DE2537294C3 - S-Inosyl-L-cystein und Verfahren zu seiner Herstellung - Google Patents
S-Inosyl-L-cystein und Verfahren zu seiner HerstellungInfo
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Description
HN
XH2C
(D
in der Ri und R2 ein Wasserstoffatom, ein niederer
Alkylrest oder ein Arylrest mit der Maßgabe sind, daß Ri und R2 nicht beide gleichzeitig ein Wasserstoffatom
sind, und X ein Halogenatom oder die Gruppe Y — O — bedeuten, wobei Y einen Arylsulfonylrest
oder einen niederen Alkylsulfonylrest bedeutet, mit einem Alkalimetallsalz des L-Cysteins zu
einem 2',3'-0-geschützten S-Inosyl-L-cysteinderivat der allgemeinen chemischen Formel
H2N-CHCH2SCH2
COOH
(ID
umsetzt, in der Ri und R2 die vorstehend genannte
Bedeutung haben, und daß man dann die Schutzgruppen in an sich bekannter Weise entfernt.
Die Erfindung betrifft S-Inosyl-L-cystein und ein
Verfahren zu seiner Herstellung.
Es wurde gefunden, daß S-Inosyl-L-cystein oder H1N-CHCH1SCH2
COOH
Es wurde gefunden, daß S-Inosyl-L-cystein oder H1N-CHCH1SCH2
COOH
(Hl)
HO OH
unter zahlreichen Inosinderivaten unerwartet herausragende pharmakologische Eigenschaften aufweist Insbesondere
durch seine Eigenschaft, auf Gewebezellen wachstumsanregend zu wirken, ist es ein wertvolles
Arzneimittel zur Behandlung von Gewebeverletzungen oder Geschwürschäden.
Die folgenden Versuche dienen dem Nachweis der zellvermehrenden und geschwürheilenden Wirkungen
des S-Inosyl-L-cysteins der Erfindung.
(A) Zellvermehrungsaktivität
(a) Die Wirkung von S-Inosyi-L-cystein
auf die Vermehrung von Hühnerembryoherzzellen
auf die Vermehrung von Hühnerembryoherzzellen
Versuch 1
Herzen 13 Tage alter Hühnerembryos werden unter sterilen Bedingungen zu 1 bis 2 mm im Durchmesser
messenden Stücken zerschnitten. Es wird in calciumfreier und magnesiumfreier phosphatgepufferter Kochsalzlösung
(PBS) gewaschen. Anschließend werden die präparierten Herzstücke mit einer O,l°/oigen Trypsinlösung
in PBS behandelt. Die überstehende Fraktion wird verworfen. Der Rückstand wird erneut mit einer
O,l°/oigen Trypsinlösung in PBS behandelt. Die überstehenden, isolierte Zellen enthaltenden Fraktionen werden
gesammelt. Das Verfahren wird dreimal wiederholt. Die auf diese Weise gewonnenen überstehenden
Fraktionen werden vereinigt und mit einem kalten Kulturmedium (F 12; Proc. Nat. Acd. Sei. 53 (1965), 288)
verdünnt, das 10% fötale Kalbsserum, Natriumpenicillin C(IOO E./ml) und Streptomyceinsulfat (1 μg/ml) enthält.
Das erhaltene Präparat wird mit 150 g zentrifugiert. Der dabei erhaltene Preßkörper wird zweimal mit dem
Kulturmedium gewaschen und anschließend vorsichtig mit demselben Medium verdünnt. Dabei wird eine
Suspension erhalten, die 200 000 Zellen pro Milliliter enthält. In 28 Kulturröhrchen wird je 1 ml Suspension
gegeben. Die beschickten Röhrchen werden in 7 gleiche Gruppen unterteilt. Die Zellen werden bei 37° C in
einem Brutkasten kultiviert. Nach 1 d Inkubation wird das Kulturmedium entfernt. Die Röhrchen werden statt
dessen mit 1 ml eines Kulturmediums versetzt, das jeweils eine der in der Tabelle 1 gezeigten Substanzen
im Medium enthält. Die siebente Gruppe ist die Kontrollgruppe. Nach einer zusätzlichen Inkubation
von 3 d wird das Kulturmedium entfernt. Anschließend werden die Zellen mit 1 ml 0,1 m Zitronensäure
behandelt, die 0,1% Kristallviolett enthält. Nach jeweils heftigem Schütteln werden die je Probe vorhandenen
Zellen viermal im Hämocytometer ausgezählt Dabei werden dk in der Tabelle I dargestellten Ergebnisse
erhalten.
Tabelle I | Anzahl der | Wachs |
Geprüfte Substanz | Zellen | tums- |
(50 ;jg/ml) | ± Standard | rate |
abweichung | (%) | |
(XlO4 Zellen) | ||
50,9 ±4,1 | 100,0 | |
Kontrolle | 65,4 ±1,6 | 128,5 |
(1) S-Inosyl-L-cystein | 54,1 ±2,0 | 106,3 |
(2) Inosin | 44,1 ±5,6 | 86 6 |
(3) Adenosin | 50,5 ±1 3 | 99,2 |
(4) L-Cystein | 57.8 ±1,8 | 113,6 |
(5) Inosin+ L-Cystein | 49,8 ±0,2 | 97,8 |
(6) Adenosin+ L-Cystein | ||
Geprüfte Substanz
(20 ;jg
(20 ;jg
10
Versuch 2
Das Testpräparat wird in der im Versuch 1 beschriebenen Weise hergestellt. Nach 3 d Inkubationszeit
wird das Kulturmedium entfernt und mit 1 ml eines Kulturmediums versetzt, das die in Tabelle Il gezeigten
Substanzen enthält. Nach einer zusätzlichen Inkubationszeit von 1 d werde:, die Zellen in den einzelnen
Proben gezählt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle II zusammengestellt.
Anzahl der
Zellen
± Standard-
abweichung
(X 104 Zellen)
Wachstums- raie (%)
Kontrolle 81,6±2,0 100,0
(1) S-Inosyl-L-cystein 97,8±3,8 119,9
(7) S-Inosyl-L-homo- 78,2±7,5 95,8 cystein
(8) S-Adenosyl-L-cystein 74,8±4,7 91,7
(9) S-Adenosyl-L-homo- 71,5 ±3,4 87,6 cystein
(10) S-Guanosyl-L-homo- 69,2±1,8 84,8 cystein
20
(b) Wirkung von S-Inosyl-Cystein auf das Wachstum
von Hühnerembryoherzzellen in Gegenwart eines wachstumhemmenden Mittels
Versuch 3
Die Zellenkultur wird in der im Beispiel 1 beschriebenen Weise hergestellt. Nach 1 d Inkubationszeit
wird das Kulturmedium abgenommen. Die Zellkulturen werden mit je 1 ml eines Kulturmediums versetzt,
das 1,7 μg pro Milliliter KCN enthält, sowie die in der
Tabelle III gezeigten Substanzen. Die erhaltenen Ergebnisse sind ebenfalls in der Tabelle III dargestellt.
Anzahl der Zellen | Wdchstumsrate | Wachstumsrate (%) |
+ Standardabweichungen | (Vn) | bezogen auf |
(XlO4 Zellen) | Kontrollversuchs- | |
werte in Tabelle I* | ||
32,0±5,0 | 100,0 | 62,9 |
50,9 ±1,5 | 159,1 | 100,0 |
37,2±4,4 | 116,3 | 73,1 |
33,3+1,9 | 104,1 | 65,4 |
41,9±6,3 | 130,9 | 82,3 |
42,3±3,7 | 132,2 | 83,1 |
36,0±4,0 | 112,5 | 70,7 |
Kontrolle
(1) S-Inosyl-L-cystein
(2) Inosin
(3) Adenosin
(4) L-Cystein
(5) Inosin+ L-Cystein
(6) Adenosin+ L-Cystein
*) Dieser Versuch wird gleichzeitig mit dem Versuch 1 durchgeführt.
Versuch
Das im Versuch 2 beschriebene Verfahren wird mit der Abänderung wiederholt, daß jedes der Test-Kulturmedien
mit 1,7 ug/ml KCN versetzt wird. Die Ergebnisse sind in der Tabelle IV dargestellt.
Geprüfte Substanz (20 ;
Anzahl der Zellen
± Standardabweichung
(X 1O4 Zellen) Wachstumsrate
Wachstumsrate (%), bezogen auf Kontrollversuchswerte in Tabelle II *)
Kontrolle
(1) S-Inosyl-L-cystein
(1) S-Inosyl-L-cystein
(7) S-Inosyl-L-homocystein
(8) S-Adenosyl-L-cystein
65,8 + 0,8
85,6±0,4 73,5+1,7 64,2±3,0 100,0
130,1
111,7
97,6
80,6
104,9
90,1
78,7
Forlsetzung
Geprüfte Substanz (20 ;-tg/ml)
Anzahl der Zellen
± Standardabweichung
(X 104 Zellen) Wachstumsrate
Wachstumsrate (%). bezogen auf
Kontrollversuch";-werte in Tabelle H *)
Kontrollversuch";-werte in Tabelle H *)
(9) S-Adenosyl-L-homocystein
(10) S-Guanosyl-L-homocystein
(10) S-Guanosyl-L-homocystein
65,2±1,8 66,3 ±1,4 99,1
100,8
100,8
79,9
81,3
81,3
*) Dieser Versuch und der Versuch 2 werden gleichzeitig durchgeführt.
Versuch
Das im Versuch 2 beschriebene Verfahren wird mit der Abänderung wiederholt, daß je Milliliter Kulturmedium
5 ;jg 6-Mercaptopurin zugegeben werden. Dabei werden die in der Tabelle V gezeigten Ergebnisse erhalten.
Geprüfte Substanz (20 ug/ml) | Anzahl der Zellen | Wachstumsrate | Wachstumsrate (%), |
± Standardabweichung | (%) | bezogen auf | |
(X 104Zellen) | Kontrollversuchs- | ||
werte in Tabelle II *) | |||
Kontrolle | 68,3 ±0,4 | 100,0 | 83,7 |
(1) S-Inosyl-L-cystein | 85,8 + 2,9 | 125,6 | 105,1 |
(7) S-Inosyl-L-homocystein | 65,3 ±3,7 | 95,6 | 80,0 |
(8) S-Adenosyl-L-cystein | 70,7 ±1,2 | 103,5 | 86,6 |
(9) S-Adenosyl-L-homocystein | 75.7±1.6 | 110.8 | 92,8 |
(10) S-Guanosyl-L-homocystein | 72,3 ±5,5 | 105,9 | 88,6 |
*) Dieser Versuch wird gleichzeitig mit dem Versuch 2 durchgeführt.
Den in den Tabellen I bis V gezeigten Daten ist zu entnehmen, daß das S-Insosyl-L-cystein hinsichtlich
seiner Fähigkeit, das Zellwachstum und die Zellvermehrung zu beschleunigen, im Vergleich zu konstitutionsähnlichen
Purinderivaten und Gemischen von Purinnucleosiden und L-Cystein herausragt.
(B) Geschwürheilende Wirkung
Wirkung von S-Inosyl-L-cystein
auf ein Klammer-Cortison-Magengeschwür
Untersuchungsverfahren
Es wurden männliche Sprahue-Dawley-Ratten mit Körpergewichten von 200 bis 250 g verwendet. Vor der
Untersuchung wurden die Tiere 24 Stunden lang ohne Nahrung und Wasser gehalten. Jede Ratte wurde unter
Narkose zur Freilegung des Magens geöffnet und eine Ligatur am Magen mittels Klammerung an seinem
zentralen Bereich mit zwei Metallplatten von 12x4 mm
Größe durchgeführt. Dieses Datum wird als »1. Operationstag« bezeichnet.
Nach 24 Stunden ab 1. Operationstag wurde jede Ratte unter Betäubung entlang der Ligaturnaht
geöffnet, um die Metallplatten aus dem Magen zu entfernen und erneut eine Ligatur angebracht. Dieses
Datum wurde als der >>1. Inkubationstag« bezeichnet.
Während 6 aufeinanderfolgenden Tagen ab dem 1. Operationstag bis zum 5 Inkubationstag wurde mittels
intramuskulärer Verabreichung Cortisonacetat (7 mg/ 100 g Ratte) injiziert. Außerdem wurde 1 Grammäquivalent
Lösung einer 5%igen Glucoselösung und Ringersche Lösung (15 ml/Ratte), Penicillin G (1000
IU/kg Ratte) und Streptomycin (50 mg/kg Ratte) kontinuierlich 5 Tage lang ab dem 1. Operationstag
injiziert. Jede Ratte wurde nach dem 1. Inkubationstag auf Diät und Wasser gestellt. Die zu untersuchenden
Produkte wurden oral oder intramuskulär während 15 Tagen ab dem 6. Inkubationstag bis zum 20. Inkubationstag
verabreicht. Kontrolltiere waren solche, bei denen man intramuskulär physiologische Kochsalzlösung
oder oral eine Carboxymethylcelluloselösung verabreichte.
Am 21. Inkubationstag wurde jede Ratte getötet und
Am 21. Inkubationstag wurde jede Ratte getötet und
so zur Entfernung ihres Magens zur Beobachtung des Grades der Geschwürbildung und der Heilwirkung nach
der Methode von Tabayashi geöffnet. Die Methode von Tabayashi wurde in dem Japanese Journal of Gast·
roenterology, 62, 1533-1549 (1965) veröffentlicht. Die beschriebene Methode ist geeignet, die regenerierende
Heilwirkung eines Medikamentes auf das Magengeschwür zu bestimmen. In dieser Richtung wirkende
Heilmittel sind erst in jüngerer Zeit entwickelt worden, während die zur Behandlung von Magengeschwüren
bo schon langer üblichen Parasvmpatholytica keine eigentliche
Heilwirkung besitzen, sondern durch Hemmung der Magensaftsekretion die Bildung und weitere
Ausbreitung des Geschwürs verhindern. Die regenerierende Heilwirkung des erfindungsgemäßen S-Inosyl-L-cysteins
wurde mit derjenigen von Geranylfarnesylacetat (Gefarnat) und einem Dialysekonzentrat aus
deproteiniertem Kälberblut, die beide als in der gleichen Richtung hochwirksame Heilmittel bekannt sind, vergli-
chen. Die Ergebnisse sind in den nachfolgenden Tabelle Vl und VIl niedergelegt, sie ?.eigen eindeutig die
Überlegenheit des erfindungsgemäßen S-lnosyl-L-cysteins.
Heilwirkung von S-lnosyl-L-cyslein, Gelamat und eines Kälberblutpräparates auf das Klammer-Cortison-Magengeschwür
bei der Ratte bei i.m.-Verabreichung
Behandlung | /.ahI der Tiere |
Zahl der | Dosis (nig/kg) |
lleilungsindex (Durchschnitt ± Standardfehler) |
lleilungs- rute (%) |
Schleimhaut- Rcgenerations- index (Durch schnitt ± Slandard- fchler) |
Heilungs- | Schleimhaut- | Heilungs- r.ile ("·„) |
Kontrollversuch | 15 | — | 30,2 ±1,8 | 100 | 28,3 ±1,3 | 100 | |||
S-Inosvl-L-cvstein | 15 | 5 | 61,4 ±3,7 | 203,3 | 42,1 ±1,7 | 148,8 | |||
Cielarnat | 15 | 50 | 54,9 ±2.5 | 181,8 | 41,0±l,9 | 144,9 | |||
Kälberblutpräparat | 15 | 40 | 3 7,6 ±1,8 | 124,5 | 32,6 ±1.9 | 115,2 | |||
Tabelle \'II | |||||||||
Heilwirkung von S-Inosyl-L-cystein um1 p.o.-Verabreichung |
Gelarnat auf | das Kiammer-Cortison-Magengeschwür bei der | Ratte bei | ||||||
Behandlung | Dosis | Heilungsindex | Heilungs- |
Tiere (nig/kgl (Durchschnitt ± rate (%) Regenerations- rate (%)
Standardfehler) index (Durch
schnitt ± Standardfehler)
Kontrollversuch | 15 | 34,7 ±1.4 | 100 | 34,5 ±1,4 | 100 | |
S-Inosyl-L-cystein | 15 | 40 | 57.3 ±2,2 | 165,1 | 47,9 ±1,9 | 138,8 |
Gefarnat | 15 | 100 | 34.8 ±1.1 | 100,3 | 35,1 ±1,6 | 101,7 |
Eine orale Verabreichung des Kälberblutpräparates wurde bis jetzt noch nicht entwickelt.
Das S-Inosyl-L-cystein der Formel 111 wird durch Umsetzen von Inosinderivaten der allgemeinen chemischen
Formel I mit geschützten Sauerstoffatomen in 2'3'-Stellung mit Alkalimetallsalzen von L-Cystein der
allgemeinen chemischen Formel IV zu Inoxyl-L-cystein
der allgemeinen chemischen Formel II mit geschützten 2'.3'-Sauerstoffatomen umgesetzt. Anschließend werden
die Schutzgruppen von den Sauerstoffatomen abgespalten. Dieses Herstellungsverfahren kann durch
folgende Reaktionsgleichungen beschrieben werden:
HN
XH;C
O O
R'· R-
HACHCH-SM
COOM (IYl
H:NCHCH;SCH,
COOH
(I)
11,NCHCH1SCH,
COOII
AK
IK) OH
(III)
In den vorstehenden allgemeinen chemischen Formeln bedeuten Ri und R? ein Wasserstoffatom, eine
niedere Alkylgruppe oder einen Arylrest mit der Maßgabe, daß R, und R2 nicht beide gleichzeitig
Wasserstoffatome sind, M ist ein Alkalimetallatom und X bedeutet ein Halogenatom oder einen Rest Y-O-,
in dem Y eine Arylsulfonylgruppe oder eine niedere Alkylsulfonylgruppe ist. Unter »niedere Alkylgruppe«
werden dabei Alkylreste mit bis zu 6, vorzugsweise bis zu 4 Kohlenstoffatomen verstanden.
Als Schutzgruppe für die 2'- und 3'-Hydroxylgruppen der Verbindung der allgemeinen chemischen Formel I
dient vorzugsweise der Isopropylidenrest. so daß also beide Reste Ri und Rj gleichzeitig die Methylgruppe
bedeuten. Aber auch andere Alkylidenreste und Arylidenreste können mit gutem Erfolg eingesetzt
werden und sind insbesondere unter milden Bedingungen wieder abspaltbar.
Wenn X in der allgemeinen chemischen Formel 1 die Gruppe Y-O-darstellt, wird die Substanz der allgemeinen
chemischen Formel I mit dem L-Cysteinsalz in flüssigem Ammoniak oder alternativ mit L-Cystein in
Alkohol in Gegenwart eines Alkalimetallalkoholats zur 2',3'-sauerstoffgeschützten Verbindung der allgemeinen
chemischen Formel Il umgesetzt. Die alkoholische Reaktion wird vorzugsweise in Methanol. Äthanol,
Isopropanol oder tert.-Butanol durchgeführt.
Die L-Cysteinsalze werden vorzugsweise durch Umsetzen von L-Cystin oder S-Benzyl-L-cystin mit
Alkalimetallen in flüssigem Ammoniak hergestellt.
Wenn X in der allgemeinen chemischen Formel I ein Halogenatom, vorzugsweise ein Chloratom oder ein
Bromatom, bedeutet, wird die Substanz der allgemeinen chemischen Formel I mit L-Cystein in Alkohol in
Gegenwart eines Alkalimetallalkoholats zur Substanz der allgemeinen chemischen Forme! II umgesetzt
Die Umsetzung in alkoholischer Phase wird vorzugsweise
im Bereich zwischen Raumtemperatur und Rückflußtemperatur durchgeführt Die Reaktion in
flüssigem Ammoniak wird unter Kühlung vorzugsweise im Temperaturbereich zwischen —80° C bis —30° C
ausgeführt.
Die Sauerstoffschutzgruppen in der Verbindung der allgemeinen chemischen Formel II können ohne
Schwierigkeiten in an sich bekannter Weise abgespalten werden, beispielsweise durch Hydrolyse mit organischen Säuren, wie beispielsweise verdünnter Ameisensäure, oder durch Hydrolyse mit MineraJsäuren, wie
beispielsweise verdünnter Salzsäure oder verdünnter Schwefelsäure.
Die Erfindung ist fan folgenden anhand von Ausführungsbeispieien näher beschrieben.
Herstellung von
S-(2',3'-O-Isopropylideninosyl)-L-cystein
S-(2',3'-O-Isopropylideninosyl)-L-cystein
Verfahren A
In ein mit einem Trockenröhrchen verschlossenes
2') Gefäß werden unter Kühlung mit einem Trockeneis-Aceton-Gemisch
Natriumhydroxid und etwa 1 I flüssiger Ammoniak gegeben. Das Gemisch wird mit 6,6 g
L-Cystin versetzt. Dem so erhaltenen Gemisch wird so viel metallisches Natrium zugesetzt, bis die Lösung eine
in schwache blaue Färbung zeigt. Anschließend wird noch
etwas L-Cystein zugesetzt, um das Gemisch wieder zu entfärben.
Die so hergestellte entfärbte Lösung wird mit 21.1 g 2',3'-0-Isopropyliden-5'-o-(p-Toluolsulfonyl)-inosin
r. versetzt. Es wird 4 h gerührt und anschließend bei
Raumtemperatur über Nacht stehengelassen. Dabei dampft der Ammoniak ab. Der Rückstand wird in
Eiswasser aufgenommen und wöchentlich durch Zusetzen von konzentrierter Salzsäure angesäuert. Zur
4,1 Einleitung und Förderung der Kristallisation wird
Äthanol zugesetzt. Nach Abfiltrieren und Umkristallisieren aus Wasser werden 16,6 g des Produktes erhalten,
das bei 195 bis 198°C unter Zersetzung schmilzt. Nach
weiterer Umkristallisierung werden weiße Kristalle
4-1 erhalten, die ebenfalls unter Zersetzung bei 205 bis
208°C schmelzen. Die Elementaranalyse für Ci0H2]N5O6 · H2O liefert die folgenden Daten:
berechnet (%): C 44,75: H 5,40; N 16,31,
gefunden (%): C 44,61: H 5,32; N 15,97.
gefunden (%): C 44,61: H 5,32; N 15,97.
Verfahren B
176 mg L-Cysteinhydrochlorid und 100 mg Natrium
werden in 20 ml Äthanol gelöst Die Lösung wird mit 463 mg 2'3'-0-Isopropyliden-5'-0-(p-Toluolsulfonyl)-inosin versetzt Das erhaltene Gemisch wird 5 h unter
Rückfluß gekocht Nach Abkühlen fallen Kristalle aus, die auf dem Filter gesammelt werden. Die Kristalle
werden in 3 ml Essigsäure aufgenommen und gelöst Durch Zugabe von Äthanol wird wiederum auskristallisiert Die abgetrennten Kristalle werden chromatographisch über Sflicagel gereinigt wobei schließlich 82 mg
des Endproduktes erhalten werden, das einen Schmelzpunkt von 193 bis 197° C (Zersetzung) zeigt Das
Papierchromatographisch identifizierte Endprodukt ist mit dem nach dem Verfahren A erhaltenen Produkt
identisch.
Verfahrene
180 mg L-Cysteinhydrochlorid und 100 mg Natrium
werden in 20 ml Äthanol gelöst. Die erhaltene Lösung wird mit 270 mg S'-Chlor-S'-deoxy^'J'-O-isopropylideninosin
versetzt. Das Gemisch wird 5 h unter Rückfluß gekocht. Nach Abkühlen wird das Reaktionsgemisch
mit 3 ml Essigsäure versetzt. Anschließend wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen.
Der Rückstand wird in heißem Äthanol aufgenommen.
Der sich dann absetzende Niederschlag wird durch Filtration abgetrennt. Nach chromatographischer Reinigung
über Silicagel werden 250 mg des Endproduktes mit einem Schmelzpunkt von 195 bis 199°C (Zersetzung)
erhalten. Papierchromatographisch wird die Identität dieses Produktes mit dem nach Verfahren A
hergestellten Produkt nachgewiesen.
Verfahren D
In den mit einem Trockenröhrchen verschlossenen Kolben, der auch im Verfahren A verwendet wird,
werden etwa 200 ml flüssiger Ammoniak und 210 mg L-Cystein gegeben. Das Gemisch wird mit Natrium
versetzt bis eine schwach blaue Losung erhalten wird. Anschließend wird durch Zusatz einer kleinen Menge
L-Cystein wieder entfärbt.
Die so erhaltene entfärbte Lösung wird mit 560 mg 2',3'-O-!sopropy!iden-5'-O-methansulfonylinosin versetzt.
Unter Rühren wird im Verlauf von etwa 6 h der flüssiger Ammoniak verdampft. Der Rückstand wird in
Eiswasser gegossen. Die dabei erhaltene Lösung wird wöchentlich durch Zusatz von konzentrierter Salzsäure
angesäuert. Durch Zusatz von Äthanol wird auskristallisiert. Die Kristalle werden durch Filtration abgetrennt
und über Silicagel Chromatographien. Es werden 150 mg des Endproduktes mit einem Schmelzpunkt von
198 bis 203X (Zersetzung) erhalten. Papierchromatographisch wird die Identität des erhaltenen Produktes
mit dem nach dsm Verfahren A erhaltenen Produkt
nachgewiesen.
S-lnosyl-L-cystein
Verfahren A
2,0 g S-(2',3'-O-lsopropylidenosyl)-L-cystein, das in
der im Beispiel 1 beschriebenen Weise hergestellt ist, werden in 10 ml einer 60%igen wäßrigen Ameisensäurelösung
gelöst. Die Lösung wird 6 d bei Raumtemperatur stehengelassen. Anschließend wird durch Zusatz von
Äthanol auskristallisiert. Die Kristalle werden durch Filtration abgetrennt und über Silicagel chromatographisch
gereinigt. Es werden 1,4 g kristallines Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 227 bis 23O0C
(Zersetzung) erhalten. Die auf CnH^NsOaS berechnete
Elementaranalyse liefert die folgenden Werte:
berechnet (%): C 42,04; H 4,62; N 18,86;
gefunden (%): C 42,35; H 4,95; N 18,41
gefunden (%): C 42,35; H 4,95; N 18,41
Verfahren B
In ein Reaktionsgefäß der im Verfahren A verwendeten
Art werden 200 mg flüssiger Ammoniak und 1,0 g L-Cystein gegeben. Das Gemisch wird mit so viel
Natrium versetzt, daß eine schwache blaue Färbung eintritt. Anschließend wird das Gemisch durch Zusatz
von etwas L-Cystin vorsichtig entfärbt.
Die so erhaltene Lösung wird mit 3,4 g 2\3'-O-Bei;zyliden-5'-O-methansulfonylinosin
versetzt. Es wird 6 h gerührt, wobei der flüssige Ammoniak abdampft. Der
erhaltene Rückstand wird in Eiswasser gegossen und wöchentlich mit konzentrierter Salzsäure angesäuert.
Anschließend wird zur Ausfällung der Kristalle Äthanol zugesetzt Die Kristalle werden abgetrennt und aus
einem Methanol-Wasser-Gemisch umkristallisiert Dabei werden 0,8 g S-(2',3'-O-Benzylideninosyl)-L-cystein
mit einem Schmelzpunkt von 176 bis 179° C erhalten. Die erhaltenen Kristalle werden in 5 ml 30%iger
wäßriger Essigsäurelösung aufgenommen. Die erhaltene Lösung wird 6 h bei 70cC gehalten. Nach Abschluß
der Reaktion wird die Lösung unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt Der erhaltene Rückstand
wird über Silicagel Chromatographien. Es werden 0,5 g kristallines Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von
221 bis 225°C (Zersetzung) erhalten. Papierchromatographisch wird nachgewiesen, daß das erhaltene
Produkt identisch mit dem Produkt ist, das nach dem Verfahren A (Beispiel 2) erhalten wird.
Claims (2)
1. S-Inoxyl-L-cystein.
2. Verfahren zur Herstellung von S-Inosyl-L-cystein,
dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise ein 2\3'-O- geschütztes Inosinderivat
der allgemeinen chemischen Formel
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