DE2537294C3

DE2537294C3 - S-Inosyl-L-cystein und Verfahren zu seiner Herstellung

Info

Publication number: DE2537294C3
Application number: DE2537294A
Authority: DE
Inventors: Iwao Osaka Hashimoto
Original assignee: Funai Pharmaceutical Industries Ltd
Current assignee: Funai Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date: 1974-08-22
Filing date: 1975-08-21
Publication date: 1982-03-25
Also published as: US4011221A; NL170541B; JPS5523275B2; JPS5126896A; SU649723A1; NL170541C; CA1051883A; FR2282276A1; NL7509982A; GB1464227A; CH612442A5; ES440135A1; DE2537294A1; DE2537294B2; BR7505724A; FR2282276B1

Description

HN

XH₂C

(D

in der Ri und R2 ein Wasserstoffatom, ein niederer Alkylrest oder ein Arylrest mit der Maßgabe sind, daß Ri und R₂ nicht beide gleichzeitig ein Wasserstoffatom sind, und X ein Halogenatom oder die Gruppe Y — O — bedeuten, wobei Y einen Arylsulfonylrest oder einen niederen Alkylsulfonylrest bedeutet, mit einem Alkalimetallsalz des L-Cysteins zu einem 2',3'-0-geschützten S-Inosyl-L-cysteinderivat der allgemeinen chemischen Formel

H₂N-CHCH₂SCH₂

COOH

(ID

umsetzt, in der Ri und R2 die vorstehend genannte Bedeutung haben, und daß man dann die Schutzgruppen in an sich bekannter Weise entfernt.

Die Erfindung betrifft S-Inosyl-L-cystein und ein Verfahren zu seiner Herstellung.
Es wurde gefunden, daß S-Inosyl-L-cystein oder H₁N-CHCH₁SCH₂
COOH

(Hl)

HO OH

unter zahlreichen Inosinderivaten unerwartet herausragende pharmakologische Eigenschaften aufweist Insbesondere durch seine Eigenschaft, auf Gewebezellen wachstumsanregend zu wirken, ist es ein wertvolles Arzneimittel zur Behandlung von Gewebeverletzungen oder Geschwürschäden.

Die folgenden Versuche dienen dem Nachweis der zellvermehrenden und geschwürheilenden Wirkungen des S-Inosyl-L-cysteins der Erfindung.

(A) Zellvermehrungsaktivität

(a) Die Wirkung von S-Inosyi-L-cystein
auf die Vermehrung von Hühnerembryoherzzellen

Versuch 1

Herzen 13 Tage alter Hühnerembryos werden unter sterilen Bedingungen zu 1 bis 2 mm im Durchmesser messenden Stücken zerschnitten. Es wird in calciumfreier und magnesiumfreier phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen. Anschließend werden die präparierten Herzstücke mit einer O,l°/oigen Trypsinlösung in PBS behandelt. Die überstehende Fraktion wird verworfen. Der Rückstand wird erneut mit einer O,l°/oigen Trypsinlösung in PBS behandelt. Die überstehenden, isolierte Zellen enthaltenden Fraktionen werden gesammelt. Das Verfahren wird dreimal wiederholt. Die auf diese Weise gewonnenen überstehenden Fraktionen werden vereinigt und mit einem kalten Kulturmedium (F 12; Proc. Nat. Acd. Sei. 53 (1965), 288) verdünnt, das 10% fötale Kalbsserum, Natriumpenicillin C(IOO E./ml) und Streptomyceinsulfat (1 μg/ml) enthält. Das erhaltene Präparat wird mit 150 g zentrifugiert. Der dabei erhaltene Preßkörper wird zweimal mit dem Kulturmedium gewaschen und anschließend vorsichtig mit demselben Medium verdünnt. Dabei wird eine Suspension erhalten, die 200 000 Zellen pro Milliliter enthält. In 28 Kulturröhrchen wird je 1 ml Suspension gegeben. Die beschickten Röhrchen werden in 7 gleiche Gruppen unterteilt. Die Zellen werden bei 37° C in einem Brutkasten kultiviert. Nach 1 d Inkubation wird das Kulturmedium entfernt. Die Röhrchen werden statt dessen mit 1 ml eines Kulturmediums versetzt, das jeweils eine der in der Tabelle 1 gezeigten Substanzen im Medium enthält. Die siebente Gruppe ist die Kontrollgruppe. Nach einer zusätzlichen Inkubation von 3 d wird das Kulturmedium entfernt. Anschließend werden die Zellen mit 1 ml 0,1 m Zitronensäure behandelt, die 0,1% Kristallviolett enthält. Nach jeweils heftigem Schütteln werden die je Probe vorhandenen

Zellen viermal im Hämocytometer ausgezählt Dabei werden dk in der Tabelle I dargestellten Ergebnisse erhalten.

Tabelle II

Tabelle I	Anzahl der	Wachs
Geprüfte Substanz	Zellen	tums-
(50 ;jg/ml)	± Standard	rate
	abweichung	(%)
	(XlO⁴ Zellen)
	50,9 ±4,1	100,0
Kontrolle	65,4 ±1,6	128,5
(1) S-Inosyl-L-cystein	54,1 ±2,0	106,3
(2) Inosin	44,1 ±5,6	86 6
(3) Adenosin	50,5 ±1 3	99,2
(4) L-Cystein	57.8 ±1,8	113,6
(5) Inosin+ L-Cystein	49,8 ±0,2	97,8
(6) Adenosin+ L-Cystein

Geprüfte Substanz
(20 ;jg

10

Versuch 2

Das Testpräparat wird in der im Versuch 1 beschriebenen Weise hergestellt. Nach 3 d Inkubationszeit wird das Kulturmedium entfernt und mit 1 ml eines Kulturmediums versetzt, das die in Tabelle Il gezeigten Substanzen enthält. Nach einer zusätzlichen Inkubationszeit von 1 d werde:, die Zellen in den einzelnen Proben gezählt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle II zusammengestellt.

Tabelle III

Anzahl der

Zellen

± Standard-

abweichung

(X 10⁴ Zellen)

Wachstums- raie (%)

Kontrolle 81,6±2,0 100,0

(1) S-Inosyl-L-cystein 97,8±3,8 119,9

(7) S-Inosyl-L-homo- 78,2±7,5 95,8 cystein

(8) S-Adenosyl-L-cystein 74,8±4,7 91,7

(9) S-Adenosyl-L-homo- 71,5 ±3,4 87,6 cystein

(10) S-Guanosyl-L-homo- 69,2±1,8 84,8 cystein

20

(b) Wirkung von S-Inosyl-Cystein auf das Wachstum

von Hühnerembryoherzzellen in Gegenwart eines wachstumhemmenden Mittels

Versuch 3

Die Zellenkultur wird in der im Beispiel 1 beschriebenen Weise hergestellt. Nach 1 d Inkubationszeit wird das Kulturmedium abgenommen. Die Zellkulturen werden mit je 1 ml eines Kulturmediums versetzt, das 1,7 μg pro Milliliter KCN enthält, sowie die in der Tabelle III gezeigten Substanzen. Die erhaltenen Ergebnisse sind ebenfalls in der Tabelle III dargestellt.

Anzahl der Zellen	Wdchstumsrate	Wachstumsrate (%)
+ Standardabweichungen	(Vn)	bezogen auf
(XlO⁴ Zellen)		Kontrollversuchs-
		werte in Tabelle I*
32,0±5,0	100,0	62,9
50,9 ±1,5	159,1	100,0
37,2±4,4	116,3	73,1
33,3+1,9	104,1	65,4
41,9±6,3	130,9	82,3
42,3±3,7	132,2	83,1
36,0±4,0	112,5	70,7

Kontrolle

(1) S-Inosyl-L-cystein

(2) Inosin

(3) Adenosin

(4) L-Cystein

(5) Inosin+ L-Cystein

(6) Adenosin+ L-Cystein

*) Dieser Versuch wird gleichzeitig mit dem Versuch 1 durchgeführt.

Versuch

Das im Versuch 2 beschriebene Verfahren wird mit der Abänderung wiederholt, daß jedes der Test-Kulturmedien mit 1,7 ug/ml KCN versetzt wird. Die Ergebnisse sind in der Tabelle IV dargestellt.

Tabelle IV

Geprüfte Substanz (20 ;

Anzahl der Zellen

± Standardabweichung

(X 1O⁴ Zellen) Wachstumsrate

Wachstumsrate (%), bezogen auf Kontrollversuchswerte in Tabelle II *)

Kontrolle
(1) S-Inosyl-L-cystein

(7) S-Inosyl-L-homocystein

(8) S-Adenosyl-L-cystein

65,8 + 0,8

85,6±0,4 73,5+1,7 64,2±3,0 100,0

130,1

111,7

97,6

80,6

104,9

90,1

78,7

Forlsetzung

Geprüfte Substanz (20 ;-tg/ml)

Anzahl der Zellen

± Standardabweichung

(X 10⁴ Zellen) Wachstumsrate

Wachstumsrate (%). bezogen auf
Kontrollversuch";-werte in Tabelle H *)

(9) S-Adenosyl-L-homocystein
(10) S-Guanosyl-L-homocystein

65,2±1,8 66,3 ±1,4 99,1
100,8

79,9
81,3

*) Dieser Versuch und der Versuch 2 werden gleichzeitig durchgeführt.

Versuch

Das im Versuch 2 beschriebene Verfahren wird mit der Abänderung wiederholt, daß je Milliliter Kulturmedium 5 ;jg 6-Mercaptopurin zugegeben werden. Dabei werden die in der Tabelle V gezeigten Ergebnisse erhalten.

Tabelle V

Geprüfte Substanz (20 ug/ml)	Anzahl der Zellen	Wachstumsrate	Wachstumsrate (%),
	± Standardabweichung	(%)	bezogen auf
	(X 10⁴Zellen)		Kontrollversuchs-
			werte in Tabelle II *)
Kontrolle	68,3 ±0,4	100,0	83,7
(1) S-Inosyl-L-cystein	85,8 + 2,9	125,6	105,1
(7) S-Inosyl-L-homocystein	65,3 ±3,7	95,6	80,0
(8) S-Adenosyl-L-cystein	70,7 ±1,2	103,5	86,6
(9) S-Adenosyl-L-homocystein	75.7±1.6	110.8	92,8
(10) S-Guanosyl-L-homocystein	72,3 ±5,5	105,9	88,6

*) Dieser Versuch wird gleichzeitig mit dem Versuch 2 durchgeführt.

Den in den Tabellen I bis V gezeigten Daten ist zu entnehmen, daß das S-Insosyl-L-cystein hinsichtlich seiner Fähigkeit, das Zellwachstum und die Zellvermehrung zu beschleunigen, im Vergleich zu konstitutionsähnlichen Purinderivaten und Gemischen von Purinnucleosiden und L-Cystein herausragt.

(B) Geschwürheilende Wirkung

Wirkung von S-Inosyl-L-cystein

auf ein Klammer-Cortison-Magengeschwür

Untersuchungsverfahren

Es wurden männliche Sprahue-Dawley-Ratten mit Körpergewichten von 200 bis 250 g verwendet. Vor der Untersuchung wurden die Tiere 24 Stunden lang ohne Nahrung und Wasser gehalten. Jede Ratte wurde unter Narkose zur Freilegung des Magens geöffnet und eine Ligatur am Magen mittels Klammerung an seinem zentralen Bereich mit zwei Metallplatten von 12x4 mm Größe durchgeführt. Dieses Datum wird als »1. Operationstag« bezeichnet.

Nach 24 Stunden ab 1. Operationstag wurde jede Ratte unter Betäubung entlang der Ligaturnaht geöffnet, um die Metallplatten aus dem Magen zu entfernen und erneut eine Ligatur angebracht. Dieses Datum wurde als der >>1. Inkubationstag« bezeichnet.

Während 6 aufeinanderfolgenden Tagen ab dem 1. Operationstag bis zum 5 Inkubationstag wurde mittels intramuskulärer Verabreichung Cortisonacetat (7 mg/ 100 g Ratte) injiziert. Außerdem wurde 1 Grammäquivalent Lösung einer 5%igen Glucoselösung und Ringersche Lösung (15 ml/Ratte), Penicillin G (1000 IU/kg Ratte) und Streptomycin (50 mg/kg Ratte) kontinuierlich 5 Tage lang ab dem 1. Operationstag injiziert. Jede Ratte wurde nach dem 1. Inkubationstag auf Diät und Wasser gestellt. Die zu untersuchenden Produkte wurden oral oder intramuskulär während 15 Tagen ab dem 6. Inkubationstag bis zum 20. Inkubationstag verabreicht. Kontrolltiere waren solche, bei denen man intramuskulär physiologische Kochsalzlösung oder oral eine Carboxymethylcelluloselösung verabreichte.
Am 21. Inkubationstag wurde jede Ratte getötet und

so zur Entfernung ihres Magens zur Beobachtung des Grades der Geschwürbildung und der Heilwirkung nach der Methode von Tabayashi geöffnet. Die Methode von Tabayashi wurde in dem Japanese Journal of Gast· roenterology, 62, 1533-1549 (1965) veröffentlicht. Die beschriebene Methode ist geeignet, die regenerierende Heilwirkung eines Medikamentes auf das Magengeschwür zu bestimmen. In dieser Richtung wirkende Heilmittel sind erst in jüngerer Zeit entwickelt worden, während die zur Behandlung von Magengeschwüren

bo schon langer üblichen Parasvmpatholytica keine eigentliche Heilwirkung besitzen, sondern durch Hemmung der Magensaftsekretion die Bildung und weitere Ausbreitung des Geschwürs verhindern. Die regenerierende Heilwirkung des erfindungsgemäßen S-Inosyl-L-cysteins wurde mit derjenigen von Geranylfarnesylacetat (Gefarnat) und einem Dialysekonzentrat aus deproteiniertem Kälberblut, die beide als in der gleichen Richtung hochwirksame Heilmittel bekannt sind, vergli-

chen. Die Ergebnisse sind in den nachfolgenden Tabelle Vl und VIl niedergelegt, sie ?.eigen eindeutig die

Überlegenheit des erfindungsgemäßen S-lnosyl-L-cysteins.

Tabelle Yl

Heilwirkung von S-lnosyl-L-cyslein, Gelamat und eines Kälberblutpräparates auf das Klammer-Cortison-Magengeschwür bei der Ratte bei i.m.-Verabreichung

Behandlung	/.ahI der Tiere	Zahl der	Dosis (nig/kg)	lleilungsindex (Durchschnitt ± Standardfehler)	lleilungs- rute (%)	Schleimhaut- Rcgenerations- index (Durch schnitt ± Slandard- fchler)	Heilungs-	Schleimhaut-	Heilungs- r.ile ("·„)
Kontrollversuch	15	—	30,2 ±1,8	100	28,3 ±1,3	100
S-Inosvl-L-cvstein	15	5	61,4 ±3,7	203,3	42,1 ±1,7	148,8
Cielarnat	15	50	54,9 ±2.5	181,8	41,0±l,9	144,9
Kälberblutpräparat	15	40	3 7,6 ±1,8	124,5	32,6 ±1.9	115,2
Tabelle \'II
Heilwirkung von S-Inosyl-L-cystein um¹ p.o.-Verabreichung	Gelarnat auf	das Kiammer-Cortison-Magengeschwür bei der	Ratte bei
Behandlung	Dosis	Heilungsindex	Heilungs-

Tiere (nig/kgl (Durchschnitt ± rate (%) Regenerations- rate (%)

Standardfehler) index (Durch

schnitt ± Standardfehler)

Kontrollversuch	15		34,7 ±1.4	100	34,5 ±1,4	100
S-Inosyl-L-cystein	15	40	57.3 ±2,2	165,1	47,9 ±1,9	138,8
Gefarnat	15	100	34.8 ±1.1	100,3	35,1 ±1,6	101,7

Eine orale Verabreichung des Kälberblutpräparates wurde bis jetzt noch nicht entwickelt.

Das S-Inosyl-L-cystein der Formel 111 wird durch Umsetzen von Inosinderivaten der allgemeinen chemischen Formel I mit geschützten Sauerstoffatomen in 2'3'-Stellung mit Alkalimetallsalzen von L-Cystein der

allgemeinen chemischen Formel IV zu Inoxyl-L-cystein der allgemeinen chemischen Formel II mit geschützten 2'.3'-Sauerstoffatomen umgesetzt. Anschließend werden die Schutzgruppen von den Sauerstoffatomen abgespalten. Dieses Herstellungsverfahren kann durch folgende Reaktionsgleichungen beschrieben werden:

HN

XH;C

O O

R'· R-

HACHCH-SM

COOM (IYl

H_:NCHCH;SCH,

COOH

(I)

11,NCHCH₁SCH,

COOII

AK

IK) OH

(III)

In den vorstehenden allgemeinen chemischen Formeln bedeuten Ri und R? ein Wasserstoffatom, eine niedere Alkylgruppe oder einen Arylrest mit der Maßgabe, daß R, und R2 nicht beide gleichzeitig Wasserstoffatome sind, M ist ein Alkalimetallatom und X bedeutet ein Halogenatom oder einen Rest Y-O-, in dem Y eine Arylsulfonylgruppe oder eine niedere Alkylsulfonylgruppe ist. Unter »niedere Alkylgruppe« werden dabei Alkylreste mit bis zu 6, vorzugsweise bis zu 4 Kohlenstoffatomen verstanden.

Als Schutzgruppe für die 2'- und 3'-Hydroxylgruppen der Verbindung der allgemeinen chemischen Formel I dient vorzugsweise der Isopropylidenrest. so daß also beide Reste Ri und Rj gleichzeitig die Methylgruppe bedeuten. Aber auch andere Alkylidenreste und Arylidenreste können mit gutem Erfolg eingesetzt werden und sind insbesondere unter milden Bedingungen wieder abspaltbar.

Wenn X in der allgemeinen chemischen Formel 1 die Gruppe Y-O-darstellt, wird die Substanz der allgemeinen chemischen Formel I mit dem L-Cysteinsalz in flüssigem Ammoniak oder alternativ mit L-Cystein in Alkohol in Gegenwart eines Alkalimetallalkoholats zur 2',3'-sauerstoffgeschützten Verbindung der allgemeinen chemischen Formel Il umgesetzt. Die alkoholische Reaktion wird vorzugsweise in Methanol. Äthanol, Isopropanol oder tert.-Butanol durchgeführt.

Die L-Cysteinsalze werden vorzugsweise durch Umsetzen von L-Cystin oder S-Benzyl-L-cystin mit Alkalimetallen in flüssigem Ammoniak hergestellt.

Wenn X in der allgemeinen chemischen Formel I ein Halogenatom, vorzugsweise ein Chloratom oder ein Bromatom, bedeutet, wird die Substanz der allgemeinen chemischen Formel I mit L-Cystein in Alkohol in Gegenwart eines Alkalimetallalkoholats zur Substanz der allgemeinen chemischen Forme! II umgesetzt

Die Umsetzung in alkoholischer Phase wird vorzugsweise im Bereich zwischen Raumtemperatur und Rückflußtemperatur durchgeführt Die Reaktion in flüssigem Ammoniak wird unter Kühlung vorzugsweise im Temperaturbereich zwischen —80° C bis —30° C ausgeführt.

Die Sauerstoffschutzgruppen in der Verbindung der allgemeinen chemischen Formel II können ohne Schwierigkeiten in an sich bekannter Weise abgespalten werden, beispielsweise durch Hydrolyse mit organischen Säuren, wie beispielsweise verdünnter Ameisensäure, oder durch Hydrolyse mit MineraJsäuren, wie beispielsweise verdünnter Salzsäure oder verdünnter Schwefelsäure.

Die Erfindung ist fan folgenden anhand von Ausführungsbeispieien näher beschrieben.

Beispiel 1

Herstellung von
S-(2',3'-O-Isopropylideninosyl)-L-cystein

Verfahren A

In ein mit einem Trockenröhrchen verschlossenes

2') Gefäß werden unter Kühlung mit einem Trockeneis-Aceton-Gemisch Natriumhydroxid und etwa 1 I flüssiger Ammoniak gegeben. Das Gemisch wird mit 6,6 g L-Cystin versetzt. Dem so erhaltenen Gemisch wird so viel metallisches Natrium zugesetzt, bis die Lösung eine

in schwache blaue Färbung zeigt. Anschließend wird noch etwas L-Cystein zugesetzt, um das Gemisch wieder zu entfärben.

Die so hergestellte entfärbte Lösung wird mit 21.1 g 2',3'-0-Isopropyliden-5'-o-(p-Toluolsulfonyl)-inosin

r. versetzt. Es wird 4 h gerührt und anschließend bei Raumtemperatur über Nacht stehengelassen. Dabei dampft der Ammoniak ab. Der Rückstand wird in Eiswasser aufgenommen und wöchentlich durch Zusetzen von konzentrierter Salzsäure angesäuert. Zur

4,1 Einleitung und Förderung der Kristallisation wird Äthanol zugesetzt. Nach Abfiltrieren und Umkristallisieren aus Wasser werden 16,6 g des Produktes erhalten, das bei 195 bis 198°C unter Zersetzung schmilzt. Nach weiterer Umkristallisierung werden weiße Kristalle

4-1 erhalten, die ebenfalls unter Zersetzung bei 205 bis 208°C schmelzen. Die Elementaranalyse für Ci₀H₂]N₅O₆ · H₂O liefert die folgenden Daten:

berechnet (%): C 44,75: H 5,40; N 16,31,
gefunden (%): C 44,61: H 5,32; N 15,97.

Verfahren B

176 mg L-Cysteinhydrochlorid und 100 mg Natrium werden in 20 ml Äthanol gelöst Die Lösung wird mit 463 mg 2'3'-0-Isopropyliden-5'-0-(p-Toluolsulfonyl)-inosin versetzt Das erhaltene Gemisch wird 5 h unter Rückfluß gekocht Nach Abkühlen fallen Kristalle aus, die auf dem Filter gesammelt werden. Die Kristalle werden in 3 ml Essigsäure aufgenommen und gelöst Durch Zugabe von Äthanol wird wiederum auskristallisiert Die abgetrennten Kristalle werden chromatographisch über Sflicagel gereinigt wobei schließlich 82 mg des Endproduktes erhalten werden, das einen Schmelzpunkt von 193 bis 197° C (Zersetzung) zeigt Das Papierchromatographisch identifizierte Endprodukt ist mit dem nach dem Verfahren A erhaltenen Produkt identisch.

Verfahrene

180 mg L-Cysteinhydrochlorid und 100 mg Natrium werden in 20 ml Äthanol gelöst. Die erhaltene Lösung wird mit 270 mg S'-Chlor-S'-deoxy^'J'-O-isopropylideninosin versetzt. Das Gemisch wird 5 h unter Rückfluß gekocht. Nach Abkühlen wird das Reaktionsgemisch mit 3 ml Essigsäure versetzt. Anschließend wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Der Rückstand wird in heißem Äthanol aufgenommen.

Der sich dann absetzende Niederschlag wird durch Filtration abgetrennt. Nach chromatographischer Reinigung über Silicagel werden 250 mg des Endproduktes mit einem Schmelzpunkt von 195 bis 199°C (Zersetzung) erhalten. Papierchromatographisch wird die Identität dieses Produktes mit dem nach Verfahren A hergestellten Produkt nachgewiesen.

Verfahren D

In den mit einem Trockenröhrchen verschlossenen Kolben, der auch im Verfahren A verwendet wird, werden etwa 200 ml flüssiger Ammoniak und 210 mg L-Cystein gegeben. Das Gemisch wird mit Natrium versetzt bis eine schwach blaue Losung erhalten wird. Anschließend wird durch Zusatz einer kleinen Menge L-Cystein wieder entfärbt.

Die so erhaltene entfärbte Lösung wird mit 560 mg 2',3'-O-!sopropy!iden-5'-O-methansulfonylinosin versetzt. Unter Rühren wird im Verlauf von etwa 6 h der flüssiger Ammoniak verdampft. Der Rückstand wird in Eiswasser gegossen. Die dabei erhaltene Lösung wird wöchentlich durch Zusatz von konzentrierter Salzsäure angesäuert. Durch Zusatz von Äthanol wird auskristallisiert. Die Kristalle werden durch Filtration abgetrennt und über Silicagel Chromatographien. Es werden 150 mg des Endproduktes mit einem Schmelzpunkt von 198 bis 203X (Zersetzung) erhalten. Papierchromatographisch wird die Identität des erhaltenen Produktes mit dem nach dsm Verfahren A erhaltenen Produkt nachgewiesen.

Beispiel 2

S-lnosyl-L-cystein

Verfahren A

2,0 g S-(2',3'-O-lsopropylidenosyl)-L-cystein, das in der im Beispiel 1 beschriebenen Weise hergestellt ist, werden in 10 ml einer 60%igen wäßrigen Ameisensäurelösung gelöst. Die Lösung wird 6 d bei Raumtemperatur stehengelassen. Anschließend wird durch Zusatz von Äthanol auskristallisiert. Die Kristalle werden durch Filtration abgetrennt und über Silicagel chromatographisch gereinigt. Es werden 1,4 g kristallines Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 227 bis 23O⁰C (Zersetzung) erhalten. Die auf CnH^NsOaS berechnete Elementaranalyse liefert die folgenden Werte:

berechnet (%): C 42,04; H 4,62; N 18,86;
gefunden (%): C 42,35; H 4,95; N 18,41

Verfahren B

In ein Reaktionsgefäß der im Verfahren A verwendeten Art werden 200 mg flüssiger Ammoniak und 1,0 g L-Cystein gegeben. Das Gemisch wird mit so viel Natrium versetzt, daß eine schwache blaue Färbung eintritt. Anschließend wird das Gemisch durch Zusatz von etwas L-Cystin vorsichtig entfärbt.

Die so erhaltene Lösung wird mit 3,4 g 2\3'-O-Bei;zyliden-5'-O-methansulfonylinosin versetzt. Es wird 6 h gerührt, wobei der flüssige Ammoniak abdampft. Der erhaltene Rückstand wird in Eiswasser gegossen und wöchentlich mit konzentrierter Salzsäure angesäuert. Anschließend wird zur Ausfällung der Kristalle Äthanol zugesetzt Die Kristalle werden abgetrennt und aus einem Methanol-Wasser-Gemisch umkristallisiert Dabei werden 0,8 g S-(2',3'-O-Benzylideninosyl)-L-cystein mit einem Schmelzpunkt von 176 bis 179° C erhalten. Die erhaltenen Kristalle werden in 5 ml 30%iger wäßriger Essigsäurelösung aufgenommen. Die erhaltene Lösung wird 6 h bei 70^cC gehalten. Nach Abschluß der Reaktion wird die Lösung unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt Der erhaltene Rückstand wird über Silicagel Chromatographien. Es werden 0,5 g kristallines Endprodukt mit einem Schmelzpunkt von 221 bis 225°C (Zersetzung) erhalten. Papierchromatographisch wird nachgewiesen, daß das erhaltene Produkt identisch mit dem Produkt ist, das nach dem Verfahren A (Beispiel 2) erhalten wird.

Claims

Patentansprüche: 5'-S-(L-2~Amino-2-carboxyäthyl)-5'-thioinosin der Formel III

1. S-Inoxyl-L-cystein.

2. Verfahren zur Herstellung von S-Inosyl-L-cystein, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise ein 2\3'-O- geschütztes Inosinderivat der allgemeinen chemischen Formel