DE3447720C2 - Verwendung bestimmter opiumartiger peptide zur behandlung von cerebraler ischaemie - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung bestimmter opiumartiger Peptide zur Behandlung von cerebraler Ischämie, insbesondere den Einsatz von Dynorphin, Dynorphinanaloga und Dynorphinamidanaloga bei der Umkehr neurologischer Defizite und bei der Verlängerung der Überlebenszeit nach cerebraler Ischämie.

Nachdem viele Infektionskrankheiten durch die medizinische Wissenschaft steuerbar wurden oder eliminiert worden sind, bleiben chronische Krankheiten, wie Herzanfälle, Schlaganfälle und Krebs, Hauptursachen von Todesfällen. Wenn aufgrund eines Schlaganfalles nicht der Tod eintritt, ist das Opfer häufig schwer behindert. Die Todesrate für Schlaganfallopfer liegt in den Vereinigten Staaten über 2 pro 1000. Die Japaner, die einen der niedrigsten Todesindizes von Herzkrankheiten haben, besitzen einen der höchsten aufgrund von Schlaganfällen.

Es sind verschiedene unterschiedliche Verbindungen als nützlich bei der Behandlung von Schlaganfällen vorgeschlagen worden. Beispielsweise scheint es, daß Aspirin das Risiko von vorübergehenden ischämischen Anfällen oder kleinen Schlaganfällen sowie Todesfällen aufgrund von Schlaganfällen reduzieren kann. Das US-Patent 42 56 883, Erfinder: Nicolaou et al., erteilt am 17. Mai 1981, umfaßt Prostacyclinanaloga, von denen behauptet wird, daß sie bei vasculären Verengungen und bei mit essentiellem Hochdruck auftretenden cerebralen Schlaganfällen nutzbringende Eigenschaften besäßen. Das US- Patent 43 64 951, Erfinder Skruballa et al., erteilt am 21. Dezember 1982, beschreibt Prostacycline, von denen behauptet wird, sie besäßen unter anderem zur Behandlung von Schlaganfällen nützliche Eigenschaften. Das US-Patent 43 94 385, Erfinder: Cragoe, erteilt am 19. Juli 1983, umfaßt die Verwendung von Benzofuranyloxyessigsäuren und entzündungshemmenden Steroiden, von denen behauptet wird, daß sie bei der Steuerung von Ödemen aus ischämischen Schlaganfällen einsetzbar seien.

Es ist kürzlich mitgeteilt worden, daß der Opiatantagonist Naloxon neurologische Defizite, die sekundär bei cerebraler Ischämie auftreten, umkehren kann, während Morphin diese verschlimmert. Baskin und Hosobuchi "Naloxone reversal of ischaemic neurological deficits in man", Lancet 2, Seiten 272 bis 275 (1981). Es ist auch berichtet worden, daß neurologische Defizite, die durch eine unilaterale Carotis- Unterbrechung bei Springmäusen hergestellt werden, durch interperitoneale Gabe von Naloxon reversibel sein können: Hosobuchi et al., "Reversal of induced ischemic neurologic deficit in gerbils by the opiate antagonist naloxone" Science 215, Seiten 69 bis 71 (1982), sowie Chemical Abstracts 98: 174 869h (1987).

Levy und al. haben nun berichtet, daß die Behandlung mit Naloxon keine verbesserten neurologischen Funktionen brachte oder eine Veränderung der Infarktgröße bei Springmäusen bewirkte, die einem zeitweiligen Carotisverschluß unterzogen worden waren ("Failure of naloxone to limit clinical or morpholigical brain damage in gerbils with unilateral carotis artery occlusion", Abstracts of the 12th Annual Meeting of the Society for Neuroscience, Seite 248 (1982)). In ähnlicher Weise haben Holaday und D′Amato berichtet, daß Naloxon keinen günstigen Effekt auf das Überleben oder die neurologische Funktion in verschiedenen unterschiedlichen Modellen eines Schlaganfalls bei Springmäusen hatte ("Naloxone or TRH fails to improve neurologic deficits in gerbil models of ′stroke′," Life Science 31, Seiten 385 bis 392 (1982)).

Ausgehend von den verschiedenen unterschiedlichen Verbindungen, die zur Behandlung von Schlaganfällen vorgeschlagen worden sind und die sich teilweise als unzureichend erwiesen haben, ist es Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Möglichkeit zur Behandlung von an Ischämie, wie akuter oder nicht-akuter cerebraler Ischämie, leidenden Patienten zu schaffen.

Diese Aufgabe wird durch die Verwendung der opiumartigen Peptide Dynorphin, Dynorphinanaloga und Dynorphinamidanaloga gelöst.

Besonders bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung sind Gegenstand der Unteransprüche.

Es ist bevorzugt, dem Patienten zur Behandlung aufeinanderfolgende Dosen des vorgeschlagenen Mittels zu geben. Besonders bevorzugte opiumartige Peptide sind Dynorphin (1-13)- und Dynorphin(1-10)amid. Die vorliegende Erfindung ist bei an akuter fokaler cerebraler Ischämie leidenden Patienten einsetzbar zur Verlängerung der Überlebenszeit, und es wird angenommen, daß sie besonders nützlich bei der partiellen Reversibilität neurologischer Schäden, die von cerebraler Ischämie stammen, ist.

Seit der Entdeckung von Opiatrezeptoren im Zentralnervensystem ist angenommen worden, daß endogene Opiat-Liganden bei der Funktion des Zentralnervensystems sowohl bei gesunden als auch bei kranken Zuständen eine Rolle spielen. Die Aufmerksamkeit der Forschung hat sich dabei hauptsächlich auf die Rolle dieser Substanzen bei der Modulation der Wahrnehmung von Schmerz-Stimuli konzentriert, sie hat sich aber auch mit der Hypophysen-Funktion, epileptischen Störungen und Geisteskrankheit beschäftigt.

Opiumartige Peptide werden im Kreislaufsystem, wahrscheinlich von der Hypophyse (Imura et al., Ann Rev. Physiol. 43, Adv. Biochem. Psychopharmacol. 22, Seiten 191 bis 204 (1980)), Herz (Lang et al., Life Sci. 32, Seiten 399 bis 406 (1983)) und Darm (Elde et al., Neuroscience 1, Seiten 349 bis 357 (1976); Polak et al., Lancet 1, Seiten 972 bis 974 (1977); Alumets et al., Histochem. 56, Seiten 187 bis 196 (1978)) stammend, gefunden.

Die überwiegende Theorie ist, daß die meisten Wirkungen opiumartiger Drogen im Zentralnervensystem eintreten (daß heißt, innerhalb des Gehirns oder des Rückmarkstranges). Nichtsdestoweniger gibt es Beweise, daß endogene opiumartige Peptide die Empfindlichkeit der peripheren Nerven gegenüber Stimuli, Herzrate und Blutdruck beeinflussen, und es wird angenommen, daß zirkulierende opiumartige Peptide unter normalen Bedingungen die Steuerung der Empfindlichkeit dieser peripheren Orte des autonomen Nervensystems gegenüber solchen endogenen Substanzen bewirken.

Endogene opiumartige Peptide können in 3 Klassen gruppiert werden: beta-Endorphin und bestimmte ähnliche Verbindungen; die Enkephaline, welche die kleinsten opiumartigen Peptide sind; und Dynorphine, alpha-Neo-Dynorphin und ihre verwandten Peptide. Von diesen drei Typen scheint beta-Endorphin dasjenige mit den morphinähnlichen Effekten am meisten verwandte zu sein. Intracerebroventrikuläre (i.c.v.) Gabe dieses Peptids führt zu Schmerzlosigkeit, wobei sich sowohl die Toleranz als auch die physische Abhängigkeit nach verlängerter Behandlung entwickeln; außerdem wird Kreuztoleranz und Kreuzabhängigkeit ähnlich wie bei Morphin beobachtet. Im Gegensatz dazu ist über die Gabe der natürlichen Enkephaline, Leucin-(leu)- und Methionin-(met)- Enkephalin, geschrieben worden, daß sie nur eine sehr schwache oder keine analgetische Wirkung, wenn sie i.c.v. gegeben werden, besitzen.

Dynorphin wurde zuerst aus den Hypophysendrüsen isoliert und die Sequenz seiner ersten 13 N-terminalen Aminosäuren bestimmt; dieses Fragment ist synthetisiert worden und seine Eigenschaften wurden gemeinsam mit denjenigen der vollständigen 17 Aminosäure langen Sequenz der natürlichen Verbindung untersucht. Die ersten 13 Aminosäuren von Dynorphin oder Dynorphin(1-13) haben die Sequenz:

Das N-terminale Ende enthält LEU-Enkephalin (die Aminosäuren, die mit 1 bis 5 numeriert wurden), gefolgt durch die C- terminale Fortsetzung (die mit 6 bis 13 numerierten Aminosäuren). Der Einschluß von LEU-Enkephalin wurde für notwendig als biologisches "homing-device" für die Aktivität gehalten, wobei angenommen wurde, daß die Länge der Fortsetzung nach LEU-Enkephalin kritisch für seine Wirksamkeit sei.

Dynorphin besitzt wenig oder keine analgetischen Wirkungen bei Mäusen. Während dieses Fehlen einer Wirkung ursprünglich den raschem Abbau des Dynorphins im Gehirn zugeschrieben wurde, ist gezeigt worden, daß Dynorphin andere pharmakologische Wirkungen zeigte, die anzeigten, daß es lange genug zum Hervorrufen einer Schmerzlosigkeit intakt bleiben sollte. Demzufolge beschreibt das US-PS 43 61 553, Erfinder: Loh et al., erteilt am 30. November 1982, daß obwohl Dynorphin das analgetische Antwortsverhalten auf Morphin und beta- Endorphin verhindert oder als ihr Antagonist wirkt, den entgegengesetzten Effekt bei morphintoleranten Tieren hat. D. h., daß Dynorphin die analgetische Wirkung sowohl von Morphin als auch von beta-Endorphin bei morphintoleranten Tieren potenziert. Dynorphin benimmt sich somit weder als klassischer Agonist noch als Antagonist.

Es ist kürzlich berichtet worden, daß Dynorphin(1-10)amid nicht gegen die narkotische Schmerzlosigkeit bei nicht toleranten Tieren (wie Dynorphin(1-17) und Dynorphin(1-13)) als Antagonist wirkt, obwohl es die analgetische Wirkung in toleranten Wirten potenziert, Woo et al., Life Sciences 31, Seiten 1817 bis 1882 (1982).

Im Gegensatz zu den in vivo opiumartigen Eigenschaften eines opiumartigen Peptids, wie Dynorphin, benimmt sich Naloxon (17-Allyl-4-5α-epoxy-3,14-dihydroxymorphinan-6-on) als klassischer narkotischer Antagonist. Andere nichtpeptidische Narkotika umfassen Naltrexon, Nalorphin, Diprenorphin, Lavallorphan, Pentazocin, Metazocin, Cyclazocin und Etazocin.

Die vorliegende Erfindung schafft ein Verfahren zur Behandlung von an cerebraler Ischämie leidenden Patienten durch die Gabe eines opiumartigen Peptids. Geeignete erfindungsgemäße opiumartige Peptide umfassen Dynorphin, Dynorphinanaloga und Dynorphinamidanaloga.

Bevorzugte opiumartige Peptide für die Durchführung der vorliegenden Erfindung sind die Polypeptide mit der Aminosäuresequenz

TYR-GLY-GLY-PHE-LEU-ARG-ARG-AA⁸-AA⁹-AA¹⁰- (AA¹¹)_w,

wobei AA⁸ TYR, ILE, LEU oder LYS ist, AA⁹ ARG oder PRO ist, AA¹⁰ PRO oder LYS ist, AA¹¹ LYS, LYS-LEU oder LYS- LEU-LYS ist, w 0 oder 1 ist, wobei das Polypeptid als Säure oder in amidierter Form vorliegt. Zwei besonders bevorzugte Ausführungsformen für die Durchführung der vorliegenden Erfindung sind Dynorphin(1-13)-, und Dynorphin(1-10)amid.

Die Herstellung geeigneter Dynorphin- und Dynorphin-verwandter Peptide für die Durchführung der vorliegenden Erfindung kann durch Verfahren und Vorrichtungen, die aus dem Stand der Technik für die Peptidsynthese bekannt sind, durchgeführt werden, wobei das untenstehende Beispiel I (Herstellung von Dynorphin (1-10)amid) zur Erläuterung dient.

Beispiel I

Dynorphin (1-10)-NH₂ wurde auf einem festen Träger von Boc- Pro-BHA(Benzyhydrylamin)-Harz (2 mM/4,5 g Harz) synthetisiert. Mittels des Merrifield-Verfahrens auf einem manuellen Festphasenpeptidsynthetisierer von Peninsula wurden die entsprechenden Boc-geschützten Aminosäuren auf das Boc-Pro-BHA-Harz gegeben: Arg(Tos), Ile, Arg(Tos), Leu, Phe, Gly, Gly und Tyr(o-Br-Z). Ein 5,0molarer Überschuß jeder geschützten Aminosäure wurde eingesetzt. Der Erfolg der Kopplungsreaktion wurde durch den semi-quantitativen Ninhydrintest überwacht. Die nachfolgenden Schritte wurden durchgeführt, um die Boc-geschützte Aminosäure an Boc-Pro-BHA-Harz zu koppeln:

• 1) Waschen mit CH₂Cl₂ (3 × 100 ml),
• 2) Vorwaschen mit 33%iger Trifluoressigsäure in CH₂Cl₂ mit 1% Indol (1 × 100 ml),
• 3) Abspalten der Schutzgruppe mit 33%iger Trifluoressigsäure in CH₂Cl₂ mit 1% Indol (1 × 100 ml), 20 Minuten,
• 4) Waschen mit CH₂Cl₂ (1 × 100 ml),
• 5) Waschen mit Ethylalkohol (1 × 100 ml),
• 6) Waschen mit CH₂Cl₂ (2 × 100 ml),
• 7) Vorwaschen mit 10%igem Et₃N in CH₂Cl₂ (1 × 100 ml),
• 8) Neutralisieren mit 10%igem Et₃N in CH₂Cl₂ (1 × 100 ml), 10 Minuten,
• 9) Waschen mit CH₂Cl₂ (3 × 100 ml),
• 10) Zugabe von geschützter Aminosäure (5,0molarer Überschuß) in Dimethylformamid (10 ml) und CH₂Cl₂ (50 ml),
• 11) Es wurde DCC in CH₂Cl₂ (0,5 M, 20 ml) zugegeben; die Reaktionszeit betrug bis zu drei Stunden,
• 12) Waschen mit CH₂Cl₂ (3×100 ml).

Das entstehende geschützte Boc-Tyr(O-Br-Z)-Gly-Gly-Phe-Leu- Arg(Tos)-Arg(Tos)-Ile-Arg(Tos)-Pro-BHA-Harz wurde gut mit 33%iger Trifluoressigsäure in CH₂Cl₂, CH₂Cl₂ und Methylalkohol gewaschen. Nach Trocknen unter Vakuum über Nacht wurde das Peptid-Harz durch HF (30 ml/g Harz) in Gegenwart von Anisol (3 ml/g Harz) über eine Stunde bei 0°C gespalten. Die Reaktionsmischung wurde unter Vakuum getrocknet und mit wasserfreiem Äther gewaschen. Das erwünschte Peptid wurde in 10%iger Essigsäure gelöst und das Harz abgefiltert. Das Filtrat wurde unter Erhalt von rohem Dynorphin (1-10)-NH₂ lyophilisiert. Das Peptid wurde durch Verteilungschromatographie unter Verwendung von N-Butylalkohol : Pyridin : H₂O (11 : 5 : 3) als Elutionslösungsmittel und Carboxymethylcelluloseionenaustauschchromatographie gereinigt, um reines Dynorphin (1-10)-NH₂ zu erhalten.

Es wird angenommen, daß die Faktoren, die das Antwortverhalten gegenüber einer Therapie bei cerebraler Ischämie gemäß der vorliegenden Erfindung beeinflussen, die Dosierung, die Applikation und die Dauer der Therapie umfassen.

Der Blutdruck scheint kein Faktor zu sein, der das Therapie- Antwortverhalten bei cerebraler Ischämie gemäß der vorliegenden Erfindung beeinflußt, da eine Blutdruckbeobachtung während der Durchführung der Erfindung keine Änderungen im Herzminutenvolumen, dem systemischen Blutdruck oder dem cerebralen Blutfluß zeigte.

Bei der Behandlung von an akuter fokaler cerebraler Ischämie leidender Patienten gemäß der vorliegenden Erfindung wird die Therapie durch Gabe einer Dosis eines geeigneten opiumartigen Peptids begonnen und anschließend die Gabe darauffolgender Dosen weitergeführt.

Die Anfangsdosis kann zwischen etwa 1,0 µg pro Kilogramm Patientengewicht bis zu etwa 10 mg pro Kilogramm Patientengewicht liegen, bevorzugter bei etwa 100 µg pro Kilogramm Patientengewicht, und kann durch unterschiedliche Mittel, die im Fachgebiet bekannt sind, gegeben werden, wie beispielsweise durch intravenöse Injektion ("I.V."). Nachfolgende Dosen können auch durch verschiedene Mittel, die in dem Gebiet bekannt sind, gegeben werden, wie durch Injektionen oder äußerliche Anwendungen gemeinsam mit einem Arzneimittelträger wie Dimethylsulfoxid oder Azon (erhältlich von Nelson Laboratories). Es ist aber bevorzugt, daß die nachfolgenden Dosen im wesentlichen kontinuierlich gegeben werden, solange sich der Patient in einer lebensbedrohenden Situation befindet, oder bis sich der Zustand des Patienten stabilisiert, und mit einer Rate zwischen etwa 0,01 µg pro Stunde bis etwa 100 µg pro Stunde durchgeführt wird. Beispielsweise kann kontinuierliche Infusion durch Verwendung einer implantierten Minipumpe oder durch I.V. erfolgen. Wenn sich der Zustand des Patienten stabilisiert, können die Dosen schrittweise reduziert oder titriert werden. Abhängig von der Art der Gabe kann das opiumartige Peptid mit einer großen Vielzahl physiologisch akzeptabler Trägermaterialien, wie wäßrige Salzlösung und phosphatgepufferte Salzlösung, formuliert werden und kann physiologisch verträgliche Träger, wie Glukose, Mannitol oder ähnliches, einschließen.

Die nachfolgenden experimentellen Verfahren, Materialien und Resultate werden zur Erläuterung der vorliegenden Erfindung beschrieben. Andere Aspekte, Vorteile und Modifikationen innerhalb des Schutzbereichs der Erfindung sind dem Fachmann, an welchen sich die Erfindung richtet, offensichtlich.

Experimentelles

Auf Basis einer Zufallszahltafel wurden erwachsene männliche Katzen einer von sechs Gruppen zugeordnet, die mit: 1. Salzlösung (12 Katzen), 2. Naloxon (13 Katzen), 3. Naltrexon (10 Katzen), 4. Diprenorphin (13 Katzen), 5. Dynorphin (1-13) (10 Katzen), und 6. Dynorphin (1-10)amid (5 Katzen) behandelt wurde. Die Katzen wurden mit 50 g Ketamin, das intramuskulär gegeben wurde, sediert. Anästhesie wurde durch eine Mischung von Halothan, Stickoxid und Sauerstoff über eine Maske durchgeführt. Anschließend wurde die Trachea intubiert, aber der Katze Spontanatmung ermöglicht. Anschließend wurde 1 000 000 Einheiten Penicillin G intramuskulär gegeben und die Katzen in einen stereotaktischen Apparat gesetzt. Unter Verwendung der bei Katzen zuerst durch O′Brien und Waltz beschriebenen Technik ("Transorbital approach for occluding the middle cerebral artery without craniectomy", Stroke 4, Seiten 201 bis 206 (1973)) wurde ein die Orbitalwand durchdringender Verschluß der rechten mittleren cerebralen Arterie (MCA) durchgeführt.

Es wurde im supraorbitalen Bereich unter Verwendung von aseptischen Verfahren ein Schnitt angelegt, und die Präparation wurde in einer subperiostealen Ebene entlang der oberen Orbitalwand durchgeführt. Der Augapfel wurde eingeschnitten und sein Inhalt entfernt. Die Ciliararterien und die ophtalmischen Gefäße wurden mit einer bipolaren Coagulationszange bei Vergrößerung mit dem chirurgischen Mikroskop coaguliert. Es wurden gerade und gebogene Mikroschen verwendet, um die Orbita-Präparation zu vervollständigen, der Augenhöheninhalt wurde herausgesaugt. Ein mikrochirurgischer Bohrer wurde zur Entfernung des optischen Stranges eingesetzt, wodurch das optische Foramen vergrößert wurde. Es wurde ein Schnitt in die Dura gelegt und die Carotis- Gabelung freigelegt. Es wurde ein spinnetzartiger Schnitt ausgeführt, um die inneren Carotis-, mittleren Cerebralen, die hintere Verbindungs-(posterior communication) und vorderen Cerebralarterien freizulegen. Das Segment der mittleren Cerebralarterie (MCA) proximal den Lenticulostriatenarterien (MI) wurde mit der bipolaren Zange coaguliert und mit der Mikroschere durchgeschnitten. Der Orbit wurde ausgespült und mit Zahnzement, um Auslaufen von Cereborospinalflüssigkeit zu verhindern, gefüllt. Die Wunde wurde vernäht, geschlossen und als Verband Colloidinspray aufgebracht.

In der Mittellinie des Lumbarbereichs wurde ein kleiner Schnitt angelegt und eine subkutane Tasche für späteren Einsatz einer osmotischen Pumpe hergestellt, die zur Abgabe von Arzneimittel bei konstantem Volumen ausgelegt war. Dieser Schnitt wurde leicht unter Verwendung eines Vorderstiches vernäht. Es wurde der Katze erlaubt, aufzuwachen, und sie wurde über 6 Stunden nach dem Verschluß der mittleren Cerebralarterie überwacht. Die neurologische Funktion wurde unabhängig durch zwei Personen überwacht, die keine Kenntnis vom experimentellen Protokoll hatten.

Bei einer Blindstudie erhielten die Katzen sodann eine intraperitoneale Injektion einer der folgenden Lösungen: 2 ml steriler normaler Salzlösung; 2 mg einer 10 ml pro Kilogramm Lösung Naloxon, gelöst in steriler normaler Salzlösung; 2 ml einer Lösung mit einem Gehalt an 500 µg Diprenorphin, gelöst in steriler normaler Salzlösung; 2 ml einer Lösung mit einem Gehalt an 10 mg pro Kilogramm Naltrexon, gelöst in steriler normaler Salzlösung; 2 ml einer Lösung mit einem Gehalt an 10 mg pro Kilogramm Dynorphin (1-13), gelöst in steriler normaler Salzlösung; und von 2 ml einer Lösung mit einem Gehalt von 10 mg pro Kilogramm Dynorphin(1-10)Amid, gelöst in einer sterilen normalen Salzlösung. 20 Minuten später wurde eine zweite neurologische Bestimmung durchgeführt.

Die Katzen wurden sodann mit 50 mg intramuskulär gegebenem Ketamin sediert und unter Verwendung einer sterilen Technik wurde eine osmotische Pumpe (erhältlich von ALZA Corp., Palo Alto, CA) in die vorher hergestellte subkutane Tasche im Lumbarbereich implantiert, um entweder Salzlösung mit 15 µl pro Stunde, Diphenorphen mit 100 µg pro Stunde, Naloxon mit 5 mg pro Kilogramm pro Stundes Naltrexon mit 1 mg pro Kilogramm pro Stunde, 50 µg pro Stunde Dynorphin (1-13) oder 50 µg pro Stunde Dynorphin(1-10)Amid abzugeben. Die Untersucher waren wiederum nicht darüber informiert, welche Applikationsform gegeben wurde.

Neurologische Bestimmungen wurden täglich durchgeführt, solange die Katzen am Leben waren, oder bis sieben Tage abgelaufen waren. 1 000 000 Einheiten Penicillin G wurden täglich intramuskulär gegeben und subkutane Injektion einer hinreichend mit Milchzucker versehenen Ringerlösung lieferte eine angemessene tägliche Flüssigkeitserhaltung. Wenn eine Katze begann zu fressen oder zu trinken, wurde die subkutane Flüssigkeitsgabe beendet. Falls eine Katze tot gefunden wurde, wurde eine Kraniektomie durchgeführt, das Gehirn entfernt, und ein Coronarschnitt in der Höhe des optischen Chiasma angelegt. Nach sieben Tagen wurden die überlebenden Katzen getötet.

Die Coronarschnitte wurden in eine 2%ige Lösung von 2,3,5- Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) 25 Minuten inkubiert. TTC ist umfangreich zur Demonstration der Gegenwart und des Ausmaßes eines akuten myocardischen Infarktes eingesetzt worden, und gibt eine lebhafte Anzeige des cerebralen Infarkts in aktutem Stadium. Das Reaktionsprodukt von TTC und lebensfähigem Gewebe ist ein tiefrotes Formazan, welches normales graues Material tief färbt, während normales weißes Material sich mit geringerer Intensität färbt. Infarkt-Gewebe läßt sich nicht anfärben.

Es wurden Farbschnitte aus den angefärbten Gehirnen angefertigt. Ein Neuropathologe, welcher das experimentelle Protokoll nicht kannte, stellte Aufnahmen, der gesamten betroffenen Hemisphäre und des Infarktbereiches aus projizierten Bildern der Schnitte her. Unter Verwendung eines Digitalisierers wurde der Prozentsatz infarktgeschädigten Gewebes relativ zur gesamten Hemisphäre für beide Bereiche in jeder Katze berechnet, dieses definierte die Infarktgröße.

Die untere Tabelle erläutert die Mortalität in jeder Gruppe als Funktion der Zeit nach Verschluß der Cerebralarterie.

Tabelle I

Wie durch die Daten der Tabelle I oben erläutert, starben Katzen der Blind- oder Salzlösungsgruppe in weniger als 24 Stunden. Die Gabe von Diprenorphin besaß eine geringfügige lebensverlängernde Wirkung. Sowohl Naloxon als auch Naltrexon verlängerten das Überleben. Dynorphin (1-13) verlängerte die Überlebenszeit am besten von allen Gruppen. Obwohl die Mortalitätsratenergebnisse für Dynorphin (1-10) amid bei der Verlängerung der Überlebenszeit weniger eindrucksvoll als für Naloxon, Naltrexon und Dynorphin (1-13) erscheinen, waren die Überlebensbedingungen von hoher Qualität und klinisch sehr signifikant.

Die Infarktgröße wurde nicht durch irgendeine angewandte Behandlung verändert und es war eine beträchtliche Ähnlichkeit in den Resultaten zwischen den Gruppen. D. h., es bestand kein statistisch signifikanter Unterschied in der Infarktgröße unter den Gruppen.

Claims (3)

1. Verwendung der opiumartigen Peptide Dynorphin, Dynorphinanaloga und Dynorphinamidanaloga zur Behandlung von cerebraler Ischämie.

2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das opiumartige Peptid die Aminosäurefrequenz TYR-GLY-GLY-PHE-LEU-ARG-ARG-AA⁸-AA⁹-AA¹⁰-(AA¹¹)_wbesitzt, wobei AA⁸ TYR, ILE, LEU oder LYS, AA⁹ ARG oder PRO, AA¹⁰ PRO oder LYS, AA¹¹ LYS, LYS-LEU oder LYS-LEU-LYS ist, w 0 oder 1 ist und das opiumartige Peptid als Säure oder in amidierter Form vorliegt.

3. Verwendung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das opiumartige Peptid Dynorphin(1-13) oder Dynorphin(1-10) amid ist.