DE3433156C2 - - Google Patents
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Description
Escherichia coli K 12-Stämme sind bekanntlich bevorzugte
Mikroorganismen für die Durchführung von Experimenten der
Genmanupulation. Die Technologie der rekombinanten DNA wurde
im industriellen Bereich für die Herstellung kommerziell
interessanter Substanzen entwickelt, wobei das Wirts-Vektor-
System Escherichia coli K 12 benutzt wird. Dies geschah haupt
sächlich aus zwei Gründen:
Einerseits ist die Genetik dieser Mikroorganismen derzeit am besten bekannt, und andererseits schreiben die Richtlinien für den Umgang mit rekombinanter DNA in verschiedenen Ländern die Benutzung dieses Organismus für die Durchführung von Experi menten mit rekombinanter DNA vor. Doch die Stämme besitzen nicht die Fähigkeit zur Saccharosevergärung, wie sie andere industriell nützliche Mikroorganismen aufweisen wie Bacillus, Corynebacterium, Actinomyceten oder Hefen. Daher können Escherichia coli K 12-Stämme nicht gut wachsen, wenn man Rohmaterialien wie Melasse verwendet, die Saccharose als Hauptkohlenstoffquelle enthalten. Somit wäre es wünschenswert, einen Plasmidvektor zu erhalten, der sich nicht nur dafür eignet, industriell nützliche genetische Informationen zu tragen, sondern der gleichzeitig Bakterien, beispielsweise Escherichia coli K 12, die Fähigkeit der Saccharosevergärung verleihen könnte.
Einerseits ist die Genetik dieser Mikroorganismen derzeit am besten bekannt, und andererseits schreiben die Richtlinien für den Umgang mit rekombinanter DNA in verschiedenen Ländern die Benutzung dieses Organismus für die Durchführung von Experi menten mit rekombinanter DNA vor. Doch die Stämme besitzen nicht die Fähigkeit zur Saccharosevergärung, wie sie andere industriell nützliche Mikroorganismen aufweisen wie Bacillus, Corynebacterium, Actinomyceten oder Hefen. Daher können Escherichia coli K 12-Stämme nicht gut wachsen, wenn man Rohmaterialien wie Melasse verwendet, die Saccharose als Hauptkohlenstoffquelle enthalten. Somit wäre es wünschenswert, einen Plasmidvektor zu erhalten, der sich nicht nur dafür eignet, industriell nützliche genetische Informationen zu tragen, sondern der gleichzeitig Bakterien, beispielsweise Escherichia coli K 12, die Fähigkeit der Saccharosevergärung verleihen könnte.
Dieser Plasmidvektor würde einen weiteren Vorteil gegenüber
anderen konventionellen Vektoren bieten, der dadurch bedingt
ist, daß der Phänotyp zur Saccharosegärung dazu beiträgt, die
Stabilität einer diesen Vektor enthaltenden Kultur von Mikro
organismen sicherzustellen, wenn man ein Kulturmedium be
nutzt, das Saccharose als Kohlenstoffquelle enthält. In einem
solchen Medium können nur Zellen mit diesem Plasmid wachsen,
da sie allein in der Lage sind, Saccharose zu vergären.
Wenn Zellen ihr Plasmid mit kommerziell verwertbaren Genen
verlieren, verlieren sie gleichzeitig die Fähigkeit zur
Saccharosevergärung, und sie sind nicht mehr in der Lage zu
wachsen. Dies erübrigt den Zusatz großer Antibiotikamengen
zum Kulturmedium, um auf die Anwesenheit des Plasmids zu
selektionieren, ein Verfahren, das wirtschaftlich sehr
kostenaufwendig ist.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Hybridvektoren zur
Clonierung und Expression bereitzustellen, die von Plasmiden
oder Viren (Bakeriophagen) abgeleitet sind und eine DNA-
Sequenz enthalten, die damit transformierten Organismen die
Fähigkeit zur Saccharosevergärung verleihen kann. Eine weitere
Aufgabe der Erfindung ist es, transformierte Wirtsor
ganismen zu schaffen, die die Fähigkeit zur Saccharosever
gärung aufweisen.
Diese Aufgaben werden durch die Bereitstellung der in den An
sprüchen gekennzeichneten Gegenstände gelöst.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein Hybridvektor, der von
Plasmiden oder Viren (Bakteriophagen) abgeleitet ist, zur
Clonierung und Expression, dadurch gekennzeichnet, daß er
eine DNA-Sequenz enthält, die das Saacharose-Operon des
Plasmids scr 53 (53 Mdal) aus E. coli AB 1281 (scr 53) mit
der Hinterlegungsnummer NCIB 11993 enthält und eine Größe
von 4,85 kb aufweist.
Außerdem sind Gegenstand der Erfindung ein transformierter
Wirtsorganismus bakteriellen Ursprungs, der dadurch gekenn
zeichnet ist, daß er mit einem Hybridvektor transformiert
ist, der eine Fähigkeit zur Saccharosevergärung ver
leihende DNA-Sequenz enthält, sowie das Verfahren zu seiner
Herstellung.
Durch Einführung eines Hybridvektors der Erfindung mittels
Transformation in einen Mikroorganismus, beispielsweise
einen Stamm von E. coli K 12, mit genetischen Methoden wird
ein DNA-Fragment übertragen, welches den Zellen die Fähig
keit zur Saccharosevergärung verleiht. Die neu hergestellten
Mikroorganismen sind in der Lage, in einem Kulturmedium
zu wachsen, welches Saccharose als einzige Kohlenstoffquelle
enthält. Wenn der Plasmidvektor den Zellen verlorengeht,
können die Mikroorganismen die Saccharose nicht mehr verwerten
und sind nicht mehr in der Lage, in einem solchen
Medium zu wachsen. Daher können Stämme, welche diesen Plas
midvektor tragen, gut in Rohmaterialien wie Melasse wachsen,
welche Saccharose als Hauptkohlenstoffquelle enthalten.
Dieser neue Hybridvektor kann dazu benutzt werden, andere
Gene von industriellem Interesse einzubauen. In diesem Fall
ist die Fähigkeit zur Saccharosevergärung, welche durch den
Plasmidvektor verliehen wird, nicht nur insofern nützlich,
als sie dem Mikroorganismus das Wachstum in saccharosehaltigem
Medium erlaubt, sondern auch dadurch, daß sie die Stabilität
des Plasmids auch ohne Zusatz von Antibiotika zur Kultur er
höht, wenn in diesen Medien die Gärung erfolgt. Darüber hinaus
kann man, falls die Anwesenheit anderer Mikroorganismen
vermieden werden soll, dem Medium ein Antibiotikum zufügen,
für welches der Hybridvektor Resistenz verleiht. Durch
diese zusätzliche Möglichkeit kann die Plasmidstabilität
erhöht werden. Folglich sind der Miktroorganismus und das
Verfahren zu seiner Herstellung von großem Nutzen in kommer
ziellen Gärungsprozessen.
Die Erfindung wird nachstehend an Hand einer bevorzugten Aus
führungsform näher erläutert, bei der der verwendete Mikro
organismus der bekannten Stamm Escherichia coli K 12 DH 1
(beschrieben in: Molecular Cloning, Cold Spring Harbor
(1982)) ist, der wegen seiner guten Transformationseigen
schaften einer der bevorzugten E. coli K 12-Stämme für Clo
nierungsexperimente ist. Jedoch können auch andere E. coli -
Stämme sowie andere, insbesondere gramnegative Bakterien mit
guten Ergebnissen verwendet werden.
Zur Gewinnung der Saccharosevergärungsgene (Saccharose-
Operon) wird die DNA des Stammes E. coli AB 1281 (scr 53) [NICB 11993]
benutzt. Dieser Stamm trägt das konjugative Plasmid scr 53
(53 Mdal), von dem man feststellte, daß es in der Lage ist,
einem klinisch isolierten Salmonella-Stamm die ungewöhnliche
Eigenschaft der Saccharosevergärung zu verleihen (J.
Bacteriol. 122, 401 (1975)). Das Plasmid scr 53, welches das
Saccharose-Operon enthält, kann dazu benutzt werden, die
Eigenschaft der Saccharosevergärung durch Konjugation oder
Transduktion auf andere Salmonella - oder Escherichia coli -
Stämme zu übertagen (J. Bacteriol. 122, 401 (1975)); es
kann jedoch nicht als Plasmidvektor für genetische Clonie
rungsexperimente eingesetzt werden. Mit vorliegender Erfin
dung ist es erstmals gelungen, das im Plasmid scr 53 ent
haltene Saccharose-Operon zu isolieren und in geeignete Hybrid
vektoren unzuclonieren, so daß neue genetische Manipula
tionen mit diesem Operon ermöglicht werden.
Nach Isolierung der scr 53-Plasmid-DNA durch ein gebräuch
liches Verfahren wird die DNA mit einer Restriktionsendo
nuklease behandelt. Als Vektor-DNA kann jedes Plasmid oder
jeder Phage benutzt werden, welche sich in Mikroorganismen,
beispielsweise in Escherichia Zellen vermehren können.
Nach Spaltung der Vektor-DNA mit einer Restriktionsendo
nuklease braucht man keine spezielle Methode, um das
scr 53-DNA-Fragment in den Vektor einzufügen,; es kann jede
gebräuchliche Technik zur Herstellung rekombinanter DNA
verwendet werden. Das Hybridplasmid, welches man auf diese
Weise erhält, kann in einen geeigneten Mikroorganismus, bei
spielsweise der Gattung Escherichia mittels gebräuchlicher
Transformationstechniken eingeführt werden, obwohl die Aus
beute bei diesen Techniken schwanken kann.
Transformanten können selektiert werden, da diese
Kolonien auf einem Nährboden mit Saccharose als einziger
Kohlenstoffquelle wachsen können, und da auf dem Vektor vorzugsweise
zusätzlich mindestens eine Antibiotikaresistenz codiert ist,
die als weiteres Markierungsgen dient.
Wenn das Plasmid einer auf diese Weise erhaltenen Transfor
mante genetische Information zur Saccharosevergärung trägt,
können die Transformanten einwandfrei in saccharosehaltigem
Medium wie Melasse wachsen, wodurch das Saccharose-Operon zum
Erhalt der Plasmidpräsenz beiträgt.
Das auf diese Weise geklonte Saccharose-Operon kann auch
in andere Plasmidvektoren mit bereitem Wirtsbereich umcloniert
werden, wie zum Beispiel in das Plasmid RSF 1010, welches
durch Transformation die Fähigkeit zur Saccharosevergärung in
andere gramnegative Bakterien übertragen kann.
Eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung stellt das
Vektorplasmid pSP 1 dar, das dadurch gekennzeichnet ist, daß
- a) es ein Hybridplasmid ist, das die gesamte Nukleotid sequenz des Plasmids pBR 325 und eine Fremd-DNA-Insertion an der PstI-Schnittstelle von pBR 325 enthält, wobei die Fremd- DNA-Insertion eine Saccharose-Operon von Plasmid scr 53 enthaltende DNA-Sequenz ist;
- b) es ein Molekulargewicht von etwa 10,8 kb und die folgenden
Schnittstellen für Restriktionsendonucleasen auf
weist:
- RestriktionsenzymZahl der Schnittstellen Bgl II0 Xba I0 Xho I0 Sma I1 Hind III1 Cla I2 BamH I2 EcoR I2 Sal I2 Pst I2 Sph I2 Hinc II5 Pvu II5
Der Stamm Escherichia coli AB 1281 (scr 53) [NICB 11993] mit dem konjugati
ven Plasmid scr 53 ist eine Exkonjugante des E. coli-Stamms
AB 1281 (CGSC 1281) (J. Bacteriol. 122, 401 (1975)). Dieser
Stamm wird bei 37°C 16 Stunden lang unter Schütteln in
500 m L-Medium gezüchtet, das 1% Pepton, 0,5% Hefeextrakt,
0,5% NaCl und 0,1% Saccharose enthält und auf pH 7,2 einge
stellt ist. Die Bakterienzellen werden konzentriert und
die Plasmid-DNA nach der Methode von Hansen und Olsen
(J. Bacteriol. 135, 227 (1978) extrahiert. Das Plasmid
scr 53 wird weiter durch Zentrifugation in einem isopykni
schen CsCl-Gradienten mit Ethidiumbromid gereinigt. Es werden
10 µm gereinigte DNA erhalten.
DNA des Plasmids pBR 325, einem Vektor mit Genen für
Ampicillin-, Tetracyclin- und Chloramphenicolresistenz als
Marker (Gene 4, 121 (1978)), wird auf folgende Weise gewonnen:
Zellen des Stammes Escherichia coli K 12 DH 1, welcher das
Plasmid pBR 325 trägt, werden in 500 ml L-Medium (1% Pepton,
0,5% Hefeextrakt, 0,5% NaCl, eingestellt auf pH 7,2),
die 100 µg/ml Ampicillin enthält, bei 37°C bebrütet. Die
Plasmide werden durch Zugabe von 300 µg/ml Spectinomycin
zu den Zellen in der exponentiellen Phase amplifiziert.
Nach 16 Stunden Bebrütung werden die Zell geerntet und
durch Behandlung mit Lysozym und SDS lysiert (Biochim.
Biophys. Acta 299, 516 (1973)). Nach Reinigung durch Zentri
fugation im CsCl-Ethidiumbromid-Gleichgewichtsgradienten werden
500 µg Plasmid-DNA erhalten.
1 µg der scr 53-Plasmid-DNA und 2 µg der Vektor-DNA werden
jeweils mit der Restriktionsendonuklease Pst I bei 37°C
für eine Stunde behandelt, um die DNA-Moleküle zu spalten;
anschließend wird für 10 min auf 65°C erhitzt. Die Lösungen
mit den gepalteten DNAs des Plasmids scr 53 und des Vektors
werden gemischt und die DNA-Fragmente mit T 4-DNA-Ligase in
Gegenwart von ATP, MgCl₂ und Dithiothreit bei 14°C 24 Stunden
lang ligiert. Die rekombinante DNA wird durch Ethanol
fällung gewonnen.
Komponente Zellen des Stammes Escherichia coli DH 1 werden
mit der RbC1-Methode gewonnen, die von Hanahan beschrieben
wurde (J. Mol. Biol. 166, 557 (1983)). Die im Schritt (C)
erhaltene DNA mit den Hybridplasmiden wird der Suspension
kompetenter Zellen zugefügt. Die Suspension wird für
20 min im Eis gehalten, dann 2 min auf 37°C erwärmt und schließ
lich wieder für 60 s in Eis gestellt.
Mit den Zellen, die nun DNA enthalten, wird L-Medium beimpft
und das Medium 1 Stunde bei 37°C geschüttelt, wobei die
Transformationsreaktion abgeschlossen wird. Die Zellen werden
konzentriert, mit Saline (8,5 g/l NaCl) gewaschen und auf
Agarmedium ausplattiert (9 g K₂HPO₄, 4,5 g KH₂PO₄, 2 g
(NH₄)₂SO₄, 0,1 g MgSO₄×7 H₂O, 0,01 g FeSO₄×7 H₂O,
1 mg Thiamin-HCl, 5 g Saccharose, 15 g Agar pro Liter und
12,5 µg/ml Tetracyclin).
Die Platten werden bei 37°C bebrütet. Nach 2 Tagen können
8000 Kolonien auf den Platten gezählt werden. 100 Kolonien
werden abgenommen, gereinigt und isoliert. Jede auf diese
Weise erhaltene Transformate wird auf einem Medium aus
10 g Pepton, 5 g NaCl, 10 g Saccharose, 0,02 g Bromcresol
purpur und 15 g Agar pro Liter auf ihre Fähigkeit, Saccharose
zu vergären (scr⁺-Phänotyp), geprüft. In diesem Medium
erscheinen saccharoseverwertende Transformanten als gelbe
Kolonien. Die Transformanten werden auch die Tetracyclin
und Chloramphenicolresistenz sowie auf Ampicllinsensitivität
geprüft.
Die Plasmide der Zellen, welche den richtigen Phänotyp
(scr⁺, CmR, TcR, ApS) zeigen, werden mit einer Minipräpara
tionsmethode analysiert (Molecular Cloning. Cold Spring
Harbor Laboratory (1982)). Die Hybridplasmide werden mit
Pst I gespalten und ein Klon mit einem Plasmid ausgewählt,
welches ein Pst I-Insert von 4,85 kb aufweist. Das pBR 325-Hy
bridplasmid mit besagtem Insert und als pSP 1 bezeichnet und
hat eine Größe von 10,8 kb.
Aus saccharosevergärenden Zellen des Stammes Escherichia
coli DH 1 (pSP 1) AM 512), welche das Plasmid pSP 1 besitzen,
wird die pSP 1-Plasmid-DNA durch das in Schritt (B) beschriebene
Verfahren extrahiert.
In diesem Schritt werden 0,5 µg der pSP 1-Plasmid-DNA aus dem
vorangehenden Abschnitt mit folgenden Restriktionsendo
nukleasen gespalten:
EcoR IEscherichia coli
Hind IIIHaemophillus influenzae
Pst IProvidencia stuartii
Sal IStreptomyces albus
BamH IBacillus amyloliquefaciens
Xbar IXanthomonas badrii
Pvu IIProteus vulgaris
Cla ICaryophanum latum
Xhol IXanthomonas holicola
Hinc IIHaemophilus influenzae
Sph IStreptomyces phaechromogenes
Sma IXanthomonas malvacearum
Bgl IIBacillus globigii
Die Restriktionsendonukleasen werden unter den
für jedes Enzym geeignete Bedingungen eingesetzt. Die
daraus hervorgehenden DNA-Fragmente werden durch horizontale
Elektrophorese in 0,5% Agarose-Gelen analysiert. Das Mole
kulargewicht eines jeden Fragments wird aus seiner elektro
phoretischen Wanderungsgeschwindigkeit errechnet. Die Be
rechnung erfolgt mittels einer Standardkurve, bei der die
elektrophoretischen Wanderungsgeschwindigkeiten gegen die
bekannten Molekluargewichte von DNA-Fragmenten aufgetragen
werden, welche durch Hind III-Spaltung von DNAs der
Phagen λ und Φ erhalten werden.
Die Ergebnisse sind in Tabelle I dargestellt.
RestriktionsendonukleaseAnzahl der Spaltstellen
auf dem Plasmid pSP 1
RestriktionsendonukleaseAnzahl der Spaltstellen
auf dem Plasmid pSP 1
Bgl II0
Xba I0
Xho I0
Sma I1
Hind III1
Cla I2
BamH I2
EcoR I2
Sal I2
Pst I2
Sph I2
Hinc II5
Pvu II5
Die Restriktionskarte des Plasmids pSP 1 wird durch Einzel
und Doppelpaltungen der Plasmid-DNA mit Restriktionsendo
nukleasen und Analyse der DNA-Fragmente durch Agarose-Gel
elektrophorese erstellt. Die bekannte Restriktionskarte des
Plasmids pBR 325 (Gene 14, 289 (1981)) wird ebenfalls für
die Erstellung der pSP 1-Restriktionskarte herangezogen. Diese
ist in der Zeichnung dargestellt.
Die Saccharoseaktivität wird durch folgende Methode bestimmt,
die auf dem Auftreten von reduzierenden Zuckern nach
Saccharosespaltung beruht: Zellen des Stammes E. coli DH 1 mit
dem Plasmid pBR 325 oder dem neuen Hybridvektorplasmid pSP 1
werden in L-Medium und in L-Medium mit 10 mmol/l Saccharose kulti
viert. Die Zellen werden geerntet und die bakteriellen
Pellets mit 50 mmol/l Kaliumphosphat-Puffer pH 6,5 gewaschen,
der 200 mml/l KCl und 1 mml/l 2-Mercaptoethanol enthielt. Nach
dem Waschen werden die Zellen im gleichen Puffer resuspendiert
und mit Ultraschall behandelt. Nach dieser Behandlung wird
die Suspension bei 40 000 × g 20 min lang bei 4°C zentrigu
giert. Der Überstand wird extrahiert und ohne weitere Be
handlung verwendet. Eine Mischung von 0,5 ml dieser
Enzympräparation und 0,5 ml von 1 mol/l Saccharose wird 30 min
bei 37°C inkubiert. Durch Zugabe von 1 ml Dinitrosalicyl-
Reagens (Methods in Enzymol. 1, 149 (1955)) wird die Reak
tion gestoppt. Die Proben werden für 5 min in ein kochendes
Wasserbad gesetellt, in Eis gekühlt und mit 20 ml destl. Wasser
verdünnt. Die optische Dichte der Proben wird bei
540 nm gemessen. Standardlösungen von Glucose werden zur
Eichung verwendet. Die Proteinkonzentration wird mit
einer gebräuchlichen Methode bestimmt.
Wie in Tabelle II gezeigt, wurde in den pSp 1 enthaltenden
Zellen von E. coli DH 1 die Saccharaseaktivität konstitutiv
experimiert.
- Maniatis T. et al., Molecluar cloning, a laboratory manual.
Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor New York.
(1982).
- Wohlhieter, J. A. et al., J. Bacteriol. 122, 401-406 (1975).
- Bolivar F., Gene 4, 121-136 (1978).
- Godson, G. N. and Vapnek, D., Biochim. Biophys. Acta 299, 516-520 (1973).
- Hanahan D., J. Mol. Biol. 166, 557-567 (1983).
- Bernfeld P., Methods in Enzymol. 1 149-159 (1955).
- Hansen, J. B. and Olsen, R. H., J. Bacteriol. 135, 227-238 (1978).
- Prentki, P. et al., Gene 14, 289-299 1981).
- Wohlhieter, J. A. et al., J. Bacteriol. 122, 401-406 (1975).
- Bolivar F., Gene 4, 121-136 (1978).
- Godson, G. N. and Vapnek, D., Biochim. Biophys. Acta 299, 516-520 (1973).
- Hanahan D., J. Mol. Biol. 166, 557-567 (1983).
- Bernfeld P., Methods in Enzymol. 1 149-159 (1955).
- Hansen, J. B. and Olsen, R. H., J. Bacteriol. 135, 227-238 (1978).
- Prentki, P. et al., Gene 14, 289-299 1981).
Claims (11)
1. Hybridvektor, der von Plasmiden oder Viren (Bakterio
phagen) abgeleitet ist, zur Clonierung oder Expression,
dadurch gekennzeichnet, daß er eine DNA-Sequenz enthält,
die das Saccharose-Operon des Plasmids scr 53 (53 Mdal)
aus E. coli AB 1281 (scr 53) mit der Hinterlegungsnummer
NICB 11993 enthält und eine Größe von 4,85 kb auf
weist.
2. Hybridvektor pSP 1, nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß
- a) er ein Hybridplasmid ist, das die gesamte Nucleotid sequenz des Plasmids pBR 325 und eine Fremd-DNA-Inser tion in der PstI-Schnittstelle von pBR 325 enthält, wobei die Fremd-DNA-Insertion eine DNA-Sequenz gemäß Anspruch 1 ist,
- b) er eine Größe von etwa 10,8 kb hat und die folgenden Schnittstellen für Restriktionsendonucleasen aufweist: RestriktionsenzymZahl der SchnittstellenBgl II0 Xba I0 Xho I0 Sma I1 Hind III1 Cla I2 BamH I2 Ecor I2 Sal I2 Pst I2 Sph I2 Hinc II5 Pvu II5
3. Hybridvektor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß er von einem Plasmidvektor mit breitem Wirtsbereich
abgeleitet ist.
4. Hybridvektor nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet,
daß das Plasmid mit breitem Wirtsbereich das Plasmid
RSF 1010 ist.
5. Hybridvektor nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch
gekennzeichnet, daß er außerdem mindestens eine DNA-
Sequenz enthält, die für eine Resistenz gegen ein Anti
biotikum codiert.
6. Hybridvektor nach einem der Ansprüche 1 bis 5 dadurch
gekennzeichnet, daß er außerdem eine DNA-Sequenz ent
hält, die ein wertvolles Genprodukt codiert.
7. Verfahren, einem Bakterium die Fähigkeit zu verleihen,
in einem Saccharose als einzige Kohlenstoffquelle ent
haltenden Medium zu wachsen und gegebenenfalls ein wert
volles Genprodukt herzustellen, dadurch gekennzeichnet,
daß man das Baktertium mit einem Hybridvektor nach einem
der Ansprüche 1 bis 6 transformiert.
8. Bakertium, das mit einem Hybridvektor nach einem der
Ansprüche 1 bis 6 transformiert ist.
9. Bakterium nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
es gram-negativ ist.
10. Bakterium nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
es eine Art der Gattung Escherichia ist.
11. Escherichia coli DH 1 (SP 1) mt der Hinterlegungs-Nummer
NCIB 11940.
Applications Claiming Priority (1)
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE3433156A1 DE3433156A1 (de) | 1985-10-10 |
| DE3433156C2 true DE3433156C2 (de) | 1988-12-29 |
Family
ID=10556683
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19843433156 Granted DE3433156A1 (de) | 1984-02-16 | 1984-09-10 | Die faehigkeit zur fermentation von saccharose verleihende dna-sequenz, diese dna-sequenz enthaltender vektor, transformierter wirtsorganismus und ihre verwendung |
Country Status (4)
| Country | Link |
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| DE (1) | DE3433156A1 (de) |
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| GB (1) | GB2155935B (de) |
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| US5569595A (en) * | 1991-09-27 | 1996-10-29 | Center For Innovative Technology | Production of poly-β-hydroxybutyrate in prokaryotic host cells |
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| KR101058894B1 (ko) | 2009-03-03 | 2011-08-23 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-아미노산 생산 미생물 및 이를 이용한 ｌ-아미노산 생산방법 |
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-
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- 1984-07-30 FR FR8412097A patent/FR2559781B3/fr not_active Expired
- 1984-09-10 DE DE19843433156 patent/DE3433156A1/de active Granted
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- 1985-02-19 US US06/702,587 patent/US4806480A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
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| GB2155935A (en) | 1985-10-02 |
| GB8404057D0 (en) | 1984-03-21 |
| FR2559781B3 (fr) | 1986-05-30 |
| FR2559781A1 (fr) | 1985-08-23 |
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| US4806480A (en) | 1989-02-21 |
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