し、 それにより固有の感染を治療または予防することに指向される。より詳細には、 本発明高度免疫孔は、損傷を受けた動物の腸管を越えて固有の腸内細菌が転座す るのを防ぐのに十分量、動物に投与された場合、老化、さもなくば免疫損傷した 動物の免疫機能低下の開始を遅延、該機能低下の速度を低下、あるいは該機能低 下を回復させる。

本発明によれば、イー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）　、ニス・ティフィムリウム（Ｓ 。

ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）およびニス・ディスエンテリアエ（Ｓ、　ｄｙｓｅｎ ｔｅｒｉａｅ）のごとき腸内細菌をはじめとする細菌の抗原で高度に免疫された 、例えばつ／のような乳産生動物由来の高度免疫乳の投与により、動物における 生理学的老化の抑制、寿命の延長、生理学的老化の開始の遅延が効果的に行われ 、生理学的または年齢的に老化した動物における減少している生理学的機能能力 が回復されることが確認された。

さらに、ついに、本発明高度免疫孔の投与により、老化したマウスのごとき老化 または免疫損傷を受けた動物の血清中の抗−腸内細菌抗体レベルが効果的に低下 することが確認された。すなわち、本発明高度免疫孔は、老化または免疫損傷を 受けた動物の胃腸消化管から血清への腸内細菌の転座を防止する。さらに、かか る高度免疫乳の投与により、老化に関連したＧＡＬＴおよび膵臓細胞の外来抗原 による刺激に対する増殖的応答の低下に対して防御が行われることが見いだされ た。すなわち、高度免疫乳の使用により、生理学的老化および免疫学的老化に関 連した免疫学的機能低下に対する防御が行われることが確認された。さらに、つ いに、高度免疫乳の投与により、固有の細菌の胃腸消化管からの転座により引き 起こされる感染症が防止されることが確認された。

図面の簡単な説明 添付図面と併せて以下の詳細な説明を参照することにより、本発明およびその多 くの注目すべき利点がより完全に理解される。

図１は、体重曲線を示す。２力月齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを２種の餌（１２０ ｇ／体重ｋｇ／日）で１６力月間飼育した。Ｏ１対照乳；・、高度免疫乳。

各ポイントおよび縦線はχおよびＳＤ　（ｎ＝２０）を示す。スチューデントの ｔ試験（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ−ｔｅｓｔ）において、いずれの時間ポイント における体重も、２群の間において統計学的相違を示さなかった。

図２は、種々のリンパ様組織の細胞動力学を示す。ネズミの器官を８および１６ 力月齢において採取した。Ｏ１胸腺；△、牌臓；ロ、ＭＬＮ　：Ｏ，Ｉ　ＥＬ　 （これらは対照孔を与えられたネズミから得た（ｎ＝８））。・、胸腺；ム、牌 臓；閣。

ＭＬＮ；・、ＩＥＬ（これらは高度免疫乳を与えられたネズミから得た）。各ポ イントおよび縦線はχおよびＳＤを示す。を−試験おける対照孔を与えられた群 との統計学的相違はｐ＜０．００５であった。

図３は、腸管内のエンテロバクテリウム属の数を示す。各群から５匹のマウス（ ８か月齢）を試験した。ロ、対照乳；■、高度免疫乳。各ポイントおよび縦線は χおよびＳＤを示す。対照孔を与えられた群との統計学的相違は”ｐ＜０．０５ および”　ｐ＜０．０２５であった。

図４は、腸内細菌に対する血清中の抗体レベルを示す。各群から５匹のマウスを ＥＬＩＳＡにより試験した。抗体レベルを、４０５ｎｍにおいてＥＩＡリーダー で測定した。各ポイントおよび縦線はχおよびＳＤを示す。対照孔を与えられた 群との統計学的相違はｐ＜０．００５であった。

図５　（Ａ、ＢおよびＣ）は、ＧＡＬＴ細胞上の細胞表面マーカーに対するＦＡ Ｃ８分析を示す。ストレプトアビジン−ＤｕｏＣＨＨＯＭＥ添加前に、ＩＥＬお よびＭＬＮ細胞をフルオレセインイソチオシアナー１−（ＦＩＴＣ）−抗−ＣＤ ３モノクローナル抗体（Ｍａｂ）　、ＰＥ−抗−ＣＤ４Ｍａｂおよびビオチン− 抗−ＣＤ８Ｍａｂで染色した。ＣＤ３’細胞おけるＣＤ４およびＣＤ８表面マー カーの３色分析を、ＦＡＣ３ｃａｎを装備したＦＡＣＳＣＡＮ・リサーチ・ソフ トウェア（ＦＡＣＳＣＡＮ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて行 った。ビオチン−Ｔｈｙｌおよびストレプトアビジン−ＰＥ添加前に、他の細胞 を、ＦＩＴＣ−抗−αβ（α／β（ＴｃＲ））（α／βＴ−細胞受容体のベータ サブユニット不変部）ＭａｂまたはＦＩＴＣ−抗−Ｃδ（γ／δＴｃＲ）（γ／ δＴ−細胞受容体のデルタサブユニット不変部）ｈ４ａｂで染色した。ＩＥＬサ ブセットの細胞動力学。個々のポイントを、細胞表面マーカー有りおよび／また は無しの細胞の全細胞数に対するＸのパーセント値として計算した。Ｏ，ＣＤ３ ”；△、ＣＤ４’ＣＤ８’：ロ、ＣＤ４−ＣＤ８’；Ｏ，ＣＤ４−ＣＤ８−　（ 図５Ａにおいて対照孔を与えられたマウ７．　（ｎ＝６）由来のＩＥＬにおいて ）。αβを有するＴ細胞：△、γ６を有するＴ細胞（図５Ｂおよび５Ｃにおいて 高度免疫乳を与えられたマウス（ｎ＝６）由来）。各ポイントおよび縦線はχお よびＳＤを示す。Ｘ対照孔を与えられた群との統計学的相違はｐ＜０．０２５で あった。

図６　（ＡおよびＢ）は、ＧＡＬＴ細胞上の細胞表面マーカーに対するＦ　Ａ　 ＣＳ分析を示す。ストレプトアビジン−ＤｕｏＣＨＲＯＭＥ添加前に、ＩＥＬお よびＭＬＮ細胞をフルオレセインイソチオシアナート（Ｆ　Ｉ　ＴＣ）−抗−Ｃ Ｄ３モノクローナル抗体（Ｍａｂ）　、ＰＥ−抗−ＣＤ４Ｍａｂおよびビオチン −抗−ＣＤ８Ｍａｂで染色した。ＣＤ３’細胞おけるＣＤ４およびＣＤ８表面マ ーカーの３色分析を、ＦＡＣ５ｃａｎを装備したＦＡＣＳＣＡＮ・リサーチ・ソ フトウェア（ＦＡＣＳＣＡＮ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて 行った。ビオチン−Ｔｈｙｌおよびストレプトアビジン−ＰＥ添加前に、他の細 胞を、ＦＩＴＣ−抗−αβ（α／β（ＴｃＲ））（α／βＴ−細胞受容体のベー タサブユニット不変部）ＭａｂまたはＦＩＴｃ−抗−Ｃδ（γ／δＴｃＲ）（γ ／δＴ−細胞受容体のデルタサブユニット不変部）Ｍａｂで染色した。ＭＬＮ細 胞サブセットの細胞動力学。細胞表面マーカーを、図５で示したのと同じシンボ ルで示す。対照孔を与えられた群との統計学的相違はＺ　ｐ　＜領００５および 工”　ｐ＜０．０２５であった。

図７　（ＡおよびＢ）は、ＩＥＬの細胞溶解アッセイを示す。５１Ｃｒ−クロム 酸ナトリウムで標識したＰ８１５腫瘍細胞を、１μｇ／ｍｌの抗−ＣＤ３’細胞 の存在下、ウェルあたり１．５Ｘ１０”個の濃度で使用した。各群から６匹のマ ウスを試験した。Ｑ、対照孔：・、高度免疫乳：０．リファレンス（１，５力月 齢）。各ポイントおよび縦線はχおよびＳＤを示す。対照孔を与えられた群との 有意差はｐ＜０．１であった。

図８は、有糸分裂誘発性または同種異系抗原的刺激に対するＭＬＮ細胞の増殖応 答を示す。２μｇ／ｍｌのＰＨＡまたは同体積のＢＡＬＢ／ｃマウス由来の膵臓 細胞とともに、ウェル当たり５．０Ｘ１０５個の濃度で細胞を３７℃で６８時間 培養した。３７ＭＢｑの［メチル−３）（］−チチミンをウェルに添加し、さら に４時間インキュベーションした。ＭＬＮ細胞の有糸分裂誘発応答。Ｏ１対照乳 （ｎ＝６）；・、高度免疫乳（ｎ＝６）。各ポイントおよび縦線はχおよびＳＤ を示す。Ｉ対照孔を与えられた群との統計学的相違は”ｐ＜０．０２５であった 。

図９は、有糸分裂誘発性または同種異系抗原的刺激に対するＭＬＮ細胞の増殖応 答を示す。２μｇ／ｍｌのＰＨＡまたは同体積のＢＡＬＢ／ｃマウス由来の膵臓 細胞とともに、ウェル当たり５．０Ｘ１０ｓ個の濃度で細胞を３７℃で６８時間 培養した。３７ＭＢｑの［メチル−３）（］−チチミンをウェルに添加し、さら に４時間インキュベーションした。ＭＬＮ細胞の混合白血球反応。△、対照乳（ ｎ＝６）：ム、高度免疫乳（ｎ＝６）。各ポイントおよび縦線はχおよびＳＤを 示す。！対照孔を与えられた群との統計学的相違は”ｐ＜０．０５であった。

図１０（ＡおよびＢ）は、膵臓において５ＲＢＣに対してプラークを形成した細 胞数を示す。マウス（８力月齢）にｌＸｌ０’個の５ＲＢＣを腹腔内注射した。

免疫後、４および７日目にマウスを試験した。ロ、対照乳；■、高度免疫乳。各 ポイントおよび縦線はχおよびＳＤを示す。対照孔を与えられた群との統計学的 相違はｐ＜０．００１であった。

図１１は、５ｓＤＮＡに対する自己抗体の血清におけるレベルを示す。各群から ５匹のマウスを試験した。Ｏ９対照乳：・、高度免疫乳。抗体のレベルを、４０ ５ｎｍにおけるＥＩＡリーダーによる吸光度として示す。各ポイントおよび縦線 はχおよびＳＤを示す。対照孔を与えられた群との統計学的相違はｐ＜ｏ、１で あった。

図１２は、高度免疫乳ム、対照孔△または水○のいずれかを与えられたラットの 寿命を、日数（Ｘ軸）に対する生存ラット数（Ｙ軸）の関数として示す。

図１３は、高度免疫乳ム、対照孔△または水Ｏのいずれかを与えられたラットの 寿命を、日数（Ｘ軸）に対する生存ラット数（Ｙ軸）の関数として示す。

図１４は、高度免疫乳、対照孔、または水を与えられたラットの生存日数を示す 棒グラフである。

定義 「高度免疫乳」は、本発明の目的に関しては、高度免疫状態に維持された乳産生 動物から得た乳を意味する。高度免疫の詳細は下記にある。かかる乳は液体また は粉末形態であってよく、例えばスキムミルクの形態が挙げられる。

「通常孔」または「対照孔」は、本発明の目的に関しては、慣用的方法および酪 農慣習により乳産生動物から得た乳を意味する。かかる乳は液体または粉末形態 であってよく、例えば、ストール・ミルク・バイオロジクス・インターナショナ ル（Ｓｔｏｌｌｅ　Ｍｉｌｋ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ ｌ）　（ＳＭＢ　Ｉ　ニオバイオ州シンシナチ（Ｃｉｎｃｉｎａｔｉ）　）から 得られるスキムミルクの形態が挙げられる。

「乳産生動物」は、本発明の目的に関しては、商業的に使用可能な量の乳を産生 ずる動物、好ましくはウシ、ヒツジおよびヤギ、より好ましくはボス（Ｂｏｓ） （ボバイド（ｂｏν１ｄ））種の乳牛、特にホルスタイン（Ｈｏｌｓｔｅｉｎ） のごとき高収鳳の乳を産生する系統の乳牛を意味する。

「投与する」は、本発明の目的に関しては、物質で対象を治療（例えば経口的に ）するいかなる方法をも意味する。

「治療」は、本発明の目的に関しては、症状／疾患および／または当該症状／疾 患の原因を改善または完全に除去することを意味する。

「細菌抗原」は、本発明の目的に関しては、宿主において免疫応答を誘導しうる 生菌または死菌細胞の標品、あるいは細菌細胞または細菌由来の遺伝子がら得ら れるいかなる成分をも意味する。

「微小カプセル化形態」は、本発明の目的に関しては、乳産生動物に投与するた めの１種またはそれ以上の細菌抗原を封入したポリマー微粒子を意味する。

「動物」は、本発明の目的に関しては、年齢的老化、生理学的老化、または免疫 学的老化のうちのいずれか１つまたはそれ以上に対する対象となる生物を意味し 、例えば、ヒトおよび他の動物、特に、農業用動物、家畜研究用動物、および動 物園の動物を包含する。

「固有の感染」は、本発明の目的に関しては、固有の腸内細菌（当該動物の胃腸 消化管に存在する細菌）の当該動物の胃腸消化管から他の器官、組織、血液等へ の転座により引き起こされる血液または全身の感染を意味する。かかる感染に感 受性のある動物としては、免疫損傷を受けている動物、すなわち、白血病、ＡＩ ＤＳにかかっている動物、老化した動物等が挙げられる。老人医学における患者 および免疫損傷患者をはじめとする動物において、本発明方法による高度免疫乳 での治療により、かかる固有の感染は防止されつる。

「延長された寿命」または「寿命の延長」なる語は、本発明の目的に関しては、 当該種における正常と思われる寿命以上に延長された寿命、または当該種におけ る正常と思われる寿命を延長することを意味する。

「生理学的老化」または「生理学的年齢」なる語は、本発明の目的に関しては、 年齢について評価される「年齢的老化」に対立するものとしての「生理学的機能 能力」について評価される年齢を意味する。よって、「生理学的老化を抑制する 」なる語は、生理学的機能能力の低下を遅くすることを意味する。かがる生理学 的機能能力の低下は年齢的老化に関連していても関連していなくてもよい。

「低下した生理学的機能能力」なる語は、本発明の目的に関しては、動物の正常 な生理学的（正常な活動の）プロセスの低下または劣化、すなわち、すべての正 常から負への変化を意味する。かかる低下または劣化は、年齢的老化０例えば自 己免疫疾患、ＡＩＤＳ、感染、および癌をはじめとする疾患：または正常な免疫 細胞の機能の低下を引き起こす症状に関連またはそれによる低下あるいは劣化を 包含してもしなくてもよい。低下した生理学的機能能力の臨床的確証としては、 例えば、感染する機会の増加、腫瘍、自己免疫および免疫に関する症候群が挙げ られる。

「回復」なる語は、本発明の目的に関しては、動物の生理学的機能能力を正常範 囲にまで高めることを意味する。生理学的機能能力が低下または回復したかどう かの決定は、本発明が属する分野の当業者により容易に行われつる。

「免疫学的老化」なる語は、本発明の目的に関しＣは、免疫学的老化により特徴 づけられる状態で、そして特に例えば胸腺Ｔ細胞数のいくらかまたはすべての減 少、を糸分裂誘発に対する応答の低下、膵臓と腸間膜リンパ節細胞との混合リン パ球培養反応の低下、血清中における腸内細菌に対する抗体数の増加により示さ れる胃腸消化管からの細菌あるいは細菌抗原の転座数の増加、胸腺リンパ質量の 減少、有糸分裂誘発性または同種異系抗原的刺激に対する膵臓細胞の増殖応答の 低下、５ＲＢＣで免疫した後の膵臓における抗−ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）抗体 の出現頻度の減少、および例えば抗−５ｓＤＮＡ自己抗体のごとき自己抗体の血 清におけるレベルの増加をはじめとする免疫機能の低下した状態を意味する。

「免疫損傷した」なる語は、動物または個体が、本発明の目的に関しては、例え ば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）のごとき、正常な免疫細胞の機能を低下 させる症状にかかっている動物またはヒトであることを意味する。

好ましい具体例の詳細な説明 本発明は、一部には、ウシのごとき乳産生動物が腸内細菌を含有するワクチンで 高度免疫の状態にされた場合、当該動物はかかる細菌に対する正常値を超えたＩ ｇＧを含有する乳を産生ずるという発見に基づ（。対象に対するこの高度免疫乳 の経口投与により、かかる対象の生理学的老化が抑制され、モして／または生理 学的にあるいは年齢的に老化した動物の低下した生理学的機能能力が回復させら れる。「正常値を超えた」なる語は、高度免疫されていない動物の乳に見られる レベルを超えたレベルを意味する。

本発明高度免疫乳を種々の腸内細菌（例えば表２参照）に対して高度免疫された 乳牛から得る。高度免疫乳は、抗体活性を維持するための温度調節下で製造され る。温度調節は、１６１’Ｆないし１６７°Ｆの範囲で滞留時間１５〜１９秒、 好ましくは１６３°Ｆないし１６５°Ｆの範囲で滞留時間１６〜１８秒、そして より好ましくは殺菌温度１６４°Ｆで滞留時間１７秒の低温殺菌工程を用いて高 度免疫乳を殺菌することを意味する。殺菌工程に続いて、１００°Ｆないし１１ ０°　Ｆの温度範囲、好ましくは１０３°Ｆないし１０７°Ｆ、そしてより好ま しくは１０５°Ｆにおける低温エバポレーション工程を行う。エバポレーション 段階において高度免疫乳の全固形物量が４０％になった場合、３５４″Ｆないし ３９４°Ｆ、好ましくは３６４°Ｆないし３８４°Ｆ１そしてより好ましくは３ ７４°Ｆにおいて低温噴霧乾燥工程を用いて該乳を噴霧乾燥する。噴霧乾燥して いる間の出口温度は１７０°Ｆないし２００°Ｆ１好ましくは１８０″Ｆないし １９０°Ｆ、より好ましくは１８５°Ｆである。本発明高度免疫孔の栄養成分は 、対照孔の成分（ゴレイ（Ｇｏｌａｙ）ら、アメリカン・ジャーナル・オン・ク リニカル・ニュートリンヨン（＾ｍ、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｎｕｔｒ、　）第５ ２巻：１０１４〜１０１９頁（１９９０年））と同じである。しかしながら、１ ｇＧａ度、およびヒトの腸内細菌（表２）に対するＩｇＧ抗体活性は、対照乳中 よりも本発明高度免疫乳中において有意に高い。

ａ、高度免疫孔製造方法 免疫応答および抗体産生を刺激するに十分な初期免疫を動物に行い、ついで、十 分に高用量の特異的抗原で定期的に追加免疫することにより、高度免疫状態を達 成しつる。追加免疫の好ましい用量は、ウシの初期免疫を起こすのに必要な量の ５０％に等しいかまたはそれ以上である。よって、ウシが正常に免疫されている 状態であっても、乳中に当該特徴が現れない用量の閾値が存在する。必要な高度 免疫状態を達成するためには、最初の一連の追加免疫投与の後に高度免疫乳を試 験することが必要である。動物が免疫学的に応答していないというように有益な ファクターが乳中に存在しない場合には、乳中に当該特徴が現れるまで高用量の 追加免疫を投与する。

要約すると、高度免疫乳の製造法は以下の工程からなる＝　（１）抗原の選択（ 腸内細菌、腸内細菌抗原および特にヒト・腸内細菌またはその抗原性抽出物）； （２）乳産生動物、特にウソに対する初期免疫；　（３）初期誘導の対する感受 性を確認するための血清の試験；　（４）適当な用量の追加免疫での高度免疫； および、所望により（５）防御的特性についての乳の試験；　（６）高度免疫さ れたつ／からの乳の採取；および、所望により（７）乳の加工。

工程１．いかなる腸内細菌抗原または腸内細菌抗原の混合物であっても使用する ことができる。この工程において重要な点は、腸内細菌抗原により免疫が誘導さ れ、乳産生動物が高度免疫状態にされつるのみならず、高度免疫乳中に正常値を 超えたレベルの腸内細菌に対するＩｇＧが産生されうることである。１の好まし いワクチンは、実施例２に詳細に記載するシリーズ１００　（ＳｅｒｉｅｓｌＯ Ｏ）ワクチンと呼ばれる多価細菌抗原の混合物である。

工程２．工捏１の抗原を、感受性を引き起こすいかなる方法によっても乳産生動 物の投与することができる。ｌの方法において、ｌＸｌ０’ないし１ｘｌＯ”個 、好ましくは１０１ないし１０１０個、最も好ましくは２ｘｌＯ＠個の熱殺菌細 菌由来の抗原からなるワクチンを筋肉内注射により投与する。しかしながら、静 脈注射、腹腔的注射、直腸止剤、または経口投与のごとき他の方法を使用しても よい。

工程３：乳産生動物が腸内細菌抗原に対して感受性になったかどうかを調べる必 要がある。感受性を試験するための、免疫学分野の当業者に知られた多くの方法 がある（［メソソズ・イン・イミュノロジー・アンド・イミュノケミストリー（ Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅ＋ ５ｉｓｔｒｙ）　Ｊ　、ウィリアム、シーφエイ（Ｗｉｌｌｉａｍ、　Ｃ，Ａ、 　）およびチェイス、ダブリユウ・エム（Ｃｈａｓｅ、　Ｉｌ、　Ｍ、）、ニュ ーヨークのアカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）第１巻〜第 ５巻（１９７５年））。

好ましい方法は、複数の腸内細菌種からなる多価ワクチンを抗原として使用し、 該ワクチンによる攻撃の前後において血清中の凝集性抗体の存在について試験す るものである。該ワクチンで免疫後の乳抗体の存在は感受性を示す。このポイン トを通過すれば工程４に進むことができる。

工程４　この工程は、感受性となった動物において高度免疫状態を誘導し維持す ることを包含する。このことは、初期の感受性付与を行うのに使用したのと同じ 多価ワクチンを一定期間の間隔をおいて繰り返し追加免疫することにより達成さ れる。多価細菌性ワクチンには、２週間の追加免疫間隔が最適である。しかしな がら、動物が高度免疫状態を経て当該抗原に対して免疫耐性となっていないこと を確認する必要がある。

好ましい具体例において、乳産生動物の高度免疫を、実施例２に詳細に記載した ように調製された微小カプセル封入ワクチンの単−回投与により達成することも できる。該徐放形態による高度免疫の利点は、抗原に対する一定の暴露により動 物が高度免疫状態を維持するということである。

別の具体例において、例えば微小カプセル封入抗原および液体抗原の同時投与、 あるいは初期免疫を筋肉内注射で行い、追加免疫を経口もしくは微小カプセル封 入体による非経口投与で行うといった異なる免疫方法を組み合わせることも可能 である。初期および高度免疫の多くの異なる組み合わせが当業者に知られている 。

工程５・乳を防御的効果について試験することが必要である。このことは、高度 免疫乳またはそれから製造される製品の免疫機能に対する効果を試験するいずれ の既知方法によっても達成されうる。

工程６：この工程は、乳の採取および加工を包含する。慣用的方法により乳を採 取することができる。さらに、乳を加工することができる。かかる加工を慣用的 方法により行うことができる。例えば乳を脱脂してスキムミルクとすることがで きる。

本発明高度免疫乳を、単に粉末または液剤形態として経口投与してもよく、ある いは組成物として与えてもよい。Ｔ−リンパ球機能を抑制、または免疫学的老化 を予防、あるいは免疫機能低下の開始を遅延、免疫機能低下速度を低下もしくは 低下した免疫機能を回復させるいかなる量または濃度であってもこれらの組成物 を投与することができる。経口投与用の本発明高度免疫乳の固体剤型としては、 カプセル、錠剤、丸薬、粉末および顆粒が挙げられる。かかる固体剤型中におい て、活性化合物を少なくとも１種の蔗糖、乳糖または澱粉のごとき不活性希釈剤 と混合することができる。かかる剤型もまた、通常の実施において不活性希釈剤 以外のさらなる物質を含有していてもよい。カプセル、錠剤、および火剤の場合 、剤型が緩衝化剤を含有していてもよい。錠剤および火剤がさらに腸溶コーティ ングされていてもよい。

経口投与用の液体剤型としては、乳自体をはじめとする医薬上許容されるエマル ジョン、製薬分野で通常使用される不活性希釈剤を含有する溶液、懸濁液、シロ ップおよびエリキシルが挙げられる。かかる組成物が、不活性希釈剤以外に、／ ｉｉ潤剤、乳化剤および呼濁化剤、ならびに甘味料のごときアジ二ノくントを含 有していてもよい。

本発明組成物中の活性成分の用量を変更してもよい。しかしながら、適当な剤型 が得られるような活性成分量とすることが必要である。選択される剤型は、所望 する効果、投与経路および治療期間に依存する。さらに、選択される剤型は通常 の当業者により容易に決定されうる。

好ましくは、高度免疫乳をスキムミルクの形態として、Ｔ−リン、（球機能を抑 制または免疫学的老化を予防するに十分量を動物に経口投与する。適当な用量範 囲は、１日あたり約１ｇ／体重ｋｇないし１日約２００ｇ／体重ｋｇ、好ましく は１日約５０ｇ／体重ｋｇないし１日約１５０　ｇ／体重ｋｇ、より好ましく１ ま１日約９８ｇ／体重ｋｇである。毎日の好ましい投与回数は１日１〜４回、好 ましくは１日２回である。好ましくは、治療を動物が生きている間ずつと行うべ きである。本発明高度免疫乳を若いうちから投与することは必ずしも実用でなＬ Ｘ０治療を開始する年齢がいくつであろうと有益な効果を得ることが可能である 。

全乳粉末、バルク蛋白濃縮粉末またはホエー蛋白濃縮粉末のごとき他の乾燥形態 として高度免疫乳を投与してもよい。全乳粉末の適当な用量範囲はスキムミルり 粉末について説明したのと同じ範囲である。乳蛋白濃縮粉末およびホエー蛋白濃 縮粉末の適当な用量範囲は、体重１ｋｇあたり１日約０．１グラムなし１し体重 １ｋｇあたり１日約２０グラム、好ましくは、体重１ｋｇあたり１日約５グラム ないし体重１ｋｇあたり１日約１５グラム、より好ましくは体重１ｋｇあたり１ 日約９．８グラムである。高度免疫乳を、全乳、スキムミルク、乳蛋白濃縮物、 ホエー蛋白應縮物または投与用の別の液体組成物のごとき液剤形態として投与し てもよい。液体乳製品の適当な用量範囲は、体重１ｋｇあたり１日０１ミリリツ トルないし体重１ｋｇあたり１日約２００ミリリツトル、好ましくは体重１ｋｇ あたり１日約１ミリリツトルないし体重１ｋｇあたり１日約５０ミリリツトル、 より好ましくは体重１ｋｇあたり１日約２５ミリリツトルである。１日の好まし い投与回数は１日１ないし４回、好ましくは１日２回である。好ましい治療期間 の長さは対象が生きている間ずっとである。

用量および投与回数、ならびに治療期間の長さは、動物または患者の年齢および 一般的健康状態、ならびに種に依存し、また副作用を考慮に入れて決定される。

用量、回数および治療期間の長さの最適化は当業者により行われ得る。投与は、 同時に行っている他の薬剤での治療および投与薬剤に対する患者の耐性にも依存 する。

本発明のワクチンにおける使用に適する細菌またはその細菌抗原としては、ヒト または他の動物の腸内細菌が挙げられる。かかる適用な細菌としては、例えば、 以下のものが挙げられる（アステリスクを付したものについては表の終わりに説 明がある）。

（１）ｘ腸内細菌科のメンバー、例えば以下のものを包含する：ニス・ノスエン テリアエ（Ｓ、　ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）　（アメリカン・タイプ・カルチャ ー・コレクションＣＡｍｅｒｉｃａｎ　丁ｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅ ｃｔｉｏｎ）　（ＡＴＣＣ）受託番号１３３１３．１１８３５＋ヒト：２７３４ ５，２９０２７．２９０２８；動物＝２７３４６／チンパンジー）；ニス・フレ クスネリ（Ｓ、ｆｌｅｘｎｅｒｉ）　（ＡＴＣＣ番号：　２９９０３　；ヒト： 　２５９２９および２５８７５）：ニス・ボイジイ（Ｓ。

ｂｏｙｄｉｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号＋８７００；ヒト＋２５９３０）；ニス・ ソネイ（Ｓ。

５ｏｎｎｅｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：　２９９３０　；ヒト＋　２５９３１． ２９０２９．２９０３０および２９０３１）をはじめとするシゲラ（Ｓｈｉｇｅ ｌｌａ）　；イー・コリ（ＡＴＣＣ番号：２６．１１７７５：ヒト：９３３９． ９５４６．９９８０．１１６９８．１１６９９．ｅ１１７７５，１２０３６．２ ３５１０〜２３５１２．２３５１４，２３５１５，２３５１９．２３５２０〜２ ３５２２，２３５２４゜２３５２６〜２３５２９，２３９７７．２３５３０〜２ ３５３４：２３９７８．２３９８０〜２３９８３．２９５５２および２３９８５ 　：動物：ウシ／４３５０．４３５１．２３５４０．２３５４１および２３５４ ３）をはじめとするエンエリシア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）　： イー・ホンナエ（Ｅ、　ｈｏｓｈｉｎａｅ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号・動物：ツノ メドリ／３３３７９）、イー・タルク（Ｅ、　ｔａｒｄａ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番 号、ヒト：１５９４７，１５４６９゜２３６５７〜２３７１２および２３８３７ ）をはじめとするエドヮルドシェラ（Ｅｄｖａｒｄｓｉｅｌｌａ）　： ニス・パラティフィーＡ　（Ｓ、ｐａｒａｔｙｐｈｉ−＾）　（ＡＴＣＣ番号＋ ９５１０，９２８１．１２１７６および１１５１１）；ニス・ンヨットミュレリ （Ｓ。

ｓｃｈｏｔｔｍｕｅｌｌｅｒｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号８７５９）＋ニス・ティ フィムリウム（Ｓ。

ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕ＋＋）　（ＡＴＣＣ番号：１３３１１　；動物・ウシ／１ ４０２８）；ニス・コレラニスイス（Ｓ、ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）　（ＡＴ ＣＣ番号：　ｅ１３３１２，７００１）；ニス−エンテリテイディス（Ｓ、ｅｎ ｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：４９３１および１３０７６）；ニス・ ガリナルム（Ｓ、ｇａｌｌｉｎａｒｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：９１８４）；以下 の血清型：モンテビデオ（ｍｏｎｔｅｖｉｄｅｏ）　（ＡＴＣＣ番号：８３８７ Ｌニユーボート（ｎｅｖｐｏｒｔ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：　６９６２．２７８ ６９）　、アナトラム（ａｎａｔｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号：　９２７０）　、＝ 、イントン（ｎｅｗｉｎｔｏｎ）　（ＡＴＣＣ番号：２９６２８）、ハイデルベ ルグ（ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号＋８３２６）、セントボー ル（ｓａｉｎｔｐａｕｌ）　（ＡＴＣＣ番号：９７１２Ｌボツダム（ｐｏｔｓｄ ａｍ）（ＡＴＣＣ番号：２５９５７）、ツウィカウ（ｚｒｉｋａｕ）　（Ａ　Ｔ 　ＣＣ番号；１５８０５）およびジャバニカ（ｊａｖａｎｉｃａ）　（ＡＴＣＣ 番号：１０７２１）を含むニス・スピーシズ（Ｓ、ｓｐ、）（ＡＴＣＣ＠号：２ ９８９０）をはじめとするサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）　； エイ・ヒンンヤウィイ（＾、ｈｉｎｓｈａｗｉｉ）　（サルモネラ・アリゾナエ （Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ａｒｉｚｏｎａｅ）　）　（ＡＴＣＣ番号：ｅ１３３ １４）をはじめとするアリシナ（＾ｒｉｚｏｎａ）　； シー・フロインディイ（Ｃ，ｆｒｅｕｎｄｉｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号　８０９ ０　：ヒト：６７５０．２９２１９〜２９２２２および３３１２８　；動物ニラ イブストック（ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ）　／　２９９３５　）　；およびシー・デ ィベルスス（Ｃ，ｄｉｖｅｒｓｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：　２７５１６　：ヒト ：２５４０９．２９２２４および２９２２５）をはじめとするントロバクター（ Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）　；ケイ・−ニー　モー１−ア−ｒ−（Ｌｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ）　（ＡＴＣＣ番号：　９５９０．１３８８３：ヒト：２０９１６， ２０９１７．３３４９５，２９６４２：動物：ウシ／４３５２、ビーバー／４７ ２７）をはじめとするクレブシェラ（Ｈｅｂｓｉｅｌｌａ）　；イー・クロアカ ーｒ−（Ｅ、　ｃｌｏａｃａｅ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト：ｅ１３０４７， ２９００５．２９００６．１０６９９および２９８９３）；イー・アエロゲネス （Ｅ。

ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：８８４：ヒト：　ｅ１３０４８， １５０３８，２９０１０．２９７５１および２９９４０）；イー・アグロメラン ス（Ｅ、　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）（ＡＴＣＣ番号：ヒト：　２７１５５．２ ７９８８，２７９８４．２７９８７，２９００１．２９００２．２７９９８，２ ７９８１．２７９９３．２７９９１および２７９８９）；イー１ハフイニアエ・ アルベイ（Ｅ、　ｈａｆｉｎｉａｅ　ａｌｖｅｉ）　（ハフィニア・アルベイ（ Ｈａｆｉｎｉａ　ａｌｖｅｉ）と同じ）（ＡＴＣＣ番号：１３３３７，９７６０ ，１１６０４．２３２８０，２５９２７．ヒト：　２９９２６および２９９２７ ）をはじめとするエンテロバクタ−（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）　；ニス・マ ルセセンス（Ｓ、ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号　１３８８０；ヒト ＝９１０３．２５１７９．２７１３７．２９０２１．２９０２２および２９９３ ７゜動物・サル／４００２．１−カゲ／６０６５）；ニス・リクエファシエンス （Ｓ。

１ｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号：２５７９２，１１３６７、ｅ１ ４４６０，１４４６１．１９３２３．動物：乳製品／２５６４１〜２５６４３） ；およびニス・ルビダエア（Ｓ、ｒｕｂｉｄａｅａ）　（ＡＴＣＣ番号：２７５ ９３．ヒト：２９０２３）：をはじめとするセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）　； ピー・ミラビリス（Ｐ、＋ｌ１ｒａｂｉｌｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：２９９０６ ．４６７５，９２４０．９９２１，１２４５３．１４１５３，１４２７３．１５ ２９０．１５３６３゜２１１００．２１６３５および２１７１８　；ヒト：４６ ３０．７００２．２５９３３．２９８５２．２９８５４−２９８５６）：ピー・ モルガニイ（Ｐ、ｍｏｒｇａｎｉｉ）　；ピー・ブルガリア、　（Ｐ、ｖｕｌｇ ａｒｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ｅ１３３１５；ヒト＝８４２７．２７９７２．２ ７９７３，３３４２０．６８９８）をはじめとするプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ）　； ピー・レットゲリ　（Ｐ、ｒｅｔｔｇｅｒｉ）　（ＡＴＣＣ番号：２９９４４． ９９１８．９９１９．１４５０５．２１１１８，３１０５２．ヒト：９２Ｓ０． ２５９３２）；ビー・アルカリ７ｙ／エンス（Ｐ、ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎｓ ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：９８８６，１３１５９．２５８２８，２７９７０． ２７９７１および２９９４５）；ビー・スツアルティイ（Ｐ、５ｔｕａｒｔｉｉ ）　（ＡＴＣＣ番号：２９９１４；ヒト：’２５８２５．２５８２６．２５８２ ７および２９８５１）をはじめとするプロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ）　； ワイ・エンテロコリティ力（Ｙ、　ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）　（Ａ　Ｔ 　ＣＣ番号・ヒト、９６１０．２３７１５．２７７２９　；動物、サル／２９９ １３）およびワイ・シュードラベルクローシス（Ｙ、ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃ ｕｌｏｓｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：　２９８３３　；ヒト：２９９１０．動物： ６９０５．１３９７９．１３９８０．２７８０２）をはじめとするイエルンニア （Ｙｅｒｓｉｎｉａ）　；（２）Ｉビブリオナセアエ（Ｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａ ｅ）科のメンバー、例えば以下のものを包含する　ブイ・バラへそりティクス（ ｖ、　ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号１７８０２） ；およびビブリオ・スクンノアンス（Ｖｉｂｒｉｏ　ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｓ） をはじめとするビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）　；（３）０例えば以下のものを包含 する腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）　：ストレプトコッカス・フェカリス（ Ｓｔｒｅｐ、ｆａｅｃａｌｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ｅ１９４３３．２７２７５ ．２７２７４．２７２７６、ヒト：　６５６９，３３０７４．２７２７４、動物 　ウシ／２７９５９．２７３３２）；ストレプトコッカス・ファエシウム（Ｓｔ ｒｅｐ、　ｆａｅｃｉｕ＋＊）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：１９４３４　；ヒト：　 ６０５６．１２７５５゜２７２７０．２７２７３）；ストレプトコッカス・ボビ ス（Ｓｔｒｅｐ、ｂｏｖｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号　：動物　ウシ／１５３１５． １５３５２．２７９６０．３３３１７）；ストレプトコッカス・アガラクティア エ（Ｓｔｒｅｐ、ａｇａｌａｃｉｔｉａｅ）　（ＡＴＣＣ番号：１３８１３；ヒ ト　６２４：動物、ウシ／２７９５６．２７５４１．１２９２７．１２９２８． ７０７７．４７６８）：ストレプトコッカス・アンギノスス（Ｓｔｒｅｐ、ａｎ ｇｉｎｏｓｕｓ）　：ストレプトコッカス・アビウム（Ｓｔｒｅｐ、　ａνｉｕ ｍ）　；ストレブトコッカス−フレモリ７．　（Ｓｔｒｅｐ、ｃｒｅｍｏｒｉｓ ）　（ＡＴＣＣ番号：１９２５７．９５９６．９６２５）；ストレプトコッカス ・エフイスミリウス（Ｓｔｒｅｐ。

ｅｑｕｉｓｍｉｌｉｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：９５４２）；ストレプトコッカス ・ラクテイス（Ｓｔｒｅｐ、　１ａｃｔｉｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号＋１９４３ ５．７９６２，７９６３．２７８６１；動物、乳製品／ｅ１１４５４．２１０５ ３．２９１４６）：ストレプトコッカス・ミティア（Ｓｔｒｅｐ４ｉｔｉｏｒ） 　；ストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐ、ｍ１ｔｉｓ）　（ＡＴＣＣ番 号、ヒト：９０３．６２４９．１５９０９〜１５１４）；ストレプトコッカス・ ミュータンス（Ｓｔｒｅｐ、ｍｕｔａｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号：：２５１７５； ヒト＝２７６０７．２７９４７．３１３４１）：ストレプトコッカス・サンバリ ウス（Ｓｔｒｅｐ、５ａｌｉｖａｒｉｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：　：１３４１９ 　；ヒト：３１０６７．２７９４５．２５９７５．９７５８）：ストレプトコノ カス・サンダイス（Ｓｔｒｅｐ。

ｓａｎｇｕｉｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号、：ヒト：１０５５６−１０５５８．２ ９６６７．２９６６８）：；ｔ、トレブトコッカス・エクイスス（Ｓｔｒｅｐ、 　ｅｑｕｉｎｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：９８１２）：ストレプトコッカス・ デユランス（Ｓｔｒｅｐ、ｄｕｒａｎｓ）　（ストレプトコッカス・ファ工／ウ ム参照）：ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐ。

ｐｙｏｇｅｎｅｓ））　（ＡＴＣＣ番号：８６７１．１０３８９．１２３４７， １２３４９，１２９７２．１２３５７，１０４０３．１２３４４　：ヒト：７９ ５８．１９６１５，２１０５９．２１５４７．１１４３４〜１１４３６，２５６ ６３．１０７８２）；ストレプトコッカス・ニューモニアｊ−（Ｓｔｒｅｐ、　 ｐｎｅｕＩＩｌｏｎｉａｅ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：６３０１〜６３１２．ｅ６ ３０３．９１６３，１０８１３，１１７３３．１２２１３，２７３３６．６３１ ４〜６３３２．８３３３〜８３４０．１０３４１〜１０３５９．１０３６１〜１ ０３７３．１００１５）；ストレプトコッカス・コンスタラトラス（Ｓｔｒｅｐ 、ｃｏｎｓｔａｌｌａｔｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：：ヒト：２７５１３，２７８ ２３）；ストレプトコッカス・ハンセニイ（Ｓｔｒｅｐ、ｈａｎｓｅｎｉｉ）　 （ＡＴＣＣ番号：ヒト＝２７７５２）；ストレプトコッカス・インターメディウ ス（Ｓｔｒｅｐ、　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）（ＡＴＣＣ番号＋２７３３５）お よびストレプトコッカス・モルビロリウム（ＳｔｒｅｐＪｏｒｂｉｌｌｏｒｉｕ ＋ａ）　（ＡＴＣＣ番号二二ヒト＋　２７５２７．２７８２４）をはじめとする ストレプトコッカスｊｌ！　（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｊ）　；スタフィロコッ カス・アウレウス（Ｓｔａｐｈ、ａｕｒｅｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号＋１１６３１ ：ヒト：１２６００．１３１５０，９９９６，１４４５８．１９６３６，２１９ １５．２７２１７．４０１２．Ｄ物：”ｐン／２７５４３．２９７４０）ニア、 ９フイａコツカス・アルプス（Ｓｔａｐｈ、ａｌｂｕｓ）　；スタフィロコッカ ス・エビデルミゾイス（Ｓｔａｐｈ、ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）　（ＡＴＣＣ＠ 号：ヒト：　ｅ１５５，１４９９０．１０８７５）をはじめとするスタフィロコ ッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）　；（４）”　エル・アンドフィルス （Ｌ、　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：：ｅ４３５６．３１ ４．３３２．５２１，８３２，４３５５．４３５７．４７９６．４９６２．９２ ２４．１１９７５、ヒト＋３３１９７．３３２００．動物：ブタ／３３１９８． ニワトリ／３３１９９）；エル・プレビス（Ｌ、ｂｒｅｖｉｓ）　（ＡＴＣＣ番 号：ヒト：１４８６９．１１５７７）Ｉエル・ブフネリ（Ｌ、　ｂｕｃｈｎｅｒ ｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号二４゜０５；ヒト：１１５７９，１２９３５．１２９ ３６）；エル・カゼイ（Ｌ、　ｃａｓｅｉ）（ＡＴＣＣ番号：　ｅ３９３，７４ ６９．ヒト：２７２１６，２１０５２，１１５７８゜１１５８２．１５００８． ４６４６．動物：乳製品／２５５９９，２５５９８．３３４）、エル・カテナフ ォルメ（Ｌ、　ｃａｔｅｎａｆｏｒｍｅ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト・２５５ ３６）、エル・クリスバトウス（Ｌ、ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）　：エル・フェルメ ントラム（Ｌ、　ｆｃｒｍｅｎｔｕｍ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：１４９３１　； ヒト：　２３２７１．２３２７２゜１１９７６．１４９３２）：エル・ヘルベテ ィクス（Ｌ、　ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：１５００９．８ ０１８．１０３８６）：エル・ラクティス（Ｌ、１ａｃｔｉｓ）　（ＡＴＣＣ番 号・乳製品：１２３１５．２１０５１）ニーｒ−に一うイヒマンニイ（Ｌ。

ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：４７９７．７８３０）：エル ・ミヌトゥス（Ｌ、ｍ１ｎｕｔｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：３３２６７）：エル・ ブラナレウム（Ｌ。

ｐｌａｎａｒｅｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号：１４９１７，４００８　；ヒト：１１ ９７４）；エル・ロゴサ−？−（Ｌ、ｒｏｇｏｓａｅ）　（ＡＴＣＣ番号、ヒト ：　２７７５３　）　：エル・ルミニス（Ｌ、　ｒｕｗｊｎｊｓ）　（Ａ　Ｔ　 ＣＣ番号：ヒト：２５６４４；動物　２７７８〜２７７８２）、エル・サリバリ ウス（Ｌ、５ａｌｉｖａｒｉｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：１１７４２．１１７４１ ．２９６０２）をはじめとするラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ） 　：（５）！シーリエトゥス・パリ・インテスティナリス（Ｃ，ｆｅｔｕｓ　ｖ ａｒｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：３３２４６〜３３２ ４９．３３２９３）およびシ町フェトウス・パリ・ジェジュニ（Ｃ，ｆｅｔｕｓ 　ｖａｒ　ｊｅｊｕｎｉ）　（ＡＴＣＣ番号：　ヒト：　２９４２８．３３２５ ０〜３３２５３，３３２９１．３３２９２）　をはじめとするカンピロバクタ− （Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）　；（６）Ｚエイ・ヒドロフィリア（Ａ、　ｈ ｙｄｒｏｐｈｉｌｉａ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：　７９６６；動物：　ｈ工ｔＬ ／ｅ　９０７１．魚／１９５７０）；！イー　シゲｏイデス（＾。

ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号：１４０２９，１４０３０）をは じめとするアエロモナス（Ａｅｒｏａ＋ｏｎａｓ）　；（７）寒バクテロイデス （Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）属、フッバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕ ｍ）属およびラブトロトリチオエ（Ｌｅｐｔｒｏｔｒｉｃｈｉｏｅ）属をはじめ とするバクテロイダセアエ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ）科のメンバーであ り、以下のものを包含する： ビー・アミロフィルス（Ｂ、ａｍｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）　；ビー・アサッヵロリ ティクス（Ｂ。

ａｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号＋　２５２６０　； ヒト：２７０６７）：ビー・カビロスス（Ｂ、ｃａｐｉｌｌｏｓｕｓ）　（ＡＴ ＣＣ番号：ヒト＋２９７９９）：ビーー：１７グランス（Ｂ、ｃｏａｇｕｌａｎ ｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２９７９８）；ビ町ディスクツニス（Ｂ、ｄｉｓ ｔａｓｏｎｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：８５０３）；ビー・エゲルティイ（Ｂ、ｅ ｇｇｅｒｔｈｉｉ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２７７５４）；ビー・フラギリス （Ｂ。

ｆｒａｇｉｌｉｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト＋２３７４５．２５２８５，２ ９７６８．２９７７１）；ビー・ヒペルメガス（Ｂ、ｈｙｐｅｒ＋＊ｅｇａｓ） 　（ＡＴＣＣ番号：ニワトリ／２５５６０）；ビー・メラニノアニクス（Ｂ、　 ＋＊ｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト：１５０３２ ．１５０３３．２５２６１，２５６１１，１５９３０．２５８４５，３３１８４ ．３３１８５；動物：ウシ／２９１４７）；ビー・ムルチアシドゥス（Ｂ。

ｍｕｌｔｉａｃｉｄｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト２７７２３，２７７７２ ．動物：ブタ／２７７２４）；ビー・オラリス（Ｂ、ｏｒａｌｉｓ）　（ＡＴＣ Ｃ番号：ヒト＋３３２６９゜３３３２１．３３３２２）；ビー・オバトウス（Ｂ 、ｏｖａｔｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：８４８３）：ビー・ニューモンシンテス（ Ｂ、ｐｎｅｕｍｏｎｓｉｎｔｅｓ）　；ビー・ブラエアクトウス（Ｂ、ｐｒａｅ ａｃｕｔｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号　ヒト：２５５３９）；ビー・ブトレディ二７ ．　（Ｂ、ｐｕｔｒｅｄｉｎｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号・ヒト＋２７９０８．２９ ８００）；ビー・ルミニコラ（Ｂ、　ｒｕｍｉｎｉｃｏｌａ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ 番号：ヒト＋２７５１８＋動物：ウシ／１９１８８〜１９１８９）；ビー・スブ ランキニクス（Ｂ、　５ｐｌａｎｃｈｉｎｉｃｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号号、ヒト 　２９５７２）；ビー・テタイオタオミクロン（Ｂ。

ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｊｃｒｏｎ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：：ヒト：１２２９ ０．２９１４８．２９７４１〜２９７４２）：ビー・スクソノアネス（Ｂ、ｓｕ ｅｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号。

ウシ／１９１６９）；ビー・ウニフすルミス（Ｂ、　ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）　（ Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：８４９２）：ビー・ウシオリティクス（Ｂ、ｕｒｃｏｌｙｔ ｉｃｕｓ）　；ビー・プルガトウス（Ｂ、　ｖｕｌｇａｔｕｓ）　（Ａ、　Ｔ　 ＣＣ番号：　８４８２　；ヒト：２９３２７）をはじめとするバクテロイデス（ ＢａｃｔｅｒｏｉｄｅＳ）　；ｘ’７−ゴニジアフオルマンス（Ｆ、ｇｏｎｉｄ ｉａｆｏｒｍａｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号：　２５５６３）；！７・モルチフエル ム（Ｆ、＋ｎｏｒｔｉｆｅｒｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号＋９８１７；ヒト＋２５５ ５７）；エフ・ナビフォルメ（Ｆ、ｎａｖｉｆｏｒｍｅ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒ ト：２５８３２）、エフ・ネクロゲネス（Ｆ、ｎｅｃｒｏｇｅｎｅｓ）　（ＡＴ ＣＣ番号ニアヒル／２５５５６）；エフ・ネクロフォルム（Ｆ、ｎｅｃｒｏｐｈ ｏｒｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号＝２５２８６：ヒツジ／２７８５２）；エフ・ヌク レアトラム（Ｆ、ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号：１０９５３．２３７ ２６　：ヒト：２５５８６）：エフ・プラウティ（Ｆ。

ｐｌａｕｔｉ）　（ＡＴＣＣ番号：２９８６３）；エフ・ブラウスニツチイ（Ｆ 。

ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２７７６６）：エフ・ルッ シ（Ｆ、　ｒｕｓｓｉ）（ＡＴＣＣ番号：ネ：＋／２５５８３）：Ｌフ・ジンビ オスム（Ｆ、ｓｙ＋ｓｂｉｏｓｕｍ）　；ｚ７−バリウム（Ｆ、ｖａｒｉｕ＋ａ ）　（ＡＴＣＣ番号：８５０１．２７７２５）をはじめとするフッバクテリウム （Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕ＠）　；エル・ブッカリス（Ｌ、ｂｕｃｃａｌｉｓ ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：１４２０１，１９６１６．２３４７１．２３４７２ ）をはじめとするレブトトリチア（Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａ）　；（８）ｘピ ー・アエルギノサ（Ｐ、　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ｅ１ ０１４５゜１４２．７７００〜７７０１　：ヒト：９０２７．１０１９７．１４ ０２３〜１４２１３．１５１５２．１５６９２，１７４３４．１７６４８．１７ ６５７．１７９３３〜１７９３４．１９１４２〜１９１４３，１９４２９，１９ ６６０．２１７２６，２３２６８．２３９９２．２３９９４．２３９９６〜２３ ９９９．２５０００〜２５００４．２５０１０．２７３１２〜２７３１８，２９ ２６０，３３３４７．３３４６７〜３３４６８．３３４９４，１９５８２．１０ ７５２）：ピー・マルトフィラ（Ｐ。

ｍａｌｔｏｐｈｉｌａ）　（ＡＴＣＣ番号：１７８０６　；ヒト＋１３６３６． １３６３７．１５０９９．１７４４５．１７６７２．１７６７４，１７６７６． １７６７７）；ビー・スピーシズ（Ｐ、ｓｐ、）（ＡＴＣＣ番号：１９１５１， ２７１０９：）：：）＋２３７１３）をはじめとするシュードモナス（Ｐｓｅｕ ｄｏｍｏｎａｓ）　；（９）ｘアシネトバクタ−（＾ｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ）　；（１０）”エム・ラクナタ（Ｍ、１ａｃｕｎａｔａ）　（ＡＴＣＣ番号： ヒト：ｅ１７９６７．１１７４８，１７９７０，１７９７２；動物：モルモット ／１７９５６）；エム・オス０エンシス（Ｍ、ｏｓｌｏｅｎｓｉｓ）　（ＡＴＣ Ｃ番号ヒト：１９９７６．１７９７４．１９９５４〜１９９５６．１９９６５） ；エム・ノンリクエファエンスＣＭ。

ｎｏｎｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓＸＡ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト：　１９９７５，１ ７９５４．１７９７５）；エム・フェニルピルビ力（Ｆ、ｐｈｅｎｙｌｐｙｒｕ ｖｉｃａ）　（ＡＴＣＣ番号ヒト：１７９５８゜２３３３３〜２３３３５）： （１１）　！エイ・フェカリス（ＡＴＣＣ番号：ｅ８７５０；ヒト１３１３８゜ １５５５４．１９０１８）をはじめとするアルカリゲネス（＾ｌｃａｌｉｇｅｎ ｅｓ）　；（１２）”！イ・キシロソキシダンス（＾、ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎ ｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト　２７０６１〜２７０６３）をはじめとするアクロ モバクタ−（＾ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ） （１３）”イー・アエロファノエンス（Ｅ、　ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）　（Ａ 　Ｔ　ＣＣ番号：ヒ）：２５９８６．２９７３８）：イー・アラクトリティクム （Ｅ、　ａｌａｃｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２３２６３．２ ３２６４．１９３０１）；イー・ビフォルメ（Ｅ、　ｂｉｆｏｒ＋ａｅ）　（Ａ 　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト：２７８０６）；イー・ブダイ（Ｅ。

ｂｕｄａｙｉ）　（ＡＴＣＣ番号２５５４１）；イー・セルロソルベンス：イー ・コムベシイ（Ｅ、ｃｏｍｂｅｓｉｉ）　（ＡＴＣＣ番号：２５５４５）；イー ・コントルトラム（Ｅ。

ｃｏｎｔｏｒｔｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号・ヒト：２５５４０）：イー・シリ ンドロイデス（Ｅ、ｃｙｌｉｎｄｒｏｉｄｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：　２ ７５２８，２７８０３〜２７８０５）；イー・ドリクム（Ｅ、ｄｏｌｉｃｕｍ） 　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：　２９１４３〜２９１４４）、イー・エリゲンス（Ｅ 、ｅｌｉｇｅｎｓ）　；イー・フォルミンゲネランス（Ｅ。

ｆｏｒｍｉｃｉｇｅｎｅｒａｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２７７５５）：イ ー・ハリイ（Ｅ。

ｈａｌｉｉ）イー・レンツム（Ｅ、ｌｅｎｔｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号・ヒト：２ ５５５９）；イー・リモスム（Ｅ、１ｉ＋＊ｏｓｕｉ）　（ＡＴＣＣ番号：８４ ８６，１０８２５）；イー・モ二り７ｔルメ（Ｅ、ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｏ＋ｅ） 　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２５５４６）；イー・ムルチ７ｔルメ（Ｅ、ｍｕｌｔ ｉｆｏｒｍｅ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２５５４６）：イー・ニトリトゲネス （Ｅ、ｎｉｔｒｉｔｏｇｅｎｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号：２５５４７）；イー・ラ ムルア、　（Ｅ、　ｒａｍｕｌｕｓ）　、　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト：２９０ ９９）：イー・レフタレ（Ｅ。

ｒｅｃｔａｌｅ）　；イー・ルミナチウム（Ｅ、　ｒｕｍｉｎａｔｉｕｍ）　（ Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ウシ／１７２３３）：イー・サブレアム（Ｅ、ｓａｂｕｒｒ ｅａｍ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：　３３２７１．３３３１８．３３３１９）＋ イー−７ラエウム（Ｅ、ｓｉｒａｅｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号ヒト＋２９０６６） ；イー・テヌ１（Ｅ、ｔｅｎｕｅ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２５５５３）、イ ー・トルツオスム（Ｅ、ｔｏｒｔｕｏｓｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号、シチメンチョ ウ／２５５４８）：イー・ペントリオスム（Ｅ、　ｖｅｎｔｒｉｏｓｕｍ）　（ Ａ　Ｔ　ＣＣ番号＝２７５６０）をはじめとするニーバクテリア（Ｅｕｂａｃｔ ｅｒｉａ）　：（１４）”以下のものを包含するペブトコッカセアエ（Ｐｅｐｔ ｏｃｏｃｃｕｃｅａｅ）科ピー・アサッカロリティクス（Ｐ、ａｓａｃｃａｒｏ ｌｙｔｉｃｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：１４９６３、ヒト　２９７４３）：ピー・ マグムス（Ｐ、　ｍａｇｎｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号・１４９５５’、１５７ ９４＋ヒト：１４９５６．２９３２８）；ビー・プレボテイイ（Ｐ。

ｐｒｅｖｏｔｉｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト＋９３２１．１４９５２）；ビ ー・サラカロリティクス（Ｐ、５ａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）　（ＡＴＣＣ 番号：ヒト：１４９５３）：ビー・パリアビリス（Ｐ、ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ） 　（ビー・マグヌス（Ｐ、　ｍａｇｎｕｓ）参照）をはじめとするベブトコッカ ス（Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）　：ピー・アナエロビウス（Ｐ、ａｎａｅｒｏｂ ｉｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：２７３３７）；ビー・ミクロス（Ｐ、　ｍ１ｃｒｏ ｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号　ヒト：３３２７０）；ビー・パルブルス（Ｐ、ｐａ ｒｖｕｌｕｓ）　；ピ・−・プロダクトウス（Ｐ、ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ）　（Ａ ＴＣＣ番号：ヒト２７３４０）をはじめとするベブトストレブトコッカス（Ｐｅ ｐｊｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）　；アール・アルプス（Ｒ，ａｌｂｕｓ） 　（ＡＴＣＣ番号：ウシ／２７２１１）Ｈアール・ブロミイ（Ｒ，ｂｒｏｍｉｉ ）　（ＡＴＣＣ番号・ヒト：２７２５５）；アール・フラベファエンス（Ｒ，ｆ ｌａｖｅｆａｃｉｅｎｓ）　；アール・ラクタリス（Ｒ，］ａｅｔａｒｉｓ）　 （ＡＴＣＣＩＭ：ヒト：２９１７６）；アール・オベウム（Ｒ，ｏｂｅｕｍ）　 （ＡＴＣＣ番号・ヒト：２９１．７４＞：アール・トルケス（Ｒ，ｔｏｒｑｕｅ ｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２７７５６）をはじめとするルミノコッカス（Ｒ ｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）　；サルシナ・ベントリクリ（Ｓａｒｃｉｎａ　ｖｅ ｎｔｒｉｃｕｌｉ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号＋２９０６８゜２９０６９）をはじめ とするサルシナ（Ｓａｒｃｉｎａ）　；（１５）　”ビー・アドレセンティス（ Ｂ、ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：１５７０３〜１５７ ０６）：ビー・アングラトラム（Ｂ、　ａｎｇｕｌａｔｕｍ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ 番号：２７５３５，２７６６９．２７６７０．２７６７１）；ビー・ビフィドウ ム（Ｂ、ｂｉｆｉｄｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：１１１４６，１１１４７， １１６８３．１５６９６．２９２５１）；ビー・ブレベ（Ｂ、ｂｒｅｖｅ）　（ ＡＴＣＣ番号：ヒト：１５６９８〜１５７０１）：ビー・カテヌラトウム（Ｂ、 ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号・ヒト２７５３９，２７６７５〜２ ７６７７）：ビー・コルヌトウム（Ｂ、ｃｏｒｎｕｔｕｍ）　；ビー・デンティ ウム（Ｂ、ｄｅｎｔｉｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：１５４２３〜１５４２４ ．２７５３４．２７６７８〜２７６８０）；ビー・エリクシニイ（Ｂ、ｅｒｉｋ ｓｏｎｉｉ）　；ビー・インファンテイス（Ｂ、１ｎｆａｎｔｉｓ）　（ＡＴＣ Ｃ番号ヒト：１５６９７，１５７０２．１７９３０．２５９６２．２７９２０） ；ビー・ロンラム（８，１ｏｎｇｕ１１）　（ＡＴＣＣ番号・ヒト：０５７０７ 〜１５７０８）；およびビー・ンユードロングム（Ｂ、ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕ ｗ）　（ＡＴＣＣ番号：動物・ブタ／２５５２６、ウソ／２５８６４〜２５８６ ５）をはじめとするビフイドバクテリア（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）　； （１６）”シー・アセトブチリラム（Ｃ，ａｃｅｔｏｂｕｔｙｌｉｃｕｍ）　（ ＡＴＣＣ番号：８２４．３６２５．４２５９．８５２９．１０１３２）；シー・ アミノバレリクム（Ｃ。

ａｍｉｎｏｖａｌｅｒｉｃｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号　１３７２５）＋シー・アン ランテイブチリラム（Ｃ，ａｕｒａｎｔｉｂｕｔｙｌｉｃｕｍ）　（ＡＴＣＣ番 号＋１７７７７）ニジ−・ノくラテイ　（Ｃ。

ベノヤリンキイ（Ｃ，ｂｅｊｅｒｉｎｋｉｉ）　（ＡＴＣＣ番号＋８５８．６０ １４，１１９１４゜６１）、シー・ネクシレ（Ｃ，ｎｅｘｉｌｅ）　（Ａ　Ｔ　 ＣＣ番号・ヒト：２７７５７）；シー・オセアニクム（Ｃ，ｏｃｅａｎｉｃｕｍ ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：　２５６４７〜２５６４９）ニジ−・オロティクム（ Ｃ，ｏｒｏｔｉｃｕｍ）　；　ン−・バラブトリフイクム（Ｃ，ｐａｒａｐｕｔ ｒｉｆｉｃｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号：１７７９６．１７８６４．２５７８０）； シー・ノぐステウリアヌ（Ｃ，ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｍ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番 号＋６０１３．７０４０〜７０４１）：シー・ベルフリンゲンス（Ｃ，ｐｅｒｆ ｒｉｎｇｅｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト＋１２９１８〜１２９２０，１９５７ ４　；動物：ニワトリ／１４８１０．子ヒツジ／１０３８８゜３６２９．３６２ ７．３６２６）ニジ−・ブラガルム（Ｃ，ｐｌａｇａｒｕｍ）　；シー・シュー ドテタニクム（Ｃ，ｐｓｅｕｄｏｔｅｔａｎｉｃｕｍ）　；シー・ブトレファン エンス（Ｃ，ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号　２５７８６）；シ ー・サルタゴファルムム（Ｃ。

ｓａｒｔａｇｏｆａｒｍｕｍ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：２５７７８）；シー・セ プテイクム（Ｃ。

ｓｅｐｔｉｃｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号＋　６００８〜６００９．８０５３〜８０ ５４．８０６５゜１１４２４．１２４６４）：シー・ソルデリイ（Ｃ，５ｏｒｄ ｅｌｉｉ）　（ＡＴＣＣ番号。

９７１４）；ノーースフエノイデス（Ｃ，５ｐｈｅｎｏｉｄｅｓ）　（Ａ　Ｔ　 ＣＣ番号：３５６０゜１９４０３）；シー・スポロスフェロイデス（Ｃ，５ｐｏ ｒｏｓｐｈｅｒｏｉｄｅｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：２５７８１）＋シー・スブ テルミニアエ（Ｃ，ｓｕｂｔｅｒｍｉｎｊａｅ）　（ＡＴＣＣ番号：２５７７４ ．２９７４８）；およびノー・チルチウム（Ｃ，ｔｅｒｔｉｕｍ）　（ＡＴＣＣ 番号：１４５７３．１９４０５）をはじめとするクロストリシア（Ｃ１ｏｓｔｒ ｉｄｉａ）　；（１７）”アジドアミノコツカス・フェルメンタンス（＾ｃｉｄ ａａ＋ｉｎｏｃｏｃｃｕｓｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ブタ 腸／２５０８５〜２５０８８）：（１８）”シーーｘウタクトウス（Ｃ，ｅｕｔ ａｃｔｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト＝２７７５９）；シー・カドウス（Ｃ，ｃ ａｔｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒｈ：２７７６１）；シー・コメス（Ｃ，ｃｏｍ ｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト＋２７７５８）をはじめとするコブロコツカス（ Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）　；（１９）”ゲミゲル・フオルミシリス（Ｇｅｍｉ ｇｅｒｆｏｒｍｉｃｉｌｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号・２７７４９） （２０）”メガスフエラ・エルスデニイ（Ｍｅｇａｓｐｈｅｒａｅｌｓｄｅｎｉ ｉ）　（ＡＴＣＣ番号：１７７．５２〜１７７５３；動物：ブタ／２５９４０） ：（２１）′ｘエイ・ナニスルンディイ（＾ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ）　（ＡＴＣ Ｃ番号：ヒト＝１．２１０４，１９０３９．２７０３８〜２７０４０）：および エイ・オドントリティクス（＾ｏｄｏｎｔｏｌｙｔｉｃｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号 ：ヒト：１７９２９，１７９８２．２９３２３）をはじめとするアクチノミセス （＾ｃｔｉｎｏ１１ｙｃｅｓ＞　：（２２）”アラクニア・プロピオニ力（＾ｒ ａｃｈｎｉａ　ｐｒｏｐｆｏｎｉｃａ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：ヒト：１４１５ ７．２９３２４〜２９３２６）；（２３）”ラチノスピラ・ムルチポルス（Ｌａ ｃｈｎｏｓｐｉｒａＩｌｌｕｌｔｉｐｏｒｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号、ウシ／１９ ０２７）； （２４）”ビー・アクネス（Ｐ、ａｃｎｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：２９３ ９９．３３１７９．６９１９．６９２１〜６９２３，１１８２７．１１８２８） ＋ビー・アビドラム（Ｐ、ａｖｉｄｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号＋２５５７７）＋ピ ー・グラヌロスム（Ｐ。

ｇｌａｎｕｌｏｓｕｍ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：２５５６４）；およびビー・ン エンセニイ（Ｐ。

ｊｅｎｓｅｎｉｉ）　（ＡＴＣＣ番号：　４８６７〜４８７１．４９６４．１４ ０７３）をはじめとするプロビオノバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｏｂａｃｔｅ ｒｉｕ＋ｏ）　：（２５）”ベイロネラ・パルブラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｐ ａｒｖｕｌａ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒト：１０７９０）： （２６）”ブチリビブリオ・フィブリツルベン７、　（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉ 。

ｆｉｂｒｉｓｏｌｖｅｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号　ウソ／１９１７１．２７２０８ ）：（２７）ディー・ニグリフィカンス（Ｄ、ｎｉｇｒｉｆｉｃａｎｓ）　（Ａ ＴＣＣ番号＝１９９９８．７９４６．１９８５８）；ディー・ルミニス（Ｄ、ｒ ｕｒＡｉｎｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ヒツジ／２３１９３）；ディー・オリエン ティス（Ｄ、ｏｒｉｅｎｔｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号　１９３６５）をはじめとす るデスルフォトマクルム（Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏ＋ｏａｃｕｌｕｍ）　；（２８） ”デスルフォ？ナス・ピグラ（Ｄｅｓｕｌｆｏｍａｎａｓ　ｐｉｇｒａ）　；（ ２９）”オシロスビラ・グイレルモンディイ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ　ｇｕ ｉｌｌｅｒｍｏｎｄｉｉ）：（３０）”セレノモナス・ルミナティウム（Ｓｅｌ ｅｎｏＩＩｌｏｎａｓ　ｒｕｍｉｎａｔｉｕｍ）　（ＡＴＣＣ番号、つ／／１９ ２０５）； （３１）”スシニモナル・アミロリティ力（Ｓｕｃｉｎｉｍｏｎａｌ　ａｍｙｌ ｏｌｙｔｉｃａ）　；（３３）”スクンニビブリオ・デキストリノソルベンス（ Ｓｕｃｃｉｎｉｖｉｂｒｉ。

ｄｅｘｉｔｒｉｎｏｓｏｌｖｅｎｓ）　（ＡＴＣＣ番号・乳牛／１９７１６）＋ （３４）”アエロコツカス・ビリダンス（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｖｆｒｉｄａ ｎｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：１０４００．１１５６３．２９５０３．２９８３ ８）；（３５）”ビー・セレウス（Ｂ、ｃｅｒｅｕｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ｅ１ ４５７９．２，２４６．４３４２．６４６４，７００４．７０３９，９１３９， ９８１８　；　ｌ：、’７ジ／１２４８０）：ビー・スブチリス（Ｂ、５ｕｂｔ ｉｌｉｓ）　（ＡＴＣＣ番号：ｅ６０５１．８２゜４６５．４５２９）をはじめ とするバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）　；（３６）”コリネバクテ１功ム・スビ ーシズ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｓ　５ｐｃｉｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号： 　６９３１．６９３３．６９３５〜６９３８．９７３６〜９７４４　；ヒト＋１ ３９５９〜１３９６２，１５９２７．１７８９２＋動物：マウス／１１０３５、 ウシ／９７３９〜９７４１）； （３７）”ミクロコツカス・スビー７ズ（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　５ｐｅｃｉ ｅｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ番号　９２７４．１２０８４．１３５５３〜１３５５５ ．２１８２９）（３８）ミクロコツカス・ニューモニアエ（Ｄｉｐｌｏｃｏｃｃ ｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）　（ＡＴＣＣ番号　６３０３）をはじめとするミ クロコツカス。

ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａ） 　（ＡＴＣＣ番号；９３３３）をはじめとするヘモフィルス。

（４０）”ノカルディア・スピーシズ（Ｎｏｃａｒｄｉａ　５ｐｅｃｉｅｓ）　 （Ａ　Ｔ　ＣＣ番号：１２２８８．１３６３５．１４５５８〜１４５５９，１５ ０７４．１９１７０，１９５３４、２１１４５．２１１４７．２１４３０．２１ ５１９．２７９４２．２９１００゜２９６６４．３１２３３，３１２８０，３１ ２８１．３１３１９）；および（４１）Ｘペディオコッカス・スビーシズ（Ｐｅ ｄｉｏｃｏｃｃｕｓ　５ｐｅｃｉｅｓ）　（ＡＴＣＣ番号・８４５９）。

８デイビス（Ｄａｖｉｓ）ら、「マイクロバイオロジー（Ｍｉｃｒｏｂｏｉｌｏ ｇｙ）　Ｊ第３版。

第３１〜３３ｔ、ハーバ−・アンド・ロウ（Ｈａｒｐｅｒ　＆　Ｒｏｗ）　（１ ９８０年）、ドレイサー、−ビー・ニス（Ｄｒａｓａｒ、Ｂ、Ｓ、）　ｒロウル ・オン・ザ・ゲート・フローラ・イン・トキンンティー・アンド・キャンサー（ Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｇｕｔ　Ｆｌｏｒａ　１ｎＴｏｘｉｃｉｔｙ　ａｎｄ 　Ｃａｎｃｅｒ）　Ｊ　、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓ ｓ）　、　３４〜３６頁（１９８８年）、メリーランド州ロックビル（Ｒｏｃｋ ｖｉｌｌｅ）のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクンヨン、カタログ・オ ン・ストレインズ　Ｉ（Ｃａｔａｌｏｇｕｅ　ｏｆ　５ｔｒａｉｎｓ　Ｉ）第１ ５版、５７〜２３０頁（１９８２年）参照。これらの全内容を本明細書の記載に 取り込ませる。

ヒトまたは動物の消化管に存在するいかなる細菌であっても本発明のワクチンに おける使用に適している。上に掲載した細菌から適当な細菌を選択することは当 業者の知識の範囲内である。上に掲載されていない他の細菌を選択することも当 業者の知識の範囲内である。

ｂ動物に対する高度免疫乳の効果の試験本発明高度免疫孔の効果を以下のように して試験することができる：（１）餌 本発明高度免疫孔とともに、いかなる一般的な栄養食であっても試験動物に与え ることができる。「一般的な栄養食」は、対象とする特定の種の個体を良好な健 康状態に維持するために用いる餌をいう。例えば、通常は、多くの供給元から市 販されているマウス用餌をマウスに与える。高度免疫乳をいかなる形態で与えて もよいが、好ましくはスキムミルク粉末の形態で与える。老動物または免疫損傷 した動物における腸内細菌の転座により引き起こされる感染を効果的に予防する のに十分な量のみならず、免疫機能低下を予防、遅延、あるいは低下している免 疫機能を回復するのに十分な量のスキムミルク粉末を与える。

動物がマウスである場合には、好ましい餌は以下のものからなる。約７０ないし 約９０重量パーセントのキムミルク粉末；約４ないし７重量パーセントのグリセ ロール：約２ないし５重量パーセントのベニバナ油：約３ないし８重量パーセン トのＡｌＮ−７６のごとき無機塩類混合物、約１ないし３重量パーセントのＡＬ Ｎ−７６のごときビタミン混合物；約１ないし３重量パーセントのメチオニン： および約１１ないし約４５重量パーセントのコリンバイタータラート（ｃｏｌｉ ｎｅ　ｂｉｔａｒｔａｒａｔｅ）からなる、昆合物。

適当な対照餌としては、本発明高度免疫孔が対照乳て置き換えられた栄養食であ ればいかなるものでもよい。

（ｉｉ）乳試料 上記のごと（、本発明高度免疫孔を温度調節下で製造する。高度免疫乳を、一般 的に知られたいかなる方法によっても試験し、抗体活性が維持されていることを 確認することができる。抗体活性が存在することを確認するための高度免疫乳の 試験方法としては、例えばＥＬＩＳＡ法が挙げられる。

（ｉｉｉ）細菌の検出 腸内細菌に対する高度免疫乳の効果を調べるために、動物の小腸、大腸または結 腸の小片を、何等かの適当な培地中、例えばハート・インフユージコン・ブロス （ｈｅａｒｔ　１ｎｆｕｓｉｏｎ　ｂｒｏｔｈ）　（ミズーリ州デトロイト（Ｄ ｅｔｒｏｉｔ）のディフコ・ラボラトリーズ（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ ｉｅｓ）製）中で、細菌の活性を維持し、細菌の人為的な増殖を抑制するために 氷上で、よく知られた方法によりホモジナイズすることができる。ついで、ホモ ジナイズした腸の希釈物をペトリ皿中の適当な培地、例えばマツコンキー（Ｍａ ｃＣｏｎｋｅｙ’　ｓ）寒天中に入れ、適当時間、例えば１８〜４８時間、３７ ℃でインキュベーションし、コロニー数を数えて消化管中の腸内細菌科の数を決 定することができる。本発明高度免疫孔は、対照乳を与えた動物において観察さ れる数と比較すると、大腸および結腸中の腸内細菌科の数を減少させる。

（ｉｖ）消化管から転座した細菌の侵入レベルの評価動物の胃腸消化管から転座 した細菌の侵入レベルを評価するために、高度免疫乳投与前および投与後におい て腸粘膜細菌に対する抗体の血清中のレベルを測定することができる。

腸内細菌に対する抗体の血清中のレベル測定するために、当該分野におけるいず れの方法、例えば酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＩｊＳＡ）を用いてもよい。

本発明高度免疫孔は、対照乳を与えた動物において観察されるレベルと比較する と、腸内細菌に対する抗体レベルを減少させる。

（Ｖ）老化に関連し７たＧＡＬＴ細胞の免疫学的機能低下に対する高度免疫乳の 防御的効果Ｇ　Ａ、　Ｌ　Ｔ細胞の免疫学的機能に対する高度免疫乳の効果を調 べるために、まず、ＩＥＬ数を調べる。

腸上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を、当該分野で知られたいかなる方法、例えばグツ ドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）ら（ジャーナル・オン・イクスペリメンタル・メディ ソン（Ｊ。

Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　）第１７０巻：１５６９−１５８１頁（１，９８９年）） により記載された方法の変法によっても単離することができる。

ＩＥＬにおいて、本発明高度免疫孔は、対照乳を与えられた動物において見られ る細胞数と比較すると、正常な老化に関連したＣＤ４−ＣＤ８−細胞の増加を阻 害した。さらに、ＩＥＬにおいて、本発明高度免疫孔は、対照乳を与えられた動 物において見られる細胞数と比較すると、Ｔｈｙｌ’αβＴｃＲを有する細胞を 増加させる。Ｉ＼（ＬＮにおいて、本発明高度免疫孔は、対照乳を与えられた動 物において見られる数と比較すると、ＣＤ４”細胞の数を減少させた。

胸腺、膵臓、腸間膜リンパ節およびＩＥＬ細胞を、よく知られた流動細胞蛍光測 光分析法（ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｆｌｕｏｒｏｎｅｔｒｉｃ　ａｓｓｅｙ　ｍｅｔ ｈｏｄｓ）を用いて分析することができる。例えば、例えば実施例１に示すよう にモノクローナル抗体を用いて新鮮細胞を染色することができる。ついで、染色 された細胞を、例えば単ビーム流動細胞測光装置（ベクトン・ディキンマン（Ｂ ｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）のＦＡＣ３ｃａｎ）で分析することができる 。前方および横の角度の光散乱を用いて死細胞および凝集細胞を除外することが できる。ついで、既知方法を用いて集めたデータを分析することができる。例え ば、２色分析の場合においてはコンソート３０リサーチソフトウエア（Ｃｏｎｓ ｏｒｔ　３０　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｓｏｆｔｗａｒｅ）で、３色分析の場合にお いてはＦＡＣ３ｃａｎリサーチソフトウェア（ＦＡＣ３ｃａｎｒｅｓｅａｒｃｈ 　ｓｏｆｔｗａｒｅ）で、データを分析することができる。

（ｖｌ）細胞溶解活性の増大 ＩＥＬは独特なＣＤ３”Ｔ細胞数を示す（ＣＤ３’Ｔ細胞は細胞溶解活性を示し 、細菌およびウィルスの侵入に対する局所的な免疫防御において重要な役割を果 たしている）。

高度免疫乳を与えられた動物において、抗−ＣＤ３モノクローナル抗体の存在下 の腫瘍細胞（例えばＰ８１５）に対して再指向されたＩＥＬの細胞溶解活性を、 既知方法（例えば、グツドマンら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）第３３３巻：８ ５５〜８５７頁（１９８８年）に開示された再指向細胞溶解アッセイ）によりア ッセイすることができる。本発明高度免疫孔は、対照乳を与えられた動物におい て観察される活性と比較すると、腫瘍細胞に対する増大した細胞溶解活性をもた らす。

さらに、活性は、若い動物において観察されるのとほぼ等しいレベルに維持され た。

（ｖｉｉ）有糸分裂誘発性刺激 ＭＬＮ細胞において、有糸分裂誘発因子に対する増殖応答は、動物の老化に伴い 減少する。本発明高度免疫孔は、対照乳を与えられた動物において観察される応 答性と比較して、有糸分裂誘発因子に対するＭＬＮ細胞の老化に関連した応答性 低下を抑制する。

一般的に知られたいずれの方法を用いてもＭＬＮ細胞を有糸分裂誘発因子に対す る応答性に関してアッセイすることができる。例えば実施例１参照。

また、本発明高度免疫孔は、同種異型抗原に対する増殖応答の低下から動物を有 意に防御する。

（ｖｉｉｉ）老化に関連した免疫応答低下に対する全身免疫後の高度免疫乳の防 御効果 老化に関連した免疫機能低下に対する高度免疫乳の全身的効果を評価するために 、ＰＦＣアッセイを行うことができる。詳細には、ヒツジ・赤血球細胞（ＳＲＢ Ｃ）で免疫後、５ＲＢＣに対する肝臓中のプラーク形成細胞について動物をアッ セイすることができる。例えば実施例１に示す方法、すなわちジエーシーノーデ ン（Ｊｅｒｎｅ−Ｎｏｒｄｅｎ）スライド法の変法をはじめとするよく知られた いかなる方法によってもかかるアッセイを行うことができる。本発明高度免疫孔 は、膵臓細胞の抗−ヒツジ赤血球抗体を産生ずる能力の低下を予防する。

（１ｘ）老化したマウスにおける抗ＤＮＡ抗体の血清中のレベル老化に関連した 免疫不全に対する高度免疫乳の効果を評価するために、若い動物および老いた動 物由来の血清中の抗−５ｓＤＮＡ自己抗体の産生を試験することができる。例え ば、若いマウスおよび老いたマウス由来の血清を試験することができる。より詳 細には、約７ないし９力月齢のマウス由来の血清を、約１５ないし１７力月齢の マウス由来の血清と比較することができる。以前報告されたように（カド（Ｃａ ｔｏ）ら、エイソング・イムノロ・インフエ・ディシーズ（ＡｇｉｎｇＩｍｍｕ ｎｏｌ、　Ｉｎｆ、　Ｄｉｓ、）第１巻　１７７〜１９０頁（１９８８年））、 血清中の自己抗体の存在は、老化とともに増加する。

本発明高度免疫孔は、対照乳を与えられた動物において観察される血清中のレベ ルと比較すると、抗−ＤＮＡ自己抗体の血清中のレベルの増加を抑制する。例え ばＥＬＩＳＡ、ＲＩＡまたは免疫ブロンティングをはじめとするよく知られた方 法を用いて自己抗体を検出することができる。

特定の実施例を用いて本発明を説明するが、それは単に説明のためだけであって 、特に断らない限り本発明を限定するものでない。

実施例 実施例１ 免疫学的機能に対する高度免疫乳の効果ａ材料および方法 （１）マウス　６週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスを、静岡のジャパンＳＬ　 Ｃ０ａｐａｎ　５ＬＣ）から購入した。前以て２週間飼育した後、各群のマウス に、栄養成分混合物（表１）を含有する高度免疫乳または対照スキムミルク食を １４力月にわたり与えた。マウスを８力月齢および１６力月齢において屠殺して 免疫学的プロフィールを調べた。

表１ 使用した餌の組成 スキムミルク”　８１．５ 無機塩類混合物　５８ ビタミン混合物　１．７ （ｃｏｌｉｎｅ　ｂｉｔａｒｔａｒａｔｅ）　０．３疫した後乳牛から得られ、 抗体活性を維持するために温度調節下で製造されたものである。もう１つは免疫 されていない乳牛から得られ、標準的条件下で製造されたものである。他の成分 は福岡のクロダ（Ｋｕｒｏｄａ）から購入した。

＝ビタミンおよび無機塩類組成物はタケット（Ｔａｃｋｅｔ）ら、ニュー・イン グランド・ジャーナル・オン・メディ／ン第３８１巻＋１２４０〜１２４３頁（ １９８８年）に報告されている。ビタミン、コリン、メチオニン、無機塩類、乳 、浦およびグリセロールを混合した。混合物を４℃に維持した。１２０ｇ／体重 ｋｇ／日の餌を動物室で計量し、マウスのケージに入れた。

（ｉｉ）乳試料　種々のヒト・腸内細菌抗原（表２）に対して高度免疫された乳 牛から得られたスキムミルク粉末および対照スキムミルク粉末を、ストール・ミ ルク・バイオロジクス・インターナショナル（ＳＭＢｌ、オハイオ州シンシナチ ）から得た。抗体活性を維持するために高度免疫乳は温度調節下で製造された。

高度免疫乳の栄養成分は対照乳と同じであった（ゴレイら、アメリカン・ジャー ナル・オン・クリニカル・ニュートリジョン第５２巻：１０１４〜１０１９頁（ １９９０年））。ＩｇＧおよびヒト・腸内細［！（表２）に対するＩｇＧ抗体活 性は、対照乳におけるよりも高度免疫乳において有意に高かった。

表２ Ｓ−１００細菌リスト 表２（続き） （ｉｉｉ）細菌の検出　小腸、大腸および結腸の小片を、ハート・インフユーン ヨン・ブロス（ｈｅａｒｔ　１ｎｆｕｓｉｏｎ　ｂｒｏｔｈ）　（ミズーリ州デ トロイトのディフコ・ラボラトリーズ製）中で、細菌の活性を維持し、細菌の人 為的な増殖を抑制するために氷上で、よく知られた方法によりホモジナイズした 。ついで、ホモジナイズした器管の希釈物をベトリ皿中のマツコンキー寒天に撒 き、３７℃で１８〜４８時間インキュベーションし、コロニー数を計数した。

（ｉｖ）Ｅｌｉｓａ　酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を行って腸内細 菌（表２）に対する抗体およびＤＮＡに対する自己抗体の血清中のレベルを測定 した。簡単に説明すると、抗細菌抗体アッセイについては、０，１ｍｏｌ／Ｌホ ウ酸緩衝液（ｐＨ８，５）中熱殺菌した細菌５０ｕｌ　（１，６μｇ／ｍＬ；　 ５ＭＢ１から寛大にも提供された；表２）を９６−ウェルのＥＴＡプレート（マ サチューセノツ州ケンブリッジ（ＣａＩＱｂｒｉｄｇｅ）のコスタ−（Ｃｏｓｔ ｅｒ）社製）に入れた。

抗ＤＮＡ自己抗体アノセイニツイては、１本鎮ＤＮＡ５０μ＋　（１０μｇ／ｍ Ｌ）をウェルに入れた。各試料を４℃で一晩保存した。その後、プレートを１０ ｇ／ＬのＢＳＡ溶液でブロックし、０．５ｇ／Ｌツイ：／　（Ｔｗｅｅｎ）　２ ０リン酸緩衝化セイライン（Ｐ　Ｂ　Ｓ）溶液で３回洗浄して非特異的付着を防 止した。ついで、血清希釈物５０μＬ（ツイン／ＰＢＳ溶液で３３倍希釈）を各 ウェルに入れた。プレートを室温で２時間インキュベーションし、ついで、洗浄 した。さらに、５０μＬのアルカリホスファターゼに結合したヤギ・抗マウスＩ ｇＧ（ツイン／ＰＢＳでの１０００倍希釈物、カリフォルニア州バーリンゲイム （Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ）のタボ（Ｔａｇｏ）社製）を各ウェルに入れた。プレ ートを室温に２時間保ち、ついで、４回洗浄した。最後に、５０μＬの発色剤（ ｐ−ニトロフェニルホスファートモノエタノールアミン１００ｇ／Ｌ）を各ウェ ルに入れることによりウェルの発色を開始した。発色反応を３ｍｏｌ／ＬのＮａ ＯＨで停止した。得られた発色を、マイクロプレートフォトメーター（ザルツブ ルク（Ｓａｌｚｂｕｒｇ）のＳＬＴ社のＥＡＲ４００）により４９２ｎｍにおい て測定した値を参考にして４０５ｎｍにおける吸光度として測定した。

（Ｖ）ネズミ・ＩＥＬの精製　腸の上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を、以前グツドマ ン（Ｇｏｏｄｍａｎ）　（グツドマンら、ジャーナル・オン・イクスペリメンタ ル・メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　）第１７０巻：１５６９〜１５８ １頁（１９８９年））により記載された方法の変法により単離した。簡単に説明 すると、小腸を５ｍｍの小片に切り、ついで、１ｍＭのジチオスレイトール（ミ ズーリ州セントルイスのシグマ社製）を添加した培地１９９にューヨーク州のグ ランド・アイランド（Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ）のギブコ（ＧＩＢＣＯ）社製 ）中、３７℃で撹拌した。ついで、リンパ球および上皮細胞の混合物を３０／６ ７．５％パーコール（Ｐｅｒｃｏｌ）勾配（ベテト（Ｐｅｔｅｔ）ら、ヨーロピ アン・ジャーナル・オン・イミュノロジー（Ｅｕｒ、　Ｊ。

Ｉ＋ｕ＋ｕｎｏ１．　）第１３８巻：１６４７〜１８５２頁（１９８７年）、ソ ントニ（Ｓｏｎｔｏｎｉ）ら、ジャーナル・オン・イミュノロン−（Ｊ、　Ｉｍ ｍｕｎｏｌ、　）第１３４巻：２７９９〜２８０７頁（１９８５年））により遠 心分離した。

（ｖｉ）流動細胞蛍光測光分析　新鮮な胸腺細胞、膵臓細胞、腸間膜リンパ節（ ＭＬＮ）細胞およびＩＥＬを、以下のモノクローナル抗体を用いて染色した：Ｈ ５７−５９７　（抗ＴｃＲβ鎖（コロラド州デンバー（Ｄｅｎｖｅｒ）のナショ ナル・ンユーイソンユ・センター・フォー・イミュノロジー・アンド・レスピラ トリー・メデイシン（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｅｗｉｓｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ 　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｒｅ５ｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄ奄モ■ ｎｅ）のアール・コポ（Ｋｏｂｏ）博士から親切にも提供された）；ＣＬ３（抗 ＴｃＲγ／δ（カリフォルニア州サン・ディエイ（Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ）のファ ーミジェ（ＰｈａｒＭｉｇｅｎ）社製）；　１４５−２Ｃ１１（抗ＣＤ３ε鎖（ イリノイ州シカゴ大学のジェイ・エイ・ブルーストーン（Ｊ、＾、　Ｂｌｕｅｓ ｔｏｎｅ）博士から親切にも提供された）：ビオチン結合抗Ｔｈｙ１．２　（カ リフォルニア州すンフランシスコのカルタグ（Ｃａｌｔａｇ）社製、ビオチン結 合抗Ｌｙｔ２およびフィコエリスリン結合抗Ｌ３Ｔ４　（両方ともベクトン・デ ィキンマン（Ｂ６ｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）から得た）。

他の試薬はフィコエリスリン結合ストレプトアビジンおよびＤｕｏＣＨＲＯＭＥ 結合ストレプトアビジン（両方ともベクトン・ディキンマンから得た）であった 。

染色試料を単ビーム流動細胞測光器ＦＡＣ５ｃａｎで分析した。前方および横の 角度の光散乱を用いて死細胞および凝集細胞を除外した。２色分析の場合にはコ ンソート３０−リサーチ・ソフトウェア（Ｃｏｎｓｏｒｔ３０　Ｒｅ５ｅａｒｃ ｈ　５ｏｆｔ＋ｗａｒｅ）　（ベクトン　ディキンマン）でデータを分析し、３ 色分析の場合にはＦＡＣＳＣＡＮ・リサーチ・ソフトウェアで分析した。

（ｖｉｉ）再指向細胞溶解アッセイ　Ｆｃ受容体’ＤＢＡ／２幹細胞腫Ｐ８１５ 細胞（グツドマンら、ネイチャー第３３３巻、８５５〜８５７頁（１９８８年） ）に対する溶解活性についてＩＥＬを分析しこ。新たに単離したＩＥＬを、ＣＤ ３複合体のε艙に対して特異的な１μｇ／ｍＬのモノクローナル抗体（２Ｃ１１ ）とともに前以てインキュベーションしておいた１、５Ｘ１０３個の５１Ｃｒ− クロム酸ナトリウム標識Ｐ８１５標的細胞といっしょにウェルあたり１０’個と して９６ウエル丸底マイクロタイタープレート中、３７℃で４時間インキュベー ションした。特異的溶解のパーセント値を、１００Ｘ　［（エフェクターととも に放出されたｃｐｍ数）−（単独で放出されたｃｐｍ数）］］計（界面活性剤に より放出されたｃｐｍ数）−（単独で放出されたｃｐｍ数）］として計算した。

（ν１ｉｉ）有糸分裂誘発性刺激　腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）細胞を有糸分裂誘 発剤に対する応答性についてアッセイした。新鮮なＭＬＮ細胞を、３７℃で６８ 時間、１μＬ／ｍＬのＰＨＡ−Ｐ　（ファセオルス・ブルガリス（Ｐｈａｓｅｏ ｌｕｓνｕ１ｇａｒｉｓ）凝集素：ミズーリ州デトロイトのディフコ社製）とと もにウェルあたり２．５ｘｌＯ’細胞として９６ウエルプレートで培養した。３ ７ＭｂＱの［メチル−３）（］チミンンを各ウェルに添加し、さらに４時間イン キュベーションを行った。細胞を収穫した後、ベータープレート・システム（Ｂ ｅｔａ−Ｐｌａｔｅ　５ｙｓｔｅ園）（スウェーデンのウプサラ（ｕｐｐｓａｌ ａ）のファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製）を用いることにより試料をカ ウントした。培地と同体積の培養試料を有糸分裂誘発剤のかわりに添加してリフ ァレンス対照として用いた。特異的刺激率（Ｓｌ）を、（ＣＰＭ、□）／　（Ｃ ＰＭ、、、）として計算した。

（１ｘ）混合白血球反応　同種異系抗原的膵臓細胞に対する応答性に関してＭＬ Ｎ細胞をアッセイした。新鮮なＭＬＮ細胞を９６ウエルの丸底マイクロタイター プレートにューヨーク州のコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）社製）中、前辺て２５ ＧＶの照射を受けた同種異系抗原的細胞細胞とともにウェルあたり２．５ｘｌＯ ’個として３７℃で６８時間培養した。３７Ｍｂｑの［メチル−３１（］チチミ ンを各ウェルに添加し、さらに４時間インキュベーションした。ついで、細胞を 収穫し、試料のｃｐｍ数を測定した。ＢＡＬＢ／ｃマウス由来の同種異系抗原的 細胞のかわりに１．５力月齢のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の同系膵臓細胞ととも に培養された試料のＣｐｍ数を測定し、リファレンス対照として用いた。

（ｘ）ＰＦＣ７ノセイ　ヒツジ・赤血球細胞（ＳＲＢＣ，東京のニラポン・パイ オーテスト・ラボラトリーズ（Ｎｉｐｐｏｎ　Ｂｌｏ−Ｔｅ５ｔ　Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒｉｅｓ）社製）を使用前に培地（ＲＰＭ１１６４０；ギブコ（Ｇｊｂｃｏ ）　）で３回洗浄した。初期応答を測定するために、マウスを層殺し、膵臓を取 り出した。ジエーシーノーデン（Ｊｅｒｎｅ−Ｎｏｒｄｅｎ）のスライド法の変 法によりプラーク形成細胞（ＰＦＣ）に対して膵臓細胞をアッセイした。簡単に 説明すると、膵臓由来の新鮮単細胞を培地５ｍｌに懸濁した。５ＲＢＣペレツト を培地中に６．５倍希釈となるように懸濁した。ついで、１００μＬの５ＲＢＣ 懸濁液、１００μＬのモルモット新鮮血清および２０μＬの膵臓細胞懸濁液をそ れぞれ水中の各試験管に添加した。ついで、混合懸濁液をジエーシーノーデンス ライド中に置いた。ワセリンで密封後、スライドを３７℃で２時間インキュベー ションした。得られたＰＦＣを数えた。

（ｘｌ）統計　標準的なスチューデントのｔ−試験（Ｓｔｕｄｅｎｔ’　ｓ　Ｔ −ｔｅｓｔ）を用いて２群間の相違の有意さを調べた。

結果 （ｉ）体重および種々のリンパ様組織の細胞数に対する餌の影響　高度免疫乳の 経口投与の免疫学的機能に対する影響を調べる前に、体重および種々のリンパ様 組織の細胞数の動力学を最初に観察した（図１）。高度免疫乳または対照乳を与 えた両群とも、１２力月齢まで徐々に体重が増加した。他方、胸腺における細胞 数は、両群において老化とともに減少した（図２）。しかしながら、８力月齢に おける胸腺細胞数の減少は、高度免疫乳によって、わずかであるが有意に（ｐ＜ ０．００５）予防された。対照的に、膵臓、ＭＬＮおよびＩＥＬの細胞数は、観 察期間においては両群とも同じであった。

（ｉｉ）　ＩＩＩ内細菌に対する高度免疫乳の作用　老化マウスにおける腸内細 菌叢に対する高度免疫乳の影響を調べるために、腸消化管中の腸内細菌科の数を 中程度の老化（８力月齢）において計数した。図３に示すように、対照乳を与え られたマウスにおいて観察される数と比較すると、高度免疫乳は、大腸および結 腸における腸内細菌科の数を減少させた（ｐ＜０．０２５）。胃腸消化管から転 座している細菌の侵入のレベルを評価するために、８および１６力月齢において 粘膜細菌（表２）に対する血清抗体レベルを測定した。高度免疫乳は、対照乳を 与えたマウスにおいて観察されたレベルと比較すると、腸内細菌に対する抗体の レベルを減少させた（ｐ＜０．００５　；　８力月齢）。

（ｉｉｉ）老化に関連したＧＡＬＴ細胞の免疫学的機能低下に対する高度免疫乳 の防御効果　ＧＡＬＴ細胞の免疫学的機能に対する高度免疫乳の影響を調べるた めに、ＩＥＬおよびＭＬＮ細胞数を調べた。ＩＥＬにおいては、図５　（Ａ、Ｂ およびＣ）に示すように、ＣＤ４−ＣＤ８−細胞の増加は、対照乳を与えられた マウスと比較すると、ゆるやかであった。ＭＬＮにおいては（図６ＡおよびＢ） 、ＣＤ４”細胞は、若いマウスのＣＤ４’と比較すると、１６力月齢において減 少していた。高度免疫乳は、対照乳を用いて観察される数と比較すると、ＣＤ４ ’細胞数の減少を抑制した（ｐ＜０．００５）。

ｒＥＬは、細胞溶解活性を示す能力があり、細菌およびウィルスの侵入に対して 局所的な免疫防御に重要な役割を果たしているＣＤ３”Ｔ細胞数が特有である（ ジェインウェイ、エイ０ａｎｅｖａｙ、　Ａ、　）　、ネイチャー第３３３巻： ８０４〜８０６頁（１９８８年））。それゆえ、高度免疫乳および対照乳を与え られたマウスにおいて、抗ＣＤ３モノクローナル抗体の存在下でのＰ８１５ｍ的 細胞に対する再指向されたＩＥＬの細胞溶解活性をアッセイした（図７Ａおよび Ｂ）。対照乳を与えられたマウスにおいて観察された活性と比較すると、高度免 疫乳乳は、Ｐ８１５腫瘍細胞に対する細胞溶解活性を増大させ（ｐ＜０．１）　 、若いマウス（２力月齢）において観察されるのとほぼ同じレベルの活性を維持 させた。ＭＬＮ細胞においては、図８に示すように、ＰＨＡ　（Ｔ細胞に対する 分裂促進剤）に対する増殖応答が１６力月齢において減少していた。対照乳を与 えられたマウスにおいて観察された応答性と比較すると、高度免疫乳は、老化に 関連した応答性の低下を有意に抑制した（ｐ＜０．００５）。高度免疫乳はまた 、老化に伴って観察される同種異系抗原に対する増殖応答の低下からマウスを有 意に防御した（ｐ＜０．０２５；図９）。

（ｉｖ）老化に関連した免疫応答低下に対する全身免疫後の高度免疫乳の効果老 化に関連した免疫機能低下に対する高度免疫乳の全身的効果を調べるために、Ｐ ＦＣアッセイを行った。８力月齢のマウスに対して５ＲＢＣで免疫を行ってから ４日および７日後に、マウスを、膵臓において５ＲＢＣに対してプラークを形成 する細胞についてアッセイした（図１０ＡおよびＢ）。４日目にＩｇＭを有する 細胞が出現した。この時点でＩｇＧを有する細胞は、対照乳を与えたマウスにお いては検出されなかったが、高度免疫乳によりＩｇＧを有する細胞数が検出可能 なレベルとなっていた（ｐ＜０．００１）。５ＲＢＣで免疫７日後において、Ｉ ｇＭを有する細胞およびＩｇＧを有する細胞数は、高度免疫乳を与えた群と対照 乳を与えた群との間に有意な相違は見られなかった。

（Ｖ）老化マウスにおける抗ＤＮＡ抗体の血清レベル　老化に関連した免疫機能 不全に対する高度免疫乳の影響を調べるために、８および１６力月齢のマウス由 来の血清中の抗５ｓＤＮＡ自己抗体の産生を調べた（図１０ＡおよびＢ）。

自己抗体は老化とともに増加し、以前の報告（カド−（Ｋａｔｏ）ら、エイジン グ・イミュノロ・インフｊ−’ディジ（＾ｇｉｎｇ　Ｉｍｗｕｎｏｌ、　Ｉｎｆ 、　Ｄｉｓ、　）第１巻：１７７〜１９０頁（１９８８年））と矛盾しなかった 。対照乳を与えられたマウスにおいて観察された血清レベルと比較すると、高度 免疫乳は抗ＤＮＡ抗体の血清レベルの増加を抑制した（ｐ＜０．１；１６力月齢 ）。

高度免疫乳は腸内細菌の増殖（図３）および血清中の抗腸内細菌抗体の出現（図 ４）を抑制した。高度免疫乳が、生命を脅かす腸内細菌感染からγ線照射された マウスを防御することが見いだされた。これらの結果は、高度免疫乳が、胃腸消 化管からの腸内細菌の転座に対して防御を行うことを示すものである。粘膜細菌 （表２）で高度免疫された乳牛から高度免疫乳を得、該高度免疫乳は腸内細菌抗 原に特異的なＩｇＧを有していた（ゴレイ（Ｇｏｌａｙ）ら、アメリカン・ジャ ーナル・オン・クリニカル・ニュートリジョン（＾ｖａ、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　 Ｎｕｔｒ、　）第５２巻：　１０１４〜１０１９（１９９０年））。これらの抗 体は不ズミ・腸内細菌叢と交差反応し得た。それゆえ、高度免疫乳中の最も有効 な成分は、病原性腸内細菌（＝特異１？Ｊな抗体で有り得る。腸内細菌の侵入を 阻害することに関する２つの仮説（ま：　（ｉ）　ｔ！ｉ果的に抗体が補体成分 を活性化し、直接的に細菌を溶解する力＼まｔこ１１ル−メン（こおける多形核 白血球および／またはマクロファージによる食作用を促進する；および（ｉｉ） 抗体が細菌を凝集させ、細菌が粘膜に付着するのを防止し、また粘膜下組織への 侵入を防止する（ジエインウエイ、エイ、ネイチャー第３３３巻、８０４〜８０ ６頁（１，９８８年）：ウエルシュ（ｊｅｌｓｈ）ら、ジャーナル・オン・ペデ ィアトリクス（Ｊ、　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ）第９４巻、１〜９頁（１９７８年 ））。高度免疫孔はまた、有意に高レベルのラクトペルオキシダーゼおよびラク トフエ１ノンのごとき非特異的抗細菌物質を含有していた（ウェルシュら、ジャ ーナル・オン・ペディアトリクス第９４巻・１〜９頁（１９７８年））。それゆ え、これらの物質１ままた、腸内細菌の侵入を阻害しつる。

本発明者らは、驚くべきことに、高度免疫孔の経口投与が、老化（こ関連した低 下からＧ　Ａ、　Ｌ　Ｔの免疫機能を有意に防御することを見し１だした。高度 免疫孔を与えることが、再指向されたＩＥＬの細胞溶解活性および分裂促進製お よび同種異系抗原的刺激に対するＭＬＮ細胞の応答性を老化（二関連した低下刃 １ら防御した（図７．８および９）。これらの知見に対する１つの説明（ま、高 度免疫孔（二よる腸内細菌数の変化がＧＡＬＴ細胞の免疫機能の増大を引き起こ し得るとＬＮうことである。高度免疫孔は、有意に腸内細菌科の増殖を抑制した 。そのうち、シト特異的免疫刺激因子（ミアケ（Ｍｉａｋｅ）ら、インフエクト ・イミュノ（Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ、）第４８巻　４８０−４８５頁（１９ ８５年）、ノモト（Ｎｏｉｏｔｏ）ら、ジャーナル・オン・クリニ・ラボ・イミ ュノｏ　（Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｌａｂ、　Ｉｍｕｎｏｌ、　）第１７巻：９１〜 ９７頁（１９８５年））として知られる腸内細菌である大腸菌力く高度免疫孔を 与え“　られたマウスにおいて増加した（ティー・オーモＩＪ　（Ｔ、　Ｏｈｍ ｏｒｉ）ら、準備中原稿）。

よって、高度免疫孔は、ある腸内細菌の刺激を増大させることによりＧＡＬＴ細 胞の免疫学的機能を間接的に増大させること力（できるものと考えられる。Ｓ＋ ＋の説明は、勺イトカイン類のごとき高度免疫乳中のｌ、ｓ（つ力罵の成分力（ ＧＡＬＴ細胞の免疫機能を増大させるというものである（ウエルンユら、ジャー ナル・オン・ベディアトリクス第９４巻：１〜９頁（１９７８年））。

高度免疫孔はまた、５ＲＢＣでの免疫後の初期の相において、膵臓における抗５ ＲＢＣプラーク形成細胞の数を増加させた（図１０ＡおよびＢ）。この結果は、 長期にわたる腸内細菌の侵入に対する予防における高度免疫孔の防御的作用が、 ＧＡＬＴの機能のみならず全身のリンパ様組織の機能にも影響を及ぼすことを示 唆するものである。５ｓＤＮＡに対する血清抗体の出現を防止することにおける 高度免疫孔の防御的作用（図１１）は、高度免疫孔が全身のリンパ様組織の機能 に間接的に影響するという結論を支持するものである。

結論的には、高度免疫孔の経口投与は、老化に関連した免疫機能の低下から動物 を効果的に防御する。臨床的には、それらの知見は、老いた動物および免疫損傷 した動物の治療において重要である。例えば、老人病、または白血病のごとき免 疫損傷疾患の治療および／または改善の間において、老化および免疫損傷した患 者を複雑な形態の腸内細菌固有の感染から防御するために高度免疫孔を予防的に 投与してもよい。

実施例２ Ｓ−１００ワクチンの製造 アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから得られるような上記表２に 示す細菌のスペクトルを含んだ細菌培養物を、１５ｍ１の培地で復元し、３７℃ で一晩インキユベーションした。良好な増殖が得られたならば、該細菌懸濁液の 約半量を用いて１リツトルのブロスに接種し、その接種物を３７℃でインキュベ ーションした。残りの懸濁液を滅菌したグリセロールの入った試験管に移し、６ 力月までは一２０℃で保存する。

培養において良好な増殖が見られた後、懸濁液を２０分間遠心分離することによ り細菌細胞を収穫して培地を除去した。得られた細菌ペレットを滅菌セイライン 溶液に再懸濁し、細菌試料を３回遠心分離して細胞から培地を洗い取った。３回 目の滅菌セイライン洗浄後、遠心分離により得られた細菌ペレットを少量の２回 蒸留した水に懸濁した。

培地を含まない細菌懸濁液を、８０℃の水につけたガラス製フラスコ中に入れて 一晩熱殺菌した。該ブロス培養物の生存性試験を少量の熱殺菌細菌で行つＩこ。

ブロスを熱殺菌細菌とともに植菌し、３７℃で５日間インキュベーションし、増 殖を毎日チェックした。なぜならば、ワクチンに使用するには細菌が死んでし） なければならないからである。

熱殺菌細菌を凍結乾燥した。ついで、乾燥細菌を滅菌セイライン溶液を混合して ２．２ｘｌＯ’細菌細胞／ｍｌセイライン（６６０ｎｍにおける光学密度の読み が１．０）の濃度とした。

該多価ワクチンの５ｍｌ試料を乳牛に毎日注射した。該多価抗原（二対するウシ ・抗体に関する酵素結合免疫アッセイを用いることにより、注射されｔ二乳牛１ こつ（＼て抗体（ＩｇＧ）力価Ｌ／ベベル定期的に調べた。

実施例３ 免疫方法 熱殺菌細菌を上記方法で製造した。得られた多価抗原試料（Ｓ−１００）を、慣 用的な相分離法により微小カプセル封入して多価抗原含有微粒子製品を製造した 。一般的には、抗原含有型マド１ルツクス材料を生体と両立しつる材料、好まし くは生分解性または生体崩壊性材料、好ましくはポリ酢酸、ポ１ノグ＋）コール 酸、乳酸とグリコール酸とのコポリマー、ポリカプトラクトン、ツボ１ノオキサ ル酸、コラーゲンのごとき蛋白、グリセロールの脂肪酸エステル、ならび（こセ ルロースエステルのポリマーから形成する。これらのポリマーは当該分野でよく 知られており、例えば、米国特許第３．７７３．９１９号、米国特許第３，８８ ７．６９９号：米国特許第４，１１８．４７０；米国特許第４．０７６．７９８ 号にに２載されてしＸる。これらの全内容を本明細書の記載に取り込ませる。使 用しｔこポ１ツマー性マトリックス材料は生分解性ラクチド−グリコリドコポリ マー（ｌａｃｔｉｄｅ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）であった。

熱殺菌細菌抗原をかかるマトリックス材料、好ましくは直径１〜５００ミクロン の間、好ましくは１０〜２５０ミクロンの微小球１こカプセル封入する。カプセ ル封入法は慣用的であり、相分離法、界面反応、および物理的方法力１らなる。

抗原の宿主に対する抗原の微小カプセルからの最適な放出速度を得るｔこめに、 種々の組み合わせのマトリックスおよび種々の濃度の混和した抗原を用しするこ と力（できる。これらの組み合わせは、過度の実験をすることなく当業者１；よ り決定される。

実施例における微粒子は直径２５０ミクロン以下であった。つ０で、２２％（１ ６，５ｍｇ）の多価抗原を含有する約７５０ｍｇの微粒子を約３ｃｃの担体（水 中１重量％のツイン（Ｔ冒ｅｅｎ）２０および２重量％のカルボキシメチルセル ロース多数のウソの群れから少数群を選抜した。これらのランダム（二選抜した ウシのうち５匹を対照として選択した。４匹のウシに多価抗原を含有する微粒子 を筋肉注射した。微粒子試料を２．０ｍＲａｄのガンマ線照射で滅菌した。対照 のみならず接種したウシから得られた牛乳試料から抗体（ＩｇＧ）力価のレベル を定期的に測定した。

実施例４ ラットの寿命に対する高度免疫乳中取の効果ａ，材料および方法 ６週齢、体重１６０ないし１９０グラムの間のオスのスプラグ・ダウＩＪ−（ｓ ｐｒａｇｕｅ　ｄａｗｌｅｙ）　・ラットをフ什ソシャー・サイエンティフィッ ク（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）から購入し？．−。う・ソトを各１０ 匹ずつ３群（Ａ，Ｂおよび０群）に分けた。各群に適宜う・ソト用餌を与えた。

さら（＝、Ａ群（二Ｓ１００高度免疫乳２５Ｑｍｌを毎日与えた。Ｓ１００高度 免疫乳１よ上２己実施例↓二示しｔこよう（＝シて製造した。Ｂ群に市販の対照 スキムミルクをＡ群と同じだ：す与えた。０群：こラット用餌および水のみを与 えた。水または乳のビンを毎日交換した。

すべてのラットが死亡するまで、毎日ケージの清掃ごと（二生存ラット数をを舅 己録した。

ｂ、結果 寿命の結果を下表３にまとめた。１９８５年８月６日の試験開始以来最後のラッ トが死亡した１９８８年２月３日まで（３０力月）の生存ラットの平均数は、高 度免疫乳のＡ群については５±３．２８．対照乳のＢ群については３．２２±３ ゜２３、そして水対魚群については３．４４±４であった。高度免疫乳を与えら れたラット（Ａ群）と他の群（Ｂ群および０群）との間の生存数の相違は、以下 に明示するように統計学的に有意であった。Ａ群の生存数は、対照乳（Ｂ群）ま たし、その結果を図１２．１３および１４に示す。

（５）　軍勢 齢 ＦＩＧ、３ ２　８　（６（月） 齢 ＦｆＧ、　４ （ｇ−Ｏｆｘ）犯踏 （９−０１Ｘ）　’４鵡購 （ｇ−０１×）■画購 騰（〈斗−ユｔω鉤致兜首坤 影」〈斗−）ｔω輝敬（ロ）首♀し ＦＩＧ、８ ＦＩＧ、９ ４８目　７８目 ５ＲＢＣで免疫してからの時間　５ＲＢＣで免疫してがらの時間ＦＩＧ、　ＩＯ Ａ　ＦＩＧ、　１０８ 時間（日） ＦＩＧｉ３ （日）−県ＩＩ猷至 フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＰＴ、　Ｓ Ｅ）、　ＡＵ、　ＣＡ、　ＪＰ、　ＮＺ

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．動物における生理学的老化を抑制するに十分な量の腸内細菌含有ワクチンで 免疫された乳産生動物から製造された高度免疫乳を動物に投与することを特徴と する動物における生理学的老化を抑制する方法。
2. ２．動物の寿命を延長するに十分な量の腸内細菌含有ワクチンで免疫された乳産 生動物から製造された高度免疫乳を動物に投与することを特徴とする動物の寿命 を延長する方法。
3. ３．動物において生理学的老化の開始を遅延するに十分な量の腸内細菌含有ワク チンで免疫された乳産生動物から製造された高度免疫乳を動物に投与することを 特徴とする動物における生理学的老化の開始を遅延させる方法。
4. ４．動物において低下しつつある生理学的機能能力を回復させるに十分な量の腸 内細菌含有ワクチンで免疫された乳産生動物から製造された高度免疫乳を動物に 投与することを特徴とする動物において低下しつつある生理学的機能能力を回復 させる方法。
5. ５．該高度免疫乳が経口投与される請求項１、２、３または４のいずれか１に記 載の方法。
6. ６．該動物がヒトである請求項１、２、３または４のいずれか１に記載の方法。
7. ７．該高度免疫乳がスキムミルク粉末の形態であり、１日につき約１ないし約２ ００ｇ／ｋｇ体重が投与される請求項５記載の方法。
8. ８．該量が１日あたり約５ないし約１５０ｇ／ｋｇ体重である請求項７記載の方 法。
9. ９．該量が１日あたり約９８ｇ／ｋｇ体重である請求項８記載の方法。
10. １０．該高度免疫乳が約１４日間投与される請求項９記載の方法。