DE2535799A1

DE2535799A1 - Entzuendungshemmende und antirheumatisch wirkende verbindungen

Info

Publication number: DE2535799A1
Application number: DE19752535799
Authority: DE
Inventors: Francesco Makovec; Luigi Rovati; Paolo Senin
Original assignee: Rotta Research Laboratorium SpA
Current assignee: Rottapharm SpA
Priority date: 1974-08-12
Filing date: 1975-08-11
Publication date: 1976-02-26
Also published as: NL7509091A; JPS5143773A; ATA623775A; CA1053663A; FR2281755A1; GB1467568A; FR2281755B1; IT1043937B; ES440166A1; DE2535799B2; AU8371775A; HK38879A; AT345295B; NL180663C; IE42125L; JPS5416511B2; CH618697A5; US3985878A; DE2535799C3; IE42125B1

Description

ROTTA RESEARCH LABORATORIUM S.p.A. San Fruttuoso di Monza (Milan) Italien

Entzündungshemmende und antirheumatisch wirkende Verbindungen.

Die Erfindung betrifft Verbindungen mit einer therapeutisch verwertbaren, entzündungshemmenden und antirheumatischen Wirkung sowie pharmazeutische Präparate auf Basis dieser Verbindungen.

Bekannte entzündungshemmende Verbindungen sind bei akuten Vorgängen wirksam, für die eine Schwellung und starke Schmerzen kennzeichnend sind. Diese entzündungshemmenden Verbindungen besitzen häufig auch eine analgetische Wirkung.

Es treten jedoch Schwierigkeiten in den Fällen auf, bei denen neben einer Rötung und Schwellung eine fortschreitende Läsion des Knorpels und Knochens (Gelenksarthrose) vor sich geht. Alle bisher bekannten entzündungshemmenden Verbindungen haben nämlich eine hemmende Wirkung sowohl auf Knorpeln als auch auf die Knochenmatrix, so daß die kontinuierliche Verwendung dieser Heilmittel bei chronischen Krankheitsfällen die Gelenksarthrose verstärkt und zu einer Osteoporose führt. Hinzu kommt, daß die bekannten entzündungshemmenden Verbindungen die Magenschleimhaut angreifen und sogar Magengeschwüre und einen Magendurchbruch verursachen können; ihre Verabreichung an Patienten,die an Gastroduodenitis und Geschwüren des Magens oder des Duodenums leiden, ist daher nicht möglich oder zumindest sehr gefährlich.

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Vorliegende Erfindung sieht therapeutisch wertvolle entzündungshemmende Verbindungen mit nachstehenden Eigenschaften vor:

1) Starke Wirkung bei entzündlichen Vorgängen;

2) zufriedenstellende analgetische Wirkung;

3) starke Wirkung bei chronischen Osteoarthritiden und

4) keine irritierenden und Ulcera verursachenden Wirkungen auf die Magenschleimhaut.

Erfindungsgemäß werden neue entzündungshemmende und antirheumatische Verbindungen der Formel A

UxIp U*lp \

COO-(CHp)_n -Tn{ ' ■ N-(CHp)_n -0-CO-CHp_n n^^N-

* 1 ^XCH₂ - CH₂Z₁₁ 2

?^H2 ' · ' "7

CH-NH-C^Q

^Wi₂ - WX₂ - CK₂

vorgesehen, in der n- und n₂ für 2 oder 3 stehen, wobei die beiden tertiären Aminogruppen gewünschtenfalls mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren, z.B. Oxal-, Zitronen-, Malein-, Pumar- oder Salzsäure, Salze bilden.

Verbindungen A können nach einem der beiden nachstehenden Verfahren hergestellt werden:

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Verfahren "a": COO Ka

'+Cl - (CH₉)

^VCH^ - CH,f

- OH

CH - KE - CO

ί XK₀-CH₉-CK

CH₂-CH -

.N - (CH₉)_n - OK S ² ⁿ

(III)

CH₂ - COOH

N CH.

ι .³·

CO i (IV)

■Γ-(A)

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-A-

Verfahren "b"

CHp-COOH + HO-(CH₀) CH₂

- CH

2\

■2 "CHp - CH; (ID

(CH₂) -Cl-

CH₂-C00-(CH_o)_n - Ni ² ⁿ2 CH₂

Ho

(VI)

N- (CHp)_n - Cl

<L Xl₁

(VI) +Cl- CO

ei

(VII)

CHp-COO-(CHp)

(VIII) N -

11-

- c:

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COO Na '" + (VIII) U (A)

Gemäß dem Verfahren "a" wird N-Benzoyl-N¹,N¹-di-npropyl-DL-isoglutamin in einem Lösungsmittel, z.B. SuIfolan. Toluol, Xylol oder Dimethylsulfoxid, mit N-(Hydroxyalkyl)-N¹-(chloralkyl)-piperazin in Gegenwart von Natriumbikarbonat bei einer Temperatur von 70 bis 150°C, vorzugsweise bei 110°C, 2 bis 12 Stunden reagieren gelassen. Das so erhaltene Zwischenprodukt, N'-(2 oder 3)-Hydroxyalkyl-N-(2 oder 3)-(N-benzoyl-N¹, N¹-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxyalkyl-piperazin wird mit 1-(p-Chlorbenzoyl)-S-methoxy^-methyl-S-indolessigsäure in Gegenwart eines Kondensationsmittels, z.B. N¹,N¹-Dicyclohexylcarbodiimid oder Ν,Ν'-Carbonyl-diimidazol, in einem Lösungsmittel, z.B. Tetrahydrofuran, Dioxan, Chloroform, Äthylacetat oder Aceton, 8 bis 48 Stunden lang bei einer Temperatur von 10 b'is 30°C umgesetzt, wobei sich die Verbindung A bildet.

Gemäß dem Verfahren "b" wird 5-Methoxy-2-methyl-3-indolylessigsäure mit N-(Hydroxyalkyl)-N¹-(chloralkyl)-piperazin in Gegenwart eines Kondensationsmittels, z.B. N,N¹-Dicyclohexylcarbodiimid oder Ν,Ν¹-Carbonyl-diimidazol, in einem Lösungsmittel, z.B. Tetrahydrofuran, Dioxan, Chloroform, Äthylacetat oder Aceton, 8 bis 48 Stunden bei einer Temperatur von 10 bis 30⁰C umgesetzt. Das erhaltene N¹-(2 oder 3)-Chloralkyl-N-(2 oder 3)-(5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy)-alkylpiperazin wird mit einer Suspension von Natriummetall, Natriumjodid oder Natriumphenat in einem Lösungsmittel, z.B. Benzol oder Toluol, 2 bis 8 Stunden bei 10 bis 40⁰C

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2 b 3 5 7 9

reagieren gelassen. Hierauf wird, ohne das organometallische Zwischenprodukt zu isolieren, die Reaktionsmasse bei 5 bis 10°C mit einer stöchiometrischen Menge von p-Chlorbenzoylchlorid vermischt, und die Reaktion bei einer Temperatur \αα 10 bis 40°C 4 bis 12 Stunden vor sich gehen gelassen. Man erhält das N¹-(2 oder 3)-Chloralkyl-N-(2 oder 3)-/T-(p-chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy_/-alkylpiperazin, das mit N-Benzoyl-N',N¹-di^v-propyl-D,L-isoglutamin in einem Lösungsmittel, z.B. Toluol, Xylol, Sulfolan oder Dimethylsulfoxid, in Gegenwart einer stöchiometrischen Menge Natriumbicarbonat bei 60 bis 120°C 2 bis 12 Stunden, umgesetzt wird, wobei sich die Verbindung A bildet.

Die Verbindung A ist in an sich bekannter Weise, wie aus nachfolgenden Beispielen ersichtlich ist, in ein Salz überführbar.

Die bevorzugte Verbindung, die nachstehend mit

"CR 604" bezeichnet wird, ist das N¹-2-/T-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolacetox;£7-äthyl-N-3-(N-benzoyl-N^l ,N¹-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin, vorzugsweise in Form des Dimaleats.

Es folgen Beispiele für die Herstellung erfindungsgemäßer Verbindungen.

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Beispiel 1 :

N¹(2-Hydroxyäthyl)-N-3-{N-benzoyl-N',N'-di-n-prppyl-DL-isoglutaminyl)-oxy-propylpiperazin.

Einer Lösung von 33,4 g (0,1 Mol) N-Benzoyl-N¹,

N'-di-n-propyl-D,L-isoglutamin in 200 ml Dimethylsulfoxid werden unter Rühren 5,4 g (0,1 Mol) Natriummethylat und dann 10,6 g(0,1 KoI) N-3-Chlorpropyl-N'-2-hydroxyäthylpiperazin zugesetzt. Hierauf wird die Mischung auf 105⁰C gebracht und bei dieser Temperatur 12 Stunden unter Rühren stehen gelassen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft und der Rückstand mit Äthylacetat versetzt und mit einer verdünnten Salzsäurelösung extrahiert; die wässerige saure Phase wird mit einer 4n Natriumhydroxydlösung auf einen pH-Wert von 10 gebracht und wieder aeimal mit Äthylacetat extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen werden mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, wonach abfiltriert und nochmals cretrocknet. wird.Der so erhaltene ölige Rückstand wird in 150 ml Methanol gelöst; durch Zusatz von einer methänolisehen Oxalsäurelösung wird das Dioxalat ausgefällt.

Ausbeute 81 %, F = 181-184°C Beispiel 2:

N'-2-/T-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy_7~äthyl-N-3-(N-benzoyl-N¹ ,N¹ -di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin (CR 604).

Einer titrierten Lösung von 400 ml Äthylacetat,die 0,1 Mol N'-(2 Hydroxyäthyl)-n-3-(N-benzoyl-N',N¹-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin enthält; - letzteres wurde erhalten, indem 71,9 g (0,105 Mol) des entsprechenden Dioxalats in 500 ml Wasser gelöst wurden-, wonach diese Lösung auf einen pH-Wert von 9 bis 10 mittels Natriumbicarbonat gebracht und die so gebildete ölige Emulsion zweimal nacheinander mit insgesamt 400 ml Äthylacetat extrahiert wurde - werden der Reihe nach 35,8 g (0,1 Mol) 1-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolessigsäure und 20,6 g (0,1 Mol) N,N¹-Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Dieses Gemisch wird 24 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen;

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nach Abfiltrieren des ausgefällten N¹-N'-Dicyclohexylharnstoff wird die organische Phase mit verdünnter Salzsäure,einer Lösung von Natriumbicarbonat und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen und danach mit wasserfreim Natriumsulfat getrocknet/ filtriert und wieder getrocknet. Der ölige Rückstand wird in 600 ml Methanol gelöst; das Dioxalat wird durch Zusatz einer Lösung von Oxalsäure in Methanol ausgefällt.

Ausbeute 85 %, F= 190 - 192°C (kristallisiert aus Methanol) Mikrokristalline Substanz, die mattweiß ist, und in Äthanol, Methanol und Aceton ein wenig löslich und in Wasser unlöslich ist.
Mikroanalyse (CR 604 - Dioxalat):

C % H % N %

berechnet 58,60 6,10 6,83 gefunden 59,01 6,19 6,79.

In analoger Weise kann das Dimaleat hergestellt werden.

Ausbeute 83 %, F= 146 - 148°C (kristallisiert aus Äthanol) Mikrokristalline Substanz,die mattgelb ist und in Äthanol und Aceton ein wenig und in Methanol etwas mehr löslich ist, in Wasser hingegen unlöslich ist.

Nach der gleichen Verfahrensweise jedoch mit geringerer Ausbeute kann das Dihydrochlorid erhalten werden, Ausbeute 70 % ,F= 107 - 111°C (unter Zersetzung).

Die Verbindung ist von amorphem Aussehen ,leicht

gelb gefärbt, in Methanol und Äthanol löslich, in Aceton ziemlich gut und in Wasser (Löslichkeit ungefähr 0,5 % bei 25⁰C) kaum löslich. Beispiel 3:

N'-3-(Chlorpropyl)-N-2-(5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy)-äthylpiperazin.

Einer Lösung von 21,9 g (0,1 Mol) 5-Methoxy-2-

methyl-3-indolylessigsäure in 300 ml Äthylacetat werden der Reihe nach 20,6 g (0,1 Mol) N-(2-Hydroxyäthyl)-N'-3-(chlorpropyl)piperazin und 20,6 g (0,1 Mol) N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid; das Gemisch

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— Q —

wird 2 4 Stunden unter Rühren bei Raumtemperatur stehen gelassen. Nach Abfiltrieren des ausgefällten N,N¹-Dicyclohexylharnstoffs wird die organische Phase mit einer Lösung von Natriumbicarbonat und einer gesättigten Natrxumchloridlösung gewaschen und'anschliessend wird mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet,, abfiltriert und wieder getrocknet. Der ölige Rückstand wird als solcher bei der nächsten Verfahrensstufe eingesetzt. Ausbeute 80%.

Beispiel 4:

N'-3-(Chlorpropyl)-N-2-/T-(p-chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy_/-äthy lpiper azin.

Einer Lösung von 40,8 g (0,1 Mol)des nach Beispiel 3 erhaltenen Öls in 400 ml Toluol werden unter Durchleitung von Stickstoff 12 g Natriumjodid (0,1 Mol) in einer Suspension von 20 % Vaselin zugesetzt; das Gemisch wird 6 Stunden bei Raumtemperatur unter starkem Rühren reagieren gelassen und dann auf 0⁰C abgekühlt, wonach 17,5 g (0,1 MoI)- p-Chlorbenzoylchlorid hinzugefügt werden. Die Mischung wird dann auf Raumtemperatur gebracht und zumindest 6 Stunden weiter reagieren gelassen.

Die organische Phase wird in einer wässerigen Lösung von Natriumbicarbonat und dann mit Wasser gewaschen; hierauf wird mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, wonach abfiltriett und in Vakuum eingeengt wird. Der so erhaltene ölige Rückstand wird in 200 ml Methanol gelöst; durch Zusatz einer methanolischen Oxalsäurelösung wird das Dioxalat ausgefällt. Ausbeute 68 %, F = 207-21O⁰C (unter Zersetzung).
Beispiel 5:

N'-2-/⁼1(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-3-indolacetoxy_7-äthyl-N-3-(N-benzoyl-N' ,N¹ -di-n-propyl-D^-isoglutaminyl) oxypropyl-piperazin (CR 604, vgl. Beispiel 2).

Einer Suspension von 33,4 g (0,1 Mol) N-Benzoyl-N¹,N¹-di-n-propyl-D,L-isoglutamin in 300 ml wasserfreiem Toluol werden unter Rühren 5,4 g (0,1 Mol) Natriummethylat zugesetzt; das Gemisch wird dann auf 60°C gebracht und unter Rühren 3 Stunden stehen gelassen, wonach 400 ml einer Toluollösung hinzugefügt werden, die 0,1 Mol N'-3-(Chlorpropyl)-N-2-/T-(p-chlorbenzoyl)-S-

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indolacetoxy_/-äthyl-piperazin enthielt. ( Letztere Verbindung wurde erhalten ,indem 76,2 g (0,105 Mol) des entsprechenden Dioxalats in 600 ml Wasser gelöst wurden, wonach diese Lösung durch Zusatz von Natriumcarbonat auf einen pH-Wert von 9 bis 10 gebracht, und schließlich die so gebildete ölige Emulsion zweimal mit insgesamt 400 ml Toluol extrahiert wurde.)

Das Gemisch wird dann auf 100°C gebracht und 12

Stunden reagieten gelassen, wonach die organische Phase mit einer wässerigen Lösung von Salzsäure,Natriumbicarbonat und schließlich Natriumchlorid gewaschen wird und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet wird. Hierauf wird abfiltriert und im Vakuum eingeengt.

Der ölige Rückstand wird in 600 ml Methanol gelöst, und das Maleat durch Zusatz von einer Lösung von Maleinsäure in Methanol ausgefällt. Ausbeute 80 %.
Beispiel 6:

N¹-(3-Hydroxypropyl)-N-3-(N-benzoyl-N',N'-di-npropyl-DL-isoglutaminyi)-oxypropylpiperazin.

Es wird wie in Beispiel 1 verfahren, wobei jedoc-h

22,0 g (0,1 Mol) N-3~Chlorpropyl-N'-3-hydroxypropylpiperazin anstelle von N-3-Chlorpropyl-N¹-hydroxyäthylpiperazin eingesetzt werden. Ausbeute 74 %, F= 173-176°C (Dioxalat).
Beispiel 7:

N' -3-/Ϊ (p-Chlorbenzoyl)-5-methox-y-2-methyl-3-indol-· acetoxyy-propyl-N-3-(N-benzoyl-N¹,N¹-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin (CR 613).

Es wird wie in Beispiel 2 verfahren, wobei jedoch

51,8 g (0,1 Mol) N'-(3-Hydroxypropyl)-N-3-(N-benzoyl-N',N¹-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl) -oxypropylpiperazin anstelle von N'-2-(Hydroxyäthyl)-N-3-(N-benzoyl-N¹,N'-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin eingesetzt werden.

Ausbeute 80 %, P«138-141°C (Dimalea-t) ; mikrokristalline mattgelbe Verbindung/die etwas löslich in Äthanol und Aceton/ etwas mehr löslich in Methanol und in Wasser unlöslich ist.

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Mikroanalyse (CR 613-dimaleat):

	8:	berechnet:	C	%	"H	%	N	.%
		gefunden:	60	,56	6,	28	6	,42
		60	,31	6,	41	6	,28.
Beispiel

N¹-(2-Hydroxyäthyl)-N-2-(N-benzoyl-N',N'-di-npropyl-DL-isoglutaminyl)-oxyäthylpiperazin.

Es wird wie in Beispiel 1 verfahren, wobei jedoch

19,3 g (0,1 Mol) N-2-Chloräthyl-N'-2-hydroxyäthylpiperazin anstelle von N-(2-Hydroxyäthyl)-N¹-3-(chlorpropyl)-piperazin eingesetzt werden Ausbeute 78 %, F = 187-19O°C (Dioxalat). Beispiel 9:

N' -2-/T- (p-Chlorbenzoyl) -S-methoxy^-methyl-S-

indolacetoxy/-äthyl-N-2-(N-benzoyl-N',N¹-di-n-propyl-DiL-isoglutaininyl) -oxyäthylpiperazin (CR 626).

Es wird^wie in Beispiel 2 verfahren, wobei jedoch

49,2 g (0,1 Mol) (berechnet auf Grund der Analyse) N¹-2-(Hydroxyäthyl) -N-2- (N-benzoyl-N¹· ,N' -di-n-propyl-D,L-isoglutaminyl) -oxyäthyl piperazin anstelle von N¹-2-'Hydroxyäthyl-N-3-(N-benzoyl-N¹,N¹-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin eingesetzt werden. Ausbeute 77%, F = 163-164?C (Dimaleat), mikrokristalline mattgelbe Verbindung ,die in Äthanol und Aceton .wenig löslich, in Methanol etwas mehr löslich und in Wasser unlöslich ist. Mikroanalyse (CR 626- Dimaleat)

C % H % N %

berechnet 59,90 6,07 6,59 gefunden 59,17. 5,91 6,47.

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Die pharmakologischen Eigenschaften der er-

findunqsqemäßön Verbindungen sollen nunmehr beschrieben werden, nämlich die Wirksamkeit bei akuten Enzündungsprozessen, die analgetische und antiarthritische Wirkung und keine Ulcera verursachende oder die Magenschleimhaut irritierende Wirkung.

Es wurden Versuche an Tieren und Menschen ausgeführt.

Tierversuche
1a: Akute entzündungshemmende Wirkung.

Diese Wirkung wurde mittels des "Pfotentests" nach Domenjoz in folgender Weise ausgeführt:

Jungen Ratten von mittlerem Gewicht (200 g) wurden mittels subkutaner Injektion in die rechte Pfote eine wäßrige Suspension von Carrageen <(1 %) eine Stunde nach der oralen Verabreichung der zu untersuchenden Heilmittel verabreicht.

2 Stunden nach der Verabreichung des Carrageens

wurden beide Pfoten abgetrennt, gewogen und die Pfote, in welche die Injektion vorgenommen worden war und die·in der Zwischenzeit angeschwollen war, mit der anderen Pfote verglichen.

Der Gewichtsunterschied hängt von dem Grad der entzündungshemmenden Wirkung ab. Die Auswertung erfolgt durch Berechnung des EDc₀ in mg/kg bei oraler Verabreichung, d.h. der Dosis des Heilmittels, welche die Entzündung der behändsten Pfote, verglichen mit der nicht behandelten Pfote um 50 % herabsetzen kann.

In Tabelle 1 sind die' ED₅ -Werte von Verbindungen der Formel A aufgezeigt, und mit einigen der besser bekannten entzündungshemmenden Mitteln verglichen. Die Auswertung ist sowohl in mg/kg Tiergewicht als auch in Mikromol/kg Tiergewicht angegeben. Die zweite Aufwertung, die verläßlicher ist, weil sie auf je ein Molekül bezogen ist, zeigt, daß unter allen untersuchten Verbindungen die interessant©!t# V#irfein<äung die mit CR 604 bezeichnete Verbindung ist.

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Tabelle 1

Akute entzündungshemmende Wirkung (Domenjoz-Test)'

Molekular ED ,um/kg

gewicht ^bU/ ,_,, ³ per os(+)

ED₅₀ mg/kg per os

CR 604 (Dimaleat) CR 613 (Dimaleat) CR 626 (Dimaleat) Phenylbutazon

Acety!salicylsäure Mephenaminsäure

Ibuprofen

Indometacin

1076,63	11,5	12	,3
1090,70	13,6	14	,9
1062,60	15,0	16	/0
308,37	463,7	143
180,15	1254,5	266
2 41,.30	439,4	106
206,27	436,3	90
357,81	17,3	6	,2

(+): Mikromol/kg

1b: Durch Kügelchem (Pellets) bewirkter Granulomtest

Ein weiterer wichtiger Test für die Beurteilung

einer entzündungshemmenden Wirkung ist der mit Baumwollkügelchen. Dieser Test besteht darin, ein steriles Baumwollkügelchen unter die Rückenhaut der Ratte einzubringen.'

Das Kügelchen wird eine Woche in situ belassen, wobei die Tiere täglich mit verschiedenen Dosen des zu untersuchenden Heilmittels behandäLt werden. Die Beurteilung erfolgt durch Abwiegen der zur gegebenen Zeit entnommenen und getrockneten Kügelchen bei Versuchs- und Kontrolltieren. Der ED^-Wert ist die Heilmittel-Dosis, welche die durch Infiltration des umgebenden entzündeten Gewebes bedingte Gewichtserhöhung des Kügelchens, um 50 % herabsetzt. In Tabelle 2 sind die mit CR 604 und Indometacin erhaltenen Resultate angegeben. Auch bei diesem Versuch zeigt die Verbindung CR 604 eine starke entzündungshemmende Wirkung.

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Tabelle. 2 Akute entzündungshemmende Wirkung (Granulomtest)

Verbindungen Molekular- ED_5o/um/kg ED₅₀ mg/kg

gewicht _{per os (+) per os}

CR 604 (Dimaleat) 1076,63 25,6 27,6

Indometacin 357,81 23,5 8., 41

(+) Mikromol/kg

2. Analgetische Wirkung

Die analgetische. Wirkung eines entzündungshemmenden Mittels kann in herkömmlicher Weise nach dem Phenylchinon-Verfahren überprüft werden, das darauf beruht, daß Ratten auf eine intraperitoneale Verabreichung einer irritierenden Substanz, wi-e Phenylchinon, unter Abgabe von Lauten reagieren.

Aus der Anzahl .dieser Reaktionen beurteilt- man

die Schmerzempfindlichkeit; die Auswertunq wird als ED^_n in mg/kg Tiergewicht angegeben, und entspricht der Dosis, welche die Reaktion auf das irritierende Stimulans um 50 % herabsetzt.

Die in Tabelle 3 zusammengefaßten Resultate, und unter diesen vor allem diejenigen, die sich auf Mikromole beziehen, zeig-en, insbesondere in Vergleich zu den entsprechenden Indometacin-Werten, die besonders interessante analgetische Wirkung von CR 604.

Tabelle3 Analgetische Wirkung bei Ratten. Phenylchinon-Test

Verbindungen Molekular- ED ,um/kg ED₅₀ mg/kg _ 9^ewicht per os(+) per os

(Dimaleat) 1076,63 5,3 5,72

Indometacin 357,81 5,6 2

Phenylbutazon 308,37 324,0 100

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3. Wirkung bei chronischen Osteoarthritiden

Die Versuche zur Bestimmung der Wirksamkeit

der Verbindungen bei Osteoarthrosis sind in zwei Teile geteilt: in vitro und in vivo.

Diese Versuche bestehen hauptsächlich in der Überprüfung der Möglichkeiten mit diesen Heilmitteln die Wiederherstellung von osteocartilagenem Gewebe bei Gelenken zu beeinflussen, da diese Krankheiten im allgemeinen durch die Zerstörung der Gewebe gekennzeichnet sind, die von der eiweißhaltigen Grundsubtanz ausgeht und sich durch den anorganischen Teil des Knochens ausbreitet.

a: Versuche in vitro

Diese Versuche -v/erden in einer Kultur in vitro, d.h. außerhalb des Organismus,von dem Gewebe desgleichen embrionalen Ursprungs wie das Gewebe des ostearticularen Ursprungs vorgenommen, und die Wirkungen der verschiedenen Heilmittel bestimmt. Die Meßeinheiten dieser Wirkungen basieren auf der Bildung von Glukoseaminglicanen (Mucopolysaccharide gemessen durch Trübungsbestimmung).

Eine Serie von Versuchen dieser Art, die bereits veröffentlicht sind, vgl. Karzel et al "Excerpta Medina¹ int. Congr. series no. 138 (1968, S. 102) zeigt, daß alle bisher bekannten entzündungshemmenden Mittel eine Herabsetzung der Gewebsaktivität verursachen und dies erklärt deren schädigende Wirkung, die nach längerer Verabreichung solcher Heilmittel beobachtet wird.

Erfindungsgemäße Verbindungen werden in dieser Hinsicht mit bekannten entzündungshemmenden Mitteln verglichen.

Die Resultate sind in Tabelle 4 aufgezeigt.

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Tabelle 4

Wirkung der Verbindungen auf die Bildung von liucopolysacchariden aus einer Fibroblast-Kultur in vitro. (+)

Verbindungen Dosen :-^ug'^m Mucopolysaccharid-Produkte

der Kultur- am 10. Tag der Inkubation, flüssigkeit Vierte in %. bezogen auf die Kontrollen

Indometacin 2 78

Phenylbutazon .10 5 8

Ilephenaminsäure 10 5 8

CR 604 '

(Dimaleat) · 6 108

(+) Mucopolysaccharide gemessen durch Trübungsbestimmung nach Karzel et,al. Excerpta Medica - Med.Int.Congr. Series no. 188 0968), 102

Die in Tabelle 4'angeführten Resultate zeigen, daß die Verbindung CR 604 die einzige Verbindung ist, die in dieser in vitro-Kultur des Kollagengewebes das Wachsen und die Bildung von Mucopolysacchariden nicht beeinträchtigt, bi Versuche in vivo

Osteolathyrismus bei Kaninchen. Der Osteolathyrismus besteht darin, daß man bei jungen Kaninchen eine Dystrophie des Knochengelenksystems herbeiführt, indem man jeden Tag introperitotjeal 100 mg/kg Körpergewicht Aminoacetonitril verabreicht. Bei dieser Behandlung werden nach ungefähr 30 Tagen folgende Veränderungen in dem Kaninchen beobachtet:

Gewichtsverlust ,(in Vergleich zu dem physiologisch behandelten Kontrollen), Ptosis der Ohrmuschel, Fellverlust, Deformation der Vorder- und Hinterbeine, Verschlechterung des Allgemeinbefindens .

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Alle diese Vorgänge treten auf, v/eil das Aminoacetonitril mit Bezug auf das kollagene Bindegewebe ein Gift ist, · das die biochemische Zusammensetzung der Gelenksknqpel und der Knochen verändert.

Eine Bewertung der therapeutischen Wirkung kann entweder biochemisch erfolgen, nämlich indem die Menge an Aminozuckern in diesen Geweben bestimmt wird, oder dadurch, daß nur die allgemeinen Symptome in Betracht gezogen v/erden, die der Aminozuckerverminderung proportional sind.

In Tabelle 5 sind aufgrund letzterer Beurteilung erhaltene Ergebnisse aufgezeigt, wobei jedes Symptom so bewertet wird, daß diesem eine Zahl von 0 bis 4 zugeteilt wird, und 4 den Maximalschaden und 0 keinen Schaden anzeigt.

Tabelle 5

30 bis 35 Tage alte Kaninchen behandelt mit A-minoacetonitril;

Heilmittel intraperitoneal verabreicht

Verbindungen

Behandlungstage

Ptosis Fell- Allgemein- Deformati- De- Gewder Ohr- ver- befinden der Hin- for- vermuschel lust terbeine ma- lust

CR 604-(Diiaaleat) 15 mg/ kg/tag + /uiiinoacetonitrol

100 mg/kg/Tag

25

0,2

0,6

d.

Vorder beine

Physiologi sche Kon trollen	25	0	0	0	0	0	0
/jninoaceto- nitril 100 mg/kg/Tag	25	1,2	3	3,2	2,3	2,8	3,8

Indometacin 5 r.ig/kg/Tag Aminoacetonitril 100 mg/kg/ 25 Tag

1,4

1,6

3,2 3,5

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In Tabelle 5 sind die am 25. Tag ermittelten Resultate aufgezeigt, wobei die Gruppen verglichen werden, die nur mit einer physiologischen Lösung, nur mit Aminoacetoni.tril, mit Aminoacetonitril und CR 604 sowie mit Aminoacetonitril und Indometacin in vorgeschriebenen Dosierungen behandelt wurden.

Jede Gruppe bestand aus 8 Tieren.

Die erhaltenen Resultate zeigen, daß Aminoacetonitril sehr starke symptomatische Verschlechterungen hervorruft. Indometacin allein kann diese Vorgänge nicht verhindern, wogegen CR 604 diesen Vorgängen entgegenwirkt, wobei die toxischen Symptome erheblich geändert sind.

4: Irritierende und geschwürbildende Wirkung auf die Magenschleimhaut.

Die experimentelle Beurteilung dieser Wirksamkeit wurde bei Ratten mittels nachstehender Verfahrensweise ausgeführt:

Die Verbindung wird Ratten, die 12 Stunden fasten gelassen wurden, oral verabreicht,. 4 Stunden mchher werden die Tiere getötet. ·

Als positiv, d.h..als magenschädigend,werden die Fälle bewertet, bei,denen zumindest eine Blutungsstelle an der Magenwand auftritt.

Unter dem Wert ED_ soll die Dosis des Heilmittels verstanden werden, die bei 50 % der behandelten Tiere die Bildung solcher Blutungen verhindert.

In Tabelle 6 werden die Verbindungen CR 604 und Indometacin miteinander verglichen, da letztere Verbindung unter allen Verbindungen dieser Art der entzündungshemmenden Wirkung von CR 604 am nächsten kommt.

Die erhaltenen Resultate zeigen, daß die eine Magenschädigung bewirkende Dosis von Indometacin ,selbst wenn diese in Mikromol ausgedrückt wird, sehr niedrig ist, wogegen diejenige von CR 604 so hoch ist, daß sie von keiner praktischen Bedeutung ist, und ungefähr gleich ist der tödlichen Dosis.

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Tabelle6 Magenschädigende Wirkung bei Ratten: ED

gemäß obiger Definition

ED

50

τ? v,· ^ „„ ^{Art der} Molekular- ED_cn Verbindungen _Verafa_ _gewicht 50

reichung /^um/k^ ⁽⁺⁾ mg/kg

Indometacin	Oral	357,81	33,5	' 12	,2
CR 6O4- dimaleat	Oral .	1076,63	330,1	355	,6
CR 613- dimaleat	Oral	• 1090,70	277,4	302
CR 626- dimaleat	Oral	1062,60	341 ,7	363

Verträglichkeit bei Tieren

Für diese Verbindungen und insbesondere für die Verbindung CR 604 wurden bei subakuten und chronischen Fällen Toleranzversuche bei einer bis zu -6 Monaten währenden Verabreichung an die Tiere gemacht. Qe erhaltenen Resultate zeigen, daß das Produkt selbst in Anteilen, die größer sind als diejenigen, die für Menschen empfohlen werden, ohne Auftreten irgendwelcher anatomischer Läsionen oder funktioneller Störungen toleriert wird. Therapeutische Anwendung bei Menschen

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können Menschen

oral in Form von Tabletten oder Kapseln.verabreicht werden, welche die Verbindung in einem Anteil von 50 bis 150 mg enthalten.

So können z.B. CR 604 - Dimaleat-Kapseln zur oralen Verabreichung erhalten werden, indem 25 mg der Verbindung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff, z.B. Stärke, Laktose, Talk oder Magnesiumstearat gründlich gemischt werden.

Als tägliche Minimaldosis werden 3 Kapseln pro Tag empfohlen, welche Dosierung jedoch erforderlichenfalls verdoppelt werden kann.

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Es können auch Suppositorien hergestellt werden,

die 100 bis 120 mg CR 604 - Dimaleat in einem pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff dispergiert enthalten.

Pro Tag können je nach Bedarf 1 bis 3 dieser Suppositorien verabreicht werden.

Selbstverständlich können auch andere, auf oralem oder rektalem Weg verabreichbare Präparate hergestellt werden, welche pharmakologische annehmbare Trägerstoffe enthalten. Die therapeutischen Wirkungen dieser Produkte und insbesondere die Wirkung der Verbindung CR 604 können bei Menschen auch aufgrund von bei wissenschaftlichen Untersuchungen bewährten Verfahrensweisen, z.B. Doppelblindversuchen, demonstriert werden.

So kann z.B. die Wirkung des in 75 mg verabreichten Kapseln von CR 604 (6 täglich) mit 25 mg Indometacin-Kapseln (6 täglich), d.i. in annähernd äquimolekularen Dosen, bei einer Gruppe von 60 behändsten Personen (30 mit CR 604 und 30 mit Indometacin)folgendes festgestellt werden (vgl. Tabelle 7):

a. Indometacin bewirkt bei 46,6 % der behndelten Personen(nach einwöchiger Behandlung)und bei 53,3 % der behandelten Personen (nach dreiwöchiger Behandlung) Magenbeschwerden, sodaß in einigen Fällen die üterbrechung der Behandlung ratsam erschien, wogegen CR 604 keine merkliche Beschwerden bei Verabreichung therapeutisch gleich wirksamer Dosen verursachte.

b. Die Uropepsinogen-Bestimmung zeigt, daß sich der Uropepsin-Gehalt im Harn bei mit CR 604 behandelten Personen verringert, mit Indometacin behandelten Personen hingegen erhöht. Hiedurch werden die vorstehenden Ausführungen in objektiver Weise bestätigt, da das üropepsinogen den Anteil des im Magen sezernierten und durch den Harn ausgeschiedenen Pepsins anzeigt. Die Magensekretion von Pepsin wird durch Mittel erhöht, welche die Magenschleimhaut irritieren und angreifen.

c. Bei den mit CR 604 behandelten Personen tritt eine Herabsetzung der Kalziumausscheidung im Harn auf, wogegen bei mit Indometacin behandelten Personen eine Tendenz zu einer Erhöhung

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dieses Kalziumgehaltes zu verzeichnen ist.

Die Ausscheidung von Kalzium steht in Beziehung zu der Zerstörung der Fasern der Protein-Knochenmatrix, die auch zum Verlust von in ihr eingelagertem Kalzium führt. Die Verabreichung von bekannten entzündungshemmenden Mitteln führt zur Zerstörung dieser Fasern unter Kalziumverlust. Hingegen verursacht die Verbindung CR 604 diese Zerstörung nicht.

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Tabelle

Verbindungen

Epigastralgie _f aus- Uropepsinogen(ausgedrückt in drückt in % Patienten äqu.rag Tyrosin pro Tag) mit Beschwerden

Kalzium im Harⁿ
mg/1000 ml Harn

CD O (O OO O CD \ O CO OO

Vor der Be- nach nach Vor der nach nach handlung einer drei Behänd.- einer drei

Woche Wochen lung Woche Wochen Vor der nach
Behänd- einer
lung Woche

nach
drei

Wochen

CR 604 dimaleat

3,3

216,3 209,8 153,8

107

Indometacin

46,6 . 53,3 164,7 208,1 345,7

137

148

Es ist somit'erwiesen, daß die Verbindung CR 604 auch bei Verabreichung an Menschen die gleichen charakteristischen Eigenschaften zeigt, die bei den in vitro Versuchen und bei den Tierversuchen festgestellt werden konnten. Dank dieser Eigenschaften wird ein wesentlicher Fortschritt von großer therapeutischer
Bedeutung erzielt.

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Claims

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Patentansprüche:

■¹· Entzündungshemmende und antiarthrotisch wirkende

Verbindungen der Formel I

'OR ~0H_o COO-(CH₉),: -<f 2 ²

^CK

CH

-0-CO-CH₉V

CH₂-CH₂-CH

OGH 3

in der n- und n₂ für 2 oder 3 steht, und Salze dieser Verbinsungen mit pharmakologisch annehmbaren Säuren.
2. Verbindungen der Formel I, bei denen die tertiären Aminogruppen mit Oxal-, Zitronen-, Malein-, Fumar- oder Salzsäure Salze bilden.
3. N·-2-/T-(p-Chlorbenzoyl)-5-methoxy-2-methy1-3-indolacetoxy_7~äthyl-N-3-(N-benzoyl-N¹ ,N'-di-n-propyl-DL-isoglutaminyl)-oxypropylpiperazin.
4. Verbindung nach Anspruch 3, bei der die beiden tertiären Aminogruppen mit Maleinsäure ein Salz bilden.
5. Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmendes Präparat^ dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Verbindung oder ein Salz nach Anspruch 1 oder 2 enthält.
6. Verbindungen und Gelenksaffektionen hemmendes Präparat nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff die Verbindung nach Anspruch 3 enthält.
7. Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmendes Präparat, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff das Salz nach ' Anspruch 4 enthält.

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8. Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmendes Präparat nach einem der Ansprüche 5 bis 7 in oral verabreichbarer Form mit einem Gehalt von 50 bis 150 mg Wirkstoff.
9. Entzündungen und Gelenksaffektionen hemmendes Präparat nach einem der Ansprüche 5 bis 7, in Form von Suppositorien mit einem Gehalt von 100 bis 200 mg Wirkstoff.

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