CH641682A5

CH641682A5 - X-ray contrast medium

Info

Publication number: CH641682A5
Application number: CH1033378A
Authority: CH
Inventors: Hat Auf Nennung Verzichtet Erfinder
Original assignee: Daeniker Felix
Priority date: 1978-10-05
Filing date: 1978-10-05
Publication date: 1984-03-15
Also published as: DE2935195A1; FR2437831B1; FR2437831A1

Description

Der vorliegenden Erfindung liegt die Idee zu Grunde, hochverträgliche schattengebende Komponenten, die sich als Röntgenkontrastmittel bereits bestens bewährt haben, in Liposome einzubetten und derart Präparate zu schaffen, die nach intravenöser Verabreichung bevorzugt in Leber und Milz konzentriert werden. The present invention is based on the idea of embedding highly tolerable shadow-giving components, which have already proven their worth as X-ray contrast agents, in liposomes and to create such preparations which are preferably concentrated in the liver and spleen after intravenous administration.

Es wurde nun gefunden, dass insbesondere Salze der hochverträglichen stark sauren Kontrastmittelsäuren, wie sie in den modernen intravenös anwendbaren Urographie-, Ge-fäss- und Cholecystographiemitteln verwendet werden, mit Phospholipiden nach an sich bekannten Verfahren zu Liposomen verarbeitet werden können, die sich ihrerseits intravenös verabreichen lassen. Es wurde weiter gefunden, dass wenige Minuten nach intravenöser Verabreichung dieser Liposome im Röntgenkontrastbild die Leber und Milz erkennbar wird. Die quantitative Ausmessung der Leber/Milz-Kontra-ste kann auch mit Hilfe der Tomographie erfolgen, einer Methode, die es ermöglicht, auch feine Differenzen quantitativ zu erfassen und diagnostisch auszuwerten. It has now been found that, in particular, salts of the highly tolerated, strongly acidic contrast medium acids, such as those used in modern intravenously applicable urography, vascular and cholecystography means, can be processed with phospholipids to liposomes, which in turn are intravenous, using processes known per se let be administered. It was also found that a few minutes after intravenous administration of these liposomes, the liver and spleen can be seen in the X-ray contrast image. The quantitative measurement of the liver / spleen contrast can also be carried out with the help of tomography, a method that makes it possible to quantitatively record even fine differences and evaluate them diagnostically.

Gewöhnlich sind bereits einige Stunden nach der intravenösen Applikation dieser Liposome die Röntgenkontraste weitgehend verschwunden. Die schattengebenden Komponenten sind demnach bereits ausgeschieden worden. Entsprechend ihrer bekannten hohen Verträglichkeit und hohen Ausscheidungsgeschwindigkeit werden sie laufend entfernt. Bereits nach 24-48 Stunden sind die Kontrastmittel praktisch vollkommen aus dem Organismus ausgeschieden. Usually, the x-ray contrasts have largely disappeared a few hours after the intravenous application of these liposomes. The shadowing components have therefore already been eliminated. They are continuously removed in accordance with their well-known high tolerance and high excretion rate. The contrast agents are practically completely eliminated from the organism after only 24-48 hours.

Damit ist das gesteckte Ziel erreicht worden, Kontrastmittel für die spezifische Darstellung der Leberorgane zu schaffen, die eine zuverlässige Diagnose ermöglichen und rasch wieder aus dem Organismus eliminiert werden und da2 This has achieved the goal of creating contrast media for the specific representation of the liver organs, which enable reliable diagnosis and are quickly eliminated from the organism, and there

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her keine Langzeitschädigungen verursachen können, wie sie allen bisher geprüften Leberkontrastmitteln eigen sind. cannot cause long-term damage that is common to all liver contrast agents tested to date.

Die vorliegende Erfindung betrifft demnach Röntgenkontrastmittel, wie sie im Patentanspruch 1 definiert werden. The present invention accordingly relates to X-ray contrast media as defined in claim 1.

Besonders geeignete schattengebende Verbindungen sind 3,5-Bis-(acetylamino)-2,4,6-trijod-benzoesäure, 5-Acetami-do-2,4,6-trijod-N-methylisophthalamidsäure, Adipinsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijod-anilid), Diglykolsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijod-anilid) oder 5,5'-(Adipoyldiamino)-bis-(2,4,6-trijod-N-methylisophthalamidsäure) bzw. deren Salze. Particularly suitable shading compounds are 3,5-bis (acetylamino) -2,4,6-triiodo-benzoic acid, 5-acetami-do-2,4,6-triiodo-N-methylisophthalamic acid, adipic acid bis- (3- carboxy-2,4,6-triiodo-anilide), diglycolic acid bis- (3-carboxy-2,4,6-triiodo-anilide) or 5,5 '- (adipoyldiamino) -bis- (2,4,6 -triiod-N-methylisophthalamic acid) or its salts.

Das erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung von Röntgenkontrastmitteln gemäss vorliegender Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, dass man ein Phospholipid in einer konzentrierten Salzlösung der schattengebenden Komponente der Formel I, gemäss Anspruch 1 dispergiert und daraus Liposome mit Multilayer-Struktur formt. The process according to the invention for producing X-ray contrast media according to the present invention is characterized in that a phospholipid is dispersed in a concentrated salt solution of the shadowing component of the formula I, and liposomes with a multilayer structure are formed therefrom.

Beispiele Examples

Kontrastmittelsubstanzen (= schattengebende Komponenten) Contrast agent substances (= shading components)

Amidotrizoat: Amidotrizoate:

3,5-Bis-(acetylamino)-2,4,6-trijod-benzoesäure. 3,5-bis (acetylamino) -2,4,6-triiodo-benzoic acid.

Acidum Ioxotrizoicum: Acidum Ioxotrizoicum:

3-Acetamido-5-glycolamido-2,4,6-trijod-benzoesäure. Metrizoat: 3-acetamido-5-glycolamido-2,4,6-triiodo-benzoic acid. Metrizoat:

3-Acetamido-2,4,6-trijod-5-(N-methylacetamido-ben-zoesäure. 3-Acetamido-2,4,6-triiodo-5- (N-methylacetamido-ben-zoic acid.

Acidum Iotalamicum: Acidum Iotalamicum:

5-Acetamido-2,4,6-trijod-N-methyl-isophthalamidsäure. Acidum Ioxitalamicum: 5-acetamido-2,4,6-triiodo-N-methyl-isophthalamic acid. Acidum Ioxitalamicum:

5-Acetamido-N-(2-hydroxyethyl)-2,4,6-trijod-iso-phthalamidsäure. 5-Acetamido-N- (2-hydroxyethyl) -2,4,6-triiodo-iso-phthalamic acid.

Verwendet wird eine hochkonzentrierte Lösung des Natrium- oder N-Methylglukamin = (MGA)-Salzes oder eine Mischung beider Salze. A highly concentrated solution of the sodium or N-methylglucamine = (MGA) salt or a mixture of both salts is used.

Adipiodon: Adipiodon:

Adipinsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijod-anilid) (50%ige Lösung des Natrium- oder MGA-Salzes). Adipic acid bis (3-carboxy-2,4,6-triiodine anilide) (50% solution of the sodium or MGA salt).

Acidum Ioglycamicum: Acidum Ioglycamicum:

Diglykolsäure-bis-(3-carboxy-2,4,6-trijodanilid) (50%ige Lösung des Natrium- und/oder MGA-Salzes). Diglycolic acid bis (3-carboxy-2,4,6-triiodanilide) (50% solution of the sodium and / or MGA salt).

Acidum Iocarmicum: Acidum Iocarmicum:

5,5/-(Adipoyldiamino)-bis-(2,4,6-trijod-N-methyl-iso-phthalamidsäure). 5.5 / - (Adipoyldiamino) bis (2,4,6-triiodo-N-methyl-iso-phthalamic acid).

Lösung des Natrium- oder MGA-Salzes. Solution of the sodium or MGA salt.

Trägermaterial Phospholipide, insbesondere Lecithine variierender Zusammensetzung. Carrier material phospholipids, in particular lecithins of varying composition.

Herstellung der Liposome Die Phospholipide werden in einem geeigneten organischen Lösungsmittel wie Methanol, Äthanol, Chloroform oder Methylenchlorid gelöst. Die Lösung wird in einem grossräumigen Kolben eingedampft, derart, dass die Kolbeninnenfläche von einem möglichst dünnen gleichmäs-sigen Film überzogen ist. Das organische Lösungsmittel wird durch Anwendung von Fein- und/oder Hochvakuum vollständig entfernt. Preparation of the liposomes The phospholipids are dissolved in a suitable organic solvent such as methanol, ethanol, chloroform or methylene chloride. The solution is evaporated in a large-volume flask in such a way that the inner surface of the flask is covered with a thin, even film. The organic solvent is completely removed by applying a fine and / or high vacuum.

Nun fügt man die konzentrierte wässerige Lösung der gewünschten schattengebenden Komponente zu und schüttelt oder turbiniert. Now add the concentrated aqueous solution to the desired shading component and shake or turbinate.

Die entstandene Dispersion wird zentrifugiert (15' bei 25 000 g). Die Liposomenschicht schwimmt oben auf. Sie wird von der überschüssigen Lösung des Kontrastmittels abgetrennt und in physiologischer Kochsalzlösung erneut dispergiert. Durch Zentrifugieren (2' bei 2000 g) trennt man die grösseren Teile ab. Die homogene, milchige kolloid-di-sperse Liposomen-Lösung stellt das gebrauchsfertige Röntgenkontrastmittel dar. The resulting dispersion is centrifuged (15 'at 25,000 g). The liposome layer floats on top. It is separated from the excess solution of the contrast medium and redispersed in physiological saline. The larger parts are separated off by centrifugation (2 'at 2000 g). The homogeneous, milky colloid-reverse liposome solution is the ready-to-use X-ray contrast medium.

Alle Operationen werden unter Schutzgas, gewöhnlich Stickstoff, vorgenommen, um eine Oxydation der empfindlichen Phospholipide auszuschliessen. Alle verwendeten Ausgangsstoffe und Gefässe müssen sterilisiert oder sterilfiltriert werden. Alle Operationen werden unter sterilen Bedingungen durchgeführt. All operations are carried out under an inert gas, usually nitrogen, to prevent oxidation of the sensitive phospholipids. All raw materials and vessels used must be sterilized or sterile filtered. All operations are carried out under sterile conditions.

Herstellvorschrift Manufacturing instructions

4 g einer aus Soja gewonnenen Mischung von Phospholipiden mit überschüssiger negativer Ladung werden unter Stickstoff in 40 ml Chloroform gelöst. Die Lösung wird in einem 1-Liter-Kolben im Vakuum am Rotationsverdampfer langsam eingeengt. An der Kolbenwand bildet sich ein gleichmässiger dünner Film. Dieser wird zunächst im Wasserstrahlvakuum und später im Hochvakuum bei maximal 50 °C getrocknet. Nach dem Trocknen werden 20-40 ml der einzuschliessenden konzentrierten wässerigen Lösung der schattengebenden Komponenten zugegeben. Durch Schütteln von Hand, durch Turbinieren oder mittels Vibromischer werden die Liposome gebildet. Leichtes Erwärmen fördert die Liposomenbildung. Sobald der ursprüngliche Film vollständig dispergiert ist, wird die entstandene milchige Lösung zentrifugiert (15'bei 25 000 g). Die gebildeten Liposome schwimmen auf der überschüssigen Lösung. 4 g of a mixture of phospholipids with excess negative charge obtained from soy are dissolved in 40 ml of chloroform under nitrogen. The solution is slowly concentrated in a 1 liter flask in vacuo on a rotary evaporator. A uniform thin film forms on the piston wall. This is first dried in a water jet vacuum and later in a high vacuum at a maximum of 50 ° C. After drying, 20-40 ml of the concentrated aqueous solution of the shading components to be enclosed are added. The liposomes are formed by shaking by hand, by turbinating or using a vibromixer. Gentle warming promotes liposome formation. As soon as the original film is completely dispersed, the resulting milky solution is centrifuged (15 'at 25,000 g). The liposomes formed float on the excess solution.

Die Lösung wird abdekantiert und durch dasselbe Volumen physiologischer Kochsalzlösung ersetzt. Die Liposome werden durch Schütteln oder mittels eines Vibromischers erneut dispergiert. Gröbere Partikel werden durch nochmaliges kurzes Zentrifugieren (2' bei 2000 g) abgetrennt. Die überstehende Emulsion stellt das gebrauchsfertige Röntgenkontrastmittel dar. The solution is decanted off and replaced with the same volume of physiological saline. The liposomes are redispersed by shaking or using a vibromixer. Coarser particles are separated by another brief centrifugation (2 'at 2000 g). The protruding emulsion represents the ready-to-use X-ray contrast medium.

Pharmakologische Prüfungen Pharmacological tests

Die auf die oben beschriebene Weise erhaltenen Liposo-men-Dispersionen wurden Kaninchen und Hunden intravenös appliziert, und zwar in Dosen von ca. 1-3 ml pro kg mit einer Injektionsgeschwindigkeit von ca. 0,2-10 ml/min. Die verwendeten Dispersionen enthielten etwa 0,05-0,2 schattengebende Komponente pro ml entsprechend ca. 30-120 mg Jod pro ml und weisen einen niedrigen osmotischen Druck auf. The liposome dispersions obtained in the manner described above were administered intravenously to rabbits and dogs, namely in doses of approximately 1-3 ml per kg with an injection rate of approximately 0.2-10 ml / min. The dispersions used contained approximately 0.05-0.2 shading component per ml, corresponding to approximately 30-120 mg iodine per ml, and have a low osmotic pressure.

Ergebnisse Results

Bereits 15 Minuten nach der intravenösen Verabreichung der Liposome war im Röntgenbild die Leber und gewöhnlich auch die Milz der Versuchstiere sichtbar. Already 15 minutes after the intravenous administration of the liposomes, the liver and usually also the spleen of the test animals were visible in the X-ray image.

Eine diagnostisch aussagekräftige Auswertung der Kontraste kann insbesondere durch Ausmessung mit Hilfe der Tomographie erfolgen. Dadurch werden selbst geringe visuell kaum registrierbare Kontrastdifferenzen quantitativ erfassbar. A diagnostically meaningful evaluation of the contrasts can be carried out in particular by measurement using tomography. This makes it possible to quantitatively detect even small contrast differences that are barely visually recordable.

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Claims

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PATENT CLAIMS 1. X-ray contrast media for imaging in particular the liver and spleen, consisting of at least one highly tolerable shadowing component of the formula I CO-X

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in which acyl is a mono- or divalent acyl radical, Y is hydrogen, an acylamino, N-alkylacylamino, alkylaminocarbonyl or hydroxyalkylaminocarbonyl group and X is an OH group or salts thereof, embedded in spherical liposomes from phospholipids with multilayer Structure.

2. X-ray contrast agent according to claim 1, characterized in that as a shading component of the formula 13,5-bis (acetylamino) -2,4,6-triiodo-ben-zoic acid or 5-acetamido-2,4,6-triiodine -N-methylisophthalamic acid or its salts used.

3. X-ray contrast medium according to patent claim 1, characterized in that adipic acid bis (3-carboxy-2,4,6-tri-iodo-anilide), diglycolic acid bis (3-carboxy-2, 4,6-triiodo-anilide) or 5,5 '- (adipoyldiamino) -bis- (2,4-6-triiodo-N-methyliso-phthalamic acid) or their salts.

4. A process for the preparation of X-ray contrast media according to claim 1, characterized in that a phospholipid is dispersed in a concentrated salt solution of the shading component of the formula I according to claim 1 and liposomes with a multilayer structure are formed therefrom.

Radiographic contrast imaging of the liver is an old concern of the doctor. Nevertheless, there is still no useful contrast medium available.

Hepato lienography, i.e. the positive contrast examination of the liver and spleen indirectly by intravenous injection of a contrast medium was carried out earlier with Thorotrast and later with iodine brine. Because of the damaging effects of these contrast agents, which are no longer excreted or not excreted quickly enough, this investigation is only carried out in experiments. (Barke X-ray contrast media, see 266, Georg Thieme-Verlag, Leipzig, 1970).

Representations of the liver with the aid of ultrasound echo methods, as have recently been proposed, do not provide any diagnostically sufficient information.

The problem therefore arises of how to use well-tolerated x-ray contrast media, such as those e.g. the intravenously applicable, highly compatible modern urography and vasography agents Amidotrizoat, Acidum Ioxotrizoicum, Metrizoat, Acidum Iotalamicum, Acidum Ioxitalamicum, Acidum Ioglicicum, Acidum Ioxaglicum and Acidum Iocar-micum, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidumidumum Ium, Acidum Ium and Acid, Acidum Ium, can be used to visualize the liver and spleen.

For example, attempts to use emulsions or suspensions of esters of the abovementioned contrast medium acids as hepato-lienography agents. However, on the one hand the stability of emulsions and suspensions generally proved to be inadequate and on the other hand the metabolism of the contrast agent esters was too slow to achieve sufficient safety for this diagnostic method for clinical use.

It is known that liposomes from phospholipids preferentially concentrate in the liver and spleen after intravenous injection.

Liposomes are microcapsules formed from spherical or polyspherical phospholipids, the core or interstices of which can contain active substances or indicators which are released only slowly in the organism. Liposomes generally have dimensions that are on the order of red blood cells and therefore can be injected intravenously. Since they consist of natural material or metabolize into natural components, liposomes of a suitable size are generally well tolerated by the organism. Compare, for example, DE-OS 2 725 696 (12/22/77). Oil embolism or thrombosis as with iodine oils are in any case not to be feared here.

Thanks to the slow release of the contrast substance, there are no calcium withdrawal symptoms.

In parallel to the improvement of the technique of liposomes, there was also an increasing interest in the use of liposomes as carriers for active substances and enzymes and also as immunological auxiliaries. DE-OS 2 532 317 (29.1.76), DE-OS 2 712 031 (29.9.77), DE-OS 2 643 641 (14.4.77). Their general structure is somewhat known. For example, there are onion-like structures that have a series of lipid layers, i.e. around balls that enclose an aqueous liquid, which can contain active ingredients. Liposomes are usually colloidally dispersed in isotonic aqueous media, especially physiological saline (0.9% by weight NacL).