DE2921829A1 - Praeparat zur behandlung maligner neoplasien und verfahren zu seiner herstellung - Google Patents
Praeparat zur behandlung maligner neoplasien und verfahren zu seiner herstellungInfo
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Description
Es ist klinisch bewiesen, daß eine Infektion mit Zellen von haemolytischen Streptococcen mit ß-haemolysierender Wirkung
eine bestimmte Wirkung gegen maligne Neoplasien ausübt. Es ist ferner bekannt, daß diese Erreger unter anderem Erysipel
erzeugen, und daß ihre Antitumorwirkung sehr instabil ist,
d.h. durch Erhitzen oder andere Behandlung die Wirkung leicht verloren geht. Aus diesen Gründen war es nicht
möglich, lebende vermehrungsfähige Zellen zur Behandlung maligner Neoplasien einzusetzen. Es wurden verschiedene Methoden zur
Herstellung von Präparaten zur Behandlung maligner Neoplasien entwickelt, bei denen lebende Zellen von Bakterien der Art
Streptococcus haemolyticus in Bernheimer's Basalmedium
(nachstehend wird dieses Medium als "BBM" bezeichnet) suspendiert, die Suspension mit einem Penicillin in sehr hoher Konzentration
versetzt und das Gemisch erhitzt wird; vgl.
JP-AS 6 690/70. Andere Methoden sind in den JP~ASen 8 871/70,
2 674/71 und 37 003/72 beschrieben.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien zu schaffen, das eine wesentlieh
stärkere Wirkung hat als die Präparate, die übliche Stämme von Streptococcus haemolyticus enthalten. Diese Aufgabe
wird durch die Erfindung gelöst.
Die Erfindung betrifft somit den in den Patentansprüchen gekennzeichneten
Gegenstand.
Überraschenderweise wurde .festgestellt, daß Stämme von
Streptococcus equisimilis, insbesondere von Streptococcus equisimilis ATCC 21597, sich durch eine wesentlich stärkere
Wirkung gegenüber malignen Neoplasien auszeichnen, als die üblichen Stämme von Streptococcus haemolyticus. So zeigt bei-
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spielsweise ein Präparat von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 eine sehr hohe Wirkung gegen den Tumor MH 134,
der bei Behandlung mit einem Präparat mit Streptococcus haemolyticus nicht anspricht. Das Präparat der Erfindung
zeigt sogar bei intraperitonealer Gabe Wirkung gegen solide Tumoren, bei denen die bekannten Streptococcus haemolyticus-Präparate
nur eine geringe oder keine Wirkung bei intraperitonealer Gabe zeigen. Ferner ist die Antitumorwirkung
der Stämme von Streptococcus equisimilis verhältnismäßig beständig gegen Wärme. Auch durch Wärmebehandlung bzw. Erhitzen
inaktivierte, d.h. nicht mehr vermehrungsfähige Stämme zeigen noch eine ausreichende antineoplastische Wirkung.
Die erfindungsgemäß verwendbaren Stämme sind die Stämme von
Streptococcus equisimilis, beispielsweise Stamm ATCC 21597.
Dieser Stamm wurde beim Fermentation Research Institute (FRI)
Agency of Industrial Science and Technology, Japan, unter der Hinterlegungs-Nummer 4509 und bei der ATCC unter der Gruppe
Streptococcus sp. Lancefield's Gruppe C unter der Nummer 21597 hinterlegt.
Die mikrobiologischen Eigenschaften des Stammes sind nachstehend aufgeführt. Sie entsprechen denen von Streptococcus
equisimilis in Bergey's Manual of Determinative
Bacteriology, 8. Auflage, 1974.
1) Morphologische Eigenschaften
Die Zellen haben kugelige oder eiähnliche Gestalt mit einem
Durchmesser bis zu 2 μπι und bilden in Todd-Hewitt-Medium typisehe
Ketten.
2) Physiologische Eigenschaften
(1) Art der Haemolyse: } ß-Haemolyse
(2) Serologische Klassifikation nach Lancefield: Gruppe C
(3) Katalaseaktivität: negativ
35 (4) Wachstum bei 100C und 45°C: negativ
(5) Wachstum bei pH 9,6: negativ
L 909849/0 8-0 8
(6) (7) (8) (9) (10)
(11) (12) (13) (14) (15) (16) (17) (18)
(19) (20)
Wachstum in 10 % Galle enthaltendem Medium: positiv Wachstum in 40 % Galle enthaltendem Medium: negativ
Wachstum in einem 6,5 % NaCl enthaltenden Medium: negativ Hydrolyse von Hippursäure: negativ
Vergärung von Zuckern (Bildung von Säure aus Kohlenhydraten)
Glycerin: | positiv | Trehalose: | positiv |
Lactose: | positiv | ||
Maltose: | positiv | SaIicin: | negativ |
Mannit: | negativ | Glucose: | positiv |
Raffinose: | negativ | Sucrose: | positiv |
Inosit: | positiv | Inulin: | negativ |
Arabinose: | negativ | Sorbit: | negativ |
Xylose: | positiv |
Arginin-Decarboxyläse-Aktivität: positiv
Ornithin-Decarboxylase-Aktivität: negativ
Lysin-Decarboxylase-Aktivität: negativ Assimilierung von Salzen der Citronensäure: negativ
Bildung von Schwefelwasserstoff: negativ
Bildung von Indol: negativ Urease-Aktivität: negativ
ONPG-Test (O-Nitrophenyl-ß-D-galactopyranosid-Test):
negativ Voges-Proskauer-Test: negativ Celluloseabbau: schwach positiv.
Die Züchtung der Bakterien des Stammes Streptococcus equisimilis wird beispielsweise in Fleischbrühe oder 3 bis
5prozentigem Hefeextraktmedium bei etwa 370C durchgeführt.
Die Züchtungsdauer beträgt gewöhnlich 18 bis 20 Stunden, doch hängt sie etwas vom Nährmedium und der Einsaatdichte
und anderen Faktoren ab. Nach beendeter Züchtung werden die
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Zellen aus der Kulturflüssigkeit in üblicher Weise abgetrennt,
beispielsweise abgeschleudert, und mit einer geeigneten Flüssigkeit, wie physiologischer Kochsalzlösung, gewaschen. Sodann
sind sie verwendungsbereit.
Zur Herstellung von Arzneipräparaten können die üblichen Methoden angewendet werden, wie sie zur Herstellung von Präparaten
mit Streptococcus haemolyticus angewendet werden. Vorzugsweise werden Zellen von Streptococcus equisimilis in einer Salzlösung,
wie Bernheimer's Basalmedium, suspendiert, das 1,35 g Maltose,
12 ml 20prozentige wäßrige Kaliumhydrogenphosphatlösung, eingestellt mit Natriumhydroxid auf pH 6,8 bis 7,0, 24 ml
2prozentige wäßrige Magnesiumsulfat .7H„0-Lösung und 132 ml
destilliertes Wasser enthält. Der erhaltenen Suspension wird ein Penicillin in einer Menge von mindestens 25 000, insbesondere
26 000 bis 60 000 Einheiten/ml zugesetzt. Das Gemisch wird mindestens 10 Minuten, vorzugsweise 10 bis 30 Minuten
bei 30 bis 38°C stehengelassen und sodann 20 bis 40 Minuten auf. 40 bis 50°C erhitzt. Die bevorzugte Salzlösung ist BBM,
doch kann auch eine phosphat-gepufferte physiologische Kochsalzlösung oder physiologische Kochsalzlösung allein als Salzlösung
verwendet werden.
Da die Antitumorwirkung von Streptococcus eguisimilis verhältnismäßig
beständig gegen Wärme ist, werden die Zellen in einer Salzlösung, wie BBM, phosphat-gepufferter physiologischer
Kochsalzlösung oder physiologischer Kochsalzlösung suspendiert. Die Suspension kann 5 bis 30 Minuten auf 65 bis
1OO°C erhitzt werden. Auf diese Weise erhält man ebenfalls ein Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien.
Das erhaltene Präparat kann klinisch als solches unmittelbar verwendet oder nach dem Gefriertrocknen längere Zeit gelagert
werden. Zur Gefriertrocknung wird das Präparat mit einer Aminosäure, vorzugsweise Methionin, Arginin, Ornithin, Cystein,
Asparaginsäure oder Glutaminsäure, oder einem Zucker, wie
L 909849/0808 ι
Sucrose, Maltose, Raffinose oder Lactose, oder Dextran oder
löslicher Stärke als Stabilisator versetzt.
Die Beispiele und Versuche erläutern die Erfindung.
# 5
Streptococcus equisimilis ATCC 21597 wird in 100 ml Fleischbrühe überimpft und 20 Stunden bei 370C gezüchtet. Die erhaltene
Kulturflüssigkeit wird sodann in 2 Liter eines 5prozentigen Hefeextraktmediums überimpft und weitere 20 Stunden bei 370C
gezüchtet. Hierauf wird die Kultur zentrifugiert. Die abgeschleuderten Zellen vrerden in 40 ml physiologischer Kochsalzlösung
suspendiert, sodann mit 4 ml einer lOprozentigen wäßrigen Wasserstoffperoxidlösung versetzt und gründlich gemischt.
Das Gemisch wird 30 Minuten bei O0C stehengelassen. Danach wird das Gemisch zentrifugiert. Die abgeschleuderten
Zellen werden mit 30 ml physiologischer Kochsalzlösung versetzt. Die Zellen werden abgeschleudert und noch weitere zweimal
mit jeweils 30 ml physiologischer Kochsalzlösung gewaschen.
Sodann werden die erhaltenen Zellen in 90 ml BBM suspendiert.
Eine 1 : 20 verdünnte Lösung der Kokkensuspension in physiologischer
Kochsalzlösung hat bei 660 nm eine Absorption von 0,460, gemessen mit einem Hitachi-Spektrophotometer Modell 101.
Die KokkenSuspension in BBM (85 ml) wird mit 17 ml einer
Lösung des Natriumsalzes von Benzylpenicillin (1,6 χ 10 Einheiten/ml) versetzt, 20 Minuten bei 37 C stehengelassen und
sodann 30 Minuten auf 450C erhitzt.
Es werden 102 ml einer Kokkensuspension erhalten, die mit 102 ml einer Lösung eines Penicillins und DL-Methionin versetzt
wird. Es werden 1,08 χ 10 Einheiten/ml des Kaliumsalzes von Benzylpenicillin und eine 1,Oprozentige wäßrige Lösung
von Dl-Methionin verwendet. Die erhaltene Suspension wird in einer Menge von jeweils 2 ml in 90 Ampullen abgefüllt,
die gefriergetrocknet und sodann in trockener Luft bei
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Atmosphärendruck abgeschmolzen werden. Es werden 90 Ampullen erhalten, die jeweils 5 mg getrocknete Zellen enthalten.
Beispiel 2
Streptococcus equisimilis ATCC 21597 wird gemäß Beispiel 1 gezüchtet.
2,1 Liter der Kulturflüssigkeit werden zentrifugiert.
Die erhaltenen abgeschleuderten Zellen werden zweimal mit physiologischer Kochsalzlösung gewaschen und jeweils zentrifugiert.
Sodann werden die Zellen in 108 ml BBM suspendiert. Die verdünnte Kokkensuspension (1:20) in BBM mit physiologischer Kochsalzlösung
hat eine Absorption von 0,400 bei 660 nm. Die erhaltene Kokkensuspension in BBM wird 10 Minuten auf 90°C in
einem Wasserbad erhitzt und sodann im Eisbad abgekühlt.
Die erhaltene Kokkensuspension (102 ml) wird mit 102 ml einer lOprozentigen wäßrigen Lösung von DL-Methionin versetzt und
gründlich vermischt. Hierauf wird die Suspension in einer Menge
von jeweils 2 ml in 90 Ampullen abgefüllt. Die Suspension in den Ampullen wird gefriergetrocknet. Sodann werden die
Ampullen in trockener Luft und bei Atmosphärendruck abgeschmolzen. Es werden 90 Ampullen erhalten, die jeweils 5 mg getrocknete
Zellen enthalten.
Beispiel 3
Gemäß Beispiel 2 wird eine Kokkensuspension in BBM aus Streptococcus equisimilis erhalten. Die Kokkensuspension wird
. 10 Minuten auf 650C in einem Wasserbad erhitzt und sodann ge-
30 maß Beispiel 2 gefriergetrocknet.
Versuch 1:
MH 134 Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 3 Wochen alten männlichen Mäusen des Stammes C3H/HeN in einer Menge von
10 Zellen/Maus injiziert. 3 Tage nach der Injektion erhält jede Maus intravenös 5 mal jeden zweiten Tag eine Suspension des
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gemäß Beispiel 1 erhaltenen gefriergetrockneten Pulvers in physiologischer Kochsalzlösung in einer Menge von 0,1 mg (ausgedrückt
durch das Trockenzellgewicht). 20 Tage nach der Beimpfung wird das Tumorgewicht bestimmt.
Zur Kontrolle werden Zellen von Streptococcus pyogenes
Stamm Su (ATCC-Nr. 21068), die gemäß Beispiel 1 behandelt und in physiologischer Kochsalzlösung suspendiert wurden, in
gleicher Weise verwendet.
Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefaßt. Aus Tabelle II ist ersichtlich, daß das Präparat mit den Zellen von
Streptococcus equisimilis ATCC 21597 eine signifikante Wirkung gegenüber MH 134 Tumorzellen zeigt, während das Präparat
von Streptococcus pyogenes Stamm Su nur eine sehr geringe Wirkung entfaltet.
Tabelle | II | % Unter drückung |
|
81,8 | |||
Präparat | Zahl der Mäuse |
Tumorgewicht, g durchschnittl. +_ Standardfehler |
22,0 |
Streptococcus equisimilis ATCC 21597 |
10 | 0,24 _+ 0,07* | - |
Streptococcus pyogenes Su-Stamm |
10 | 1 ,03 _+ 0,19 | |
Blindversuch | 11 | 1,32 +_ 0,21 | |
* ρ < 0,001 Versuch 2: |
|||
BAMC 1 Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 6 Wochen alten weiblichen Mäusen des Stammes BALB/cAnN in einer Menge
von 10 Zellen/Maus injiziert. 3 Tage nach der Injektion wird
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20
30
35
jeder- Maus intravenös oder intraperitoneal 5 mal jeden zweiten
Tag eine Suspension des in Beispiel 1 erhaltenen gefriergetrockneten Pulvers in physiologischer Kochsalzlösung in einer
Dosis von 0/1 mg (ausgedrückt durch das Trockenzellgewicht) gegeben. 21 Tage nach der Injektion wird das Tumorgewicht jeder
Maus bestimmt. Zum Vergleich wird ein gemäß Beispiel 1 hergestelltes Präparat aus Streptococcus pyogenes Stamm Su
suspendiert in physiologischer Kochsalzlösung verwendet.
Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt. Aus Tabelle
III ist ersichtlich, daß das Präparat der Erfindung eine wesentlich höhere Wirkung gegenüber dem BAMC 1 Tumor hat als
das Präparat aus Streptococcus pyogenes Stamm Su.
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ω ο
αϊ
CD
σ co οο
4?-
CO
O 00 O CO
Präparat | .Verabfolgungs- weg |
■ Zahl der Mäuse |
Tumorgewicht, g durch schnitt!.+ Standardfehler |
prozentuale Unterdrüc kung |
Streptococcus equisimilis ATCC-21597 |
i.v. | 10 | O772 ± 0,01 | 65,9 |
Streptococcus pyogenes Stamm Su |
i.p. | 11 | l;07 + 0,14 | 48,2 |
Blindversuch | i.v. | 10 | 1,00 + 0,11 | 51,1 |
i.p. | 10 | 1,84 + 0,10 | 10,4 | |
11 | 2,08 + 0,29 | _ |
CD
00 K) CD
10 15
Versuch 3
Ehrlich-Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 5 Wochen alten nackten Mäusen in einer Menge von 10 Zellen/Maus injiziert.
Die Hälfte der Mäuse ist männlichen Geschlechts. 3 Tage nach der Injektion wird jeder Maus intravenös oder
xntraperitoneal 5 mal jeden zweiten Tag eine Suspension des von in Beispiel 1 erhaltenen gefriergetrockneten Pulvers in physioi
logischer Kochsalzlösung in einer Dosis von 0,1 mg (Trocken-.zellgewicht)
gegeben. 21 Tage nach der Injektion wird das Tumorgewicht jeder Maus bestimmt. Zum Vergleich wird ein gemäß
Beispiel 1 hergestelltes Präparat aus Streptococcus pyogenes Stamm Su suspendierten physiologischer Kochsalzlösung verwendet.
Die Ergebnisse sind in Tabelle IV zusammengefaßt. Aus der Tabelle ist ersichtlich, daß das Präparat der Erfindung
eine wesentlich höhere Wirkung gegenüber Ehrlich-Tumor aufweist
als Streptococcus Pyogenes Stamm Su.
20 25 30
Präparat | Zahl der Mäuse ' |
Tumor gewicht", g durchschnittl. jt- Standardfehler |
prozentuale Unterdrüc kung |
Streptococcus equisimilis ATCC 21597 |
9 | 0;50 + 0f04* | 89,0 |
Streptococcus pyogenes Stamm--Su,, |
9 | I714 + 0,23* | 74; 8 |
Blindversuch | 12 | 4,53 ± Oj50 |
35
ρ <0,001
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- 14 -
Versuch 4
Meth A Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 6 Wochen alten männlichen Mäusen des Stammes BALB/cAnN in einer
Menge von 10 Zellen/Maus injiziert. 3 Tage nach der Injektion
wird jede Maus intravenös oder intraperitoneal 5 mal jeden zweiten Tag eine Suspension des gemäß Beispiel 1 hergestellten
gefriergetrockneten Pulvers in physiologischer Kochsalzlösung in einer Dosis von 0/1 mg (Trockenzellgewicht)
gegeben. 21 Tage nach der Impfung wird das Tumorgewicht jeder Maus bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle V zusammengefaßt.
Aus dieser Tabelle ist ersichtlich, daß die Antitumorwirkung des Präparats der Erfindung ausgezeichnet ist-
Präparat | Zahl der Mäuse r |
Tumorgewicht, gi durchschhittl. + Standardfehler s |
prozentuale Unterdrük- kung |
Streptococcus equisimilis" ATCC 21597 |
10 | 0;57 ± 0,12* | 76,8 |
Blindversuch | 10 | 2;46 + 0;42 |
* ρ <0,001
Versuch 5
Ähnlich Versuch 1 wird 6 Wochen alten männlichen Mäusen des Stammes C3H/HeN das in Beispiel 1 oder Beispiel 2 erhaltene
Präparation Streptococcus equisimilis ATCC 21597 gegeben,
und die Antitumörwirkung der Präparate gegen MH 134 Tumor wird bestimmt. 19 Tage nach der Verimpfung des Tumors wird
das Tumorgewicht bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengefaßt. Beide Präparate zeigen eine ausgezeichnete
Antitumörwirkung gegen MH 134 Tumor.
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- 15 Tabelle VI
•»V—-- —' ![Präparat |
Zahl der Mäuse ' |
Tumorgewicht, g durchschnittl. + Standardfehler |
prozentuale Unter- -\ drückung |
Präparat von •Beispiel 1 |
10 | 0,27 + 0,06* - | 65,4 |
Präparat von Beispiel 2 |
10 | 0,27 + 0;05* | 65; 4 |
Blindversuch | 10 | 0,78 + 0,15 |
* ρ <O,O1
Versuch 6
Ähnlich Versuch 1 wird 5 Wochen alten männlichen Mäusen des
Stammes BALB/cAnN Crj das Präparat gemäß Beispiel 1,2 oder 3 von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 gegeben. Sodann wird die Antitumorwirkung gegen Meth A Tumor bestimmt. 19 Tage nach der Verimpfung wird das Gewicht des Tumors bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VII zusammengefaßt. Sämtliche Präparate zeigen eine ausgezeichnete Antitumorwirkung.
Stammes BALB/cAnN Crj das Präparat gemäß Beispiel 1,2 oder 3 von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 gegeben. Sodann wird die Antitumorwirkung gegen Meth A Tumor bestimmt. 19 Tage nach der Verimpfung wird das Gewicht des Tumors bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VII zusammengefaßt. Sämtliche Präparate zeigen eine ausgezeichnete Antitumorwirkung.
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-" -16 Tabelle VII
Präparat | Zahl"der Mäuse |
Tumorgewicht, g durchschnittl. + Standardfehler |
■prozentuale Unterdrük- kung |
Präparat von Beispiel 1 |
9 | 0,43 + 0;08* | 85,1 |
-Präparat von Beispiel 2 |
9 | 0;42 + 0,15* | 85,5 |
Präparat von ■- Beispiel 3 |
9 | 0; 75 ± 0,18* | 74;0 |
Blindversuch | 9 | 2,89 ± 0,25 ■ |
30
* p<0,001
Versuch 7
Die in den Beispielen 1 bis 3 erhaltenen Präparate werden in physiologischer Kochsalzlösung suspendiert. Nach dem Inaktivieren
des Penicillins in der Suspension des Präparats von Beispiel 1 durch Behandlung mit Penicillinase wird jede Zellensuspension
in üblicher Weise mit defibriniertem Pferdeblutagar vermischt. Das Gemisch wird in Petrischalen gegossen
und 48 Stunden bei 370C inkubiert. Nach der Züchtung werden
die lebenden Zellen gezählt. Durch diesen Test wird bestätigt, daß keines der Präparate vermehrungsfähige Zellen
enthält.
35
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Claims (17)
1. Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien, gekennzeichnet dur
len von Streptococcus equisimilis.
len von Streptococcus equisimilis.
gekennzeichnet durch einen Gehalt an ZeI-
2. Präparat nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch einen
Gehalt an Zellen von Streptococcus equisimilis ATCC 21597.
3. Präparat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet,
daß es in gefriergetrockneter Form vorliegt und eine Aminosäure oder einen Zucker, Dextran oder lösliche Stärke als
Stabilisator enthält.
4. Präparat nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß
die Aminosäure Methionin, Arginin, Ornithin, Cystein, Asparaginsäure oder Glutaminsäure ist.
5. Präparat nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß
der Zucker Sucrose, Maltose, Raffinose oder Lactose ist.
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6. Verfahren zur Herstellung des Präparats nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Streptococcus
equisimilis in einer ein Penicillin enthaltenden Salzlösung auf 30
hitzt.
hitzt.
auf 30 bis 38°C erwärmt und anschließend auf 40 bis 500C er-
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 verwendet.
8. Verfahren nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, daß man das Penicillin in einer Menge von mindestens
25 000 Einheiten/ml verwendet.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
man das Penicillin in einer Konzentration von 26 0OO bis 60 000 Einheiten/ml verwendet.
10. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man die Erwärmung bei 30 bis 38°C während 10 bis 30 Minuten
und die Erhitzung bei 40 bis 50 C während 20 bis 40 Minuten durchführt.
11. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man als Salzlösung Bernheimer's Basalmedium verwendet.
12. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man als Salzlösung eine phosphat-gepufferte physiologische
Kochsalzlösung verwendet.
13. Verfahren zur Herstellung des Präparats nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Streptococcus equisimilis in einer Salzlösung auf 65 bis 1000C erhitzt.
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14. Verfahren nach Anspruch 13/ dadurch gekennzeichnet, daß
man Zellen von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 verwendet.
15. Verfahren nach Anspruch 13 oder 14, dadurch gekennzeichnet,
daß man die Zellen 5 bis 3O Minuten auf 65 bis 1000C erhitzt.
16. Verfahren nach Anspruch 13 bis 15, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Salzlösung Bernheimer's Basalmedium verwendet.
17. Verfahren nach Anspruch 13 bis 15, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Salzlösung phosphat-gepufferte physiologi-
15 sehe Kochsalzlösung verwendet.
18* Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien, erhältlich
entweder
a) durch 10 bis 30minütiges Erwärmen der Zellen von Streptococcus equisimilis in einer ein Penicillin in einer Menge
von mindestens 25 000 Einheiten/ml enthaltenden Salzlösung auf 30 bis 380C und anschließendes 20 bis 40minütiges Erhitzen
auf 40 bis 500C oder
b) durch 5 bis 30 minütiges Erhitzen der Zellen von Streptococcus
equisimilis in einer Salzlösung auf 65 bis 1000C.
909849/0808
Applications Claiming Priority (1)
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---|---|---|---|
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---|---|
DE2921829A1 true DE2921829A1 (de) | 1979-12-06 |
DE2921829C2 DE2921829C2 (de) | 1987-08-13 |
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