DE2935195A1

DE2935195A1 - Neues leberkontrastmittel und verfahren zu dessen herstellung

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Publication number: DE2935195A1
Application number: DE19792935195
Authority: DE
Inventors: Nichtnennung Beantragt
Original assignee: DAENIKER FELIX
Current assignee: DAENIKER FELIX
Priority date: 1978-10-05
Filing date: 1979-08-31
Publication date: 1980-04-17
Also published as: FR2437831A1; CH641682A5; FR2437831B1

Description

Die röntgenologische Kontrastdarstellung der Leber ist ein altes Anliegen des Arztes„ Trotzdem gibt es bis heute dazu kein brauchbares Kontrastmittel„

Die Hepato-Lienographie, d.h. die positive Kontrastuntersuchung der Leber und Milz auf indirektem Wege durch intravenöse Injektion eines Kontrastmittels wurde früher mit
Thorotrast, später mit Jodsolen vorgenommen. Wegen der
schädigenden Wirkung dieser Kontrastmittel, die nicht mehr oder nicht genügend rasch ausgeschieden werden, ΐ-d-rd diese Untersuchung nur noch im Experiment durchgeführt. [Barke
Röntgenkontrastmittel, S. 266, Georg Thieme-Verlag, Leipzig, 1970.]

Darstellungen der Leber mit Hilfe von Ultraschall-Echoverfahren, wie sie neuerdings vorgeschlagen werden, geben keine diagnostisch ausreichende Informationen«

Es stellt sich demnach das Problem wie man gut verträgliche Röntgenkontrastmittel, wie sie z.B. die intravenös anwendbaren hochverträgiichen modernen Urographie- und Vaso- - graphiemittel AMIDQTRIZOAT, . ÄCIDUM IOXOTRIZOICUM, METRIZOAT, ACIDUM IOTÄLÄMICUM, ÄCIDUM IOXITALäMICUM, ÄCIDUM lOGLICICUM, ÄCIDUM IQXAGLICÜM und ACIDUM lOCARMICUM oder die Cholestographiemittel ADIPIQDON, ACIDUM lOGLYCAMICUM, ACIDUM
lOTROXICUM und ACIDUM lOSEFÄMICUM darstellen, präparieren
kann, dass sie zur Darstellung der Leber und Milz verwendbar \-ierden„

Es wurde z„B. versucht. Emulsionen oder Suspensionen von
Estern von oben genannten Kontrastmittelsäuren als Hepato-Lienographiemittel zu verwenden., Jedoch erwies sich einerseits die Stabilität von Emulsionen und Suspensionen im

allgemeinen als ungenügend und andererseits der Metabolismus der Kontrastmittelester zu langsam, um eine für die
klinische Anwendung ausreichende Sicherheit dieser diagnostischen Methode zu erreichen»

Es ist bekannt, dass sich Liposome aus Phospholipiden nach intravenöser Injektion bevorzugt in der Leber und Milz konzentrieren.

Liposome sind aus sphärischen bzw. polysphärischen Phospholipiden gebildete Mikrokapseln, deren Kern bzw. Zwischenräume Wirkstoffe oder Indikatoren enthalten können, die im Organismus nur langsam freigesetzt werden. Liposome haben im allgemeinen Abmessungen, die in der Grössenordnung roter Blutkörperchen liegen und demzufolge intravenös injizierbar sind. Da sie aus natürlichem Material bestehen oder in natürliche Komponenten metabolisieren, werden Liposome geeigneter Grosse vom Organismus im allgemeinen gut vertragen. Vergl. dazu beispielsweise DT-OS 2.725.696 (22.12.77). Oelembolien oder Thrombosen wie bei Jodoelen sind jedenfalls hier nicht zu befürchten.

Dank der langsamen Freisetzung der Kontrastsubstanz treten auch keine schockartigen Calcium-Entzugserscheinungen auf.

Parallel zu der Verbesserung der Technik der Liposome entwickelte sich auch ein zunehmendes Interesse für die Verwendung von Liposomen als Träger für Wirkstoffe und Enzyme und auch als immunologische Hilfsstoffe. DT-OS 2.532.317 (29.1.76), DT-OS 2.712.031 (29.9.77), DT-OS 2.643.641 (14.4.77). Ihre allgemeine Struktur ist einigermassen bekannt. Es handelt sich z.B. um zwiebelartige Strukturen, die eine Reihe von Lipidschichten aufweisen, d.h. um Kügelchen, die eine wässerige Flüssigkeit welche Wirkstoffe enthalten kann, umschliessen. Liposome werden gewöhnlich in isotonischen wässerigen Medien, insbesondere physologischer Kochsalzlösung (0,9 Gew. % NaCl), kolloid dispergiert.

Der vorliegenden Erfindung liegt die Idee zu Grunde, hochverträgliche schattengebende Komponenten, die sich als Röntgenkontrastmittel bereits bestens bewährt haben, in

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Liposome einzubetten und derart Präparate zu schaffen, die nach intravenöser Verabreichung bevorzugt in Leber und Milz konzentriert werden.

Es wurde nun gefunden, dass insbesondere Salze der hochverträglichen stark sauren Kontrastmittelsäuren, \cLe sie in den modernen intravenös anwendbaren Urographie-, Gefäss- und Cholecystographiemitteln verwendet werden, mit Phospholipiden nach an sich bekannten Verfahren zu Liposomen verarbeitet werden können, die sich ihrerseits intravenös verabreichen lassen. Es wurde weiter gefunden, dass wenige Minuten nach intravenöser Verabreichung dieser Liposome im Röntgenkontrastbild die Leber und Milz erkennbar wird« Die quantitative Ausmessung der Leber/Milz-Kontraste kann auch mit Hilfe der Tomographie erfolgen, einer Methode die es ermöglicht, auch feine Differenzen quantitativ zu erfassen und diagnostisch auszuwerten.

Gewöhnlich sind bereits einige Stunden nach der intravenösen Applikation dieser Liposome die Röntgenkontraste weitgehend verschwunden. Die schattengebenden Komponenten sind demnach bereits ausgeschieden worden., Entsprechend ihrer bekannten hohen Verträglichkeit und hohen Ausscheidungsgeschwindigkeit werden sie laufend mit dem Harn entfernt. Bereits nach 24 - 48 Stunden sind die Kontrastmittel praktisch vollkommen aus dem Organismus ausgeschieden» Damit ist das gesteckte Ziel erreicht vrorden, Kontrastmittel für die spezifische Darstellung der Leberorgane zu schaffen, die eine zuverlässige Diagnose ermöglichen und rasch wieder aus dem Organismus eliminiert werden und daher keine Langzeitschädigungen verursachen können, wie sie allen bisher geprüften Leberkontrastmitteln eigen sind.

Die vorliegende Erfindung betrifft demnach Röntgenkontrastmittel zur Darstellung insbesondere der Leber und der Milz bestehend aus hochverträglichen jodhaltigen Röntgenkontrastmitteln vom Typus der 2,4,6-Trijodbenzoesäure-Derivate ein-

gebettet in sphärische Phospholipide, Liposome mit Multilayer-Struktur.

Als schattengebende Komponenten verwendet man dazu bekannte Verbindungen der allgemeinen Formel, worin Acyl einen ein- oder zweiwertigen Acyl-Rest, Y Wasserstoff, eine Acylamino-, N-Alkyl-acylamino-, Alkylaminocarbonyl- oder Hydroxyalkylaminocarbonyl-Gruppe und X eine OH-Gruppe oder den Rest einer Carboxylat-Salzgruppe (-O-Kation) bedeutet.

Besonders geeignete schattengebende Verbindungen sind 3,5-Bis-(acetylamino)-2,4,6-trijod-benzoesäure, 5-Acetamido-2,4,6-trijod-N-methylisophthalamidsäure, Adipinsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijod-anilid), Diglykolsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijod-anilid) oder 5,5'-(AdipoyldiaminoJ-bis-(2,4,6-trijod-N-methylisophthalamidsäure) bzw. deren Salze.

Das Verfahren zur Herstellung von Röntgenkontrastmitteln gemäss vorliegender Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, dass man in an sich bekannter Weise ein Phospholipid in einer konzentrierten Salzlösung der schattengebenden Komponente dispergiert und daraus Liposome mit Multilayer-Struktur formt.

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Beispieles Kontrastmittelsubstanzen (= schattenqebende Komponenten)

AMIDQTRIZOATs 3, 5^-Bis- (acetylamino )-2,4,6-tri jod-benzoesäure*

ACIDUM IOXOTRIZOICüMs S-Acetamido-S-glycolamido^, 4,6-

trijod-benzoesäure.

METRIZOAT: 3-Ac et amido-2,4, 6-tri jod-5-(N-methylacetamido-benzoesäure.

ACIDUM lOTÄLAMICUMs 5-Acetamido-2_f4,6-trijod-N-methylisophthalamidsäure.

ACIDUM lOXITALAMICUM: S-Acetamido-N-(2-hydroxyethyl)-2,4,6-tri jod-isoplrtlialamidsäure <. Verwendet v/ird eine hochkonzentrierte Lösung des Natrium- oder N-Methylglukamin = (MGA)-Salzes oder eine Mischung beider

Salze*

ADIPIODONs Adipinsäure-bis-(3-carboxy-2,4„6-trijodanilid) (50 %ige Lösung des Natrium- oder MGA-S alzesK

ACIDUM lOGLYCAMICUMs Diglykolsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-

trijodanilid) (5O %ige Lösung des-Natrium- und/oder MGA-Salzes) <.

ACIDUM lOCARMICUMs 5,5^e-(Adipoyldiamino)-bis-(2,4,6-trijod-N-methyl-isophthalamidsäure). Lösung des Natrium- oder MGA-Salses.

Trägermaterial

Phospholipide insbesondere Lecithine variierender Zusammensetzung.

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Herstellung der Liposome

Die Phospholipide werden in einem geeigneten organischen

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Lösungsmittel wie Methanol, Äthanol, Chloroform oder Methylenchlorid gelöst. Die Lösung wird in einem grossräumigen Kolben eingedampft, derart, dass die Kolbeninnenfläche von einem möglichst dünnen gleichmässigen Film überzogen ist. Das organische Lösungsmittel wird durch Anwendung von Fein- und/oder Hochvakuum vollständig entfernt.

Nun fügt man die konzentrierte wässerige Lösung der gewünschten schattengebenden Komponente zu und schüttelt oder turbiniert.

Die entstandene Dispersion wird zentrifugiert (15' bei 25 000 g). Die Liposomenschicht schwimmt oben auf. Sie wird von der überschüssigen Lösung des Kontrastmittels abgetrennt und in physiologischer Kochsalzlösung erneut dispergiert. Durch Zentrifugieren(2' bei 2 000 g) trennt man die grosseren Teile ab. Die homogene, milchige kolloid-disperse Liposomen-Lösung stellt das gebrauchsfertige Röntgenkontrastmittel dar.

Alle Operationen werden unter Schutzgas, gewöhnlich Stickstoff, vorgenommen, um eine Oxydation der empfindlichen Phospholipide auszuschliessen. Alle verwendeten Ausgangsstoffe und Gefässe müssen sterilisiert oder sterilfil- triert werden. Alle Operationen werden unter sterilen Bedingungen durchgeführt.

Herstellvorschrift

4 g einer aus Soja gewonnenen Mischung von Phospholipiden mit überschüssiger negativer Ladung werden unter Stickstoff in 40 ml Chloroform gelöst. Die Lösung wird in einem 1 Liter Kolben im Vakuum am Rotationsverdampfer langsam eingeengt. An der Kolbenwand bildet sich ein gleichmässiger dünner Film. Dieser wird zunächst im Wasserstrahlva-

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kuum und später im Hochvakuum bei maximal 5O°C getrocknet., Nach dem Trocknen werden 20 - 40 ml der einzuschliessenden konzentrierten wässerigen Lösung der schattengebenden Komponenten zugegeben« Durch Schütteln von Hand, durch Turbinieren oder mittels Vibromischer werden die Liposome gebildet. Leichtes Erwärmen fördert die Liposomenbildung.. Sobald der ursprüngliche Film vollständig dispergiert ist, wird die entstandene milchige Lösung zentrifugiert (15' bei 25 000 g)< Die gebildeten Liposome schwimmen auf der überschüssigen Lösung der schattengebenden Komponenten«, Die Lösung wird abdekantiert und durch dasselbe Volumen physiologischer Kochsalzlösung ersetzt. Die Liposome werden durch Schütteln oder mittels eines Vibrömischers erneut dispergiert«. Gröbere Partikel werden durch nochmaliges kurzes Zentrifugieren (2" bei 2 0OO g) abgetrennt. Die überstehende Emulsion stellt das gebrauchsfertige Röntgenkontrastmittel dar.

Pharmakoloqische Prüfungen

Die auf die oben beschriebene Weise erhaltenen Liposomen™ Dispersionen wurden Kaninchen und Hunde intravenös appliziert und zwar in Dosen von ca. 1 - 3 ml pro kg mit einer Injektionsgeschwindigkeit von ca» O₈2 - 10 ml/Min„Die verwendeten Dispersionen enthielten etwa 0,05 — 0,2 schattengebende Komponente pro ml entsprechend ca. 30 - 120 mg Jod pro ml und weisen einen niedrigen ösmotischen Druck auf«.

Ergebnisse

Bereits 15 Minuten nach der intravenösen Verabreichung der Liposome war im Röntgenbild die Leber und gewöhnlich auch die Milz der Versuchstiere sichtbar« Eine diagnostisch aussagekräftige Auswertung der Kontraste kann insbesondere durch Ausmessung mit Hilfe der Tomographie erfolgen. Dadurch werden selbst geringe visuell kaum registrierbare Kontrastdifferenzen quantitativ erfassbar.

Claims

Paüentanwälte

Ir. Hisse-irJ 69 Heidelberg 1 Gaisbergsfc 3 » Telefon 25335

Neues Leberkontrastmittel und Verfahren zu dessen Herstellung

Patentanspruches

1«, Röntgenkontrastmittel zur Darstellung insbesondere der Leber und der Milz bestehend aus hochverträglichen jodhaltigen Rontgenkontrastmxtteln vom Typus der 2,4,6-Trijodbenzoesäure-Derivate eingebettet in sphärische Phospholipide, Liposome mit Multilayer-Struktur.

2„ Röntgenkontrastmittel nach Patentanspruch I₁ dadurch gekennzeichnet, dass man als schattengebende Komponente bekannte Verbindungen der allgemeinen Formel

MH-Äcyl

verwendet, worin Acyl einen ein- oder zweiwertigen Acyl-Rest, Y Wasserstoff, eine Acylamino-, N-Alkyl-acyl— amino-, Alkylaminocarbonyl- oder Hydroxyalkylaminocarbonyl-Gruppe und X eine OH-Gruppe oder den Rest einer Carboxylat-Salzgruppe (-O-Kation) bedeutet.

3. Röntgenkonstrastmittel nach Patentansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass man als schattengebende Komponente 3,5-Bis-(acetylamino)-2,4,6-trijod-benzoesäure oder 5-Acetamido-2,4_/6-trijod-N-methylisophthalamidsäure bzw. deren Salze verwendet.

4. Röntgenkontrastmittel nach Patentansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass man als schattengebende Komponenten Adipinsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijod-anilid), Diglykolsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijod-anilid) oder 5,5'-(Adipoyldiamino)-bis-(2,4,6-trijod-N-mehtylisophthalamidsäure) bzw. deren Salze verwendet.

5. Verfahren zur Herstellung von Röntgenkontrastmitteln gemäss Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man in an sich bekannter Weise ein Phospholipid in einer konzentrierten Salzlösung der schattengebenden Komponente dispergiert und daraus Liposome mit Multilayer-Struktur formt.

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