DE2921829A1 - Praeparat zur behandlung maligner neoplasien und verfahren zu seiner herstellung - Google Patents

Praeparat zur behandlung maligner neoplasien und verfahren zu seiner herstellung

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DE2921829A1 DE19792921829 DE2921829A DE2921829A1 DE 2921829 A1 DE2921829 A1 DE 2921829A1 DE 19792921829 DE19792921829 DE 19792921829 DE 2921829 A DE2921829 A DE 2921829A DE 2921829 A1 DE2921829 A1 DE 2921829A1
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Haruki Ogawa
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Description

Es ist klinisch bewiesen, daß eine Infektion mit Zellen von haemolytischen Streptococcen mit ß-haemolysierender Wirkung eine bestimmte Wirkung gegen maligne Neoplasien ausübt. Es ist ferner bekannt, daß diese Erreger unter anderem Erysipel erzeugen, und daß ihre Antitumorwirkung sehr instabil ist, d.h. durch Erhitzen oder andere Behandlung die Wirkung leicht verloren geht. Aus diesen Gründen war es nicht möglich, lebende vermehrungsfähige Zellen zur Behandlung maligner Neoplasien einzusetzen. Es wurden verschiedene Methoden zur Herstellung von Präparaten zur Behandlung maligner Neoplasien entwickelt, bei denen lebende Zellen von Bakterien der Art Streptococcus haemolyticus in Bernheimer's Basalmedium (nachstehend wird dieses Medium als "BBM" bezeichnet) suspendiert, die Suspension mit einem Penicillin in sehr hoher Konzentration versetzt und das Gemisch erhitzt wird; vgl.
JP-AS 6 690/70. Andere Methoden sind in den JP~ASen 8 871/70, 2 674/71 und 37 003/72 beschrieben.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien zu schaffen, das eine wesentlieh stärkere Wirkung hat als die Präparate, die übliche Stämme von Streptococcus haemolyticus enthalten. Diese Aufgabe wird durch die Erfindung gelöst.
Die Erfindung betrifft somit den in den Patentansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.
Überraschenderweise wurde .festgestellt, daß Stämme von Streptococcus equisimilis, insbesondere von Streptococcus equisimilis ATCC 21597, sich durch eine wesentlich stärkere Wirkung gegenüber malignen Neoplasien auszeichnen, als die üblichen Stämme von Streptococcus haemolyticus. So zeigt bei-
9098A9/0808
spielsweise ein Präparat von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 eine sehr hohe Wirkung gegen den Tumor MH 134, der bei Behandlung mit einem Präparat mit Streptococcus haemolyticus nicht anspricht. Das Präparat der Erfindung zeigt sogar bei intraperitonealer Gabe Wirkung gegen solide Tumoren, bei denen die bekannten Streptococcus haemolyticus-Präparate nur eine geringe oder keine Wirkung bei intraperitonealer Gabe zeigen. Ferner ist die Antitumorwirkung der Stämme von Streptococcus equisimilis verhältnismäßig beständig gegen Wärme. Auch durch Wärmebehandlung bzw. Erhitzen inaktivierte, d.h. nicht mehr vermehrungsfähige Stämme zeigen noch eine ausreichende antineoplastische Wirkung.
Die erfindungsgemäß verwendbaren Stämme sind die Stämme von Streptococcus equisimilis, beispielsweise Stamm ATCC 21597.
Dieser Stamm wurde beim Fermentation Research Institute (FRI) Agency of Industrial Science and Technology, Japan, unter der Hinterlegungs-Nummer 4509 und bei der ATCC unter der Gruppe Streptococcus sp. Lancefield's Gruppe C unter der Nummer 21597 hinterlegt.
Die mikrobiologischen Eigenschaften des Stammes sind nachstehend aufgeführt. Sie entsprechen denen von Streptococcus equisimilis in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. Auflage, 1974.
1) Morphologische Eigenschaften
Die Zellen haben kugelige oder eiähnliche Gestalt mit einem
Durchmesser bis zu 2 μπι und bilden in Todd-Hewitt-Medium typisehe Ketten.
2) Physiologische Eigenschaften
(1) Art der Haemolyse: } ß-Haemolyse
(2) Serologische Klassifikation nach Lancefield: Gruppe C
(3) Katalaseaktivität: negativ
35 (4) Wachstum bei 100C und 45°C: negativ (5) Wachstum bei pH 9,6: negativ
L 909849/0 8-0 8
(6) (7) (8) (9) (10)
(11) (12) (13) (14) (15) (16) (17) (18)
(19) (20)
Wachstum in 10 % Galle enthaltendem Medium: positiv Wachstum in 40 % Galle enthaltendem Medium: negativ Wachstum in einem 6,5 % NaCl enthaltenden Medium: negativ Hydrolyse von Hippursäure: negativ Vergärung von Zuckern (Bildung von Säure aus Kohlenhydraten)
Tabelle I
Glycerin: positiv Trehalose: positiv
Lactose: positiv
Maltose: positiv SaIicin: negativ
Mannit: negativ Glucose: positiv
Raffinose: negativ Sucrose: positiv
Inosit: positiv Inulin: negativ
Arabinose: negativ Sorbit: negativ
Xylose: positiv
Arginin-Decarboxyläse-Aktivität: positiv Ornithin-Decarboxylase-Aktivität: negativ Lysin-Decarboxylase-Aktivität: negativ Assimilierung von Salzen der Citronensäure: negativ Bildung von Schwefelwasserstoff: negativ
Bildung von Indol: negativ Urease-Aktivität: negativ
ONPG-Test (O-Nitrophenyl-ß-D-galactopyranosid-Test):
negativ Voges-Proskauer-Test: negativ Celluloseabbau: schwach positiv.
Die Züchtung der Bakterien des Stammes Streptococcus equisimilis wird beispielsweise in Fleischbrühe oder 3 bis 5prozentigem Hefeextraktmedium bei etwa 370C durchgeführt. Die Züchtungsdauer beträgt gewöhnlich 18 bis 20 Stunden, doch hängt sie etwas vom Nährmedium und der Einsaatdichte und anderen Faktoren ab. Nach beendeter Züchtung werden die
90 9 8 49/0808
Zellen aus der Kulturflüssigkeit in üblicher Weise abgetrennt, beispielsweise abgeschleudert, und mit einer geeigneten Flüssigkeit, wie physiologischer Kochsalzlösung, gewaschen. Sodann sind sie verwendungsbereit.
Zur Herstellung von Arzneipräparaten können die üblichen Methoden angewendet werden, wie sie zur Herstellung von Präparaten mit Streptococcus haemolyticus angewendet werden. Vorzugsweise werden Zellen von Streptococcus equisimilis in einer Salzlösung, wie Bernheimer's Basalmedium, suspendiert, das 1,35 g Maltose, 12 ml 20prozentige wäßrige Kaliumhydrogenphosphatlösung, eingestellt mit Natriumhydroxid auf pH 6,8 bis 7,0, 24 ml 2prozentige wäßrige Magnesiumsulfat .7H„0-Lösung und 132 ml destilliertes Wasser enthält. Der erhaltenen Suspension wird ein Penicillin in einer Menge von mindestens 25 000, insbesondere 26 000 bis 60 000 Einheiten/ml zugesetzt. Das Gemisch wird mindestens 10 Minuten, vorzugsweise 10 bis 30 Minuten bei 30 bis 38°C stehengelassen und sodann 20 bis 40 Minuten auf. 40 bis 50°C erhitzt. Die bevorzugte Salzlösung ist BBM, doch kann auch eine phosphat-gepufferte physiologische Kochsalzlösung oder physiologische Kochsalzlösung allein als Salzlösung verwendet werden.
Da die Antitumorwirkung von Streptococcus eguisimilis verhältnismäßig beständig gegen Wärme ist, werden die Zellen in einer Salzlösung, wie BBM, phosphat-gepufferter physiologischer Kochsalzlösung oder physiologischer Kochsalzlösung suspendiert. Die Suspension kann 5 bis 30 Minuten auf 65 bis 1OO°C erhitzt werden. Auf diese Weise erhält man ebenfalls ein Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien.
Das erhaltene Präparat kann klinisch als solches unmittelbar verwendet oder nach dem Gefriertrocknen längere Zeit gelagert werden. Zur Gefriertrocknung wird das Präparat mit einer Aminosäure, vorzugsweise Methionin, Arginin, Ornithin, Cystein, Asparaginsäure oder Glutaminsäure, oder einem Zucker, wie
L 909849/0808 ι
Sucrose, Maltose, Raffinose oder Lactose, oder Dextran oder löslicher Stärke als Stabilisator versetzt.
Die Beispiele und Versuche erläutern die Erfindung.
# 5
Beispiel 1
Streptococcus equisimilis ATCC 21597 wird in 100 ml Fleischbrühe überimpft und 20 Stunden bei 370C gezüchtet. Die erhaltene Kulturflüssigkeit wird sodann in 2 Liter eines 5prozentigen Hefeextraktmediums überimpft und weitere 20 Stunden bei 370C gezüchtet. Hierauf wird die Kultur zentrifugiert. Die abgeschleuderten Zellen vrerden in 40 ml physiologischer Kochsalzlösung suspendiert, sodann mit 4 ml einer lOprozentigen wäßrigen Wasserstoffperoxidlösung versetzt und gründlich gemischt. Das Gemisch wird 30 Minuten bei O0C stehengelassen. Danach wird das Gemisch zentrifugiert. Die abgeschleuderten Zellen werden mit 30 ml physiologischer Kochsalzlösung versetzt. Die Zellen werden abgeschleudert und noch weitere zweimal mit jeweils 30 ml physiologischer Kochsalzlösung gewaschen.
Sodann werden die erhaltenen Zellen in 90 ml BBM suspendiert.
Eine 1 : 20 verdünnte Lösung der Kokkensuspension in physiologischer Kochsalzlösung hat bei 660 nm eine Absorption von 0,460, gemessen mit einem Hitachi-Spektrophotometer Modell 101. Die KokkenSuspension in BBM (85 ml) wird mit 17 ml einer Lösung des Natriumsalzes von Benzylpenicillin (1,6 χ 10 Einheiten/ml) versetzt, 20 Minuten bei 37 C stehengelassen und sodann 30 Minuten auf 450C erhitzt.
Es werden 102 ml einer Kokkensuspension erhalten, die mit 102 ml einer Lösung eines Penicillins und DL-Methionin versetzt wird. Es werden 1,08 χ 10 Einheiten/ml des Kaliumsalzes von Benzylpenicillin und eine 1,Oprozentige wäßrige Lösung von Dl-Methionin verwendet. Die erhaltene Suspension wird in einer Menge von jeweils 2 ml in 90 Ampullen abgefüllt, die gefriergetrocknet und sodann in trockener Luft bei
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Atmosphärendruck abgeschmolzen werden. Es werden 90 Ampullen erhalten, die jeweils 5 mg getrocknete Zellen enthalten.
Beispiel 2
Streptococcus equisimilis ATCC 21597 wird gemäß Beispiel 1 gezüchtet. 2,1 Liter der Kulturflüssigkeit werden zentrifugiert. Die erhaltenen abgeschleuderten Zellen werden zweimal mit physiologischer Kochsalzlösung gewaschen und jeweils zentrifugiert.
Sodann werden die Zellen in 108 ml BBM suspendiert. Die verdünnte Kokkensuspension (1:20) in BBM mit physiologischer Kochsalzlösung hat eine Absorption von 0,400 bei 660 nm. Die erhaltene Kokkensuspension in BBM wird 10 Minuten auf 90°C in einem Wasserbad erhitzt und sodann im Eisbad abgekühlt.
Die erhaltene Kokkensuspension (102 ml) wird mit 102 ml einer lOprozentigen wäßrigen Lösung von DL-Methionin versetzt und gründlich vermischt. Hierauf wird die Suspension in einer Menge von jeweils 2 ml in 90 Ampullen abgefüllt. Die Suspension in den Ampullen wird gefriergetrocknet. Sodann werden die Ampullen in trockener Luft und bei Atmosphärendruck abgeschmolzen. Es werden 90 Ampullen erhalten, die jeweils 5 mg getrocknete Zellen enthalten.
Beispiel 3
Gemäß Beispiel 2 wird eine Kokkensuspension in BBM aus Streptococcus equisimilis erhalten. Die Kokkensuspension wird . 10 Minuten auf 650C in einem Wasserbad erhitzt und sodann ge-
30 maß Beispiel 2 gefriergetrocknet.
Versuch 1:
MH 134 Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 3 Wochen alten männlichen Mäusen des Stammes C3H/HeN in einer Menge von 10 Zellen/Maus injiziert. 3 Tage nach der Injektion erhält jede Maus intravenös 5 mal jeden zweiten Tag eine Suspension des
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gemäß Beispiel 1 erhaltenen gefriergetrockneten Pulvers in physiologischer Kochsalzlösung in einer Menge von 0,1 mg (ausgedrückt durch das Trockenzellgewicht). 20 Tage nach der Beimpfung wird das Tumorgewicht bestimmt.
Zur Kontrolle werden Zellen von Streptococcus pyogenes Stamm Su (ATCC-Nr. 21068), die gemäß Beispiel 1 behandelt und in physiologischer Kochsalzlösung suspendiert wurden, in gleicher Weise verwendet.
Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefaßt. Aus Tabelle II ist ersichtlich, daß das Präparat mit den Zellen von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 eine signifikante Wirkung gegenüber MH 134 Tumorzellen zeigt, während das Präparat von Streptococcus pyogenes Stamm Su nur eine sehr geringe Wirkung entfaltet.
Tabelle II % Unter
drückung
81,8
Präparat Zahl der
Mäuse		 Tumorgewicht, g
durchschnittl.
+_ Standardfehler		 22,0
Streptococcus
equisimilis
ATCC 21597		 10 0,24 _+ 0,07* -
Streptococcus
pyogenes
Su-Stamm		 10 1 ,03 _+ 0,19
Blindversuch 11 1,32 +_ 0,21
* ρ < 0,001
Versuch 2:
BAMC 1 Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 6 Wochen alten weiblichen Mäusen des Stammes BALB/cAnN in einer Menge von 10 Zellen/Maus injiziert. 3 Tage nach der Injektion wird
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20
30 35
jeder- Maus intravenös oder intraperitoneal 5 mal jeden zweiten Tag eine Suspension des in Beispiel 1 erhaltenen gefriergetrockneten Pulvers in physiologischer Kochsalzlösung in einer Dosis von 0/1 mg (ausgedrückt durch das Trockenzellgewicht) gegeben. 21 Tage nach der Injektion wird das Tumorgewicht jeder Maus bestimmt. Zum Vergleich wird ein gemäß Beispiel 1 hergestelltes Präparat aus Streptococcus pyogenes Stamm Su suspendiert in physiologischer Kochsalzlösung verwendet.
Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt. Aus Tabelle III ist ersichtlich, daß das Präparat der Erfindung eine wesentlich höhere Wirkung gegenüber dem BAMC 1 Tumor hat als das Präparat aus Streptococcus pyogenes Stamm Su.
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ω ο
αϊ
Tabelle III
CD σ co οο 4?- CO
O 00 O CO
Präparat .Verabfolgungs-
weg		 ■ Zahl
der
Mäuse		 Tumorgewicht, g
durch schnitt!.+
Standardfehler		 prozentuale
Unterdrüc
kung
Streptococcus equisimilis
ATCC-21597		 i.v. 10 O772 ± 0,01 65,9
Streptococcus pyogenes
Stamm Su		 i.p. 11 l;07 + 0,14 48,2
Blindversuch i.v. 10 1,00 + 0,11 51,1
i.p. 10 1,84 + 0,10 10,4
11 2,08 + 0,29 _
CD
00 K) CD
10 15
Versuch 3
Ehrlich-Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 5 Wochen alten nackten Mäusen in einer Menge von 10 Zellen/Maus injiziert. Die Hälfte der Mäuse ist männlichen Geschlechts. 3 Tage nach der Injektion wird jeder Maus intravenös oder xntraperitoneal 5 mal jeden zweiten Tag eine Suspension des von in Beispiel 1 erhaltenen gefriergetrockneten Pulvers in physioi logischer Kochsalzlösung in einer Dosis von 0,1 mg (Trocken-.zellgewicht) gegeben. 21 Tage nach der Injektion wird das Tumorgewicht jeder Maus bestimmt. Zum Vergleich wird ein gemäß Beispiel 1 hergestelltes Präparat aus Streptococcus pyogenes Stamm Su suspendierten physiologischer Kochsalzlösung verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV zusammengefaßt. Aus der Tabelle ist ersichtlich, daß das Präparat der Erfindung eine wesentlich höhere Wirkung gegenüber Ehrlich-Tumor aufweist als Streptococcus Pyogenes Stamm Su.
Tabelle IV
20 25 30
Präparat Zahl der
Mäuse '		 Tumor gewicht", g
durchschnittl. jt-
Standardfehler		 prozentuale
Unterdrüc
kung
Streptococcus
equisimilis
ATCC 21597		 9 0;50 + 0f04* 89,0
Streptococcus
pyogenes
Stamm--Su,,		 9 I714 + 0,23* 74; 8
Blindversuch 12 4,53 ± Oj50
35
ρ <0,001
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- 14 -
Versuch 4
Meth A Tumorzellen werden subcutan in den Rücken von 6 Wochen alten männlichen Mäusen des Stammes BALB/cAnN in einer Menge von 10 Zellen/Maus injiziert. 3 Tage nach der Injektion wird jede Maus intravenös oder intraperitoneal 5 mal jeden zweiten Tag eine Suspension des gemäß Beispiel 1 hergestellten gefriergetrockneten Pulvers in physiologischer Kochsalzlösung in einer Dosis von 0/1 mg (Trockenzellgewicht) gegeben. 21 Tage nach der Impfung wird das Tumorgewicht jeder Maus bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle V zusammengefaßt. Aus dieser Tabelle ist ersichtlich, daß die Antitumorwirkung des Präparats der Erfindung ausgezeichnet ist-
Tabelle V
Präparat Zahl der
Mäuse r 		Tumorgewicht, gi
durchschhittl. +
Standardfehler s 		prozentuale
Unterdrük-
kung
Streptococcus
equisimilis"
ATCC 21597		 10 0;57 ± 0,12* 76,8
Blindversuch 10 2;46 + 0;42
* ρ <0,001
Versuch 5
Ähnlich Versuch 1 wird 6 Wochen alten männlichen Mäusen des Stammes C3H/HeN das in Beispiel 1 oder Beispiel 2 erhaltene Präparation Streptococcus equisimilis ATCC 21597 gegeben, und die Antitumörwirkung der Präparate gegen MH 134 Tumor wird bestimmt. 19 Tage nach der Verimpfung des Tumors wird das Tumorgewicht bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengefaßt. Beide Präparate zeigen eine ausgezeichnete Antitumörwirkung gegen MH 134 Tumor.
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- 15 Tabelle VI
•»V—-- —'
![Präparat		 Zahl der
Mäuse '		 Tumorgewicht, g
durchschnittl. +
Standardfehler		 prozentuale
Unter- -\
drückung
Präparat von
•Beispiel 1		 10 0,27 + 0,06* - 65,4
Präparat von
Beispiel 2		 10 0,27 + 0;05* 65; 4
Blindversuch 10 0,78 + 0,15
* ρ <O,O1
Versuch 6
Ähnlich Versuch 1 wird 5 Wochen alten männlichen Mäusen des
Stammes BALB/cAnN Crj das Präparat gemäß Beispiel 1,2 oder 3 von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 gegeben. Sodann wird die Antitumorwirkung gegen Meth A Tumor bestimmt. 19 Tage nach der Verimpfung wird das Gewicht des Tumors bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VII zusammengefaßt. Sämtliche Präparate zeigen eine ausgezeichnete Antitumorwirkung.
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-" -16 Tabelle VII
Präparat Zahl"der
Mäuse		 Tumorgewicht, g
durchschnittl. +
Standardfehler		 ■prozentuale
Unterdrük-
kung
Präparat von
Beispiel 1		 9 0,43 + 0;08* 85,1
-Präparat von
Beispiel 2		 9 0;42 + 0,15* 85,5
Präparat von ■-
Beispiel 3		 9 0; 75 ± 0,18* 74;0
Blindversuch 9 2,89 ± 0,25 ■
30
* p<0,001
Versuch 7
Die in den Beispielen 1 bis 3 erhaltenen Präparate werden in physiologischer Kochsalzlösung suspendiert. Nach dem Inaktivieren des Penicillins in der Suspension des Präparats von Beispiel 1 durch Behandlung mit Penicillinase wird jede Zellensuspension in üblicher Weise mit defibriniertem Pferdeblutagar vermischt. Das Gemisch wird in Petrischalen gegossen und 48 Stunden bei 370C inkubiert. Nach der Züchtung werden die lebenden Zellen gezählt. Durch diesen Test wird bestätigt, daß keines der Präparate vermehrungsfähige Zellen enthält.
35
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Claims (17)

CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA Tokyo , Japan 11 Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien und Verfahren zu seiner Herstellung " Priorität: 29. Mai 1978, Japan, Nr. 63 418/78 Patentan sprüche
1. Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien, gekennzeichnet dur
len von Streptococcus equisimilis.
gekennzeichnet durch einen Gehalt an ZeI-
2. Präparat nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch einen Gehalt an Zellen von Streptococcus equisimilis ATCC 21597.
3. Präparat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet,
daß es in gefriergetrockneter Form vorliegt und eine Aminosäure oder einen Zucker, Dextran oder lösliche Stärke als Stabilisator enthält.
4. Präparat nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß
die Aminosäure Methionin, Arginin, Ornithin, Cystein, Asparaginsäure oder Glutaminsäure ist.
5. Präparat nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Zucker Sucrose, Maltose, Raffinose oder Lactose ist.
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6. Verfahren zur Herstellung des Präparats nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Streptococcus equisimilis in einer ein Penicillin enthaltenden Salzlösung auf 30
hitzt.
auf 30 bis 38°C erwärmt und anschließend auf 40 bis 500C er-
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 verwendet.
8. Verfahren nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, daß man das Penicillin in einer Menge von mindestens 25 000 Einheiten/ml verwendet.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß man das Penicillin in einer Konzentration von 26 0OO bis 60 000 Einheiten/ml verwendet.
10. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man die Erwärmung bei 30 bis 38°C während 10 bis 30 Minuten und die Erhitzung bei 40 bis 50 C während 20 bis 40 Minuten durchführt.
11. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man als Salzlösung Bernheimer's Basalmedium verwendet.
12. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man als Salzlösung eine phosphat-gepufferte physiologische Kochsalzlösung verwendet.
13. Verfahren zur Herstellung des Präparats nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Streptococcus equisimilis in einer Salzlösung auf 65 bis 1000C erhitzt.
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14. Verfahren nach Anspruch 13/ dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Streptococcus equisimilis ATCC 21597 verwendet.
15. Verfahren nach Anspruch 13 oder 14, dadurch gekennzeichnet, daß man die Zellen 5 bis 3O Minuten auf 65 bis 1000C erhitzt.
16. Verfahren nach Anspruch 13 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß man als Salzlösung Bernheimer's Basalmedium verwendet.
17. Verfahren nach Anspruch 13 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß man als Salzlösung phosphat-gepufferte physiologi-
15 sehe Kochsalzlösung verwendet.
18* Präparat zur Behandlung maligner Neoplasien, erhältlich entweder
a) durch 10 bis 30minütiges Erwärmen der Zellen von Streptococcus equisimilis in einer ein Penicillin in einer Menge von mindestens 25 000 Einheiten/ml enthaltenden Salzlösung auf 30 bis 380C und anschließendes 20 bis 40minütiges Erhitzen auf 40 bis 500C oder
b) durch 5 bis 30 minütiges Erhitzen der Zellen von Streptococcus equisimilis in einer Salzlösung auf 65 bis 1000C.
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DE19792921829 1978-05-29 1979-05-29 Praeparat zur behandlung maligner neoplasien und verfahren zu seiner herstellung Granted DE2921829A1 (de)

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JP6341878A JPS54157815A (en) 1978-05-29 1978-05-29 Anti-tumor substance and its preparation

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Publication Number Publication Date
DE2921829A1 true DE2921829A1 (de) 1979-12-06
DE2921829C2 DE2921829C2 (de) 1987-08-13

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